抗肝癌干細(xì)胞單克隆抗體及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種抗肝癌干細(xì)胞單克隆抗體，由保藏編號(hào)為CGMCC?No.8800的小鼠雜交瘤細(xì)胞4P-120分泌產(chǎn)生，該單克隆抗體經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，能夠特異性結(jié)合肝癌細(xì)胞并特異性識(shí)別肝癌組織，其所識(shí)別的抗原在人肝癌的癌組織中高表達(dá)而在癌旁組織中不表達(dá)或低表達(dá)，并在細(xì)胞增殖過(guò)程中存在陽(yáng)性向陰性的分化以及陰性向陽(yáng)性的逆分化；相比抗原低表達(dá)細(xì)胞，抗原高表達(dá)細(xì)胞有更強(qiáng)的增殖能力、克隆形成能力、成球能力、劃痕遷移能力和侵襲轉(zhuǎn)移能力；因此，本發(fā)明為靶向腫瘤干細(xì)胞的肝癌治療提供了有應(yīng)用前景的功能性單克隆抗體，其可以用于制備肝癌治療藥物。
【專利說(shuō)明】抗肝癌干細(xì)胞單克隆抗體及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種單克隆抗體。
【背景技術(shù)】
[0002]肝癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其病死率居惡性腫瘤的第3位，肝癌患者5年生存率僅有14%~30%。原發(fā)性肝癌具有發(fā)病隱襲、病死率高的特點(diǎn)，早期診斷及防止復(fù)發(fā)對(duì)預(yù)后意義重大。自單克隆抗體技術(shù)問(wèn)世后，人們?cè)噲D通過(guò)應(yīng)用抗肝癌單克隆抗體提高肝癌的早期診斷率及治療效果，但目前獲得的抗肝癌單克隆抗體的特異性尚不令人滿意，由于腫瘤異質(zhì)性的存在，又使其臨床應(yīng)用受到一定影響。因此，有必要尋找更好的抗肝癌特異性單克隆抗體，以提高對(duì)肝癌診治的特異性。近年來(lái)，腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cell, CSC)已成為腫瘤研究的新熱點(diǎn)。由于CSC是腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和耐藥的根源，因此，建立靶向CSC的治療新策略有望克服臨床上現(xiàn)有治療手段的缺陷，改善肝癌患者的預(yù)后。發(fā)明人所在課題組前期基于腫瘤干細(xì)胞同胚胎干細(xì)胞的相似性，以Nanog作為分選標(biāo)記，構(gòu)建了以Nanog為啟動(dòng)子調(diào)控GFP表達(dá)的慢病毒報(bào)告系統(tǒng)Lv-Nanog (p) -GFP,分選獲得的Nanog陽(yáng)性的肝癌細(xì)胞經(jīng)體內(nèi)外試驗(yàn)證實(shí)具有腫瘤干細(xì)胞特性(Hepatology2012)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于以Nanog陽(yáng)性的肝癌細(xì)胞作為免疫原及篩選抗原，通過(guò)單克隆抗體技術(shù)篩選出針對(duì)肝癌干細(xì)胞的單克隆抗體，并對(duì)該單克隆抗體針對(duì)的抗原進(jìn)行研究，以期為靶向腫瘤干細(xì)胞的肝癌治療提供有應(yīng)用前景的功能性單克隆抗體。
[0004]經(jīng)研究，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
[0005]1.抗肝癌干細(xì)胞單克隆抗體，由保藏編號(hào)為CGMCC N0.8800的小鼠雜交瘤細(xì)胞4P-120分泌產(chǎn)生。
[0006]2.抗肝癌干細(xì)胞單克隆抗體在制備肝癌治療藥物中的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明以Nanog陽(yáng)性的肝癌細(xì)胞作為免疫原及篩選抗原，通過(guò)單克隆抗體技術(shù)篩選出能夠穩(wěn)定分泌單克隆抗體的小鼠雜交瘤細(xì)胞株4P-120，其分泌的單克隆抗體經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，能夠特異性結(jié)合肝癌細(xì)胞并特異性識(shí)別肝癌組織；該單克隆抗體所識(shí)別的抗原在人肝癌的癌組織中高表達(dá)而在癌旁組織中不表達(dá)或低表達(dá)，并在細(xì)胞增殖過(guò)程中存在陽(yáng)性向陰性的分化以及陰性向陽(yáng)性的逆分化；相比抗原低表達(dá)細(xì)胞，抗原高表達(dá)細(xì)胞有更強(qiáng)的增殖能力、克隆形成能力、成球能力、劃痕遷移能力和侵襲轉(zhuǎn)移能力；因此，本發(fā)明為靶向腫瘤干細(xì)胞的肝癌治療提供了有應(yīng)用前景的功能性單克隆抗體，其可以用于制備肝癌治療藥物。
[0008]生物材料保藏 [0009]小鼠雜交瘤細(xì)胞4P-120于2014年3月5日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCCJia:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，保藏編號(hào)為CGMCC N0.8800。【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖進(jìn)行說(shuō)明:
[0011]圖1為鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體4P-120與不同細(xì)胞系的反應(yīng)情況。
[0012]圖2為鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體4P-120與人肝癌組織及正常肝臟組織的反應(yīng)情況。
[0013]圖3為鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體4P-120所識(shí)別的抗原在人肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況。
[0014]圖4為鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogros單克隆抗體4P-120所識(shí)別的抗原在細(xì)胞增殖過(guò)程中的表達(dá)變化情況。其中，A、B為從PLC-Nanog細(xì)胞中分別分選4P-120抗原與Nanog雙陰性細(xì)胞(P9)、4P-120抗原單陽(yáng)性細(xì)胞(P8)、4P-120抗原與Nanog雙陽(yáng)性細(xì)胞(P6)、4P-120抗原單陰性細(xì)胞(P7)這四個(gè)細(xì)胞群體；(:、03、？為對(duì)分選出的？9、？8、？7、？6細(xì)胞群體進(jìn)行流式回測(cè)的結(jié)果； G、H、1、J為培養(yǎng)7d后對(duì)P9、P8、P7、P6細(xì)胞群體進(jìn)行4P-120抗原分化情況的流式檢測(cè)結(jié)果。
[0015]圖5為4P-120抗原高表達(dá)細(xì)胞有更強(qiáng)的增殖能力。
[0016]圖6為4P-120抗原高表達(dá)細(xì)胞有更高的克隆形成能力。
[0017]圖7為4P-120抗原高表達(dá)細(xì)胞有更高的成球能力。
[0018]圖8為4P-120抗原高表達(dá)細(xì)胞有更高的劃痕遷移能力。
[0019]圖9為4P-120抗原高表達(dá)細(xì)胞有更高的侵襲轉(zhuǎn)移能力。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面將結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。
[0021]一、鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體的制備
[0022]1、鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras雜交瘤細(xì)胞株的獲得
[0023]將培養(yǎng)的PLC-NanograsNanogneg細(xì)胞(即以Nanog為啟動(dòng)子調(diào)控GFP表達(dá)的肝癌細(xì)胞PLC)流式分選出PLC-Nanogros細(xì)胞(即Nanog陽(yáng)性的PLC細(xì)胞)，作為免疫原；取體重14~18g的4~6周齡健康BALB/c小鼠，于每只小鼠腹腔內(nèi)注射I X IO6個(gè)PLC-Nanogpos細(xì)胞進(jìn)行首次免疫，之后每間隔2周再以相同方法加強(qiáng)免疫2次。于末次加強(qiáng)免疫后第10天，取小鼠尾血，分離血清，采用細(xì)胞間接酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)抗體效價(jià)。
[0024]ELISA法檢測(cè)抗體效價(jià)具體如下^fPLC-Nanogras細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔IX IO4個(gè)細(xì)胞，次日取出細(xì)胞培養(yǎng)板，棄上清后PBS洗3次，用4%多聚甲醛溶液于室溫下固定20分鐘，PBS漂洗3次，再用10%胎牛血清(FBS)于37°C封閉30分鐘，棄上清，不同細(xì)胞培養(yǎng)孔分別加入連續(xù)10倍稀釋的免疫小鼠血清，每孔lOOul，同時(shí)以首次免疫前的小鼠血清作為陰性對(duì)照，PBS作為空白對(duì)照，37 °C孵育I小時(shí)后棄上清，PBST洗板5次，再加入用封閉液按1:1000稀釋的HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG，每孔lOOul，37°C孵育30分鐘，棄去標(biāo)記抗體溶液，PBST洗板5次，再加入OPD顯色液，37°C孵育20分鐘后，用2mol/L硫酸終止反應(yīng)，測(cè)量各組OD49tlnm值；實(shí)驗(yàn)組OD49tol值大于或等于陰性對(duì)照2.1倍者判為陽(yáng)性，以判為陽(yáng)性的最高稀釋倍數(shù)作為抗體效價(jià)。
[0025]選取抗體效價(jià)最高的一只小鼠，以PLC-Nanogros細(xì)胞進(jìn)行脾臟加強(qiáng)，3天后，取其脾臟制備脾細(xì)胞懸液，與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合。所得融合細(xì)胞用含HAT的1640培養(yǎng)液平均分到5-7個(gè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)，于培養(yǎng)第7天左右，用含HAT的1640培養(yǎng)液全量換液一次，第10天收集培養(yǎng)上清，采用ELISA法進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞篩選。
[0026]ELISA法篩選陽(yáng)性細(xì)胞具體如下:于融合細(xì)胞培養(yǎng)第9天，將PLC-Nanogras細(xì)胞接種于另一 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔I X IO4個(gè)細(xì)胞，第10天取出細(xì)胞培養(yǎng)板，棄上清后PBS洗3次，用4%多聚甲醛溶液于室溫下固定20分鐘，PBS漂洗3次，再用10% FBS于37°C封閉30分鐘，棄上清，各孔分別加入不同融合細(xì)胞培養(yǎng)上清，每孔lOOul，同時(shí)以1:100稀釋的免疫小鼠血清作為陽(yáng)性對(duì)照，以SP2/0細(xì)胞 培養(yǎng)上清作為陰性對(duì)照，37°C孵育I小時(shí)，棄上清，PBST洗板5次，再加入用封閉液按1:1000稀釋的HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG，每孔lOOul，37°C孵育30分鐘，棄去標(biāo)記抗體溶液，PBST洗板5次，再加入OPD顯色液，37°C孵育20分鐘后，用2mol/L硫酸終止反應(yīng)，測(cè)量各組OD49tlnm值，實(shí)驗(yàn)組OD49tol值大于或等于陰性對(duì)照2.1倍者判為陽(yáng)性。
[0027]將陽(yáng)性孔細(xì)胞用含HAT的1640培養(yǎng)液換液培養(yǎng)，次日采用前述ELISA法進(jìn)行復(fù)檢，檢測(cè)出的陽(yáng)性孔細(xì)胞進(jìn)一步進(jìn)行單克隆化篩選。
[0028]單克隆雜交瘤細(xì)胞株的獲得:采用有限稀釋法對(duì)陽(yáng)性孔細(xì)胞進(jìn)行亞克隆，每次亞克隆后第七天左右，挑選出單克隆細(xì)胞孔并采用前述ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，保留1-2個(gè)陽(yáng)性孔，重復(fù)亞克隆三次以上，直至所有亞克隆均為陽(yáng)性，對(duì)該細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)并凍存，即得單克隆雜交瘤細(xì)胞株。
[0029]本發(fā)明經(jīng)過(guò)四次融合篩選，共獲得64株單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)鑒定確認(rèn)，命名為4P-120的小鼠雜交瘤細(xì)胞能夠穩(wěn)定分泌具有肝癌特異性的單克隆抗體。
[0030]2、鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體的獲得
[0031]選取體重20g以上、8周齡以上健康BALB/c小鼠，腹腔注射由液體石蠟與羊毛脂按質(zhì)量比為3:1混合制得的佐劑，每只0.3ml, 7-10天后將培養(yǎng)的小鼠雜交瘤細(xì)胞4P-120用PBS或生理鹽水洗一次后注射入小鼠腹腔，7-10天后取小鼠腹水，用ProteinG柱按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行純化，即得鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體4P-120，測(cè)定抗體濃度，-20°C保存。
[0032]二、鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體的特異性鑒定
[0033]1、流式細(xì)胞儀檢測(cè)抗體特異性
[0034]選取不同腫瘤細(xì)胞系:三種肝癌細(xì)胞系(PLC，HU-7，T1224)，二種胃癌細(xì)胞系(Xn0422, SGC7901)，二種膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(U87，U251)，三種結(jié)腸癌細(xì)胞系(SW480, SW620，HCT-116)，以及二種正常細(xì)胞系(293，L02)和三例正常CIK細(xì)胞(CIK-1，CIK-2，CIK-3)，將培養(yǎng)細(xì)胞用PBS洗I次，加入小鼠雜交瘤細(xì)胞4P-120培養(yǎng)上清，4°C孵育30分鐘，PBS洗3次，再加入用PBS按1:500稀釋的異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG(Sigma公司)，4°C孵育30分鐘，PBS洗三次，用PBS400ul復(fù)溶后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
[0035]結(jié)果如圖1所示，小鼠雜交瘤細(xì)胞4P-120培養(yǎng)上清對(duì)三種肝癌細(xì)胞系均呈明顯的高反應(yīng)，對(duì)其它腫瘤細(xì)胞系呈低反應(yīng)，對(duì)正常細(xì)胞系呈陰性反應(yīng)，說(shuō)明由小鼠雜交瘤細(xì)胞4P-120分泌的鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體4P-120能夠特異性結(jié)合肝癌細(xì)胞。
[0036]2、免疫熒光鑒定抗體特異性
[0037]分別切取人肝癌組織和正常肝臟組織，用冷丙酮固定20分鐘，PBS洗4次，再用10% BSA于37°C孵育30分鐘，再加入10ug/ml鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體4P-120，4°C冰箱過(guò)夜，PBS洗5次，再加入用PBS按1:500稀釋的FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG，37°C孵育50分鐘，再加入1:500稀釋的DAPI，37°C孵育10分鐘，PBS洗5次，40%甘油封片，激光共聚焦檢測(cè)。
[0038]結(jié)果如圖2所示，鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogros單克隆抗體4P-120與人肝癌組織呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，而對(duì)人正常肝臟組織呈陰性反應(yīng)，說(shuō)明該單克隆抗體能夠特異性識(shí)別肝癌組織。
[0039]3、免疫組化鑒定抗體特異性[0040]分別選取人肝癌的癌組織及癌旁組織石蠟切片，燈下烤20分鐘，用二甲苯浸泡2次(每次10分鐘)，再依次用無(wú)水乙醇、無(wú)水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇各浸泡5分鐘，再依次用蒸餾水、PBS各洗3次，加入抗原修復(fù)液，800W微波加熱3分15秒，150W微波加熱16分鐘，冷卻后蒸餾水洗3次，再加入3%過(guò)氧化氫，37°C孵育15分鐘，PBS洗3次，再加入封閉血清，37°C孵育15分鐘，再加入5ug/ml鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體4P-120，4°C冰箱過(guò)夜，PBS洗5次，再加入1:500稀釋的山羊抗小鼠IgG(Sigma公司)，37°C孵育25分鐘，PBS洗5次，再加入辣根過(guò)氧化物酶，37°C孵育15分鐘，PBS洗3次，DAB染色，自來(lái)水終止反應(yīng)，蘇木素復(fù)染約10秒，再依次用75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇、無(wú)水乙醇各浸泡5分鐘，干燥封片，顯微鏡下觀察。
[0041]結(jié)果如圖3所示，鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體4P-120所識(shí)別的抗原在人肝癌的癌組織中高表達(dá)，在癌旁組織中不表達(dá)或低表達(dá)；統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果也顯示，單克隆抗體4P-120所識(shí)別的抗原在癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織。
[0042]三、鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體的抗原表達(dá)及不同抗原表達(dá)量細(xì)胞的功能特性檢測(cè)
[0043]1、鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體所識(shí)別的抗原在細(xì)胞增殖過(guò)程中的表達(dá)情況
[0044]將培養(yǎng)的PLC-NanogrosNanogneg細(xì)胞用胰酶消化，PBS洗I次，1000rpm離心3分鐘，棄上清，加入50ug/ml鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogros單克隆抗體4P_120100ul，室溫孵育15分鐘，用PBS重懸細(xì)胞1000rpm離心洗滌3次，再加入1:1000稀釋的Alexa Fluo647標(biāo)記的抗小鼠IgG，4°C孵育15分鐘，用流式細(xì)胞儀分選出鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogras單克隆抗體4P-120的抗原高表達(dá)細(xì)胞群與抗原低表達(dá)細(xì)胞群，用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基分別培養(yǎng)，并將培養(yǎng)前細(xì)胞抗原表達(dá)情況與7天后回測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。
[0045]結(jié)果如圖4所示，鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogros單克隆抗體4P-120所識(shí)別的抗原在細(xì)胞增殖過(guò)程中存在陽(yáng)性向陰性的分化以及陰性向陽(yáng)性的逆分化。
[0046]2、不同抗原表達(dá)量的細(xì)胞群體的功能特性檢測(cè)
[0047]分別取未分選的PLC細(xì)胞、從PLC細(xì)胞系中分選出的鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogpos單克隆抗體4P-120的抗原高表達(dá)細(xì)胞、抗原低表達(dá)細(xì)胞各1000個(gè)，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，I~4天后用cell tilter blue細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒測(cè)定細(xì)胞增殖能力差異，數(shù)據(jù)由全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀檢測(cè)560nm/590nm比值獲得。結(jié)果如圖5所示，4P-120抗原高表達(dá)細(xì)胞具有顯著強(qiáng)于未分選PLC細(xì)胞、4P-120抗原低表達(dá)細(xì)胞的增殖能力。
[0048]分別取未分選的PLC細(xì)胞、從PLC細(xì)胞系中分選出的鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogpos單克隆抗體4P-120的抗原高表達(dá)細(xì)胞、抗原低表達(dá)細(xì)胞各50個(gè)，接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，用含10 % FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，2天換液一次，14天后對(duì)克隆形成數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)并統(tǒng)計(jì)。結(jié)果如圖6所示，相較于單克隆抗體4P-120的抗原低表達(dá)細(xì)胞，4P-120抗原聞表達(dá)細(xì)胞有更聞的克隆形成能力。
[0049]分別取未分選的PLC細(xì)胞、從PLC細(xì)胞系中分選出的鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogpos單克隆抗體4P-120的抗原高表達(dá)細(xì)胞、抗原低表達(dá)細(xì)胞各20個(gè)，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，用無(wú)血清成球培養(yǎng)基培養(yǎng)，14天后對(duì)成球數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)并統(tǒng)計(jì)。結(jié)果如圖7所示，相較于未分選細(xì)胞及4P-120抗原低表達(dá)細(xì)胞，4P-120抗原高表達(dá)細(xì)胞有更高的成球能力。
[0050]分別取未分選的PLC細(xì)胞、從PLC細(xì)胞系中分選出的鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogpos單克隆抗體4P-120的抗原高表達(dá)細(xì)胞、抗原低表達(dá)細(xì)胞各IO5個(gè)，接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，用含2% FBS的低血清培養(yǎng)液培養(yǎng)，待鋪滿孔板后進(jìn)行劃痕并拍照，24小時(shí)后再次拍照，統(tǒng)計(jì)劃痕的平均寬度愈合情況。結(jié)果如圖8所示，相較于未分選細(xì)胞及4P-120抗原低表達(dá)細(xì)胞，4P-120抗原高表達(dá)細(xì)胞有更高的劃痕遷移能力。
[0051]分別取未分選的PLC細(xì)胞、從PLC細(xì)胞系中分選出的鼠抗人肝癌干細(xì)胞PLC-Nanogpos單克隆抗體4P-120的抗原高表達(dá)細(xì)胞、抗原低表達(dá)細(xì)胞各IO5個(gè)，接種于8umtranswell小室中，小室內(nèi)為200ul無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基，下層24孔板中為1300ul含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基，24小時(shí)后對(duì)穿孔細(xì)胞數(shù)進(jìn)行染色，統(tǒng)計(jì)穿孔細(xì)胞數(shù)。結(jié)果如圖9所示，相較于4P-120抗原低表達(dá)細(xì)胞，4P-120抗原高表達(dá)細(xì)胞有更高的侵襲轉(zhuǎn)移能力。
[0052]最后說(shuō)明的是，以上優(yōu)選實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過(guò)上述優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。
【權(quán)利要求】
1.抗肝癌干細(xì)胞單克隆抗體，其特征在于，由保藏編號(hào)為CGMCCN0.8800的小鼠雜交瘤細(xì)胞4P-120分泌產(chǎn)生。
2.如權(quán)利要求1所述的抗肝癌干細(xì)胞單克隆抗體在制備肝癌治療藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07K16/18GK103923214SQ201410167963
【公開(kāi)日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年4月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月24日
【發(fā)明者】錢(qián)程, 洪娟, 趙文旭, 沈俊杰, 單娟娟 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院