具有超長(zhǎng)cdr3s的人源化抗體的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了人源化抗體，包括包含超長(zhǎng)CDR3的抗體(例如牛)，以及其用途。
【專(zhuān)利說(shuō)明】具有超長(zhǎng)CDR3S的人源化抗體
[0001] 本申請(qǐng)要求2012年1月9日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/584,680號(hào)的權(quán)益，將其 全文以引用方式結(jié)合于本文中作為參考。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本文公開(kāi)的內(nèi)容涉及人源化抗體，包括包含超長(zhǎng)⑶R3的抗體。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 抗體是脊椎動(dòng)物免疫系統(tǒng)響應(yīng)于外來(lái)物質(zhì)（抗原）而形成的天然蛋白質(zhì)，主要用 于抵御感染。一個(gè)多世紀(jì)以來(lái)，已經(jīng)在人工條件下在動(dòng)物中誘導(dǎo)抗體，并收獲抗體用于疾病 狀況的治療或診斷，或用于生物學(xué)研究。每個(gè)單獨(dú)的抗體生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)生具有化學(xué)上確定的 組成的單一類(lèi)型的抗體，然而，響應(yīng)于抗原接種直接從動(dòng)物血清獲得的抗體實(shí)際上包含產(chǎn) 自單個(gè)抗體生產(chǎn)細(xì)胞的集群的不相同的分子的集群（例如，多克隆抗體）。
[0005] 與其他脊椎動(dòng)物相比，某些?？贵w具有超長(zhǎng)的VH⑶R3序列。例如，約10%的IgM 含有"超長(zhǎng)" CDR3序列，其可以長(zhǎng)達(dá)61個(gè)氨基酸長(zhǎng)度。這些不同尋常的CDR3經(jīng)常具有多 個(gè)半胱氨酸。功能性VH基因通過(guò)稱(chēng)為V (D) J重組的過(guò)程形成，其中D-區(qū)編碼絕大部分的 ⑶R3。已經(jīng)在牛中鑒定出編碼超長(zhǎng)序列的獨(dú)特的D-區(qū)。超長(zhǎng)⑶R3在?；蚪M中被部分地 編碼，與人類(lèi)相比，提供了牛的抗體全集的獨(dú)特特征。Kaushik等人（美國(guó)專(zhuān)利第6, 740, 747 號(hào)和第7, 196, 185號(hào)）公開(kāi)了幾種聲稱(chēng)作為探針有用的牛特有的牛種系D-基因序列，以及 聲稱(chēng)作為疫苗載體有用的牛VDJ盒。
[0006] 發(fā)明概述
[0007] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了人源化抗體，包括包含超長(zhǎng)CDR3的抗體，生產(chǎn)所述抗體的 方法，以及其用途。
[0008] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段。
[0009] 在一些實(shí)施方式中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含一個(gè)或多個(gè)人類(lèi)可變區(qū)框 架序列。
[0010] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)CDR3的長(zhǎng) 度是35個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，40個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，45個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，50個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，55 個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，或60個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)。
[0011] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)CDR3的長(zhǎng) 度是35個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)。
[0012] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含3 個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，4個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，5個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，6個(gè)或 更多個(gè)半胱氨酸殘基，7個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，8個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，9個(gè)或更多 個(gè)半胱氨酸殘基，10個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，11個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，或12個(gè)或更 多個(gè)半胱氨酸殘基。
[0013] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含3 個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基。
[0014] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，抗體或其結(jié)合片 段包含半胱氨酸基序。
[0015] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，半胱氨酸基 序選自由以下序列組成的組：CX1QCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41)、CXiqCX6CX5CXCX15C(SEQ ID NO: 42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO : 43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO: 44), CX10CX6Cx5CXCX13C(SEQ ID NO:45)、CXiciCX5CXCX4CX8C(SEQ ID NO:46)、CXiciCX6CX6CXCX7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48)、CXiciCX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49)、 CX13CX8CX8C (SEQ ID NO : 50) , CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO: 51) , CX10CX5CX5C (SEQ ID NO:52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
[0016] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，半胱氨酸基序選 自由以下序列組成的組：
[0017] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID NO: 150)、CX10C(SEQ ID NO: 151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152)。
[0018] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含2 至6個(gè)二硫鍵。
[0019] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 SEQ ID NO:40或其衍生物。
[0020] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 SEQ ID NO: 1-4的任一個(gè)的氨基酸殘基3-6。
[0021] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 非人類(lèi)DH或其衍生物。
[0022] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述非人類(lèi)DH 是 SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: 10、 SEQ ID NO:11 或 SEQ ID NO:12。
[0023] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 JH序列或其衍生物。
[0024] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述JH序列是 SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16 或 SEQ ID NO:17。
[0025] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含： 非人類(lèi)或人類(lèi)VH序列（例如，種系VH)或其衍生物；非人類(lèi)DH序列或其衍生物；和/或JH 序列或其衍生物。
[0026] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 另外的氨基酸序列，所述另外的氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之間的二至六個(gè)氨 基酸殘基或更多個(gè)氨基酸殘基。
[0027] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述另外的氨基 酸序列選自由以下序列組成的組：IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO :20或 SEQ ID NO ：21〇
[0028] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 衍生自或基于 SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO : 26、SEQ ID NO :27 或 SEQ ID NO : 28 的序列。
[0029] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 牛序列、非牛序列、抗體序列或非抗體序列。
[0030] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，非抗體序列是合 成的序列。
[0031] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，非抗體序列是細(xì) 胞因子序列、淋巴因子序列、趨化因子序列、生長(zhǎng)因子序列、激素序列或毒素序列。
[0032] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，非抗體序列 是IL-8序列、IL-21序列、SDF-I (α )序列、生長(zhǎng)抑素序列、氯毒素（chlorotoxin)序列、 Pro-TxII序列或齊考諾肽（ziconotide)序列。
[0033] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，非抗體序列是 SEQ ID NO :475-481 的任一個(gè)。
[0034] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，非抗體序列取代 至少一部分的超長(zhǎng)⑶R3。
[0035] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 X1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)，其 中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬 酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸 (H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨 酰胺（Q)。
[0036] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述X1X2X 3X4X5基 序是 TTVHQ (SEQ ID NO: 153)、TSVHQ (SEQ ID NO: 154)、SSVTQ (SEQ ID NO: 155)、STVHQ (SEQ ID NO: 156), ATVRQ (SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO: 163)、STVYQ(SEQ ID NO: 164)、TIVHQ(SEQ ID NO: 165)、AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、 TTVFQ(SEQ ID NO: 167)、AAVFQ(SEQ ID NO: 168)、GTVHQ(SEQ ID NO: 169)、ASVHQ(SEQ ID NO :170), TAVFQ (SEQ ID NO: 171), ATVFQ (SEQ ID NO: 172), AAAHQ (SEQ ID NO: 173), VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO :177), ITAHQ (SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID NO:181)、TTVLQ(SEQ ID NO:182)、TTTHQ(SEQ ID NO:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO:184)。
[0037] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 CX1X2X3X4X5 基序。
[0038] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述CX1X 2X3X4X5 基序是CTTVHQ(SEQ ID N0:185)、CTSVHQ(SEQ ID N0:186)、CSSVTQ(SEQ ID N0:187)、 CSTVHQ(SEQ ID NO: 188)、CATVRQ(SEQ ID NO: 189)、CTTVYQ(SEQ ID NO: 190)、CSPVHQ(SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、CTAVYQ(SEQ ID NO:193)、CTNVHQ(SEQ ID NO:194)、 CATVHQ (SEQ ID NO:195)、CSTVYQ (SEQ ID NO:196)、CTIVHQ (SEQ ID NO:197)、CAIVYQ (SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、 CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、 CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID NO:210), CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212), CGTVYQ(SEQ ID NO:213), CTTVLQ(SEQ ID NO:214), CTTTHQ(SEQ ID N0:215) 或 CTTDYQ(SEQ ID NO :216)。
[0039] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 (XaX b)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0040] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述（XaX b)z基 序是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、HYTYTYEW(SEQ ID N0:219)、 KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF (SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVffTHNF(SEQ ID NO:230), TYKYVYEff(SEQ ID N0:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、 TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、TYSYEH(SEQ ID NO:244)、TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF (SEQ ID NO: 249)、AYSY (SEQ ID NO: 250)、CYSF (SEQ ID NO: 251)、DYTY (SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257),NYQff(SEQ ID NO:258),NYSF(SEQ ID NO:259),PYEff(SEQ ID NO:260)、RYNW(SEQ ID NO:261)、RYTY(SEQ ID NO:262)、SYEF(SEQ ID NO:263)、SYEH(SEQ ID NO:264)、SYEW(SEQ ID NO:265)、SYKW(SEQ ID NO:266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO:268)、TYEF(SEQ ID NO:269)、TYEW(SEQ ID NO:270)、TYQW(SEQ ID NO:271)、TYTY(SEQ ID NO:272)或 VYEW(SEQ ID NO:273)。
[0041] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述（XaX b)z基序 是 YXYXYX。
[0042] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)， 其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天 冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨 酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X 5是谷氨酰 胺（Q)，以及其中η是27-54。
[0043] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 Xn(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中z是1-4。
[0044] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n(XaXb)z基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V) ，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5 是谷氨酰胺（Q)，其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸 (W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0045] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述X1X2X 3X4X5基 序是TTVHQ(SEQIDN0:153)或TSVHQ(SEQIDN0:154)，以及其中（X aXb)z基序是YXYXYX。
[0046] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包 含：CX1X 2X3X4X5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸 (V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其中X4 是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中 X5是谷氨酰胺（Q);選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：CX1(iCX5CX 5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)，以及（XaXb)z 基序，其中 Xa 是任意氨基酸殘基，Xb 是 選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及 其中z是1_4。
[0047] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包 含：CX1X 2X3X4X5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨 酸（V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨 酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨酸（D)， 其中X4是組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)， 以及其中X 5是谷氨酰胺（Q);選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中所述半 胱氨酸基序選自由以下序列組成的組：CCX 3CXCX3CX2CCXCX5CX9CX 5CXC (SEQ ID NO: 96)、 CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC (SEQ ID NO: 97), CX7CXCX5CX4CCCX4CX6CXC (SEQ ID NO:98), CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC(SEQ ID N0:100)、 Cx5Cxcx1Cxcx3CCx3Cx 4Cx10C(seq id no： 101), cx9cccx3cx4cccx5cx6c(seq id no： 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C (SEQ ID NO: 103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C (SEQ ID NO: 104)、 CX6CX2CX3CCCX4CX5CX 3CX3C(SEQ ID NO: 105), CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC(SEQ ID NO: 106), CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC(SEQ ID NO: 107), CX5CX2CCX5CX4CCX3CCX 7C(SEQ ID NO: 108), CX5CX5CX3CX2CXCCX4CX 7CXC (SEQ ID NO : 109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C (SEQ ID NO: 110)、CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO: 111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C (SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX 3CX4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO: 114), CX10CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO: 115), CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX 4CX8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID NO: 120) , Cx3CX5CX3CCCX4CX9C (SEQ ID NO: 121), CCX9CX3CXCCX3CX5C (SEQ ID NO: 122), Cx9CX2CX3CX4CCX4CX 5C (SEQ ID NO: 123) , CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID N0:124), Cx9CX3CCCX10CX2CX3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO : 126)、 CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO : 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C (SEQ ID NO: 128)、 Cx8CX2CX4CCX4CX3CX 3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C (SEQ ID NO: 130), CxiiCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、CX2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、 CX9CX5CX4CCX7C(SEQ ID NO: 133), CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135) , CX9CX5CX4CCX8C (SEQ ID NO: 136) , CX9CX6CX4CCXC (SEQ ID NO: 137), CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138)、CX10CX3CX4CCX4C (SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C (SEQ ID NO: 140) , CX10CX3CX4Cx7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C(SEQ ID NO: 142), CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID NO: 143)、CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144)、CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145)、CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CX10CXCX4C(SEQ ID N0:148)、CX1(ICCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);以及（XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸 (Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0048] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 另外的序列，所述另外的序列是接頭。
[0049] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述接頭連接到 非抗體序列的C-末端、N-末端、或C-末端和N-末端兩者。
[0050] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)CDR3是反 芻動(dòng)物CDR3。
[0051] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述反芻動(dòng)物是 牛。
[0052] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含人類(lèi)重鏈可變區(qū)框架序列。
[0053] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含人類(lèi)重鏈種系序列，或衍生自人類(lèi)重鏈種系序列。
[0054] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含人類(lèi)重鏈種系序列，所述人類(lèi)重鏈種系序列是VH4家族成員種系序列。
[0055] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含VH4-34種系序列。
[0056] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含人類(lèi)重鏈種系序列，所述人類(lèi)重鏈種系序列衍生自VH4-34種系序列。
[0057] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基于Kabat編號(hào)的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
[0058] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDR2,所述CDR2包含基于Kabat編號(hào)的Glu50Ser取代。
[0059] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDRl和CDR2,所述CDRl包含基于Kabat編號(hào)的Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、 Gly27Phe、Phe29Leu、Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基于基于 Kabat 編號(hào)的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和Asn58Gly取代。
[0060] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含在SEQ ID勵(lì)：461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸序 列。
[0061] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列。
[0062] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸序 列；以及SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列。
[0063] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸序 列；SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列；以及一肽序列，其中所述肽序列位于SEQ ID NO: 461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 與 SEQ ID N0:470 之間。
[0064] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述肽序列是牛 序列、非牛序列、抗體序列或非抗體序列。
[0065] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含人類(lèi)輕鏈可變區(qū)框架序列。
[0066] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)序列，所述輕鏈可變區(qū)序列是λ輕鏈可變區(qū)序列。
[0067] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述λ輕鏈可 變區(qū)序列是牛λ輕鏈可變區(qū)序列，或衍生自牛λ輕鏈可變區(qū)序列。
[0068] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述λ輕鏈可 變區(qū)序列是人類(lèi)λ輕鏈可變區(qū)序列，或衍生自人類(lèi)λ輕鏈可變區(qū)序列。
[0069] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述人類(lèi)λ輕 鏈可變區(qū)序列是VL1-51種系序列。
[0070] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述人類(lèi)λ輕 鏈可變區(qū)序列衍生自VL1-51種系序列。
[0071] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VL1-51種 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基于Kabat編號(hào)的Ile29Val和Asn32Gly取代。
[0072] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VL1-51種 系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含DNN到⑶T的取代。
[0073] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VL1-51種 系序列包含 CDR2,所述 CDR2 包含 DNNKRP(SEQ ID N0:471)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的 取代。
[0074] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VL1-51種 系序列包含基于Kabat編號(hào)的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代。
[0075] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VL1-51種 系序列包含基于Kabat編號(hào)的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及CDR2,所述CDR2 包含DNN到⑶T的取代。
[0076] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含SEQ ID NO :440、441、442、443或444中列出的氨基酸序列。
[0077] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了編碼本文公開(kāi)的人源化抗體或其結(jié)合片段的多核苷酸。
[0078] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的多核 苷酸。
[0079] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化可變區(qū)的多核苷酸。
[0080] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了包含本文公開(kāi)的多核苷酸的載體。
[0081] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了包含本文公開(kāi)的載體的宿主細(xì)胞。
[0082] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了包含多種多核苷酸的核酸文庫(kù)，所述多核苷酸包含編碼 人源化抗體或其結(jié)合片段的序列，其中所述抗體或其結(jié)合片段包含超長(zhǎng)CDR3。
[0083] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)，其中所述抗體或其結(jié) 合片段包含超長(zhǎng)⑶R3。
[0084] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)CDR3的長(zhǎng) 度是35個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，40個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，45個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，50個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，55 個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，或60個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)。
[0085] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)CDR3的長(zhǎng) 度是35個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)。
[0086] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含3 個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，4個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，5個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，6個(gè)或 更多個(gè)半胱氨酸殘基，7個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，8個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，9個(gè)或更多 個(gè)半胱氨酸殘基，10個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，11個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，或12個(gè)或更 多個(gè)半胱氨酸殘基。
[0087] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含3 個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基。
[0088] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，抗體或其結(jié)合片 段包含半胱氨酸基序。
[0089] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所 述半胱氨酸基序選自由以下序列組成的組=CXiqCX5CX5CXCX 7C(SEQ ID NO:41)、 CXiciCX6CX5CXCX15C (SEQ ID NO: 42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO: 43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO: 44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
[0090] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述半胱氨酸基 序選自由以下序列組成的組：
[0091] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID no:99)、cx5cx3cxcx4cx4ccx 1(icx2cc(seq id no:loo)、Cx5Cxcx1Cxcx3CCx3Cx 4CxiqC(seq ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID NO: 150)、CX10C(SEQ ID NO: 151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152)。
[0092] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含2 到6個(gè)二硫鍵。
[0093] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 SEQ ID NO :40或其衍生物。
[0094] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 SEQ ID NO : 1-4中任一個(gè)的氨基酸殘基3-6。
[0095] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 非人類(lèi)DH或其衍生物。
[0096] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述非人類(lèi)DH 是 SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: 10、 SEQ ID NO:11 或 SEQ ID NO:12。
[0097] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 JH序列或其衍生物。
[0098] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述JH序列是 SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID N0:15、SEQ ID N0:16 或 SEQ ID N0:17。
[0099] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含： 非人類(lèi)VH序列或其衍生物；非人類(lèi)DH序列或其衍生物；和/或JH序列或其衍生物。
[0100] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 另外的氨基酸序列，所述另外的氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之間的二至六個(gè)氨 基酸殘基或更多氨基酸殘基。
[0101] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述另外的氨基 酸序列選自由以下序列組成的組：IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO:20或 SEQ ID NO:21〇
[0102] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 衍生自或基于 SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、 SEQ ID N0:27 或 SEQ ID N0:28 的序列。
[0103] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 非牛序列或非抗體序列。
[0104] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，非抗體序列是合 成的序列。
[0105] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，非抗體序列是細(xì) 胞因子序列、淋巴因子序列、趨化因子序列、生長(zhǎng)因子序列、激素序列或毒素序列。
[0106] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，非抗體序列 是IL-8序列、IL-21序列、SDF-I (α )序列、生長(zhǎng)抑素序列、氯毒素（chlorotoxin)序列、 Pro-TxII序列或齊考諾肽（ziconotide)序列。
[0107] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，非抗體序列是 SEQ ID NO :475-481 中的任一個(gè)。
[0108] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 X1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)，其 中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬 酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸 (H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷氨 酰胺（Q)。
[0109] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，X1X2X 3X4X5基序 是 TTVHQ(SEQ ID N0:153)、TSVHQ(SEQ ID N0:154)、SSVTQ(SEQ ID N0:155)、STVHQ(SEQ ID NO :156), ATVRQ (SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO:163)、STVYQ(SEQ ID NO:164)、TIVHQ(SEQ ID NO:165)、AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、 TTVFQ(SEQ ID NO: 167), AAVFQ(SEQ ID NO: 168), GTVHQ(SEQ ID NO: 169), ASVHQ(SEQ ID NO :170), TAVFQ (SEQ ID NO: 171), ATVFQ (SEQ ID NO: 172), AAAHQ (SEQ ID NO: 173), VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175) , TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO :177), ITAHQ (SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID NO:181)、TTVLQ(SEQ ID NO:182)、TTTHQ(SEQ ID NO:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO:184)。
[0110] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 CX1X2X3X4X5 基序。
[0111] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述CX1X 2X3X4X5 基序是CTTVHQ(SEQ ID N0:185)、CTSVHQ(SEQ ID N0:186)、CSSVTQ(SEQ ID N0:187)、 CSTVHQ (SEQ ID NO :188)、CATVRQ (SEQ ID NO :189)、CTTVYQ (SEQ ID NO :190)、CSPVHQ (SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、CTAVYQ(SEQ ID NO:193)、CTNVHQ(SEQ ID NO:194)、 CATVHQ(SEQ ID NO: 195)、CSTVYQ(SEQ ID NO: 196)、CTIVHQ(SEQ ID NO: 197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、 CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、 CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID NO:210), CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212), CGTVYQ(SEQ ID NO:213), CTTVLQ(SEQ ID NO:214), CTTTHQ(SEQ ID N0:215) 或 CTTDYQ(SEQ ID NO :216)。
[0112] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 (XaX b)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0113] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述（XaX b)z基 序是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、HYTYTYEW(SEQ ID N0:219)、 KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff (SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff (SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO:226), SYTYNYDF(SEQ ID NO:227), SYTYNYEff(SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO: 229), SYVffTHNF (SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID NO :231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、 TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、TYSYEH(SEQ ID NO:244)、TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF(SEQ ID NO: 249)、AYSY (SEQ ID NO: 250)、CYSF (SEQ ID NO: 251)、DYTY (SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256)、NYDY(SEQ ID NO:257)、NYQW(SEQ ID NO:258)、NYSF(SEQ ID NO:259)、PYEW(SEQ ID NO:260),RYNff(SEQ ID NO:261),RYTY(SEQ ID NO:262),SYEF(SEQ ID NO:263),SYEH(SEQ ID NO:264)、SYEW(SEQ ID NO:265)、SYKW(SEQ ID NO:266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO:268), TYEF(SEQ ID NO:269), TYEff(SEQ ID NO:270), TYQff(SEQ ID NO:271), TYTY(SEQ ID NO:272)或 VYEW(SEQ ID NO:273)。
[0114] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述（XaX b)z基序 是 YXYXYX。
[0115] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)， 其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天 冬酰胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨 酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是谷氨酰 胺（Q)，以及其中η是27-54。
[0116] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 Xn(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0117] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 X1X2X3X4X5X n(XaXb)z基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V) ，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5 是谷氨酰胺（Q)，其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸 (W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0118] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述X1X2X 3X4X5基 序是TTVHQ(SEQIDN0:153)或TSVHQ(SEQIDN0:154)，以及其中（XaXb) z基序是YXYXYX。
[0119] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含： CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)， 其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或 天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（Τ)、精氨酸（R)、酪氨酸（Υ)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中 X5是谷氨酰胺（Q)，選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：CX1(iCX5CX 5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8Cx2C (SEQ ID NO :86)、CX10CX6CX5CX8Cx 2C (SEQ ID NO :87)、CX10CX6CX5CXCx8C (SEQ ID NO:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID NO:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID NO:95);以及（XaXb)z 基序，其中 Xa 是任意氨基酸殘基，Xb 是 選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及 其中z是1_4。
[0120] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含： CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)， 其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天 冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨 酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷 氨酰胺（Q);選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以下序 列組成的組：CCX 3CXCX3CX2CCXCX5CX9CX 5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQIDN0:150)、CX1ciC(SEQIDN0:151)^PCX 9C(SEQIDN0:152);#& (XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0121] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)⑶R3包含 額外的序列，所述額外的序列是接頭。
[0122] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述接頭連接到 非抗體序列的C-末端、N-末端、或C-末端和N-末端兩者。
[0123] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)CDR3是反 芻動(dòng)物CDR3。
[0124] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述反芻動(dòng)物是 牛。
[0125] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含人類(lèi)重鏈可變區(qū)框架序列。
[0126] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含人類(lèi)重鏈種系序列，或衍生自人類(lèi)重鏈種系序列。
[0127] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含人類(lèi)重鏈種系序列，所述人類(lèi)重鏈種系序列是VH4家族成員種系序列。
[0128] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含VH4-34種系序列。
[0129] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含衍生自VH4-34的人類(lèi)重鏈種系序列。
[0130] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基于Kabat編號(hào)的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
[0131] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDR2,所述CDR2包含基于Kabat編號(hào)的Glu50Ser取代。
[0132] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VH4-34種 系序列包含CDRl和CDR2,所述CDRl包含基于Kabat編號(hào)的Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、 Gly27Phe、Phe29Leu、Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基于基于 Kabat 編號(hào)的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和Asn58Gly取代。
[0133] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列。
[0134] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸序 列；以及SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列。
[0135] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或 其結(jié)合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸 序列；SEQ ID N0:470中列出的氨基酸序列；以及一肽序列，其中所述肽序列位于SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 與 SEQ ID N0:470 之間。
[0136] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述肽序列是牛 序列、非牛序列、抗體序列或非抗體序列。
[0137] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含λ輕鏈可變區(qū)序列。
[0138] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)序列，所述輕鏈可變區(qū)序列是λ輕鏈可變區(qū)序列。
[0139] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述λ輕鏈可 變區(qū)序列是牛λ輕鏈可變區(qū)序列。
[0140] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述λ輕鏈可 變區(qū)序列是人類(lèi)λ輕鏈可變區(qū)序列。
[0141] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述人類(lèi)λ輕 鏈可變區(qū)序列是VL1-51。
[0142] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述人類(lèi)λ輕 鏈可變區(qū)序列衍生自VL1-51。
[0143] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VL1-51種 系序列包含CDR1，所述CDRl包含基于Kabat編號(hào)的Ile29Val和Asn32Gly取代。
[0144] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VL1-51種 系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含DNN到⑶T的取代。
[0145] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VL1-51種 系序列包含 CDR2,所述 CDR2 包含 DNNKRP(SEQ ID N0:471)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的取 代。
[0146] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VL1-51種 系序列包含基于Kabat編號(hào)的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代。
[0147] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述VL1-51種 系序列包含基于Kabat編號(hào)的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及CDR2,所述CDR2 包含DNN到GDT的取代。
[0148] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段包含SEQ ID NO :440、441、442、443或444中列出的氨基酸序列。
[0149] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，人源化抗體或其 結(jié)合片段以空間定址的形式（spatially addressed format)存在。
[0150] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了人源化抗體可變區(qū)的方法，包括遺傳地組合編碼非人類(lèi) 超長(zhǎng)CDR3的核酸序列與編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸序列的步驟。
[0151] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了產(chǎn)生包含超長(zhǎng)⑶R3的人源化抗體的文庫(kù)的方法，所述 方法包括：組合編碼超長(zhǎng)CDR3的核酸序列與編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸序列，以 產(chǎn)生編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的核酸；以及表達(dá)編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體 的所述核酸，以產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的文庫(kù)。
[0152] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)的 方法，所述超長(zhǎng)CDR3包含非抗體序列，所述方法包括：組合編碼超長(zhǎng)CDR3的編碼、編碼人類(lèi) 可變區(qū)框架（FR)序列的核酸序列以及編碼非抗體序列的核酸序列，以產(chǎn)生編碼包含超長(zhǎng) CDR3和非抗體序列的人源化抗體或其結(jié)合片段的核酸，表達(dá)編碼包含超長(zhǎng)CDR3和非抗體 序列的人源化抗體或其結(jié)合片段的所述核酸，以產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3和非抗體序列的人源 化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)。在一些實(shí)施方式中，超長(zhǎng)CDR3包含牛、非牛、抗體或非抗體序 列。本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)的方 法，所述超長(zhǎng)CDR3包含非?；蚍强贵w序列。
[0153] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù) 的方法，所述超長(zhǎng)CDR3包含半胱氨酸基序，所述方法包括：組合人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列 以及編碼超長(zhǎng)CDR3和半胱氨酸基序的核酸序列；向該核酸序列中引入一個(gè)或多個(gè)核苷酸 變化，該核酸序列編碼位于編碼不同氨基酸殘基的核苷酸的半胱氨酸基序中的一個(gè)或多個(gè) 半胱氨酸殘基之間的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基，以產(chǎn)生編碼包含超長(zhǎng)CDR3和半胱氨酸基序 的人源化抗體或其結(jié)合片段的核酸，該半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)或多 個(gè)半胱氨酸殘基之間引入的一個(gè)或多個(gè)核苷酸變化；以及表達(dá)所述編碼人源化抗體或其結(jié) 合片段的核酸，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含超長(zhǎng)CDR3和半胱氨酸基序，該所述半胱 氨酸基序具有在半胱氨酸結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基之間引入的一個(gè)或多個(gè)核 苷酸變化，以產(chǎn)生人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含超 長(zhǎng)CDR3和半胱氨酸基序，其中該半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)或多個(gè)半 胱氨酸殘基之間引入的一個(gè)或多個(gè)核苷酸變化。
[0154] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)，所 述超長(zhǎng)CDR3包含半胱氨酸基序，其中所述抗體或結(jié)合片段包含位于半胱氨酸基序中的半 胱氨酸殘基之間的氨基酸殘基的一個(gè)或多個(gè)取代。
[0155] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了產(chǎn)生包含牛超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文 庫(kù)的方法，所述方法包括：組合編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸序列和編碼牛超長(zhǎng) CDR3的核酸，表達(dá)編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸和編碼牛超長(zhǎng)CDR3的核酸，以產(chǎn)生 包含牛超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)。
[0156] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了人源化抗體，包括包含⑶R3支架的抗體，生產(chǎn)所述抗體的 方法，以及其用途。
[0157] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含CDR3支架的人源化抗體或其結(jié)合片段。
[0158] 在一些實(shí)施方式中，所述⑶R3支架包含一個(gè)或多個(gè)人類(lèi)可變區(qū)框架序列。
[0159] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了包含牛超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)。
[0160] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含 X1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)，其 中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬 酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸 (H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷氨 酰胺（Q)。
[0161] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，CDR3支架的長(zhǎng)度 是35個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，40個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，45個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，50個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，55個(gè) 氨基酸或更長(zhǎng)，或60個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)。
[0162] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，CDR3支架的長(zhǎng)度 是35個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)。
[0163] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含3 個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，4個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，5個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，6個(gè)或 更多個(gè)半胱氨酸殘基，7個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，8個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，9個(gè)或更多 個(gè)半胱氨酸殘基，10個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，11個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，或12個(gè)或更 多個(gè)半胱氨酸殘基。
[0164] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含3 個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基。
[0165] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含半 胱氨酸基序。
[0166] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所 述半胱氨酸基序選自由以下序列組成的組=CX iqCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41)、 CXiciCX6CX5CXCX15C (SEQ ID NO: 42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO: 43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO: 44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
[0167] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，半胱氨酸基序選 自由以下序列組成的組：
[0168] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID NO: 150)、CX10C(SEQ ID NO: 151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152)。
[0169] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含2 至6個(gè)二硫鍵。
[0170] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，CDR3支架中的 X1X2X3X4X5基序是TTVHQ(SEQ ID NO: 153)、TSVHQ(SEQ ID NO: 154)、SSVTQ(SEQ ID NO: 155)、 STVHQ(SEQ ID NO: 156), ATVRQ(SEQ ID NO: 157), TTVYQ(SEQ ID NO: 158), SPVHQ(SEQ ID NO :159), ATVYQ (SEQ ID NO: 160), TAVYQ (SEQ ID NO: 161), TNVHQ (SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO: 163), STVYQ(SEQ ID NO: 164), TIVHQ(SEQ ID NO: 165), AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、TTVFQ(SEQ ID NO: 167)、AAVFQ(SEQ ID NO: 168)、GTVHQ(SEQ ID NO: 169)、 ASVHQ(SEQ ID NO: 170), TAVFQ(SEQ ID NO: 171), ATVFQ(SEQ ID NO: 172), AAAHQ(SEQ ID NO :173), VVVYQ (SEQ ID NO: 174), GTVFQ (SEQ ID NO: 175), TAVHQ (SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO:177), ITAHQ(SEQ ID NO: 178), VTVHQ(SEQ ID NO:179) ；AAVHQ(SEQ ID N0:180)、GTVYQ(SEQ ID N0:181)、TTVLQ(SEQ ID N0:182)、TTTHQ(SEQ ID N0:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO:184)。
[0171] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含 CX1X2X3X4X5 基序。
[0172] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述CX1X 2X3X4X5 基序是CTTVHQ (SEQ ID NO :185)、CTSVHQ (SEQ ID NO :186)、CSSVTQ(SEQ ID NO: 187)、 CSTVHQ (SEQ ID NO :188)、CATVRQ (SEQ ID NO :189)、CTTVYQ (SEQ ID NO :190)、CSPVHQ (SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、CTAVYQ(SEQ ID NO:193)、CTNVHQ(SEQ ID NO:194)、 CATVHQ(SEQ ID NO: 195)、CSTVYQ(SEQ ID NO: 196)、CTIVHQ(SEQ ID NO: 197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、 CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、 CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID NO:210), CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212), CGTVYQ(SEQ ID NO:213), CTTVLQ(SEQ ID NO:214), CTTTHQ(SEQ ID N0:215) 或 CTTDYQ(SEQ ID NO :216)。
[0173] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含 (XaX b)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0174] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述（XaX b)z基 序是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、HYTYTYEW(SEQ ID N0:219)、 KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF (SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO :229), SYVffTHNF (SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID N0:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、 TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、TYSYEH(SEQ ID NO:244)、TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF(SEQ ID NO: 249)、AYSY (SEQ ID NO: 250)、CYSF (SEQ ID NO: 251)、DYTY (SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256)、NYDY(SEQ ID NO:257)、NYQW(SEQ ID NO:258)、NYSF(SEQ ID NO:259)、PYEW(SEQ ID NO:260),RYNff(SEQ ID NO:261),RYTY(SEQ ID NO:262),SYEF(SEQ ID NO:263),SYEH(SEQ ID NO:264)、SYEW(SEQ ID NO:265)、SYKW(SEQ ID NO:266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO:268)、TYEF(SEQ ID NO:269)、TYEW(SEQ ID NO:270)、TYQW(SEQ ID NO:271)、TYTY(SEQ ID NO:272)或 VYEW(SEQ ID NO:273)。
[0175] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述（XaX b)z基序 是 YXYXYX。
[0176] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含 X1X2X3X4X5X n基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)， 其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天 冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨 酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X 5是谷氨酰 胺（Q)，以及其中η是27-54。
[0177] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含 Xn(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中z是1-4。
[0178] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含 X1X2X3X4X5X n(XaXb)z基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X 5是谷 氨酰胺（Q)，Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組 氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中ζ是1-4。
[0179] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，CDR3支架中的 X1X2X3X4X5 基序是 TTVHQ(SEQ ID NO: 153)或 TSVHQ(SEQ ID NO: 154)，以及其中（XaXb)z 基序 是 YXYXYX。
[0180] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包 含：CX1X 2X3X4X5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨 酸（V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸 (V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其中 X4是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其 中X 5是谷氨酰胺（Q)，選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序=CXiqCX5CX 5CXCX7C (SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO: 44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78)、 CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID NO:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID NO:95);以及（XaXb)z 基序，其中 Xa 是任意氨基酸殘基，Xb 是 選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及 其中z是1_4。
[0181] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含： CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或纈氨酸（V)， 其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天 冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨 酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷 氨酰胺（Q)，選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以下序 列組成的組：CCX 3CXCX3CX2CCXCX5CX9CX 5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO :99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO :100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiciC (SEQ ID NO :101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C (SEQ ID NO ： 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C (SEQ ID NO： 103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105), CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC(SEQ ID NO :106), Cx4Cx4CCX4CX4CXCX1 !CX2CXC (SEQ ID NO： 107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID NO: 109), CX3CX7CX3CX4CCXCX2CX 5CX2C(SEQ ID NO :110), CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO： 111) > CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO :112), CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO ： 113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO : 115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID NO : 116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C (SEQ ID NO ：117), CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC (SEQ ID NO ： 118) , CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C (SEQ ID NO :119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C (SEQ ID NO: 120)、Cx3CX5CX3CCCX4CX 9C (SEQ ID NO :121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C (SEQ ID NO :122)、Cx9CX2CX3CX4CCX 4CX5C (SEQ ID NO : 123)、CX9CX7CX4CCXCX7CX 3C(SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO :126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C (SEQ ID NO: 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO : 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C(SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、Cx2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO :133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C (SEQ ID NO ： 134), CX9CX5CX4CCX14C (SEQ ID NO ： 135), CX9CX5CX4CCX8C (SEQ ID NO :136)、CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO : 137)、CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO :138)、 CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO :141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C (SEQ ID NO :142)、CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID NO :143)、 Cx7CXCX3CXCX6C (SEQ ID NO ： 144) ,CX7CXCX4CXCX4C (SEQ ID NO ： 145) XX9CX5CX4C (SEQ ID NO： 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CXiciCXCX4C(SEQ ID NO: 148)、CXltlCCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);以及（XaXb) z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組 氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0182] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含 SEQ ID NO :40或其衍生物。
[0183] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含 SEQ ID NO : 1-4的任一個(gè)的氨基酸殘基3-6。
[0184] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含非 人類(lèi)DH或其衍生物。
[0185] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述非人類(lèi)DH 是 SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10、 SEQ ID NO :11 或 SEQ ID NO :12。
[0186] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含 JH序列或其衍生物。
[0187] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述JH序列是 SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID N0:15、SEQ ID N0:16 或 SEQ ID N0:17。
[0188] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含： 非人類(lèi)VH序列或其衍生物；非人類(lèi)DH序列或其衍生物；和/或JH序列或其衍生物。
[0189] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含另 外的氨基酸序列，所述另外的氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之間的二至六個(gè)氨基 酸殘基或更多個(gè)氨基酸殘基。
[0190] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述另外的氨基 酸序列選自由以下序列組成的組：IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO :20或 SEQ ID NO ：21〇
[0191] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，⑶R3支架包含衍 生自或基于 SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、 SEQ ID NO :27 或 SEQ ID NO :28 的序列。
[0192] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，CDR3支架是反芻 動(dòng)物⑶R3支架。
[0193] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述反芻動(dòng)物是 牛。
[0194] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了包含本文公開(kāi)的⑶R3支架的文庫(kù)。
[0195] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了編碼本文公開(kāi)的CDR3支架的多核苷酸。
[0196] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了包含本文公開(kāi)的任何多核苷酸的載體。
[0197] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了包含本文公開(kāi)的任何載體的宿主細(xì)胞。
[0198] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了
[0199] 在每個(gè)或任一個(gè)上文或下文提及的實(shí)施方式的一些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞是細(xì) 菌、病毒或噬菌體。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0200] 當(dāng)與附圖一同閱讀時(shí)，前文的概述以及下文的發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明將被更好地理解。 為了舉例說(shuō)明公開(kāi)內(nèi)容的目的，附圖中顯示的是當(dāng)前優(yōu)選的實(shí)施方式。然而要理解的是，公 開(kāi)內(nèi)容不限于所顯示的確切的裝置、實(shí)施例和工具。
[0201] 附圖 1 顯示了何含軺長(zhǎng) CDR3 序列的、稱(chēng)為 BLV1H12、BLV5B8、BLVOT3、BLV8C11、 BF4E9、BFlHl或F18的示例性牛衍生的抗體可變區(qū)序列的序列比對(duì)。
[0202] 附圖2A-C描繪了超長(zhǎng)⑶R3序列。（上方）從種系VhBUU DH2和Jh的翻譯。文獻(xiàn) 中報(bào)道的5個(gè)全長(zhǎng)的超長(zhǎng)CDR H3含有四到八個(gè)半胱氨酸，彼此不是高度同源的；然而，在比 對(duì)之前"固定"這些⑶R H3的第一個(gè)半胱氨酸是，可以發(fā)現(xiàn)半胱氨酸殘基與DH2的某些保守 性。七個(gè)序列中的四個(gè)（BLV1H12、BLV?3、BLV8C11和BF4E9)含有與D H2相同位置的四個(gè)半 胱氨酸，但還具有其他的半胱氨酸。BLV5B8具有與種系DH2-樣的兩個(gè)半胱氨酸。具有一 定半胱氨酸保守性的這種有限的同源性表明，D H2的突變可以產(chǎn)生這些序列。B-Ll和B-L2 是來(lái)自源于牛脾臟的初始序列，其余的是來(lái)自深度測(cè)序數(shù)據(jù)的選定的超長(zhǎng)CDR H3序列。第 一組含有所鑒定的最長(zhǎng)的⑶R H3,顯現(xiàn)為同源相關(guān)的（clonally related)。*表明序列出 現(xiàn)167次，表明它是對(duì)于功能強(qiáng)烈選定的。八個(gè)半胱氨酸序列的某一些表現(xiàn)為功能選擇的， 因?yàn)樗鼈兂霈F(xiàn)多次，在括號(hào)中標(biāo)明。各種長(zhǎng)度的其他代表性序列在最后一組中標(biāo)明。限定了 ⑶R H3范圍的框架半胱氨酸和色氨酸殘基是雙下劃線的。表2A-C中呈現(xiàn)的序列BLV1H12 到UL-77 (最左側(cè)一列）分成四段來(lái)顯示，來(lái)區(qū)別衍生自某些種系序列和V/D/J連接序列的 氨基酸殘基的節(jié)段。從左到右，第一段衍生自VH種系，在公開(kāi)內(nèi)容中以X 1X2X3X4X5基序表示。 第二段代表來(lái)自V-D連接的序列，在公開(kāi)內(nèi)容中以X n表示。第三段代表衍生自DH2種系的 氨基酸殘基的串列，第四段是衍生自JhI種系區(qū)域的氨基酸殘基的串列。
[0203] 附圖 3 描繪了稱(chēng)為 BLV1H12、BLV5B8、BLVOT3、BLV8C11、BF4E9、BFlHl 或 F18 的示 例性牛衍生的超長(zhǎng)CDR3序列的序列比對(duì)。
[0204] 附圖4顯示了稱(chēng)為VH-UL的示例性牛種系重鏈可變區(qū)（Vh)序列，其適合于修飾或 與超長(zhǎng)⑶R3序列一起使用。
[0205] 附圖5A-B顯示了稱(chēng)為4-39、4-59*03、4-34*09和4-34*02的示例性人類(lèi)種系重鏈 可變區(qū)序列，它們適合于修飾或與超長(zhǎng)CDR3序列一起使用（A)，以及這些序列的比對(duì)（B)。
[0206] 附圖6顯示了稱(chēng)為BLV1H12的示例性牛輕鏈可變區(qū)序列，其適合于修飾或與超長(zhǎng) CDR3序列一起使用（例如，包含超長(zhǎng)CDR3序列的重鏈可變區(qū)序列）。
[0207] 附圖 7A-B 顯示了稱(chēng)為 V11-47、V11-40*1、V11-51*01 和 V12-18*02 的示例性輕鏈 可變區(qū)序列，它們適合于修飾或與超長(zhǎng)CDR3序列一起使用（A)，以及這些序列的比對(duì)（B)。
[0208] 發(fā)明詳述
[0209] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體，以及生產(chǎn)所述抗體的 材料（例如，蛋白質(zhì)序列、遺傳序列、細(xì)胞、文庫(kù)）和方法（例如，人源化方法、文庫(kù)方法）。 這種人源化抗體對(duì)于多種疾病狀態(tài)或失調(diào)的治療或預(yù)防是有用的。
[0210] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體，其中所述CDR3序列 長(zhǎng)度是35個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)（例如，40個(gè)或更長(zhǎng)、45個(gè)或更長(zhǎng)、50個(gè)或更長(zhǎng)、55個(gè)或更長(zhǎng)、60 個(gè)或更長(zhǎng)）和/或其中所述CDR3序列具有至少3個(gè)半胱氨酸殘基或更多（例如，3個(gè)或更多 個(gè)半胱氨酸殘基、4個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基、5個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基、6個(gè)或更多個(gè)半 胱氨酸殘基、7個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基、8個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基、9個(gè)或更多個(gè)半胱氨 酸殘基、10個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基、11個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基、或12個(gè)或更多個(gè)半胱 氨酸殘基）。這樣的抗體，如本文描述的，結(jié)合（例如，特異性或選擇性結(jié)合）多種靶點(diǎn)，包 括，例如，蛋白質(zhì)靶點(diǎn)，例如跨膜蛋白質(zhì)（例如，GPCR、離子通道、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、細(xì)胞表面受體）。
[0211] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了用于制備或制造包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體的方 法和材料。這樣的材料包括蛋白質(zhì)、遺傳序列、細(xì)胞和文庫(kù)。這樣的方法包括人源化的方法 以及產(chǎn)生和篩選文庫(kù)的方法。
[0212] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段。在一些實(shí) 施方式中，超長(zhǎng)CDR3長(zhǎng)度可以是35個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，40個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，45個(gè)氨基酸或 更長(zhǎng)，50個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，55個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，或60個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)。在一些實(shí)施方式 中，超長(zhǎng)CDR3可以包含3個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，4個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，5個(gè)或 更多個(gè)半胱氨酸殘基，6個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，7個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，8個(gè)或更 多個(gè)半胱氨酸殘基，9個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，10個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，11個(gè)或更 多個(gè)半胱氨酸殘基，或12個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基。超長(zhǎng)CDR3可以包含半胱氨酸基序， 包括，例如，其中所述半胱氨酸基序選自由以下序列組成的組：CX 1(ICX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78)、 CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C(SEQ ID NO:87)、CX10CX6CX5CXCx8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID N0:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)?？商娲?，所述超長(zhǎng) CDR3 可以包含 半胱氨酸基序，包括，例如，其中所述半胱氨酸基序選自由以下序列組成的組： CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC (SEQ ID NO ：96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC (SEQ ID NO： 97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、 CX5CX3CXCX4CX4CCX1(ICX 2CC (SEQ ID NO :100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO :101)、 CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO :102)、Ccx8Cx5Cx4CX3CX 4CCXCX1C (SEQ ID NO :103)、 CCX6CCX5CCCX4CX4CX12C (SEQ ID NO ： 104), CX6CX2CX3CCCX4CX5CX 3CX3C (SEQ ID NO： 105), CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC (SEQ ID NO ： 106) , CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC (SEQ ID NO： 107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID NO: 109), CX3CX7CX3CX4CCXCX2CX 5CX2C(SEQ ID NO :110), CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO： 111) > CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO :112), CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO ： 113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO : 115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID NO : 116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C (SEQ ID NO ：117), CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC (SEQ ID NO ： 118) , CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C (SEQ ID NO :119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C (SEQ ID NO: 120)、Cx3CX5CX3CCCX4CX 9C (SEQ ID NO :121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C (SEQ ID NO :122)、Cx9CX2CX3CX4CCX 4CX5C (SEQ ID NO : 123)、CX9CX7CX4CCXCX7CX 3C(SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO :126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C (SEQ ID NO: 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO : 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C(SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、Cx2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO :133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C (SEQ ID NO ： 134), CX9CX5CX4CCX14C (SEQ ID NO ： 135), CX9CX5CX4CCX8C (SEQ ID NO :136)、CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO : 137)、CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO :138)、 CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO :141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C (SEQ ID NO :142)、CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID NO :143)、 Cx7CXCX3CXCX6C (SEQ ID NO ： 144) ,CX7CXCX4CXCX4C (SEQ ID NO ： 145) XX9CX5CX4C (SEQ ID NO： 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CXiciCXCX4C(SEQ ID NO: 148)、CXltlCCX4C(SEQ ID NO: 149)、CX15C (SEQ ID NO: 150)、CX10C (SEQ ID NO :151)和 CX9C (SEQ ID NO: 152)。
[0213] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中所述超 長(zhǎng)CDR3包含X 1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸⑶或 纈氨酸（V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨 酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨酸（D)，其 中X4是組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及 其中X 5是谷氨酰胺（Q)。在一些實(shí)施方式中，所述X1X2X3X 4X5基序可以是TTVHQ(SEQ ID NO: 153),TSVHQ(SEQ ID NO ： 154),SSVTQ(SEQ ID NO ： 155),STVHQ(SEQ ID NO ： 156),ATVRQ(SEQ ID NO: 157)、TTVYQ (SEQ ID NO: 158)、SPVHQ (SEQ ID NO: 159)、ATVYQ (SEQ ID NO: 160)、 TAVYQ (SEQ ID NO :161)、TNVHQ (SEQ ID NO :162)、ATVHQ (SEQ ID NO :163)、STVYQ (SEQ ID NO: 164)、TIVHQ (SEQ ID NO: 165)、AIVYQ (SEQ ID NO: 166)、TTVFQ (SEQ ID NO: 167)、 AAVFQ (SEQ ID NO: 168)、GTVHQ (SEQ ID NO: 169)、ASVHQ (SEQ ID NO: 170)、TAVFQ (SEQ ID NO ：171), ATVFQ (SEQ ID NO ： 172), AAAHQ (SEQ ID NO ： 173), VVVYQ (SEQ ID N0：174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175)、TAVHQ(SEQ ID NO: 176)、ITVHQ(SEQ ID NO: 177)、ITAHQ(SEQ ID NO ：178), VTVHQ(SEQ ID N0：179) ；AAVHQ(SEQ ID NO ： 180), GTVYQ(SEQ ID N0：181), TTVLQ (SEQ ID NO: 182)、TTTHQ (SEQ ID NO :183)或 TTDYQ (SEQ ID NO: 184)。
[0214] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中所述超 長(zhǎng)CDR3包含（XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸 (F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。在一些實(shí)施 方式中，所述（XaX b)z 基序可以是 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID N0:218)、 HYTYTYEff (SEQ ID NO ：219), KHRYTYEff (SEQ ID NO ：220), NYIYKYSF(SEQ ID N0：221), PYIYTYQF(SEQ ID NO ：222), SFTYTYEff (SEQ ID NO ：223), SYIYIYQff (SEQ ID NO ：224), SYNYTYSff(SEQ ID NO ：225), SYSYSYEY(SEQ ID NO ：226), SYTYNYDF (SEQ ID NO ：227), SYTYNYEff(SEQ ID NO ：228), SYTYNYQF(SEQ ID NO ：229), SYVffTHNF(SEQ ID N0：230), TYKYVYEff (SEQ ID NO ：231), TYTYTYEF(SEQ ID NO ：232), TYTYTYEff (SEQ ID N0：233), VFTYTYEF(SEQ ID NO ：234),AYTYEff(SEQ ID NO ：235),DYIYTY(SEQ ID NO ：236),IHSYEF(SEQ ID NO ：237),SFTYEF(SEQ ID NO ：238),SHSYEF(SEQ ID NO ：239),THTYEF(SEQ ID NO ：240), TWTYEF(SEQ ID NO :241)、TYNYEW(SEQ ID NO :242)、TYSYEF(SEQ ID NO :243)、TYSYEH(SEQ ID NO :244)、TYTYDF(SEQ ID NO :245)、TYTYEF(SEQ ID NO :246)、TYTYEW(SEQ ID NO :247)、 AYEF(SEQ ID NO :248)、AYSF(SEQ ID NO :249)、AYSY(SEQ ID NO :250)、CYSF(SEQ ID NO : 251),DYTY(SEQ ID NO ：252),KYEH(SEQ ID NO ：253),KYEff(SEQ ID NO ：254), MYEF(SEQ ID NO :255)、NWIY(SEQ ID NO :256)、NYDY(SEQ ID NO :257)、NYQW(SEQ ID NO :258)、NYSF(SEQ ID NO :259)、PYEW (SEQ ID NO :260)、RYNW (SEQ ID NO :261)、RYTY (SEQ ID NO :262)、 SYEF (SEQ ID NO :263)、SYEH (SEQ ID NO :264)、SYEW (SEQ ID NO :265)、SYKW (SEQ ID NO : 266)、SYTY (SEQ ID NO: 267)、TYDF (SEQ ID NO: 268)、TYEF (SEQ ID NO: 269)、TYEW (SEQ ID NO: 270)、TYQW (SEQ ID NO: 271)、TYTY (SEQ ID NO :272)或 VYEW (SEQ ID NO: 273)。
[0215] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中所述超 長(zhǎng)CDR3包含X 1X2X3X4X5Xn(X aXb)z基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨 酸（S)或纈氨酸（V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸 (A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸⑴或天冬氨 酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸 (L)，以及其中X 5是谷氨酰胺（Q)，其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙 氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，其中η是27-54,以及其中z 是 1_4〇
[0216] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中所述超長(zhǎng) CDR3包含：CX1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈 氨酸（V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸 (V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4 是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5 是谷氨酰胺（Q)，選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序=CXiqCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID NO : 41)、CX10CX6Cx5CXCX15C (SEQ ID NO :42)、CX11CXCX5C (SEQ ID NO :43)、CX11CX5CX5CXCx7C (SEQ ID NO ：44) , CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO :45)、CXiciCX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO :46)、 CX10CX6CX6CXCx7C (SEQ ID NO ：47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO ：48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO ：49) ,CX13CX8CX8C (SEQ ID NO ： 50) ,CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO ： 51) ,CX10CX5CX5C (SEQ ID NO : 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO : 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO : 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C (SEQ ID NO ：55), CX10CX6CX5CXCX9C (SEQ ID NO ： 56), CX10CXCx4CX5CX11C (SEQ ID NO :57)、CX7CX3CX6CX5CXCX 5CX1(iC(SEQ ID NO :58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO :59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO :60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO :61)、 CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO ：62), CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO ：63), CX10CX5CX5CXCX10C (SEQ ID NO :64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO :65)、CXiqCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO :66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO :67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO :68)、CX4CX6CX9CX2CX 11C (SEQ ID NO :69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO :70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、CX10CX6CX5C(SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID NO :73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID NO :74)、CX10CXCX6C (SEQ ID NO : 75)、CX10CX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、CX10CX4CX5CX12CX 2C (SEQ ID NO :77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO :78)、 CX12CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO ： 79) ,CX10CX6CX5CXCXnC (SEQ ID NO ：80) ,CX16CX5CXCXCX14C (SEQ ID NO :81)、CX10CX5CXCX8Cx6C (SEQ ID NO : 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO :84)、CX1(ICX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID NO :85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C (SEQ ID NO ：86) XX10CX6CX5CX8CX2C (SEQ ID NO ：87) ,CX10CX6CX5CXCX8C (SEQ ID NO :88)、CX1(ICX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO :89)、CXiciCX6CX5CX3CX 8C(SEQ ID NO : 90)、CX10CX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID NO :91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C (SEQ ID NO :92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO :93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO :95)，以及（XaXb) z 基序，其中 Xa 是任意氨基酸殘基，Xb 是 選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及 其中z是1_4。
[0217] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中所述超 長(zhǎng)CDR3包含：CX 1X2X3X4X5基序，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或 纈氨酸（V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨 酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中 X4是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中 X5是谷氨酰胺（Q)，選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以 下序列組成的組：
[0218] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQIDN0:150)、CX1ciC(SEQIDN0:151)^PCX 9C(SEQIDN0:152);#& (XaXb)z基序，其中X a是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W) 和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
[0219] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了產(chǎn)生包含超長(zhǎng)⑶R3的人源化抗體的文庫(kù)的方法，包括： 組合編碼超長(zhǎng)CDR3的核酸序列與編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸序列，以產(chǎn)生編碼 包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的核酸；以及表達(dá)編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的所述核 酸，以產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的文庫(kù)。
[0220] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù) 的方法，所述超長(zhǎng)CDR3包含非抗體序列，包括：組合編碼超長(zhǎng)CDR3的編碼、編碼人類(lèi)可變區(qū) 框架（FR)序列的核酸序列以及編碼非抗體序列的核酸序列，以產(chǎn)生編碼包含超長(zhǎng)CDR3和 非抗體序列的人源化抗體或其結(jié)合片段的核酸，表達(dá)編碼包含超長(zhǎng)CDR3和非抗體序列的 人源化抗體或其結(jié)合片段的所述核酸，以產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3和非抗體序列的人源化抗體 或其結(jié)合片段的文庫(kù)。
[0221] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù) 的方法，所述超長(zhǎng)CDR3包含非抗體序列。
[0222] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù) 的方法，所述超長(zhǎng)CDR3包含半胱氨酸基序，包括：組合人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列以及編碼 超長(zhǎng)CDR3和半胱氨酸基序的核酸序列；向該核酸序列中引入一個(gè)或多個(gè)核苷酸變化，該核 酸序列編碼位于編碼不同氨基酸殘基的核苷酸的半胱氨酸基序中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸 殘基之間的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基，以產(chǎn)生編碼包含超長(zhǎng)CDR3和半胱氨酸基序的人源化 抗體或其結(jié)合片段的核酸，該半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨 酸殘基之間引入的一個(gè)或多個(gè)核苷酸變化；以及表達(dá)所述編碼人源化抗體或其結(jié)合片段的 核酸，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含超長(zhǎng)CDR3和半胱氨酸基序，該所述半胱氨酸基序 具有在半胱氨酸結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基之間引入的一個(gè)或多個(gè)核苷酸變化， 以產(chǎn)生人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含超長(zhǎng)CDR3和 半胱氨酸基序，其中該所述半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸 殘基之間引入的一個(gè)或多個(gè)核苷酸變化。
[0223] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)，所 述超長(zhǎng)CDR3包含半胱氨酸基序，其中所述抗體或結(jié)合片段包含位于半胱氨酸基序中的半 胱氨酸殘基之間的氨基酸殘基的一個(gè)或多個(gè)取代。
[0224] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了產(chǎn)生包含牛超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文 庫(kù)的方法，所述方法包括：組合編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸序列和編碼牛超長(zhǎng) CDR3的核酸，表達(dá)編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸和編碼牛超長(zhǎng)CDR3的核酸，以產(chǎn)生 包含牛超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)。
[0225] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了包含X1X2X3X 4X5基序的⑶R3支架，其中X1是蘇氨酸（T)、 甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨 酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨 酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸 (Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷氨酰胺（Q)。
[0226] 蛋白質(zhì)
[0227] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體。
[0228] 在一實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體，其中所述 CDR3長(zhǎng)度是35個(gè)氨基酸或更多（例如，40個(gè)或更多、50個(gè)或更多、55個(gè)或更多、60個(gè)或更 多）。這種人源化抗體可以包含超長(zhǎng)CDR3內(nèi)的至少3個(gè)半胱氨酸殘基或更多（例如，4個(gè) 或更多，6個(gè)或更多、8個(gè)或更多）。
[0229] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3是長(zhǎng)度35個(gè)氨基酸或更多，并且衍生自或基于非人類(lèi)序列。超長(zhǎng)CDR3序列可以 衍生自天然地產(chǎn)生超長(zhǎng)⑶R3抗體的任何物種，包括反芻動(dòng)物，例如家畜（牛，Bos taurus)。
[0230] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3是長(zhǎng)度35個(gè)氨基酸或更多，并且衍生自非抗體序列。所述非抗體序列可以衍生 自任何蛋白質(zhì)家族，包括但不限于，趨化因子、生長(zhǎng)因子、肽、細(xì)胞因子、細(xì)胞表面蛋白、血清 蛋白、毒素、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白、凝血因子、分泌的蛋白，等等。所述非抗體序列可以是人類(lèi)或 非人類(lèi)來(lái)源的，可以包含非抗體蛋白質(zhì)的一部分，例如肽或結(jié)構(gòu)域。超長(zhǎng)CDR3的非抗體序 列可以含有來(lái)自其天然序列的突變，包括氨基酸改變（例如，取代）、插入或刪除?？梢栽谔?于非抗體序列之間的接點(diǎn)處工程化額外的氨基酸，以促進(jìn)或增強(qiáng)人源化抗體內(nèi)非抗體序列 的適當(dāng)折疊。
[0231] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3長(zhǎng)度是35個(gè)氨基酸或更多，并且包含至少3個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，包括，例 如，4個(gè)或更多，6個(gè)或更多，以及8個(gè)或更多。
[0232] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3長(zhǎng)度是35個(gè)或更多個(gè)氨基酸，并且包含至少3個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，其中所 述超長(zhǎng)CDR3是多特異性抗體的組分。所述多特異性抗體可以是雙特異性的，或包含更多的 效價(jià)。
[0233] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3長(zhǎng)度是35個(gè)氨基酸或更多，并且包含至少3個(gè)半胱氨酸殘基或更多，其中部分人 類(lèi)超長(zhǎng)CDR3是免疫綴合物的組分。
[0234] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體，其中 所述CDR3長(zhǎng)度是35個(gè)氨基酸或更多，并且包含至少3個(gè)半胱氨酸殘基或更多，其中包含超 長(zhǎng)CDR3的人源化抗體結(jié)合跨膜蛋白質(zhì)靶點(diǎn)。這樣的跨膜靶點(diǎn)可以包括，但不限于，GPCR、離 子通道、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和細(xì)胞表面受體。
[0235] 基因序列
[0236] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了編碼包含超長(zhǎng)CDR序列的人源化抗體的基因序列（例如， 基因、核酸、多核苷酸）。
[0237] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了編碼超長(zhǎng)CDR3的基因序列（例如，基因、核酸、多核苷 酸）。
[0238] 在一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的 基因序列，其中所述CDR3長(zhǎng)度是35個(gè)或更多個(gè)氨基酸（例如，40個(gè)或更多、50個(gè)或更多、 55個(gè)或更多、60個(gè)或更多）。這種人源化抗體可以包含超長(zhǎng)CDR3內(nèi)的至少3個(gè)或更多個(gè)半 胱氨酸殘基（例如，4個(gè)或更多，6個(gè)或更多、8個(gè)或更多）。
[0239] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3是長(zhǎng)度35個(gè)氨基酸或更多，并且衍生自或基于非人類(lèi)序列。編 碼超長(zhǎng)CDR3的遺傳序列可以衍生自天然地產(chǎn)生超長(zhǎng)CDR3抗體的任何物種，包括反芻動(dòng)物， 例如家畜（牛，Bos taurus)。
[0240] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3是長(zhǎng)度35個(gè)氨基酸或更多，并且衍生自非抗體蛋白質(zhì)序列。所 述編碼非抗體蛋白質(zhì)序列的基因序列可以衍生自任何蛋白質(zhì)家族，包括但不限于，趨化因 子、生長(zhǎng)因子、肽、細(xì)胞因子、細(xì)胞表面蛋白、血清蛋白、毒素、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白、凝血因子、分 泌的蛋白，等等。所述非抗體蛋白質(zhì)序列可以是人類(lèi)或非人類(lèi)來(lái)源的，可以包含非抗體蛋白 質(zhì)的一部分，例如肽或結(jié)構(gòu)域。超長(zhǎng)CDR3的非抗體蛋白質(zhì)序列可以含有來(lái)自其天然序列的 突變，包括氨基酸改變（例如，取代）、插入或刪除。可以在處于非抗體序列之間的接點(diǎn)處工 程化另外的氨基酸，以促進(jìn)或增強(qiáng)人源化抗體內(nèi)非抗體序列的適當(dāng)折疊。
[0241] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3長(zhǎng)度是35個(gè)氨基酸或更多，并且包含至少3個(gè)或更多個(gè)半胱氨 酸殘基，包括，例如，4個(gè)或更多，6個(gè)或更多，以及8個(gè)或更多。
[0242] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3長(zhǎng)度是35個(gè)或更多個(gè)氨基酸，并且包含至少3個(gè)或更多個(gè)半胱 氨酸殘基，其中所述超長(zhǎng)CDR3是多特異性抗體的組分。所述多特異性抗體可以是雙特異性 的，或包含更多的效價(jià)。
[0243] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3長(zhǎng)度是35個(gè)氨基酸或更多，并且包含至少3個(gè)半胱氨酸殘基或 更多，其中所述超長(zhǎng)CDR3是免疫綴合物的組分。
[0244] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體 的基因序列，其中所述CDR3長(zhǎng)度是35個(gè)氨基酸或更多，并且包含至少3個(gè)半胱氨酸殘基或 更多，其中包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體結(jié)合跨膜蛋白質(zhì)靶點(diǎn)。這樣的跨膜靶點(diǎn)可以包括， 但不限于，GPCR、離子通道、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和細(xì)胞表面受體。
[0245] 文庫(kù)和陣列
[0246] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體的集合、文庫(kù)和陣列。
[0247] 在一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體的 文庫(kù)或陣列，其中所述文庫(kù)或陣列的至少兩個(gè)成員在所述超長(zhǎng)CDR3序列中的至少一個(gè)半 胱氨酸的位置上是不同的。通過(guò)所述超長(zhǎng)CDR3序列中不同數(shù)量的半胱氨酸（例如，至少3 個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，例如4個(gè)或更多個(gè)，6個(gè)或更多個(gè)以及8個(gè)或更多個(gè)）和/或通 過(guò)不同的二硫鍵形成，以及因此不同的環(huán)結(jié)構(gòu)，可以增強(qiáng)結(jié)構(gòu)多樣性。
[0248] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體 的文庫(kù)或陣列，其中所述文庫(kù)或陣列的至少兩個(gè)成員在位于所述超長(zhǎng)CDR3中的半胱氨酸 之間的至少一個(gè)氨基酸處是不同的。就此來(lái)說(shuō)，所述文庫(kù)或陣列的成員可以含有CDR3的相 同位置處的半胱氨酸，產(chǎn)生相似的總體結(jié)構(gòu)折疊，但通過(guò)不同的氨基酸側(cè)鏈帶來(lái)細(xì)微的差 異。這樣的文庫(kù)或陣列對(duì)于親合力成熟可能是有用的。
[0249] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體 的文庫(kù)或陣列，其中至少兩個(gè)超長(zhǎng)CDR3序列在長(zhǎng)度上是不同的（例如，氨基酸長(zhǎng)度為35個(gè) 或更多個(gè)氨基酸，例如40個(gè)或更多、50個(gè)或更多、55個(gè)或更多、以及60個(gè)或更多）。在文庫(kù) 或陣列的成員之間，氨基酸和半胱氨酸含量可以或可以不變化。不同長(zhǎng)度的超長(zhǎng)CDR3序列 可以提供獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，包括，例如，由于作為長(zhǎng)度改變的結(jié)果的空間差異。
[0250] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體 的文庫(kù)或陣列，其中所述文庫(kù)的至少兩個(gè)成員在用于構(gòu)建包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的 人類(lèi)框架方面是不同的。
[0251] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體 的文庫(kù)或陣列，其中所述文庫(kù)或陣列的至少兩個(gè)成員不同在于具有包含一部分超長(zhǎng)CDR3 的非抗體蛋白質(zhì)序列。這樣的文庫(kù)或陣列可以含有多個(gè)非抗體蛋白質(zhì)序列，包括趨化因子、 生長(zhǎng)因子、肽、細(xì)胞因子、細(xì)胞表面蛋白、血清蛋白、毒素、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)、凝血因子、分 泌的蛋白質(zhì)、病毒或細(xì)菌蛋白質(zhì)，等等。所述非抗體蛋白質(zhì)序列可以是人類(lèi)或非人類(lèi)來(lái)源 的，可以包含非抗體蛋白質(zhì)的一部分，例如肽或結(jié)構(gòu)域。超長(zhǎng)CDR3的非抗體蛋白質(zhì)序列可 以含有來(lái)自其天然序列的突變，包括氨基酸改變（例如，取代）、插入或刪除?？梢栽谔幱诔?長(zhǎng)CDR3內(nèi)的非抗體序列之間的接點(diǎn)處工程化另外的氨基酸，以促進(jìn)或增強(qiáng)人源化抗體內(nèi) 非抗體序列的適當(dāng)折疊。
[0252] 本文公開(kāi)的內(nèi)容的文庫(kù)或陣列可以是本領(lǐng)域公知的幾種形式。所述文庫(kù)或陣列可 以是可定址的文庫(kù)或可定址的陣列。所述文庫(kù)或陣列可以處于展示形式，例如，抗體序列可 以在噬菌體、核糖體、mRNA、酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞上表達(dá)。
[0253] 細(xì)胞
[0254] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含基因序列的細(xì)胞，所述基因序列編碼包含超長(zhǎng)CDR3 序列的人源化抗體。
[0255] 在一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了表達(dá)包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的 細(xì)胞。所述細(xì)胞可以是原核或真核的，包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體可以在細(xì)胞表面表達(dá)， 或分泌到培養(yǎng)基中。當(dāng)在細(xì)胞表面展示時(shí)，人源化抗體優(yōu)選地含有用于向質(zhì)粒膜中插入的 基序，例如，處于C-末端的跨膜結(jié)構(gòu)域，或脂質(zhì)附著位點(diǎn)。對(duì)于細(xì)菌細(xì)胞，包含超長(zhǎng)CDR3的 人源化抗體可以分泌到周質(zhì)中。當(dāng)細(xì)胞是真核的時(shí)，它們可以用編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源 化抗體的遺傳序列瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。可替代地，可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法，轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo) 編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的遺傳序列來(lái)創(chuàng)建穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定的庫(kù)?？梢酝ㄟ^(guò) 熒光活化的細(xì)胞分選（FACS)或通過(guò)選擇編碼藥物抗性的基因來(lái)挑選細(xì)胞。對(duì)于生產(chǎn)包含 超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體有用的細(xì)胞包括原核細(xì)胞如大腸桿菌，真核細(xì)胞如酵母，釀酒 酵母（Saccharomyces cerevisiae)和巴斯德畢赤氏酵母（Pichia pastoris)，中國(guó)倉(cāng)鼠卵 巢（CHO)細(xì)胞，猴細(xì)胞如C0S-1，或人類(lèi)細(xì)胞如HEK-293、HeLa、SP-l。
[0256] 人源化方法
[0257] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了制造包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體的方法，包括將衍 生自非人類(lèi)CDR3的超長(zhǎng)CDR3序列工程化到人類(lèi)框架之中的步驟。所述人類(lèi)框架可以是種 系來(lái)源的，或可以衍生自非種系（例如，突變的或親和力成熟的）序列。本領(lǐng)域技術(shù)人員 公知的的遺傳工程技術(shù)，包括在本文中公開(kāi)的，可以用于產(chǎn)生含有人類(lèi)框架和非人類(lèi)超長(zhǎng) CDR3的雜合DNA序列。不同于可以由衍生自七個(gè)家族之一的V區(qū)基因編碼的人類(lèi)抗體，產(chǎn)生 超長(zhǎng)CDR3序列的?？贵w看起來(lái)利用了單個(gè)V區(qū)家族，其可以被認(rèn)為與人類(lèi)VH4家族最為同 源。在優(yōu)選的實(shí)施方式，衍生自牛的超長(zhǎng)CDR3序列被人源化，以產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的抗體， 衍生自VH4家族的人類(lèi)V區(qū)序列可以遺傳地融合到牛衍生的超長(zhǎng)CDR3序列。人類(lèi)抗體基因 座中的示例性VH4種系基因序列在附圖5A中顯示（例如，SEQ ID NO :31-34和368-371)。
[0258] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了人源化抗體可變區(qū)的方法，包括遺傳地組合編碼非 人類(lèi)超長(zhǎng)CDR3(ULCDR3)的核酸序列與編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸序列的步 驟。還提供的是制造人源化抗體可變區(qū)的方法，包括選擇包含F(xiàn)R1、FR2和FR3的人類(lèi) 框架序列；選擇CDRl序列；選擇CDR2序列；選擇超長(zhǎng)CDR3序列；以及組合所述序列為 FRl-⑶R1-FR2-⑶R2-FR3-UIXDR3。還提供的是制造人源化抗體可變區(qū)序列的方法，包括選 擇包含編碼FRl-⑶R1-FR2-⑶R2-FR3的序列的人類(lèi)抗體可變區(qū)序列；選擇編碼非人類(lèi)超長(zhǎng) CDR3(ULCDR3)的序列；以及將步驟（a)的人類(lèi)序列與步驟（b)的非人類(lèi)序列按閱讀框融 合，以產(chǎn)生編碼 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-ULCDR3 的序列。
[0259] 在一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了人類(lèi)VH4框架序列與牛衍生的超長(zhǎng) CDR3的融合物，例如，可以通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)的。首先，鑒定V區(qū)遺傳序列的第二個(gè)半胱氨 酸，以及編碼所述第二個(gè)半胱氨酸的核苷酸序列。一般地，所述第二個(gè)半胱氨酸標(biāo)記了 CDR3 的上游（N-末端）兩個(gè)殘基處的框架與⑶R3的邊界。第二，鑒定牛衍生的V區(qū)序列中的第 二個(gè)半胱氨酸，其類(lèi)似地標(biāo)記了⑶R3的上游（N-末端）2個(gè)殘基。第三，編碼人類(lèi)V區(qū)的遺 傳材料與編碼超長(zhǎng)CDR3的遺傳序列組合。因而，可以制造遺傳融合物，其中超長(zhǎng)CDR3序列 位于人類(lèi)V區(qū)序列的框架中。優(yōu)選地，包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體在氨基酸組成方面盡可 能地接近人類(lèi)。任選地，J區(qū)序列可以從牛衍生的序列突變?yōu)槿祟?lèi)序列。還任選的是，人源 化的重鏈可以與人類(lèi)輕鏈配對(duì)。
[0260] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了人類(lèi)超長(zhǎng)CDR3重鏈與非人類(lèi)輕鏈 的配對(duì)。
[0261] 在另一種實(shí)施方式中，本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了包含超長(zhǎng)CDR3的人源化重鏈與人 類(lèi)輕鏈的配對(duì)。優(yōu)選地，所述輕鏈與已知與牛超長(zhǎng)CDR3重鏈配對(duì)的牛輕鏈?zhǔn)峭吹?。示?性牛輕鏈在附圖7A中示出（例如，SEQ ID NO:36-39和373-376)。
[0262] 文庫(kù)方法
[0263] 本文公開(kāi)的內(nèi)容提供了制造包含人源化抗體的文庫(kù)的方法，所述人源化抗體包含 超長(zhǎng)⑶R3序列。在WO 2010/054007中描述了制造空間定址文庫(kù)的文庫(kù)的方法。在酵母、 噬菌體、大腸桿菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中制造文庫(kù)的方法是本領(lǐng)域公知的。
[0264] 本文公開(kāi)的內(nèi)容還提供了篩選包含超長(zhǎng)CDR3序列的人源化抗體的文庫(kù)的方法。
[0265] 定義
[0266] "超長(zhǎng)⑶R3"或"超長(zhǎng)⑶R3序列"在本文中可互換地使用，包括不是衍生自人類(lèi)抗 體序列的CDR3或CDR3序列。超長(zhǎng)CDR3長(zhǎng)度可以是35個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，例如，40個(gè)氨基 酸或更長(zhǎng)，45個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，50個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，55個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，或60個(gè)氨基酸或 更長(zhǎng)。超長(zhǎng)CDR3的長(zhǎng)度可以包括非抗體序列。超長(zhǎng)CDR3可以包含非抗體序列，包括，例 如，白細(xì)胞介素序列、激素序列、細(xì)胞因子序列、毒素序列、淋巴因子序列、生長(zhǎng)因子序列、趨 化因子序列、毒素序列、或其組合。優(yōu)選地，超長(zhǎng)⑶R3是重鏈⑶R3 (⑶R-H3或⑶RH3)。優(yōu) 選地，超長(zhǎng)CDR3是衍生自或基于反芻動(dòng)物（例如，牛）序列的序列。超長(zhǎng)CDR3可以包含 至少3個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，例如，4個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，6個(gè)或更多個(gè)半胱氨 酸殘基，8個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，10個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，或12個(gè)或更多個(gè)半胱 氨酸殘基（例如，3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個(gè)或更多個(gè)）。超長(zhǎng)^1?3可以包含以下基序 中的一種或多種：半胱氨酸基序，X 1X2X3X4X5基序，CX 1X2X3X4X5基序，或（X aXb)z基序。"半胱 氨酸基于"是超長(zhǎng)CDR3中氨基酸殘基的節(jié)段，其包含3個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，包括4 個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，5個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，6個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，7個(gè) 或更多個(gè)半胱氨酸殘基，8個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，9個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，10個(gè)或 更多個(gè)半胱氨酸殘基，11個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，或12個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基。半 胱氨酸基序可以包含選自由以下序列組成的組的氨基酸序列：CX 1(ICX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:41) ,CX10CX6Cx5CXCX15C(SEQ ID NO:42) XX11CXCX5C(SEQ ID NO:43) ,CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX10CX6Cx5CXCX13C (SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCx7C(SEQ ID NO:47)、CXiciCX4CX7CXCX8C(SEQ ID NO:48)、CXiciCX4CX7CXCX7C(SEQ ID NO:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCx7C(SEQ ID NO: 51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID NO: 52)、CXiciCX5CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 53)、CXiciCX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCx7C(SEQ ID NO:55)、CX10CX6CX5CXCx9C(SEQ ID NO:56)、CX10CXCX4Cx5CX11C(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(iCXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CX11CX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CXiciCX5CX5CXCXiciC (SEQ ID NO:64)、CX1(ICXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CXiciCX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68)、CX4CX6CX9CX2CX11C (SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C (SEQ ID NO:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71)、 CX10CX6CX5C (SEQ ID NO :72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C (SEQ ID NO: 73)、CX7CX5CXCX2C (SEQ ID NO:74)、CXiciCXCX6C (SEQ ID NO:75)、CX1(ICX3CX3CX5CX 7CXCX6C (SEQ ID NO: 76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID NO:81)、CXiciCX5CXCX8CX6C (SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCx8C (SEQ ID NO: 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID NO:85)、 CX11CX4CX5CX8CX2C (SEQ ID NO :86)、CX10CX6CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO :87)、CX10CX6CX5CXCx8C (SEQ ID NO:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90) , CX10CX6CX5CXCX2CX6CX 5C(SEQ ID NO:91) , CX7CX6CX3CX3CX9C(SEQ ID NO:92), CX9CX8CX5CX6CX5C (SEQ ID NO : 93)、CX10CX2CX2CX7CXCX UCX5C (SEQ ID NO :94)和 CX1QCX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID NO:95)?？商娲?，半胱氨酸基序可以包含選自由以下序列 組成的組的氨基酸序列：
[0267] CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC (SEQ ID NO: 100)、Cx5CxcxiCxCX3CCX3CX 4CXiqC (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), Ccx8Cx5Cx4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX 4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID NO:lll)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID NO:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID NO:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID NO:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID NO:121)、CCX9CX3CXCCX3CX 5C(SEQ ID NO:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID NO:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 Cx3CX5CX5CX4CCX10CX 6C (SEQ ID NO: 126) , CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO: 127), CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、Cx8CX2CX4CCX4CX 3CX3C (SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO : 130)、CxiiCX3CX4CCCX8CX 2C (SEQ ID NO: 131)、 Cx2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : I 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID NO: 136) , CX9CX6Cx4CCXC (SEQ ID NO: 137) , CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CXiciCX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139)、CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140)、CXiqCX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO: 141) , CX7CX7CX2CX2CX3C (SEQ ID NO: 142) , CX9CX4CX4CCX6C (SEQ ID N0:143), Cx7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152)。半胱氨 酸基序優(yōu)選地位于超長(zhǎng)CDR3內(nèi)X1X2X3X 4X5基序和（XaXb) z基序之間。I1X2X3X4X 5基序"是超 長(zhǎng)CDR3中一系列的五個(gè)連續(xù)氨基酸殘基，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、 絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X 2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙 氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天 冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或 亮氨酸（L)，以及其中X 5是谷氨酰胺（Q)。在一些實(shí)施方式中，所述X1X2X3X 4X5基序可以 是 TTVHQ(SEQ ID N0:153)、TSVHQ(SEQ ID N0:154)、SSVTQ(SEQ ID N0:155)、STVHQ(SEQ ID NO :156), ATVRQ (SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO:163)、STVYQ(SEQ ID NO:164)、TIVHQ(SEQ ID NO:165)、AIVYQ(SEQ ID NO: 166)、 TTVFQ (SEQ ID NO :167)、AAVFQ (SEQ ID NO :168)、GTVHQ (SEQ ID NO :169)、ASVHQ (SEQ ID NO :170), TAVFQ (SEQ ID NO: 171), ATVFQ (SEQ ID NO: 172), AAAHQ (SEQ ID NO: 173), VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO :177), ITAHQ (SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID NO:181)、TTVLQ(SEQ ID NO:182)、TTTHQ(SEQ ID NO:183)或 TTDYQ(SEQ ID NO: 184)。WCX1X2X3X4X5基序"是超長(zhǎng)⑶R3中的一系列六個(gè)連續(xù)氨基酸殘基，其中第一個(gè)氨 基酸殘基是半胱氨酸，其中X 1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X 3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X 5 是谷氨酰胺（Q)。在一些實(shí)施方式中，所述CX1X2X3X4X 5基序是CTTVHQ(SEQ ID NO: 185)、 CTSVHQ(SEQ ID NO: 186)、CSSVTQ(SEQ ID NO: 187)、CSTVHQ(SEQ ID NO: 188)、CATVRQ(SEQ ID NO:189)、CTTVYQ(SEQ ID NO:190)、CSPVHQ(SEQ ID NO:191)、CATVYQ(SEQ ID NO:192)、 CTAVYQ(SEQ ID NO: 193)、CTNVHQ(SEQ ID NO: 194)、CATVHQ(SEQ ID NO: 195)、CSTVYQ(SEQ ID NO:196)、CTIVHQ(SEQ ID NO:197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、CTTVFQ(SEQ ID NO:199)、 CAAVFQ(SEQ ID NO:200)、CGTVHQ(SEQ ID NO:201)、CASVHQ(SEQ ID NO:202)、CTAVFQ(SEQ ID NO:203)、CATVFQ(SEQ ID NO:204)、CAAAHQ(SEQ ID NO:205)、CVVVYQ(SEQ ID NO:206)、 CGTVFQ(SEQ ID NO:207)、CTAVHQ(SEQ ID NO:208)、CITVHQ(SEQ ID NO:209)、CITAHQ(SEQ ID NO:210),CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ；CAAVHQ(SEQ ID NO:212),CGTVYQ(SEQ ID N0:213), CTTVLQ(SEQ ID N0:214)、CTTTHQ(SEQ ID N0:215)或 CTTDYQ(SEQ ID N0:216)。"（XaXb)z" 基序是超長(zhǎng)CDR3中兩個(gè)氨基酸殘基的重復(fù)系列，其中X a是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪 氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是 1-4。在一些實(shí)施方式中，（X aXb)z 基序可以包含 CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、HYTYTYDF(SEQ ID NO:218), HYTYTYEff (SEQ ID NO:219), KHRYTYEff (SEQ ID NO:220), NYIYKYSF(SEQ ID N0:221), PYIYTYQF(SEQ ID NO:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO:226), SYTYNYDF(SEQ ID NO: 227) , SYTYNYEff (SEQ ID NO: 228) , SYTYNYQF (SEQ ID NO: 229) , SYVffTHNF (SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID NO: 231), TYTYTYEF (SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO:233)、VFTYTYEF(SEQ ID NO:234)、AYTYEW(SEQ ID NO:235)、DYIYTY(SEQ ID NO:236)、 IHSYEF(SEQ ID NO:237)、SFTYEF(SEQ ID NO:238)、SHSYEF(SEQ ID NO:239)、THTYEF(SEQ ID NO:240)、TWTYEF(SEQ ID NO:241)、TYNYEW(SEQ ID NO:242)、TYSYEF(SEQ ID NO:243)、 TYSYEH(SEQ ID NO:244),TYTYDF(SEQ ID NO:245),TYTYEF(SEQ ID NO:246),TYTYEff(SEQ ID NO:247),AYEF(SEQ ID NO:248),AYSF(SEQ ID NO:249),AYSY(SEQ ID NO:250)XYSF(SEQ ID NO:251),DYTY(SEQ ID NO:252),KYEH(SEQ ID NO:253),KYEff(SEQ ID NO:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NffIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257),NYQff(SEQ ID NO:258),NYSF(SEQ ID NO:259)、PYEW(SEQ ID NO :260)、RYNff(SEQ ID NO :261)、RYTY(SEQ ID NO :262)、SYEF(SEQ ID NO:263)、SYEH(SEQ ID NO :264)、SYEW(SEQ ID NO :265)、SYKW(SEQ ID NO :266)、SYTY(SEQ ID NO:267)、TYDF(SEQ ID NO :268)、TYEF(SEQ ID NO :269)、TYEW(SEQ ID NO :270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID N0:272)或 VYEW(SEQ ID N0:273)。在一些實(shí)施方式中，所述 (XaXb) z基序是YXYXYX。超長(zhǎng)⑶R3可以包含一氨基酸序列，所述氨基酸序列衍生自或基于 SEQ ID NO :40(參見(jiàn)，例如，SEQ ID NO: 1-4的氨基酸殘基3-6;還參見(jiàn)，例如，附圖2A-C中的 VH種系序列）。包含超長(zhǎng)CDR3的可變區(qū)可以包括一氨基酸序列，所述氨基酸序列是SEQ ID N0:1(CTTVHQ)、SEQ ID N0:2(CTSVHQ)、SEQ ID N0:3(CSSVTQ)或SEQ ID N0:4(CTTVHP)。這樣 的序列可以衍生自或基于牛種系VH基因序列（例如，SEQ ID NO: 1)。超長(zhǎng)CDR3可以包含衍 生自或基于非人類(lèi)DH基因序列的序列，例如，SEQ ID N0:5(還參見(jiàn)，例如Koti,等人（2010) Mol. Immunol. 47:2119-2128)，或可選擇的序列，例如，SEQ ID N0:6、7、8、9、10、ll 或 12(還 參見(jiàn)，例如，附圖2A-C中的DH2種系序列）。超長(zhǎng)CDR3可以包含衍生自或基于JH序列的序 列，例如，SEQ ID NO: 13(還參見(jiàn)，例如 Hosseini,等人（2004) Int. Immunol. 16:843-852)， 或可選擇的序列，例如，SEQIDN0:14、15、16或17(還參見(jiàn)，例如，附圖2A-C中的JH1種系 序列）。在一實(shí)施方式中，超長(zhǎng)CDR3可以包含衍生自或基于非人類(lèi)VH序列的序列（例如， SEQ ID N0:l、2、3或4;可替代地，附圖2A-C中的VH序列）和/或衍生自或基于非人類(lèi)DH 序列的序列（例如，SEQ ID N0:5、6、7、8、9、10、ll或12 ;可替代地，附圖2A-C中的DH序列） 和/或衍生自或基于JH序列的序列（例如，SEQ ID NO: 13、14、15、16或17 ;可替代地，附圖 2A-C中的JH序列），和任選的額外的序列，所述額外的序列包含二至六個(gè)或更多個(gè)氨基酸 (例如，IR、IF、SEQ ID N0:18、19、20或21)，例如，位于VH衍生的序列和DH衍生的序列之 間。在另一個(gè)實(shí)施方式中，超長(zhǎng)CDR3可以包含衍生自或基于SEQ ID N0:22、23、24、25、26、 27或28的序列（還參見(jiàn)，例如，附圖2A-C中的SEQ ID NO: 276-359)。
[0268] 本文公開(kāi)的"分離的"生物分子，例如各種多肽、多核苷酸和抗體，是指已經(jīng)被鑒定 和分離，和/或從其天然環(huán)境的至少一種成分中回收的生物分子。
[0269] "拮抗劑"是指部分地或完全地阻斷、抑制或中和多肽的活性（例如，生物學(xué)活性） 的任何分子。"拮抗劑"還涵蓋的是完全地或部分地抑制編碼多肽的mRNA的轉(zhuǎn)錄或翻譯的 分子。適合的拮抗劑分子包括，例如，拮抗劑抗體或抗體片段；天然多肽的片段或氨基酸序 列變體；肽；反義寡核苷酸；小的有機(jī)分子；以及編碼多肽拮抗劑或拮抗劑抗體的核酸。提 及"一種"拮抗劑涵蓋了單一的拮抗劑或兩個(gè)或更多個(gè)不同拮抗劑的組合。
[0270] "激動(dòng)劑"是指部分地或完全地模擬多肽的生物學(xué)活性的任何分子。"激動(dòng)劑"還 涵蓋的是刺激編碼多肽的mRNA的轉(zhuǎn)錄或翻譯的分子。適合的激動(dòng)劑分子包括，例如，激動(dòng) 劑抗體或抗體片段；天然多肽；天然多肽的片段或氨基酸序列變體；肽；反義寡核苷酸；小 的有機(jī)分子；以及編碼多肽激動(dòng)劑或抗體的核酸。提及"一種"激動(dòng)劑涵蓋了單一的激動(dòng)劑 或兩個(gè)或更多個(gè)不同激動(dòng)劑的組合。
[0271] "分離的"抗體是指一種抗體，其已經(jīng)被鑒定和分離，和/或從其天然環(huán)境的成分 中回收。其天然環(huán)境的污染成分是干擾所述抗體的診斷或治療用途的材料，可包括酶、激 素和其它蛋白的或非蛋白的溶質(zhì)。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，分離的抗體將被純化至（1)按 抗體的重量計(jì)算大于95% (例如，通過(guò)Lowry法測(cè)定的），優(yōu)選的按重量計(jì)算超過(guò)99%， (2)達(dá)到足以獲得N-末端或內(nèi)部氨基酸序列的至少15個(gè)殘基的程度（例如，通過(guò)使用旋 轉(zhuǎn)杯測(cè)序儀），或（3)達(dá)到在還原或非還原條件下SDS-PAGE的同質(zhì)性（例如，使用考馬斯 (Coomassie?)藍(lán)或優(yōu)選的銀黃染色）。分離的抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)原位的抗體，因?yàn)椴淮?在抗體的天然環(huán)境的至少一種成分。類(lèi)似地，分離的抗體包括處于重組細(xì)胞周?chē)呐囵B(yǎng)基 中的抗體。分離的抗體可以通過(guò)至少一種純化步驟來(lái)制備。
[0272] "分離的"核酸分子是指從抗體核酸的天然來(lái)源中通常與之相關(guān)的至少一種雜 質(zhì)核酸分子中鑒定和分離的核酸分子。分離的核酸分子不同于其天然存在的形式或環(huán)境 (setting)。因此分離的核酸分子不同于在天然細(xì)胞中存在的核酸分子。然而，分離的核酸 分子包括被包含在表達(dá)抗體的細(xì)胞中的核酸分子，其中，例如，核酸分子位于與天然細(xì)胞的 不同的染色體位置中。
[0273] Kabat 中的可變域殘基編號(hào)，或 Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，Public Health Service, National Institutes of Health，Bethesda，Md. (1991)中的氨基酸位置編號(hào)，以及其變體，是指在Kabat等人中用于 抗體編碼的重鏈可變域或輕鏈可變域的編號(hào)系統(tǒng)。使用這種編號(hào)系統(tǒng)，實(shí)際上線性的氨基 酸序列可以含有更少或額外的氨基酸，相應(yīng)于可變域的FR或CDR的縮短，或插入。例如， 重鏈可變域可以包括處于H2的殘基52之后的單個(gè)氨基酸插入（例如，根據(jù)Kabat的殘基 52a)，以及處于重鏈FR殘基82之后的插入的殘基（例如，根據(jù)kabat的殘基82a、82b和 82c，等）。對(duì)于給定抗體，殘基的Kabat編號(hào)可以通過(guò)在抗體序列的同源性區(qū)域上與"標(biāo)準(zhǔn) 的" Kabat編號(hào)的序列比對(duì)來(lái)確定。
[0274] "基本上相似的"或"基本上相同的"是指在兩個(gè)數(shù)值（一般地，一個(gè)數(shù)值與本文公 開(kāi)的抗體相關(guān)，另一個(gè)數(shù)值與參比/比較抗體相關(guān)）之間足夠高的相似性，從而本領(lǐng)域技術(shù) 人員將認(rèn)為在所述值所衡量的生物學(xué)特征的情境內(nèi)兩個(gè)值之間的差異很小或沒(méi)有生物學(xué) 和/或統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性。作為參考/比較抗體的值的函數(shù)，所述兩個(gè)值之間的差異優(yōu)選 地小于約50 %，優(yōu)選地小于約40 %，優(yōu)選地小于約30 %，優(yōu)選地小于約20 %，優(yōu)選地小于約 10%。
[0275] "結(jié)合親和性" 一般是指分子（例如，抗體）的單個(gè)結(jié)合位點(diǎn)與它的結(jié)合配體（例 如，抗原）之間的非共價(jià)相互作用的總和的強(qiáng)度。除非另外標(biāo)明，"結(jié)合親和性"是指固有的 結(jié)合親和性，其反映了結(jié)合配對(duì)（例如，抗體和抗原）的成員之間1:1的相互作用。分子X(jué) 與它的配體Y的親和力一般可以通過(guò)解離常數(shù)來(lái)表示。親和力可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的常見(jiàn) 方法來(lái)測(cè)量，包括本文描述的那些。低親和力抗體一般緩慢地結(jié)合抗原并傾向于容易解離， 而高親和力抗體一般更快地結(jié)合抗原并傾向于保持結(jié)合更久。測(cè)量結(jié)合親和性的多種方法 是本領(lǐng)域已知的，它們的任何一種可以用于本文公開(kāi)的內(nèi)容。
[0276] "加載速率（on-rate) "或"締合的速率"或"締合速率"或"km"可以使用表面胞 質(zhì)團(tuán)共振技術(shù)根據(jù)供應(yīng)商的指導(dǎo)來(lái)測(cè)定，例如，Biacore (例如，1^3(3〇^4100，1^3〇〇^?-2000, Biacore?-3000, Biacore, Inc.，Piscataway, N. J.)羧甲基化葡聚糖生物傳感器芯片 (CM5, Biacore Inc.)〇
[0277] "載體"是指能夠轉(zhuǎn)運(yùn)與之連接的另一個(gè)核酸的核酸分子。一種類(lèi)型的載體是"質(zhì) 粒"，是指在其中可以連接其他DNA片段的環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)。另一種類(lèi)型的載體是噬菌體載 體。另一種類(lèi)型的載體是病毒載體，其中其他的DNA片段可以連接到病毒基因組中。某些 載體能夠在導(dǎo)入它們的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制（例如，具有細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)的細(xì)菌載體和游離 哺乳動(dòng)物載體）。其他載體（例如，非游離哺乳動(dòng)物載體）可以在導(dǎo)入宿主細(xì)胞中時(shí)被整合 到宿主細(xì)胞的基因組中，從而隨宿主基因組一起復(fù)制。此外，某些載體能夠指導(dǎo)與它們可操 作連接的基因的表達(dá)。這樣的載體在此被稱(chēng)為"重組表達(dá)載體"（或簡(jiǎn)稱(chēng)"重組載體"）。一 般地，在重組DNA技術(shù)中有實(shí)用性的表達(dá)載體常常是質(zhì)粒的形式。因而，"質(zhì)粒"和"載體" 有時(shí)可互換地使用，因?yàn)橘|(zhì)粒是常用的載體形式。
[0278] "基因"是指核酸（例如，DNA)序列，其包含多肽、前體或RNA(例如，rRNA、tRNA) 的生產(chǎn)所必需的編碼序列。多肽可以由全長(zhǎng)編碼序列或由編碼序列的任何部分來(lái)編碼，只 要保持了全長(zhǎng)或片段的期望的活性或功能性質(zhì)（例如，酶活性、配體結(jié)合、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫 原性，等等）。該術(shù)語(yǔ)還涵蓋結(jié)構(gòu)基因的編碼區(qū)域以及距每一端約Ikb或更遠(yuǎn)距離鄰近于 編碼區(qū)域的5'和3'末端的序列，從而所述基因相應(yīng)于全長(zhǎng)mRNA的長(zhǎng)度。位于編碼區(qū)域的 5'并在mRNA上存在的序列被稱(chēng)為5'非翻譯序列。位于編碼區(qū)域的3'或下游并在mRNA 上存在的序列被稱(chēng)為3'非翻譯序列。術(shù)語(yǔ)"基因"涵蓋了基因的cDNA和基因組形式?；?因的基因組形式或克隆含有被非編碼序列中斷的編碼區(qū)域，所述非編碼序列被稱(chēng)為"內(nèi)含 子"或"間插區(qū)"或"間插序列"。內(nèi)含子是轉(zhuǎn)錄成核RNA (hnRNA)的基因的片段；內(nèi)含子可 以含有調(diào)節(jié)元件例如增強(qiáng)子。內(nèi)含子從核的或初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中被除去或"剪出"，因而在信 使RNA(mRNA)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中沒(méi)有內(nèi)含子。mRNA在翻譯期間起作用，來(lái)指定新生多肽中氨基酸 的序列或順序。除了含有內(nèi)含子之外，基因的基因組形式還可以包括存在于RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 上、位于序列的5'和3'末端的序列。這些序列被稱(chēng)為"側(cè)翼"序列或區(qū)域（這些側(cè)翼序列 位于mRNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上存在的非翻譯序列的5'或3'）。5'側(cè)翼區(qū)域可能含有調(diào)節(jié)序列，例 如，啟動(dòng)子和增強(qiáng)子，它們控制或影響基因的轉(zhuǎn)錄。3'側(cè)翼區(qū)域可能含有指導(dǎo)轉(zhuǎn)錄終止、轉(zhuǎn) 錄后裂解和多聚腺苷酸化的序列。
[0279] "多核苷酸"或"核酸"在本文中可互換地使用，是指任何長(zhǎng)度的核苷酸的聚合物， 包括DNA和RNA。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修飾的核苷酸或堿基，和/ 或它們的類(lèi)似物，或可以通過(guò)DNA或RNA聚合酶、或通過(guò)合成反應(yīng)摻入到聚合物中的任何底 物。多核苷酸可以包含修飾的核苷酸，例如，甲基化的核苷酸和它們的類(lèi)似物。如果存在， 在聚合物的組裝之前或之后，可以進(jìn)行對(duì)核苷酸結(jié)構(gòu)的修飾。核苷酸的序列可以被非核苷 酸部分打斷。多核苷酸可以在合成之后被進(jìn)一步修飾，例如，通過(guò)與標(biāo)記物結(jié)合。其他類(lèi)型 的修飾包括，例如，"加帽（caps) "，用類(lèi)似物取代一個(gè)或多個(gè)天然存在的核苷酸，核苷間修 飾，例如，具有不帶電的連鍵（膦酸甲酯、磷酸三酯、磷酰胺、氨基甲酸酯，等）和具有帶電的 連鍵（例如，硫代磷酯、二硫代磷酸酯，等）的那些，含有懸垂部分的那些，例如，蛋白質(zhì)（例 如，核酸酶、毒素、抗體、信號(hào)肽、聚-L 一賴(lài)氨酸，等），具有嵌入劑（例如，吖啶、補(bǔ)骨脂素， 等）的那些，含有螯合劑（例如，金屬、放射性金屬、硼、氧化金屬，等）的那些，含有烷化劑 的那些，具有修飾的連鍵（例如，α -異頭核酸，等）的那些，以及多核苷酸的未修飾的形式。 進(jìn)一步的，例如，通常存在于糖中的任何羥基基團(tuán)可以被膦酸酯基團(tuán)、磷酸基團(tuán)置換，被標(biāo) 準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)保護(hù)，或被活化來(lái)制備與其他核苷酸的連鍵，或可以被綴合到固體或半固體支 持物上。5'和3'末端OH可以被磷酸化，或用胺或1到20個(gè)碳原子的有機(jī)加帽基團(tuán)部分來(lái) 取代。其他羥基也可以被衍生化為標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)。多核苷酸還可以含有本領(lǐng)域公知的核糖 或脫氧核糖的類(lèi)似形式，包括，例如，2' -0-甲基-，2' -0-烯丙基，2' -氟-或2' -疊氮-核 糖，碳環(huán)的糖類(lèi)似物，α -異頭糖，差向異構(gòu)的糖，例如阿拉伯糖、木糖或來(lái)蘇糖、吡喃糖、呋 喃糖、景天庚酮糖、無(wú)環(huán)類(lèi)似物，以及基礎(chǔ)核苷類(lèi)似物，例如甲基核苷。一個(gè)或多個(gè)磷酸二酯 鍵可以被可選擇的連接基團(tuán)替代。這些可選擇的連接基團(tuán)包括，但不限于，其中磷酸鹽被 ?(〇)3("硫代"）、？(5)5("二硫代"）、〃(0)殿2("酰胺化"）、？(0)1^(0)(?'、0)或01 2("甲 縮醛"）替換的實(shí)施方式，其中每個(gè)R或R'獨(dú)立地是H或取代的或未取代的烷基（1-20 C)， 任選地含有醚（O)鍵、芳基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或芳烷基（araldyl)。多核苷酸中的所有 連鍵不必是相同的。上文的描述適用于本文提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
[0280] "寡核苷酸"是指短的，一般為單鏈的，一般為合成的多核苷酸，其長(zhǎng)度一般地而不 是必然地小于約200個(gè)核苷酸。術(shù)語(yǔ)"寡核苷酸"和"多核苷酸"不是互斥的。上文對(duì)多核 苷酸的描述同樣地和完全地適合于寡核苷酸。
[0281] "嚴(yán)格雜交條件"是指一些條件，在所述條件下，一般在復(fù)雜的核酸混合物中，探針 將與其目標(biāo)子序列雜交，而不與其他的序列雜交。嚴(yán)格條件是序列依賴(lài)性的，在不同環(huán)境中 是不同的。更長(zhǎng)的序列在更高的溫度下特異性雜交。對(duì)于核酸雜交的廣泛的指導(dǎo)可以在 Tijssen,Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Probes, ''Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays" (1993)中找到。一般地，選擇嚴(yán)格條件為比定義的離子強(qiáng)度pH下 特定序列的熱熔點(diǎn)（Tm)低約5-10°C。Tm可以是溫度（在定義的離子強(qiáng)度、pH和核酸濃度 下），在該溫度下50%與目標(biāo)互補(bǔ)的探針與目標(biāo)序列雜交處于平衡狀態(tài)（目標(biāo)序列過(guò)量存 在，在Tm時(shí)，50 %的探針被占據(jù)處于平衡狀態(tài)）。嚴(yán)格調(diào)節(jié)還可以添加去穩(wěn)定劑例如甲酰 胺來(lái)實(shí)現(xiàn)。對(duì)于選擇性或特異性雜交，陽(yáng)性信號(hào)可以是至少兩倍的背景雜交，優(yōu)選的10倍 背景雜交。示例性嚴(yán)格雜交條件可以是如下的：50%甲酰胺、5XSSC和1% SDS，在42°C孵 育，或 5XSSC、1% SDS、在 65°C孵育，在 0· 2XSSC 和 0· 1% SDS 中 65°C下洗滌。
[0282] 當(dāng)提及細(xì)胞、核酸、蛋白質(zhì)或載體使用時(shí)，"重組"表明該細(xì)胞、核酸、蛋白質(zhì)或載體 已經(jīng)通過(guò)導(dǎo)入異源核酸或蛋白質(zhì)或天然核酸或蛋白質(zhì)的改變被修飾，或者所述細(xì)胞來(lái)自這 樣修飾的細(xì)胞。例如，重組細(xì)胞表達(dá)在細(xì)胞的天然（非重組）形式下不不存在的基因，或表 達(dá)天然基因，所述天然基因被過(guò)量表達(dá)或被異常表達(dá)，例如，表達(dá)為非天然存在的片段或剪 接變體。所述"重組核酸"在本文中是指最初在試管中形成的核酸，一般通過(guò)核酸的操作， 例如使用聚合酶和內(nèi)切酶，處于自然中通常不存在的形式下。照這樣，實(shí)現(xiàn)了不同序列的可 操作的連接。因而，處于線性形式的分離的核酸、或通過(guò)將通常不接合的DNA分子連接而在 體外形成的表達(dá)載體，對(duì)于本發(fā)明來(lái)說(shuō)都被認(rèn)為是重組的。要理解的是，一旦重組核酸被制 造和導(dǎo)入宿主細(xì)胞或生物體，它將非重組性地復(fù)制，例如，利用宿主細(xì)胞的體內(nèi)細(xì)胞機(jī)制而 不是體外操作；然而，這樣的核酸一旦被重組地生產(chǎn)，雖然隨后的復(fù)制是非重組性的，對(duì)于 在此公開(kāi)的目的而言仍被認(rèn)為是重組的。類(lèi)似地，"重組蛋白質(zhì)"是使用重組技術(shù)制造的蛋 白質(zhì)，例如，通過(guò)如上文描述的表達(dá)重組核酸。
[0283] 對(duì)于肽或多肽序列"氨基酸序列同一性百分比"是指在比對(duì)序列并在必要時(shí) 引入空位來(lái)實(shí)現(xiàn)最大百分比的序列同一性時(shí)，候選序列中與特定肽或多肽序列中的氨基酸 殘基相同的氨基酸殘基的百分比，任何保守性取代不認(rèn)為是序列同一性的部分。為了確定 氨基酸序列同一性百分比的比對(duì)可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的各種方式來(lái)實(shí)現(xiàn)，例如，使 用公眾可獲得的計(jì)算機(jī)軟件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟件。本 領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定用于衡量比對(duì)的合適的參數(shù)，包括在被比較的序列全長(zhǎng)上實(shí)現(xiàn)最大 對(duì)準(zhǔn)所需的任何算法。
[0284] 術(shù)語(yǔ)"多肽"、"肽"和"蛋白"可互換地使用來(lái)指代氨基酸殘基的聚合物。該術(shù)語(yǔ) 還適用于這樣的氨基酸聚合物，在其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是相應(yīng)的天然存在的氨基酸 的人工化學(xué)模擬物，還適合于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。
[0285] "氨基酸"是指天然存在的和合成的氨基酸，以及功能上類(lèi)似于天然存在的氨基酸 的氨基酸類(lèi)似物和氨基酸模擬物。天然存在的氨基酸是由遺傳密碼編碼的那些，以及在后 期被修飾的那些氨基酸，例如，羥脯氨酸、gamma-羧基谷氨酸和0-磷酸絲氨酸。氨基酸類(lèi) 似物是指一類(lèi)化合物，其具有與天然存在的氨基酸相同的基礎(chǔ)化學(xué)結(jié)構(gòu)，例如，結(jié)合到氫的 α碳、羧基基團(tuán)、氨基基團(tuán)和R基團(tuán)，例如，高絲氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亞砜、甲硫氨酸甲 基锍。這種類(lèi)似物可以具有修飾的R基團(tuán)（例如，正亮氨酸）或修飾的肽主干，但是保持了 與天然存在的氨基酸相同的基礎(chǔ)化學(xué)結(jié)構(gòu)。氨基酸模擬物是指具有與氨基酸的一般化學(xué)結(jié) 構(gòu)不同的結(jié)構(gòu)、但是以與天然存在的氨基酸類(lèi)似地方式起作用的化合物。
[0286] "保守性修飾的變體"適用于氨基酸和核酸序列。"氨基酸變體"是指氨基酸序列。 對(duì)于特定的核酸序列，保守性修飾的變體是指編碼相同或基本上相同的氨基酸序列的那 些核酸，或在所述核酸不編碼氨基酸序列時(shí)，是指基本上相同的或相關(guān)的（例如，天然連續(xù) 的）序列。由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，許多功能上相同的核酸編碼了大多數(shù)蛋白質(zhì)。例如， 密碼子GCA、GCC、GCG和GCU都編碼氨基酸丙氨酸。因而，在由密碼子指代的丙氨酸的每 個(gè)位置，該密碼子可以被改變?yōu)樗枋龅南鄳?yīng)密碼子的另一個(gè)而不改變編碼的多肽。這種 核酸變體是"沉默變體"，其是一種保守性修飾的變體。在本文中編碼多肽的每種核酸序列 也描述了所述核酸的沉默變體。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，在某些情境下，核酸中的每個(gè) 密碼子（除了 AUG，其通常是甲硫氨酸的唯一密碼子，以及TGG，其通常是色氨酸的唯一密 碼子）可以被修改以產(chǎn)生功能上相同的分子。因而，編碼多肽的核酸的沉默變體就表達(dá)的 產(chǎn)物而言在描述的序列中是隱含的，但對(duì)于實(shí)際的探針序列不是。對(duì)于氨基酸序列，熟練 技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，改變、添加或刪除編碼序列中的單個(gè)氨基酸或小百分比的氨基酸的、對(duì) 核酸、肽、多肽或蛋白質(zhì)序列的單獨(dú)的取代、添加或刪除是"保守性修飾的變體"，包括其中 改變引起了氨基酸與化學(xué)上相似的氨基酸的取代。提供了功能上相似的氨基酸的保守性 取代表是本領(lǐng)域公知的。這種保守性修飾的變體是本文公開(kāi)的多態(tài)性變體、種間同源物和 等位基因之外的，并且不排除它們。典型的保守性取代包括：1)丙氨酸（A)、甘氨酸（G); 2)天冬氨酸（D)、谷氨酸（E) ;3)天冬酰胺（N)、谷氨酰胺（Q) ;4)精氨酸（R)、賴(lài)氨酸（K); 5)異亮氨酸（I)、亮氨酸（L)、甲硫氨酸（M)、纈氨酸（V) ;6)苯丙氨酸（F)、酪氨酸（Y)、 色氨酸（W) ;7)絲氨酸（S)、蘇氨酸（T);和8)半胱氨酸（C)、甲硫氨酸（M)(也參見(jiàn)，例如 Creighton, Proteins(1984)) 〇
[0287] "抗體"（Ab)和"免疫球蛋白"（Ig)是具有相似的結(jié)構(gòu)特征的糖蛋白?？贵w可以 展現(xiàn)對(duì)特定抗原的結(jié)合特異性，免疫球蛋白可以包括抗體和一般缺乏抗原特異性的其他抗 體樣分子。例如，后一種類(lèi)的多肽是由淋巴系統(tǒng)以低水平、以及由骨髓瘤以提高的水平產(chǎn)生 的。
[0288] "抗體"和"免疫球蛋白"在廣義上可互換地使用，包括單克隆抗體（例如，全長(zhǎng)或 完整的單克隆抗體）、多克隆抗體、多價(jià)抗體、多特異性抗體（例如，雙特異性抗體，只要它 們展現(xiàn)了期望的生物學(xué)活性），還可以包括某些抗體片段（如本文中更詳細(xì)地描述的）。抗 體可以是人類(lèi)的、人源化的和/或親和力成熟的?？贵w可以指免疫球蛋白和免疫球蛋白部 分，無(wú)論是天然的、部分的還是完全合成的，例如，重組生產(chǎn)的，包括含有免疫球蛋白分子的 可變區(qū)的至少一部分、足以形成抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體的任何部分。因此，抗體或其部分包括 具有結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何蛋白質(zhì)，所述結(jié)合結(jié)構(gòu)域同源于或基本上同源于免疫球蛋白抗原結(jié) 合位點(diǎn)。例如，抗體可以指含有兩條重鏈（其可以表示為H和H'）和兩條輕鏈（其可以表 示為L(zhǎng)和L'）的抗體，其中每條重鏈可以是全長(zhǎng)免疫球蛋白重鏈或其足以形成抗原結(jié)合位 點(diǎn)的部分（例如，重鏈包括但不限于VH鏈、VH-CHl鏈和VH-CH1-CH2-CH3鏈），每條輕鏈可 以是全長(zhǎng)輕鏈或其足以形成抗原結(jié)合位點(diǎn)的部分（例如，輕鏈包括但不限于VL鏈和VL-CL 鏈）。每條重鏈（H和H'）與一條輕鏈（分別為L(zhǎng)和L'）配對(duì)。一般地，抗體最少包括可變重 (VH)鏈和/或可變輕（VL)鏈的全部或至少一部分?？贵w還可以包括恒定區(qū)的全部或一部 分。例如，全長(zhǎng)抗體是具有兩條全長(zhǎng)重鏈（例如，VH-CH1-CH3-CH3或VH-CH1-CH2-CH3-CH4) 和兩條全長(zhǎng)輕鏈（VL-CL)和鉸鏈區(qū)的抗體，例如，由抗體分泌性B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體，以及具 有相同結(jié)構(gòu)域的合成生產(chǎn)的抗體。另外，"抗體"是指免疫球蛋白家族的蛋白質(zhì)，或包含免 疫球蛋白的片段、能夠非共價(jià)地、可逆地以及以特異性方式結(jié)合相應(yīng)抗原的多肽。示例性抗 體結(jié)構(gòu)單元包括四聚體。每個(gè)四聚體由兩個(gè)相同的多肽鏈對(duì)組成，每個(gè)對(duì)具有一條"輕"鏈 (約25 kD)和一條"重"鏈（約50-70kD)，通過(guò)二硫鍵連接。公認(rèn)的免疫球蛋白基因包括 Κ、λ、α、Υ、δ、ε和μ恒定區(qū)基因，以及無(wú)數(shù)的免疫球蛋白可變區(qū)基因。輕鏈被分類(lèi) 為κ或λ。重鏈被分類(lèi)為γ、μ、α、δ或ε，其隨后定義了免疫球蛋白類(lèi)型，IgG、IgM、 IgA、IgD和IgE。每條鏈的N-末端劃定了主要對(duì)抗原識(shí)別負(fù)責(zé)的約100到110個(gè)或更多個(gè) 氨基酸的可變區(qū)。術(shù)語(yǔ)可變輕鏈（VL)和可變重鏈（VH)分別是指輕鏈和重鏈的這些區(qū)域。
[0289] "可變"是指這樣的事實(shí)，在抗體之間在序列上可變域（也稱(chēng)為可變區(qū)）的某些 部分廣泛地不同，被用于每種特定抗體的結(jié)合和特異性方面。然而，可變性在抗體的整個(gè) 可變域上不是均勻分布的。它一般集中于處在輕鏈可變域和重鏈可變域中稱(chēng)為互補(bǔ)決定 區(qū)（⑶R)或高變區(qū)（HVR)的三個(gè)片段中。⑶R包括Kabat、Chothia和MGT中指明的那些， 如本文中可變區(qū)序列內(nèi)顯示的。可變域的更高保守性的部分被稱(chēng)為框架（FR)。天然重鏈 和輕鏈的可變域各自包含四個(gè)FR區(qū)，很大程度上采用β -片層結(jié)構(gòu)，由三個(gè)⑶R連接，其 形成環(huán)形連接，在某些情況下形成β_片層結(jié)構(gòu)的一部分。每條鏈中的CDR通過(guò)FR緊密 鄰近地結(jié)合在一起，與來(lái)自另一個(gè)鏈的⑶R-同形成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)（參見(jiàn)Kabat等 K . Sequences of Proteins of Tmmunol ogical Interest,第五版，National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991))。恒定域沒(méi)有直接涉及抗體與抗原的結(jié)合，但是展現(xiàn)出各 種效應(yīng)物功能，例如在抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒性中抗體的參與。
[0290] 抗體對(duì)木瓜蛋白酶消化產(chǎn)生兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片段，稱(chēng)為"Fab"片段，各自具有 單個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，以及殘余的"Fc"片段，它的名稱(chēng)反映了其容易結(jié)晶的能力。胃蛋白酶 處理產(chǎn)生F(ab'） 2片段，其具有兩個(gè)抗原結(jié)合部位并且仍然能夠交聯(lián)抗原。
[0291] "Fv"是指一種含有抗原識(shí)別和抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體片段。在雙鏈Fv種類(lèi)中，該區(qū) 域由非共價(jià)締合的一條重鏈和一條輕鏈可變域的二聚體組成。在單鏈Fv(scFv)種類(lèi)中，一 條重鏈和一條輕鏈可變域可以通過(guò)柔性肽接頭共價(jià)連接，從而輕鏈和重鏈可以以類(lèi)似于雙 鏈Fv(scFv)種類(lèi)中的"二聚"結(jié)構(gòu)締合。在這種結(jié)構(gòu)中，每個(gè)可變域的三個(gè)⑶R相互作用 來(lái)在VH-VL二聚體的表面上限定抗原結(jié)合位點(diǎn)。合在一起，六個(gè)CDR為抗體賦予了抗原結(jié) 合特異性。然而，盡管比完整結(jié)合位點(diǎn)有更低的親合性，既便單個(gè)可變區(qū)（或僅包含三個(gè)特 異于抗原的CDR的半個(gè)Fv)也具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力。
[0292] Fab片段還含有輕鏈的恒定域以及重鏈的第一恒定域（CHl)。Fab'片段不同于 Fab片段，在重鏈CHl結(jié)構(gòu)域的羧基末端具有幾個(gè)額外的殘基，包括一個(gè)或多個(gè)來(lái)自抗體絞 鏈區(qū)的半胱氨酸。Fab' -SH在此是指在恒定區(qū)的半胱氨酸殘基攜帶有游離硫醇基的Fab'。 F(ab'）2抗體片段最初作為Fab'片段的配對(duì)而產(chǎn)生，其具有Fab'片段之間的鉸鏈半胱氨 酸?？贵w片段的其他化學(xué)偶聯(lián)也是已知的。
[0293] 來(lái)自任何脊椎動(dòng)物物種的抗體（免疫球蛋白）的"輕鏈"可以根據(jù)它們的恒定域 的氨基酸序列被分成稱(chēng)為κ和λ的兩種明顯不同的類(lèi)型之一。
[0294] 取決于它們的重鏈恒定域的氨基酸序列，免疫球蛋白可以被分為不同的種類(lèi)。由 五種主要的免疫球蛋白類(lèi)別：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中的一些可以進(jìn)一步分為子類(lèi) (同種型），例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。符合免疫球蛋白的不同類(lèi)別的重 鏈恒定域分別被稱(chēng)為a、S、ε、 Y和μ。不同類(lèi)別的免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)象 是公知的。
[0295] "抗體片段"僅包含完整抗體的一部分，其中所述部分優(yōu)選地保留了至少一種、優(yōu) 選的大多數(shù)或全部的功能，所述功能通常與存在于完整抗體中時(shí)的所述部分相關(guān)。抗體片 段的實(shí)例包括 Fab、Fab'、F(ab'）2、單鏈 Fv (scFv)、Fv、dsFv、雙價(jià)抗體（diabody)、Fd 和 FcT 片段、Fab片段、Fd片段、scFv片段、線性抗體、單鏈抗體分子，以及由抗體片段形成的多特 異性抗體（參見(jiàn)，例如Methods in Molecular Biology, Vol 207 :Recombinant Antibodies for Cancer Therapy Methods and Protocols (2003);第 I 章 ；p 3-25, Kipriyanov)。其他 已知的片段包括，但不限于，scFab片段（Hust等人，BMC Biotechnology (2007) ,7:14)。在 一種實(shí)施方式中，抗體片段包含完整抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)，因而保留了結(jié)合抗原的能力。在 另一種實(shí)施方式中，抗體片段，例如，包含F(xiàn)c區(qū)的抗體片段，保留了在完整抗體中存在時(shí)通 常與Fc區(qū)相關(guān)的生物學(xué)功能，例如，F(xiàn)cRn結(jié)合、抗體半衰期調(diào)節(jié)、ADCC功能和補(bǔ)體結(jié)合。在 一種實(shí)施方式中，抗體片段是單價(jià)的抗體，其具有基本上類(lèi)似于完整抗體的體內(nèi)半衰期。例 如，這樣的抗體片段可以包括在一個(gè)抗原結(jié)合臂上與能夠?yàn)槠钨x予體內(nèi)穩(wěn)定性的Fc序 列連接。對(duì)于其他實(shí)例，抗體片段或抗體部分是指全長(zhǎng)抗體的任何部分，其小于全長(zhǎng)但是含 有足以形成抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體可變區(qū)的至少一部分（例如，一個(gè)或多個(gè)CDR)，因而保留 了全長(zhǎng)抗體的結(jié)合特異性和/或活性；抗體片段包括通過(guò)對(duì)全長(zhǎng)抗體酶處理產(chǎn)生的抗體衍 生物，以及合成地，例如重組地產(chǎn)生的衍生物。
[0296] "dsFv"是指具有工程化的分子間二硫鍵的Fv，所述二硫鍵穩(wěn)定VH-VL配對(duì)。
[0297] "Fd片段"是指含有抗體重鏈的可變域（VH)和一個(gè)恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域（CHl)的抗體。
[0298] "Fab片段"是指含有全長(zhǎng)抗體的部分的抗體片段，其產(chǎn)自全長(zhǎng)免疫球蛋白的木瓜 蛋白酶消化，或合成地，例如重組地生產(chǎn)的具有相同結(jié)構(gòu)的片段。Fab片段含有輕鏈（含有 VL和CL部分）以及另一條鏈，所述另一條鏈含有重鏈的可變域（VH)和重量的一個(gè)恒定區(qū) 結(jié)構(gòu)域部分（CHl);它可以重組地產(chǎn)生。
[0299] "F(ab'）2片段"是指在pH 4. 0-4. 5下用胃蛋白酶消化免疫球蛋白產(chǎn)生的，或具有 相同結(jié)構(gòu)合成地例如重組地產(chǎn)生的抗體片段。F (ab'）2片段含有兩個(gè)Fab片段，但是其中每 個(gè)重鏈部分含有額外幾個(gè)氨基酸，包括連接兩個(gè)片段形成二硫鍵的半胱氨酸殘基；它可以 重組地產(chǎn)生。
[0300] "Fab'片段"是指含有半個(gè)（一條重鏈和一條輕鏈）F (ab'）2片段的片段。
[0301] "Fd'片段是指含有F(ab'）2片段的一個(gè)重鏈部分的抗體片段。
[0302] "Fv'片段"是指僅含有抗體分子的VH和VL結(jié)構(gòu)域的片段。
[0303] "scFv片段"是指一種抗體片段，其含有可變輕鏈（VL)和可變重鏈（VH)，由多肽接 頭以任何順序共價(jià)連接。所述接頭的長(zhǎng)度使得兩個(gè)可變域被橋接而沒(méi)有實(shí)質(zhì)的干擾。示例 性接頭有（Gly-Ser) η殘基，帶有整體上分散的Glu或Lys殘基來(lái)提高溶解度。
[0304] 雙抗體是二聚的scFv ;雙抗體一般具有比scFv更短的肽接頭，它們優(yōu)先地二聚 化。
[0305] "HsFv"是指一些抗體片段，其中通常存在于Fab片段中的恒定域被二聚化的卷曲 螺旋結(jié)構(gòu)域代替（參見(jiàn)，例如Arndt等人（2001) J Mol Biol. 7:312:221-228)。
[0306] "高變區(qū)"、"HVR"或"HV"以及"互補(bǔ)決定區(qū)"或"⑶R"可以指抗體可變域的區(qū) 域，它們?cè)谛蛄猩鲜歉咦兊模?或形成結(jié)構(gòu)上限定的環(huán)體。一般地，抗體包含六個(gè)高變 區(qū)或〇)1? ;三個(gè)在￥!1中011、！12、!13)，三個(gè)在￥1^中仏1、1^2、1^3)。多種高變區(qū)或〇)1?輪廓 在用，并被涵蓋在本文中。Kabat互補(bǔ)決定區(qū)（Kabat CDRs)基于序列變異性，是最常用 的（Kabat 等人，Sequences of Proteins of Tmmunological Interest,第 5 版· Public Health Service,National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). Chothia refers instead to the location of the structural loops (Chothia 和 Lesk, J. Moh Biol. 196:901-917(1987))。AbM 高變區(qū)代表了 Kabat CDR 和 Chothia 結(jié)構(gòu)環(huán)體 (Chothia"CDRs"）之間的折中，被Oxford Molecular的AbM抗體建模軟件使用。"contact" 高變區(qū)是基于可用的復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)的分析。來(lái)自這些高變區(qū)的每一個(gè)的殘基在下文中標(biāo) 注。
[0307]

【權(quán)利要求】
1. 一種包含超長(zhǎng)⑶R3的人源化抗體或其結(jié)合片段。
2. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3的長(zhǎng)度為35個(gè)氨 基酸或更長(zhǎng)，40個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，45個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，50個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，55個(gè)氨基酸或更 長(zhǎng)，或60個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)。
3. 權(quán)利要求2所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3的長(zhǎng)度為35個(gè)氨 基酸或更長(zhǎng)。
4. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含3個(gè)或更多 個(gè)半胱氨酸殘基，4個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，5個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，6個(gè)或更多個(gè)半 胱氨酸殘基，7個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，8個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，9個(gè)或更多個(gè)半胱氨 酸殘基，10個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，11個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，或12個(gè)或更多個(gè)半胱 氨酸殘基。
5. 權(quán)利要求4所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含3個(gè)或更多 個(gè)半胱氨酸殘基。
6. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述抗體或其結(jié)合片段包含半 胱氨酸基序。
7. 權(quán)利要求6所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述半胱氨酸基序選自由以 下序列組成的組：CX1(ICX5CX5CXCX7C (SEQ ID NO: 41)、CX1(ICX6CX5CXCX15C (SEQ ID NO: 42)、 CXnCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXuCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX1(iCX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45) , CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47)、 CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48) , CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49), CX13CX8CX8C (SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO : 51)、CX10CX5CX5C (SEQ ID NO: 52)、 CX10CX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO:53), CX10CX6CX5CX7CX9C(SEQ ID NO:54), CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID N0:55) , CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO: 56) , CX10CXCX4CX5CXnC (SEQ ID NO :57), CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C(SEQ ID N0:58) , CX10CXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO:59), CX16CX5CXC(SEQ ID N0:60)、CX6CX4CXCX4CX5C(SEQ ID N0:61)、CXuCX4CX5CX6CX 3C(SEQ ID N0:62)、CX8CX2CX6CX5C(SEQ ID N0:63)、CX1(iCX5CX5CXCX1(iC(SEQ ID N0:64)、 CX10CXCX6CX4CXC(SEQ ID NO:65), CX10CX5CX5CXCX2C(SEQ ID NO:66), CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO : 68)、CX4CX6CX9CX2CXUC (SEQ ID N0:69)、 CX6CX4CX5CX5CX12C (SEQ ID NO : 70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71), CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO: 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
8. 權(quán)利要求6所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述半胱氨酸基 序選自由以下序列組成的組：CCX3CXCX3CX2CCXCX 5CX9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、 CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC (SEQ ID NO: 97), CX7CXCX5CX4CCCX4CX6CXC (SEQ ID NO:98), CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID N0:99)、CX5CX3CXCX4CX4CCX 1(ICX2CC(SEQ ID N0:100)、 CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C(SEQ ID NO: 101) , cx9cccx3cx4cccx5cx6c(seq ID NO: 102), CCX8CX5CX4CX3CX4CCXCX 1C(SEQ ID NO: 103) , CCX6CCX5CCCX4CX4CX12C(SEQ ID NO: 104), CX6CX2CX3CCCX4CX5CX 3CX3C(SEQ ID N0:105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC(SEQ ID N0:106)、 CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC(SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、 CX5CX5CX3CX2CXCCX4CX 7CXC (SEQ ID NO : 109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C (SEQ ID NO: 110)、CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C (SEQ ID NO: 111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C (SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO: 114), CX10CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO: 115), CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC (SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、 CX9CX2CX3CX4CCX4CX 5C(SEQ ID N0:123)、CX9CX7CX4CCXCX7CX 3C(SEQ ID N0:124)、 CXgCX3CCCX10CX2CX3C (SEQ ID NO: 125)、CX3CX5CX5CX4CCX 1(ICX6C (SEQ ID NO : 126)、 CX9CX5CX4CCXCX5CX4C (SEQ ID NO : 127)、CX7CXCX6CX4CCCX10C (SEQ ID NO: 128)、 CX8CX2CX4CCX4CX3CX 3C (SEQ ID NO: 129)、CX7CX5CXCX4CCX7CX 4C (SEQ ID NO: 130), CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、CX2CX3CX4CCX4CX 5CX15C (SEQ ID NO : 132)、 CX9CX5CX4CCX7C(SEQ ID NO: 133), CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO:135)、CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID NO:137)、 CX5CCX7CX4CX12 (SEQ ID NO: 138), CX10CX3CX4CCX4C (SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C (SEQ ID NO:140)、CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID NO:142)、 CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID NO: 143), CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145)、CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146)、CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147)、CX10CXCX4C(SEQ ID N0:148)、CX1(ICCX4C(SEQ ID NO:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID NO:151)和 CX9C(SEQ ID NO: 152) 〇
9. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含2至6個(gè)二 硫鍵。
10. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含SEQ ID NO: 40或其衍生物。
11. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含SEQ ID NO: 1_4中任一個(gè)的氨基酸殘基3-6。
12. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含非人類(lèi)DH 或其衍生物。
13. 權(quán)利要求12所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述非人類(lèi)DH是SEQ ID NO: 5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10、SEQ ID N0:11 或 SEQ ID NO :12。
14. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含JH序列或 其衍生物。
15. 權(quán)利要求14所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述JH序列是SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO :16 或 SEQ ID NO: 17。
16. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含： _非人類(lèi)VH序列或其衍生物； -非人類(lèi)DH序列或其衍生物；和/或 -JH序列或其衍生物。
17. 權(quán)利要求16所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含另外的氨 基酸序列，所述另外的氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之間的二至六個(gè)氨基酸殘基 或更多個(gè)氨基酸殘基。
18. 權(quán)利要求17所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述另外的氨基酸序列選自 由 IR、IF、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20 或 SEQ ID NO :21 組成的組。
19. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含衍生自或 基于 SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、SEQ ID NO :27 或 SEQ ID NO :28 的序列。
20. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含非牛序列或 非抗體序列。
21. 權(quán)利要求20所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述非抗體序列是合成的序 列。
22. 權(quán)利要求20所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述非抗體序列是細(xì)胞因子 序列、淋巴因子序列、趨化因子序列、生長(zhǎng)因子序列、激素序列或毒素序列。
23. 權(quán)利要求20所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述非抗體序列是IL-8序列、 IL-21序列、SDF-1 ( a )序列、生長(zhǎng)抑素序列、氯毒素序列、Pro-TxII序列或齊考諾肽序列。
24. 權(quán)利要求20所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述非抗體序列是SEQ ID NO :475-481中的任一個(gè)。
25. 權(quán)利要求20所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述非抗體序列替換至少一 部分的超長(zhǎng)⑶R3。
26. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含XiX2X3X4X 5基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)。
27. 權(quán)利要求26所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述XiX2X3X4X 5基序是 TTVHQ(SEQ ID NO: 153), TSVHQ(SEQ ID NO: 154), SSVTQ(SEQ ID NO: 155), STVHQ(SEQ ID N0:156), ATVRQ(SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID N0:163)、STVYQ(SEQ ID N0:164)、TIVHQ(SEQ ID N0:165)、AIVYQ(SEQ ID N0:166)、 TTVFQ(SEQ ID NO: 167), AAVFQ(SEQ ID NO: 168), GTVHQ(SEQ ID NO: 169), ASVHQ(SEQ ID N0:170)、TAVFQ(SEQ ID NO:171)、ATVFQ(SEQ ID NO:172)、AAAHQ(SEQ ID NO:173)、 VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID NO:177), ITAHQ(SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID N0:181)、ITVLQ(SEQ ID N0:182)、ITTHQ(SEQ ID N0:183)或 ITDYQ(SEQ ID NO:184)。
28. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含CXiX2X3X4X 5基序。
29. 權(quán)利要求28所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述CXTXYX5基序是 CTTVHQ(SEQ ID NO: 185), CTSVHQ(SEQ ID NO: 186), CSSVTQ(SEQ ID NO: 187), CSTVHQ(SEQ ID N0:188),CATVRQ(SEQ ID NO:189),CTTVYQ(SEQ ID NO:190),CSPVHQ(SEQ ID NO:191), CATVYQ(SEQ ID NO: 192), CTAVYQ(SEQ ID NO: 193), CTNVHQ(SEQ ID NO: 194), CATVHQ(SEQ ID N0:195)、CSTVYQ(SEQ ID N0:196)、CTIVHQ(SEQ ID N0:197)、CAIVYQ(SEQ ID N0:198)、 CTTVFQ(SEQ ID NO: 199), CAAVFQ(SEQ ID NO:200), CGTVHQ(SEQ ID NO:201), CASVHQ(SEQ ID N0:202),CTAVFQ(SEQ ID NO:203),CATVFQ(SEQ ID NO:204),CAAAHQ(SEQ ID NO:205), CVVVYQ(SEQ ID NO:206), CGTVFQ(SEQ ID NO:207), CTAVHQ(SEQ ID NO:208), CITVHQ(SEQ ID N0:209)、CITAHQ(SEQ ID N0:210)、CVTVHQ(SEQ ID NO:211) ;CAAVHQ(SEQ ID NO:212)、 CGTVYQ(SEQ ID NO:213)、CTTVLQ(SEQ ID NO:214)、CITTHQ(SEQ ID NO:215)或CTTDYQ(SEQ ID NO:216)。
30. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含》11%基 序， 其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
31. 權(quán)利要求30所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述（XaXb)z基序是 CYTYNYEF(SEQ ID NO: 217), HYTYTYDF (SEQ ID NO: 218), HYTYTYEff (SEQ ID N0:219), KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID NO:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID N0:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF (SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVWTHNF(SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff(SEQ ID N0:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEff(SEQ ID NO:235), DYIYTY(SEQ ID NO:236), IHSYEF(SEQ ID NO:237), SFTYEF(SEQ ID N0:238),SHSYEF(SEQ ID NO:239),THTYEF(SEQ ID NO:240),TWTYEF(SEQ ID NO:241), TYNYEff(SEQ ID NO:242), TYSYEF(SEQ ID NO:243), TYSYEH(SEQ ID NO:244), TYTYDF(SEQ ID N0:245)、TYTYEF(SEQ ID N0:246)、TYTYEW(SEQ ID N0:247)、AYEF(SEQ ID N0:248)、 AYSF(SEQ ID N0:249)、AYSY(SEQ ID N0:250)、CYSF(SEQ ID N0:251)、DYTY(SEQ ID N0:252)、KYEH(SEQ ID N0:253)、KYEW(SEQ ID N0:254)、MYEF(SEQ ID N0:255)、NWIY(SEQ ID N0:256)、NYDY(SEQ ID N0:257)、NYQW(SEQ ID N0:258)、NYSF(SEQ ID N0:259)、PYEW(SEQ ID N0:260)、RYNff(SEQ ID N0:261)、RYTY(SEQ ID N0:262)、SYEF(SEQ ID N0:263)、SYEH(SEQ ID N0:264)、SYEW(SEQ ID N0:265)、SYKW(SEQ ID N0:266)、SYTY(SEQ ID N0:267)、TYDF(SEQ ID N0:268)、TYEF(SEQ ID N0:269)、TYEW(SEQ ID N0:270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID N0:272)或 VYEW(SEQ ID N0:273)。
32. 權(quán)利要求30所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述（XaXb)z基序是YXYXYX。
33. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含XiX2X3X4X 5Xn基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是谷氨酰胺（Q)，以及 其中n是27-54。
34. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含Xn(XaXb) z基序， 其中xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
35. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含 xTxWxjxf、基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， 其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H) 組成的組的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
36. 權(quán)利要求35所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述XiX2X3X4X 5基序是
37. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：CX1QCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID N0:41)、 CX10CX6CX5CXCX15C(SEQ ID N0:42)、CXUCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX10CX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID N0:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID N0:50)、CX1(iCX6CX5CXCX7C(SEQ ID NO:51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID N0:52)、CX1(iCX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO: 53)、CX1(ICX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID NO:55), CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO:56), CX10CXCX4CX5CXnC(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CXnCX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CX1(ICX5CX5CXCX1(IC (SEQ ID NO: 64) , CX10CXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CX1(ICX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67) , CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68) , CX4CX6CX9CX2CXnC (SEQ ID N0:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C(SEQ ID N0:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C(SEQ ID N0:71)、 CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、cx7cx5cxcx2c(seq ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO :95), _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
38.權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q); -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以下序列 組成的組：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID NO:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID NO:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
39. 權(quán)利要求20所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含另外的序 列，所述另外的序列是接頭。
40. 權(quán)利要求39所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述接頭連接至所述非抗體 序列C-末端、N-末端、或C-末端和N-末端兩者。
41. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述超長(zhǎng)CDR3是反芻動(dòng)物 CDR3。
42. 權(quán)利要求41所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述反芻動(dòng)物是牛。
43. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段 包含人類(lèi)重鏈種系序列，所述人類(lèi)重鏈種系序列是VH4家族成員種系序列。
44. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段 包含VH4-34種系序列。
45. 權(quán)利要求44所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片 段包含人類(lèi)重鏈種系序列，所述人類(lèi)重鏈種系序列衍生自VH4-34種系序列。
46. 權(quán)利要求45所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述VH4-34種系序列包含 CDR1,所述CDR1包含基于Kabat編號(hào)的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
47. 權(quán)利要求45所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述VH4-34種系序列包含 CDR2,所述CDR2包含基于Kabat編號(hào)的Glu50Ser取代。
48. 權(quán)利要求45所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述VH4-34種系序列包含 CDR1 和 CDR2,所述 CDR1 包含基于 Kabat 編號(hào)的 Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、Gly27Phe、 Phe29Leu、Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基 于基于 Kabat 編號(hào)的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和 Asn58Gly 取代。
49. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段 包含 SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 中列出的氨基酸序列。
50. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段 包含SEQ ID NO :470中列出的氨基酸序列。
51. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段 包含SEQ ID勵(lì)：461、462、463、464、465、466、467、468或469中列出的氨基酸序列；以及5￡0 ID NO :470中列出的氨基酸序列。
52. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段 包含 SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 中列出的氨基酸序列，SEQ ID NO :470中所列的氨基酸序列；以及肽序列，其中所述肽序列位于SEQ ID NO :461、462、463、 464、465、466、467、468 或 469，與5￡〇10勵(lì)：470 之間。
53. 權(quán)利要求52所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述肽序列是牛序列、非牛序 列、抗體序列或非抗體序列。
54. 權(quán)利要求1所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段 包含輕鏈可變區(qū)序列，所述輕鏈可變區(qū)序列是A輕鏈可變區(qū)序列。
55. 權(quán)利要求54所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述A輕鏈可變區(qū)序列是牛 入輕鏈可變區(qū)序列。
56. 權(quán)利要求54所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述A輕鏈可變區(qū)序列是人 入輕鏈可變區(qū)序列。
57. 權(quán)利要求56所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述人A輕鏈可變區(qū)序列是 VL1-51種系序列。
58. 權(quán)利要求56所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述人A輕鏈可變區(qū)序列衍 生自VL1-51種系序列。
59. 權(quán)利要求58所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述VL1-51種系序列包含 CDR1,所述CDR1包含基于Kabat編號(hào)的Ile29Val和Asn32Gly取代。
60. 權(quán)利要求58所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述VL1-51種系序列包含 ⑶R2，所述⑶R2包含DNN到⑶T的取代。
61. 權(quán)利要求58所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述VL1-51種系序列包含 CDR2,所述 CDR2 包含 DNNKRP(SEQ ID N0:47l)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的取代。
62. 權(quán)利要求58所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述VL1-51種系序列包含基 于 Kabat 編號(hào)的 S2A、T5N、P8S、A12G、A13S 和 P14L 取代。
63. 權(quán)利要求58所述的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述VL1-51種系序列包含 基于Kabat編號(hào)的S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及包含DNN到⑶T的取代的 CDR2。
64. 權(quán)利要求1的人源化抗體或其結(jié)合片段，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含 SEQ ID N0:440、441、442、443或444中列出的氨基酸序列。
65. 編碼權(quán)利要求1-64中任一項(xiàng)所述的人源化抗體或其結(jié)合片段的多核苷酸。
66. 編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的多核苷酸。
67. 編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化可變區(qū)的多核苷酸。
68. 包含權(quán)利要求65-67中任一項(xiàng)所述的多核苷酸的載體。
69. 包含權(quán)利要求68的載體的宿主細(xì)胞。
70. -種包含多種多核苷酸的核酸文庫(kù)，所述多核苷酸包含編碼人源化抗體或其結(jié)合 片段的序列，其中所述抗體或其結(jié)合片段包含超長(zhǎng)CDR3。
71. -種人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)，其中，所述抗體或其結(jié)合片段包含超長(zhǎng) CDR3。
72. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)CDR3的長(zhǎng)度為35個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，40個(gè) 氨基酸或更長(zhǎng)，45個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，50個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，55個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，或60個(gè)氨基酸 或更長(zhǎng)。
73. 權(quán)利要求72所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)CDR3的長(zhǎng)度是35個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)。
74. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含3個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，4 個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，5個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，6個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，7個(gè)或 更多個(gè)半胱氨酸殘基，8個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，9個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，10個(gè)或更 多個(gè)半胱氨酸殘基，11個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，或12個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基。
75. 權(quán)利要求74所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含3個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基。
76. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述抗體或其結(jié)合片段包含半胱氨酸基序。
77. 權(quán)利要求76所述的文庫(kù)，其中，所述半胱氨酸基序選自由以下序列組 成的組：CX1(iCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:41)、CX1(iCX6CX5CXCX15C(SEQ ID NO:42)、 CXnCXCX5C(SEQ ID NO:43)、CXuCX5CX5CXCX7C(SEQ ID NO:44)、CX1(iCX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45) , CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47)、 CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48) , CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49), CX13CX8CX8C (SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO : 51)、CX10CX5CX5C (SEQ ID NO: 52)、 CX10CX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO:53), CX10CX6CX5CX7CX9C(SEQ ID NO:54), CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID N0:55) , CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO: 56) , CX10CXCX4CX5CXnC (SEQ ID NO :57), CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C(SEQ ID N0:58) , CX10CXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO:59), CX16CX5CXC(SEQ ID N0:60)、CX6CX4CXCX4CX5C(SEQ ID N0:61)、CXuCX4CX5CX6CX 3C(SEQ ID N0:62)、CX8CX2CX6CX5C(SEQ ID N0:63)、CX1(iCX5CX5CXCX1(iC(SEQ ID N0:64)、 CX10CXCX6CX4CXC(SEQ ID NO:65), CX10CX5CX5CXCX2C(SEQ ID NO:66), CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO : 68)、CX4CX6CX9CX2CXUC (SEQ ID N0:69)、 CX6CX4CX5CX5CX12C (SEQ ID NO : 70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71), CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
78. 權(quán)利要求76所述的文庫(kù)，其中，所述半胱氨酸基序選自由以下序列組成的組：C CX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96), CX6CX2CX5CX4CCXCX4CX 6CXC(SEQ ID NO:97), CX7CXCX5CX4CCCX4CX6CXC(SEQ ID NO:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99)、 CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C(SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C (SEQ ID NO: 102) , CCXgCXgCX^CX^CXCXiC (SEQ ID NO: 103), CCX6CCX5CCCX4CX4CX12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID N0:105)、 CX3CX5CX6CX4CCXCX5CX 4CXC(SEQ ID NO: 106), CX4CX4CCX4CX4CXCXnCX 2CXC(SEQ ID NO: 107), CX5CX2CCX5CX4CCX3CCX 7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、 CX3CX7CX3CX4CCXCX2CX 5CX2C(SEQ ID NO: 110), CX9CX3CXCX4CCX5CCCX 6C(SEQ ID NO: 111), CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、 CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO: 114), CX10CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO: 115), CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、 CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC (SEQ ID NO: 118) , CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C (SEQ ID NO: 119), CX4CX2CCX3CXCX4CCX2CX 3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、 CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID NO: 122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID NO: 123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID N0:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID N0:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152)。
79. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含2至6個(gè)二硫鍵。
80. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含SEQ ID NO:40或其衍生物。
81. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含SEQ ID NO: 1-4中任一個(gè)的氨 基酸殘基3-6。
82. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含非人類(lèi)DH或其衍生物。
83. 權(quán)利要求82所述的文庫(kù)，其中，所述非人類(lèi)DH是SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11 或 SEQ ID NO:12。
84. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含JH序列或其衍生物。
85. 權(quán)利要求84所述的文庫(kù)，其中，所述JH序列是SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16 或 SEQ ID NO:17。
86. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含： _非人類(lèi)VH序列或其衍生物； -非人類(lèi)DH序列或其衍生物；和/或 -JH序列或其衍生物。
87. 權(quán)利要求86所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含另外的氨基酸序列，所述另外的 氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之間的二至六個(gè)氨基酸殘基或更多個(gè)氨基酸殘基。
88. 權(quán)利要求87所述的文庫(kù)，其中，所述另外的氨基酸序列選自由IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20 或 SEQ ID NO: 21 組成的組。
89. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含衍生自或基于SEQ ID NO:22、 SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、SEQ ID N0:27或SEQ ID N0:28 的序列。
90. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含非牛序列或非抗體序列。
91. 權(quán)利要求90所述的文庫(kù)，其中，所述非抗體序列是合成的序列。
92. 權(quán)利要求90所述的文庫(kù)，其中，所述非抗體序列是細(xì)胞因子序列、淋巴因子序列、 趨化因子序列、生長(zhǎng)因子序列、激素序列或毒素序列。
93. 權(quán)利要求90所述的文庫(kù)，其中，所述非抗體序列是IL-8序列、IL-21序列、 SDF-1 ( a )序列、生長(zhǎng)抑素序列、氯毒素序列、Pro-TxII序列或齊考諾肽序列。
94. 權(quán)利要求90所述的文庫(kù)，其中，所述非抗體序列是SEQ ID NO :475-481中的任一 個(gè)。
95. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含XiX2X3X4X 5基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)。
96. 權(quán)利要求95所述的文庫(kù)，其中，所述XTXYX5基序是TTVHQ(SEQ ID N0:153)、 TSVHQ(SEQ ID NO: 154), SSVTQ(SEQ ID NO: 155), STVHQ(SEQ ID NO: 156), ATVRQ(SEQ ID N0:157), TTVYQ(SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ (SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID NO: 163), STVYQ(SEQ ID N0:164), TIVHQ(SEQ ID NO: 165), AIVYQ (SEQ ID NO: 166), TTVFQ (SEQ ID NO: 167), AAVFQ(SEQ ID NO: 168), GTVHQ(SEQ ID NO: 169), ASVHQ(SEQ ID NO: 170), TAVFQ(SEQ ID N0:171)、ATVFQ(SEQ ID N0:172)、AAAHQ(SEQ ID N0:173)、VWYQ(SEQ ID N0:174)、 GTVFQ(SEQ ID NO:175), TAVHQ(SEQ ID NO:176), ITVHQ(SEQ ID NO:177), ITAHQ(SEQ ID N0:178), VTVHQ(SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ (SEQ ID NO: 181), ITVLQ(SEQ ID N0:182)、ITTHQ(SEQ ID N0:183)或 ITDYQ(SEQ ID N0:184)。
97. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含CXTXYX5基序。
98. 權(quán)利要求97所述的文庫(kù)，其中，所述CXTXYX5基序是CTTVHQ(SEQ ID N0:185)、 CTSVHQ(SEQ ID NO: 186), CSSVTQ(SEQ ID NO: 187), CSTVHQ(SEQ ID NO: 188), CATVRQ(SEQ ID N0:189)、CTTVYQ(SEQ ID N0:190)、CSPVHQ(SEQ ID N0:191)、CATVYQ(SEQ ID N0:192)、 CTAVYQ(SEQ ID NO: 193), CTNVHQ(SEQ ID NO: 194), CATVHQ(SEQ ID NO: 195), CSTVYQ(SEQ ID N0:196)、CTIVHQ(SEQ ID N0:197)、CAIVYQ(SEQ ID N0:198)、CTTVFQ(SEQ ID N0:199)、 CAAVFQ(SEQ ID NO:200), CGTVHQ(SEQ ID NO:201), CASVHQ(SEQ ID NO:202), CTAVFQ(SEQ ID N0:203),CATVFQ(SEQ ID NO:204),CAAAHQ(SEQ ID NO:205),CVVVYQ(SEQ ID NO:206), CGTVFQ(SEQ ID NO:207), CTAVHQ(SEQ ID NO:208), CITVHQ(SEQ ID NO:209), CITAHQ(SEQ ID N0:210)、CVTVHQ(SEQ ID N0:211) ;CAAVHQ(SEQ ID N0:212)、CGTVYQ(SEQ ID N0:213)、 CTTVLQ(SEQ ID N0:214)、CTTTHQ(SEQ ID N0:215)或 CTTDYQ(SEQ ID N0:216)。
99. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含（XaXb)z基序， 其中，Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
100. 權(quán)利要求99所述的文庫(kù)，其中，所述（XaXb)z基序是CYTYNYEF(SEQ ID N0:217)、 HYTYTYDF(SEQ ID N0:218), HYTYTYEff (SEQ ID NO: 219), KHRYTYEff (SEQ ID N0:220), NYIYKYSF(SEQ ID NO:221), PYIYTYQF(SEQ ID NO:222), SFTYTYEff(SEQ ID N0:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO: 224), SYNYTYSff (SEQ ID NO: 225), SYSYSYEY (SEQ ID NO:226), SYTYNYDF(SEQ ID NO:227), SYTYNYEff(SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVWTHNF(SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff (SEQ ID NO: 231), TYTYTYEF (SEQ ID N0:232), TYTYTYEff(SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID ND: 234), AYTYEff (SEQ ID NO :235), DYIYTY(SEQ ID NO :236), IHSYEF(SEQ ID NO :237), SFTYEF(SEQ ID NO :238), SHSYEF(SEQ ID N0:239) ,THTYEF(SEQ ID NO:240),TWTYEF(SEQ ID NO:241),TYNYEff(SEQ ID NO:242), TYSYEF(SEQ ID N0:243)、TYSYEH(SEQ ID N0:244)、TYTYDF(SEQ ID N0:245)、TYTYEF(SEQ ID N0:246)、TYTYEW(SEQ ID N0:247)、AYEF(SEQ ID N0:248)、AYSF(SEQ ID N0:249)、AYSY(SEQ ID N0:250)、CYSF(SEQ ID N0:251)、DYTY(SEQ ID N0:252)、KYEH(SEQ ID N0:253)、KYEW(SEQ ID N0:254),MYEF(SEQ ID NO:255),NWIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257).NYQff(SEQ ID N0:258)、NYSF(SEQ ID N0:259)、PYEW(SEQ ID N0:260)、RYNW(SEQ ID N0:261)、RYTY(SEQ ID N0:262)、SYEF(SEQ ID N0:263)、SYEH(SEQ ID N0:264)、SYEW(SEQ ID N0:265)、SYKW(SEQ ID N0:266)、SYTY(SEQ ID N0:267)、TYDF(SEQ ID N0:268)、TYEF(SEQ ID N0:269)、TYEW(SEQ ID N0:270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID N0:272)或 VYEW(SEQ ID N0:273)。
101. 權(quán)利要求99所述的文庫(kù)，其中，所述（XaXb)z基序是YXYXYX。
102. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含XiX2X3X4X 5Xn基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是谷氨酰胺（Q)，以及 其中n是27-54。
103. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含Xn(XaXb) z基序， 其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
104. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含XiXfxfXjXfh基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成 的組的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
105. 權(quán)利要求104所述的文庫(kù)，其中，所述XTXYX5基序是TTVHQ(SEQ ID N0:153)或
106. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：CX1QCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID NO: 41)、 CX10CX6CX5CXCX15C(SEQ ID N0:42)、CXUCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX10CX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID N0:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID N0:50)、CX1(iCX6CX5CXCX7C(SEQ ID NO:51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID N0:52)、CX1(iCX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO: 53)、CX1(ICX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID NO:55), CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO:56), CX10CXCX4CX5CXnC(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CXnCX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CX1(ICX5CX5CXCX1(IC (SEQ ID NO: 64) , CX10CXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CX1(ICX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC (SEQ ID NO: 67) , CX15CX5CXC (SEQ ID NO: 68) , CX4CX6CX9CX2CXnC (SEQ ID N0:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C(SEQ ID N0:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C(SEQ ID N0:71)、 CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、cx7cx5cxcx2c(seq ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO: 95)，和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
107. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)⑶R3包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q); -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以下序列 組成的組：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), cx9cccx3cx4cccx5cx6c(seq ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID N0:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID N0:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
108. 權(quán)利要求90所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)CDR3包含另外的序列，所述另外的序列 是接頭。
109. 權(quán)利要求108所述的文庫(kù)，其中，所述接頭連接至非抗體序列的C-末端、N-末端、 或C-末端和N-末端兩者。
110. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述超長(zhǎng)CDR3是反芻動(dòng)物CDR3。
111. 權(quán)利要求110所述的文庫(kù)，其中，所述反芻動(dòng)物是牛。
112. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含人類(lèi)重鏈種系 序列，所述人類(lèi)重鏈種系序列是VH4家族成員種系序列。
113. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含VH4-34種系序 列。
114. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含衍生自VH4-34 的人類(lèi)重鏈種系序列。
115. 權(quán)利要求114所述的文庫(kù)，其中，所述VH4-34種系序列包含⑶R1，所述⑶R1包含 基于Kabat編號(hào)的Gly31Asp和Tyr32Lys取代。
116. 權(quán)利要求114所述的文庫(kù)，其中，所述VH4-34種系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含 基于Kabat編號(hào)的Glu50Ser取代。
117. 權(quán)利要求114所述的文庫(kù)，其中，所述VH4-34種系序列包含⑶R1和⑶R2，所 述 CDR1 包含基于 Kabat 編號(hào)的 Ala23Thr、Val24Ala、Tyr25Ser、Gly27Phe、Phe29Leu、 Gly31Asp、Tyr32Lys、Tyr33Ala、Trp34Val 和 Ser35Gly 取代，所述 CDR2 包含基于基于 Kabat 編號(hào)的 Ile48Leu、Glu50Ser、Asn52Asp、His53Thr、Ser54Gly、Ser56Asn 和 Asn58Gly 取代。
118. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含SEQ ID NO: 470中列出的氨基酸序列。
119. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、467、468 或 469 中列出的氨基酸序列；以及 SEQ ID N0:470 中列出的氨基酸序列。
120. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含SEQ ID 勵(lì):461、462、463、464、465、466、467、468或4697 中所列的氨基酸，5￡0 1〇勵(lì):470 中列出的 氨基酸序列；以及一肽序列，其中所述肽序列位于SEQ ID N0:461、462、463、464、465、466、 467、468 或 4697,與 SEQ ID N0:470 之間。
121. 權(quán)利要求120所述的文庫(kù)，其中，所述肽序列是牛序列、非牛序列、抗體序列或非 抗體序列。
122. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)序 列，所述輕鏈可變區(qū)序列是A輕鏈可變區(qū)序列。
123. 權(quán)利要求122所述的文庫(kù)，其中，所述A輕鏈可變區(qū)序列是牛A輕鏈可變區(qū)序 列。
124. 權(quán)利要求122所述的文庫(kù)，其中，所述A輕鏈可變區(qū)序列是人類(lèi)A輕鏈可變區(qū)序 列。
125. 權(quán)利要求124所述的文庫(kù)，其中，所述人類(lèi)A輕鏈可變區(qū)序列是VL1-51。
126. 權(quán)利要求124所述的文庫(kù)，其中，所述人類(lèi)A輕鏈可變區(qū)序列衍生自VL1-51。
127. 權(quán)利要求126所述的文庫(kù)，其中，所述VL1-51種系序列包含CDR1，所述CDR1包含 基于Kabat編號(hào)的Ile29Val和Asn32Gly取代。
128. 權(quán)利要求126所述的文庫(kù)，其中，所述VL1-51種系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含 DNN到⑶T的取代。
129. 權(quán)利要求126所述的文庫(kù)，其中，所述VL1-51種系序列包含⑶R2,所述⑶R2包含 DNNKRP(SEQ ID N0:471)到⑶TSRA(SEQ ID N0:472)的取代。
130. 權(quán)利要求126所述的文庫(kù)，其中，所述VL1-51種系序列包含基于Kabat編號(hào)的 S2A、T5N、P8S、A12G、A13S 和 P14L 取代。
131. 權(quán)利要求126所述的文庫(kù)，其中，所述VL1-51種系序列包含基于Kabat編號(hào)的 S2A、T5N、P8S、A12G、A13S和P14L取代，以及包含DNN到⑶T的取代的CDR2。
132. 權(quán)利要求71所述的文庫(kù)，其中，所述文庫(kù)包含SEQ ID勵(lì)：440、441、442、443或444 中列出的氨基酸序列。
133. 權(quán)利要求71-132中任一項(xiàng)所述的文庫(kù)，其中，所述人源化抗體或其結(jié)合片段以空 間定址的形式存在。
134. -種人源化抗體可變區(qū)的方法，包括將編碼非人類(lèi)超長(zhǎng)CDR3的核酸序列和編碼 人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸序列基因組合的步驟。
135. -種產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的文庫(kù)的方法，所述方法包括： a. )組合編碼超長(zhǎng)CDR3的核酸序列與編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸序列，以產(chǎn) 生編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的核酸；和 b. )表達(dá)所述編碼包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體的核酸，以產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的人源化 抗體的文庫(kù)。
136. -種產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)的方法，所述超長(zhǎng) ⑶R3包含非抗體序列，所述方法包括： a. )組合編碼超長(zhǎng)CDR3的核酸序列、編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸序列、以及 編碼非抗體序列的核酸序列，以產(chǎn)生編碼包含超長(zhǎng)CDR3和非抗體序列的人源化抗體或其 結(jié)合片段的核酸，和 b. )表達(dá)所述編碼包含超長(zhǎng)CDR3和非抗體序列的人源化抗體或其結(jié)合片段的所述核 酸，以產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3和非抗體序列的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)。
137. -種包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)，所述超長(zhǎng)CDR3包含非抗 體序列。
138. -種產(chǎn)生包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)的方法，所述超長(zhǎng) CDR3包含半胱氨酸基序，所述方法包括： a. )組合人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列以及編碼超長(zhǎng)CDR3和半胱氨酸基序的核酸序列； b. )向所述核酸序列中引入一個(gè)或多個(gè)核苷酸變化，所述核酸序列編碼位于編碼不同 氨基酸殘基的核苷酸的半胱氨酸基序中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基之間的一個(gè)或多個(gè)氨 基酸殘基，以產(chǎn)生編碼包含超長(zhǎng)CDR3和半胱氨酸基序的人源化抗體或其結(jié)合片段的核酸， 所述半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基之間引入的一個(gè) 或多個(gè)核苷酸變化；和 c. )表達(dá)所述編碼人源化抗體或其結(jié)合片段的核酸，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包 含超長(zhǎng)CDR3和半胱氨酸基序，所述半胱氨酸基序具有在半胱氨酸結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)或多個(gè) 半胱氨酸殘基之間引入的一個(gè)或多個(gè)核苷酸變化，以產(chǎn)生人源化抗體或其結(jié)合片段的文 庫(kù)，所述人源化抗體或其結(jié)合片段包含超長(zhǎng)CDR3和半胱氨酸基序，所述半胱氨酸基序具有 在半胱氨酸結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基之間引入的一個(gè)或多個(gè)核苷酸變化。
139. -種包含超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)，所述超長(zhǎng)CDR3包含半胱 氨酸基序，其中所述抗體或結(jié)合片段包含位于所述半胱氨酸基序中的半胱氨酸殘基之間的 一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基取代。
140. -種產(chǎn)生包含牛超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)的方法，所述方法 包括： a. )組合編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸序列和編碼牛超長(zhǎng)CDR3的核酸，和 b. )表達(dá)編碼人類(lèi)可變區(qū)框架（FR)序列的核酸和編碼牛超長(zhǎng)CDR3的核酸，以產(chǎn)生包含 牛超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)。
141. 一種包含牛超長(zhǎng)CDR3的人源化抗體或其結(jié)合片段的文庫(kù)。
142. -種包含XfxYX5基序的CDR3支架， 其中，X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)。
143. 權(quán)利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架的長(zhǎng)度為35個(gè)氨基酸或更 長(zhǎng)，40個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，45個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，50個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，55個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)，或60 個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)。
144. 權(quán)利要求143所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架的長(zhǎng)度為35個(gè)氨基酸或更 長(zhǎng)。
145. 權(quán)利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含3個(gè)或更多個(gè)半胱氨 酸殘基，4個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，5個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，6個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘 基，7個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，8個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，9個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基， 10個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，11個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘基，或12個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸殘 基。
146. 權(quán)利要求145所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含3個(gè)或更多個(gè)半胱氨酸 殘基。
147. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含半胱氨酸基序。
148. 權(quán)利要求147所述的CDR3支架，其中，所述半胱氨酸基序選自由以下序 列組成的組{父1(^5〇父5〇父〇父7(：(5￡〇10勵(lì):41)、〇父 1(^6〇父5〇父〇父15(：(5￡〇10勵(lì):42)、 CXnCXCX5C(SEQ ID NO: 43), CXnCX5CX5CXCX7C (SEQ ID NO: 44), CX10CX6CX5CXCX13C (SEQ ID NO: 45) , CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47)、 CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48) , CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID NO: 49), CX13CX8CX8C (SEQ ID NO: 50)、CX10CX6CX5CXCX7C (SEQ ID NO : 51)、CX10CX5CX5C (SEQ ID NO: 52)、 CX10CX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO:53), CX10CX6CX5CX7CX9C(SEQ ID NO:54), CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID N0:55) , CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO: 56) , CX10CXCX4CX5CXnC (SEQ ID NO :57), CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C(SEQ ID N0:58) , CX10CXCX4CX5CXCX2CX 3C(SEQ ID NO:59), CX16CX5CXC(SEQ ID N0:60)、CX6CX4CXCX4CX5C(SEQ ID N0:61)、CXuCX4CX5CX6CX 3C(SEQ ID N0:62)、CX8CX2CX6CX5C(SEQ ID N0:63)、CX1(iCX5CX5CXCX1(iC(SEQ ID N0:64)、 CX10CXCX6CX4CXC(SEQ ID NO:65), CX10CX5CX5CXCX2C(SEQ ID NO:66), CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO: 67)、CX15CX5CXC (SEQ ID NO : 68)、CX4CX6CX9CX2CXUC (SEQ ID N0:69)、 CX6CX4CX5CX5CX12C (SEQ ID NO : 70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C (SEQ ID NO: 71), CX10CX6CX5C(SEQ ID N0:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID N0:73)、CX7CX5CXCX2C(SEQ ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID N0:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID N0:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C(SEQ ID N0:95)。
149. 權(quán)利要求147所述的CDR3支架，其中，所述半胱氨酸基序選自由以下序列組 成的組：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID NO:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID NO:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID NO:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID NO:lll)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID NO:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID NO:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID NO:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID NO:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID NO:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID NO:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID NO:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID NO:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID NO:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID NO:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID NO:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID NO:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、CX8CX2CX4CCX4CX 3CX3C(SEQ ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID NO:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID NO:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139),CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140),CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID NO:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID NO:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152)。
150. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含2至6個(gè)二硫鍵。
151. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架中的XTXYX5基序?yàn)?TTVHQ(SEQ ID NO: 153), TSVHQ(SEQ ID NO: 154), SSVTQ(SEQ ID NO: 155), STVHQ(SEQ ID N0:156), ATVRQ(SEQ ID NO: 157), TTVYQ (SEQ ID NO: 158), SPVHQ (SEQ ID NO: 159), ATVYQ(SEQ ID NO: 160), TAVYQ(SEQ ID NO: 161), TNVHQ(SEQ ID NO: 162), ATVHQ(SEQ ID N0:163)、STVYQ(SEQ ID N0:164)、TIVHQ(SEQ ID N0:165)、AIVYQ(SEQ ID N0:166)、 TTVFQ(SEQ ID N0:167)、AAVFQ(SEQ ID N0:168)、GTVHQ(SEQ ID N0:169)、ASVHQ(SEQ ID N0:170)、TAVFQ(SEQ ID N0:171)、ATVFQ(SEQ ID N0:172)、AAAHQ(SEQ ID N0:173)、 VVVYQ(SEQ ID NO: 174), GTVFQ(SEQ ID NO: 175), TAVHQ(SEQ ID NO: 176), ITVHQ(SEQ ID N0:177), ITAHQ(SEQ ID NO: 178), VTVHQ (SEQ ID NO: 179) ；AAVHQ(SEQ ID NO: 180), GTVYQ(SEQ ID N0:181)、ITVLQ(SEQ ID N0:182)、ITTHQ(SEQ ID N0:183)或 ITDYQ(SEQ ID NO:184)。
152. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含CXTXYX5基序。
153. 權(quán)利要求152所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架中的CXiX2X3X4X 5基序?yàn)?CTTVHQ(SEQ ID NO: 185), CTSVHQ(SEQ ID NO: 186), CSSVTQ(SEQ ID NO: 187), CSTVHQ(SEQ ID NO:188),CATVRQ(SEQ ID NO:189),CTTVYQ(SEQ ID NO:190),CSPVHQ(SEQ ID NO:191), CATVYQ(SEQ ID NO: 192), CTAVYQ(SEQ ID NO: 193), CTNVHQ(SEQ ID NO: 194), CATVHQ(SEQ ID NO:195)、CSTVYQ(SEQ ID NO:196)、CTIVHQ(SEQ ID NO:197)、CAIVYQ(SEQ ID NO:198)、 CTTVFQ(SEQ ID NO: 199), CAAVFQ(SEQ ID NO:200), CGTVHQ(SEQ ID NO:201), CASVHQ(SEQ ID N0:202),CTAVFQ(SEQ ID NO:203),CATVFQ(SEQ ID NO:204),CAAAHQ(SEQ ID NO:205), CVVVYQ(SEQ ID NO:206), CGTVFQ(SEQ ID NO:207), CTAVHQ(SEQ ID NO:208), CITVHQ(SEQ ID N0:209)、CITAHQ(SEQ ID N0:210)、CVTVHQ(SEQ ID NO:211) ;CAAVHQ(SEQ ID NO:212)、 CGTVYQ(SEQ ID NO:213)、CTTVLQ(SEQ ID NO:214)、CITTHQ(SEQ ID NO:215)或CTTDYQ(SEQ ID NO:216)。
154. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含（XaXb)z基序， 其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
155. 權(quán)利要求154所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架中的（XaXb) z基序?yàn)?CYTYNYEF(SEQ ID NO: 217), HYTYTYDF (SEQ ID NO: 218), HYTYTYEff (SEQ ID N0:219), KHRYTYEff(SEQ ID NO: 220), NYIYKYSF (SEQ ID NO: 221), PYIYTYQF (SEQ ID N0:222), SFTYTYEff(SEQ ID NO:223), SYIYIYQff(SEQ ID NO:224), SYNYTYSff(SEQ ID NO:225), SYSYSYEY(SEQ ID NO: 226), SYTYNYDF(SEQ ID NO: 227), SYTYNYEff (SEQ ID NO:228), SYTYNYQF(SEQ ID NO:229), SYVWTHNF(SEQ ID NO: 230), TYKYVYEff(SEQ ID NO:231), TYTYTYEF(SEQ ID NO: 232), TYTYTYEff (SEQ ID NO: 233), VFTYTYEF (SEQ ID NO:234), AYTYEff(SEQ ID NO:235), DYIYTY(SEQ ID NO:236), IHSYEF(SEQ ID NO:237), SFTYEF(SEQ ID NO:238) ,SHSYEF(SEQ ID NO:239),THTYEF(SEQ ID NO:240),TWTYEF(SEQ ID NO:241), TYNYEff(SEQ ID NO:242), TYSYEF(SEQ ID NO:243), TYSYEH(SEQ ID NO:244), TYTYDF(SEQ ID NO:245)、TYTYEF(SEQ ID NO:246)、TYTYEW(SEQ ID NO:247)、AYEF(SEQ ID NO:248)、 AYSF(SEQ ID NO:249)、AYSY(SEQ ID N0:250)、CYSF(SEQ ID NO:251)、DYTY(SEQ ID NO:252)、KYEH(SEQ ID NO:253)、KYEW(SEQ ID NO:254)、MYEF(SEQ ID NO:255)、NWIY(SEQ ID NO:256),NYDY(SEQ ID NO:257).NYQff(SEQ ID NO:258),NYSF(SEQ ID NO:259).PYEff(SEQ ID N0:260)、RYNW(SEQ ID NO:261)、RYTY(SEQ ID NO:262)、SYEF(SEQ ID NO:263)、SYEH(SEQ ID N0:264)、SYEW(SEQ ID N0:265)、SYKW(SEQ ID N0:266)、SYTY(SEQ ID N0:267)、TYDF(SEQ ID N0:268)、TYEF(SEQ ID N0:269)、TYEW(SEQ ID N0:270)、TYQW(SEQ ID N0:271)、TYTY(SEQ ID NO :272), or VYEff(SEQ ID N0:273)〇
156. 權(quán)利要求154所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架中的（XaXb)z基序?yàn)閅XYXYX。
157. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含XiX2X3X4X 5Xn基序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，其中X5是谷氨酰胺（Q)，以及 其中n是27-54。
158. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含Xn(XaXb) z基序， 其中Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨 酸01)組成的組的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
159. 權(quán)利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含XiX2X3X4X 5Xn(XaXb)z基 序， 其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸（V)，其中X2是絲 氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V)或天冬酰胺（N)， 其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是組氨酸（H)、蘇氨 酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， Xa是任意氨基酸殘基，Xb是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和組氨酸（H)組成 的組的芳香族氨基酸，其中n是27-54,以及其中z是1-4。
160. 權(quán)利要求159所述的CDR3支架，其中，CDR3支架中的XfxYX5基序?yàn)門(mén)TVHQ (SEQ 10勵(lì)：153)或15￥即(5￡〇10勵(lì)：154)，并且其中（父1\基序?yàn)椋じ福じ秆靖浮?br> 161. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q)， -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：CX1QCX5CX5CXCX 7C (SEQ ID N0:41)、 CX10CX6CX5CXCX15C(SEQ ID N0:42)、CXUCXCX5C(SEQ ID N0:43)、CXnCX5CX5CXCX7C(SEQ ID N0:44)、CX10CX6CX5CXCX13C(SEQ ID NO: 45)、CX10CX5CXCX4CX8C (SEQ ID NO: 46)、 CX10CX6CX6CXCX7C (SEQ ID NO: 47), CX10CX4CX7CXCX8C (SEQ ID NO: 48), CX10CX4CX7CXCX7C (SEQ ID N0:49)、CX13CX8CX8C(SEQ ID N0:50)、CX1(iCX6CX5CXCX7C(SEQ ID NO:51)、CX10CX5CX5C(SEQ ID N0:52)、CX1(iCX5CX6CXCX7C(SEQ ID NO: 53)、CX1(ICX6CX5CX7CX 9C (SEQ ID NO: 54)、 CX9CX7CX5CXCX7C(SEQ ID NO:55), CX10CX6CX5CXCX9C(SEQ ID NO:56), CX10CXCX4CX5CXnC(SEQ ID NO: 57) , CX7CX3CX6CX5CXCX5CX 10C (SEQ ID NO: 58)、CX1(ICXCX4CX5CXCX2CX 3C (SEQ ID NO: 59)、CX16CX5CXC (SEQ ID NO : 60)、CX6CX4CXCX4CX5C (SEQ ID NO: 61), CXnCX4CX5CX6CX3C (SEQ ID NO: 62)、CX8CX2CX6CX5C (SEQ ID NO: 63)、CX10CX5CX5CXCX10C (SEQ ID NO: 64) , CX10CXCX6CX4CXC (SEQ ID NO: 65)、CX1(ICX5CX5CXCX2C (SEQ ID NO: 66)、 CX14CX2CX3CXCXC(SEQ ID NO:67)、CX15CX5CXC(SEQ ID N0:68)、CX4CX6CX9CX2CX nC(SEQ ID NO:69)、CX6CX4CX5CX5CX 12C(SEQ ID N0:70)、CX7CX3CXCXCX4CX5CX 9C(SEQ ID NO:71)、 CX10CX6CX5C(SEQ ID NO:72)、CX7CX3CX5CX5CX 9C(SEQ ID NO:73)、cx7cx5cxcx2c(seq ID N0:74)、CX1(iCXCX6C(SEQ ID NO:75)、CX1(iCX3CX3CX5CX 7CXCX6C(SEQ ID NO:76)、 CX10CX4CX5CX12CX2C (SEQ ID NO : 77)、CX12CX4CX5CXCXCX9CX 3C (SEQ ID NO: 78), CX12CX4CX5CX12CX2C(SEQ ID NO:79) ,CX10CX6CX5CXCXnC(SEQ ID NO:80) ,CX16CX5CXCXCX14C(SEQ ID N0:81)、CX10CX5CXCX8CX6C(SEQ ID NO: 82)、CX12CX4CX5CX8CX 2C (SEQ ID NO: 83)、 CX12CX5CX5CXCX8C (SEQ ID NO : 84)、CX10CX6CX5CXCX4CXCX 9C (SEQ ID N0:85)、 CXnCX4CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:86), CX10CX6CX5CX8CX2C(SEQ ID NO:87), CX10CX6CX5CXCX8C(SEQ ID N0:88)、CX10CX6CX5CXCX3CX 8CX2C(SEQ ID NO : 89)、CX10CX6CX5CX3CX 8C (SEQ ID N0:90)、CX1(ICX6CX5CXCX2CX 6CX5C(SEQ ID N0:91)、CX7CX6CX3CX3CX 9C(SEQ ID N0:92)、 CX9CX8CX5CX6CX5C(SEQ ID NO :93) , CX10CX2CX2CX7CXCXnCX 5C (SEQ ID NO :94)和 CX10CX6CX5CXCX2CX8CX 4C (SEQ ID NO: 95)，和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
162.權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含： -CXTfxl5基序，其中X1是蘇氨酸（T)、甘氨酸（G)、丙氨酸（A)、絲氨酸（S)或纈氨酸 (V)，其中X2是絲氨酸（S)、蘇氨酸（T)、脯氨酸（P)、異亮氨酸（I)、丙氨酸（A)、纈氨酸（V) 或天冬酰胺（N)，其中X3是纈氨酸（V)、丙氨酸（A)、蘇氨酸（T)或天冬氨酸（D)，其中X4是 組氨酸⑶、蘇氨酸（T)、精氨酸（R)、酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)或亮氨酸（L)，以及其中X5是谷氨酰胺（Q); -選自由以下序列組成的組的半胱氨酸基序：其中半胱氨酸基序選自由以下序列 組成的組：CCX3CXCX3CX2CCXCX5CX 9CX5CXC(SEQ ID N0:96)、CX6CX2CX5CX4CCXCX 4CX6CXC(SEQ ID N0:97)、CX7CXCX5CX4CCCX4CX 6CXC(SEQ ID N0:98)、CX9CX3CXCX2CXCCCX6CX 4C(SEQ ID NO:99), CX5CX3CXCX4CX4CCX10CX 2CC(SEQ ID NO: 100), CX5CXCX1CXCX3CCX3CX 4CX10C (SEQ ID NO: 101), CX9CCCX3CX4CCCX5CX6C(SEQ ID NO: 102), ccx8cx5cx4cx3cx4ccxcx 1c(seq id N0:103)、CCX6CCX5CCCX4CX4CX 12C(SEQ ID N0:104)、CX6CX2CX3CCCX4CX 5CX3CX3C(SEQ ID NO: 105)、CX3CX5CX6CX4CCXCX 5CX4CXC (SEQ ID NO: 106)、CX4CX4CCX4CX4CXCX nCX2CXC (SEQ ID N0:107)、CX5CX2CCX5CX4CCX 3CCX7C(SEQ ID N0:108)、CX5CX5CX3CX2CXCCX 4CX7CXC(SEQ ID N0:109)、CX3CX7CX3CX4CCXCX 2CX5CX2C(SEQ id no:iio)、cx9cx3cxcx4ccx5cccx 6c(seq ID N0:111)、CX9CX3CXCX2CXCCX6CX 3CX3C(SEQ ID N0:112)、CX8CCXCX3CCX3CXCX3CX 4C(SEQ ID N0:113)、CX9CCX4CX2CXCCXCX4CX 3C(SEQ ID N0:114)、CX1(iCXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:115)、CX9CXCX3CX2CXCCX4CX 5CXC(SEQ ID N0:116)、CX6CCXCX5CX4CCXCX5CX 2C(SEQ ID N0:117)、CX6CCXCX3CXCCX3CX4CC(SEQ ID N0:118)、CX6CCXCX3CXCX2CXCX4CX 8C(SEQ ID N0:119)、CX4CX2CCX3CXCX4CCX 2CX3C(SEQ ID N0:120)、CX3CX5CX3CCCX4CX 9C(SEQ ID N0:121)、CCX9CX3CXCCX3CX5C(SEQ ID N0:122)、CX9CX2CX3CX4CCX 4CX5C(SEQ ID N0:123)、 CX9CX7CX4CCXCX7CX3C (SEQ ID NO : 124)、CX9CX3CCCX10CX2CX 3C (SEQ ID NO: 125)、 CX3CX5CX5CX4CCX1(ICX 6C(SEQ ID N0:126)、CX9CX5CX4CCXCX5CX 4C(SEQ ID N0:127)、 CX7CXCX6CX4CCCX10C(SEQ ID NO: 128)、cx8cx2cx4ccx4cx 3cx3c(seq ID NO: 129)、 CX7CX5CXCX4CCX7CX4C (SEQ ID NO: 130) , CXnCX3CX4CCCX8CX2C (SEQ ID NO: 131)、 CX2CX3CX4CCX4CX5CX 15C (SEQ ID NO : 1 32)、CX9CX5CX4CCX7C (SEQ ID NO: 133)、 CX9CX7CX3CX2CX6C(SEQ ID NO: 134), CX9CX5CX4CCX14C(SEQ ID NO: 135), CX9CX5CX4CCX8C(SEQ ID N0:136)、CX9CX6CX4CCXC(SEQ ID N0:137)、CX5CCX7CX4CX12(SEQ ID N0:138)、 CX10CX3CX4CCX4C(SEQ ID NO: 139), CX9CX4CCX5CX4C(SEQ ID NO: 140), CX10CX3CX4CX7CXC(SEQ ID N0:141)、CX7CX7CX2CX2CX 3C(SEQ ID N0:142)、CX9CX4CX4CCX6C(SEQ ID N0:143)、 CX7CXCX3CXCX6C(SEQ ID NO: 144), CX7CXCX4CXCX4C(SEQ ID NO: 145), CX9CX5CX4C(SEQ ID NO: 146), CX3CX6CX8C(SEQ ID NO: 147), CX10CXCX4C(SEQ ID NO: 148), CX10CCX4C(SEQ ID N0:149)、CX15C(SEQ ID N0:150)、CX1(IC(SEQ ID N0:151)和 CX9C(SEQ ID N0:152);和 _(XaXb)z基序，其中Xa是任意氨基酸殘基，X b是選自由酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨 酸（W)和組氨酸（H)組成的組的芳香族氨基酸，以及其中z是1-4。
163. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含SEQ ID N0:40或其衍 生物。
164. 權(quán)利要求142所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含SEQ ID NO: 1-4中任一 個(gè)的氨基酸殘基3-6。
165. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含非人類(lèi)DH或其衍生物。
166. 權(quán)利要求165所述的CDR3支架，其中，所述非人類(lèi)DH是SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQIDN0:7、SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQIDN0:10、SEQIDN0:11*SEQID NO:12。
167. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含JH序列或其衍生物。
168. 權(quán)利要求167所述的CDR3支架，其中，所述JH序列是SEQ ID N0:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16 或 SEQ ID NO:17。
169. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含： _非人類(lèi)VH序列或其衍生物； -非人類(lèi)DH序列或其衍生物；和/或 -JH序列或其衍生物。
170. 權(quán)利要求169所述的CDR3支架，其中，所述CDR3支架包含另外的氨基酸序列，所 述另外的氨基酸序列包含位于VH序列和DH序列之間的二至六個(gè)氨基酸殘基或更多個(gè)氨基 酸殘基。
171. 權(quán)利要求170所述的⑶R3支架，其中，所述另外的氨基酸序列選自由IR、IF、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20 或 SEQ ID NO: 21 組成的組。
172. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架包含衍生自或基于SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27 或 SEQ ID NO :28的序列。
173. 權(quán)利要求142所述的⑶R3支架，其中，所述⑶R3支架是反芻動(dòng)物⑶R3支架。
174. 權(quán)利要求173所述的CDR3支架，其中，所述反芻動(dòng)物是牛。
175. -種包含權(quán)利要求142-174中任一項(xiàng)所述的⑶R3支架的文庫(kù)。
176. 編碼權(quán)利要求142-174中任一項(xiàng)所述的⑶R3支架的多核苷酸。
177. 包含權(quán)利要求176的多核苷酸的載體。
178. 包含權(quán)利要求177的載體的宿主細(xì)胞。
179. 權(quán)利要求178所述的宿主細(xì)胞，其中，所述細(xì)胞是細(xì)菌、病毒或噬菌體。
【文檔編號(hào)】C07K16/10GK104411717SQ201380013173
【公開(kāi)日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2013年1月9日 優(yōu)先權(quán)日:2012年1月9日
【發(fā)明者】沃恩·斯密德, 奧馬爾·A·巴茲甘, 茅洪源 申請(qǐng)人:斯克利普斯研究所