一種從金銀花中分離純化綠原酸及3，5-二咖啡酰奎尼酸的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及從金銀花中分離純化綠原酸及3，5-二咖啡?？崴岬姆椒?，是以金銀花為原料，經(jīng)過下述步驟：（1）金銀花粗提物的制備；（2）萃??；（3）大孔吸附樹脂分離純化；（4）半制備型高效液相色譜分離純化：用半制備型高效液相色譜進(jìn)行分離純化，流動(dòng)相為甲醇-水，得到2種高純度的成分，經(jīng)鑒定分別是綠原酸及3，5-二咖啡?？崴?。本工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴(yán)重危害,綜合成本低。
【專利說明】一種從金銀花中分離純化綠原酸及3,5- 二咖啡?？崴岬姆椒?br> 【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域，具體是涉及一種從金銀花中分離純化綠原酸及3，5-二咖啡酰奎尼酸的方法。
【背景技術(shù)】 [0002]金銀花為忍冬科植物忍冬(Zoflicera japonica Thumb.)的干燥花蕾或帶初開的花，性寒，味甘，歸肺、心、胃經(jīng)，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱的功能，用于治療急性扁桃體炎、咽炎、乳腺炎、痢疾、肺炎、流感、肝炎、闌尾炎等疾病。金銀花含有酚酸、黃酮、皂苷、揮發(fā)油等多種成分，其中酚酸類成分(包括綠原酸、咖啡酸、異綠原酸等)為主要活性成分。異綠原酸是結(jié)構(gòu)極為相近的7種異構(gòu)體的混合物，其中3，5-二咖啡酰奎尼酸是其中含量最高的一種。藥理實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)踐表明金銀花中的酚酸類化合物具有顯著的抗癌、抗菌、抗病毒、抗氧化、抗突變、保肝利膽、降血脂、止血、增強(qiáng)免疫等藥理作用，此外還可以促進(jìn)胃液分泌及胃腸蠕動(dòng)。除了其藥用價(jià)值以外，金銀花在保健食品、化妝品等許多領(lǐng)域也具有廣闊的市場前景。
[0003]有關(guān)金銀花中綠原酸的提取、分離、純化研究的報(bào)道很多，但是涉及3，5_ 二咖啡?？崴岬难芯繄?bào)道非常少，為了實(shí)現(xiàn)對金銀花的綜合利用，本發(fā)明提供了一種簡單快速的從金銀花中分離純化綠原酸及3，5- 二咖啡酰奎尼酸的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種簡單快速的從金銀花中分離純化綠原酸及3，5- 二咖啡酰奎尼酸的方法。
[0005]本發(fā)明的方案如下:
從金銀花中分離純化綠原酸及3，5-二咖啡?？崴岬姆椒ǎ洳襟E為:
(1)金銀花粗提物的制備:取粉碎好的金銀花，用70%乙醇(鹽酸調(diào)pH至4左右)加熱回流提取，過濾，乙醇提取液經(jīng)減壓濃縮得粗提物浸膏。
[0006](2)萃取:將上述粗提物浸膏溶于70°C左右的熱水中，加鹽酸調(diào)pH至2左右，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液經(jīng)減壓濃縮得金銀花總酚酸提取物。
[0007](3)大孔吸附樹脂分離純化:將金銀花總酚酸提取物上大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再依次用20%、40%、60%、80%、95%乙醇-水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，收集40%乙醇洗脫部分，濃縮得樣品1，收集80%乙醇洗脫部分，濃縮得樣品2。
[0008](4)半制備型高效液相色譜分離純化:將樣品1和樣品2分別用半制備型高效液相色譜進(jìn)行分離純化，色譜柱為C18 SMB 100柱,流動(dòng)相為甲醇-水，檢測波長為325 nm,收集目標(biāo)組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，即得到所要分離的單體化合物。
[0009]前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(1)加熱回流提取時(shí)提取時(shí)間為1-3小時(shí)，提取次數(shù)為2-6次。更加優(yōu)選的是，提取時(shí)間為2小時(shí)，提取次數(shù)為4次。[0010]前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(1)加熱回流提取時(shí)所用乙醇的濃度為50%-95% (優(yōu)選 70%)。
[0011]前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(3)對金銀花總酚酸粗提物的粗分離所用的HPD系列的大孔吸附樹脂的型號有100、400、500、600、722和826 (優(yōu)選400)。
[0012]前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(4)對樣品1的分離純化所用甲醇的濃度為15%-25% (優(yōu)選20%)，對樣品2的分離純化所用甲醇的濃度為30%-40% (優(yōu)選35%)。
[0013]前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(4)分離純化用甲醇-水溶液進(jìn)行洗脫，洗脫液的流速為20-30 mL/min (優(yōu)選25 mL/min)。
[0014]本發(fā)明涉及從金銀花中分離純化綠原酸及3，5- 二咖啡?？崴岬姆椒ǎ襟E為:(1)金銀花粗提物的制備:取粉碎好的金銀花，用70%乙醇(鹽酸調(diào)pH至4左右)加熱回流提取，過濾，乙醇提取液經(jīng)減壓濃縮得粗提物浸膏。(2)萃取:將上述粗提物浸膏溶于70°C左右的熱水中，加鹽酸調(diào)pH至2左右，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液經(jīng)減壓濃縮得金銀花總酚酸提取物。(3)大孔吸附樹脂分離純化:將金銀花總酚酸提取物上大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再依次用20%、40%、60%、80%、95%乙醇-水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，收集40%乙醇洗脫部分，濃縮得樣品1，收集80%乙醇洗脫部分，濃縮得樣品2。(4)半制備型高效液相色譜分離純化:將樣品1和樣品2分別用半制備型高效液相色譜進(jìn)行分離純化，色譜柱為C18 SMB 100柱，流動(dòng)相為甲醇-水，檢測波長為325 nm，收集目標(biāo)組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，即得到所要分離的單體化合物。該工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴(yán)重危害，綜合成本低。
[0015]本發(fā)明從金銀花中分離純化綠原酸及3，5-二咖啡?？崴岬姆椒ǎ紫扔幂腿〉姆椒▽⒎铀犷惢?物自粗提物中提取出來，同時(shí)還可以將粗提物中絕大多數(shù)強(qiáng)極性雜質(zhì)除去，這一點(diǎn)可以從圖1中看出；再用大孔吸附樹脂對金銀花總酚酸提取物進(jìn)行粗分離，經(jīng)過粗分離可以對化合物實(shí)現(xiàn)分組，這一點(diǎn)可以從圖2和圖3中看出；最后用半制備型高效液相色譜法進(jìn)行分離純化就可以得到2種化合物，所得目標(biāo)化合物純度高，雜質(zhì)含量極低，這一點(diǎn)可從圖6和圖7中看出。除此之外，還具有如下優(yōu)勢:
(1)金銀花粗提物溶于熱水，調(diào)至弱酸性后經(jīng)乙酸乙酯萃取可以除去絕大多數(shù)強(qiáng)極性雜質(zhì)，使混合物的組成得到了簡化，可以為后續(xù)的分離工作降低難度，并且可以保護(hù)半制備型高效液相色譜柱不被污染，有效地延長了色譜柱的使用壽命。
[0016](2)用大孔吸附樹脂對金銀花總酚酸提取物進(jìn)行粗分離，用水作流動(dòng)相可以除去絕大多數(shù)強(qiáng)極性雜質(zhì)，用不同濃度的乙醇-水溶液梯度洗脫可以使混合物實(shí)現(xiàn)分組，組成得到簡化，并且大孔吸附樹脂可以經(jīng)過再生后重復(fù)使用多次。
[0017](3)用半制備型高效液相色譜法對化合物進(jìn)行分離純化，可以得到2種高純度單體化合物，方法操作簡單，效率高，工藝周期短，節(jié)省試劑，降低了生產(chǎn)成本。
[0018](4)純化過程中不使用對環(huán)境和人體危害大的氯仿等有機(jī)溶劑，洗脫液經(jīng)減壓蒸餾回收后可以重復(fù)使用多次，綠色環(huán)保。
[0019](5)優(yōu)化了層析方法的條件(洗脫液的組成和流速)，使化合物的純度和效率都大為提聞。
【專利附圖】

【附圖說明】[0020]圖1是金銀花總酚酸提取物的高效液相色譜圖。
[0021]圖2是樣品1的高效液相色譜圖。
[0022]圖3是樣品2的高效液相色譜圖。
[0023]圖4是樣品1的半制備型高效液相色譜圖。
[0024]圖5是樣品1的半制備型高效液相色譜圖。
圖6是綠原酸的高效液相色譜圖及紫外光譜圖。
[0025]圖7是3，5- 二咖啡?？崴岬母咝б合嗌V圖及紫外光譜圖。
[0026]在圖1-7中，1:綠原酸；11:3，5-二咖啡?？崴?。
【具體實(shí)施方式】
[0027]下面結(jié)合實(shí)施例和附圖詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護(hù)范圍不被此限制。實(shí)施例中所用設(shè)備或原料皆可從市場獲得。所用試劑均購自濟(jì)南試劑總廠，所用水為去離子水。
[0028]實(shí)施例:從金銀花中分離純化綠原酸及3，5-二咖啡?？崴岬姆椒?，其步驟為:
(1)金銀花粗提物的制備:取粉碎好的金銀花，用70%乙醇(鹽酸調(diào)pH至4左右)加熱回流提取，過濾，乙醇提取液經(jīng)減壓濃縮得粗提物浸膏。
[0029](2)萃取:將上述粗提物浸膏溶于70°C左右的熱水中，加鹽酸調(diào)pH至2左右，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液經(jīng)減壓濃縮得金銀花總酚酸提取物。
[0030](3)大孔吸附樹脂分離純化:將金銀花總酚酸提取物上大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再依次用20%、40%、60%、80%、95%乙醇-水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，收集40%乙醇洗脫部分，濃縮得樣品1，收集80%乙醇洗脫部分，濃縮得樣品2。
[0031](4)半制備型高效液相色譜分離純化:將樣品1和樣品2分別用半制備型高效液相色譜進(jìn)行分離純化，色譜柱為C18 SMB 100柱(400 mmX25.4 mm 1.D., 10 μ m，成都格萊普科技有限公司)，流動(dòng)相為甲醇-水(樣品1:20:80 ;樣品2:35:65 ;V/V)，檢測波長為325nm,收集目標(biāo)組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，即得到所要分離的單體化合物。
[0032]發(fā)明人通過使用不同濃度的甲醇作流動(dòng)相，采用不同的洗脫方式，控制甲醇-水洗脫液的流速為20-30 mL/min (優(yōu)選25 mL/min),優(yōu)選出了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的純化條件，有關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
表一樣品1的半制備型高效液相色譜分離條件
【權(quán)利要求】
1.從金銀花中分離純化綠原酸及3，5-二咖啡?？崴岬姆椒?，其特征是，步驟為:(1)金銀花粗提物的制備:取粉碎好的金銀花，用70%乙醇(鹽酸調(diào)pH至4左右)加熱回流提取，過濾，乙醇提取液經(jīng)減壓濃縮得粗提物浸膏；(2)萃取:將上述粗提物浸膏溶于70°C左右的熱水中，加鹽酸調(diào)pH至2左右，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液經(jīng)減壓濃縮得金銀花總酚酸提取物；(3)大孔吸附樹脂分離純化:將金銀花總酚酸提取物上大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，再依次用20%、40%、60%、80%、95%乙醇-水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，收集40%乙醇洗脫部分，濃縮得樣品1，收集80%乙醇洗脫部分，濃縮得樣品2 ；(4)半制備型高效液相色譜分離純化:將樣品1和樣品2分別用半制備型高效液相色譜進(jìn)行分離純化，色譜柱為C18 SMB 100柱，流動(dòng)相為甲醇-水，檢測波長為325 nm,收集目標(biāo)組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，即得到所要分離的單體化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(1)加熱回流提取時(shí)間為1-3小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(1)加熱回流提取時(shí)提取時(shí)間為2小`時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(1)提取次數(shù)為2-6次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(1)提取次數(shù)為3-5次(優(yōu)選4次)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(1)加熱回流提取時(shí)所用乙醇的濃度為50%-95% (優(yōu)選 70%)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(3)對金銀花總酚酸粗提物的粗分離所用的HPD系列的大孔吸附樹脂的型號有100/400/500/600/722/826 (優(yōu)選400)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(4)對樣品1分離純化用甲醇-水洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫方式有甲醇-水梯度洗脫/15%甲醇-水等度洗脫/20%甲醇-水等度洗脫/25%甲醇-水等度洗脫。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟(4)對樣品2分離純化用甲醇-水洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫方式有甲醇-水梯度洗脫/30%甲醇-水洗脫/35%甲醇-水等度洗脫/40%甲醇-水等度洗脫。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，控制甲醇-水洗脫液流速為20-30mL/min(優(yōu)選 25 mL/min)ο
【文檔編號】C07C69/732GK103641718SQ201310714715
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年12月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月23日
【發(fā)明者】李愛峰, 張永清, 柳仁民, 孫愛玲 申請人:聊城大學(xué)