功能化淫羊藿苷衍生物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明所述功能化淫羊藿苷衍生物，為丁二酸化淫羊藿苷和馬來酸化淫羊藿苷，丁二酸化淫羊藿苷的結(jié)構(gòu)式：馬來酸化淫羊藿苷的結(jié)構(gòu)式：制備方法：以淫羊藿苷和酸酐為原料，淫羊藿苷與酸酐的摩爾比為1：(2～11)；將淫羊藿苷和酸酐分別溶解于極性溶劑中形成溶液，在攪拌下將兩種溶液混合均勻，然后在25℃～40℃反應(yīng)4～24小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后除去極性溶劑和殘留酸酐及其分解產(chǎn)物得反應(yīng)產(chǎn)物，將反應(yīng)產(chǎn)物冷凍干燥得到功能化淫羊藿苷衍生物。本發(fā)明所述功能化淫羊藿苷衍生物水溶性好、細(xì)胞毒性低，通過其可將Ica以共價(jià)形式載入到組織工程支架材料中，且所述功能化淫羊藿苷衍生物能作為生物活性物質(zhì)在組織工程中應(yīng)用。
【專利說明】功能化淫羊霍音衍生物及其制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域，涉及淫羊蕾巧衍生物及其制備方法，W及淫羊蕾 巧衍生物在組織工程中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 組織工程是目前最具前景的缺損組織修復(fù)與功能重建技術(shù)，人工組織或前組織由 W生物材料制備的支架和種子細(xì)胞構(gòu)成，前者為后者提供粘附、增殖、分化和組織化的支撐 環(huán)境，最終共同形成具有一定形狀和功能的人工組織或前組織。但僅將種子細(xì)胞和支架復(fù) 合，細(xì)胞生長(zhǎng)缺乏有效調(diào)控，最終很難形成需要的目標(biāo)組織，其主要原因在于支架材料本身 對(duì)細(xì)胞分化和合成代謝的促進(jìn)作用有限，而組織的形成需要有大量細(xì)胞因子參與。為此，有 較多研究嘗試將相關(guān)生長(zhǎng)因子載入支架，通過其釋放來調(diào)節(jié)種子細(xì)胞的分化和細(xì)胞外基質(zhì) 代謝，W期獲得需要的組織。然而，載入生長(zhǎng)因子雖可促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化，但組織形成的 不同階段所需生長(zhǎng)因子的種類和濃度有所不同，同時(shí)，外源性生長(zhǎng)因子存在價(jià)格昂貴、易降 解失活、可能具有免疫原性，W及可能引入意想不到的外源性基因等諸多問題。
[0003] 淫羊蕾巧（icariin，簡(jiǎn)稱Ica)是從藥用植物淫羊蕾化erb Epimedii，簡(jiǎn)稱肥巧 中分離的一種性質(zhì)較為穩(wěn)定的黃麗，是肥P的主要活性成分。鑒于Ica的多種生物活性， 將Ica裝載到組織工程支架中，可提高支架材料的生物學(xué)功能。然而，當(dāng)Ica的濃度大于 IX 1(T5M時(shí)具有明顯的細(xì)胞毒性，盡管Ica的溶解度較低，但在常溫下獲得的飽和溶液其濃 度也達(dá)到2XIO^M，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。為了提高Ica的生物利用度，避免非 共價(jià)的載入方式存在的初始暴釋W(xué)及載入量有限等問題，需要將Ica共價(jià)引入組織工程支 架中，但I(xiàn)ca化學(xué)性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定，沒有易于發(fā)生反應(yīng)的活性基團(tuán)，難W與其它物質(zhì)W共價(jià)的 形式反應(yīng)結(jié)合，只能W非共價(jià)形式載入到支架材料中。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供水溶性好、細(xì)胞毒性低的功能化淫 羊蕾巧衍生物及其制備方法，通過功能化淫羊蕾巧衍生物可將Ica W共價(jià)形式載入到組織 工程支架材料中。本發(fā)明的再一目的是提供淫羊蕾巧衍生物作為生物活性物質(zhì)在組織工程 中的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明所述功能化淫羊蕾巧衍生物，為下二酸化淫羊蕾巧（簡(jiǎn)稱Ica-SA)、馬來酸 化淫羊蕾巧（簡(jiǎn)稱Ica-MAL)。下二酸化淫羊蕾巧的結(jié)構(gòu)式如下：
[0006]

【權(quán)利要求】
1. 功能化淫羊蕾苷衍生物，其特征在于結(jié)構(gòu)式如下：
其中，丁二酸殘基+ + . *·或馬來酸殘基"與淫羊藿苷分子結(jié)構(gòu)式中 的葡萄糖環(huán)和/或鼠李糖環(huán)上的任意一個(gè)或多個(gè)羥基相連，或與淫羊藿苷分子結(jié)構(gòu)式中C5 位的酚羥基相連。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述功能化淫羊藿苷衍生物，其特征在于所述丁二酸殘基與淫羊藿 苷分子的摩爾比為（2.8?I. 1) :1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述功能化淫羊藿苷衍生物，其特征在于所述馬來酸殘基與淫 羊藿苷分子的摩爾比為（2. 7?1. 4) : 1。
4. 一種功能化淫羊藿苷衍生物的制備方法，其特征在于： 以淫羊藿苷和酸酐為原料，淫羊藿苷與酸酐的摩爾比為1 : (2?11);將淫羊藿苷和酸 酐分別溶解于極性溶劑中形成淫羊藿苷溶液和酸酐溶液，在攪拌下將酸酐溶液與淫羊藿苷 溶液混合均勻，然后在25°C?40°C反應(yīng)4小時(shí)?24小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后除去極性溶劑和殘留 酸酐及其分解產(chǎn)物得反應(yīng)產(chǎn)物，將反應(yīng)產(chǎn)物冷凍干燥得到功能化淫羊藿苷衍生物； 所述溶解淫羊藿苷和溶解酸酐的極性溶劑體積相等，且溶解淫羊藿苷和溶解酸酐的極 性溶劑的體積之和與淫羊藿苷的質(zhì)量之比為1 : (10?50)，極性溶劑的體積的單位為L(zhǎng)，淫 羊藿苷的質(zhì)量單位為g。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述功能化淫羊藿苷衍生物的制備方法，其特征在于所述酸酐為丁 二酸酐或馬來酸酐。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述功能化淫羊藿苷衍生物的制備方法，其特征在于所述的極 性溶劑為吡陡、甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、四氫呋喃中的任一種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述功能化淫羊藿苷衍生物的制備方法，其特征在于反應(yīng)結(jié)束 后除去極性溶劑和殘留酸酐及其分解產(chǎn)物的操作依次如下： (1) 通過減壓蒸餾或自然揮發(fā)除去反應(yīng)液中大部分極性溶劑，得膏狀物； (2) 將所得膏狀物用有機(jī)萃取劑溶解后加入去離子水?dāng)嚢柘礈欤缓箪o置分層并分離 出水層得含產(chǎn)物的有機(jī)層，所述有機(jī)萃取劑的體積與淫羊藿苷的質(zhì)量之比為1: (2?10)， 有機(jī)萃取劑體積的單位為L(zhǎng)，淫羊藿苷質(zhì)量的單位為g; (3) 將含產(chǎn)物的有機(jī)層加入去離子水?dāng)嚢柘礈旌箪o置分層并分離出水層，對(duì)所得含產(chǎn) 物的有機(jī)層重復(fù)上述操作，直至分離出的水層達(dá)到中性； (4) 通過減壓蒸餾或自然揮發(fā)除去有機(jī)層中的有機(jī)萃取劑得產(chǎn)物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述功能化淫羊藿苷衍生物的制備方法，其特征在于所述有機(jī)萃取 劑為乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異戊酯中的任一種。
9. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述功能化淫羊藿苷衍生物的制備方法，其特征在于反應(yīng)結(jié)束 后除去極性溶劑和殘留酸酐及其分解產(chǎn)物的操作是：將所得反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到透析袋中，用去 離子水進(jìn)行透析，所述透析袋的截流分子量為500道爾頓?800道爾頓。
10. 權(quán)利要求1?3所述功能化淫羊藿苷衍生物作為調(diào)節(jié)種子細(xì)胞分化和細(xì)胞外基質(zhì) 代謝的生物活性物質(zhì)在組織工程中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07H1/00GK104447913SQ201410621318
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月6日
【發(fā)明者】肖玉梅, 何龍, 楊繼榕, 魯建, 李東曉, 張興棟 申請(qǐng)人:四川大學(xué)