關(guān)于Npas2蛋白激動劑多肽及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明關(guān)于Npas2蛋白激動劑多肽及其應(yīng)用，涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有促進Npas2蛋白表達，治療治療乳腺癌的多肽。其序列為MFQTIKDQLEGQR是全新的序列，該多肽提高在體內(nèi)荷瘤小鼠生存率；抑制人乳腺癌細胞系MDA-MB-435S和MCF-7的增殖；具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【專利說明】關(guān)于Npas2蛋白激動劑多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及Npas2蛋白激動劑多肽3及其應(yīng)用，具體涉及具有促進Npas2蛋白表達，治療乳腺癌的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002]晝夜節(jié)律是生物體的生理功能、生化指標(biāo)和生理行為等多種生命現(xiàn)象以24小時為周期呈節(jié)律性振蕩的一種生物節(jié)律。生物鐘系統(tǒng)涉及人體系統(tǒng)的生理、生化和行為的各個方面，在整體水平、細胞水平影響周圍器官、組織和細胞，控制和調(diào)節(jié)代謝、睡眠和覺醒、內(nèi)分泌、免疫以及細胞周期等，使生命活動協(xié)調(diào)一致；在分子水平上，調(diào)控與細胞周期、細胞增殖和凋亡、DNA損傷修復(fù)應(yīng)答有關(guān)的一系列細胞因子，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和治療等關(guān)系密切。因此晝夜節(jié)律紊亂可引起生物鐘基因及其相關(guān)蛋白產(chǎn)物的異常表達，從而促使腫瘤發(fā)生，加速腫瘤進展。
[0003]乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，其死亡率的上升速度在女性惡性腫瘤位居第一。流行病學(xué)的研究表明，晝夜節(jié)律的破壞與乳腺癌的發(fā)生密切相關(guān)。Npas2在乳腺癌中表達明顯下調(diào)，與乳腺癌的發(fā)生、病理和臨床分期關(guān)系密切。Npas2基因是在哺乳動物中最大生物鐘基因，是Clock的同源基因，可以通過調(diào)控和干擾癌基因、抑癌基因、與細胞周期、細胞增殖和凋亡相關(guān)基因，在細胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)應(yīng)答和腫瘤生長抑制的過程等多方面可能參與了乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展。研究表明，Npas2蛋白低表達與腫瘤瘤體大小、浸潤深度有關(guān)，Npas2蛋白高表達對乳腺癌發(fā)展具有保護性作用。在乳腺癌癌前病變中Npas2表達增強，可以阻止癌前病變惡變。Npas2蛋白功能降低是乳腺癌發(fā)生的一個重要因素。因此，促進Npas2蛋白表達，抑制乳 腺癌發(fā)展，是治療乳腺癌的新靶點。但是，尚未有開發(fā)成熟的Npas2蛋白激動劑多肽的治療乳腺癌的藥物
本專利中的Npas2蛋白激動劑多肽已證明在乳腺癌中有效，具有在其他腫瘤模型中開發(fā)的前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列Npas2蛋白激動劑多肽，對乳腺癌具有很好的療效。
[0005]技術(shù)方案
Npas2蛋白激動劑多肽，其特征在于其序列為MFQTIKDQLEGQR。
[0006]Npas2蛋白激動劑多妝在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。
[0007]有益效果
利用固相合成法化學(xué)合成Npas2蛋白激動劑多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可體內(nèi)促進Npas2蛋白表達，治療乳腺癌。提高在體內(nèi)荷瘤小鼠生存率；抑制人乳腺癌細胞系MDA-MB-435S和MCF-7的增殖；具有潛在的新藥開發(fā)價值?！揪唧w實施方式】
[0008]本發(fā)明涉及多肽由吉爾生化(上海)合成。
[0009]實施例1
Npas2蛋白激動劑多肽對人乳腺癌細胞MDA-MB-435S增殖的作用。
[0010]采用MTT比色法。將對數(shù)生長的MDA-MB-435S細胞，以1.0X 105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物Npas2蛋白激動劑多肽3和陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個復(fù)孔，培養(yǎng)48h，分別在011、211、811、1411、2011、2411、3611、4811 每孔加入 MTT，作用 4h 后，加入 DMS0，孵育 30min，在酶標(biāo)儀620nm處測定吸光度A值，按公式腫瘤細胞生長抑制率=(1_實驗組吸光值/對照組吸光值)X 100%。計算出實驗藥物的IC50為6.45μΜ。當(dāng)濃度為6.45 μ M時，對MCF-7增殖抑制率為78.3%。
[0011]實施例2
Npas2蛋白激動劑多肽對人乳腺癌細胞MCF-7增殖的作用。
[0012]采用MTT比色法。將對數(shù)生長的MCF-7細胞，以1.0X 105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物Npas2蛋白激動劑多肽3和陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個復(fù)孔，培養(yǎng)48h，分別在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、48h 每孔加入 MTT，作用 4h 后，加入 DMS0，孵育 30min，在酶標(biāo)儀620nm處測定吸光度A值，按公式腫瘤細胞生長抑制率=(1_實驗組吸光值/對照組吸光值)X 100%。計算出實驗藥物的IC50為9.13μΜ。當(dāng)濃度為9.13 μ M時，對MCF-7增殖抑制率為86.4%。
[0013]實施例3
Npas2蛋白激動劑多肽對人乳腺癌細胞MDA-MB-435S裸鼠異種移植腫瘤生長的抑制試驗取對數(shù)生長期的人乳腺癌細胞MDA-MB-435S細胞株，在無菌條件下制備成5 X 107/ml細胞懸液，以0.1ml接種于裸鼠右側(cè)腋窩皮下。用游標(biāo)卡尺測量裸鼠移植瘤直徑，待腫瘤生長至100-200mm3后將動物隨機分組。使用測量瘤徑的方法，動態(tài)觀察被試多肽的抗腫瘤效果。腫瘤直徑的測量次數(shù)為每2天測I次。給藥方式均采用尾靜脈注射。陰性對照組注射等量生理鹽水，每天I次；紫杉醇組10mg/kg,每周給藥I次；恩度組2.5mg/kg,每天給藥I次；多肽高中低組分別以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg,每天給藥I次。試驗結(jié)束后，小鼠處死，手術(shù)剝?nèi)×鰤K稱重。
[0014]表1多肽對人乳腺癌細胞MDA-MB-435S裸鼠異種移植腫瘤生長的抑制作用
【權(quán)利要求】
1.Npas2蛋白激動劑多肽，其特征在于其序列為MFQTIKDQLEGQR。
2.一種藥物組合物，其特征在于其包含如權(quán)利要求1所述多肽與一種以上藥學(xué)上可接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、或穩(wěn)定劑。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物為注射劑。
4.如權(quán)利要求1所述的Npas2蛋白激動劑多肽，其特征在于有效劑量為10mg/kg。
5.如權(quán)利要求1所 述的Npas2蛋白激動劑多肽在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07K7/08GK104017052SQ201410288147
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年6月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月25日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請人:蘇州普羅達生物科技有限公司