一種煙花苷的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種煙花苷的制備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的制備方法包括如下步驟：（1）取含煙花苷的藥材或提取物用含水有機溶劑提取，得提取液；（2）提取液經(jīng)濃縮、過濾，得濾液；（3）濾液經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30%~100%乙醇溶液洗脫，得洗脫液；（4）洗脫液濃縮至適量，用正丁醇萃??；或先用極性小的有機溶劑萃取，再用正丁醇萃取，得正丁醇萃取液；（5）正丁醇萃取液濃縮至適量，用堿水萃取，收集水層部分，調(diào)PH值至3-6，適當(dāng)濃縮，經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30%~100%乙醇溶液洗脫，洗脫液得到的提取物再經(jīng)自制C18柱和/或制備HPLC分離，即得。本發(fā)明制備得到的煙花苷可作為對照品用于腸炎寧制劑的含量測定。
【專利說明】一種煙花苷的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，特別涉及一種煙花苷的制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]收載于2010年版《中華人民共和國藥典》的腸炎寧糖漿和腸炎寧片具有清熱利濕、行氣的功效，用于急、慢性胃腸炎，腹灣，細(xì)菌性痢疾，小兒消化不良等，臨床應(yīng)用廣泛、療效確切。近幾年，國家食品藥品監(jiān)督管理局又新批準(zhǔn)了腸炎寧丸、腸炎寧顆粒、腸炎寧膠囊、腸炎寧咀嚼片等劑型。目前已有報道中，腸炎寧制劑質(zhì)量檢測指標(biāo)成分為東莨菪內(nèi)酯、沒食子酸和雞屎藤苷甲酯，而腸炎寧制劑中含量較高的黃酮類成分沒有明確的檢測指標(biāo)成分。 申請人:采用HPLC法，并以槲皮素、山奈酚和蘆丁等3種常見的黃酮類成分對照品作為對照，對腸炎寧制劑進行了分析，發(fā)現(xiàn)由于藥材是采用水提，所以腸炎寧制劑中槲皮素和山奈酚的含量較低；腸炎寧制劑色譜圖中與蘆丁對照品色譜峰保留時間相同的地方有色譜峰，但分離度較差，而且峰純度檢測顯示該色譜峰中包含了其它成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種煙花苷的制備方法，本發(fā)明制備得到的煙花苷可作為腸炎寧制劑含量測定用的對照品。
[0004]本發(fā)明提供的煙花苷的制備方法，包括如下步驟:
[0005](I)取含煙花苷的藥材或提取物用含水有機溶劑提取，得提取液；
[0006](2)提取液經(jīng)濃縮、過濾，得濾液；
[0007](3)濾液經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30%~100%甲醇或乙醇溶液洗脫，得洗脫液；
[0008](4)洗脫液經(jīng)濃縮，用正丁醇萃取；或先用極性小的有機溶劑萃取，再用正丁醇萃取，得正丁醇萃取液；
[0009](5)正丁醇萃取液經(jīng)濃縮，用堿水萃取，收集水層部分，調(diào)PH值至3-6，濃縮，經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30%~100%甲醇或乙醇溶液洗脫，洗脫液得到的提取物再經(jīng)自制C18柱和/或制備HPLC分離，即得。
[0010]本發(fā)明優(yōu)選的煙花苷的制備方法，包括如下步驟:
[0011](I)取含煙花苷的藥材或提取物用30%~100%甲醇或乙醇溶液提取，得提取液；
[0012](2)提取液經(jīng)濃縮、過濾，得濾液；
[0013](3)濾液經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30%~50%甲醇或乙醇溶液洗脫，得洗脫液；
[0014](4)洗脫液經(jīng)濃縮，先用乙酸乙酯萃取棄去，再用正丁醇萃取，得正丁醇萃取液；
[0015] (5)正丁醇萃取液經(jīng)濃縮，用堿水萃取，收集水層部分，調(diào)PH值至4-5，濃縮，濃縮液經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30%~50%甲醇或乙醇溶液洗脫，洗脫液得到的提取物再經(jīng)自制C18柱和/或制備HPLC，以體積比例為20:80~40:60的甲醇-水混合溶液洗脫，即得。
[0016]本發(fā)明更優(yōu)選的煙花苷的制備方法，包括如下步驟:
[0017](I)取含煙花苷的藥材或提取物，用30%~75%乙醇溶液提取，得提取液；
[0018](2)提取液經(jīng)濃縮、過濾，得濾液；
[0019](3)濾液經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30%乙醇溶液洗脫，得洗脫液；
[0020](4)洗脫液經(jīng)濃縮，先用乙酸乙酯萃取棄去，再用正丁醇萃取，得正丁醇萃取液；
[0021](5)正丁醇萃取液經(jīng)濃縮，用5%碳酸鈉溶液萃取，收集水層部分，調(diào)PH值至4-5，濃縮，經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30 %乙醇溶液洗脫，洗脫液得到的提取物再經(jīng)自制C18柱和/或制備HPLC，以體積比例為20:80~40:60甲醇-水混合溶液洗脫，即得。
[0022]本發(fā)明提供的煙花苷可作為腸炎寧制劑含量測定用的對照品。
[0023]本發(fā)明所述的腸炎寧制劑為腸炎寧口服液、腸炎寧糖漿、腸炎寧膠囊、腸炎寧顆粒、腸炎寧片、腸炎寧咀嚼片或腸炎寧丸中的任意一種。
[0024]本發(fā)明創(chuàng)新之處在于:通過HPLC法對腸炎寧制劑進行色譜分析，并利用光譜分析和峰純度檢測技術(shù)篩選出分離度和峰純度都較好的黃酮類成分色譜峰，然后對其進行分離、鑒定，最終分離鑒定得到其中一個黃酮類成分煙花苷。通過對煙花苷含量測定方法學(xué)考察表明，采用HPLC法測定腸炎寧制劑中的煙花苷簡便、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，有助于更好的控制腸炎寧制劑的質(zhì)量 。本發(fā)明制備得到的煙花苷經(jīng)標(biāo)定純度大于98%，可作為腸炎寧制劑含量測定用的對照品。
[0025]下面將通過一些實驗例對本發(fā)明作進一步說明。
[0026]實驗例I腸炎寧制劑黃酮類成分對照品的研究
[0027]1、腸炎寧制劑中待分離目標(biāo)成分的篩選
[0028](I)色譜條件=DikmaC18色譜柱(250mmX4.6mm, 5 μ m);流動相:0.3%冰醋酸水溶液一乙腈(梯度洗脫，Omin比例為85:15,60min比例為65:35);檢測波長為350nm。
[0029](2)供試品溶液的制備:取腸炎寧顆粒粉末約4.0g，加入60%甲醇100ml，超聲(功率250W，頻率33KHz)處理30分鐘，放冷，過濾，濾液濃縮至約30ml，過濾，經(jīng)聚酰胺柱吸附，依次用水和60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，濃縮至適量，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0030](3)檢測及結(jié)果:取供試品溶液20μ 1，按(I)項下色譜條件進樣分析，經(jīng)過對峰高較高且分離度較好的色譜峰進行光譜分析和峰純度檢測，確定出峰時間為18分鐘左右的黃酮類成分為待分離成分。
[0031]2、提取分離
[0032]取生產(chǎn)上用于生產(chǎn)腸炎寧顆粒的稠膏1kg，加30 %乙醇10L，超聲，靜置，過濾，濾液濃縮至5L，過濾，經(jīng)聚酰胺柱吸附，依次用水、30%乙醇和60%乙醇洗脫，經(jīng)HPLC分析，待分離成分主要存在于30%乙醇洗脫部分，30 %乙醇洗脫部分回收乙醇并減壓濃縮至1L，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，經(jīng)HPLC分析，待分離成分主要存在于正丁醇萃取液中，正丁醇萃取液濃縮至500ml，用5%碳酸鈉溶液3000ml分3次萃取，經(jīng)HPLC分析，待分離成分主要存在于水層部分，水層部分用酸調(diào)PH值至4~5，濃縮至2500ml，經(jīng)聚酰胺柱吸附，依次用水和30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫部分，濃縮至乙醇含量少于10%，經(jīng)自制YMGC18H3柱吸附，依次用10%甲醇、30%甲醇和50%甲醇洗脫，經(jīng)HPLC分析，待分離成分主要存在于30%甲醇洗脫部分，30%甲醇洗脫部分減壓濃縮后，用少量35%甲醇溶解，再經(jīng)制備HPLC，甲醇-水(35:65)洗脫，得目標(biāo)成分。
[0033]3、結(jié)構(gòu)鑒定
[0034]目標(biāo)成分:黃色針狀結(jié)晶，鹽酸鎂粉反應(yīng)及Molish反應(yīng)均呈陽性。UV(MeOH)nm:329，268。1H-Nmr(Dmso-CI6JoomHz) δ:7.97 (2Η, d, J = 8.7Ηζ, Η-2 '，6 ' ) ,6.87 (2Η,d, J = 8.7Ηζ, Η-3 ' ,5 ' )，6.40 (1Η, brs, Η_8)，6.19 (1Η, brs, Η_6)，5.30 (1Η, d, J =7.4Ηζ, H — I " )，5.24(1Η, brs, H-1 " ' )。13C—NMR(100MHzDMS0_d6) δ:177.9(C_4)，164.2 (C-7), 161.3 (C-5), 159.9 (C-4 ; ), 156.9 (C-2,9), 133.3 (C-3) ,131.0 (C-2 ;，6')，120.9 (C-1 ' )，115.2 (C-3 '，5 ' ), 104.0(C-1O), 101.4 (C-1 " )，100.8(C_1 "'
98.8 (C-6), 93.8 (C-8), 76.4 (C-5 " ),75.8 (C-3 " ), 74.2 (C-2 " ) ,71.4 (C-4 "'
70.6 (C-3 " ' ) ,70.4 (C-2 " ' ),70.0 (C-4 " ) ,68.3 (C-5 " ' ) ,66.9 (C-6 ")，17.8(C-6"')。根據(jù)以上數(shù)據(jù)確定目標(biāo)成分為煙花苷。
[0035]經(jīng)過標(biāo)定，制得的煙花苷的純度大于98%，可作為含量測定用的對照品。[0036]實驗例2腸炎寧顆粒中煙花苷含量測定研究
[0037]1、儀器與試藥
[0038]安捷倫1200液相色譜儀(美國安捷倫公司)。煙花苷對照品(自制，純度大于98% );腸炎寧顆粒(江西天施康中藥股份有限公司，批號:20140301、20140302、20140303);乙腈為色譜純；水為超純水，其它試劑均為分析純。
[0039]2、色譜條件
[0040]DikmaC18色譜柱(250mm X 4.6mm, 5 μ m);流動相:0.3 %冰醋酸水溶液一乙腈(80:20);流速:1.0ml/min ;檢測波長:350nm ;柱溫:25°C ;理論板數(shù)按煙花苷計不低于3000。
[0041]3、對照品溶液的制備取煙花苷對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成每1ml含
0.01mg的溶液，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0042]4、供試品溶液的制備取腸炎寧顆粒，研細(xì)，取約4.0g，精密稱定，加入60%甲醇100ml，超聲(功率250W，頻率33KHz)處理30分鐘，放冷，過濾，濾液濃縮至適量，放冷，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加60%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0043]5、系統(tǒng)適應(yīng)性試驗
[0044]煙花苷在波長260nm和350nm附近均有較強的紫外吸收，本方法選擇350nm作為檢測波長。按2項下色譜條件測定，比較煙花苷對照品溶液、供試品溶液的色譜圖，結(jié)果煙花苷色譜峰無拖尾，分離度良好。
[0045]6、線性關(guān)系考察
[0046]精密稱取煙花苷對照品10.23mg,置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，取上述母液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液，按2項下色譜條件，分別注入高效液相色譜儀I μ 1，3 μ 1，5 μ 1，10 μ 1，20 μ 1，測定峰面積。以進樣量(Ug)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進行回歸分析，結(jié)果見表1。
[0047]表1煙花苷線性關(guān)系考察結(jié)果
[0048]
【權(quán)利要求】
1.一種煙花苷的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟: (1)取含煙花苷的藥材或提取物用含水有機溶劑提取，得提取液； (2)提取液經(jīng)濃縮、過濾，得濾液； (3)濾液經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，309^100%甲醇或乙醇溶液洗脫，得洗脫液； (4)洗脫液經(jīng)濃縮，用正丁醇萃?。换蛳扔脴O性小的有機溶劑萃取，再用正丁醇萃取，得正丁醇萃取液； (5)正丁醇萃取液經(jīng)濃縮，用堿水萃取，收集水層部分，調(diào)PH值至3-6，濃縮，經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，309^100%甲醇或乙醇溶液洗脫，洗脫液得到的提取物再經(jīng)自制C18柱和/或制備HPLC分離，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的一種煙花苷的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟: (1)取含煙花苷的藥材或提取物用309^100%甲醇或乙醇溶液提取，得提取液； (2)提取液經(jīng)濃縮、過濾，得濾液； (3)濾液經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30%~50%甲醇或乙醇溶液洗脫，得洗脫液； (4)洗脫液經(jīng)濃縮，先用乙酸乙酯萃取棄去，再用正丁醇萃取，得正丁醇萃取液； (5)正丁醇萃取液經(jīng)濃縮，用堿水萃取，收集水層部分，調(diào)PH值至4-5，濃縮，濃縮液經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30%~50%甲醇或乙醇溶液洗脫，洗脫液得到的提取物再經(jīng)自制C18柱和/或制備HPLC，以體積比例為20:80-40:60的甲醇-水混合溶液洗脫，即得。
3.如權(quán)利要求1所述的一種煙花苷的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟: (1)取含煙花苷的藥材或提取物，用30%~75%乙醇溶液提取，得提取液； (2)提取液經(jīng)濃縮、過濾，得濾液； (3)濾液經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30%乙醇溶液洗脫，得洗脫液； (4)洗脫液經(jīng)濃縮，先用乙酸乙酯萃取棄去，再用正丁醇萃取，得正丁醇萃取液； (5)正丁醇萃取液經(jīng)濃縮，用5%碳酸鈉溶液萃取，收集水層部分，調(diào)PH值至4-5，濃縮，經(jīng)聚酰胺柱吸附，水洗棄去，30%乙醇溶液洗脫，洗脫液得到的提取物再經(jīng)自制C18柱和/或制備HPLC，以體積比例為20:80-40:60甲醇-水混合溶液洗脫，即得。
4.煙花苷作為腸炎寧制劑含量測定用對照品的應(yīng)用，所述的腸炎寧制劑為腸炎寧口服液、腸炎寧糖衆(zhòng)、腸炎寧膠囊、腸炎寧顆粒、腸炎寧片、腸炎寧咀嚼片或腸炎寧丸中的一種。
【文檔編號】C07H1/08GK103923138SQ201410191984
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年5月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月8日
【發(fā)明者】吳孔松, 吳朝陽, 吳安明 申請人:江西天施康中藥股份有限公司