一種從虎杖中提取白藜蘆醇的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從虎杖中提取白藜蘆醇的方法。所述方法包括滅酶、一次酶解、一次提取、二次酶解、二次提取和純化六個步驟。本發(fā)明所述方法操作簡便，提取效率高，適用于生產實際。
【專利說明】一種從虎杖中提取白藜蘆醇的方法

【技術領域】
[0001 ] 本申請涉及一種從虎杖中提取白藜蘆醇的方法。

【背景技術】
[0002]虎杖系寥科屬多年生草本植物，其根莖和根具有祛風利濕、散瘀定痛、止咳化痰的藥效。虎杖中主要含蒽醌類和芪類化合物，其中具有芪類結構的非黃酮類多酚化合物白藜蘆醇具有重要的生理活性，研究表明白藜蘆醇具有抗菌、抗癌、抗炎、抗過敏、降血脂和抗氧化等多方面的藥理活性，是目前研究較熱門而有希望的抗癌藥劑之一。
[0003]目前現(xiàn)有技術中常見的白藜蘆醇提取的方法主要有:1.原料中加入植物酶，將白藜蘆醇苷水解為白藜蘆醇，再用有機溶劑提?。?.采用有機溶劑提取原料，濃縮得到的浸膏再加入植物酶，將白藜蘆醇苷水解后用有機溶劑萃取；3.采用有機溶劑提取原料，濃縮、除雜、精制得到白藜蘆醇苷純品，再將其水解為白藜蘆醇。上述方法均各自有其利弊。
[0004]首先，現(xiàn)有技術中對于酶解的處理均為一步酶解，一般先進行酶解，然后提取純化，其原理為使用纖維素酶等促進細胞破壁，從而促進白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的溶出，并促進白藜蘆醇苷轉化為白藜蘆醇；而先提取，然后提取液中加入水解酶酶解，其原理也是為促進白藜蘆醇苷轉化為白藜蘆醇。但一步酶解存在以下弊端:使用纖維素酶破壁提取的方法因為在酶解時酶解液為水，而白藜蘆醇苷不溶于水，因此，在酶解階段纖維素酶等水解酶促進白藜蘆醇苷轉化為白藜蘆醇的作用得不到發(fā)揮，而先提取后酶解的方法，由于在提取階段缺少纖維素酶等水解酶的破壁作用，導致了白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的溶出不足。
[0005]其次，虎杖中即存在促進白藜蘆醇苷轉化為白藜蘆醇的水解酶，也存在促進白藜蘆醇代謝的相關酶，該代謝相關酶會導致在酶解過程中白藜蘆醇的分解，造成白藜蘆醇的損失。一些文獻中公開了使用虎杖自身酶進行酶水解的技術方案，不需要外加入水解酶。但此類技術方案必然也將導致白藜蘆醇的損失。


【發(fā)明內容】

[0006]本申請旨在提供一種新的從虎杖中提取白藜蘆醇的方法，以克服現(xiàn)有技術中的上述缺陷。
[0007]本發(fā)明所述方法包括以下步驟:
(1)滅酶:將干燥虎杖粉碎至20?80目，紫外線照射40?60min；
(2)第一次酶解:向滅酶后的虎杖粗粉中加入虎杖重量1.5?2倍的水，調節(jié)pH至4.5?5.5，加入纖維素酶，其中纖維素酶的用量為虎杖粗粉重量的0.1%?0.5%，在40?50°C下酶解3?4h，每隔30min超聲處理酶解液lOmin，超聲頻率為20?10kHz，超聲功率為200?300W，得酶解液I ;
(3)第一次提取:酶解液I中加入其體積3?5倍的75?95%乙醇，提取2?3次，合并提取液后過濾，濾液濃縮得到稠膏狀提取物I ;
(4)第二次酶解:在稠膏狀提取物I中加入其體積10?20倍的水，并加入稠膏狀提取物I重量0.1%?0.5%的酶，攪拌，在40?50°C下酶解3?4h，每隔30min超聲處理酶解液lOmin，得酶解液II ；
(5)第二次提取:酶解液II中加入其體積3?5倍的75?95%乙醇，提取2?3次，合并提取液后過濾，濾液濃縮得到稠膏狀提取物II ;
(6)純化:將稠膏狀提取物II用水分散，上大孔吸附樹脂，先用50°C純凈水洗至無色，再使用樹脂體積I?2倍量的5%乙醇洗脫，洗脫液棄去，最后使用75?95%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，洗脫液加入活性炭脫色，減壓回收溶劑，得白藜蘆醇粗晶體，再使用乙醇重結晶2?3次，干燥得到純度為98%以上的白藜蘆醇。
[0008]進一步地，本發(fā)明所述步驟(2)中，優(yōu)選調節(jié)pH至5，纖維素酶的用量優(yōu)選為虎杖粗粉重量的0.2%?0.3%。
[0009]進一步地，本發(fā)明所述步驟(4)中，所述酶為纖維素酶、葡萄糖苷酶或兩者的混合物。
[0010]本發(fā)明技術方案首次采用紫外線滅酶，使白藜蘆醇代謝相關酶分解后再進行酶解，盡可能減少白藜蘆醇的損失。另外，本發(fā)明還采用了二次酶解的方法，使白藜蘆醇和白藜蘆醇苷最大限度地保留，以提高白藜蘆醇的收率。綜合本發(fā)明所述的各個步驟來看，本發(fā)明所述方法操作簡便，提取效率高，適用于生產實際。
[0011]

【專利附圖】

【附圖說明】
圖1為白藜蘆醇標準品HPLC譜圖圖2為實施例1中白藜蘆醇終產物HPLC譜圖。

【具體實施方式】
[0012]實施例1
將10g干燥虎杖粉碎至50目，紫外線照射滅酶60min。之后向虎杖粗粉中加入200g水，調節(jié)pH=5，再加入0.2g纖維素酶，在45°C下酶解4h，每隔30min超聲處理酶解液lOmin，超聲頻率為80kHz，超聲功率為200W，得酶解液I ;向酶解液I中加入75%乙醇，提取2?3次，合并提取液后過濾，濾液濃縮得到稠膏狀提取物I ;向稠膏狀提取物I中加入其體積10倍量的水和其質量0.2%的纖維素酶，攪拌，在45°C下酶解4h，每隔30min超聲處理酶解液1min,得酶解液II ；向酶解液II中加入75%乙醇，提取2?3次，合并提取液后過濾，濾液濃縮為稠膏狀提取物II ;使用大孔吸附樹脂對稠膏狀提取物II進行純化。先用50°C純凈水洗脫至無色，再用樹脂體積I?2倍量的5%乙醇洗脫，洗脫液棄去，最后使用80%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，洗脫液加入活性炭脫色，減壓回收溶劑，得白藜蘆醇粗晶體，再使用乙醇重結晶2?3次，干燥得到純度為98.12%的白藜蘆醇1.13g。
[0013]實施例2
將500g干燥虎杖粉碎至60目，紫外線照射滅酶60min。之后向虎杖粗粉中加入IL水，調節(jié)pH=5，再加入*1.2g纖維素酶，在50°C下酶解4h，每隔30min超聲處理酶解液lOmin，超聲頻率為60kHz，超聲功率為300W，得酶解液I ;向酶解液I中加入80%乙醇，提取2?3次，合并提取液后過濾，濾液濃縮得到稠膏狀提取物I ;向稠膏狀提取物I中加入其體積10倍量的水和其質量0.2%的β-葡萄糖苷酶，攪拌，在50°C下酶解4h，每隔30min超聲處理酶解液lOmin，得酶解液II ；向酶解液II中加入80%乙醇，提取2?3次，合并提取液后過濾，濾液濃縮得到稠膏狀提取物II ;使用大孔吸附樹脂對稠膏狀提取物II進行純化。先用50°c純凈水洗脫至無色，再用樹脂體積I?2倍量的5%乙醇洗脫，洗脫液棄去，最后使用80%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，洗脫液加入活性炭脫色，減壓回收溶劑，得白藜蘆醇粗晶體，再使用乙醇重結晶2?3次，干燥得到純度為98.30%的白藜蘆醇6.05g。
[0014]實施例3
將5000g干燥虎杖粉碎至60目，紫外線照射滅酶60min。之后向虎杖粗粉中加入8.5L7K，調節(jié)PH=5，再加入12g纖維素酶，在50°C下酶解4h，每隔30min超聲處理酶解液lOmin，超聲頻率為80kHz，超聲功率為200W，得酶解液I ;向酶解液I中加入90%乙醇，提取2?3次，合并提取液后過濾，濾液濃縮得到稠膏狀提取物I ;向該稠膏狀提取物中加入其體積10倍量的水，再加入其質量0.3%的β-葡萄糖苷酶和纖維素酶的混合物(其中β-葡萄糖苷酶與纖維素酶質量之比為2:1)，攪拌，在451:下酶解411，每隔301^11超聲處理酶解液lOmin，得酶解液II ;向酶解液II中加入90%乙醇，提取2?3次，合并提取液后過濾，濾液濃縮得到稠膏狀提取物II ;使用大孔吸附樹脂對稠膏狀提取物II進行純化。先用50°C純凈水洗脫至無色，再用樹脂體積I?2倍量的5%乙醇洗脫，洗脫液棄去，最后使用95%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，洗脫液加入活性炭脫色，減壓回收溶劑，得白藜蘆醇粗晶體，再使用乙醇重結晶2?3次，干燥得到純度為98.41%的白藜蘆醇58.52g。
【權利要求】
1.一種從虎杖中提取白藜蘆醇的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)滅酶:將干燥虎杖粉碎至20?80目，紫外線照射40?60min； (2)第一次酶解:向滅酶后的虎杖粗粉中加入虎杖重量1.5?2倍的水，調節(jié)pH至4.5?5.5，加入纖維素酶，其中纖維素酶的用量為虎杖粗粉重量的0.1%?0.5%，在40?50°C下酶解3?4h，每隔30min超聲處理酶解液lOmin，超聲頻率為20?10kHz，超聲功率為200?300W，得酶解液I ; (3)第一次提取:酶解液I中加入其體積3?5倍的75?95%乙醇，提取2?3次，合并提取液后過濾，濾液濃縮得到稠膏狀提取物I ; (4)第二次酶解:在稠膏狀提取物I中加入其體積10?20倍的水，并加入稠膏狀提取物I重量0.1%?0.5%的酶，攪拌，在40?50°C下酶解3?4h，每隔30min超聲處理酶解液lOmin，得酶解液II ； (5)第二次提取:酶解液II中加入其體積3?5倍的75?95%乙醇，提取2?3次，合并提取液后過濾，濾液濃縮得到稠膏狀提取物II ; (6)純化:將稠膏狀提取物II用水分散，上大孔吸附樹脂，先用50°C純凈水洗至無色，再使用樹脂體積I?2倍量的5%乙醇洗脫，洗脫液棄去，最后使用75?95%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，洗脫液加入活性炭脫色，減壓回收溶劑，得白藜蘆醇粗晶體，再使用乙醇重結晶2?3次，干燥得到純度為98%以上的白藜蘆醇。
2.如權利要求1所述的一種從虎杖中提取白藜蘆醇的方法，其特征在于:所述步驟(2)中，調節(jié)pH至5，纖維素酶的用量為虎杖粗粉重量的0.2%?0.3%。
3.如權利要求1或2所述的一種從虎杖中提取白藜蘆醇的方法，其特征在于:所述步驟(4)中，所述酶為纖維素酶、葡萄糖苷酶或兩者的混合物。
【文檔編號】C07C39/21GK104341277SQ201410655461
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2014年11月18日 優(yōu)先權日:2014年11月18日
【發(fā)明者】白易, 閆強, 趙永強, 張成亮 申請人:白心亮