血液制品中fii沉淀的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了血液制品中FII沉淀的制備方法，它是以血漿為原料，利用低溫乙醇法依次制備得到FI+II+III沉淀、FI+III上清，再取FI+III上清經(jīng)過低溫乙醇法分離FII，壓濾，取沉淀即得；與現(xiàn)有技術(shù)不同的是，本發(fā)明分離FII后的壓濾過程中，使用PALL50濾板，采用硅藻土為助濾劑，預(yù)涂層所用硅藻土為80-95g/m2濾板，待濾液中硅藻土的用量為0.2～0.3g/L血漿。所述硅藻土中，SiO2含量為96.0～98.7％，Al2O3含量為0.6～1.2％、Fe2O3含量為0.3～0.4％，酸溶物質(zhì)含量為0.05～0.12％，水溶物質(zhì)含量為0.15～0.20％。本發(fā)明研究表明，采用本發(fā)明方法制備的FII沉淀，其中球蛋白純度大幅提高，為提高產(chǎn)品質(zhì)量提供了保障；同時，采用本發(fā)明方法制備的球蛋白，可以提高球蛋白收率，明顯增加商品利潤，為企業(yè)帶來的商業(yè)價值不可估量。
【專利說明】血液制品中Fl I >/U疋的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及血液制品中FII沉淀的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]球蛋白用于治療原發(fā)性免疫球蛋白G缺乏癥，如X聯(lián)鎖低免疫球蛋白G血癥，常見變異性免疫缺陷病，免疫球蛋白G亞類缺陷病等；治療繼發(fā)性免疫球蛋白G缺陷病，如重癥感染，新生兒敗血癥，嬰幼兒毛細支氣管炎等；治療自身免疫性疾病，如原發(fā)性血小板減少性紫癜，川崎病等，是重要的臨床藥物。目前，國內(nèi)人血液制品的規(guī)模化生產(chǎn)主要使用低溫乙醇法從健康人血漿中分離純化球蛋白，例如《醫(yī)學生物制品學》(第二版，人民衛(wèi)生出版社)、《血液制品學》(第二版，人民衛(wèi)生出版社)、CN201110030778.3、CN201110223760.5、CN201210013227.0、CN201110030776.4等。通常使用的分離流程見圖1，其中，組分I (又稱FI)主要含有纖維蛋白原，組分1+111(又稱FI+III)主要含有丙球、凝血酶原和纖溶酶原，組分11(又稱FII)主要含有球蛋白，組分V(又稱FV)主要含有白蛋白。低溫乙醇法過程相對簡單，產(chǎn)量較高，可以進行大規(guī)模的生產(chǎn)，在世界范圍內(nèi)得到了廣泛的應(yīng)用。
[0003]使用壓濾技術(shù)進行固液相分離是目前多數(shù)國內(nèi)外血液制品廠家用于低溫乙醇分離工藝組分分離的方法。壓濾通常會使用助濾劑，其粒間隙也構(gòu)成復(fù)雜的迷宮結(jié)構(gòu)，當制品溶液沖擊濾板時，主要通過靜電吸附和機械阻擋的方式來捕捉固體成分，由助濾劑形成的濾餅層和深層濾板成為捕捉固體沉淀顆粒的重要場所。濾板應(yīng)有適當?shù)目讖剑员隳茉诮亓糁鸀V劑顆粒以形成結(jié)實的濾餅層的同時給制品溶液的流動帶來最小的阻力。
[0004]壓濾工藝的主要控制參數(shù)包括濾板(過濾介質(zhì))類型、助濾劑類型和用量的選擇等條件。
[0005]其中，助濾劑種類繁多，其主要功能是吸附沉淀顆粒、幫助過濾，還可提升最終產(chǎn)品的安全性和質(zhì)量。助濾劑的選擇通常可以考慮濾過液的濁度要求、生產(chǎn)能力、產(chǎn)品的回收率、產(chǎn)品的穩(wěn)定性和純度等方面的要求，以及去除產(chǎn)品溶液中特別成份的需要。目前血液制品生產(chǎn)常用的助濾劑有硅藻土和珍珠巖等。硅藻土是古代單細胞硅藻遺骸沉積物，具有質(zhì)輕、多孔、高強、耐磨、絕緣、絕熱、吸附及填充等一列優(yōu)良性能，具有良好的化學穩(wěn)定性。硅藻土助濾劑的主要優(yōu)點是:具有良好的微孔結(jié)構(gòu)、吸附性能和抗壓縮性能，不僅能使被濾液體獲得較好的流速比，并且能濾除微細的懸浮物，保證了澄清度。
[0006]血液制品中添加助濾劑的主要目的是提高過濾性能、提高濾液澄清度、降低濾液濁度、吸附熱原質(zhì)、脂類、蛋白酶和變性蛋白，從而保證制品質(zhì)量。助濾劑通過以下方式達到助濾和吸附的作用:
[0007]I)機械截留作用:助濾劑形成的濾餅產(chǎn)生眾多的孔隙以及形成孔隙與孔隙之間的間隔層，液體流經(jīng)濾餅時能夠截留其中的懸浮粒子，包括:
[0008]A.表面過濾作用:固液相分離發(fā)生在過濾介質(zhì)的表面，當液體中懸浮固體顆粒的粒徑大于硅藻土/珍珠巖的孔徑時被截留在助濾劑表面。
[0009]B.深層過濾效應(yīng):固液相分離發(fā)生在過濾介質(zhì)的內(nèi)部:當液體中懸浮固體顆粒的粒徑小于硅藻土 /珍珠巖的孔徑時，比較小的固體顆粒穿過濾餅表面進入介質(zhì)內(nèi)部，介質(zhì)內(nèi)部曲折的微孔溝道和更細小的孔隙能夠截留這些顆粒。
[0010]2)吸附作用:產(chǎn)生吸附作用的主要原因包括范德華力、Zeta電位和離子交換作用，包括:
[0011]A.液體中的懸浮粒子形成的鏈團粘附于硅藻土 /珍珠巖而被截留；
[0012]B.比硅藻土 /珍珠巖內(nèi)部孔徑小的懸浮粒子進入到硅藻土 /珍珠巖內(nèi)部表面因相反電荷吸附而被截留。
[0013]雖然硅藻土是血液制品中常用的助濾劑之一，然而，硅藻土品種繁多，由于不同硅藻土的原料、加工方式等差異，使得不同硅藻土產(chǎn)品在成分含量和性能上產(chǎn)生了較大區(qū)別。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0014]本發(fā)明的目的在于提供一種血液制品中FI+III上清的制備方法。
[0015]具體地，本發(fā)明提供了血液制品中FII沉淀的制備方法，它是以血漿為原料，利用低溫乙醇法依次制備得到FI+II+III沉淀、FI+III上清，再取FI+III上清經(jīng)過低溫乙醇法分離FII，壓濾，取沉淀即得；與現(xiàn)有技術(shù)不同的是，本發(fā)明分離FII后的壓濾過程中，使用PALL50濾板,濾板的用量為5~1mVlOOOL ;采用硅藻土為助濾劑,預(yù)涂層所用硅藻土為80-95g/m2濾板,待濾液中娃藻土的用量為0.2~0.3g/L血衆(zhòng)；所述娃藻土中，S12含量為96.0~98.7 %，Al2O3含量為0.6~1.2 %、Fe2O3含量為0.3~0.4%，酸溶物質(zhì)含量為0.05~0.12%，水溶物質(zhì)含量為0.15~0.20%。
[0016]所述待濾液為待壓濾的樣品，即FI+III上清分離FII后的待壓濾樣品。
[0017]進一步地，所述硅藻土中，S12含量為96.0~96.2% ,Al2O3含量為1.0~1.2%、Fe2O3含量為0.3~0.4 %，酸溶物質(zhì)含量為0.05~0.12 %，水溶物質(zhì)含量為0.15~
0.20%。
[0018]進一步地，所述硅藻土的比表面積為2.2~2.3m2/g，優(yōu)選為2.228m2/g。
[0019]進一步地,所述娃藻土的離心濕密度為0.23~0.24g/cm2,優(yōu)選為0.237g/cm2。
[0020]優(yōu)選地，所述硅藻土型號為CELPURE1000。
[0021]為了進一步提高終產(chǎn)品的質(zhì)量，本發(fā)明采用如下FI+III上清制備方法:
[0022](1)FI+II+III沉淀的制備:以血漿為原料，經(jīng)過低溫乙醇法分離提取FI+II+III，壓濾，取沉淀即得；所述壓濾過程中，采用PALL50P濾板，硅藻土為助濾劑，濾板用量為10~13m2/1000L血衆(zhòng),娃藻土用量為4.5~5.5g血衆(zhòng)蛋白/Ig娃藻土 ；所述娃藻土中，S12含量為96.0~98.7 %，Al2O3含量為0.6~1.2 %、Fe2O3含量為0.3~0.4%，酸溶物質(zhì)含量為0.05~0.12%，水溶物質(zhì)含量為0.15~0.20% ;
[0023](2)FI+III上清的制備:取FI+II+III沉淀，經(jīng)過低溫乙醇法分離提取FI+III，壓濾，取上清即得；所述壓濾過程中，采用BECO Steril PR40濾板，硅藻土為助濾劑，濾板用量為10~13m2/1000L血漿，硅藻土用量為8~9g/L血漿；所述硅藻土中，S12含量為96.0~98.7%, Al2O3含量為0.6~1.2 %、Fe2O3含量為0.3~0.4 %，酸溶物質(zhì)含量為0.05~
0.12%，水溶物質(zhì)含量為0.15~0.20%。
[0024]步驟⑵中限定濾板和硅藻土用量時，所述的“血漿”即為步驟⑴中的起始原料。
[0025]其中，本發(fā)明制備方法中，各個步驟中的壓濾流速和濾板壓力為:

【權(quán)利要求】
1.血液制品中FII沉淀的制備方法，它是以血漿為原料，利用低溫乙醇法依次制備得到FI+II+III沉淀、FI+III上清，再取FI+III上清經(jīng)過低溫乙醇法分離FII，壓濾，取沉淀即得，其特征在于:分離FII后的壓濾過程中，使用PALL50濾板，濾板的用量為5~1mVlOOOL ;采用硅藻土為助濾劑，預(yù)涂層所用硅藻土為80-95g/m2濾板，待濾液中硅藻土的用量為0.2~0.3g/L血漿；所述硅藻土中，S12含量為96.0~98.7%，Al2O3含量為0.6~1.2%,Fe2O3含量為0.3~0.4%，酸溶物質(zhì)含量為0.05~0.12%，水溶物質(zhì)含量為0.15 ~0.20%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述硅藻土中，S12含量為96.0~96.2%, Al2O3含量為1.0~1.2 %、Fe2O3含量為0.3~0.4%，酸溶物質(zhì)含量為0.05~0.12%，水溶物質(zhì)含量為0.15~0.20%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于:所述硅藻土的比表面積為2.2~2.3m2/g，優(yōu)選為 2.228m2/g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于:所述硅藻土的離心濕密度為0.23 ~0.24g/cm2，優(yōu)選為 0.237g/cm2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1~4任意一項所述的制備方法,其特征在于:所述娃藻土型號為CELPURE1000。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~5任意一項所述的制備方法，其特征在于:所述壓濾過程中，使用PALL50濾板；優(yōu)選地，所述濾板的用量為5~1mVlOOOL血漿。
7.根據(jù)權(quán)利要求1~6任意一項所述的制備方法，其特征在于:所述FI+III上清采用如下方法制備: (1)FI+II+III沉淀的制備:以血漿為原料，經(jīng)過低溫乙醇法分離提取FI+II+III，壓濾，取沉淀即得；所述壓濾過程中，采用PALL50P濾板，硅藻土為助濾劑與待濾液混勻，濾板用量為10~13m2/1000L血衆(zhòng),娃藻土用量為4.5~5.5g血衆(zhòng)蛋白/Ig娃藻土 ；所述娃藻土中，S12 含量為 96.0 ~98.7%, Al2O3 含量為 0.6 ~1.2%, Fe2O3 含量為 0.3 ~0.4%,酸溶物質(zhì)含量為0.05~0.12%，水溶物質(zhì)含量為0.15~0.20% ; (2)FI+III上清的制備:取FI+II+III沉淀，經(jīng)過低溫乙醇法分離提取FI+III，壓濾，取上清即得；所述壓濾過程中，采用BECO Steril PR40濾板，硅藻土為助濾劑與待濾液混勻，濾板用量為10~13m2/1000L血衆(zhòng),娃藻土用量為8~9g/L血衆(zhòng)；所述娃藻土中，S12含量為96.0~98.7 %，Al2O3含量為0.6~1.2 %、Fe2O3含量為0.3~0.4%，酸溶物質(zhì)含量為0.05~0.12%，水溶物質(zhì)含量為0.15~0.20%。
8.權(quán)利要求1~7任意一項所述方法制備的FII沉淀。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的FII沉淀，其特征在于:所述FII沉淀中球蛋白含量在99%以上，優(yōu)選為99.0~100%。
10.球蛋白的制備方法，其特征在于:它是以權(quán)利要求8所述的FII沉淀為原料，精制后，即得球蛋白。
【文檔編號】C07K1/34GK104072601SQ201410315319
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年7月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月3日
【發(fā)明者】楊宇, 楊匯川, 余鼎, 呂家成, 蘭學淵 申請人:成都蓉生藥業(yè)有限責任公司