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      一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體c3多抗血清的方法

      文檔序號(hào):3496408閱讀:528來(lái)源:國(guó)知局
      一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體c3多抗血清的方法
      【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法,補(bǔ)體C3抗原20mg的血清0.1ml,無(wú)菌roS1.9ml,弗氏佐劑2ml混合并乳化,得到免疫原乳劑;然后湖羊免疫第一針,在湖羊的前后腹股溝,每腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射點(diǎn),皮下注射,足底部2個(gè)注射點(diǎn)平均注射,然后間隔二十天注射第二針,再每次間隔10天注射3?6針,間隔五天對(duì)免疫的湖羊動(dòng)脈采血,血液放入水箱中1小時(shí)溫度40°C,待血清充分析出,經(jīng)離心沉淀分離出抗血清。本發(fā)明將補(bǔ)體C3抗原經(jīng)皮下注入湖羊腹股溝外并進(jìn)行多次加強(qiáng)免疫,使其產(chǎn)生高效羊抗補(bǔ)體C3抗體可達(dá)1:64以上。為生物試劑廠提供原料、為醫(yī)療診斷提供方便,使湖羊產(chǎn)生了高的效益。
      【專(zhuān)利說(shuō)明】一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法

      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001] 本發(fā)明涉及一種羊抗人血清生產(chǎn)方法,具體涉及一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多 抗血清的方法及其使用方法。

      【背景技術(shù)】
      [0002] C3是血清中含量最高的補(bǔ)體成分,分子量為195000,主要有巨噬細(xì)胞和肝臟合 成,在C3轉(zhuǎn)化酶的作用下,裂解成C3a和C3b兩個(gè)片段,在補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑和旁路激活途 徑中均發(fā)揮重要作用。C3是生物試劑的重要原料,現(xiàn)有的生產(chǎn)方法采用傳統(tǒng)的免疫方式,產(chǎn) 量與效價(jià)較低,已無(wú)法滿足日益增長(zhǎng)的使用需求。


      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0003] 發(fā)明目的:為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足,本發(fā)明提供一種可提高產(chǎn)量與效價(jià)的 利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法。
      [0004] 技術(shù)方案:為解決上述技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明提供的利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清 的方法包括以下步驟:
      [0005] 1)免疫原乳劑的制備,將含有補(bǔ)體C3抗原20mg的血清0. 1ml,無(wú)菌PBSL 9ml,弗 氏佐劑2ml混合并乳化,得到免疫原乳劑;
      [0006] 2)湖羊免疫第一針,在湖羊的前后腹股溝,每腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注 射點(diǎn),皮下注射,足底部2個(gè)注射點(diǎn)平均注射;
      [0007] 3)與步驟2)間隔二十天注射第二針,前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射 點(diǎn),后腹股溝淋巴結(jié)左右2個(gè)注射點(diǎn);
      [0008] 4)與步驟3)間隔十天注射第三針,前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射 占.
      [0009] 5)與步驟4)間隔十天注射第四針,前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射 占.
      [0010] 6)與步驟5)間隔十天注射第五針,前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射 占.
      [0011] 7)與步驟6)間隔十天注射第六針,前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射 占.
      [0012] 8)與步驟7)間隔五天對(duì)免疫的湖羊動(dòng)脈采血,血液放入水箱中1小時(shí)溫度40°C, 待血清充分析出,經(jīng)離心沉淀分離出抗血清,放進(jìn)冰箱保存溫度在4°C一8°C之間;
      [0013] 9)對(duì)步驟7)所得抗血清進(jìn)行效價(jià)測(cè)定。
      [0014] 作為優(yōu)選,所述步驟1)所述抗原量是指每二頭羊的免疫抗原量。
      [0015] 所述步驟2)中注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐劑是弗氏完全佐劑。
      [0016] 作為優(yōu)選,所述步驟3)、4)、5)、6)、7)中注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐 劑是弗氏不完全佐劑。
      [0017] 作為優(yōu)選,所述步驟7)的效價(jià)測(cè)定采用的方法為瓊擴(kuò)方法。
      [0018] 有益效果:本發(fā)明將補(bǔ)體C3抗原經(jīng)皮下注入湖羊腹股溝外并進(jìn)行多次加強(qiáng)免疫, 使其產(chǎn)生高效羊抗補(bǔ)體C3抗體可達(dá)1:64以上。為生物試劑廠提供原料、為醫(yī)療診斷提供 方便,使湖羊產(chǎn)生了高的效益。

      【具體實(shí)施方式】
      [0019] 實(shí)施例:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用湖羊公羊20只,體重50公斤左右健康羊,免疫前全部打上 耳標(biāo),羊群采用圈養(yǎng),結(jié)合放養(yǎng),保持正常體況,避免羊只過(guò)肥,提高免疫力,自動(dòng)飲水器,每 天牧草供給,適量添加精料、醋糟、麩皮和維生素等。
      [0020] 人的補(bǔ)體C3接種0· Iml (合抗原20mg) I. 9ml無(wú)菌PBS完全弗氏(或不完全)佐 劑2ml制成免疫原乳劑備用。
      [0021] 湖羊免疫第一針,前后腹股溝,每腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射點(diǎn),皮下 注射,頸部?jī)蓚?cè)2個(gè)注射點(diǎn)平均注射。
      [0022] 第二針,間隔二十天,前后腹股溝分2個(gè)點(diǎn)注射,總共12個(gè)注射點(diǎn),后腹股溝淋巴 結(jié)左右2個(gè)點(diǎn)。
      [0023] 第三針,間隔十天,前后腹股溝分2個(gè)點(diǎn)注射,總共12個(gè)注射點(diǎn)。
      [0024] 第四針,間隔十天,前后腹股溝分2個(gè)點(diǎn)注射,總共12個(gè)注射點(diǎn)
      [0025] 第五針,間隔十天,前后腹股溝分2個(gè)點(diǎn)注射,總共12個(gè)注射點(diǎn),
      [0026] 第六針,間隔十天,前后腹股溝分2個(gè)點(diǎn)注射,總共12個(gè)注射點(diǎn),
      [0027] 其中第一針即第一次免疫注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐劑是弗氏完全 佐劑。
      [0028] 其余免疫中即第二、三、四、五針注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐劑是弗氏 不完全佐劑。
      [0029] 五天后對(duì)免疫的湖羊動(dòng)脈采血,血液放入水箱中1小時(shí)溫度40°C,待血清充分析 出,經(jīng)離心沉淀分離出抗血清,放進(jìn)冰箱保存溫度在4 °?C8 °C之間;
      [0030] 采用瓊擴(kuò)方法對(duì)所得抗血清進(jìn)行效價(jià)測(cè)定
      [0031] 1.配制瓊脂:稱(chēng)取1.2g瓊脂粉,加入IOOml生理鹽水中,水浴加熱溶解后,以 115°C滅菌10分鐘;
      [0032] 滅菌結(jié)束后,取出瓊脂溶液,冷卻至70°C左右,用吸管吸取瓊脂液,加入干凈的平 皿中,每塊平皿16ml,待冷卻后收起平皿,放于2?8°C冰箱中保存,可保存2周;
      [0033] 用前在平皿上用梅花打孔器打孔,中間孔加入抗原,外周孔加稀釋后的待檢血清。
      [0034] 2.樣品血清稀釋?zhuān)喝〕?6孔細(xì)胞培養(yǎng)板或血凝板,在每孔中加入25 μ 1生理鹽水 或 PBS ;
      [0035] 在每行的第1列孔中加入25 μ 1樣品血清,從第1孔向后倍比稀釋至第10孔。
      [0036] 3.加樣檢測(cè):取出打好梅花孔的瓊脂平皿,在外周孔中按順序加入倍比稀釋的樣 品血清,每孔約加20 μ 1,以孔加滿為宜;
      [0037] 在梅花孔的中央孔中加入上述分離出的抗血清;
      [0038] 將加好樣的瓊脂平皿放入濕盒中,置37°C過(guò)夜;
      [0039] 4.血清效價(jià)評(píng)定:
      [0040] 觀察外周孔與中央孔沉淀線出現(xiàn)位置,計(jì)算樣品血清的效價(jià)。測(cè)得第6孔有沉淀 線(凝集反應(yīng))說(shuō)明測(cè)定此批次抗血清的效價(jià)為1:64。
      【權(quán)利要求】
      1. 一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法,其特征在于,包括以下步驟: 1) 免疫原乳劑的制備,將含有補(bǔ)體C3抗原20mg的血清0. lml,無(wú)菌PBSL 9ml,弗氏佐 劑2ml混合并乳化,得到免疫原乳劑; 2) 湖羊免疫第一針,在湖羊的前后腹股溝,每腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射 點(diǎn),皮下注射,足底部2個(gè)注射點(diǎn)平均注射; 3) 與步驟2)間隔二十天注射第二針,前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射點(diǎn), 后腹股溝淋巴結(jié)左右2個(gè)注射點(diǎn); 4) 與步驟3)間隔十天注射第三針,前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射點(diǎn); 5) 與步驟4)間隔十天注射第四針,前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射點(diǎn); 6) 與步驟5)間隔十天注射第五針,前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射點(diǎn); 7) 與步驟6)間隔十天注射第六針,前后腹股溝分2個(gè)區(qū)域注射,總共12個(gè)注射 占. 8) 與步驟7)間隔五天對(duì)免疫的湖羊動(dòng)脈采血,血液放入水箱中1小時(shí)溫度40°C,待血 清充分析出,經(jīng)離心沉淀分離出抗血清,放進(jìn)冰箱保存溫度在4°C一8°C之間; 9) 對(duì)步驟8)所得抗血清進(jìn)行效價(jià)測(cè)定。
      2. 如權(quán)利要求1所述的一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法,其特征在于,步 驟1)所述抗原量是指每二頭羊的免疫抗原量。
      3. 如權(quán)利要求1所述的一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法,其特征在于,所 述步驟2)中注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐劑是弗氏完全佐劑。
      4. 如權(quán)利要求1所述的一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法,其特征在于,所 述步驟3)、4)、5)、6)、7)中注射的免疫原乳劑乳化時(shí)采用的弗氏佐劑是弗氏不完全佐劑。
      5. 如權(quán)利要求1所述的一種利用湖羊生產(chǎn)抗補(bǔ)體C3多抗血清的方法,其特征在于,所 述步驟7)的效價(jià)測(cè)定采用的方法為瓊擴(kuò)方法。
      【文檔編號(hào)】C07K16/06GK104211805SQ201410413400
      【公開(kāi)日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年8月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月20日
      【發(fā)明者】徐志偉, 劉照亭, 劉偉忠, 魯群 申請(qǐng)人:鎮(zhèn)江萬(wàn)山紅遍農(nóng)業(yè)園
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