專利名稱：包含缺氧定位部分的錸和锝絡(luò)合物的制作方法
在核醫(yī)學(xué)領(lǐng)域里，目前采用的許多方法都包括放射性藥物，它可以提供主要器官以及腫瘤中血液流動(灌注)的診斷圖像。這些放射性藥物在人們所感興趣的器官中的區(qū)域性吸收與流動成正比;高流動區(qū)將顯示出最高的放射性藥物濃度;而較低或無流動區(qū)具有較低的濃度。顯示這些區(qū)域差異的診斷圖像可用于鑒別灌注差的區(qū)域，但不能提供在明顯低灌注區(qū)中組織狀態(tài)的代謝信息。
人們需要新的放射性藥物，它能夠具體確定缺氧組織(即氧不足仍活著的組織)的位置。該化合物應(yīng)當(dāng)停留在缺氧區(qū)，而不應(yīng)當(dāng)停留在氧正常區(qū)。具有這些特性的放射性藥物將在缺氧區(qū)顯示出較高的濃度，而在含氧量正常區(qū)和梗塞區(qū)顯示出較低的濃度。該放射性藥物的診斷圖像應(yīng)當(dāng)很容易鑒別出例如心臟和大腦中有醒死危險但仍可挽救的組織。
人們知道，腫瘤中往往有缺氧區(qū)。當(dāng)腫瘤的迅速生長與脈管系統(tǒng)的擴(kuò)張不匹配時便會造成這種情況。Chapman在“Measurement of Tumor Hypoxia by Invasive and Non-Invasive Prvcedures Arevieiw of Recent Clinical Studies”，Radiother.Oncol，20(S1)，13-19(1991)中提出能定位缺氧區(qū)的放射性藥物也可用來提供診斷和治療腫瘤的有用圖像。此外，能定位于腫瘤缺氧區(qū)而且用放射性核素標(biāo)記具有適度α或β輻射的化合物也可用于腫瘤的內(nèi)部放射治療。
正如文獻(xiàn)
Martin et al.(“Enhanced Binding of the Hypoxic Cell Marker[3H]Fluoro-misonidazole”，J.Nucl.Med.，Vol.30，No.2，194-201(1989))and Hoffman et al.(“Binding of the Hypoxic Tracer[H-3]Misonidazole in Cerebral Ischemia”，Stroke，Vol.18，168(1987))所報導(dǎo)的那樣，缺氧定位部分，例如缺氧有關(guān)的硝基雜環(huán)化合物(例如硝基咪唑類及其衍生物)，保留有缺氧組織內(nèi)是公知的。在大腦或心臟里，缺氧通常跟隨著由于例如動脈閉塞或需求增加民血流不足產(chǎn)生的局部缺血。此外，Koh等人(“Hypoxia Imaging of Tumors Using[F-18]Fluoronitroimidazole”，J.NuCl.Med.，Vol.30，789(1989)試圖用18F入射標(biāo)記的硝基咪唑使腫瘤產(chǎn)生診斷圖像。Biskupiak等人(“Synthesis of an(iodovinyl)misonidazole derivative for hypoxia imaging”，J.Med.Chem.Vol.34，No.7，2165-2168(1991)已提出用18F放射標(biāo)記的硝基咪唑作為適用于單光子圖像設(shè)備的放射性藥物。
盡管缺氧定位化合物精確的保留機(jī)理尚不知道，但人們相信硝基雜芳化合物(例如甲氧甲基硝基咪唑乙醇)經(jīng)受了細(xì)胞內(nèi)酶還原(例如，J.D.Chapman，“The Detection and Measurement of Hypoxic Cells in Tumors”，Cancer，Vol.54，2441-2449(1984))。人們相信，這一過程對于氧分壓正常的細(xì)胞來說是可逆的，但是對于氧不是的細(xì)胞來說可發(fā)生進(jìn)一步還原。這導(dǎo)致了反應(yīng)活性體的形成，它結(jié)合在細(xì)胞內(nèi)成分上，為缺氧細(xì)胞優(yōu)選俘獲。因此，缺氧顯像化合物必須具有某特殊性，它必須能夠通過細(xì)胞膜，且必須能夠被例如還原酶(例如黃嘌呤氧化酶)還原。
對于日常臨床應(yīng)用而言，上述缺氧顯像劑不夠理想。例如，正電子放射同位素(例如F)是回旋加速器產(chǎn)生的和短命的，從而要求同位素的產(chǎn)生、幅射化學(xué)合成和診斷圖像在單一區(qū)域內(nèi)完成。基于正電子放射同位素的方法成本很高，而且這種中心在世界上也很少。雖然123Ⅰ-放射性藥物可用于廣泛使用的γ攝影顯像系統(tǒng)，但是123Ⅰ的半衰期為13小時(這便限制了基于該同位素的放射性藥物的分配)，而且生產(chǎn)費(fèi)用高。3H標(biāo)記的硝基咪唑不適用于體內(nèi)臨床顯像，只能用于基礎(chǔ)研究。
醫(yī)學(xué)顯像中優(yōu)選的放射性同位素是99mTc。它的140keVγ光子用于廣泛使用的γ攝影機(jī)是理想的。它具有較短(6小時)的半衰期，考慮到患者用藥的劑量學(xué)問題，這是很有利的。通過商業(yè)化生產(chǎn)的99Mo/99mTc發(fā)生器系統(tǒng)，可以以相對低的價格容易得到99mTc。結(jié)果，世界上超過80%的全部放射性核素圖像都使用該同位素。為了能將放射性藥物廣泛應(yīng)用于缺氧織組成像，化合物必須用99mTc標(biāo)記。就放射治療而言，錸放射性同位素，尤其是186Re和188Re，已被證明是實(shí)用的。
EP 411，491公開了與各種硝基咪唑相連的錸二肟和锝-99m二肟絡(luò)合物的酸加成物。盡管這些絡(luò)合物被認(rèn)為可用于診斷和治療目的，但人們期望在目標(biāo)地區(qū)中獲得更高的錸或锝放射性核素濃度，而用這類封端二肟硝基咪唑絡(luò)合物獲得的濃度較低。已經(jīng)證實(shí)，EP411，491中公開的化合物的還原能力與已知的定位于缺氧區(qū)的2-硝基咪唑衍生物相似。此外，該化合物的還原被黃嘌呤氧化酶催化。但是，該化合物的膜滲透性差。因而，盡管該化合物可以被缺氧細(xì)胞保留，但是這些化合物向這些細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)微區(qū)的轉(zhuǎn)移可卻不太理想。而且，EP411，491所述的絡(luò)合物需要一加熱步驟以形成缺氧定位放射性標(biāo)記化合物。如果能夠在室溫下制備所述絡(luò)合物的話，所述缺氧定位放射性標(biāo)記化合物的日常應(yīng)用將更為方便。
對本領(lǐng)域的一項有用的貢獻(xiàn)將是一種缺氧定位部分的放射性標(biāo)記絡(luò)合物，它保持該部分的生化行為和親合性，它在室溫下用適當(dāng)?shù)囊子玫姆派湫院怂貥?biāo)記，并且它能夠給目標(biāo)區(qū)提供較大量的期望的放射性核素。
本發(fā)明公開了新的配位體、所述配位體的金屬絡(luò)合物、它們的制備方法及其診斷和治療用途。特別公開了金屬絡(luò)合物，例如锝和錸絡(luò)合物，它們與缺氧定位部分連接，并且該絡(luò)合物對細(xì)胞膜的滲透性大于14C-蔗糖。典型的絡(luò)合物锝放射性核素可用作診斷顯像劑，錸放射性核素用作放射治療中的改進(jìn)劑。形成這些新絡(luò)合物的配位體可以包括(但不局限于)二配位基、三配位基或四配位基，它們最好與+5價氧化態(tài)的該金屬形成锝或錸的中性絡(luò)合物。所述配位體的例子如下式所示。
Ⅰa
Ⅰc
式中，至少一個R是-(A)p-R2，其中(A)p是連接基團(tuán)，R2是缺氧定位部分;并且其中其它R基團(tuán)相同或不同，各自選自氫、囟素、羥基、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、-COOR3、-C(O)NIIR3、-NH2、羥烷基、烷氧烷基、羥基芳基、囟代烷基、芳烷基、-烷基-COOR3、-烷基-CON(R3)2、-烷基-N(R3)2、-芳基-COOR3、-芳基-CON(R3)2、芳基-N(R3)2、含氮或氧的5元或6元雜環(huán);或者兩個R基團(tuán)與一個或多個它們相連的原子一起形成碳環(huán)的或雜環(huán)的、飽和的或不飽和的螺環(huán)或稠環(huán)，該環(huán)可被R基團(tuán)取代;
R是氫、硫羥基保護(hù)基或-(A)p-R2;
R是氫、烷基或芳基;
m＝2～5;且P＝0～20。
顯然，按已知方法在與金屬絡(luò)合之前可以將式(Ⅰc)二硫醚還原為相應(yīng)的Ⅰb二硫醇。
連接基團(tuán)(A)p可以是任何化學(xué)部分，它起著將式Ⅰ的缺氧定位部分與絡(luò)合物的其余部分拉開距離或弧立的作用。如果在作用時缺氧定位部分可能被絡(luò)合物其余部分抑制的話，這一點(diǎn)可能很重要。例如，連接基團(tuán)A(如果p＝1)或形成直鏈或支鏈的各個A單元(如果P＞1)各自選自-CH2-，-CHR4-CR4R5-，-CH＝CH-，-CH-CR4-，-CR4＝CR5-，-C≡C-，環(huán)烷基，環(huán)烯基，芳基，雜環(huán)基，氧，硫，
，-NH-，-HC＝N-，-CR4＝N-，-NR4-，-CS-;其中R4和R5各自選自烷基，鏈烯基，烷氧基，芳基，含氮或氧的5或6員雜環(huán)，囟素，羥基或羥烷基。
在考慮本領(lǐng)域已知的各種連接基團(tuán)時，應(yīng)當(dāng)明白，P可以是任何適當(dāng)?shù)闹?，這取決于對期望絡(luò)合物的設(shè)計選擇。P≤20較好，P≤10最佳。
下面列舉的是描述本發(fā)明絡(luò)合物所用術(shù)語的定義。這些定義適用于整個說明書(除非特別限定)，不論是單獨(dú)或作為較大基團(tuán)的一部分。
術(shù)語“烷基”、“鏈烯基”和“烷氧基”是指直鏈和支鏈基團(tuán)。優(yōu)選的是具有1～10個碳原子的基團(tuán)。
術(shù)語“芳基”是指苯基和取代的苯基。優(yōu)選的是苯基和被1，2或3個烷基、囟代烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基、烷氧烷基、囟素、氨基、羥基或甲?；〈谋交?。
術(shù)語“囟化”、“囟代”、“囟素”是指氟、氯、溴和碘。
詞組“5或6元含氮雜環(huán)”是指所有含至少一個氮原子的5元和6元雜環(huán)”。典型的脂肪氮雜環(huán)衍生物具有下式
式中r是0或1;A是-O-、-N-R6、-S-或-CH-R6，其中R6是氫、烷基、芳基或芳烷基。這樣的基團(tuán)包括吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、哌嗪基、4-烷基哌嗪基、4-烷基哌啶基和3-烷基吡咯烷基。詞組“5元或6元含氮雜環(huán)”還包括芳香基團(tuán)。典型的芳香基團(tuán)是吡咯基、咪唑基、噁唑基、吡唑基、吡啶基、噻吩基、噠嗪基、噻唑基、三唑基和嘧啶基。上述基團(tuán)可通過雜原子或碳原子連接。
詞組“5元或6元含氮或氧雜環(huán)”是指所有含至少一個氮或氧原子的5元或6元雜環(huán)。典型的基團(tuán)見上述“5元或6元含氮雜環(huán)”定義下所列。附加的典型基團(tuán)是1，4-二噁烷基和呋喃基。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，比14C蔗糖具有更高細(xì)胞膜滲透性的金屬絡(luò)合物，當(dāng)與缺氧定位部分連接后能提供性能好的產(chǎn)物。根據(jù)所用的金屬，采用上述含缺氧定位部分的配位體構(gòu)成的絡(luò)合物可用作顯像劑、治療劑、放射感應(yīng)劑和缺氧組織細(xì)胞毒素。
細(xì)胞滲透性是細(xì)胞膜的一種性質(zhì)，它描述外來分子向膜內(nèi)部進(jìn)入(滲透)的能力(W.D.Steim，“Transport and Diffusion Across Cell Membrane”New York Academic Press Inc.(1986);A.Kotyk，K.Janacek，J.Koryta，Biophysical Chemistry of Membrane Functions，Chichester，UKJohn Wiley&Sons，(1988))?？蓾B過膜的分子能夠穿過膜到達(dá)另一面的環(huán)境。
下面的例子采用基于Audus和Borchardt研究的細(xì)胞滲透性模型(“Bovine Brain Microvessel Endothelial Cell Monolayers as a Model System for the Blood-Brain Barrier”Ann.New YorkAccad.Sci.，1988，9-18)。該模型由培養(yǎng)的單層牛大腦內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，它形成了緊密的細(xì)胞間連接?；衔锿ㄟ^該單層反映了該化合物以被動、主動和/或被促進(jìn)的機(jī)理穿過完整細(xì)胞膜的能力。將通過的速率與3H2O(高滲透力示蹤劑)和14C-蔗糖(非滲透性示蹤劑)比較。如上所述，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)使用含有缺氧定位部分并具有大于蔗糖細(xì)胞滲透性的絡(luò)合物有利于診斷和/或治療過程。
本發(fā)明絡(luò)合物當(dāng)與放射活性金屬一起使用時，能夠在缺氧組織中提供足量的放射性核素，以增強(qiáng)使用該絡(luò)合物的診斷和治療方法。
本發(fā)明的典型絡(luò)合物如下式所示
式中，R基團(tuán)定義如上，M可以是放射性或非放射性金屬，在未填充的配位它可以帶有其它配位體X和/或Y。例如，當(dāng)M是錸或锝時，
本發(fā)明絡(luò)合物可采用任何放射性金屬，例如，锝或錸用于Ⅰb′絡(luò)合物;锝用于Ⅰa′絡(luò)合物。錸包括Re-186和Re-188放射性核素及其混合物，并且還可以包括Re-185和Re-187。锝包括Tc-99m，Tc-94m和Tc-96。
迄今為至，本發(fā)明絡(luò)合物未見公開，它利用缺氧定位基團(tuán)的性質(zhì)提供具體位置缺氧組織的圖像或治療。M是锝的本發(fā)明絡(luò)合物提供高效的、相對較易使用的診斷顯像產(chǎn)品，其特點(diǎn)是在基本保持游離的缺氧定位基的性質(zhì)的同時，放射性核素絡(luò)合物與缺氧定位基以共價鍵相連?？梢岳斫猓琈是锝的本發(fā)明絡(luò)合物用于診斷的典型例子包括(但不限于)在病理態(tài)條件下例如在心臟、大腦、肺、肝、腎或腫瘤中存在的缺氧組織的顯像。
除了用于缺氧組織的顯像外，本發(fā)明絡(luò)合物也可用作血液流動的標(biāo)記物，例如，用于灌注顯像。該新絡(luò)合物的初始分布與血液流動成正比，因此，給予灌注指示劑后，立即顯像。短時間后，隨著本發(fā)明絡(luò)合物被洗出氧正常組織而保留在缺氧組織中，實(shí)現(xiàn)了缺氧組織的顯像。
此外，當(dāng)M是Re時，本發(fā)明給放射治療適應(yīng)癥提供了穩(wěn)定鍵合的絡(luò)合物。就人們所知道的存在于腫瘤中的缺氧組織而言，本發(fā)明的Re絡(luò)合物適用于放射治療。M是Re的本發(fā)明化合物用于放射治療時，可注射進(jìn)入人體并集中于缺氧組織中。這就使我們能夠?qū)⒎派湫院怂匾詷O大的特異性準(zhǔn)確地瞄準(zhǔn)期望的位置。但是，人們理解，放射治療僅僅在這樣的區(qū)域才有可能該區(qū)域有足量的缺氧組織以便給需要治療的區(qū)域提供治療濃度的錸。
缺氧定位基團(tuán)的例子是缺氧有關(guān)的硝基雜環(huán)基團(tuán)(即，可由硝基部分缺氧有關(guān)的還原而獲得的硝基雜環(huán)基團(tuán))。除上述Koh等人和Hoffman等人的參考文獻(xiàn)所述的缺氧定位基之外，還可以包括下列文獻(xiàn)所述的缺氧定位基;
“The Metabolic Activation of Nitro-Heterocyclic Therapeutic Agents”，G.L.Kedderis et al.，Drug Metabolism Reviews，19(1)，p.33-62(1988)，“Hypoxia Mediated Nitro-Heterocyclic Drugs in the Radio-and Chemotherapy of Cancer”，G.E.Adams，et al.，Biochem.Pharmacology，Vol.35，No.1，pages 71-76(1986);“Structure-Activity Relationships of 1-Substituted 2-NitroimidazolesEffect of Partition Coefficient and Sidechain Hydroxyl Groups on Radiosensitization In vitro”，D.M.Brown et al.，Rad.Research，90，98-108(1982);“Structure-Activity Relationships in the Development of Hypoxic Cell Radiosensitizers”，G.E.Adams et al.，Int.J.Radiat.Biol.，Vol.35，No.2，133-150(1979);and“Structure-Activity Relationships in the Develop-ment of Hypoxic Cell Radiosensitizers”，G.E.Adams et al.，Int.J.Radiat.Biol.，Vol.38，No.6，613-626(1980).
這些文獻(xiàn)都公開了適用于本發(fā)明絡(luò)合物的各種硝基雜環(huán)部分。這些化合物由可以包括一個側(cè)鏈(A)p的硝基雜環(huán)基團(tuán)構(gòu)成，所述側(cè)鏈(A)p起著連接硝基雜環(huán)部分和本發(fā)明式Ⅰ絡(luò)合物其余部分的作用。
當(dāng)缺氧定位基團(tuán)是缺氧有關(guān)的硝基雜環(huán)時，絡(luò)保物的連接鏈/定位基團(tuán)部分可表示為
環(huán)狀部分是5元或6元環(huán)或芳香環(huán)，其中n是5元或6元環(huán)上所能提供的取代位置的總數(shù);
一個或多個R7取代基獨(dú)立地選自氫、囟素、羥基、烷基、芳基、烷氧基、羥基烷基、羥基烷氧基、鏈烯基、芳烷基、芳基烷基酰胺、烷基酰胺、烷基胺和(烷基胺)烷基;
X1可以是氮、氧、硫、-CR4、-CR7＝、CR7R7或-CRR-;且當(dāng)沒有(A)p時(即，P＝0)，硝基雜環(huán)缺氧定位部分通過雜環(huán)上的氮原子或碳原子與本發(fā)明絡(luò)合物的其余部分連接。
上述關(guān)于缺氧定位部分的參考文獻(xiàn)是用來說明先有技術(shù)的觀點(diǎn)是硝基雜環(huán)基團(tuán)的還原能力直接影響其在缺氧組織中的保留。因此，連接基團(tuán)(A)p不但可根據(jù)其將缺氧定位組織與絡(luò)合物其余部分分隔開的能力來選擇，而且也可根據(jù)其對于缺氧有關(guān)的硝基雜環(huán)基團(tuán)的還原能力來選擇。
優(yōu)選的缺氧定位部分(與連接基團(tuán)一起示出)是2-，4-和5硝基咪唑，可表示為
和硝基呋喃和硝基噻唑衍生物，例如
典型的基團(tuán)(包括(A)p連接基團(tuán))包括，但不限于
式中q＝0～5。最優(yōu)選的是硝基咪唑及其衍生物。
式Ⅰa配位體可用已知的方法制備，見US4615876所述。例如，將下式亞烷基二胺
與一當(dāng)量的氯代肟
反應(yīng)，得到二胺-肟
當(dāng)式Ⅰa化合物在一個而不是兩個肟部分包括一個缺氧定位基團(tuán)(可以有連接基團(tuán))時，將上面制得的化合物Ⅳ與Ⅲ′
反應(yīng)，得到
欲將肟基部分用相同取代基取代時，將下式化合物Ⅴ
與2當(dāng)量的式Ⅲ化合物反應(yīng)，可制得在亞烷基部分帶有缺氧定位部分、R2(還可帶有連接基團(tuán))的式Ⅰa化合物Ⅰa′″
式中S＝0～4;t＝0～4，前提是(S+t)不大于4。
類似地，欲將肟基部分用兩個不同取代基取代時，可將式Ⅴ化合物先與1當(dāng)量的式Ⅲ化合物反應(yīng)，然后，將所形成的中間體與1當(dāng)量的式Ⅲ′化合物反應(yīng)。
下面概述制備式Ⅰa化合物的新的和優(yōu)選的方法。該新方法也可用于任何亞烷基二胺二肟的制備。
本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易改變該新的制備PnAO衍生物的方法，以適應(yīng)本公開范圍之外化合物的制備。
該新方法包括采用氯代酮替代上述的式Ⅲ和式Ⅲ′氯代肟。因此，廣義地說，該新方法包括下述制備亞烷基二胺二肟的方法首先將亞烷基二胺與2當(dāng)量的囟代酮反應(yīng)，然后將所形成的二酮轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的亞烷基二胺二肟。類似地，當(dāng)需要不同的肟基部分時，可將亞烷基二胺與1當(dāng)量的第一種氯代酮反應(yīng)，然后再與1當(dāng)量的第二種氯代酮反應(yīng)。按上述已知的方法將所形成的不對稱二酮轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的二肟。
例如，可將式Ⅱ二胺與式Ⅵ氯代酮反應(yīng)，生成式Ⅶ二酮。式Ⅱ、式Ⅵ和式Ⅶ如下
式中X可以是Br，Cl，I，F(xiàn)，最好是Br。二酮Ⅶ可用已知方法轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的二肟產(chǎn)物，例如，用O-三甲基甲硅烷基羥胺處理。
欲使各最終產(chǎn)物的肟基部分不同時，此處的新方法便包括將式Ⅱ化合物與式Ⅲ氯代肟反應(yīng)得到式Ⅳ二胺-肟。隨后，一胺Ⅳ可以與不同取代的囟代酮Ⅵ反應(yīng)得到一酮Ⅷ。
按上述已知的方法可將-酮Ⅷ轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的二肟產(chǎn)物。
或者，為了得到不對稱肟，可將二胺Ⅱ與1當(dāng)量的第一種囟代酮Ⅵ反應(yīng)，所形成的中間體隨后與1當(dāng)量的第二種囟代酮Ⅵ反應(yīng)。
制備式Ⅰa產(chǎn)物的新方法的具體實(shí)施可將式Ⅴ二胺與2當(dāng)量的囟代酮Ⅵ反應(yīng)以得到下式二酮中間體。
可以按上述的已知方法將二酮Ⅶ′轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的二肟，得到式Ⅰa的相應(yīng)產(chǎn)物，其中-(A)p-R2基團(tuán)在配位體的亞烷基部分上。
采用上述方法中的原料可制得不對稱的式Ⅰa化合物，即將兩個非類似囟代酮Ⅵ與亞烷基二胺Ⅱ或Ⅴ先后偶合。
類似地，式Ⅳ化合物可以與式Ⅵ′化合物反應(yīng)，當(dāng)用Ⅵ′a時得到相應(yīng)的酮肟Ⅸ。
式Ⅵ′為
式中R′＝R，前提是R′中的一個基團(tuán)必須是-(A)p-R2，例如，式Ⅵ′aⅥ′a
式Ⅸ為Ⅸ
式中R′中有一個必須是-(A)p-R2。
按上述已知的方法可將酮肟Ⅸ轉(zhuǎn)烴為二肟Ⅰa。
為了制備下式化合物，
可將按WO8910759中Mallinckrodt所述方法制備的化合物ⅩⅩ
與化合物Ⅺ偶合
(式中L是離去基，例如囟素)，得到化合物ⅫⅫ
采用已知的二硫醚還原劑，例如，上述WO8910759所公開的三(2-羥乙基)膦，二硫蘇糖醇等，可將式Ⅻ三級胺二硫醚還原為期望的式Ⅰb′二硫醇產(chǎn)物(其中R＝H)。或者，在與化合物Ⅺ偶合之臆，將二硫醚Ⅹ還原為二硫醇形式。這時，應(yīng)當(dāng)在與Ⅺ偶合之前進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的硫醚保護(hù)。
為了制備化合物Ⅰb′″
可將式Ⅴ化合物與式ⅩⅢ化合物反應(yīng)，得到式ⅩⅣ化合物。式ⅩⅢ為ⅩⅢ
按下述文獻(xiàn)制備Kung et al.，“Synthesis and Biodistribution of Neutral Lipid-soluble Tc-99m Complexes that Cross the Blood-Brain-Barrier”，J.Nucl.Med.，25，326-332(1984))式ⅩⅣ如下ⅩⅣ
用還原劑(例如硼氫化鈉)處理化合物ⅩⅣ，得到下式中間體ⅩⅤ
用上述已知的硫醚還原劑將其還原為相應(yīng)的二硫醚產(chǎn)物Ⅰb′。
用已知的酞偶合方法，可制得下式化合物Ⅰb″′
式中Z和/或W是-(A)p-R2，而另一個Z和W可是以R。例如，下式化合物ⅩⅥ
可以與下式化合物ⅩⅦ
偶合，得到下式中間體ⅩⅧ
隨后，中間體ⅩⅧ可以與下式化合物偶合
(式中Z和W定義同式Ⅰb′″中的定義)，得到下式化合物
將化合物ⅩⅩ還原，例如用硼烷處理，得到具有如下結(jié)構(gòu)的式Ⅰb″化合物。
在制備本發(fā)明化合物的全部上述反應(yīng)中，對于專業(yè)人員來說，顯然在各個反應(yīng)中，硫基、氨基和酮基可能需要保護(hù)，并且隨后按已知的技術(shù)將如此保護(hù)的產(chǎn)物去保護(hù)。
除非另有說明，在所有下述的實(shí)施例和過程中，M是錸，包括使用“載體錸”?！拜d體錸”是指所用的錸化合物含有濃度＞10-7M的非放射性錸。
M是錸的本發(fā)明絡(luò)合物的制備可以用+5或+7氧化態(tài)的錸來完成。錸是Re(Ⅶ)態(tài)的化合物的例子是NH4ReO4或KReO4。Re(Ⅴ)以例如[ReOCl4](NBu4)，[ReOCl4](AsPh4)，ReOCl3(PPh3)2和ReO2(吡啶)
的形式出現(xiàn)。也可以采用專業(yè)人員已知的其它試劑。
M是锝的本發(fā)明絡(luò)合物的制備最好用高锝酸根離子形式的锝來進(jìn)行。就Tc-99m而言，高锝酸根離子最好從商購的锝-99m母女發(fā)生器(Technetium-99m Parent-daughter generators)獲得，這樣的锝是+7氧化態(tài)的。采用這種發(fā)生器來產(chǎn)生锝離子是本領(lǐng)域公知的，詳見美國專利3369121號和3920995號。該發(fā)生器通常以鹽水溶液為洗脫劑，高锝酸根離子以鈉鹽的形式得到。采用本領(lǐng)域公知的方法，也可以由回旋加速器產(chǎn)生的放射性锝制備高锝酸鹽。
锝絡(luò)合物的形成按下述方法進(jìn)行最好將標(biāo)準(zhǔn)鹽水和高锝酸根離子的混合物與適當(dāng)?shù)呐湮惑w混合，所述配位體是含至少一個R基團(tuán)的-(A)p-R2，其中(A)p是連接基團(tuán);R2是缺氧定位部分?？梢允褂眠m當(dāng)?shù)木彌_液或生理上可接受的酸或堿調(diào)節(jié)PH使之適于標(biāo)記配位體。這將隨著配位體的性質(zhì)而變化;例如對于Ⅰa型配位體，應(yīng)采用～5.5至～9.5的PH值，最好用7.0-8.5的PH值。對于Ⅱb型配位體，應(yīng)采3-8的PH值，優(yōu)選～6.0的PH值。然后，加入還原劑源將高锝酸根降低至Tc(Ⅴ)氧化態(tài)以便與配位體螯合。亞錫離子是優(yōu)選的還原劑，并且可以亞錫鹽的形式引入，所述亞錫鹽的例子有氯化亞錫、氟化亞錫、酒石酸亞錫或檸檬酸亞錫。還有本領(lǐng)域公知的其它適當(dāng)?shù)倪€原劑。反應(yīng)最好在水或水/醇混合物中，于室溫左右，用約1分鐘至1小時的時間進(jìn)行。還原劑的濃度應(yīng)為5-50μg/ml。配位體(當(dāng)存在時)的濃度為0.5-2mg/ml。
或者，本發(fā)明锝合物可以用配位體交換的方法制備。在能形成易變锝絡(luò)合物的配體(如甘露糖醇、羥基羧酸根配位體葡庚糖酸根、葡糖酸根、檸檬酸根、蘋果酸根或酒石酸根)存在下，在適于上述交換配位體的PH值(通常為5-8)下，將TcO-4還原，制得易變Tc(Ⅴ)絡(luò)合物。加入上述鉭鹽之類的還原劑，它使得Tc與交換配位體生成易變的還原絡(luò)合物。該還原的Tc絡(luò)合物隨后在適當(dāng)?shù)腜H值(如上所述)下與含有-(A)p-R2的配位體混合。易變的交換配位體被含有缺氧定位部分的配位體從金屬中替換出來，從而形成期望的本發(fā)明锝絡(luò)合物。
本發(fā)明絡(luò)合物可以在應(yīng)用它的場所或其附近方便地制備。裝有全部制備本發(fā)明絡(luò)合物所需成分的單一小瓶或多小瓶組是本發(fā)明的一個整體部分。
單一小瓶應(yīng)裝有配位體、亞錫鹽源、或其它藥學(xué)上可接受的還原劑，并和藥學(xué)上可接受的酸或堿緩沖調(diào)節(jié)PH至前述值。管中所裝物料最好是冷凍干燥的形式。這樣的單一小瓶可以裝有交換配位體，例如葡庚糖鹽、葡糖酸鹽、甘露糖醇、蘋果酸鹽、檸檬酸或酒石酸;還可裝有反應(yīng)改良劑，例如二亞乙基三胺五乙酸或乙二胺四乙酸。也可需要額外的添加劑以提高放射化學(xué)純度和最終產(chǎn)品的穩(wěn)定性，或幫助小瓶的生產(chǎn)。所述添加劑的例子有加溶劑(例如α-，β-，或γ-糊精)、抗氧劑(例如抗環(huán)血酸)，填料(例如NaCl)。
多小瓶組可在一個瓶中裝有生成上述易變的Tc(Ⅴ)絡(luò)合物所需的除高锝酸鹽之外的各個成分。所用的配位體的數(shù)量和類型以及還原劑的數(shù)量和類型完全取決于欲制備的交換絡(luò)合物的性質(zhì)，適當(dāng)?shù)臈l件對專業(yè)人員是熟知的。將高锝酸鹽加到該瓶中，經(jīng)適當(dāng)時間后，將該瓶中物料加到第二個瓶中，第二個瓶中裝有包含缺氧定位基團(tuán)部分的配位體以及將PH調(diào)至最佳值的適當(dāng)緩沖液。經(jīng)過大約5-60分鐘的反應(yīng)時間，便生成了本發(fā)明絡(luò)合物。該多小瓶組的兩個瓶中的物料最好都是冷凍干燥的。像上述單一小瓶的情況一樣，可能需要加入額外的添加劑以提高放射化學(xué)純度和最終產(chǎn)物的穩(wěn)定性，或者幫助小瓶的生產(chǎn)。
本發(fā)明絡(luò)合物可以大丸劑或緩慢靜脈輸注的形式向宿主給藥。注射劑量將根據(jù)期望的用途(例如產(chǎn)生有用的診斷圖像或期望的放射治療效果)來確定，這是本領(lǐng)域公知的。
優(yōu)選的本發(fā)明絡(luò)合物是那些其中缺氧定位部分是缺氧有關(guān)的硝基雜環(huán)基團(tuán)的絡(luò)合物。最優(yōu)選的是那些其中缺氧定位部分是2-硝基咪唑或其衍生物的絡(luò)合物。
在本發(fā)明絡(luò)合物中，優(yōu)選的(A)p是烷基、氧代烷基、羥烷基、羥基烷氧基、鏈烯基、芳烷基、芳基烷基酰胺、烷基酰胺、烷基胺和(烷基胺)p烷基。
最優(yōu)選的(A)選自
其中A3和A3′是相同或不同的烷基。
優(yōu)選的絡(luò)合物是
式中M1是锝;M2是锝或錸;而且式中至少一個R基團(tuán)是-(A)p-R2。
下述實(shí)施例是本發(fā)明具體實(shí)施的例子。
實(shí)施例13，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟A.N-(二甲基烯丙基)-2-硝基咪唑?qū)⑻妓釟溻c(0.42g，50mmol)和二甲基烯丙基溴(3.28g，22mol)和二甲基烯丙基溴(3.28g，22mol)加到2-硝基咪唑(2.26g，20mmol)的無水乙腈(10ml)混懸液中，攪拌回流16小時。減壓除去溶劑，殘留物溶于乙酸乙酯中。將溶液過濾，無水硫酸鈉干燥。除去溶劑得油狀物，用石油醚重結(jié)晶(35-50℃)。產(chǎn)量1.83g，m.p.48-49℃。
1H NMR(CDCl3)δ7.24(s，1H)，7.22(s，1H)，5.46(m，1H)，5.1(d，2H)，1.91(s，3H)and 1.90(s，3H).
B.3-氯-3-甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-2-亞硝基丁烷0℃下，將濃鹽酸(1ml，10mmol)緩慢加入攪拌著的標(biāo)題A化合物(1.81g，10mmol)的亞硝酸異戊酯(1.18g，10mmol)混懸液中，劇烈攪拌。讓溶液升至室溫，該溫度下攪拌4-6小時。濾出沉淀固體，用乙醇充分洗滌，干燥。產(chǎn)量0.31g，m.p.102-108℃(分解)。
1H NMR(DMSO-d6)δ11.9(s，1H)，7.25(s，1H)，7.05(s，1H)，5.45(s，2H)and 1.8(s，6H).
C.N-(3-氨基丙基)-1-氨基-1，1-二甲基-2-丁酮肟將3-氯-3-甲基-2-硝基異丁烷(2.72g，20mmol，按文獻(xiàn)E.G.Vassian等人，Inorg.Chem.1967;6∶2043-2046方法制備)的甲醇(20ml)混懸液滴加到1，3-二氨基丙烷(8.8g，120mmol)的無水甲醇(15ml)溶液中。將反應(yīng)混合物于0-5℃下攪拌，同時加入二胺。加完后，讓反應(yīng)混合物回升至室溫，隨后加熱回流6小時。蒸去甲醇，殘留物用水處理，用冰冷卻。濾出固體，用冰水洗。用10%氫氧化鈉將濾液調(diào)至PH11，然后減壓干燥。所得膠狀固體用異丙醚反復(fù)提取，合并濾液，冷卻、過濾。濃縮濾液，油狀殘留物再次用1∶1熱乙醚/己烷提取。合并提取液，冷卻，再次過濾。蒸去溶劑，得半固體，用己烷/乙醚重結(jié)晶兩次，得無色固體。產(chǎn)量1.8g，m.p.72-74℃.1H NMR(DMSO-d6)δ2.6(t，2H)，2.3(t，2H)，1.8(s，3H)，1.5(m，2H)and 1.2(s，6H).
D.3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟將二乙基異丙基胺(2.6mg，20mmol)和標(biāo)題B化合物(2.47g，10mmol)加到標(biāo)題C化合物(2.0g，12mmol)的無水二氯甲烷(15ml)溶液中。充氮下，將所得混合物回流16小時。用15ml無水乙醚將反應(yīng)混合物稀釋，濾出沉淀的固體，用熱的1∶1乙醚/二氯甲烷充分洗滌數(shù)次。干燥的固體磨成粉，與25ml水一起在5℃下攪拌10分鐘。濾出不溶固體，和冰水多次洗滌，直至HPLC分析中觀察到僅一個峰為至。產(chǎn)物經(jīng)空氣干燥數(shù)小時后，得淺黃色固體。產(chǎn)量1.27g，m.p.146-148℃。
1H NMR(CD3OD)δ7.4(s，1H)，7.18(s，1H)，5.4(s，2H，NI-CH2)，2.4(q，4H，N-CH2)，1.9(s，3H，N＝C-CH3)，1.6(m，2H，C-CH2-C)，1.35(s，6H，gem dimethyl)and 1.3(s，6H，gem dimethyl).
M.S.384(M+H)and 401(M+NH4).
元素分析C16H29N7O4·2.5H2OC，47.33;H，7.20;N，24.15;
測定值C，47.26;H，7.24;N，22.58.
實(shí)施例23，3，9，9-四甲基-1-(4-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟A.N-(二甲基烯丙基)-2-硝基咪唑用無水碳酸氫鈉(8.3g，100mmol)處理4(5)-硝基咪唑(5.65g，50mmol)的無水二甲基甲酰胺(10ml)溶液，攪拌15分鐘。室溫下滴加4-溴-2-甲基-2-丁烯。在氮?dú)夥罩?，?0-60℃攪拌16小時。減壓除去二甲基甲酰胺，殘留物溶于乙醚(100ml)中。乙醚層用水洗，無水硫酸鈉干燥。蒸發(fā)乙醚，剩下油狀物，用石油醚反復(fù)洗(5×25ml)。所得淺紅色油經(jīng)TLC檢測為均相，不經(jīng)純化可直接用于后續(xù)步驟，產(chǎn)量7.95g。
1H NMR(CDCl3)δ1.7(s，3H，Me)，1.75(s，3H，Me)，4.6(d，2H，N-CH2)，5.4(t，1H，olefinic H)，7.5(s，1H，imi H)and 7.8(s，1H，imi H).M.S.[M+H]+182.
B.3-氯-3-甲基-1-(4-硝基-1H-咪唑-1-基)-2-亞硝基丁烷將標(biāo)題A的烯烴(7.9g，40mmol)和亞硝酸異戊酯(5.3g，45mmol)的二氯甲烷溶液冷卻至0℃，保持反應(yīng)溫度為0-5℃，滴加濃鹽酸(5ml，50mmol)處理。攪拌反應(yīng)混合物至原料烯烴全部消耗完(用TLC，約2小時)。濾出沉淀的固體，用乙醇洗，室溫真空干燥16小時，產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。產(chǎn)量0.6g，m.p.120-122℃。
(DMSO-d6)δ1.9(s，6H，gem dimethyls)，5.18( H，N-CH2)，7.94(s，1H，imi H)，8.32(s，1H，im，H)，and 12.24(s，1H，N-OH).M.S.[M+H]+247.
C.3，3，9，9-四甲基-1-(4-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟將二異丙基胺(0.36g，2mmol)加到實(shí)施例1的C化合物(0.356g，2mmol)的無水二氯甲烷(5ml)溶液中，隨后加入固體標(biāo)題B氯代肟(0.446g，1.8mmol)，混合物于氮?dú)夥罩袛嚢杌亓?6小時。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠閃色譜純化。用15∶85MeOH/CH2Cl2洗脫，得膠狀物，用異丙醚和丙酮重結(jié)晶3次，得無色固體。產(chǎn)量0.06g，m.p.152-154℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.17(s，6H，2CH3)，1.26(s，6H，2CH3)，1.41(m，N-CH2-CH2-N，2H)，1.76(s，3H，N＝C-CH3)，2.26(m，4H，N-CH2)，4.98(s，2H，imi N-CH2)，7.9(s，1H，imi H)，8.29(s，1H，imi H)，10.42(s，1H，N-OH)and 11.63(s，1H，N-OH).
元素分析C16H29N7O4·H2OC，48.96;H，7.45;N，24.98;
測定值C，49.11;H，7.49;N，24.76.
實(shí)施例34，4，10，10-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-5，9-二氮雜十二烷-3，11-二酮二肟A.N-(4-甲基戊-3-烯-1-基)-2-硝基咪唑向2-硝基咪唑(3.0g，27mmol)的無水二甲基甲酰胺(25ml)溶液中，先后加入無水碳酸氫鈉(4.2g，50mmol)和5-溴-2-甲基-2-戊烯(5.0g，30.67mmol)。充氮下，將反應(yīng)混合物加熱至60-70℃，攪拌16小時。于50-60℃減壓(＜1mm)除去溶劑二甲基甲酰胺和未反應(yīng)溴化物，得糊狀物，將其溶于水(50ml)中，用乙酸乙酯(5×50ml)提取。合并有機(jī)提取液，濃縮得棕色油，用石油醚(b.p.40-60℃)重結(jié)晶，得黃色固體，產(chǎn)量4.8g，m.p.51-52℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.55(s，3H，CH3)，1.75(s，3H，CH3)，2.7(q，2H，olefinic CH2)，4.5(t，2H，N-CH2)，5.2(t，1H，olefinic H)，7.1(s，1H，imidazole H)，7.2(s，1H，imidazole H).M.S.[M+H]+196，[M+NH4]+213.
B.4-氯-4-甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-3-亞硝基戊烷將亞硝酸異戊酯(1.4g，12mmol)加到冰冷卻的標(biāo)題A烯烴(2.17g，12mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中，滴加濃鹽酸處理該混合物，反應(yīng)混合物溫度保持在0℃以下。再攪拌2小時后，過濾分離生成的固體，用冰冷的乙醇洗滌。淺黃色產(chǎn)物真空干燥，不用進(jìn)一步純化，直接用于后續(xù)步驟。產(chǎn)量1.7g，m.p.105-107℃1H NMR(DMSO-d6)δ1.7(s，6H，gemdimethyl)，2.9(t，2H，oxime CH2)，4.7(t，2H，N-CH2)，7.1(s，1H，imidazole H)，and 7.5(s，1H，imidazole H).M.S.[M+H]+261，[M+NH4]+278.
C.4，4，10，10-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-5，9-二氮雜十二烷-3，11-二酮二肟將碳酸氫鈉(0.42g，5mmol)加到實(shí)施例1的標(biāo)題C化合物(0.86g，5mmol)的無水四氫呋喃(10ml)溶液中，然后用標(biāo)題B化合物(1.3g，5mmol)處理反應(yīng)混合物。將該混合物攪拌下加熱回流6小時。溶液體積減至約5ml，用5g硅膠閃色譜處理粗產(chǎn)物，真空干燥得自由流動粉末狀物。將其裝入硅膠柱，經(jīng)3次色譜純化。用9∶1二氯甲烷/甲醇洗脫，得低熔點(diǎn)固體。產(chǎn)量0.13g，m.p.65-67℃1H NMR(DMSO-d6)δ1.2(s，12H，4CH3)，1.45(m，2H，5CH2)，1.8(s，3H，＝N-CH3)，2.3(m，4H，N-CH2)，2.85(t，2H，＝N-CH2)，4.8(t，2H，imidazole N-CH2)，7.2(s，1H，imidazole H)，7.6(s，1H，imidazole H)，10.4(s，1H，N-OH)，10.85(s，1H，N-OH).M.S.[M+H]+398.
元素分析C17H31N7O4C，51.37;H，7.86;N，24.67;
測定值C，51.89;H，7.89;N，23.27.
實(shí)施例46-羥基-3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟A.N-(3-氨基-2-羥基丙基)-1-氨基-1，1-二甲基-2-丁酮肟將3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷(6.75g，0.05mmol)滴加到冷卻的(0℃)1，3-二氨基-2-羥基丙烷(14g，0.155mol)的甲醇(75ml)溶液中。加完后，讓反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，加熱回?2小時，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去甲醇。殘留物用氨的甲醇溶液中和。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去過量甲醇。將殘留物溶于二氧六環(huán)-水(2∶1，300ml)中，冷卻至0℃。加入碳酸鈉(31.8g，0.3mol)，再加二碳酸二叔丁酯(65.47g，0.3mol)。反應(yīng)混合物于0℃攪拌2小時，室溫攪拌6小時。
用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去二氧六環(huán)和水，殘留物倒入水中，用乙酸乙酯提取。乙酸乙酯液用水洗、用硫酸鈉干燥。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去乙酸乙酯，殘留物經(jīng)硅膠柱色譜提純(己烷-乙酸乙酯50∶50)。先頭餾分中洗脫出二叔丁氧羰基-1，3-二氨基-2-羥基丙烷)。收集這些餾分，蒸去溶劑，得粘稠油。產(chǎn)量4.9g。在室溫下，將該粘性油用甲醇鹽酸(25ml)處理2小時。減壓除去甲醇，所得固體用氨的甲醇溶液中和，得白色產(chǎn)物。不必進(jìn)一步純化可直接用于下步反應(yīng)。產(chǎn)量3.98g。
1H NMR(D2O)δ1.54(s，6H，C(CH3)2)，1.80(s，3H，CH3)，2.92-3.32(m，4H，CH2)，4.18(m，1H，CHOH).
B.6-羧基-3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟鹽酸鹽將實(shí)施例1的標(biāo)題B化合物(1.6g，0.0065mol)加到由標(biāo)題A化合物(1.4g，0.0075mol)、二異丙基乙胺(1g，0.0078mol)和乙腈(10ml)組成的漿液中，室溫攪拌24小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去乙腈，所得粘黃色粘稠油經(jīng)硅膠色譜提純(CH2Cl2∶CH3OH(9∶1)和CH2Cl2∶CH3OH(9∶2))合并含產(chǎn)物餾分，蒸去溶劑，得粘稠油。該油的1HNMR顯示含產(chǎn)物和二異丙基乙胺。將油置于真空中12小時。用二氯甲烷研磨數(shù)次以除去二異丙基乙胺。隨后將殘留物溶于水，冷凍干燥。產(chǎn)量0.65g，m.p.114-115℃
1H NMR(D2O)δ1.33，1.44and1.88(s，15H，CH3)，2.42-2.92(m，4H，CH2)，3.90(m，1H，CHOH)，5.34(s，2H，CH2N)，7.14and7.31(s，2H，C＝NandC＝C).M.S.calc′d 400.2308;測定值400.2298.
實(shí)施例53，3，9，9-四甲基-6-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙酰氨基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟A(N，N′-二叔丁氧羰基)-2-甲磺酰基丙烷-1，3-二胺用45分鐘的時間，將甲磺酰氯(6.01g，4.1ml，0.0525mol)加到冰冷卻(0℃)的1，3-二-N-叔丁氧羰基-2-羥基丙烷(14.5g，0.05mol)和三乙胺(6.07g，8.5mol)的二氯甲烷溶液中。0℃攪拌1小時，然后室溫攪拌12小時。濾去沉淀的三乙胺鹽酸鹽，減壓蒸發(fā)濾液至干，殘留物倒入水中。過濾分離所得固體，空氣干燥，不必進(jìn)一步純化可直接使用。產(chǎn)量18g，m.p.139-140℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.41(s，18H)，3.08(s，3H)，3.30(m，2H)，3.45(m，2H)，4.65(m，1H)，5.15(bs，2H).
B.1，3-二-N-叔丁氧羰基-2-疊氮丙烷將疊氮化鈉(6.5g，0.1mol)加到標(biāo)題A化合物(9.2g，0.025mol)的無水二甲基甲酰胺(50ml)溶液中，70℃下攪拌12小時。將反應(yīng)混合物冷卻，倒入水中。過濾分離沉淀固體，水洗，空氣干燥。產(chǎn)量6.45g，m.p.90-91℃1H NMR(CDCl3)δ1.45(s，18H)，3.15(m，2H)，3.35(m，2H)，3.64(m，1H)，5.04(bs，2H).
C.1，3-二-N-叔丁氧羰基-1，2，3-三氨基丙烷將10%鈀-炭(1g)加到標(biāo)題B化合物(6.5g，0.0205mol)的甲醇(25ml)溶液中，在50Psi下氫化12小時。濾除催化劑，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去甲醇。將所得油靜置固化。產(chǎn)量4.82g(82%)，m.p.94-96℃1H NMR(CDCl3)δ1.42(s，18H，Boc)，2.89(m，1H，CHNH2)，3.12(m，4H，CH2)，5.20(m，2H，NH).
D.1，3-二-N-叔丁氧羰基-2-(2-硝基咪唑-1-基)-乙酰氨基-1，3-二氨基丙烷將羰基二咪唑(3.08g，0.019mol)加到2-(2-硝基咪唑-1-基)乙酸(3.1g，0.018mol，按文獻(xiàn)P.Webb et al.J.Lab.Cmpds.Radiopharm.1990;28265-271方法制備)的二甲基甲酰胺(25ml)溶液中，于室溫攪拌45分鐘。加入1，3-二-N-叔丁氧羰基-2-氨基丙烷(5.3g，0.018mol)，所得混合液于50℃攪拌12小時。真空除去二甲基甲酰胺，殘留物用水處理。過濾分離生成的固體，空氣干燥。產(chǎn)量6.5g。
1H NMR(CDCl3)δ1.44(s，18H)，2.90(m，1H)，3.08(m，4H)，5.24(bs，2H).
E.2-(2-硝基咪唑-1-基)乙酰氨基-1，3-二氨基丙烷二鹽酸鹽將標(biāo)題D化合物(6.5g)溶于鹽酸的甲醇溶液(20ml)中，室溫攪拌1小時。加入無水乙醚(200ml)使二胺鹽酸鹽沉淀。產(chǎn)量4.25g。
1H NMR(dihydrochloride in D2O)δ3.08-3.35(m，4H)，4.51(m，1H)，5.31(s，2H)，7.19(s，1H)，7.43(s，1H).1H NMR(free base in D2O)δ3.01-3.28(m，4H)，4.45(m，1H)，5.21(s，2H)，7.15(s，1H)，7.39(s，1H).
F.3，3，9，9-四甲基-6-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙酰氨基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮將碳酸氫鈉(5.88g，0.07mol)和2-溴-2-甲基-丁-3-酮(6.1g，0.07mol，按文獻(xiàn)W.Pfleiderer et al.，Ann.Chem.，1966;993008-3021方法制備)加到由標(biāo)題E化合物(4.25g，0.0135mol)和二甲基甲酰胺(40ml)組成的漿液中，于45℃攪拌12小時。加入二氯甲烷(200ml)，濾除不溶物。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去二氯甲烷，真空除去二甲基甲洗胺，殘留物經(jīng)硅膠色譜純化，乙酸乙酯/甲醇(9∶1)洗脫。收集含產(chǎn)物餾分。蒸發(fā)溶劑得期望的二胺二酮。產(chǎn)量2.56g。從己烷中結(jié)晶析出的產(chǎn)品樣品。m.p.為96-97℃。
1H NMR(D2O)δ1.22(d，12H，C(CH3)2)，2.12(s，6H，CH3)，2.32-2.58(m，4H)，3.9(m，1H，CH)，5.21(s，2H)，7.15(s，1H)，7.39(s，1H).M.S.(M+H)+＝411.
G.3，3，9，9-四甲基-6-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙酰氨基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟將O-三甲基甲硅烷基羥胺(1g，1.22ml，0.01mol)加到標(biāo)題F化合物(550mg，0.00133mol)的二氯甲烷(2ml)溶液。將反應(yīng)混合物于室溫靜置24小時。向反應(yīng)混合物中加甲醇(2.0ml)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑。殘留固體用水結(jié)晶。產(chǎn)量329mg，m.p.72-73℃。
1H NMR(D2O)δ1.12(s，12H，C(CH3)2)，1.72(s，6H，CH3)，2.22-2.45(m，4H)，3.8(m，1H，CH)，5.1(s，2H)，7.15(s，1H)，7.39(s，1H).M.S.(M+H)+＝441.
元素分析C18H32N8O5C，49.08;H，7.32;N，25.44;
測定值C，49.42;H，7.54;N，25.65.
實(shí)施例5a3，3，9，9-四甲基-6-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基)-4，8-二氨雜十一烷-2，10-二酮二肟A.芐基2-甲磺酰氧基乙基醚將三乙胺(18g，0.178mol)加到芐氧基乙醇(25g，0.165mol)的二氯甲烷(200ml)溶液中。將溶液冷卻至0℃，用0.5小時滴加甲磺酰氯(19.95g，0.174mol)。加完后，反應(yīng)混合物再于0℃攪拌1小時、于室溫攪拌12小時。濾出沉淀的三乙胺鹽酸鹽，用無水醚洗。將濾液和洗滌液合并，濃縮成粘稠油(37g)。
1H NMR(CDCl3)δ3.15(s，3H，CH3)，3.82(t，2H)，4.52(t，3H)，4.67(s，2H)and7.42(m，5H，Ar-H).
B.芐基2-溴乙基醚將標(biāo)題A化合物(37g，0.16mol)加到溴化鋰(86.85g，0.8mol)的丙酮(300ml)溶液中，溫和地加熱回流12小時。將反應(yīng)混合物冷卻，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去丙酮。將殘留物溶于乙醚，連續(xù)用水洗，干燥。蒸去乙醚得液體，減壓蒸餾得產(chǎn)物(32g)，b.p.95℃/1.5mm。
1H NMR(CDCl
)δ3.60(t，2H)，3.90(t，3H)，4.70(s，2H)and7.46(m，5H，Ar-H).
C.1-(2-芐氧基乙基)丙二酸二乙酯將丙二酸二乙酯(8.0g，0.05mol)加到由1.2g(0.052克原子)鈉溶于300ml乙醇制得的乙醇鈉溶液中。向溶液中滴加標(biāo)題B化合物(10.75g，0.05mol)，加熱回流12小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸去乙醇，殘留物倒入水中，用乙醚提取，硫酸鎂干燥。蒸發(fā)乙醚得油狀物。真空蒸餾得9.5g產(chǎn)物。
b.p.185℃/2mm.1H NMR(CDCl3)δ1.21(t，6H)，2.24(q，2H)，3.52(m，3H)，4.15(m，4H)，4.45(s，2H)and7.31(m，5H，Ar-H).
D.1-(2-芐氧基乙基)丙二酰胺用氨水的乙醇溶液處理標(biāo)題C化合物(9.0g)，反應(yīng)混合物于室溫攪拌12小時。蒸去溶劑得白色固體，用水結(jié)晶，得產(chǎn)物(4.5g)m.p.165-70℃.1H NMR(DMSO-d6)δ1.92(m，2H)，3.14(t，1H)，3.35(m，2H)，4.12(s，2H)，7.05(s，2H)，7.22(s，2H)and7.34(m，5H，Ar-H).
E.1，3-二氨基-N，N′-二叔丁氧羰基-2-芐氧基乙基丙烷將BH3-THF復(fù)合物(1M，750ml)加到標(biāo)題D化合物(28.0g，0.118ml)的無水四氫呋喃(500ml)漿液中，1小時加完。反應(yīng)混合物于室溫攪拌48小時。滴加水使過量硼烷分解。加入稀鹽酸直至溶液呈酸性。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去四氫呋喃。殘留物混懸于二氧六環(huán)-水(2∶1，500ml)中。加入碳酸鈉(31.8g，0.27mol)，將混合物冷卻至0℃。加入二碳酸二叔丁酯(58.9g，0.27mol)，將混合物在0℃攪拌2小時，室溫攪拌12小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去二氧六環(huán)-水，殘留物用水處理。用乙酸乙酯提取粗產(chǎn)物，用硫酸鈉干燥提取液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去乙酸乙酯，所得粘稠油經(jīng)硅膠色譜提純(己烷∶乙酸乙酯7∶3)，得27g標(biāo)題E化合物。
1H NMR(CDCl3)δ1.41(s，18H，tBoc)，1.52(m，2H，CH2CH)，1.72(m，1，CH)，2.9-3.2(m，4H，CH(CH2-NHtBoc)2)，3.6(m，2H，OCH2)，4.5(s，2H，PhCH2)，5.2(m，2H，NH)，7.3(m，5H，ArH).
F.1，3-二氨基-N，N′-二叔丁氧羰基-2-羥乙基丙烷將鈀/炭(10%，1g)加到標(biāo)題E化合物(7.5g)的甲醇(50ml)溶液中，在50psi下加氫24小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去甲醇，得1，3-二-N-叔丁氧羰基-2-(2-羥乙基)丙烷，白色固體(5g)，m.p.101-102℃1H NMR(CDCl3)δ1.45(s，18H，tBoc)，1.65(m，1H，CH)，2.9-3.2(m，6H，CH(CH2NHtBoc)2andCH2CH)，3.78(m，2H，OCH2)，5.2(m，2H，NH).
G.1，3-二氨基-N，N′-二叔丁氧羰基-2-甲磺?；一閷⑷野?1.36g，1.89ml，0.0134mol)加到羥乙基衍生物(3.5g，0.0112mol)的二氯甲烷(15ml)溶液中，混合物冷卻至0℃。慢慢加入甲磺酰氯(1.43g，0.145mol)，0.5小時加完，于0℃攪拌反應(yīng)混合物1小時，室溫攪拌12小時。除去二氯甲烷，所得固體用己烷結(jié)晶，得3.9g標(biāo)題G化合物，m.p.109-10℃.1H NMR(CDCl3)δ1.41(s，18H，tBoc)，1.52(m，2H，CH2CH)，1.72(m，1H，CH)，3.0(s，3H，CH3)，3.1(m，4H，CH(CH2-NHtBoc)2)，4.45(m，2H，OCH2)，5.15(m，2H，NH).
H.2-溴乙基-1，3-二氨基-N，N′-二叔丁氧羰基丙烷室溫下，將標(biāo)題G化合物(1.98g，0.5mol)和溴化鋰(4.34g，0.05mol)的丙酮(50ml)溶液攪拌24小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去丙酮，得到標(biāo)題H化合物，油狀物(1.5g)。不必進(jìn)一步純化可直接使用。
I.1，3-二氨基-N，N′-二叔丁氧羰基-2-(2-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基丙烷將氫化鈉(0.12g，0.005mol)加到2-硝基咪唑(0.56g，0.005mol)的無水乙腈(5ml)混懸液中，于室溫攪拌15分鐘。真空除去乙腈，殘留物溶于無水二甲甲酰胺(5.0ml)中。將標(biāo)題H化合物(1.14g，0.003mol)加到該二甲基甲酰胺溶液中，用110℃油浴加熱2小時。將混合物冷卻，真空除去二甲基甲酰胺。殘留物用水處理，二氯甲烷提取。分出二氯甲烷液，硫酸鎂干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜純化(己烷∶乙酸乙酯，50∶50)收集含產(chǎn)物餾分，蒸發(fā)得粘稠黃色油狀產(chǎn)物，靜置固化。產(chǎn)量0.52g。
1H NMR(CDCl3)δ1.35(s，18H，Boc)，1.6(m，2H，CH(CH2CH2N)，3.12(m，5H，CH(CH2NH)2andCH)，4.50(t，2H，CH(CH2CH2N)，5.12(m，2H，NH)，7.0and7.25(s，2H，CH＝CH).
J.3，3，9，9-四甲基-6-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮用甲醇鹽酸(2ml)處理標(biāo)題I化合物以除去叔丁氧羰基。真空除去甲醇得二鹽酸鹽。
1H NMR(D2O)δ2.0(m，2H，CH(CH2CH2N)，2.20(m，1H，CH)，3.12(d，4H，CH(CH2NH)，4.50(t，2H，CH(CH2CH2N)，7.10and7.42(s，2H，CH＝CH).
用氨的乙醇溶液中和二鹽酸鹽，所得二胺游離堿不必進(jìn)一步純化直接使用。
將3-溴-3-甲基丁-2-酮(0.5g，3.0mmol)加到二胺(0.2g，1mmol)、碳酸氫鈉(0.25g，3.0mmol)和二甲基甲酰胺(2.0ml)的混合物中，于50℃攪拌24小時。真空除去二甲基甲酰胺，殘留物經(jīng)硅膠色譜純化(二氯甲烷∶甲醇，9∶1，8∶2)。收集含產(chǎn)物餾分，蒸發(fā)得標(biāo)題丁化合物(110mg)，粘稠油。
1H NMR(D2O)δ1.33(d and m，13H，C(CH3)and CH)，1.80(m，2H，CH(CH2CH2N)，2.19(s，6H，CH3)，2.65(m，4H，CH(CH2NH)，4.40(t，2H，CH(CH2CH2N)，7.10and7.39(s，2H，CH＝CH).
K.3，3，9，9-四甲基-6-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟將二酮(65mg)溶于無水二氯甲烷(0.5ml)中，用三甲基甲硅烷基羥胺(0.3ml)處理。反應(yīng)混合物加熱回流24小時。除去二氯甲烷，殘留物用甲醇處理。蒸發(fā)甲醇得粘稠糊狀產(chǎn)物，溶解于水中，冷凍干燥，得62mg標(biāo)題K化合物，m.p.174-176℃1H NMR(D2O)δ1.2(d and m，13H，C(CH3)andCH)，1.75(s and m，8H，CH(CH2CH2N)and CH3)，2.55(m，4H，CH(CH2NH)，4.36(t，2H，CH(CH2CH2N)，7.06and7.34(s，2H，CH＝CH)，MS(M+H)+＝412+.
元素分析C18H35N7O4·4H2OC，44.70;H，7.30;N，20.29;
測定值C，45.08;H，7.14;N，20.18.
實(shí)施例5b5，8-二氮雜-1，2-二硫雜-5-(2-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基)-3，3，10，10-四甲基環(huán)癸烷A.5，8-二氮雜-1，2-二硫雜-3，3，10，10-四甲基環(huán)癸烷在室溫和攪拌下，將硼氫化鈉(9.12g，0.24mol)分批加入5，8-二氮雜-1，2-二硫雜-5-3，3，6，6-四甲基環(huán)癸-4，8-二烯(9.2g，40mmol)的乙醇(500ml)溶液中，2小時加完。上述二烯按下述文獻(xiàn)制備H.F.Kung，M.Molnar，J.Billings，R.Wicks，M.Blau，“Synthesis and Biodistribution of Neutral Lipid-Soluble Tc-99m Complexes that Cross the Blood-Brain-Barrier”，J.Nucl.Med.，1984;25∶326-332反應(yīng)混合物再于室溫攪拌20小時。減壓除去乙醇，粗產(chǎn)物用閃硅膠柱色譜純化。用9∶1二氯甲烷/甲醇洗脫，得結(jié)晶性產(chǎn)物(參見Lever，“CorrectionDesign，Preparation and Biodistribution of a Technetium-99m Triaminedithiol Complex to Assess Regional Cerebral Blood Flow”，J.Nucl.Med.，1987;28∶1064-1065)隨后，繼續(xù)用9∶1∶0.1二氯甲烷/甲醇/氨洗脫得所需的二胺。產(chǎn)物用石油醚重結(jié)晶，得無色固體。產(chǎn)量0.66g，m.p.58-60℃B.5，8-二氮雜-1，2-二硫雜-5-(2-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基)-3，3，10，10-四甲基環(huán)癸烷將附于硅藻土上的氟化鉀(0.82g，14.1mmol)加到標(biāo)題A化合物(0.66g，2.82mmol)的無水乙腈(10ml)溶液中，攪拌5分鐘。加入溴乙基硝基咪唑(0.65g，2.82mmol，參見D.C.Heimbrook，K.Shyam，A.C.Sartorelli，“Novel l-haloalkyl-2-nitroimidazole Bioreductive Alkylating Agents”，Anti-Cancer Drug Design，1988，2∶339-350)充氮回流下攪拌16小時。再加入溴乙基硝基咪唑(0.22g，1mmol)，隨后加入附于硅藻土上的氟化鉀(0.3g，5mmol)，繼續(xù)攪拌回流24小時。減壓除去溶劑，殘留物用20ml水處理。用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)溶液PH值至≥8。溶液用二氯甲烷提取(5×20ml)，合并有機(jī)層，水洗，無水硫酸鈉干燥。除去溶劑得半固體，用閃硅膠色譜純化，用5%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，得油狀物，TLC測定為均相。產(chǎn)量0.065g。
1H NMR(CDCl3)δ1.1，1.3，1.35and 1.45(4s，12H，gem dimethyls)，2.5-3.2(m，10H，N-CH2)，3.9(bs，1H，NH)，4.5(m，2H，imi CH2)，7.1(s，1H，imid H)，and 7.4(s，1H，imi H).M.S.[M+H]+＝374.
TLC(9∶1二氯甲烷/甲醇，硅膠)RfO38.HPLC單峰Rt＝10.06min，UV探測(230nm)用Dynamax C18柱，25cm×0.46cm，用含0.1%三氟乙酸的乙腈和水梯度洗脫。
實(shí)施例6[99Tc]氧代[[3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2-10-二酮二肟基]-(3-)-N，N′，N″，N′′′]锝(Ⅴ)將NH499TcO(26.6mg，0.148mmol)溶于鹽水(4ml)中;將實(shí)施例L標(biāo)題化合物(86.4mg，0.225mmol)溶于含10滴3M鹽酸的鹽水(10ml)中。用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液PH至6.3。合并配位體溶液和高锝酸鹽。加入0.1M碳酸氫鈉(5ml)，用氫氧化鉀調(diào)節(jié)至PH8.5-9.0。加入乙醚(60ml)，隨后滴加酒石酸亞錫(83.6mg，0.313mmol)的鹽水(5ml)溶液。反應(yīng)混合物攪拌10分鐘。分出乙醚層，水相用數(shù)等分乙醚提取(直到乙醚層觀察不到產(chǎn)物的黃色)，合并乙醚等分(110ml)，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后減至2ml。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜提純，乙醚洗脫。除去溶劑至約1ml，在-18℃冷凍四中貯存過夜。得中度桔紅色晶體。過濾分離之，以冷乙醚洗，真空干燥4小時。產(chǎn)量25.8mg。
1H NMR(CD2Cl2)δ1.39-1.49(m，12H，C(CH3)2)，1.73-1.77(m，1H，CH)，2.33(s，CH3)，2.35-2.41(m，1H，CH)，3.34-3.40(m，2H，CH2)，3.46-3.51(m，2H，CH2)，5.63-5.73(m，2H，CH2)，7.09(s，1H，imidazole CH)，7.47(s，1H，imidazole CH).M.S.(M+H)+＝496，(M-H)-＝494.
元素分析alc′d for C16H26N7O5TcC，38.79;H，5.29;N，19.79;
測定值C，39.21;H，5.60;N，19.47.
實(shí)施例6a[99Tc]氧代[[3，3，9，9-四甲基-1-(4-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2-10-二酮二肟基]-(3-)-N，N′，N″，N′′′]锝(Ⅴ)向攪拌著的[N(丁基)4]TcOCl-4(45.5mg，0.091mmol)溶液(按F.A.Cotton，A.Davison，V.Day et al.，Inorg.chem.1979，18，3024所述方法制備)中加入，1ml甲醇和120μl無水乙二醇，然后再加1.2ml的0.75M醋酸鈉的甲醇溶液。加入實(shí)施例2的配位體(名稱為3，3，9，9-四甲基-1-(4-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟)(53.6mg，0.14mol)使紫色溶液轉(zhuǎn)變?yōu)樯罱埸S色。3分鐘，加入10ml二氯甲烷，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得桔色油。絡(luò)合物經(jīng)硅膠柱色純化，二氯甲烷洗脫，桔紅色帶被蒸發(fā)成油狀物，用15ml己烷研磨為固體，分出固體，真空干燥過夜，得30.3mg標(biāo)題化合物。
M.S.(M+H)+＝496;(M+H-4-nitroimdazole)+＝383;(M-H)-＝494.1H NMR(C6D6)δ1.4-1.6(m，12H，CH3)，1.75(m，1H，CCH2C)，2.1H，CCH2C)，2.34(s，3H，CH3C＝N)，3.35(t，1H，NCH2)，3.5(m 1H，NCH2)，4.9(d，1H，imidazole NCH2，J＝14Hz)，5.3(d，1H，imidazole NCH2，J＝14Hz)，7.7(s，1H，imidazole NCHC)，8.1(s，1H，imidazole NCHC)，18.1(br，O..H..O).
實(shí)施例6b[99Tc]氧代[[6-羥基-3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟基]-(3-)-N，N′，N″，N′′′]锝(Ⅴ)向攪拌著的[N(丁基)4]TcOCl-4(57.5mg，0.115mmol)溶液中加入1ml甲醇和150μl無水乙二醇，隨后加入1.5ml的0.75M醋酸鈉的甲醇溶液。加入實(shí)施例4配位體(60mg，0.13mmol)使紫色溶液變?yōu)樯铧S褐色。5分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，得黃褐色油。將油裝邊1.5×6cm硅膠柱，用二氯甲烷洗脫，直至主要產(chǎn)物與柱頂部的雜質(zhì)帶充分分離。柱頂部分棄去，產(chǎn)物(帶很寬)被10%甲醇/90%二氯甲烷洗脫出。除去溶劑，產(chǎn)物再溶于最少量的二氯甲烷中，用飽和氯化鈉洗滌，硫酸鈉干燥，再沉色譜提純，用1∶1ACN∶CH2Cl2洗脫。蒸發(fā)溶劑得桔色油，用己烷研磨至產(chǎn)物固化。吸濾分離固體，己烷洗滌，真空干燥過夜。純標(biāo)題絡(luò)合物產(chǎn)量為8.4mg。
M.S.(M+H)+＝512，(M-H)-＝510.IR(KBr)922cm-1，Tc＝0.
實(shí)施例799mTc絡(luò)合物的制備按下述通用方法制備實(shí)施例1-5配位體的99mTc絡(luò)合物。
在10ml玻璃小瓶中將配位體(2.5mg)溶解于0.9%鹽水(2ml)和0.1M碳酸氫鈉緩沖液(0.5ml)中。加入來自99Mo/Tc發(fā)生器的洗脫液。將小瓶密封，向其中加入酒石酒亞錫的鹽水(50μl)溶液。振蕩小瓶以混合及應(yīng)物，于室溫靜置10分鐘。
必要時，用包括PRP-1樹脂的分離程序把99Tc絡(luò)合物從其它小瓶中分出，參見S.Jurisson et al.，“Chloro→Hydroxy Substitution on Technetium BATO[TcCl(diox-ime)3BR]Complexes”，Nuc.Med.Biol，18(7)，735-744(1991)這樣便得到絡(luò)合物的乙醇溶液。用氮?dú)鈱⒁掖汲煞执蹈?，再溶解于?biāo)準(zhǔn)鹽水中。
用HPLC和/或TLC測定99mTc絡(luò)合物的放射化學(xué)純度。HPLC分析在5μ15cm PRP-1柱中進(jìn)行，流速為1ml/min，用PH4.6的65/35 ACN/0.1M NH4OAc洗脫，放射性探測儀與積分器相連。TLC分析在2個20cmSAF快速薄層色譜(ITLC)板條上進(jìn)行，將5μl試樣置于板條的起點(diǎn)。一個板條用鹽水展開，另一個用甲基乙基酮(MEK)展開。展開后，從起點(diǎn)上方1cm處切下板條，對每一段計數(shù)。%RCP測定為%RCP＝%MEK板條上段-%鹽水板條上段。99mTc絡(luò)合物的RCP通常＞92%。
實(shí)施例7a由99mTc-酒石酸鹽配位體交換制備[99Tc]氧代[[3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2-10-二酮二肟基]-(3-)-N，N′，N″，N′′′]锝(Ⅴ)將0.5ml生理鹽水加到0.5ml的0.1M酒石酸鈉溶液中。將混合物置于卷邊密封的(Crimp-sealed)小瓶中，通氮除去氧氣。向其中加入5μl新制備的氯化亞錫溶液(2mg/ml脫氣1N HCl)隨后加入由99Mo/99Tc發(fā)生器洗脫來的1ml99mTcO-4溶液。室溫下10分鐘后，將所得Tc-酒石酸鹽絡(luò)合物加到裝有1.75mg實(shí)施例1硝基咪唑配位體的另一小瓶中。室溫下10分鐘后，用高壓液相色譜測得標(biāo)題99mTc-硝基咪唑絡(luò)合物的放射化學(xué)純度為92%。色譜柱為10微米，15cm PRP-1反相柱，洗脫劑當(dāng)65/35的乙腈/0.1M NH4OAc(PH4.6)，流速2ml/min。制得的絡(luò)合物與實(shí)施例6的99Tc絡(luò)合物可靠試樣的保留時間相同。
實(shí)施例7b由99mTc-檸檬酸鹽配位體交換制備[99Tc]氧代[[3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2-10-二酮二肟基]-(3-)-N，N′，N″，N′′′]锝(Ⅴ)將99mTcO-4(1ml，～30mCi)的鹽水液加到裝有檸檬酸鈉(0.05M)的鹽水(1ml，PH調(diào)至6.1)液的小瓶中，加5μl氯化亞錫(2.2mg/ml)在0.1M鹽酸中的溶液，將溶液靜置10分離使99mTc檸檬酸鹽生成完全。將該溶液(PH5.8)加到裝有2mg實(shí)施例1所述配位體的第二個小瓶中，讓反應(yīng)混合物在室溫下反應(yīng)20分鐘。最終PH為7.1。放射化學(xué)純度(HPLC測定，見實(shí)施例7A)大于94%，并在此純度下保持1小時以上。
實(shí)施例7c[99mTc]氧代[[4，7-二氮雜-2，9-二巰基-2，9-二甲基-4-(2-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基)癸烷]-(3-)-N，N′，S，S′]锝(Ⅴ)將二硫代蘇糖醇(16.3mg，106mol)加到5，8-二氮雜-1，2-二硫雜-5-(2-(2-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基)-3，3，10，10-四甲基環(huán)癸烷(6.83mg，18.3μmol，按實(shí)施例5b制得)的甲醇(0.1ml)溶液中，室溫攪拌24小時。在充氬下，反應(yīng)液體積減至＜0.25ml，加入1.25ml PH2.9 HBr/鹽水。水溶液用乙醚提取數(shù)次，以分離二硫醇和未反應(yīng)二硫醚。合并乙醚層，氬氣吹干，殘留物溶于PH1.6HBr/鹽水中。該溶液用乙醚洗滌(以除去二硫代蘇糖醇)，用氫氮化鈉調(diào)節(jié)PH至6.2，得4，7-二氮雜-2，9-二巰基-2，9-二甲基-4-(2-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基)癸烷，不必進(jìn)一步純化，直接使用。
將99mTcO-4(0.1ml，39.2mCi)加到含葡庚糖鈉(0.5ml，2.42mg/ml鹽水)和乙酸鈉(0.5ml，0.1M;PH7.03)的溶液中，隨后加入氯化亞錫(25μl，5.5mg/ml溶液，0.725μmol溶于0.1M HCl中)。于室溫靜置30分鐘后，將0.9ml此溶液加到4，7-二氮雜-2，9-二巰基-2，9-二甲基-4-(2-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基)癸烷的鹽水溶液中，混合物于室溫靜置30分鐘，然后加熱至70℃。HPLC分析表明有兩種主要產(chǎn)物，推測為順式和反式異構(gòu)體絡(luò)合物，還發(fā)現(xiàn)有其它N-取代的DADT絡(luò)合物。
(e.g.，L.A.Epps，H.D.Burns，S.Z.Lever，H.W.Goldfarb，H.N.Wagner，“Brain Imaging AgentsSynthesis and Characterization of(N-piperidinyl Hexamethyl Diaminodithiolate)oxo Technetium(Ⅴ)Complexes”，Int.J.Appl.Radiat.Isotop，1987，38∶661-664;A.Mahmood，W.A.Halpin，K.E.Baidoo，D.A.Sweigart，S.Z.Lever，“Structure of a Neutral N-alkylated Diaminedithiol(dadt)Tc-99(Ⅴ)Complex Syn[TcO(NEt-tmdadt)]Tc-99”，Acta Crystallogr.，Sect.CCryst.Struct.Commun.，1991，47∶254-257.
實(shí)施例8還原電位的測定甲氧甲基硝基咪唑乙醇，99TcO(PnAO)和99Tc-缺氧-定位示蹤劑的還原電位用循環(huán)伏安法(C.V)在二甲基甲酰胺中測定。C.V.實(shí)驗(yàn)采用普林斯敦應(yīng)用研究(P.A.R)Model 174A極譜分析儀，用Model 303靜態(tài)錄球電極，記錄在Model RE0074 X-Y記錄儀上。參考電極是Ag/AgNO3，填充液是被LiCl飽和的乙腈填充液。計數(shù)電極是鉑絲。用錄測定的伏安值是在50，100，200和500的掃描速率下進(jìn)行的。
C.V.研究所用的溶液含有濃度為0.2-0.7mM的試樣。四氟硼酸四丁基銨(Bu4NBF4)和六氟磷酸四丁基銨(Bu4N PF6)以0.1M的濃度支持著電解液。向液液中通入溶劑飽和的氮或氬氣15分鐘以脫氧。參考電位的變化通過每天測定Ru(acac)3標(biāo)準(zhǔn)的C.V.來計算。全部測得的電位按照Ru(acac)3-1.210V(相對于Ag/AgNO3，錄電極)修正。
結(jié)果見下表化合物名稱／實(shí)施例號 Epc(V) 還原過程滅滴靈－1.62可逆甲氧甲基硝基咪唑乙醇 －1.49可逆99TcO(pnAO) －2.15不可逆實(shí)施例1化合物 －1.52可逆實(shí)施例6化合物 －1.49可逆和 －1.99不可逆結(jié)果表明本發(fā)明配位體及其锝化合物的電化學(xué)還原電位都類似于可生物還原的2-硝基咪唑化合物甲氧甲基硝基咪唑乙醇，從而可期望在體內(nèi)進(jìn)行生物還原。相反地，非硝基咪唑?qū)φ瘴颰c(V)氧代3，3，9，9-四甲基-4，8-二氮雜癸烷-2，10-二酮二肟(TcO(PnAO)按Jurisson等人，Inorg.Chem.，1986，25，543的方法制備)的電化學(xué)還原卻發(fā)生在比實(shí)施例6化合物觀察到的第一個還原信號負(fù)得多的電位。
實(shí)施例8a效能的顯示用黃嘌呤氧化酶對Tc硝基咪唑絡(luò)合物的還原人們知道，酶黃嘌呤氧化酶(在黃嘌呤或次黃嘌呤存在下)能夠還原含硝基咪唑化合物如甲氧甲基硝基咪唑乙醇和2-甲基-5-硝基-1-咪唑基-乙醇之類的硝基(例如參見P.D.Josephy，B.Palcic and L.D.Skarsgard，“Reduction of Misonidazole and its Derivatives by Xanthine Oxidase”，Biochem.Pharmacol.，1981，30，849有人假設(shè)，在厭氧生物條件下的這種硝基還原是造成這些化合物在缺氧組織中選擇性俘獲的原因。因此，含锝或錸的硝基咪唑絡(luò)合物應(yīng)該能夠在壓氧生物條件和次黃嘌呤存在下被黃嘌呤氧化酶還原。下述酶評估的結(jié)果表明本發(fā)明的Tc-硝基咪唑絡(luò)合物被認(rèn)為是黃嘌呤氧化酶的適當(dāng)?shù)孜铩?br> 向一個2.5ml石英小池中加0.25微摩爾實(shí)施例6或6b的99Tc-硝基咪唑絡(luò)合物和125μl二甲基甲酰胺的溶液，1ml 0.01M次黃嘌呤的磷酸鈉緩沖液(PH7.4;0.1M)，和0.875ml含20mg/l乙二胺四乙酸鈉(EDTA)的0.1M磷酸鈉緩沖液(PH7.4)。用橡膠隔板將小池密封，用氬氣清吹15分鐘以除去氧氣。向其中加入由1.25單位酶黃嘌呤氧化酶(Boeringer)和0.5ml脫氧的PH7.4磷酸鹽緩沖液組成的溶液，將小池反轉(zhuǎn)以混合溶液，每隔15分鐘在280-600nm處記錄一次溶液的UV/可見光譜。
吸收峰在大約320nm處，這是硝基咪唑官能團(tuán)的特征峰，只是強(qiáng)度小些。一般認(rèn)為，硝基吸收峰的消失是由于硝基被黃嘌呤氧化酶還原。在不含有酶的對照反應(yīng)中，在7小時內(nèi)未觀察到光譜變化。
在平行的對照反應(yīng)中，按同樣方式將上述試劑混合，但是用3，3，9，9-四甲基-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟的99Tc絡(luò)合物(按文獻(xiàn)Jurisson et al.Inorg.Chem.，1986，25，543所述方法制備)代替實(shí)施例6或6b的锝絡(luò)合物。在該反應(yīng)中，不含可生物還原硝基咪唑官能團(tuán)，在7小時內(nèi)未觀察到光譜變化。
實(shí)施例9穿過內(nèi)皮單層細(xì)胞的能力顯示采用改良的Audus和Borchardt方法(K.L.Audus et al，Ann.New York Acad.Sci.;1988;9-18)，將牛大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離，并用其模型體外測定牛大腦微血管內(nèi)皮穿透性(K.L.Audus et al.，Ann.New York Acad.Sci.，1988;9-18).
(K.L.Audus et al.，J.Neurochem.，1986;47∶484-488 and M.V.Shah et al.，Pharm.Res.1989;6∶624-627)and W.M.Pardridge et al.
(J.Pharmacol.Exptl.Therap.，1990;253∶884-891)只是用Anocell插入代替含聚碳酸酯濾器的濾過池(Transwell)或者將聚碳酸酯濾器排成并排的裝置。使用購自Millipore的Millicell-ERS電阻系統(tǒng)，以電阻表示緊密結(jié)合物的形成，(P.Artursson et al.，J.Pharm.Sci.，1990;79595-600 and S.G.Milton et al.，J.Cell.Physiol.，1990;144498-504)形態(tài)聚集時的高電阻(～600Ω-cm2)的漸近水平表明了緊密結(jié)合的形成。只使用電阻≥500Ω-cm2的那些池。Audus-Borchardt方法的進(jìn)一步改進(jìn)是在池的外圍使用含10%血漿衍生生的馬血清的DMEM/F-12培養(yǎng)基作為Anocell插入物內(nèi)部和池外部中的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基。
單一試驗(yàn)化合物的滲透性研究使用12個Anocell插入物4個小池中裝有單層細(xì)胞，0.4ml由10%血漿衍生物的馬血清、5μCi3H-水、2μCi14C-蔗糖和20μCi Tc-99m絡(luò)合物組成的培養(yǎng)基。
4個小池中裝有與上面相同的東西，只是不裝單層細(xì)胞。
4個小池中裝有與上面相同的東西，只是不裝單層細(xì)胞和10%血漿衍生的馬血清。
將該系統(tǒng)置入37℃和含5%二氧化碳的孵化器中，孵化器裝有一用作攪拌的旋轉(zhuǎn)組織培養(yǎng)板振蕩器。然后從一組4 Anocell插入物中，從內(nèi)室(給體)和外室(受體)同時取出10μl試樣。先用計數(shù)器將試樣計數(shù)，72小時后，再用裝有二重通道能力的閃爍計數(shù)器計數(shù)。計算在研究的頭10分鐘內(nèi)的每一時間點(diǎn)上由給體池轉(zhuǎn)移到受體池的放射性成分。轉(zhuǎn)移的平均放射性百分?jǐn)?shù)對時間作圖，斜率用線性回歸分析。僅一個濾紙的清除曲線斜率等于PSf，其中PS＝滲透率與表面積的乘積。裝有濾紙加內(nèi)皮細(xì)胞的小池的清除曲線斜率記為PSm。對于全部受試的試劑，在長達(dá)10分鐘內(nèi)清除曲線的斜率是線性的。修正的內(nèi)皮單層細(xì)胞PS值記為PSe，按下式計算(根據(jù)Pardridge et al.，J.Phamnacol.Exptl.)Therap.，1990，253，884-891)1/(PSe) = 1/(PSm) - 1/(PSf)對一每一試劑用PSe按下式算得滲透性指數(shù)(Pi)Pi= (PS(試劑)－PS(蔗糖))/(PS(水)PS(蔗糖)) ×100下表是對幾種受試化合物測得的Pi值
化合物名稱/實(shí)施例號Pi99mTc-PnAO(1) 64.499mTc-HM-BAT(2) 44.399mTc-TMR(3) 50.399mTcCl(DMG)32MP(4) -9.399mTc實(shí)施例1配位體的99mTc絡(luò)合物 63.299mTc實(shí)施例5配位體的99mTc絡(luò)合物 0.299mTc實(shí)施例2配位體的99mTc絡(luò)合物 15.299mTc實(shí)施例4配位體的99mTc絡(luò)合物 1.899mTcCl(DMG)3BBNO2(5) 4.5(1) W.A.Volkert，T.J.Hoffman，S.M.Seger，D.E.Troutner，R.A.Holmes，“Tc-99m Propylene Amine Oxime(Tc-99m PnAO);A Potential Brain Radiopharmaceutical”，Eur.J.Nucl.Med.1984，9511-516.
(2) H.F.Kung，M.Molnar，J.Billings，R.Wicl.s，M.Blau，“Synthesis and Biodistri-bution of Neutral Lipid-Soluble Tc-99m Complexes that Cross the Blood-Brain-Barriet”，J.Nucl.Med.，1984，25326-332.
3. R.H.Mach，H.F.Kung，Y-Z，Guo，C-C Yu，V.Subramanyam，J.C.Calabrese，“Synthesis，Characterization and Biodistribution of Neutral and Lipid-Soluble99mTc-PAT-HM and99mTc-TMR for Brain Imaging”，Nucl.Med.Biol.，1989，16829-837.
4. E.N.Treher，L.C.Francesconi，J.Z.Gougoutas，M.F.Malley，A.D.Nunn，“Monocappcd Tris(dioxime)Complexes of Technetium(Ⅲ)Synthesis and Structural Characterization of TcX(dioxime)3B-R(X＝Cl，Br;dioxime＝dimethylglyoxime，cyclo-hexanedione dioxime;R＝CH3，C4H9)，Inorg.Chem.，1989，283411-3416.
5. K.E.Linder，S.Jurisson，A.D.Nunn，“Boronic Acid Adducts of Technetium-99m Dioxime Complexes and Rhenium Dioxime Complexes Containing a Biochemically Active Group，European Patent No.411，491;1991.
實(shí)施例9a99mTc-絡(luò)合物在正常(氧正常)Sprgue-Dawley大鼠中的生物分布測定了99mTc-絡(luò)合物的生物分布，以證實(shí)放射性示蹤劑向目標(biāo)組織的釋放，以及目標(biāo)區(qū)氧正常組織和附近組織放射性的清除。用戊巴比妥(50mg/Kg)將12只Sprague-Dawley大鼠麻醉，通過頸靜脈注射0.1ml(20μCi)放射性物質(zhì)。給藥1分鐘、5分鐘和60分鐘后(對于所有時間點(diǎn)n＝4)，將動物放血?dú)⑺?，取出目?biāo)組織，稱重并評估放射性。在整個研究過程中，讓大鼠呼吸室內(nèi)空氣。
結(jié)果示于下表
實(shí)施例10在兔子病灶性心肌缺血模型中顯示效能采用左前降(LAD)冠狀動脈的永久結(jié)扎方法，建立了兔子病灶性心肌缺血模型。用該模型進(jìn)行了兩次研究。首先，采用流動示蹤劑TcCl(CDO)MeB的雙標(biāo)記研究，用自體放射照像法測定了相對區(qū)域性心肌血流(MBF)和相對區(qū)域性心肌葡萄糖代謝速率(MMRgf)(R.K.Narra et al.，J.Nucl.Med.，1989;301830-1837)and14C-deoxy-glucose for NMRg1(L.Sokoloff et al.，J.Neuro-chem.，1977，28，897-916).)向第二組患LAD冠狀動脈閉鎖的兔子給予14C-脫氧葡萄糖和99mTc-缺氧定位示蹤劑。
經(jīng)外科準(zhǔn)備和20分鐘的LAD閉鎖后，將14C-脫氧葡萄糖(130-150μCi)作為靜脈造影劑注射，計時收集動脈血樣。25分鐘后，向兔子靜脈注射戊巴比妥和氯化鉀將其殺死。切除心臟在液體氟利昂-22中冷凍，用切片機(jī)切得20μm冠狀切片，得到全部切片的自體放射照片。對于KodakXAR膠片的第一次曝光(～14小時長)，在組織和膠片之間插入一個極其重要的鋁泊，以便完全阻擋來自14C的幅射，以得到僅僅來自99mTcCl(CDO)3MeB的MBF信息。三天之后(讓99mTc蛻變)，不用鋁泊再照第二張自體放射照片，第二次曝光持續(xù)6-8天，提供了14C-脫氧葡萄糖的區(qū)域性分布圖像。這些圖像說明，在局部缺血區(qū)有一增強(qiáng)的糖酵解區(qū)域帶。該區(qū)域由減少的組織PO2引起，是缺氧局部缺血邊界區(qū)的標(biāo)志。
在第二組動物中，原始記錄類似，不同之處僅在于實(shí)施例1所述配位體的99mTc絡(luò)合物與14C-脫氧葡萄糖共同注射，30分鐘后殺死動物。
自體放射照片顯示該絡(luò)合物區(qū)域性心肌分布形態(tài)和C-脫氧葡萄糖分布形態(tài)之間的同形性關(guān)系。兩種示蹤劑都表現(xiàn)出在局部缺血邊界區(qū)的高度吸收，在正常輸注區(qū)域放射性很弱，在無流動區(qū)域?qū)嶋H上沒有放射性。通過比較，本研究中帶有99mTc-流動示蹤劑的局部缺血區(qū)顯示了很少的放射性積累，而正常輸注區(qū)域卻顯示了放射性的高濃度積累。
3，3，6，9，9-五甲基-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟的99mTc絡(luò)合物在該模型中作為不具有缺氧定位功能的99mTc-PnAO-絡(luò)合物進(jìn)行了檢測。得到的該示蹤劑的自體放射照片未顯示出局部缺血和非局部缺血區(qū)域的差異，這表明缺氧定位部分(如2-硝基咪唑)對于上述絡(luò)合物在缺氧區(qū)域的具體定位是非常重要的。
在另一實(shí)驗(yàn)中，采用上述的兔子LAD閉鎖模型和雙標(biāo)記自體放射照像的方法，將實(shí)施例1所述配位體的99mTc絡(luò)合物行為與14C-甲氧甲基硝基咪唑乙醇的行為進(jìn)行了比較。兩種試劑的微區(qū)分布實(shí)際是相同的，并且與前在發(fā)現(xiàn)的14C-脫氧葡萄糖的類似在局部缺血區(qū)的缺氧邊界區(qū)的高吸收和氧正常區(qū)域以及流動有限的局部缺血區(qū)中心的低吸收。
實(shí)施例103在兔子病灶大腦缺血模型中效能的顯示采用實(shí)施例10所述的雙標(biāo)記自體放射照像的方法表征病灶大腦缺血模型，該模型包括自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)內(nèi)頸動脈和同側(cè)中腦動脈(MCA)的前后閉塞。在這種情況下，用99mTcCl(DMG)32MP(Nar ra，et al.，J.Nucl.Med.，1990，31(8)，1370-1377)用作大腦血流(CBF)的指示劑，與前面一樣，用14C-脫氧葡萄糖來顯示缺氧組織增強(qiáng)的糖酵解區(qū)。在囟代烷麻醉的手術(shù)完成后，令大鼠自然蘇醒，MCA閉塞1小時后，將14C-脫氧葡萄糖作為靜脈造影劑注射，計時收集樣品。14C-脫氧葡萄糖注射，25分鐘后注射作為靜脈造影劑的99mTcCl-(DMG)32MP，15秒后殺死大鼠，迅速切除大腦，按實(shí)施例10所述方法得到切片和自體放射照片。如同兔子LAD閉塞模型的實(shí)施例10所發(fā)現(xiàn)的一樣，局部缺血區(qū)周圍是糖酵解升高的組織邊緣。與前述心肌缺血的實(shí)施例不同，大腦中缺氧區(qū)域與氧正常區(qū)域相比在糖醇解方面沒有多大增加，這是因?yàn)榇竽X在氧正常組織的氧化中優(yōu)先使用葡萄糖作為底物。但是顯然局部缺血區(qū)域被增強(qiáng)的糖醇解的邊界區(qū)所包圍。在第二個實(shí)驗(yàn)系列中，MCA閉塞1小時或5天后同時一起注射實(shí)施例1所述配位體的99mTc絡(luò)合物和14C-脫氧葡萄糖，按前述方法獲取自體放射照片，兩個時間點(diǎn)都表明兩種藥劑都顯示相對于周圍的氧正常組織在缺氧邊界區(qū)吸收增加。此外，計算機(jī)輔助圖像分析表明，對于實(shí)施例1所述配位體的99mTc絡(luò)合物，缺氧-氧正常光學(xué)密度比是7∶1。這些發(fā)現(xiàn)表明了實(shí)施例1所述配位體的99mTc絡(luò)合物對于病灶大腦缺血的急性和慢性發(fā)作都具有效能。
實(shí)施例11效能的顯示離體灌注心臟的研究從雄性Sprague Dawley大鼠(275-325g)身上切除心臟，采用Langendorff法在孤離態(tài)用Krebs-Henseleit緩沖液于37℃下逆行地灌注(參見(O.Langendorff，Pfleugers Arch.ges.Physiol，61，291，1985)with modifications described previously(W.Rumsey，D.F.Wilson and M.Erecinska，Am.J.Physiol.，253(Heart Circ.Physiol.22)H1098，1987)灌注液含有[單位為mM]NaCl[118]，KCl[4.7]，CaCl2[1.8]，Na2EDTA
，KH2PO4[1.2]，MgSO4[1.2]，NaHCO3[25]，葡萄糖[11]，丙酮酸鹽
，和胰島素(12IU/l)，并且用O2∶CO2(95∶5)(完全氧正常)或N2∶CO2(95∶5)(完全缺氧)平衡。心臟連續(xù)定在5Hz。灌注壓力在72cm H2O下保持20分鐘，以便使心臟調(diào)節(jié)至弧立狀態(tài)。經(jīng)過此初步調(diào)節(jié)后，用蠕動泵將灌注液流速保持在調(diào)節(jié)后期所得到的恒速水平，即7-8ml/mim/g濕重。
為測定氧消耗，通過肺動脈在右心室置一套管。用泵以1ml/min的速度移去少量冠狀流出物，用一聯(lián)機(jī)的Clark型電極連續(xù)監(jiān)控其氧濃度。在氧正常狀態(tài)，流入物氧濃度保持在956μM。冠狀流量是通過將來自左、右肺動脈的流出物收集在一個10ml的量筒中測定的。從流入物-流出物氧濃度差與冠狀流量的乘積計算得到氧消耗。在缺氧介質(zhì)的灌注期間，只記錄流出物氧濃度。一般地，流出物氧濃度在氧正常研究中為505μM，在缺氧研究中為17μM。
在受度化合物給藥之前，心臟用氧正常介質(zhì)或缺氧介質(zhì)灌注30分鐘。通過灌注進(jìn)灌注液的方法將Tc-99m示蹤物給藥20分鐘，被灌注心臟的放射性用校準(zhǔn)的位于離右心室3-4cm并且與心臟縱軸垂直的NaI晶體探測。灌注完成后40分鐘仍保留在心臟中的放射性除以放射性的峰值給出保留的度量。結(jié)果(n＝4)示于下表在分離的經(jīng)灌注的大鼠心臟中示蹤物的保留百分?jǐn)?shù)氧正常 缺氧實(shí)施例1配位體的Tc-99m絡(luò)合物 33.5±2.5 65.3±3[Tc-99m]TcCl(CDO) Me B**71.3±5.5 63.5±3.7[Tc-99m]TcCl(DMG) 2MP**68.5±0.5 48.7±1.3＊＊先有技術(shù)的硼酸加合物(美國專利4705849號)配位體1的Tc-99m絡(luò)合物在缺氧心臟中比氧正常心臟表現(xiàn)出更多的保留。通過比較，流動示蹤物TcCl(DMG)32MP和TcCl(CDO)3MeB在缺氧條件下并不比氧正常條件下的保留有所增加。
實(shí)施例12效能的顯示分離的心肌細(xì)胞研究按照Wittenberg和Robinson的方法從雄性Sprague Dawley大鼠(200g)的心臟中分離出鈣耐受性心室肌細(xì)胞(參見(B.A.Wittenberg and T.F.Robinson，Cell Tissue Res.，216231，1981)with modifications described previously(W.Rumsey，C.Schlosser，E.M.Nuutinen，M.Robiolio and D.F.Wilson，J.Biol.Chem.，265(26)15392，1990).
進(jìn)行生存性的形態(tài)學(xué)分析(用血細(xì)胞計數(shù)器)后立即將細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程保持37℃。在整個5-9×106個細(xì)胞中，靜上的桿形細(xì)胞的數(shù)目為70-90%。
分離的肌細(xì)胞保持在氧正常、缺氧或無氧狀態(tài)。缺氧的產(chǎn)生是在細(xì)胞上方提供氬氣氛，在孵育期間將燒瓶封閉。將葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶(5/5mg)加到氬處理的細(xì)胞中以提供缺氧環(huán)境。將細(xì)胞混懸于(6.5×104個細(xì)胞/ml)分離培養(yǎng)基中，分成數(shù)等份加到保持在37℃的孵育小瓶中。
將受試化合物孵育后，用1%冰冷的高氯酸將肌細(xì)胞脫脂，在12000rpm下離心30秒鐘。分出上清液，用LKB1282γ計數(shù)器計數(shù)?；蛘?，將細(xì)胞浸透99%鄰苯二甲酸二丁酯再在12000rpm下離心30秒鐘，肌細(xì)胞便從混懸培養(yǎng)基中分離出來。分離該三個相，按上述方法計數(shù)。實(shí)施例1化合物的Tc-99m絡(luò)合物的結(jié)果如下條件 PCA丸 細(xì)胞丸 油氧正常 40.5±2.7 23.2±3.7 22.8±2.2(n=5)缺氧(氬) 48.5±3.4 36.9±8.8 20.1±5.3(n=4)無氧(葡萄 55.5±5.8 48.8±4.2 9.0±2.6糖氧化酶)(n=4)數(shù)值表示為平值±S.E.M.括號中所示為實(shí)驗(yàn)次數(shù)的數(shù)值是每種情況下代表的總放射性的百分?jǐn)?shù)。PCA丸＝高氯酸沉淀的小丸，它代表了蛋白質(zhì)/細(xì)胞膜有關(guān)的活性。細(xì)胞丸＝通過鄰苯二甲酸二丁酯(油)層的全部細(xì)胞。
這些數(shù)據(jù)表明實(shí)施例1化合物的Tc-99m絡(luò)合物表現(xiàn)出如下的保留順序無氧＞缺氧＞氧正常。由于大部分示蹤物保留在氧正常肌細(xì)胞中，因此人們對分離的肌細(xì)胞進(jìn)行了獨(dú)立的研究。
加入β-氧化的磷酸化解偶聯(lián)劑，羰基氰化物對三氟甲氧基苯腙(FCCP)對氧正常細(xì)胞中實(shí)施例1化合物的TC-99m絡(luò)合物的保留不產(chǎn)生影響，所述FCCP能夠完全氧化線粒體電子轉(zhuǎn)移鏈(mitochondrialelectron transport chain)(NADH/NAD+比值和細(xì)胞氧化還原電位降低)并將磷酸化電位([ATP]/[ADP][Pi])降低到與缺氧組織中類似的水平。此外，為分離細(xì)胞混懸液而加入氰化物(n＝3)會抑制細(xì)胞色素和氧之間的電子轉(zhuǎn)移(NADH/NAD+比值和氧化還原電位增加)而且也將磷酸化電位降低到很低的水平，對于氧正常細(xì)胞中的保留沒有影響。上述結(jié)果表明1)實(shí)施例1化合物的Tc-99m絡(luò)合物在氧正常細(xì)胞中的保留與線粒體內(nèi)吡啶核甙酸的氧化還原態(tài)無關(guān)，這很可能是由于它的親脂性或其它影響與細(xì)胞物質(zhì)結(jié)合的分子間作用的緣故。如果氧正常細(xì)胞中的保留是取決于氧化還原態(tài)，即么加入FCCP后，預(yù)期得留應(yīng)當(dāng)降低。
2)實(shí)施例1化合物的Tc-99m的大量保留需要無氧或低氧環(huán)境。氧化還原電位的增加(氰化物)并不足以影響保留的水平。后一結(jié)果被異戊巴比妥鈉證實(shí)，異戊巴比妥鈉除呼吸鏈的位置Ⅰ之外也能抑制電子流動(NADH/NAD+比值增加)。
3)最重要的是，通過細(xì)胞的解偶合和氰化物的加入，細(xì)胞的能量狀態(tài)被降低到與類似于氧隔絕時得到的狀態(tài)。因此，細(xì)胞滲透性、幾何形狀和生存性的任何變化也是類似的，暗示了保留是由于在無氧條件下實(shí)施例1化合物的Tc-99m絡(luò)合物的硝基部分的還原。這些數(shù)據(jù)表明，在缺氧組織中，實(shí)施例1化合物的Tc-99m絡(luò)合物被俘獲在缺氧細(xì)胞中。
在氧正常和缺氧(葡萄糖氧化酶)條件下用實(shí)施例1化合物的Tc-99m絡(luò)合物孵育之前，當(dāng)細(xì)胞整體性被冷凍和融化破壞時，與蛋白質(zhì)/細(xì)胞膜碎片相關(guān)的活性百分?jǐn)?shù)是類似的(氧正常＝23.3±0.8%，無氧＝25.3±2.5%n＝3)。后者說明需要用完整的細(xì)胞來俘獲化合物。
采用上述原始記錄，在分離的肌細(xì)胞中測定了數(shù)種Tc-99m絡(luò)合物。在無氧和氧正常狀態(tài)下，測定了在細(xì)胞丸中保留的活性百分?jǐn)?shù)。結(jié)果如下%在細(xì)胞丸中實(shí)施例1化合物實(shí)施例2化合物的99mTc絡(luò)合物的99mTc絡(luò)合物氧正常 2.41±2.323.5±1.7無氧53.0±2.239.9±0.5無氧／氧正常比值 2.31.7實(shí)施例4化合物 實(shí)施例5化合物的99mTc絡(luò)合物 的99mTc絡(luò)合物氧正常 10.9±0.8 10.0(n=1)無氧48.6±9.8 18.2(n=1)無氧／氧正常比值 4.4 1.86－甲基－PnAO6－羥基－PnAO的的99mTc絡(luò)合物 的99mTc絡(luò)合物氧正常 77.4(n=1) 7.1(n=1)無氧22.7(n=1) 9.2(n=1)
無氧／氧正常比值1.3 1.3TcCl(CDO)MeB的 TcCl(DMG)2MP的Tc絡(luò)合物Tc絡(luò)合物氧正常 73.6±(n=2) 69.5(n=2)無氧 83.5(n=2) 80.0(n=2)無氧／氧正常比值1.16-甲基PaAO(3，3，6，9，9-五甲基-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟)和6-羥基PnAO(6-羥基-3，3，9，9-四甲基-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟)的99mTc絡(luò)合物以及TcCl(CDO)3MeB和TcCl(DMG)32MP的99mTc絡(luò)合物(美國專利4705849)是代表性的不含缺氧定位部分的中性親脂性絡(luò)合物。這些數(shù)據(jù)表明本發(fā)明缺氧定位化合物的無氧/氧正常比值較之不帶缺氧定位部分的絡(luò)合物的大。
在另一項研究中，比較了在氧正常、缺氧和無氧狀態(tài)下分離的肌細(xì)胞對實(shí)施例配位體的99Tc絡(luò)合物的吸收與3H-FMISO和125I-碘代乙烯基MISO的吸收。無氧/氧正常比值和缺氧/氧正常比值表明實(shí)施例1化合物的99mTc絡(luò)合物與文獻(xiàn)中所述的用3H和125I標(biāo)記的缺氧定位化合物在無氧細(xì)胞中顯示出類似的選擇性保留。
實(shí)施例1配位體的3H-FMISO I-碘代乙烯基Tc絡(luò)合物 MISO氧正常 18±1(3) 3±1(3) 12±1(3)缺氧 30±7(3) 5±1(3) 16±3(2)
無氧 48±6(3) 8±2(3) 24±3(3)缺氧/氧正常 1.7 1.7 1.4無氧/氧正常 2.7 2.7 2.0(3H-FMISO和125I-碘代乙烯基MISO是先有文獻(xiàn)報道的缺氧定位化合物，參見G.V.Martin，J.S.Rascy，J.C.Caldwell，Z.Crunbaum，K.A.Krohn(1987)Fluoromisonidazole uptake in ischemic canine myocardium，J.Nucl.Med.，28，668and J.E.Biskupiak，J.R.Grierson，J.S.Rascy，G.V.Martin，K.A.Krohn(1991)Synthesis of an(Iodovinyl)misonidazole Derivative for Hypoxia Imaging，J.Med.Chem.34(7)，2165-2168))實(shí)施例13效能的顯示在分離的線粒體中的研究采用Fuller等人的分離方法，從雄性Sprague Dawley大鼠(200g)的心臟制備線粒體(參見(E.O.Fuller，D.I.Golderg，J.W.Starnes，M.Sacks，and M.J.Delavoria-Papadopoulos，Mol.Cell.Cardiol.，17∶71，1985).
從麻醉的大鼠身體上切除心臟，除去心房和大脈管，修剪整齊。將心室在冰冷的分離介質(zhì)(0.225M甘露糖醇，75mM蔗糖，1.0mM EGTA和10mM MOPS，PH7.4)中剁碎，短暫暴露在蛋白分解酶制劑Nagase(Enzyme Development Corp.，New York，NY)中，用Polytron均化。用密度梯度離心法把線粒體從破碎細(xì)胞剩余物中分離出來。
將分離的線粒體在37℃下于三種硝基咪唑化合物中孵育60分鐘。按實(shí)施例12所述方法產(chǎn)生缺氧和無氧。與線粒體有關(guān)的放射性百分?jǐn)?shù)示下表實(shí)施例1配位體 實(shí)施例4配位體的99mTc絡(luò)合物的99mTc絡(luò)合物氧正常 27.8±1.2 15.7±0.4缺氧 39.2±1.0 47.7±3.7缺氧/氧正常 1.4±0.1 3.1±0.3給出的數(shù)值是一個等分中占總放射性的百分?jǐn)?shù)，表示為平均值±S.E.M.?；衔锏臏y試采用與線粒體的制備相同的方法。
這些數(shù)據(jù)表明，在缺氧和氧正常條件下，線粒體對于這些放射性示蹤物的選擇性保留起一定作用。
實(shí)施例143，3，6，6，9，9-六甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜癸烷-2，10-二酮二肟的合成A.N-(3-氨基-2，2-二甲基丙基)-1-氨基-1，1-二甲基-2-丁酮肟在0℃下，將3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷(20.55g，0.15mol，實(shí)施例1)加到2，2-二甲基-1，3-丙烷二胺(69g，0.75mol)的無水甲醇(100ml)溶液中，兩小時加完。反應(yīng)混合物于室溫攪拌20小時。減壓除去溶劑得糊狀物。加水(50ml)，溶液用冰浴冷卻。將溶液過濾，往濾液中加入氫氧化鈉將PH值調(diào)節(jié)至10-11。再次將溶液冷卻并過濾。將濾液減壓濃縮至糊狀，然后用乙醚反復(fù)提取(10×50ml)。合并乙醚溶液，濃縮得油狀物，用石油醚重結(jié)晶2次，得標(biāo)題A化合物，無色結(jié)晶性固體(20.0g)m.p.58-60℃.1H NMR[CDCl3]δ0.85(s，6H，C-Me2)，1.28(s，6H，N-CMe2)，1.9(s，3H，N＝CMe)，2.2(s，2H，NCH2)and2.6(s，2H，N-CH2).
B 3，3，6，6，9，9-六甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜癸烷-2，10-二酮二肟用二異丙基乙胺(0.39g，3mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液處理標(biāo)題A化合物(0.8g，4mmol)的溶液并攪拌。加入3-氯-3-甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-2-亞硝基丁烷(0.783g，3mmol)，于室溫攪拌48小時。減壓除去所有揮發(fā)物，將所得糊狀物溶于二氯甲烷(2ml)中。將此溶液裝入閃硅膠柱，用0-5%甲醇的二氯甲烷溶液緩慢洗脫至所有產(chǎn)物被洗脫出。粗產(chǎn)物用色譜純化兩次以上，得淺黃色產(chǎn)物，HPLC分析表明純度為～97%。將產(chǎn)物于室溫真空干燥24小時，得0.12g標(biāo)題化合物，m.p.80-83℃下該固體呈玻璃態(tài)，118-120℃下熔化并分解。
1H NMR[CDCl3]δ0.8(s，6H，CMe2)，1.2(s，12H，N-CMe2)，1.9(s，3H，N＝CMe)，2.2(2s d，4H，N-CH2)，5.4(s，2H，imidazole CH2)，7.1(s，1H，imidH)and7.15(s，1H，imidH).M.S.[M+H]+412.
元素分析C18H33N7O4·0.6THF和0.1H2OC，53.73;H，8.39;N，21.50;
測定值C，53.73;H，8.55;N，21.28.
實(shí)施例156，6-二甲基-3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟的合成A N-(2-氨基甲基-2-乙基丁基)-1-氨基-1，1-二甲基-2-丁酮肟將3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷(4.59g，0.034mol)滴加到冷卻至0℃的5，5-二甲基-1，3-二氨基丙烷(8.86g，0.068mol)的甲醇(40ml)溶液中。滴加完畢后，讓反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，攪?8小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去甲醇。殘留物溶于二氧六環(huán)/水(2∶1，300ml)，并將溶液冷卻至0℃。向此溶液中先后加入碳酸鈉(15.9g，0.15mol)和二碳酸二叔丁酯(32.73g，0.15mol)。反應(yīng)混合物在0℃攪拌2小時，再于室溫攪拌12小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去二氧六環(huán)和水，殘留物倒入中，用乙醚提取。用水洗乙醚溶液，用硫酸鎂干燥。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去乙醚，殘留物用硅膠色譜純化(己烷/乙酸乙酯，7∶3)。先后餾分中洗脫出來的是二叔丁氧羰基-5，5-二乙基-1，3-二氨基丙烷。收集含有產(chǎn)物的丁氧羰基衍生物的餾分，蒸發(fā)溶劑，得粘稠油，靜置固化(4.2g)，將其在室溫下用HCl的甲醇溶液(25ml)處理30分鐘。減壓除去甲醇，所得固體用氨的甲醇溶液中和，得標(biāo)題A化合物，白色固體。不必進(jìn)一步純化，直接用于下步反應(yīng)。
1H NMR(D2O)δ0.8(t，6H，CH3)，1.43(q，4H，CH2)，1.52(s，6H，C(CH3)2)，1.84(s，3H，CH3)，2.99(d，4H，CH2).
B. 6，6-二乙基-3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜癸烷-2，10-二酮二肟將二異丙基乙胺(0.65g，0.005mol)加到由N-(2-氨基乙基-2-乙基丁基)-1-氨基-1，1-二乙基-2-丁酮肟(1.15g，0.005mol)、3-氯-3-甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-2-亞硝基丁烷(1.23g，0.005mol，實(shí)施例1)和乙腈構(gòu)成的漿液中，室溫攪拌48小時。減壓除去乙腈，殘留物經(jīng)硅膠色譜純化(二氯甲烷/甲醇，95.5∶0.5)。收集含產(chǎn)物餾分，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)蒸發(fā)。將所得油狀物溶解在最少量的三氯甲烷中，置于冰箱里。濾出生成的固體，空氣干燥(0.62g)，m.p.124-125℃。
元素分析C20H37N7O4C，54.64;H，8.48;N，22.29;
測定值C，54.45;H，8.50;N，22.16.
實(shí)施例166，6-二乙基-3，3，9，9-四甲基-1-(4-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟的合成將二異丙基乙胺(0.65g，0.005mol)加到由N-(2-氨基乙基-乙基丁基)-1-氨基-1，1-二甲基-2-丁酮肟(0.46g，0.002mol，實(shí)施例15)、3-氯-3-甲基-1-(4-硝基-1H-咪唑-1-基)-2-亞硝基丁烷(0.47g，0.002mol，實(shí)施例2)和乙腈組成的漿液中，室溫攪拌48小時。減壓除去乙腈，殘留物經(jīng)硅膠色譜純化(二氯甲烷/甲醇，80∶20)。收集UV確認(rèn)的餾分，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)，得黃色油，靜置固化(0.52g)。
1H NMR(DMSO-d6)δ0.76(m，6H，CH3)，1.24(m and s，16H，CH2CH3and C(CH3)2)，1.48(s，3H，CH3)，1.73 and 1.85(s，4H，CH2NH)，5.02(s，2H，N-CH2)，7.8 and 8.24(s，2H，imi.H)，11.1 and 11.8(s，2H，N-OH).
元素分析C20H37N7O4·2.71H2OC，49.19;H，8.75;N，20.08;
測定值C，49.17;H，8.13;N，19.72.
實(shí)施例173，3，9，9-四甲基-1，11-二(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟的合成將由3-氯-3-甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-2-亞硝基丁烷(0.5g，0.002mol，實(shí)施例1)與乙腈(5ml)組成的漿液于45℃保持10分鐘。向此混懸液中加入1，3-丙二胺(75mg，0.001mol)和二異丙基乙胺(300mg，0.002mol)的混合物。攪拌的混合物于45℃保持15分鐘。10分鐘內(nèi)形成澄清溶液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去乙腈和二異丙基乙胺，將殘留物溶解于水(0.5ml)中，用氨水堿化。溶液用乙酸乙酯提取，分出乙酸乙酯層，用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)乙酸乙酯得油狀物，經(jīng)硅膠色譜純化(二氯甲烷/甲醇，8∶2)。合并UV確認(rèn)餾分，蒸發(fā)得粘稠油，真空干燥。用乙腈將產(chǎn)物結(jié)晶(172mg)，mp 163-64℃.1H NMR(DMSO d6)δ1.26(s，12H，CH3)，1.89(m，2H，HNCH2CH2CH2NH)，2.12(m，4H，HNCH2CH2CH2NH)，5.22(s，2H，CH2N＜)，7.07 and 7.23(s，2H，imiH)，11.4(s，2H，OH).MS(FAB);(M+H)+＝495.
元素分析Calc′d for C19H30N10O6·0.56H2OC，45.22;H，6.22;N，27.66;
測定值C，45.32;H，6.09;N，27.66.
實(shí)施例18
3，3，9，9-四甲基-6-甲氧基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟的合成A 2-甲氧基-1，3-二氨基丙烷將氫化鈉(2.49，0.1mol)分批少量加到2-羥基-1，3-丙二胺(30g，103mol)的無水THF(600ml)溶液中，30分鐘加完。滴加碘甲烷(21.3g，0.15mol)，混合物于室溫攪拌6小時。再加碘甲烷(21.3g，0.15mol)再繼續(xù)攪拌6小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去THF和過量碘甲烷，所得粘性油經(jīng)硅膠色譜純化(己烷∶乙酸乙酯9∶1)。收集含N，N′-二叔丁氧羰基-2-甲氧基-1，3-二氨基丙烷的餾分，蒸發(fā)之。所得油狀物靜置固化。用己烷結(jié)晶(17.2g)mp 74-75℃.1H NMR(CDCl3)δ1.45(s，9H，t-C4H9)，3.05-3.35(m，4H，HNCH2CHOCH3CH2NH)，3.41(s，3H，OCH3)，5.05(m，bs，1H，NHCO).
將N，N-二叔丁氧羰基-2-甲氧基-1，3-二氨基丙烷(31.7g，0.1mol)加到HCl的甲醇溶液(100ml)中，于室溫攪拌30分鐘。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去甲醇，殘留物用氨的甲醇溶液處理，得標(biāo)題化合物，粘稠油(9.2g)1H NMR(D2O)δ3.08-3.32(m，4H，H2NCH2CHOCH3CH2NH2)，3.31(s，3H，OCH3)，3.52(m，1H，CH)B N-(3-氨基-2-甲氧基丙基)-1-氨基-1，1-二甲基-2-丁酮肟將標(biāo)題A化合物(9.2g，0.091mol)溶解于無水甲醇(50ml)中，將溶液冷卻至0℃。加入3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷(6.25g，0.04mol，實(shí)施例1)，1小時加完，反應(yīng)混合物于0℃下攪拌1小時，室溫下再攪拌12小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去甲醇，將殘留物溶解在二氧六環(huán)/水(2∶1，300ml)中，溶液冷卻至0℃，先后加入碳酸鈉(21.2g，0.2mol)和二碳酸二叔丁酯(42.0g，0.2mol)。反應(yīng)混合物于0℃攪拌1小時，室溫攪拌6小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去二氧六環(huán)/水，殘留物倒入水中，用乙酸乙酯提取。乙酸乙酯層用水洗，用硫酸鈉干燥。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將溶液蒸發(fā)，殘留物經(jīng)硅膠色譜提純(己烷∶乙酯乙酯50∶50)。先洗脫出的是N，N′-二叔丁氧羰基-2-甲氧基-1，3-氨基丙烷(由未反應(yīng)的2-甲氧基-1，3-二氨基丙烷生成)。收集產(chǎn)物的叔丁氧羰基衍生物，蒸發(fā)得粘稠油，靜置固化。產(chǎn)量7.5g(25%)1H NMR(CDCl3)δ1.22(s，6H，CH3)，1.42(s，9H，t-C4H9)，1.6(bs，1H，NH)，1.85(s，3H，CH3C＝NOH)，2.52-3.28(m，4H，HNCH2CHOCH3CH2NH2)，3.41(s，3H，OCH3)，4.12(q，1H，CH)，5.35(bs，1H，NHCO).
將叔丁氧羰基衍生物(7.5g，0.0035mol)溶解在HCl的甲醇溶液(50ml)中，于室溫攪拌30分鐘。加入無水乙醚(300ml)，濾集沉淀的胺-肟鹽酸鹽，真空干燥。將固體溶解在甲醇中，用氨的甲醇溶液中和。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去甲醇，將這樣得到的游離堿真空干燥(3.89g)1H NMR(D2O)δ1.22(s，6H，CH3)，1.81(s，CH3C＝NOH)，2.52-3.18(m，4H，HNCH2CHCHOCH3CH2NH2)，3.31(s，3H，OCH3)，3.52(m，1H，CH).
C.3，3，9，9-四甲基-6-甲氧基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟攪拌下，將二異丙基乙胺(0.35g，0.0028mol)加到由標(biāo)題B化合物(0.5g，0.0025mol)、3-氯-3-甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-2-亞硝基丁烷(0.7g，0.0028mol)和乙腈(5ml)組成的漿液中，加熱到45℃。15分鐘后形成澄清溶液。反應(yīng)混合物于45℃繼續(xù)攪拌1小時。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去乙腈，殘留物真空干燥。用氨的甲醇溶液處理所得的粘性油，真空除去甲醇。所得油狀物經(jīng)硅膠色譜提純(二氯甲烷∶甲醇8∶2)，收集UV確認(rèn)的餾分，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)。所得固體用乙腈結(jié)晶(0.12g)，m.p.
169-70℃.MS(M+H)+calc′d414.2465;found414.2472.
元素分析C17H31N7O5C，49.38;H，7.56;N，23.71;
測定值C，49.70;H，7.59;N，23.73.
實(shí)施例19[99Tc]氧代[[4，4，10，10-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-5，9-二氮雜十二烷-3，11-二酮二肟基](3-)-N，N′，N″，N′′′]锝(Ⅴ)的合成。
將[N(叔丁基)4]TcOCl-4(59.9mg，0.120mmol)溶于1.0mlMeOH中，加入乙二醇(150ml)，接著加入0.75M乙酸鈉的MeOH(1.5ml)溶液和4，4，10，10-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-5，9-二氮雜十二烷-3，11-二酮二肟(70.6mg，0.178mol，實(shí)施例3)，溶液變?yōu)橥该鞯慕奂t棕色。5分鐘后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，得粘性桔紅色不透明油。將產(chǎn)物再溶于二氯甲烷中，水洗(2×2.5ml)，然后用硫酸鈉干燥。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得亮桔色固體。將該固體再溶于＜1ml二氯甲烷中，產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱純化，用乙醚洗脫。收集桔色帶，蒸發(fā)溶劑得亮紅色固體，用二氯甲烷/己烷重結(jié)晶。吸濾分離產(chǎn)物，用乙烷洗滌并真空干燥過夜，產(chǎn)物產(chǎn)量為29.5mg，亮桔色小晶體M.S.(M+H)+＝510;(MH)-＝508.
元素分析C17H28N7O5TcC，40.08;H，5.54;N，19.25;
測定值C，39.92;H，5.84;N，19.15.
實(shí)施例20在含水乙醇中反應(yīng)，合成[99mTc]氧代[[3，3，6，6，9，9-六甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟基](3-)-N，N′，N″，N′′′]锝(Ⅴ)將3，3，6，6，9，9-六甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟(3.08mg，實(shí)施例5C)溶解在EtOH(1ml)中。加入0.1M碳酸氫鈉水溶液(0.5ml)和99mTcO-4的鹽水(0.8ml，57.1mCi)液，隨后加入飽和酒石酸亞錫的鹽水溶液(150μl)。振蕩混合物，室溫下靜置10分鐘。
實(shí)施例21以SnDTPA為還原劑合成[99mTc]氧代[[3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟基](3-)-N，N，N″，N′′′]锝(Ⅴ)在一組小瓶中裝上2mg凍干的實(shí)施例1配位體。將鹽水和99mTc發(fā)生器洗出液加到一小瓶上述凍干制劑中，使總組成體積為2ml，并根據(jù)需要調(diào)節(jié)放射性濃度。在市購的小瓶組中每個小瓶中裝有500μg氯化亞錫和10mgDTPA，加入2ml鹽水再調(diào)制。將100μl亞錫DTPA溶液移到上述實(shí)施例1配位體的重新組成的小瓶組中。振蕩小瓶，室溫下靜置10分鐘。用HPLC評定產(chǎn)物的放射化學(xué)純度，測定結(jié)果為＞95%。
實(shí)施例22下表總結(jié)了按照實(shí)施例8測試的其它化合物的結(jié)果化合物名稱/號碼 Epc(V) 還原過程實(shí)施例2化合物 -1.81 可逆實(shí)施例3化合物 -1.54 可逆實(shí)施例4化合物 -1.51 可逆實(shí)施例5化合物 -1.52 可逆實(shí)施例6a化合物 -1.81 可逆-2.02 不可逆實(shí)施例6b化合物 -1.48 可逆-1.96 不可逆實(shí)施例19化合物 -1.53 可逆-2.07 不可逆
權(quán)利要求
1.下式化合物
式中，至少一個R是-(A)p-R2，其中(A)p是連接基團(tuán)，R2是缺氧定位部分；并且其中其它R基團(tuán)相同或不同，各自選自氫、鹵素、羥基、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、-COOR3、-C(O)NHR3、-NH2、羥烷基、烷氧烷基、羥基芳基、鹵代烷基、芳烷基、-烷基-COOR3、-烷基-CON(R3)2、-烷基-N(R3)2、-芳基-COOR3、-芳基-CON(R3)2、芳基-N(R3)2、含氮或氧的5元或6元雜環(huán)；或者兩個R基團(tuán)與一個或多個它們相連的原子一起形成碳環(huán)的或雜環(huán)的，飽和的或不飽和的螺環(huán)或稠環(huán)，該環(huán)可被R基團(tuán)取代；R1是氫、硫羥基保護(hù)基或-(A)p-R2；R3是氫、烷基或芳基；m=2-5；且p=0-20。
2.金屬和配位體的絡(luò)合物，該絡(luò)合物包括一個缺氧定位部分，其中所述絡(luò)合物通過細(xì)胞膜的滲透性大于14C-蔗糖的滲透性。
3.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，其配位數(shù)小于7。
4.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，其中金屬是非放射性金屬。
5.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，其中金屬是放射性金屬。
6.權(quán)利要求5的絡(luò)合物，其中所述金屬是锝或錸。
7.權(quán)利要求6的絡(luò)合物，其中所述金屬是+5氧化態(tài)的。
8.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，其中所述配位體與所述金屬形成螯合物。
9.權(quán)利要求8的絡(luò)合物，其中所述絡(luò)合物由二齒配位體形成。
10.權(quán)利要求8的絡(luò)合物，其中所述絡(luò)合物由三齒配位體形成。
11.權(quán)利要求8的絡(luò)合物，其中所述絡(luò)合物由四齒配位體形成。
12.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，其中所述配位體選自
式中，至少一個R是-(A)p-R2，其中(A)p是連接基團(tuán)，R2是缺氧定位部分;并且其中其它R基團(tuán)相同或不同，各自選自氫、鹵素、羥基、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、-COOR3、-C(O)NHR3、-NH2、羥烷基、烷氧烷基、羥基芳基、囟代烷基、芳烷基、-烷基-COOR3、-烷基-CON(R3)2、-烷基-N(R3)2、-芳基-COOR3、-芳基-CON(R3)2、芳基-N(R3)2、含氮或氧的5元或6元雜環(huán);或者兩個R基團(tuán)與一個或多個它們相連的原子一起形成碳環(huán)的或雜環(huán)的、飽和的或不飽和的螺環(huán)或稠環(huán)，該環(huán)可被R基團(tuán)取代;R3是氫、烷基或芳基;m＝2-5;且p＝0-20。
13.權(quán)利要求12中式Ⅰa或Ⅰb的絡(luò)合物，其中金屬是锝的放射性核素。
14.權(quán)利要求12中式Ⅰb的絡(luò)合物，其中所述金屬是錸的放射性核素。
15.含有連接基團(tuán)(A)p的權(quán)利要求12的金屬絡(luò)合物，其中P是大于0的整數(shù)，各個A單元(形成直鏈或支鏈)各自選自-CH2-，-CHR4、-CR4R5-，-CH＝CH-，-CH-CR4-，-CR4＝CR5-，-C≡C-，環(huán)烷基，環(huán)烯基，芳基，雜環(huán)基，氧，硫，
，-NH-，-HC＝N-，-CR4＝N-，-NR4-，-CS-;其中R4和R5各自選自烷基，鏈烯基，烷氧基，芳基，含氮或氧的5或6員雜環(huán)，囟素，羥基或羥烷基。
16.權(quán)利要求15的金屬絡(luò)合物，其中(A)p不存在或者(A)p選自烷基、氧代烷基、羥基烷基、羥基烷氧基、鏈烯基芳基烷基、鏈烯基、芳基烷基酰胺、烷基酰胺、烷基胺和(烷基胺)烷基。
17.權(quán)利要求16的金屬絡(luò)合物，其中不含(A)p或者(A)p選自
其中A3和A3′是相同或不同的烷基。
18.權(quán)利要求12的金屬鉻合物，其中缺氧定位部分(R2)是缺氧有關(guān)的硝基雜環(huán)基團(tuán)。
19.權(quán)利要求18的鉻合物，其中該絡(luò)合物的所述連接基團(tuán)/缺氧定位部分選自
環(huán)狀部分是5元或6元環(huán)或芳香環(huán)，其中n是5元或6元環(huán)上所能提供的取代位置的總數(shù);一個或多個R7取代基獨(dú)立地選自氫、囟素、羥基、烷基、芳基、烷氧基、羥基烷基、羥基烷氧基、鏈烯基、芳烷基、芳基烷基酰胺、烷基酰胺、烷基胺和(烷基胺)烷基;X1可以是氮、氧、硫、-CR7＝或-CRR-;且當(dāng)沒有(A)p時，硝基雜環(huán)缺氧定位部分通過雜環(huán)上的氮原子或碳原子與權(quán)利要求18的絡(luò)合物其余部分相連;或者(A)p包括在硝基雜環(huán)基團(tuán)和所述權(quán)利要求18絡(luò)合物其余部分之間的連接。
20.權(quán)利要求18的絡(luò)合物，其中所述缺氧有關(guān)的硝基雜環(huán)基團(tuán)選自2-，4-或5-硝基咪唑、硝基呋喃、硝基噻唑及其衍生物。
21.權(quán)利要求20的絡(luò)合物，其中絡(luò)合物的所述定位基團(tuán)選自
22.權(quán)利要求20的絡(luò)合物，其中該絡(luò)合物的連接基團(tuán)/定位部分選自
23.權(quán)利要求12的絡(luò)合物，其中所述配位體是
24.權(quán)利要求23的絡(luò)合物，其中R2是硝基雜環(huán)，每一個R選自氫、羥基或烷基。
25.權(quán)利要求12的絡(luò)合物，其中所述配位體是
26.權(quán)利要求25的絡(luò)合物，其中R2是硝基雜環(huán)基團(tuán)，每一個R可以是氫或烷基。
27.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，它包括一個放射性核素和一個與缺氧定位部分連接的配位體，其中所述配位體/定位部分的化學(xué)名稱是3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟。
28.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，它包括一個放射性核紗和一個與缺氧定位部分連接的配位體，其中所述配位體/定位部分的化學(xué)名稱是3，3，9，9-四甲基-1-(4-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟。
29.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，它包括一個放射性核素和一個與缺氧定位部分連接的配位體，其中所述配位體/定位部分的化學(xué)名稱是4，4，10，10-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-5，9-二氮雜十二烷-3，11-二酮二肟。
30.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，它包括一個放射性核素和一個與缺氧定位部分連接的配位體，其中所述配位體/定位部分的化學(xué)名稱是6-羥基-3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟。
31.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，它包括一個放射性核素和一個與缺氧定位部分連接的配位體，其中所述配位體/定位部分的化學(xué)名稱是3，3，9，9-四甲基-6-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙酰氨基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟。
32.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，它包括一個放射性核素和一個與缺氧定位部分連接的配位體，其中所述配位體/定位部分的化學(xué)名稱是3，3，9，9-四甲基-6-((2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟。
33.權(quán)利要求12的絡(luò)合物，其中配位體是
其中R1選自氫或硫醇保護(hù)基，其它R基團(tuán)各自選自氫、羥基或烷基。
34.權(quán)利要求33的絡(luò)合物，它包括一個放射性核素和一個與缺氧定位部分連接的配位體，其中所述配位體的化學(xué)名稱是5，8-二氮雜-1，2-二硫雜-5-(2-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基)-3，3，10，10-四甲基環(huán)癸烷。
35.權(quán)利要求12的絡(luò)合物，其中配位體是
式中R1選自H或硫醇保護(hù)基，其它R基團(tuán)各自選自H、羥基或烷基。
36.權(quán)利要求12的絡(luò)合物，其中配位體是
式中R1選自H或硫醇保護(hù)基團(tuán)，其它R基團(tuán)各自選自氫、羥基或烷基，或者兩個R基團(tuán)與一個或多個它們相連的原子一起形成碳環(huán)或雜環(huán)的、飽和或不飽和的螺環(huán)或稠環(huán)，該環(huán)可被R基團(tuán)取代。
37.一種適于制備權(quán)利要求2金屬絡(luò)合物的組合，它包括選自權(quán)利要求1化合物的配位體源和一種還原劑。
38.權(quán)利要求37的組合，其中所述還原劑是亞錫化合物。
39.權(quán)利要求37的組合，其中所述金屬選自锝和錸。
40.一種適于制備權(quán)利要求2金屬絡(luò)合物的多小瓶組合，在第一小瓶中裝有一個交換配位體源和一種還原劑，在第二小瓶中裝有選自權(quán)利要求1化合物的配位體。
41.權(quán)利要求40的組合，其中所述還原劑是亞錫化合物。
42.權(quán)利要求40的組合，其中所述交換配位體選自葡庚糖酸鹽、甘露糖醇、蘋果酸鹽、檸檬酸和酒石酸。
43.權(quán)利要求40的組合，其中所述金屬選自锝和錸。
44.亞烷基二胺肟的制備方法，它包括將亞烷基二胺與2當(dāng)量囟代酮反應(yīng)，得到亞烷基二胺二酮，隨后將其轉(zhuǎn)化為所述亞烷基二胺二肟;或者將亞烷基二胺與(當(dāng)量第一種囟代酮反應(yīng)，再將所得產(chǎn)物與1當(dāng)量與第二種囟代酮反應(yīng)，隨后轉(zhuǎn)化為所述亞烷基二胺二肟;或者使亞烷基二胺與1當(dāng)量氯代亞硝基化合物反應(yīng)，然后將產(chǎn)物與囟代酮反應(yīng)，隨后轉(zhuǎn)化為所述的亞烷基二胺二肟。
45.制備下式化合物的方法
式中，至少一個R是-(A)p-R2，其中(A)p是連接基團(tuán)，R2是缺氧定位部分;并且其中其它R基團(tuán)相同或不同，各自選自氫、囟素、羥基、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、-COOR3、-C(O)NHR3、-NH2、羥烷基、烷氧烷基、羥基芳基、囟代烷基、芳烷基、-烷基-COOR3、-烷基-CON(R3)2、-烷基-N(R3)2、-芳基-COOR3、-芳基-CON(R3)2、芳基-N(R3)2、含氮或氧的5元或6元雜環(huán);或者兩個R基團(tuán)與一個或多個它們相連的原子一起形成碳環(huán)的或雜環(huán)的、飽和的或不飽和的螺環(huán)或稠環(huán)，該環(huán)可被R基團(tuán)取代;R3是氫、烷基或芳基;m＝2～5;且P＝0～20，該方法包括將化合物
與2當(dāng)量下式囟代酮反應(yīng)，
(其中X是氟、氯、溴或碘)得到下式二酮
隨后，將該二酮轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的二肟產(chǎn)物;將化合物
與1當(dāng)量下式的第一種囟代酮反應(yīng)，
(其中X是氟、氯、溴或碘)得到下式中間體，
它隨后與1當(dāng)量下式第二種囟代酮反應(yīng)，
其中在所述第二種囟代酮上的至少一個R基團(tuán)與所述第一種囟代酮上相應(yīng)的R基團(tuán)不同，X是氟、氯、溴或碘，得到下式中間體，
隨后將其轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的二肟，其中取代式A化合物的所述第一種胺肟部分的R基團(tuán)不同于取代所述第二種胺肟部分的R基團(tuán)。
46.下式化合物的制備方法，
式中，至少一個R是-(A)p-R2，其中(A)p是連接基團(tuán)，R2是缺氧定位部分;并且其中其它R基團(tuán)相同或不同，各自選自氫、囟素、羥基、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳基、-COOR3、-C(O)NHR3、-NH2、羥烷基、烷氧烷基、羥基芳基、囟代烷基、芳烷基、-烷基-COOR3、-烷基-CON(R3)2、-烷基-N(R3)2、-芳基-COOR3、-芳基-CON(R3)2、芳基-N(R3)2、含氮或氧的5元或6元雜環(huán);或者兩個R基團(tuán)與一個或多個它們相連的原子一起形成碳環(huán)的或雜環(huán)的、飽和的或不飽和的螺環(huán)或稠環(huán)，該環(huán)可被R基團(tuán)取代;R3是氫、烷基或芳基;m＝2～5;且P＝0～20，該方法包括a)將化合物
與2當(dāng)量下式化合物反應(yīng)，
(其中X是Br，Cl，I或F)，得到下式二酮Ⅶ
隨后，將該二酮轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的二肟，或者b)將化合物
與1當(dāng)量的下式第一種化合物反應(yīng)，
(其中X是氟、氯、溴或碘)，得到下式化合物。Ⅷ
隨后將其與下式化合物反應(yīng)Ⅵ′
(其中R′＝R，但R′基團(tuán)之一必須是-(A)p-R2，X是氟、氯、溴或碘)，得到二酮(Ⅸ)Ⅸ
(其中R′之一必須是-(A)p-R2)該二酮隨著被轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的二肟。
47.哺乳動物缺氧組織診斷顯像的方法，它包括給予權(quán)利要求11中式Ⅰa或Ⅰb配位體的金屬絡(luò)合物，其中金屬是锝的放射性核素，缺氧定位部分就是或包含缺氧有關(guān)的硝基雜環(huán)基團(tuán)。
48.采用權(quán)利要求47的方法診斷心臟中局部缺血組織。
49.采用權(quán)利要求47的方法，診斷肺中局部缺血組織。
50.采用權(quán)利要求47的方法診斷腎或肝中局部缺血組織。
51.采用權(quán)利要求47的方法診斷大腦中局部缺血組織。
52.采用權(quán)利要求47的方法診斷腫瘤中缺氧組織。
53.向需要放射治療的哺乳動物提供放射治療的方法，它包括給予權(quán)利要求11中的Ⅰa或Ⅰb的絡(luò)合物，其中金屬是錸的放射性核素，缺氧定位部分就是或包含缺氧有關(guān)的硝基雜環(huán)基團(tuán)。
54.哺乳動物血流的灌注顯像方法，它包括給予權(quán)利要求11中式Ⅰa或Ⅰb配位體的金屬絡(luò)合物，其中金屬是锝的放射性核素。
55.權(quán)利要求1的化合物，其化學(xué)名稱為3，3，6，6，9，9-六甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟。
56.權(quán)利要求1的化合物，其化學(xué)名稱為6，6-二乙基-3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟
57.權(quán)利要求1的化合物，其化學(xué)名稱為6，6-二乙基-3，3，9，9-四甲基-1-(4-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟。
58.權(quán)利要求1的化合物，其化學(xué)名稱為3，3，9，9-四甲基-1，11-二(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟
59.權(quán)利要求1的化合物，其化學(xué)名稱為3，3，9，9-四甲基-6-甲氧基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟。
60.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，它包括一個放射性核素和一個與缺氧定位部分連接的配位體，其中所述配位體/定位部分的化學(xué)名稱是[99Tc]氧代[[4，4，10，10-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-5，9-二氮雜十二烷-3，11-二酮二肟基](3-)-N，N′，N″，N′′′]锝(Ⅴ)。
61.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，它包括一個放射性核素和一個與缺氧定位部分連接的配位體，其中所述配位體/定位部分的化學(xué)名稱是[99mTc]氧代[[3，3，6，6，9，9-六甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟基](3-)-N，N′，N″，N′′′]锝(Ⅴ)。
62.權(quán)利要求2的絡(luò)合物，它包括一個放射性核素和一個與缺氧定位部分連接的配位體，其中所述配位體/定位部分的化學(xué)名稱是[99mTc]氧代[[3，3，9，9-四甲基-1-(2-硝基-1H-咪唑-1-基)-4，8-二氮雜十一烷-2，10-二酮二肟基](3-)-N，N′，N″，N′′′]锝(Ⅴ)。
全文摘要
公開了新方法、過程和與缺氧定位部分連接的金屬絡(luò)合物，該絡(luò)合物包括金屬(最好是錸或锝的放射性核素)缺氧定位部分和絡(luò)合配位體，其中結(jié)合的所述配位體和所述放射性核素比蔗糖的細(xì)胞膜滲透率更大。
文檔編號C07D307/71GK1093084SQ9310389
公開日1994年10月5日 申請日期1993年3月31日 優(yōu)先權(quán)日1991年10月29日
發(fā)明者K·林達(dá), A·D·納恩, D·P·諾沃尼克, K·拉馬靈加姆, R·J·迪洛科, W·L·拉姆齊, J·P·皮羅 申請人:E·R·斯奎布父子公司