一種藻藍(lán)蛋白的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種藻藍(lán)蛋白的提取方法，屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。為了解決現(xiàn)有的破壁周期長和對環(huán)境污染大的問題，提供一種藻藍(lán)蛋白的提取方法，該方法包括將含有藻藍(lán)蛋白的鮮藻或經(jīng)過預(yù)浸泡的藻粉加入-50℃～-10℃的冰粉中，將攪拌速度控制在1000r/min～3000r/min的條件下進(jìn)行破壁處理，得到含有藻藍(lán)蛋白的破壁液；再將得到的含有藻藍(lán)蛋白的破壁液進(jìn)行分離、純化和干燥，得到成品藻藍(lán)蛋白。本發(fā)明的方法具有破壁周期短和長環(huán)境友好的優(yōu)點，且得到的產(chǎn)品純度高。
【專利說明】一種藻藍(lán)蛋白的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藻藍(lán)蛋白的提取方法，屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 藻藍(lán)蛋白是從含藻膽體的藻類細(xì)胞中提取，是藍(lán)藻中僅有的捕光色素蛋白，是非 常少見的天然藍(lán)色色素和營養(yǎng)素，具有獨特的藥用功效和熒光性質(zhì)。其中以螺旋藻為代表 的藍(lán)藻中具有豐富的藻藍(lán)蛋白，并具有安全性和高消化吸收率，經(jīng)中國衛(wèi)生部和美國食品 藥品管理局認(rèn)證螺旋藻完全無毒副作用，是安全的植物藥品及保健品。
[0003] 然而，現(xiàn)有的細(xì)胞破碎法有自然溶脹法、反復(fù)凍融法、超聲波法和酶解法。自然溶 脹法一般需要10到20天，且破壁效率不高，容易導(dǎo)致微生物大量繁殖腐敗，生產(chǎn)過程難以 控制。反復(fù)凍融法一般需要三次以上才能達(dá)到有效破壁，且每次凍融需要3到5天，整個 破壁流程需要9到15天以上，且能耗巨大。超聲波法需要在低濃度的藻細(xì)胞溶液中有效， 高濃度的藻液中超聲難以傳播，低濃度的藻溶液給后續(xù)的干燥帶來困難，而且超聲波容易 導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性失活，產(chǎn)品收率低。酶解法使用的破壁酶價格昂貴，且市場不能持續(xù)穩(wěn)定供 應(yīng)，對體系的溫度和PH值要求嚴(yán)格。原有公布的純化方法有硫酸銨沉淀法，雙水相法，色譜 柱層析法等。硫酸銨沉淀和雙水相法，使用大量的化工原料硫酸鹽和聚乙二醇類，給環(huán)境造 成污染。而且產(chǎn)品中硫酸銨的殘留難以全部清除。色譜層析法，需要消耗大量昂貴的填料 耗材，且設(shè)備難以放大，層析速度慢。如中國專利申請（CN103304068A)公開了一種藻藍(lán)蛋 白的制備方法，以鮮藻或螺旋藻粉為原料，加入去離子水，混勻，然后置于_20°C?-10°C冰 凍，凍結(jié)后，取出置35°C融溶，凍融3?4次，用120目紗布過濾，離心分離，得上清液，純度 為1. 0左右，再進(jìn)行雙水相萃取、超濾分離純化，冷凍干燥，得到藻藍(lán)蛋白。其采用反復(fù)凍融 法存在生產(chǎn)周期長的問題，而采用雙水相法對環(huán)境的污染較大。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明針對以上現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，提供一種藻藍(lán)蛋白的提取方法，具有提 取效率和破壁率高且對環(huán)境污染少的效果。
[0005] 本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案得以實現(xiàn)的，一種藻藍(lán)蛋白的提取方法，該方 法包括以下步驟：
[0006] A、破壁：將含有藻藍(lán)蛋白的鮮藻或經(jīng)過預(yù)浸泡的藻粉加入-50°c?-10°c的冰粉 中，將攪拌速度控制在l〇〇〇r/min?3000r/min的條件下進(jìn)行破壁處理，得到含有藻藍(lán)蛋白 的破壁液；
[0007] B、將得到的含有藻藍(lán)蛋白的破壁液進(jìn)行分離、純化和干燥，得到成品藻藍(lán)蛋白。
[0008] 上述藻藍(lán)蛋白的提取方法中，所述的分離可以采用本領(lǐng)域常規(guī)的方法，如采用沉 淀法分離或離心分離方法等。作為優(yōu)選，步驟B中所述分離具體為：
[0009] 將采用醫(yī)用脫脂棉制成的棉柱插入上述步驟A中得到的含有藻藍(lán)蛋白的破壁液 中使藻藍(lán)蛋白吸附在棉柱上，分離棉柱上的藍(lán)色部分，采用擠壓和水進(jìn)行沖洗，得到含藻藍(lán) 蛋白的水溶液。采用本發(fā)明的分離方法不僅能夠提高產(chǎn)品的純度，且對環(huán)境友好，無需采用 硫酸銨等化學(xué)試劑。當(dāng)然，采用本發(fā)明的分離方法，而采用本領(lǐng)域常規(guī)的破壁方法如反復(fù)凍 融法、超聲波破壁法，同樣能夠?qū)崿F(xiàn)提高產(chǎn)品純度的效果。
[0010] 上述藻藍(lán)蛋白的提取方法中，作為優(yōu)選，步驟B中所述純化和干燥具體為：
[0011] 將得到的含藻藍(lán)蛋白的水溶液采用超濾膜進(jìn)行過濾和濃縮，得到含藻藍(lán)蛋白的濃 縮液；再將含藻藍(lán)蛋白的濃縮液進(jìn)行干燥，得到成品藻藍(lán)蛋白。
[0012] 本發(fā)明的藻藍(lán)蛋白的提取方法，通過在高速碾磨攪拌條件下，依靠冰粉和含有藻 藍(lán)蛋白的藻細(xì)胞之間產(chǎn)生的摩擦力和剪切力，使達(dá)到細(xì)胞破壁的作用，從而實現(xiàn)使藻藍(lán)蛋 白從細(xì)胞內(nèi)流出的效果，而對于分離、純化和干燥采用本領(lǐng)域常規(guī)的方法即可實現(xiàn)。但為 了更好的實現(xiàn)本發(fā)明，通過將采用醫(yī)用脫脂棉制成的棉柱插入上述含有藻藍(lán)蛋白的破壁液 中，使棉柱高度的大部分在液面以上，而僅使棉柱高度的小部分插入液面以下，使能夠?qū)崿F(xiàn) 更有效的分離。如使棉柱的高度的2/3?3/4保持在液面以上，而棉柱的高度和寬度可以根 據(jù)實際需要進(jìn)行調(diào)整即可，最好使棉柱的高度大于棉柱的寬度。又由于藻藍(lán)蛋白具有高度 親水性，而水能夠不斷的被棉柱吸附到液面以上，隨著水在棉柱上不斷的擴(kuò)散和蒸發(fā)，藻藍(lán) 蛋白也被不斷的提取到棉柱上，并且吸附在棉纖維（脫脂棉）上。當(dāng)棉柱上的脫脂棉充分吸 水后，取走液面以上脫脂棉藍(lán)色的部分，并且可以填充新的脫脂棉，直至破壁液被吸干。而 另一方面，由于破壁液中大量的不溶解的細(xì)胞碎片不能隨水分子擴(kuò)散，被滯留在容器底部， 而葉綠素和胡蘿卜素等色素是脂溶性的，也不能隨水分子擴(kuò)散，被滯留在容器底部，藻多糖 和核糖核酸等細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)由于親水性和水溶解度不如藻藍(lán)蛋白，則在棉纖維上的擴(kuò)散相對 較慢，滯留在棉柱的下部。經(jīng)檢測該提取液的純度能夠達(dá)到A620nm/A280nm>l. 0,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過 食品行業(yè)普遍使用的A620nm/A280nm>0. 7的要求。
[0013] 在上述的藻藍(lán)蛋白的提取方法中，所述含藻藍(lán)蛋白的藻粉可以是螺旋藻、魚腥藻 或水華藍(lán)藻等。作為優(yōu)選，所述含藻藍(lán)蛋白的藻粉選自螺旋藻。由于螺旋藻的形態(tài)是螺旋 狀的結(jié)構(gòu)，在高速攪拌的條件下，凍粉與螺旋藻之間具有更好的摩擦力和剪切力，從而實現(xiàn) 更好的破壁效果，破壁率能夠達(dá)到95%以上。
[0014] 在上述的藻藍(lán)蛋白的提取方法中，作為優(yōu)選，所述步驟A中所述的冰粉采用0. 5? 1. Omol/L的氯化鈉水溶液制成。通過在水中加入氯化鈉再制成相應(yīng)的冰粉，能夠提高冰粉 的硬度，提高冰粉與含有藻藍(lán)蛋白的藻細(xì)胞之間的摩擦和剪切效果。
[0015] 在上述的藻藍(lán)蛋白的提取方法中，步驟A中所述破壁處理過程中最好使體系溫度 保溫在〇°C以下進(jìn)行。通過控制體系的溫度在0°C以下，能夠使加入的冰粉不易于融化，更 有利于達(dá)到破壁效果。當(dāng)然也可以在室溫條件下進(jìn)行，但由于室溫下冰粉容易融化，所以， 在破壁處理過程中如果冰粉融化過多，則可以通過補(bǔ)加冰粉再攪拌來達(dá)到破壁效果。作為 優(yōu)選，步驟A中所述破壁處理過程中體系溫度控制在-10°C以下，更優(yōu)選，所述破壁處理過 程中體系溫度控制在〇°C?-20°C之間。
[0016] 在上述的藻藍(lán)蛋白的提取方法中，作為優(yōu)選，步驟B中所述棉柱的高度的2/3保持 在液面以上。使棉柱的高度的2/3保持在液面以上，能夠更有效的分離出藻藍(lán)蛋白，而使葉 綠素、藻多糖和核糖核酸等細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)等親水性和水溶解度相對弱的雜質(zhì)殘留在底部，進(jìn) 一步的提高藻藍(lán)蛋白的純度。所述棉柱可以采用不銹鋼濾網(wǎng)進(jìn)行固定。
[0017] 在上述的藻藍(lán)蛋白的提取方法中，作為優(yōu)選，所述純化具體為：
[0018] 將得到的含藻藍(lán)蛋白的水溶液先采用分子量為50萬?150萬道爾頓的超濾膜進(jìn) 行過濾，然后，再采用分子量為20萬?40萬道爾頓的超濾膜進(jìn)行過濾和濃縮，得到含藻藍(lán) 蛋白的濃縮液。
[0019] 由于藻藍(lán)蛋白分子間通過氫鍵交聯(lián)結(jié)合，實際上其在水溶液中往往容易形成三聚 體、六聚體等多聚體大分子蛋白，其聚合物分子量可達(dá)到30萬道爾頓以上，因此，通過采用 分子量為50萬?150萬道爾頓的超濾膜過濾，目的是為了充分高效的實現(xiàn)藻藍(lán)蛋白和其他 生物大分子雜質(zhì)以及細(xì)胞碎片的分離，并且獲得較大的藻藍(lán)蛋白回收率，同時，還能夠除 去細(xì)菌等微生物，實現(xiàn)無需采用高溫滅菌的優(yōu)點。而采用分子量為20萬?40萬道爾頓的 超濾膜能夠更多的去除小分子雜質(zhì)、重金屬、無機(jī)鹽等，同時達(dá)到濃縮的效果。
[0020] 在上述的藻藍(lán)蛋白的提取方法中，作為優(yōu)選，步驟A中所述藻粉與冰粉的質(zhì)量比 1 :10 ?20。
[0021] 在上述的藻藍(lán)蛋白的提取方法中，作為優(yōu)選，步驟A中所述的冰粉的溫度 為-30°C?-20°C。
[0022] 在上述的藻藍(lán)蛋白的提取方法中，作為優(yōu)選，步驟A中所述冰粉的平均粒徑為 20?60目。
[0023] 綜上所述，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點：
[0024] 1.本發(fā)明藻藍(lán)蛋白的提取方法，通過在高速攪拌的條件下，使冰粉與藻粉之間形 成摩擦力和剪切力，無需采用反復(fù)冰融法，就能夠?qū)崿F(xiàn)破壁效果，而且周期短，大大的提高 了生產(chǎn)效率。
[0025] 2.本發(fā)明的藻藍(lán)蛋白的提取方法，通過采用棉柱進(jìn)行分離，能夠有效的分離出藻 藍(lán)蛋白，且具有純度高的效果，經(jīng)過該步分離得到的藻藍(lán)蛋白的純度就能夠達(dá)到A620nm/ A280nm>l. 0的效果。省去了傳統(tǒng)的過濾除渣環(huán)節(jié)，實現(xiàn)了無需采用雙水相法萃取，具有對環(huán) 境友好的優(yōu)點，且得到的產(chǎn)品無硫酸鹽和有機(jī)溶劑的殘留。
[0026] 3.本發(fā)明的藻藍(lán)蛋白的提取方法，通過先采用50萬?150萬道爾頓的超濾膜過 濾，實現(xiàn)脫除大分子生物雜質(zhì)和實現(xiàn)除菌的效果。

【具體實施方式】
[0027] 下面通過具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步具體的說明，但是本發(fā)明并 不限于這些實施例。
[0028] 本發(fā)明的藻藍(lán)蛋白的提取方法，通過將含有藻藍(lán)蛋白的鮮藻或經(jīng)過預(yù)浸泡的藻 粉加入-50°C?-10°C的冰粉中，優(yōu)選為-30°C?-20°C，將攪拌速度控制在1000r/min? 3000r/min的條件下并控制體系溫度在0°C以下保溫進(jìn)行破壁處理，破壁處理結(jié)束后，使體 系內(nèi)的冰粉自然融化，得到含有藻藍(lán)蛋白的破壁液，經(jīng)過檢測，藻細(xì)胞的破壁率達(dá)到95 %以 上；再將得到的含有藻藍(lán)蛋白的破壁液進(jìn)行分離、純化和干燥，得到成品藻藍(lán)蛋白。作為優(yōu) 選，所述的冰粉是采用〇. 5?1. Omol/L的氯化鈉水溶液制成；作為優(yōu)選，所述含藻藍(lán)蛋白的 藻粉可以是螺旋藻、魚腥藻或水華藍(lán)。通過在水中加入氯化鈉再制成相應(yīng)的冰粉，能夠提高 冰粉的硬度，提高冰粉與含有藻藍(lán)蛋白的藻細(xì)胞之間的摩擦和剪切效果，更好的實現(xiàn)破壁 效果；所述冰冰粉的平均粒徑最好為20?60目。上述所述的分離、純化和干燥采用本領(lǐng)域 常規(guī)的方法即可，如采用離心法進(jìn)行分離得到上清液，再采用雙水相萃取法、硫酸銨沉淀法 純化和色譜純化法等，再進(jìn)行冷凍干燥后，得到相應(yīng)的成品藻藍(lán)蛋白。
[0029] 作為另一種實施方式，采用本領(lǐng)域常規(guī)的方法（如反復(fù)凍融法）將新鮮的含藻藍(lán) 蛋白的藻泥或藻粉（藻粉最好預(yù)先經(jīng)過浸泡處理）進(jìn)行破壁處理，得到相應(yīng)的含有藻藍(lán)蛋 白的破壁液，然后，將采用醫(yī)用脫脂棉制成的棉柱插入上述含有藻藍(lán)蛋白的破壁液中使藻 藍(lán)蛋白吸附在棉柱上，分離棉柱上的藍(lán)色部分，采用擠壓和水進(jìn)行沖洗，得到含藻藍(lán)蛋白的 水溶液，經(jīng)檢測該含藻藍(lán)蛋白的水溶液的純度能夠達(dá)到A620nm/A280nm>l. 0,將得到的含藻 藍(lán)蛋白的水溶液采用超濾膜進(jìn)行過濾和濃縮，得到含藻藍(lán)蛋白的濃縮液，再將含藻藍(lán)蛋白 的濃縮液進(jìn)行干燥，得到成品藻藍(lán)蛋白。
[0030] 實施例1
[0031] 取新鮮的螺旋藻藻泥，稱重，再按照藻泥與冰粉的重量比為1 :1〇的比例加 入-10°c的冰粉，冰粉的粒徑為40?20目，將上述的螺旋藻藻泥和冰粉一起加入攪拌罐 內(nèi)，將攪拌速度控制在l〇〇〇r/min的條件下并控制體系溫度在0°C以下保溫進(jìn)行破壁處理 80min，破壁處理結(jié)束后，使體系內(nèi)的冰粉自然融化，得到含有藻藍(lán)蛋白的破壁液，經(jīng)過檢 測，藻細(xì)胞的破壁率達(dá)到95%以上；
[0032] 將采用醫(yī)用脫脂棉制成的棉柱插入上述含有藻藍(lán)蛋白的破壁液中使藻藍(lán)蛋白吸 附在棉柱上，所述醫(yī)用脫脂棉可以采用不銹鋼濾網(wǎng)進(jìn)行固定，棉柱的高度可以根據(jù)實際需 要進(jìn)行調(diào)整，同時，使棉柱的高度的2/3保持在液面以上，直到破壁液被棉柱吸干，取出棉 柱的藍(lán)色部分的脫脂棉（吸附藻藍(lán)蛋白的部分），由于藻藍(lán)蛋白為藍(lán)色的物質(zhì)，易于分離， 通過擠壓和采用水進(jìn)行沖洗，直至藍(lán)色的脫脂棉被沖洗至白色為止，分離出棉柱上的藻藍(lán) 蛋白，得到含藻藍(lán)蛋白的水溶液；經(jīng)檢測本步藻藍(lán)蛋白的純度A620nm/A280nm>l. 0 ;
[0033] 將得到的含藻藍(lán)蛋白的水溶液采用超濾膜進(jìn)行過濾和濃縮，得到含藻藍(lán)蛋白的濃 縮液；
[0034] 將含藻藍(lán)蛋白的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，所述冷凍干燥采用常規(guī)的方法即可，得到 成品藻藍(lán)蛋白，經(jīng)檢測，產(chǎn)品純度A620nm/A280nm>2. 0,完全能夠達(dá)到醫(yī)用級別。
[0035] 實施例2
[0036] 取螺旋藻的藻粉，稱重，最好將上述藻粉與水按1 :3的重量比預(yù)浸泡處理。再按照 藻粉與冰粉的重量比為1 :20的比例加入_50°C的冰粉，冰粉的粒徑為40?20目，將上述 預(yù)浸泡好的螺旋藻的藻粉和冰粉一起加入攪拌罐內(nèi)，將攪拌速度控制在3000r/min的條件 下并控制體系溫度在-l〇°C以下保溫進(jìn)行破壁處理70分鐘，破壁處理結(jié)束后，使體系內(nèi)的 冰粉自然融化，得到含有藻藍(lán)蛋白的破壁液，經(jīng)過檢測，藻細(xì)胞的破壁率達(dá)到95%以上；
[0037] 將采用醫(yī)用脫脂棉制成的棉柱插入上述含有藻藍(lán)蛋白的破壁液中使藻藍(lán)蛋白吸 附在棉柱上，所述醫(yī)用脫脂棉可以采用不銹鋼濾網(wǎng)進(jìn)行固定，棉柱的高度可以根據(jù)實際需 要進(jìn)行調(diào)整，同時，使棉柱的高度的2/3保持在液面以上，直到破壁液被棉柱吸干，取出棉 柱的藍(lán)色部分的脫脂棉（吸附藻藍(lán)蛋白的部分），由于藻藍(lán)蛋白為藍(lán)色的物質(zhì)，易于分離， 通過擠壓和采用水進(jìn)行沖洗，直至藍(lán)色的脫脂棉被沖洗至白色為止，分離出棉柱上的藻藍(lán) 蛋白，得到含藻藍(lán)蛋白的水溶液；經(jīng)檢測本步藻藍(lán)蛋白的純度A620nm/A280nm>l. 0 ;
[0038] 將得到的含藻藍(lán)蛋白的水溶液先采用分子量為50萬道爾頓的超濾膜進(jìn)行過濾， 然后，再采用分子量為20萬道爾頓的超濾膜進(jìn)行過濾和濃縮，得到含藻藍(lán)蛋白的濃縮液；
[0039] 將含藻藍(lán)蛋白的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，所述冷凍干燥采用常規(guī)的方法即可，得到 成品藻藍(lán)蛋白，經(jīng)檢測，純度A620nm/A280nm>2. 0,完全能夠達(dá)到醫(yī)用級別。
[0040] 實施例3
[0041] 取水華藍(lán)藻的藻粉，最好將上述水華藍(lán)藻的藻粉與水按1 :3的重量比例預(yù)浸泡 處理。稱重，再按照藻粉與冰粉的重量比為1 :15的比例加入-30°c的冰粉，冰粉的粒徑為 40?20目，將上述的水華藍(lán)藻的藻粉和冰粉一起加入攪拌罐內(nèi)，將攪拌速度控制在2000r/ min的條件下并控制體系溫度在0°C?_20°C之間保溫進(jìn)行破壁處理90min，破壁處理結(jié)束 后，使體系內(nèi)的冰粉自然融化，得到含有藻藍(lán)蛋白的破壁液，經(jīng)過檢測，藻細(xì)胞的破壁率達(dá) 到95%以上；
[0042] 將采用醫(yī)用脫脂棉制成的棉柱插入上述含有藻藍(lán)蛋白的破壁液中使藻藍(lán)蛋白吸 附在棉柱上，所述醫(yī)用脫脂棉可以采用不銹鋼濾網(wǎng)進(jìn)行固定，棉柱的高度可以根據(jù)實際需 要進(jìn)行調(diào)整，同時，使棉柱的高度的2/3保持在液面以上，直到破壁液被棉柱吸干，取出棉 柱的藍(lán)色部分的脫脂棉（吸附藻藍(lán)蛋白的部分），由于藻藍(lán)蛋白為藍(lán)色的物質(zhì)，易于分離， 通過擠壓和采用水進(jìn)行沖洗，直至藍(lán)色的脫脂棉被沖洗至白色止，分離出棉柱上的藻藍(lán)蛋 白，得到含藻藍(lán)蛋白的水溶液；經(jīng)檢測本步藻藍(lán)蛋白的純度A620nm/A280nm>l. 0 ;
[0043] 將得到的含藻藍(lán)蛋白的水溶液先采用分子量為100萬道爾頓的超濾膜進(jìn)行過濾， 然后，再采用分子量為20萬萬道爾頓的超濾膜進(jìn)行過濾和濃縮，得到含藻藍(lán)蛋白的濃縮 液；
[0044] 將含藻藍(lán)蛋白的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，所述冷凍干燥采用常規(guī)的方法即可，得到 成品藻藍(lán)蛋白，經(jīng)檢測，純度A620nm/A280nm>2. 0,完全能夠達(dá)到醫(yī)用級別。
[0045] 實施例4
[0046] 取新鮮的魚腥藻的藻泥，稱重，再按照藻泥與冰粉的重量比為1 :20的比例加 入-40°C的冰粉，冰粉的粒徑為40?20目，所述的冰粉是采用0. 5?1. Omol/L的氯化鈉 水溶液制成，將上述的魚腥藻的藻泥和冰粉一起加入攪拌罐內(nèi)，將攪拌速度控制在2500r/ min的條件下并控制體系溫度在-5°C以下保溫進(jìn)行破壁處理80min，破壁處理結(jié)束后，使體 系內(nèi)的冰粉自然融化，得到含有藻藍(lán)蛋白的破壁液，經(jīng)過檢測，藻細(xì)胞的破壁率達(dá)到95 %以 上；當(dāng)然也可以是室溫下進(jìn)行破壁處理，破壁處理過程中如果冰粉融化過多，則可以通過補(bǔ) 加冰粉后再進(jìn)行破壁處理來達(dá)到破壁效果。
[0047] 將采用醫(yī)用脫脂棉制成的棉柱插入上述含有藻藍(lán)蛋白的破壁液中使藻藍(lán)蛋白吸 附在棉柱上，所述醫(yī)用脫脂棉可以采用不銹鋼濾網(wǎng)進(jìn)行固定，棉柱的高度可以根據(jù)實際需 要進(jìn)行調(diào)整，同時，使棉柱高度的3/4保持在液面以上，直到破壁液被棉柱吸干，取出棉柱 的藍(lán)色部分的脫脂棉（吸附藻藍(lán)蛋白的部分），由于藻藍(lán)蛋白為藍(lán)色的物質(zhì)，易于分離，通 過擠壓和采用水進(jìn)行沖洗，直至藍(lán)色的脫脂棉被沖洗至白色為止，分離出棉柱上的藻藍(lán)蛋 白，得到含藻藍(lán)蛋白的水溶液；經(jīng)檢測本步藻藍(lán)蛋白的純度A620nm/A280nm>l. 0 ;
[0048] 將得到的含藻藍(lán)蛋白的水溶液先采用分子量為150萬道爾頓的超濾膜進(jìn)行過濾， 然后，再采用分子量為40萬道爾頓的超濾膜進(jìn)行過濾，得到含藻藍(lán)蛋白的過濾液和濃縮 液。
[0049] 將含藻藍(lán)蛋白的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，所述冷凍干燥采用常規(guī)的方法即可，得到 成品藻藍(lán)蛋白，經(jīng)檢測，純度A620nm/A280nm>2. 0,完全能夠達(dá)到醫(yī)用級別。
[0050] 實施例5
[0051] 取螺旋藻的藻粉，稱重，再按照藻粉與冰粉的重量比為1 :20的比例加入-50°c的 冰粉，冰粉的粒徑為40?20目，所述的冰粉是采用0. 5?1. Omol/L的氯化鈉水溶液制 成，最好將上述的藻粉預(yù)先經(jīng)過浸泡處理，將上述的螺旋藻的藻粉和冰粉一起加入攪拌罐 內(nèi)，將攪拌速度控制在3000r/min的條件下并控制體系溫度在-15°C以下保溫進(jìn)行破壁處 理60min，破壁處理結(jié)束后，使體系內(nèi)的冰粉自然融化，得到含有藻藍(lán)蛋白的破壁液，經(jīng)過 檢測，藻細(xì)胞的破壁率達(dá)到95%以上；相比較與實施例2可以看了，本實施例中通過采用 0. 5?1. Omol/L的氯化鈉水溶液制成的冰粉，破壁處理速度更快，破壁效率得到較大的提 商；
[0052] 將采用醫(yī)用脫脂棉制成的棉柱插入上述含有藻藍(lán)蛋白的破壁液中使藻藍(lán)蛋白吸 附在棉柱上，所述醫(yī)用脫脂棉可以采用不銹鋼濾網(wǎng)進(jìn)行固定，棉柱的高度可以根據(jù)實際需 要進(jìn)行調(diào)整，同時，使棉柱的高度的2/3保持在液面以上，直到破壁液被棉柱吸干，取出棉 柱的藍(lán)色部分的脫脂棉（吸附藻藍(lán)蛋白的部分），由于藻藍(lán)蛋白為藍(lán)色的物質(zhì)，易于分離， 通過擠壓和采用水進(jìn)行沖洗，直至藍(lán)色的脫脂棉被沖洗至白色為止，分離出棉柱上的藻藍(lán) 蛋白，得到含藻藍(lán)蛋白的水溶液；經(jīng)檢測本步藻藍(lán)蛋白的純度A620nm/A280nm>l. 0 ;
[0053] 將得到的含藻藍(lán)蛋白的水溶液先采用分子量為100萬道爾頓的超濾膜進(jìn)行過濾， 然后，再采用分子量為30萬道爾頓的超濾膜進(jìn)行過濾和濃縮，得到含藻藍(lán)蛋白的濃縮液；
[0054] 將含藻藍(lán)蛋白的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，所述冷凍干燥采用常規(guī)的方法即可，得到 成品藻藍(lán)蛋白，經(jīng)檢測，純度A620nm/A280nm>2. 0,完全能夠達(dá)到醫(yī)用級別。
[0055] 本發(fā)明中所描述的具體實施例僅是對本發(fā)明精神作舉例說明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng) 域的技術(shù)人員可以對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替 代，但并不會偏離本發(fā)明的精神或者超越所附權(quán)利要求書所定義的范圍。
[0056] 盡管對本發(fā)明已作出了詳細(xì)的說明并引證了一些具體實施
[0057] 例，但是對本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來說，只要不離開本發(fā)明的精神和范圍可作各種 變化或修正是顯然的。
【權(quán)利要求】
1. 一種藻藍(lán)蛋白的提取方法，其特征在于，該方法包括以下步驟： A、 破壁：將含有藻藍(lán)蛋白的鮮藻或經(jīng)過預(yù)浸泡的藻粉加入-50°C?-10°C的冰粉中，將 攪拌速度控制在l〇〇〇r/min?3000r/min的條件下進(jìn)行破壁處理，得到含有藻藍(lán)蛋白的破 壁液； B、 將得到的含有藻藍(lán)蛋白的破壁液進(jìn)行分離、純化和干燥，得到成品藻藍(lán)蛋白。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述藻藍(lán)蛋白的提取方法，其特征在于，步驟B中所述分離具體為： 將采用醫(yī)用脫脂棉制成的棉柱插入上述步驟A中得到的含有藻藍(lán)蛋白的破壁液中使 藻藍(lán)蛋白吸附在棉柱上，分離棉柱上的藍(lán)色部分，采用擠壓和水進(jìn)行沖洗，得到含藻藍(lán)蛋白 的水溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述藻藍(lán)蛋白的提取方法，其特征在于，步驟B中所述純化和干燥具 體為： 將得到的含藻藍(lán)蛋白的水溶液采用超濾膜進(jìn)行過濾和濃縮，得到含藻藍(lán)蛋白的濃縮 液；再將含藻藍(lán)蛋白的濃縮液進(jìn)行干燥，得到成品藻藍(lán)蛋白。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述藻藍(lán)蛋白的提取方法，其特征在于，所述含藻藍(lán)蛋白的藻粉選 自螺旋藻、魚腥藻或水華藍(lán)藻。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述的藻藍(lán)蛋白的提取方法，其特征在于，步驟A中所述 的冰粉采用〇. 5?1. Omol/L的氯化鈉水溶液制成。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述藻藍(lán)蛋白的提取方法，其特征在于，步驟B中所述棉柱的高度的 2/3保持在液面以上。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2任意一項所述藻藍(lán)蛋白的提取方法，其特征在于，步驟B所述純 化具體為： 將得到的含藻藍(lán)蛋白的水溶液先采用分子量為50萬?150萬道爾頓的超濾膜進(jìn)行過 濾，然后，再采用分子量為20萬?40萬道爾頓的超濾膜進(jìn)行過濾和濃縮，得到含藻藍(lán)蛋白 的濃縮液。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述藻藍(lán)蛋白的提取方法，其特征在于，步驟A中所述藻 粉與冰粉的質(zhì)量比1 :10?20。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1或2或6所述藻藍(lán)蛋白的提取方法，其特征在于，步驟A中所述冰粉 的溫度為-30°C?-20°C。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述藻藍(lán)蛋白的提取方法，其特征在于，步驟A中所述的冰粉顆粒 的大小為20目?60目。
【文檔編號】C07K1/34GK104151424SQ201410409170
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月19日
【發(fā)明者】張兵權(quán) 申請人:臺州賓美生物科技有限公司