專利名稱：一種由白介素-ii組成的生物調(diào)節(jié)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種高效的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，能在體外試驗(yàn)中極大地提高所誘導(dǎo)的LAK細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞殺傷的能力?？芍苯舆\(yùn)用于腫瘤和愛滋病的免疫學(xué)和生物學(xué)治療。
目前在國(guó)際生物免疫學(xué)界發(fā)展和研制生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(BRMS)的熱潮中，干擾素是最典型的調(diào)節(jié)劑，但由于只能取得部分免疫恢復(fù)的效果，其應(yīng)用受到了限制(J.Clin.Oncol.4.1101-1109(1986))，而另一有效的生物調(diào)節(jié)劑白介素-Ⅱ低濃度時(shí)對(duì)LAK細(xì)胞誘導(dǎo)的殺傷力弱，在高濃度時(shí)對(duì)腫瘤殺傷力強(qiáng)，但在體內(nèi)試驗(yàn)有強(qiáng)的副作用以至人們對(duì)之使用前景有所懷疑(JAMA，256，3141(1986))。因此尋求一個(gè)具有完全免疫恢復(fù)效果，低濃度(接近于體內(nèi)環(huán)境)具有誘導(dǎo)LAK細(xì)胞強(qiáng)大的殺傷力的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑很有意義。
本發(fā)明的目的在于提供一種有效的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。它在體內(nèi)的效果類似于體外效果，能誘導(dǎo)LAK細(xì)胞大量殺傷腫瘤細(xì)胞從而能對(duì)腫瘤患者、愛滋病病人及其他免疫缺陷病人起到良好的治療作用。
本發(fā)明的內(nèi)容與要點(diǎn)在于，生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑是由黃芪提取成份F3與白細(xì)胞介素-Ⅱ組成，獲得了比單獨(dú)使用白介素-Ⅱ所誘導(dǎo)的LAK細(xì)胞強(qiáng)大得多的殺傷效果，從而首次開創(chuàng)減少白介素-Ⅱ用量而不影響殺傷效果的習(xí)能性，為白介素-Ⅱ功擊惡性腫瘤的生物免疫學(xué)治療拓開了新的前景。本發(fā)明中黃芪提取成份F3(簡(jiǎn)稱F3)由以下方法制備干燥黃芪根通過200孔羅研磨成細(xì)粉，以每100克干粉1.5升去離子水的比例回流提取。上清液過濾后旋轉(zhuǎn)脫水濃縮15倍。為了分離和鑒定黃芪中的活性部分，用凝膠濾過色層分離法來分離粗提物。將上述樣品置250°F高壓消毒20分鐘后，20℃常溫中超離心(40000×G)30分鐘。將5ml所得上清液加到2.6×100cm口徑Sephacryl S-200柱中(分離范圍是多糖1000-80000分子量)，用去離子水平衡之。過柱以25ml/小時(shí)的液流速度洗脫，每管收集6ml，吸收光強(qiáng)為280nm，參見洗脫圖3。洗脫物分為四部分，分別命名為F1、F2、F3、F4。(F1含有最高分子量成份，F(xiàn)4含最低分子量的成份)。將這些樣品旋轉(zhuǎn)脫水再用水重新調(diào)整到最初上柱容積5ml。高壓消毒后儲(chǔ)存于4℃，供做干重，碳水化合物和蛋白質(zhì)成份分析。F2分子量范圍為13000-22000。成份主要為碳水化合物占99%。蛋白質(zhì)含量不到1%。本發(fā)明的要點(diǎn)在于按上述方法提取的混合物F3以濃度30-1000ug/ml與白介素-Ⅱ濃度為10-2000u/ml形成的組合物作為一個(gè)新的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。這種新的生物調(diào)節(jié)劑比單純使用白介素-Ⅱ誘導(dǎo)的LAK細(xì)胞殺傷的生物學(xué)效應(yīng)大(

圖1，圖2)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與積極效果在于新的生物調(diào)節(jié)劑能在低濃度時(shí)(接近體內(nèi)濃度)誘導(dǎo)LAK細(xì)胞對(duì)腫瘤及其它免疫性疾病的治療，從而提供了一個(gè)具有完全恢復(fù)免疫功效的生物調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明的附圖及說明。
圖1表示加用F3后，經(jīng)白介素-Ⅱ誘導(dǎo)的LAK細(xì)胞殺傷的生物學(xué)效應(yīng)大大增強(qiáng)。橫坐標(biāo)為白介素-Ⅱ的濃度，以u(píng)/ml表示;縱坐標(biāo)為對(duì)A375P黑色素瘤的殺傷百分?jǐn)?shù)。2條殺傷曲線的比較，實(shí)線為單純白介素-Ⅱ所誘導(dǎo)的殺傷，虛線為F3加白介素-Ⅱ所誘導(dǎo)的殺傷。特別是在接近人體真實(shí)情況的低濃度白介素-Ⅱ存在時(shí)，F(xiàn)3的加入提高殺傷非常顯著。如10u/ml的白介素-Ⅱ只有2%的殺傷，而加F3后達(dá)20%殺傷。
圖2，顯示F3對(duì)于LAK細(xì)胞的殺傷增強(qiáng)作用，加用F3后即使對(duì)于低效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比例值，如T∶E＝1∶30，也有明顯的增強(qiáng)效應(yīng)，使之恢復(fù)增強(qiáng)到高效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比例組(T∶E＝1∶60)。如在A375P黑色素瘤系中，低T∶E＝1∶30組未加F3時(shí)殺傷僅有16±8%，加用后上升到33±15%與高T∶E＝1∶60的殺傷水平28±17%相似，說明F3加入后可以減少效應(yīng)細(xì)胞數(shù)量的一倍。
圖3，黃芪組成的提取洗脫圖。
實(shí)施例1、白介素-Ⅱ100u/ml2、黃芪提取物F355ug/ml
權(quán)利要求
1.一種新的生物調(diào)節(jié)劑，其特征在于生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑是由黃芪提取物F3與白介素-Ⅱ組成的組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物調(diào)節(jié)劑，其特征在于黃芪提取物F3濃度為30-1000ug/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的生物調(diào)節(jié)劑，其特征在于白介素-Ⅱ濃度為10-2000u/ml。
4.一種制備權(quán)利要求1所述的生物調(diào)節(jié)劑的方法，其特征在于干燥黃芪根研磨成細(xì)粉，以每100克干粉1.5升去離子水的比例回流提取，上清液過濾后旋轉(zhuǎn)脫水濃縮15倍，經(jīng)凝膠過濾色層分離法分離，樣品在250°F高壓消毒20分鐘后，20℃常溫中超速離心，將上清液過Sephacryl S-200柱，在280nm監(jiān)測(cè)收集F3脫水調(diào)整到所需濃度，F(xiàn)3與白介素-Ⅱ配制成新的生物調(diào)節(jié)劑。
全文摘要
本發(fā)明從黃芪各成分中篩選到一組分(F
文檔編號(hào)C07G99/00GK1047296SQ89103120
公開日1990年11月28日 申請(qǐng)日期1989年5月13日 優(yōu)先權(quán)日1989年5月13日
發(fā)明者儲(chǔ)大同 申請(qǐng)人:儲(chǔ)大同