一種分子探針及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種分子探針，它是標(biāo)記了標(biāo)記基團(tuán)的多肽。本發(fā)明還公開了前述分子探針的制備方法和用途。本發(fā)明分子探針可以用于高通量篩選，相關(guān)蛋白譜的研究，靶標(biāo)蛋白的鑒別，結(jié)構(gòu)新穎、合理、制備方法簡單，應(yīng)用前景良好。
【專利說明】-種分子探針及其制備方法和用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種分子探針及其制備方法和用途。

【背景技術(shù)】
[000引 Cbl促isitas B-lineage lymphoma)蛋白是一類在生物體內(nèi)廣泛分布的細(xì)胞內(nèi)蛋 白，屬于泛素連接酶E3系。c-Cbl在細(xì)胞內(nèi)廣泛表達(dá)，但主要存在于細(xì)胞質(zhì)中。c-Cbl由 N-端高度保守的酪氨酸激酶結(jié)合功能域（Tyrosine kinase binding domain,T?。h(huán)狀功 能域化ING)、富含脯氨酸功能域、C-端與泛素結(jié)合0Jbiquitin-associated，UBA)的功能域 及與之重疊的亮氨酸拉鏈功能域組成。c-Cbl分子中的T邸及其他功能域可W識(shí)別并結(jié)合 祀蛋白，RING功能域負(fù)責(zé)募集泛素結(jié)合酶E2,從而啟動(dòng)泛素化降解途徑。c-Cbl通過調(diào)控 信號(hào)蛋白參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)向調(diào)控，該對(duì)于維持細(xì)胞的內(nèi)穩(wěn)態(tài)具有重要作用。
[0003] 2型糖尿?。ㄅf稱非膜島素依賴型糖尿病或成人糖尿?。?，是一種嚴(yán)重的代謝性疾 病，患者的主要特征為膜島素抵抗、相對(duì)膜島素缺乏和高血糖，常需要給予藥物或膜島素治 療，但也可通過增加體育運(yùn)動(dòng)和膳食控制病情。在發(fā)達(dá)國家，近年來2型糖尿病患者數(shù)迅速 增加，美國疾病控制和預(yù)防中也已將2型糖尿病歸入流行病之一。2型糖尿病過去在40歲 W上的成年人中發(fā)病，而今越來越多的未成年人也身患此病，其原因可能是由于該年齡段 的高服胖率所致，2型糖尿病常與服胖、高血壓、高膽固醇（混合型高血脂癥）W及"代謝綜 合征"（又稱X綜合癥、Reavan' S綜合征、CHAOS綜合癥）相關(guān)，同時(shí)也與肢端服大、柯興氏綜 合征W及許多其他內(nèi)分泌疾病相關(guān)。2型糖尿病復(fù)雜且多因素的代謝改變常導(dǎo)致多個(gè)器官 的損傷和功能損害，其中最重要的累及部位即是也血管系統(tǒng)，導(dǎo)致患者也血管疾病發(fā)病率 和死亡率顯著上升，因此2型糖尿病已成為當(dāng)前嚴(yán)重的世界性問題并引起了眾多醫(yī)生W及 科研人員的關(guān)注，特別是對(duì)膜島素的敏感度降低W及糖脂代謝的研究更是目前國際關(guān)注的 熱點(diǎn)之一。在過去的幾十年里，一系列調(diào)控食欲、食物吸收W及增加肌肉組織或脂肪組織能 量消耗的基因陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，其中c-Cbl基因就參與了全身能量消耗的調(diào)控。2004年Cooney GJ研究發(fā)現(xiàn)，c-Cbl在調(diào)控全身能量平衡中起著重要的作用。2006年，該組進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)證 明c-Cbl通過調(diào)節(jié)膜島素敏感度參與了全身能量平衡的調(diào)控W及c-Cbl泛素連接酶E3功 能域參與了身體能量平衡的調(diào)控。
[0004] 綜上，c-Cbl蛋白功能域參與了機(jī)體能量平衡的調(diào)控，是潛在的治療代謝性相關(guān) 疾病的藥物祀點(diǎn)，如果能成功設(shè)計(jì)出一類c-Cbl蛋白小分子探針，則將有助于鑒定和確證 c-Cbl蛋白作為新的藥物祀點(diǎn)的可能性，有助于闡明c-Cbl的某些病理生理學(xué)意義，對(duì)于治 療糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的新型藥物研發(fā)W及為祀向c-Cbl蛋白的藥物研發(fā)提供科 學(xué)依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種可結(jié)合c-Cbl蛋白的小分子探針。
[0006] 本發(fā)明分子探針，它是標(biāo)記了標(biāo)記基團(tuán)的多膚，多膚的氨基酸序列為pfKpp，其中， P為P或者P'，f為F或F';
[0007] 所述P'的結(jié)構(gòu)式為：

【權(quán)利要求】
1. 一種分子探針，其特征在于：它是標(biāo)記了標(biāo)記基團(tuán)的多肽，多肽的氨基酸序列為 pfKpp，其中，p為P或者P'，f為F或F' ； 所述P'的結(jié)構(gòu)式為：
其中，X為碳原子或雜原子，R為氫或鹵素； f 所述F'的結(jié)構(gòu)式為
卩中，R為C1-C4的烷基、鹵素、氨基、硝基或 N3。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子探針，其特征在于：所述多肽的氨基酸序列為PFKPP、P F，KPP、P，F(xiàn)，KPP、PF，KP，P或PF，KPP，。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子探針，其特征在于：所述雜原子為S、O或N。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子探針，其特征在于：所述標(biāo)記基團(tuán)與多肽的摩爾比為 (1 ?2) :1。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子探針，其特征在于：所述標(biāo)記基團(tuán)為熒光分子、谷胱甘 肽-S-轉(zhuǎn)移酶蛋白、FLAG、Myc或生物素。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的分子探針，其特征在于：所述熒光分子為異硫氰酸熒光素、四 甲基羅丹明。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子探針，其特征在于：所述標(biāo)記基團(tuán)的標(biāo)記位置為多肽的 C-末端或N-末端。
8. -種制備權(quán)利要求1?7任意一項(xiàng)所述分子探針的方法，其特征在于：包括如下步 驟： (1)取權(quán)利要求1?7任意一項(xiàng)所述多肽和標(biāo)記基團(tuán)； ⑵用標(biāo)記基團(tuán)標(biāo)記多肽，即可。
9. 權(quán)利要求1?7任意一項(xiàng)所述分子探針在篩選以c-Cbl蛋白為靶點(diǎn)的藥物中的用 途。
【文檔編號(hào)】C07K7/06GK104447953SQ201410492083
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月24日
【發(fā)明者】孫毅毅, 謝興亮, 鐘玲, 林東 申請(qǐng)人:成都醫(yī)學(xué)院