一種鉛離子濃度檢測方法及試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種溶液中鉛離子濃度的檢測方法及試劑盒。所述方法包括：將待測液體樣品加入含有菁染料溶液和能夠形成G-四鏈體的DNA分子的樣本溶液中，混合后得測試溶液樣本，然后利用可根據(jù)溶液顏色的變化判斷測試溶液樣本中鉛離子濃度的技術(shù)，進(jìn)而檢測出液體樣品中鉛離子的濃度。本發(fā)明提供的檢測方法及試劑盒所涉及的反應(yīng)體系成分簡單，反應(yīng)體系本身可帶有大量的鈉離子，反應(yīng)也簡單，鉛離子是整個(gè)反應(yīng)的“引發(fā)劑”，保證了檢測的精確度、測試靈敏度高，特異性好，精確度好。
【專利說明】一種鉛離子濃度檢測方法及試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體而言涉及一種鉛離子濃度檢測方法及試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]鉛是一種具有神經(jīng)毒性的重金屬元素，在人體內(nèi)無任何生理功用，其理想的血鉛濃度為零。然而，由于環(huán)境中鉛的普遍存在，絕大多數(shù)人體中均存在一定量的鉛，鉛在體內(nèi)的量超過一定水平就會對健康引起難以恢復(fù)的損害。人體血鉛檢測是了解人體鉛污染的的最佳途徑。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中測定鉛離子濃度的方法主要有:雙硫腙絡(luò)合比色法、原子吸收分光光度法、溶出伏安法。
[0004]雙硫腙絡(luò)合比色法是早期廣泛使用的一種測鉛方法。主要原理是樣品經(jīng)消化后，在pH8.5-9.0時(shí)，鉛離子與雙硫腙生成紅色絡(luò)合物，溶于三氯甲烷，加入檸檬酸銨，氰化鉀和鹽酸羥胺等，防止鐵、銅、鋅等離子干擾，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。該法繁瑣、費(fèi)時(shí)，所用試劑氰化鉀和三氯甲烷毒性大，影響人體健康。
[0005]原子吸收光譜法主要包括火焰原子吸收光譜法、石墨爐無焰原子吸收光譜法、氫化物發(fā)生原子吸收光譜法。其中火焰原子吸收光譜法測定鉛的靈敏度較低，直接用于測定試樣中微量鉛，提高靈敏度是關(guān)鍵。石墨爐原子吸收光譜法測定鉛具有很高的靈敏度。但由于鉛是低溫易揮發(fā)性元素，對實(shí)際樣品的分析，基體干擾往往比較嚴(yán)重。需要選用合適的基體改進(jìn)劑，以提高鉛的灰化溫度，減少其揮發(fā)損失，或增加基體的揮發(fā)性。氫化物發(fā)生法是一種低溫原子化法，鉛的氫化物生成反應(yīng)只有在氧化劑或螯合劑存在下才有較高的效率。
[0006]陽極溶出伏安法:鉛離子在一定的還原電位下，被還原富集在工作電極上，之后工作電極電位從負(fù)向正快速掃描，當(dāng)電極電位達(dá)到電極上金屬的氧化電位時(shí)，金屬被氧化而產(chǎn)生氧化電流，在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，氧化電流峰與鉛的濃度成正比，依此原理進(jìn)行定量分析。溶出伏安法特性:通過控制還原電位和掃描電位范圍，溶出伏安法可一次測多個(gè)金屬；而通過控制富集時(shí)間、掃描速率、電解質(zhì)等實(shí)驗(yàn)條件，可改變測量的靈敏度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于檢測液體樣品中鉛離子濃度的方法。
[0008]所述方法包括以下步驟:將待測液體樣品加入含有菁染料溶液和能夠形成G-四鏈體的DNA分子的樣本溶液中，混合后得測試溶液樣本，然后利用可根據(jù)溶液顏色的變化判斷測試溶液樣本中鉛離子濃度的技術(shù)，進(jìn)而檢測出液體樣品中鉛離子的濃度。
[0009]所述方法為非疾病診斷目的的方法。
[0010]所述方法中，所述DNA分子的核酸序列中含有下述核苷酸序列:
[0011]GGYGGZGGMGG
[0012]其中:Y、Z和M獨(dú)立地代表一個(gè)或多個(gè)任意堿基。[0013]所述方法中，所述DNA分子的核酸序列可選自以下序列:
[0014]5’ -GGGTAGGGCGGGTTGGG-3> ;5’ -GTGGGTAGGGCGGGTTGG-3> ；5’ -GGGTGGGTGGGTGGGT-3’ ；5’ -TGGGTAGGGCGGGTTGGG-3’ ；5’ -GGGTTGGGCGGGATGGG-3’ ；5’ -GGGTTGGGCGGGATGGGTG-3’ ；5’ -TGGGTGGGTGGGTGGG-3’ ；5’ -GGGTGGGTGGGTGGGTT-3’。
[0015]所述DNA分子為單鏈。
[0016]所述方法中，所述菁染料為式I的化合物，
【權(quán)利要求】
1.一種用于檢測液體樣品中鉛離子濃度的方法，所述方法包括以下步驟:將待測液體樣品加入含有菁染料溶液和能夠形成G-四鏈體的DNA分子的樣本溶液中，混合后得測試溶液樣本，然后利用可根據(jù)溶液顏色的變化判斷測試溶液樣本中鉛離子濃度的技術(shù)，進(jìn)而檢測出液體樣品中鉛離子的濃度；所述方法為非疾病診斷目的的方法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述DNA分子的核酸序列中含有下述核苷酸序列:
GGYGGZGGMGG 其中:Y、Z和M獨(dú)立地代表一個(gè)或多個(gè)任意堿基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述DNA分子的核酸序列可選自以下序列:
5’ -GGGTAGGGCGGGTTGGG-3’ ；5’ -GTGGGTAGGGCGGGTTGG-3’ ；5’ -GGGTGGGTGGGTGGGT-3’ ；5’ -TGGGTAGGGCGGGTTGGG-3’ ；5’ -GGGTTGGGCGGGATGGG-3’ ；5’ -GGGTTGGGCGGGATGGGTG-3’ ；5， -TGGGTGGGTGGGTGGG-3， ；5， -GGGTGGGTGGGTGGGTT-3，。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于:所述菁染料為式I的化合物，
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的方法,其特征在于: 所述樣本溶液的溶劑選自PH值為6.2-8.2的緩沖溶液；優(yōu)選的，所述樣本溶液的溶劑選自pH值為6.2、7.0、7.2或8.2的緩沖溶液； 所述測試溶液樣本中，所述DNA分子的濃度為:0.05-30 μ mo I/L ;優(yōu)選1_10 μ mo I/L ；再優(yōu)選1.8或3或9 μ mol/L ;所述測試溶液樣本中，所述菁染料的濃度為:1-30 μ mol/L ;優(yōu)選 3-20 μ mol/L ;再優(yōu)選 3 或 9 或 18 μ mol/L ； 所述緩沖溶液選自Tris-HCl緩沖、磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀緩沖液液、硼酸-硼砂緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液、三乙醇胺緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、雙甘氨肽緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、磷酸鈉-磷酸氫鈉緩沖液、磷酸鉀-磷酸氫鉀緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液或磷酸鈉緩沖液； 所述菁染料溶液的溶劑選自甲醇或DMSO ;所述菁染料溶液中菁染料的濃度為.100 μ M ~1.2mM0
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的方法，其特征在于:所述技術(shù)包括下述I)或2): . 1)肉眼觀察法: 比較測試溶液樣本的顏色與各標(biāo)準(zhǔn)溶液樣本的顏色，測試溶液樣本中的鉛離子濃度即為顏色最接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液樣本中的鉛離子濃度；將所得的測試溶液樣本中的鉛離子濃度除以稀釋度，即得相應(yīng)的待測液體樣品中的鉛離子濃度； .2)光譜儀檢測法: 利用光譜儀檢測各標(biāo)準(zhǔn)溶液樣本的吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；利用光譜儀檢測測試溶液樣本的吸光度后，根據(jù)測試溶液樣本的吸光度值在上述標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可找到對應(yīng)的測試溶液樣本中的鉛離子濃度值；將所得的測試溶液樣本中的鉛離子濃度除以稀釋度，即得相應(yīng)的待測液體樣品中的鉛離子濃度； 所述稀釋度為待測液體樣品與測試溶液樣本的體積比值； 所述標(biāo)準(zhǔn)溶液樣本為將不同量的Pb (NO3)2溶液加入含有菁染料溶液和能夠形成G-四鏈體的DNA分子的樣本溶液中，混合后并用與樣本溶液的溶劑一樣的溶劑定容后，所得的一系列具有濃度梯度的已知鉛離子濃度的溶液。
7.—種檢測液體樣品中鉛離子濃度的試劑盒，包括菁染料、能夠形成G-四鏈體的DNA分子和PH值為6.2-8.2的緩沖溶液。
8.能夠形成G-四鏈體的DNA分子、菁染料或權(quán)利要求7所述的試劑盒在檢測液體樣品中鉛離子濃度或制備檢測液體樣品中鉛離子濃度的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
9.一種式I所示的化合物:
10.權(quán)利要求9所述式I化合物的制備方法，包括以下步驟: 1)2-甲基-苯并噻唑和化合物I在150°C加熱過夜；反應(yīng)產(chǎn)物以二氯甲烷和甲醇為溶劑通過硅膠色譜柱純化得到化合物4 ； 2)化合物3和4溶于乙醇，再加入三乙胺，加熱回流3小時(shí)后自然冷卻至室溫；反應(yīng)產(chǎn)物過濾后，以二氯甲烷和甲醇為溶劑通過硅膠色譜柱純化，然后在甲醇中重結(jié)晶，即得； 所述化合物1、3和4分別依次為式I1、式IV和式V所示的化合物:
【文檔編號】C07D277/64GK103792229SQ201410020135
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年1月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月16日
【發(fā)明者】孫紅霞, 于麗佳, 唐亞林, 楊千帆, 陳宏博, 張素格, 史運(yùn)華 申請人:中國科學(xué)院化學(xué)研究所