一種從薺菜中分離獲得的降血壓多肽的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了11種降血壓多肽，氨基酸序列具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11中任一項(xiàng)所述的序列。本發(fā)明提供的降血壓多肽具有明顯的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制活性，為治療高血壓的食品、藥物或保健品的開發(fā)利用提供了新的解決途徑，具有較好的應(yīng)用前景。
【專利說明】-種從棄菜中分離獲得的降血壓多化

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物蛋白領(lǐng)域，具體地說，是從莽菜中水解得到的多膚作為血管緊張 素轉(zhuǎn)化酶（Angiotensin Conve;rting Enzyme, ACE)抑制劑的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] ACE(血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，Angiotensin Conve;rting Enzyme)在人體內(nèi)的作用是把 血管緊張素 I (Angiotensin I Conve;rting Enzyme)轉(zhuǎn)化成血緊張素 II (Angiotensin II Convening Enzyme)，同時(shí)還會(huì)使血管舒緩激膚失活，而血管緊張素II為強(qiáng)烈的血管收縮 物質(zhì)，從而使體內(nèi)血壓升高。ACE可催化血管緊張素I (十膚）水解成八膚的血管緊張素II， 使血管進(jìn)一步收縮，血壓升高。也可作用于腎上腺皮質(zhì)，促進(jìn)酵固麗的分泌。因此，ACE是 腎素-血管緊張素-酵固麗的重要成分。ACE還催化具有降壓作用的緩激膚水解而失去活 性。ACE廣泛分布于人體各組織，W附睪、睪丸及肺的含量較豐富，其中肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞 ACE活性最高。
[000引 ACE是一種金屬膚酶，含有1個(gè)結(jié)合化化的位點(diǎn)，該就是與底物結(jié)合的"必須結(jié)合 位點(diǎn)仰3ligatcxry Binding Site)"?；Y(jié)合位點(diǎn)是ACE催化反應(yīng)的活性基團(tuán)所在部位。 各種ACE抑制物的共同作用是與ACE活性部位的化化結(jié)合，使之失活。降血壓膚是由數(shù)個(gè) 氨基酸組成的膚，是對(duì)ACE活性區(qū)域親和力較強(qiáng)的競爭性抑制劑，它們與ACE的親和力比血 管緊張素轉(zhuǎn)化酶I (Angl)或舒緩激膚更強(qiáng)，而且也較不容易從ACE結(jié)合區(qū)釋放，降低ACE活 性或使其失去活性，從而阻礙ACE催化血管緊張素I轉(zhuǎn)化成血管緊張素II，使血管不收縮， W及催化水解舒緩激膚成為失活片段的兩種生化反應(yīng)過程，起到降血壓的作用。
[0004] 目前我國臨床常用的一線抗高血壓藥主要包括利尿藥、腎上腺素受體阻斷藥、巧 通道阻滯藥和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制藥等。雖然該些藥具有很好的降壓效果，但都具有 一定的副作用或不良反應(yīng)。而來源于食品的降血壓膚（Angiotensin-eonverting Enzyme Inhibitcxry化ptides，ACEIPs)是一類能夠降低人體血壓的小分子多膚的總稱。由于其降 血壓效果明顯且對(duì)正常血壓無影響、無副作用等優(yōu)點(diǎn)，已成為目前研究的熱點(diǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本申請(qǐng)的發(fā)明人在研究降血壓多膚的過程中發(fā)現(xiàn)，莽菜作用常見的降血壓食物， 其必然具有相應(yīng)的降血壓物質(zhì)能夠起到相應(yīng)的作用。 申請(qǐng)人:從莽菜的水解產(chǎn)物中得到了 一系列的多膚有些具有明顯的抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE)的活性；經(jīng)過大量的篩選和測 序，獲得了多個(gè)具有抑制ace活性的多膚序列。
[0006] 本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供降血壓多膚，所述降血壓多膚的氨基酸序列具有 沈Q ID N0;1、SEQ ID N0;2、SEQ ID N0;3、SEQ ID N0;4、SEQ ID N0;5、SEQ ID N0;6、SEQ ID N0;7、SEQ ID N0;8、SEQ ID N0;9、SEQ ID N0;10、SEQ ID N0;11 中任一項(xiàng)所述的序列。 序列如下：
[0007] 沈Q ID NO ; 1 DHJXY-004 WPF
[0008] 沈Q ID NO ;2 DHJXY-013 RKGWAREPSR
[0009] 沈Q ID NO ;3 D町XY-025 KGSRWPSGSSGE
[0010] 沈Q ID NO ;4 DHJXY-047 GS沈PWVFG
[0011] 沈Q ID NO ;5 DHJXY-086 GEPSRSSGWPP服
[0012] 沈Q ID NO ;6 DHJXY-097 GSYASGRGSS
[0013] 沈Q ID NO ;7 DHJXY-131 YNGAWLSRVVY
[0014] 沈Q ID NO ;8 DHJXY-156 邸HLRYTSQVSGG
[0015] 沈Q ID NO ;9 DHJXY-176 GNGRYYAGSSWTA
[0016] 沈Q ID NO ;10 DHJXY-192 YRGNAWLSRRVEKVSS
[0017] 沈Q ID NO ;11 DHJXY-205 KGGGNA化SVRVGKQQPPG
[001引本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供所述降血壓多膚在制備降血壓藥物中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明的第H個(gè)目的在于提供所述降血壓多膚在制備食品中的應(yīng)用。
[0020] 本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供所述降血壓多膚在制備保健品中的應(yīng)用。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明，所述降血壓多膚用于抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性。
[0022] 本發(fā)明的有益效果；經(jīng)過大量篩選和測序，本發(fā)明從莽菜的水解物中篩選到11種 降血壓多膚，均具有明顯的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制活性，為治療高血壓的食品、藥物或 保健品的開發(fā)利用提供了新的解決途徑，具有非常廣泛的應(yīng)用前景。

【具體實(shí)施方式】
[0023] W下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，W下實(shí)施例僅用于說明本 發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0024] 實(shí)施例1降血壓多膚的獲得
[00巧]取lOg莽菜葉片及根莖，研鉢搗碎，加入2M的化0H溶液處理，通過濾膜出去纖維 素雜質(zhì)。由于酶解的順序?qū)ψ罱K的結(jié)果影響很大，因此，需要分別依次加入適量的蛋白酶 E、膜凝乳蛋白酶、膠原蛋白酶、膜蛋白酶和堿性蛋白酶進(jìn)行徹底酶解，將得到的酶解產(chǎn)物超 濾，超濾后的產(chǎn)物采用Tricine-SDSP-A(iE電泳進(jìn)行分析，根據(jù)不同條帶大小，分別進(jìn)行割 膠回收，測序。
[0026] 實(shí)施例2降血壓多膚活性檢測
[0027] 采取體外模擬測定方法測定上述降血壓多膚對(duì)ACE的抑制活性，得到了具有較好 結(jié)果的11個(gè)多膚，結(jié)果如表1所示。ACE抑制活性的測定原理及方法步驟如下：
[002引多膚的ACE抑制活性測定采用體外模擬測定，體外ACE抑制率測試原理為；底物 馬尿醜組氨醜亮氨酸（HHL)在ACE的催化作用下，可W生產(chǎn)馬尿酸（HA)與一個(gè)組氨酸和亮 氨酸結(jié)合的二膚，通過高效液相色譜的檢測方法測定馬尿酸的含量，進(jìn)而可W間接測定ACE 活性；而降血壓多膚存在時(shí)可W抑制ACE的活性，致使HA的生成減少，從而間接反應(yīng)了降血 壓多膚的活性。
[0029] 測試方法步驟如下；選取巧pendof巧巧管作為反應(yīng)器，編號(hào)1、2、3、4等，1號(hào)管加 入20 y L去離子水作為對(duì)照，2、3、4等管加入20 y L的ACE抑制劑，同時(shí)各管內(nèi)加入10 y L的 底物HHL，37C溫浴5min，然后加入10 y L的ACE啟動(dòng)反應(yīng)，在37C水浴中反應(yīng)40min，反應(yīng) 結(jié)束后，加入100 y L1M肥1終止反應(yīng)。反應(yīng)液進(jìn)行高速離也，過0. 45 y m的濾頭，然后利用 高效液相色譜（冊(cè)LC)測定。HPLC條件是；15%己膳；85%水（0. 1% TFA)，檢測波長228nm， 柱溫3(TC，上樣量lOy L。
[0030] ACE抑制率佩按下式計(jì)算：
[0031] X = (A 對(duì)照-A1) /A 對(duì)照 X 100 %
[0032] 式中：X-ACE抑制率（％ )
[0033] A對(duì)照--對(duì)照組生成HA的峰面積
[0034] A1--實(shí)驗(yàn)組生成HA的峰面積。
[00巧]實(shí)施例3多膚穩(wěn)定性檢測
[0036] 為了使得多膚能夠更加適合藥用，驗(yàn)證多膚在血清中的穩(wěn)定性。將實(shí)施例1得到 的多膚，采用常規(guī)的輔料制備成為注射制劑，注入BALB/c小白鼠體內(nèi)，注射量為10 y g/只 (每個(gè)多膚設(shè)置H個(gè)重復(fù)），每間隔3d抽取血樣，檢測所述多膚時(shí)候存在，結(jié)果如表1所示。
[0037] 表1、降血壓多膚的ACE抑制活性的測定結(jié)果
[0038]

【權(quán)利要求】
1. 降血壓多肽，其特征在于：從薺菜中提取獲得。
2. 如權(quán)利要求1所述的降血壓多肽，其特征在于：所述降血壓多肽的氨基酸序列具有 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ 10勵(lì)：7、5￡〇10勵(lì)：8、5￡〇10勵(lì)：9、5￡〇10勵(lì) ：10、5￡〇10勵(lì)：11中任一項(xiàng)所述的序列。
3. 如權(quán)利要求1所述的降血壓多肽在制備降血壓藥物中的應(yīng)用。
4. 如權(quán)利要求1所述的降血壓多肽在制備食品中的應(yīng)用。
5. 如權(quán)利要求1所述的降血壓多肽在制備保健品中的應(yīng)用。
6. 如權(quán)利要求2?5中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述降血壓多肽用于抑制血管 緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性。
【文檔編號(hào)】C07K7/08GK104447948SQ201410714921
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月25日
【發(fā)明者】紀(jì)清俠 申請(qǐng)人:紀(jì)清俠