一種酸酶結合法水解黃酒糟的方法【專利摘要】本發(fā)明公開了一種酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其特征在于：其包括如下步驟：(1)烯酸水解：稱取10.0g的黃酒糟，加入濃度為4％的鹽酸50ml，再加入水，定容至100ml；在溫度80℃～90℃的條件下，酸解5～7h，水解液變成黃色，黃酒糟變成糊狀；(2)pH值調整：使用濃度為0.5～lmol/L的NaOH溶液進行pH值的調節(jié)，使得pH值調節(jié)至5～7；(3)蛋白酶水解：向步驟(2)中加入占步驟(2)總重量1％的蛋白酶，在溫度50℃～60℃的條件下，酶解18～20h，使得水解液的氮游離率達到42～46％?！緦＠f明】一種酸酶結合法水解黃酒糟的方法【
技術領域：
】[0001]本發(fā)明涉及一種蛋白酶提取工藝，尤其涉及一種采用酸酶結合法水解黃酒糟的方法。【
背景技術：
】[0002]在釀制黃酒所選的原料中，大米中蛋白質含量8%左右，黃酒釀造用曲中的原料小麥，其蛋白質含量也高達12%左右。而黃酒糟在釀造的過程中，只是用了原料中的糖分，其余的蛋白質卻沒有被利用，因此可以說是一種豐富的蛋白質資源。大米和小麥蛋白的生物價(BV)和蛋白質效用比(PER)在植物蛋白中幾乎是最好的，可以與動物蛋白媲美。大米蛋白被公認為優(yōu)質的食用蛋白，因其氨基酸組成配比合理，與FA0/WH0推薦的蛋白質氨基酸最佳配比模式相近。[0003]酸水解植物蛋白所得的產品，在歐美被稱為HVP(HydrolizedVegetableprotein)0酸水解法生產調味品，起源于日本。日本味之素公司于20世紀20年代開始采用酸水解脫脂大豆，并把水解液添加到傳統(tǒng)醬油中，提高傳統(tǒng)醬油的風味。酸水解植物蛋白具有氨基酸含量高、鮮味濃厚、原料利用率高、生產周期短、設備投資少、價格低廉、經濟效益顯著等優(yōu)點，因此獲得了十分廣泛的應用。[0004]近年來,一些企業(yè)片面追求經濟效益,一味追求水解液中高氨基酸含量，水解中使用的鹽酸濃度高，用量大，水解溫度高，水解液未經處理，造成水解蛋白液中強致癌物氯丙醇MCP(2-氣-1，3-丙二醇,3-氣-1,2-丙二醇)和DCP(1,3-二氣-2-丙醇，2,3-二氣_1-丙醇)超標。[0005]采用高酸、高溫水解，水解時往往生成較多的類黑精,水解液顏色較深,水解副產物也較多。蛋白酶酶解，水解條件溫和，不生成色素，水解液顏色淺，且風味蛋白酶可以有效降低苦為物質的釋放，無氯丙醇產生?！?br/>發(fā)明內容】[0006]針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供一種解決上述問題的酸酶結合法水解黃酒糟的方法。[0007]本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的而采用的技術方案為:[0008]一種酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其包括如下步驟:[0009](I)烯酸水解[0010]稱取10.0g的黃酒糟，加入濃度為4%的鹽酸50ml，再加入水，定容至100mL;在溫度80°C~90°C的條件下，酸解5~7h，水解液變成黃色，黃酒糟變成糊狀；[0011]⑵pH值調整[0012]使用濃度為0.5~lmol/L的NaOH溶液進行pH值的調節(jié)，使得pH值調節(jié)至5~7；[0013](3)蛋白酶水解[0014]向步驟⑵中加入占步驟⑵總重量1%的蛋白酶，在溫度50°C~60°C的條件下，酶解18~20h，使得水解液的氮游離率達到42~46%。[0015]所述的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其包括如下步驟:[0016]⑴烯酸水解[0017]稱取10.0g的黃酒糟，加入濃度為4%的鹽酸50ml，再加入水分，定容100mL;在溫度85°C的條件下，酸解6h，水解液變成黃色，黃酒糟變成糊狀；[0018]⑵pH值調整[0019]使用濃度為lmol/L的NaOH溶液進行pH值的調節(jié)，使得pH值調節(jié)至6.5；[0020](3)蛋白酶水解[0021]向步驟⑵中加入占步驟⑵總重量I%的蛋白酶，在溫度55°C的條件下，酶解18h,使得水解液的氮游離率達到44.9%。[0022]所述步驟(3)中的蛋白酶，，其為風味蛋白酶、或中性蛋白酶、胰蛋白酶中的一種與風味蛋白酶的組合，或者三者組合。[0023]所述的步驟(3)，其還包括如下步驟:[0024](31)胰蛋白酶的制備[0025](331)取動物胰臟，進行組織破碎，加入5~7倍體積的三氯乙酸提取液，提取10~12h;提取后的樣品進行離心，收集上清液體；再加入鹽析沉淀劑進行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即為粗酶原I;[0026](332)用磷酸緩沖液溶解粗酶原I，用超濾膜超濾，從超濾開始隨時監(jiān)測透過液A280值，至A28(i〈0.5時停止超濾，濃縮樣品至提取劑體積的1/10左右，得到粗酶原II；[0027](333)濾液中加入硫酸銨，使硫酸銨的飽和度達到50~80%，靜置，過濾，留取濾餅；所得濾餅加水溶解，加入飽和硫酸銨溶液，調節(jié)PH值至4.0~5.5;溶液靜置至有針狀糜蛋白酶結晶析出；離心，調節(jié)pH值至2.0~5.0,在溶液中加入固體硫酸銨,抽濾；取沉淀物，干燥，即得胰蛋白酶。[0028]所述的步驟(331)中的鹽析沉淀劑，其為溶解度超過200g/L的無機鹽，或pH〈3的酸。[0029]所述的步驟(331)為采用鹽析沉淀劑，進行分級沉淀處理，該分級沉淀處理為在上清液中依序加入20%、40%濃度的鹽析沉淀劑進行分級沉淀。[0030]所述的步驟(332)中采用的超濾膜為3k~IOk的超濾膜。[0031]本發(fā)明的有益效果為:[0032]1、酸梅結合法水解黃酒糟，由于酸濃度低，水解液顏色淺；水解中使用的風味蛋白酶有效的減少了苦味物質的釋放，因此不需要進行脫苦脫色處理。[0033]2、本發(fā)明采用酸酶法水解進行蛋白提取，其中酸采用烯酸，所以條件溫和、副反應少、不會帶來或產生有害物質，因而可保留營養(yǎng)成分。[0034]3、本發(fā)明合理對烯酸水解的水解溫度、時間、酸濃度、以及料液比進行限定，以及對蛋白酶水解的溫度、時間、用量進行限定，得出了最佳的用料，節(jié)省了原材料的同時，得到最佳的提取率?！揪唧w實施方式】[0035]實施例1:[0036]本發(fā)明提供的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其包括如下步驟:[0037](I)烯酸水解[0038]稱取10.0g的黃酒糟，加入濃度為4%的鹽酸50ml，再加入水，定容至100mL;在溫度80°C~90°C的條件下，酸解5~7h，水解液變成黃色，黃酒糟變成糊狀；[0039](4)pH值調整[0040]使用濃度為0.5~lmol/L的NaOH溶液進行pH值的調節(jié)，使得pH值調節(jié)至5~7；[0041](5)蛋白酶水解[0042]向步驟⑵中加入占步驟⑵總重量1%的蛋白酶，在溫度50°C~60°C的條件下，酶解18~20h，使得水解液的氮游離率達到42~46%。[0043]所述的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其包括如下步驟:[0044](I)烯酸水解[0045]稱取10.0g的黃酒糟，加入濃度為4%的鹽酸50ml，再加入水分，定容100mL;在溫度85°C的條件下，酸解6h，水解液變成黃色，黃酒糟變成糊狀；[0046](2)pH值調整[0047]使用濃度為lmol/L的NaOH溶液進行pH值的調節(jié)，使得pH值調節(jié)至6.5；[0048](3)蛋白酶水解[0049]向步驟(2)中加入占步驟(2)總重量I%的蛋白酶，在溫度55°C的條件下，酶解18h,使得水解液的氮游離率達到44.9%。[0050]所述步驟(3)中的蛋白酶，，其為風味蛋白酶、或中性蛋白酶、胰蛋白酶中的一種與風味蛋白酶的組合，或者三者組合。[0051]所述的步驟(3)，其還包括如下步驟:[0052](31)胰蛋白酶的制備[0053](331)取動物胰臟，進行組織破碎，加入5~7倍體積的三氯乙酸提取液，提取10~12h;提取后的樣品進行離心，收集上清液體；再加入鹽析沉淀劑進行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即為粗酶原I;[0054](332)用磷酸緩沖液溶解粗酶原I，用超濾膜超濾，從超濾開始隨時監(jiān)測透過液A280值，至A28(i〈0.5時停止超濾，濃縮樣品至提取劑體積的1/10左右，得到粗酶原II；[0055](333)濾液中加入硫酸銨，使硫酸銨的飽和度達到50~80%，靜置，過濾，留取濾餅；所得濾餅加水溶解，加入飽和硫酸銨溶液，調節(jié)PH值至4.0~5.5;溶液靜置至有針狀糜蛋白酶結晶析出；離心，調節(jié)pH值至2.0~5.0,在溶液中加入固體硫酸銨,抽濾；取沉淀物，干燥，即得胰蛋白酶。[0056]所述的步驟(331)中的鹽析沉淀劑，其為溶解度超過200g/L的無機鹽，或pH〈3的酸。[0057]所述的步驟(331)為采用鹽析沉淀劑，進行分級沉淀處理，該分級沉淀處理為在上清液中依序加入20%、40%濃度的鹽析沉淀劑進行分級沉淀。[0058]所述的步驟(332)中采用的超濾膜為3k~IOk的超濾膜。[0059]實施例2:[0060]本實施例提供的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其與實施例1基本相同，其不同之處在于:[0061]一種酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其包括如下步驟:[0062](I)烯酸水解[0063]稱取10.0g的黃酒糟，加入濃度為4%的鹽酸50ml，再加入水，定容至100mL;在溫度83°C的條件下，酸解5h，水解液變成黃色，黃酒糟變成糊狀；[0064](6)pH值調整[0065]使用濃度為0.7mol/L的NaOH溶液進行pH值的調節(jié)，使得pH值調節(jié)至6；[0066](7)蛋白酶水解[0067]向步驟⑵中加入占步驟⑵總重量I%的蛋白酶，在溫度55°C的條件下，酶解19h,使得水解液的氮游離率達到45%。[0068]所述步驟(3)中的蛋白酶，，其為風味蛋白酶。[0069]所述的步驟(3)，其還包括如下步驟:[0070](31)胰蛋白酶的制備[0071](331)取動物胰臟，進行組織破碎，加入6倍體積的三氯乙酸提取液，提取IOh;提取后的樣品進行離心，收集上清液體；再加入鹽析沉淀劑進行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即為粗酶原I;[0072](332)用磷酸緩沖液溶解粗酶原I，用超濾膜超濾，從超濾開始隨時監(jiān)測透過液A280值，至A28(i〈0.5時停止超濾，濃縮樣品至提取劑體積的1/10左右，得到粗酶原II；[0073](333)濾液中加入硫酸銨，使硫酸銨的飽和度達到70%，靜置，過濾，留取濾餅；所得濾餅加水溶解，加入飽和硫酸銨溶液，調節(jié)PH值至5;溶液靜置至有針狀糜蛋白酶結晶析出；離心，調節(jié)PH值至3，在溶液中加入固體硫酸銨，抽濾；取沉淀物，干燥，即得胰蛋白酶。[0074]所述的步驟(331)中的鹽析沉淀劑，其為溶解度超過200g/L的無機鹽，或pH〈3的酸。[0075]所述的步驟(331)為采用鹽析沉淀劑，進行分級沉淀處理，該分級沉淀處理為在上清液中依序加入20%、40%濃度的鹽析沉淀劑進行分級沉淀。所述的步驟(332)中采用的超濾膜為5k的超濾膜。[0076]實施例3:[0077]本實施例提供的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其與實施例1、2基本相同，其不同之處在于:[0078]一種酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其包括如下步驟:[0079](I)烯酸水解[0080]稱取10.0g的黃酒糟，加入濃度為4%的鹽酸50ml，再加入水，定容至100mL;在溫度80°C~90°C的條件下，酸解5~7h，水解液變成黃色，黃酒糟變成糊狀；[0081](8)pH值調整[0082]使用濃度為0.5~lmol/L的NaOH溶液進行pH值的調節(jié)，使得pH值調節(jié)至5~7；[0083](9)蛋白酶水解[0084]向步驟⑵中加入占步驟⑵總重量1%的蛋白酶，在溫度50°C~60°C的條件下，酶解18~20h，使得水解液的氮游離率達到42~46%。[0085]所述步驟(3)中的蛋白酶，，其為中性蛋白酶與風味蛋白酶的組合。[0086]所述的步驟(3)，其還包括如下步驟:[0087](31)胰蛋白酶的制備[0088](331)取動物胰臟，進行組織破碎，加入5倍體積的三氯乙酸提取液，提取12h;提取后的樣品進行離心，收集上清液體；再加入鹽析沉淀劑進行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即為粗酶原I;[0089](332)用磷酸緩沖液溶解粗酶原I，用超濾膜超濾，從超濾開始隨時監(jiān)測透過液A280值，至A28(i〈0.5時停止超濾，濃縮樣品至提取劑體積的1/10左右，得到粗酶原II；[0090](333)濾液中加入硫酸銨，使硫酸銨的飽和度達到80%，靜置，過濾，留取濾餅；所得濾餅加水溶解，加入飽和硫酸銨溶液，調節(jié)PH值至4.0;溶液靜置至有針狀糜蛋白酶結晶析出；離心，調節(jié)PH值至5.0，在溶液中加入固體硫酸銨，抽濾；取沉淀物，干燥，即得胰蛋白酶。[0091]所述的步驟(331)中的鹽析沉淀劑，其為溶解度超過200g/L的無機鹽，或pH〈3的酸。[0092]所述的步驟(331)為采用鹽析沉淀劑，進行分級沉淀處理，該分級沉淀處理為在上清液中依序加入20%、40%濃度的鹽析沉淀劑進行分級沉淀。[0093]所述的步驟(332)中采用的超濾膜為3k的超濾膜。[0094]實施例4:[0095]本實施例提供的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其與實施例1、2、3基本相同，其不同之處在于:[0096]一種酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其包括如下步驟:[0097](I)烯酸水解[0098]稱取10.0g的黃酒糟，加入濃度為4%的鹽酸50ml，再加入水，定容至100mL;在溫度90°C的條件下，酸解7h，水解液變成黃色，黃酒糟變成糊狀；[0099](10)pH值調整[0100]使用濃度為lmol/L的NaOH溶液進行pH值的調節(jié)，使得pH值調節(jié)至6；[0101](11)蛋白酶水解[0102]向步驟(2)中加入占步驟(2)總重量I%的蛋白酶，在溫度60°C的條件下，酶解18h,使得水解液的氮游離率達到46%。[0103]所述步驟(3)中的蛋白酶，，其為胰蛋白酶與風味蛋白酶的組合。[0104]所述的步驟(3)，其還包括如下步驟:[0105](31)胰蛋白酶的制備[0106](331)取動物胰臟，進行組織破碎，加入7倍體積的三氯乙酸提取液，提取Ilh;提取后的樣品進行離心，收集上清液體；再加入鹽析沉淀劑進行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即為粗酶原I;[0107](332)用磷酸緩沖液溶解粗酶原I，用超濾膜超濾，從超濾開始隨時監(jiān)測透過液A280值，至A28(i〈0.5時停止超濾，濃縮樣品至提取劑體積的1/10左右，得到粗酶原II；[0108](333)濾液中加入硫酸銨，使硫酸銨的飽和度達到50~80%，靜置，過濾，留取濾餅；所得濾餅加水溶解，加入飽和硫酸銨溶液，調節(jié)PH值至5.5;溶液靜置至有針狀糜蛋白酶結晶析出；離心，調節(jié)PH值至2.0，在溶液中加入固體硫酸銨，抽濾；取沉淀物，干燥，即得膜蛋白酶。[0109]所述的步驟(331)中的鹽析沉淀劑，其為溶解度超過200g/L的無機鹽，或pH〈3的酸。[0110]所述的步驟(331)為采用鹽析沉淀劑，進行分級沉淀處理，該分級沉淀處理為在上清液中依序加入20%、40%濃度的鹽析沉淀劑進行分級沉淀。所述的步驟(332)中采用的超濾膜為IOk的超濾膜。[0111]實施例5:[0112]一種酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其包括如下步驟:[0113](I)烯酸水解[0114]稱取10.0g的黃酒糟，加入濃度為4%的鹽酸50ml，再加入水，定容至100mL;在溫度85°C的條件下，酸解6.5h，水解液變成黃色，黃酒糟變成糊狀；[0115](12)pH值調整[0116]使用濃度為0.8mol/L的NaOH溶液進行pH值的調節(jié)，使得pH值調節(jié)至6.2；[0117](13)蛋白酶水解[0118]向步驟(2)中加入占步驟(2)總重量1%的蛋白酶，在溫度56°C的條件下，酶解18.5h，使得水解液的氮游離率達到45.5%。[0119]所述步驟⑶中的蛋白酶，，其為風味蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶的三者組合。[0120]所述的步驟(3)，其還包括如下步驟:[0121](31)胰蛋白酶的制備[0122](331)取動物胰臟，進行組織破碎，加入6.5倍體積的三氯乙酸提取液，提取11.5h;提取后的樣品進行離心，收集上清液體；再加入鹽析沉淀劑進行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即為粗酶原I;[0123](332)用磷酸緩沖液溶解粗酶原I，用超濾膜超濾，從超濾開始隨時監(jiān)測透過液A280值，至A28(i〈0.5時停止超濾，濃縮樣品至提取劑體積的1/10左右，得到粗酶原II；[0124](333)濾液中加入硫酸銨，使硫酸銨的飽和度達到65%，靜置，過濾，留取濾餅；所得濾餅加水溶解，加入飽和硫酸銨溶液，調節(jié)PH值至5;溶液靜置至有針狀糜蛋白酶結晶析出；離心，調節(jié)PH值至3.5，在溶液中加入固體硫酸銨，抽濾；取沉淀物，干燥，即得胰蛋白酶。[0125]所述的步驟(331)中的鹽析沉淀劑，其為溶解度超過200g/L的無機鹽，或pH〈3的酸。[0126]所述的步驟(331)為采用鹽析沉淀劑，進行分級沉淀處理，該分級沉淀處理為在上清液中依序加入20%、40%濃度的鹽析沉淀劑進行分級沉淀。所述的步驟(332)中采用的超濾膜為7k的超濾膜。[0127]本發(fā)明的有益效果為:[0128]1、酸梅結合法水解黃酒糟，由于酸濃度低，水解液顏色淺；水解中使用的風味蛋白酶有效的減少了苦味物質的釋放，因此不需要進行脫苦脫色處理。[0129]2、本發(fā)明采用酸酶法水解進行蛋白提取，其中酸采用烯酸，所以條件溫和、副反應少、不會帶來或產生有害物質，因而可保留營養(yǎng)成分。[0130]3、本發(fā)明合理對烯酸水解的水解溫度、時間、酸濃度、以及料液比進行限定，以及對蛋白酶水解的溫度、時間、用量進行限定，得出了最佳的用料，節(jié)省了原材料的同時，得到最佳的提取率。[0131]上述的實施例并不是本發(fā)明的所有的實施例，說明書記載的組份范圍，均可以實現(xiàn)本發(fā)明。[0132]如本發(fā)明實施例所述，采用與本發(fā)明相同或相似的步驟及組分，及其所列明的范圍內，所得到的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，均在本發(fā)明的保護范圍之內?！緳嗬蟆?.一種酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其特征在于:其包括如下步驟:(1)烯酸水解稱取10.0g的黃酒糟，加入濃度為4%的鹽酸50ml，再加入水，定容至100mL;在溫度80°C~90°C的條件下，酸解5~7h，水解液變成黃色，黃酒糟變成糊狀；(2)pH值調整使用濃度為0.5~lmol/L的NaOH溶液進行pH值的調節(jié)，使得pH值調節(jié)至5~7;(3)蛋白酶水解向步驟(2)中加入占步驟(2)總重量1%的蛋白酶，在溫度50°C~60°C的條件下，酶解18~20h，使得水解液的氮游離率達到42~46%。2.根據(jù)權利要求1所述的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其特征在于:其包括如下步驟:(1)烯酸水解稱取10.0g的黃酒糟，加入濃度為4%的鹽酸50ml，再加入水分，定容100mL;在溫度850C的條件下，酸解6h，水解液變成黃色，黃酒糟變成糊狀；(2)pH值調整使用濃度為lmol/L的NaOH溶液進行pH值的調節(jié)，使得pH值調節(jié)至6.5；(3)蛋白酶水解向步驟(2)中加入占步驟(2)總重量1%的蛋白酶，在溫度55°C的條件下，酶解18h，使得水解液的氮游離率達到44.9%。3.根據(jù)權利要求1所述的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其特征在于:所述步驟(3)中的蛋白酶，其為風味蛋白酶、或中性蛋白酶、胰蛋白酶中的一種與風味蛋白酶的組合，或者三者組合。4.根據(jù)權利要求1所述的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其特征在于:所述的步驟(3)，其還包括如下步驟:(31)膜蛋白酶的制備(331)取動物胰臟，進行組織破碎，加入5~7倍體積的三氯乙酸提取液，提取10~12h;提取后的樣品進行離心，收集上清液體；再加入鹽析沉淀劑進行沉淀，至沉淀不再析出，得到的沉淀即為粗酶原I;(332)用磷酸緩沖液溶解粗酶原I，用超濾膜超濾，從超濾開始隨時監(jiān)測透過液A28tl值，至A28(i〈0.5時停止超濾，濃縮樣品至提取劑體積的1/10左右，得到粗酶原II；(333)濾液中加入硫酸銨，使硫酸銨的飽和度達到50~80%，靜置，過濾，留取濾餅；所得濾餅加水溶解，加入飽和硫酸銨溶液，調節(jié)PH值至4.0~5.5;溶液靜置至有針狀糜蛋白酶結晶析出；離心，調節(jié)pH值至2.0~5.0,在溶液中加入固體硫酸銨,抽濾；取沉淀物,干燥，即得胰蛋白酶。5.根據(jù)權利要求4所述的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其特征在于:所述的步驟(331)中的鹽析沉淀劑，其為溶解度超過200g/L的無機鹽，或pH〈3的酸。6.根據(jù)權利要求4所述的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其特征在于:所述的步驟(331)為采用鹽析沉淀劑，進行分級沉淀處理，該分級沉淀處理為在上清液中依序加入20%,40%濃度的鹽析沉淀劑進行分級沉淀。7.根據(jù)權利要求4所述的酸酶結合法水解黃酒糟的方法，其特征在于:所述的步驟(332)中采用的超濾膜為3k~IOk的超濾膜?！疚臋n編號】C07K1/12GK103966296SQ201410149246【公開日】2014年8月6日申請日期:2014年4月14日優(yōu)先權日:2014年4月14日【發(fā)明者】雷泉申請人:雷泉