專利名稱：氟代紅豆杉醇的制作方法
本申請是1993年1月19日提交的USSN08/006，423的部分繼續(xù)申請，USSN08/006，423作為本申請的參考文獻，它又是1992年7月1日提交的USSN07/907，261的繼續(xù)申請。本申請也是1992年12月24日提交的USSN07/996，455和1993年3月11日提交的USSN08/029，819的部分繼續(xù)申請，USSN07/996，455和08/029，819也作為本申請的參考文獻。
本發(fā)明提供了具有抗腫瘤活性的化合物。本發(fā)明還提供了用于制備具有抗腫瘤活性化合物的中間體。
紅豆杉醇最初是從短葉紫杉(WesternYew)，短葉紅豆杉(Taxusbrevifolia)Nutt(紫杉科)分離出來的，其結(jié)構(gòu)如下(示出了2′-，7-，10-和13-位)
在由NationalCancerInstitute(NCI)資助的臨床試驗中，結(jié)果表明紅豆杉醇有望用于抵抗卵巢癌、乳腺癌以及其它癌癥的發(fā)展。最近紅豆杉醇已被批準用于治療轉(zhuǎn)移性卵巢癌。
在抗有絲分裂的藥物中紅豆杉醇是無與倫比的，即使在其他方面不利的條件下它也能促進微管蛋白的穩(wěn)定的微管組裝。該藥物與微管結(jié)合，使微管穩(wěn)定不發(fā)生解聚，從而破壞微管蛋白與微管之間的平衡，最終抑制有絲分裂。有關(guān)紅豆杉醇的作用機制、毒理學、臨床療效等綜述于許多文章中，例如Rowinsky等人的文章，見Taxol;ANovelInvestigationalAntimicrotubuleAgent，J.Natl.CancerInst.，82;p1247(1990)。
由于發(fā)現(xiàn)紅豆杉醇在癌癥治療中效果顯著，許多實驗室已設(shè)立了開發(fā)紅豆杉醇類似物的項目，以便進一步研究其藥理學特性。由此發(fā)現(xiàn)了下式的taxotere
據(jù)報道它在促進微管組裝方面和紅豆杉醇一樣有效且其有效性大約是胞毒劑的兩倍。見，BiologicallyActiveTaxolAnaloguesWithDeletedA-RingSideChainSubstitutentsandVariableC-2′Configurations，J.Med.Chem.34，p1176(1991);RelationshipsbetweentheStructureofTaxolAnaloguesandTheirAntimitoticActivity，J.Med.Chem.，34，p992(1991)。
近年來，將氟引入到藥理學活性化合物中發(fā)現(xiàn)了一些意義深遠且意想不到的結(jié)果。(生物學活性有機氟化合物制備方法的進展詳見;AdvancesinthePreparationofBiologicallyActiveOrganofluorineCompounds，Tetrahedron，43，No.14，p3123(1987)。)本發(fā)明的目的是提供氟化紅豆杉醇及其衍生物。
本發(fā)明涉及一種式Ⅰ的氟化紅豆杉醇衍生物
式中R1為-CORz，其中的Rz為RO-或R;
Rg為C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基、或式-W-Rx的基團，其中的W是一個鍵、C2-6烯烴二基、或-(CH2)t-，其中的t為1-6;Rx為萘基、呋喃基、噻吩基或苯基，此外，Rx可被1-3個相同或不同的C1-6烷基，C1-6烷氧基，鹵素或-CF3基選擇性地取代;
R2為-OCOR、H、OH、-OR、-OSO2R、-OCONRoR、-O-CONHR、-OCOO(CH2)tR、或-OCOOR;
R和Ro各自為C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C3-6環(huán)烷基、C2-6炔基、或苯基，苯基可被1～3個相同或不同的C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素或-CF3基選擇性地取代。
本發(fā)明還提供藥物組合物和對式Ⅰ的氟化紅豆杉醇有用的中間體。還提供一種用式Ⅰ的化合物治療哺乳動物腫瘤的方法。
本發(fā)明涉及式Ⅰ的氟化紅豆杉醇衍生物
式中R1為-CORz，其中的Rz為RO-或R;
Rg為C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基、或式-W-Rx的基團，其中的W是一個鍵、C2-6烯烴二基、或-(CH2)t-，其中的t為1-6;Rx為萘基、呋喃基、噻吩基或苯基，此外，Rx可被1-3個相同或不同的C1-6烷基，C1-6烷氧基，鹵素或-CF3基選擇性地取代;
R2為-OCOR、H、OH、-OR、-OSO2R、-OCONRoR、-O-CONHR、-OCOO(CH2)tR、或-OCOOR;
R和Ro各自為C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C3-6環(huán)烷基、C2-6炔基、或苯基，苯基可被1～3個相同或不同的C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素或-CF3基選擇性地取代。
可用多種方法合成式Ⅰ的氟化紅豆杉醇衍生物。下面對合成的描述和具體的實施例只是為了說明的目的，不以任何方式對用其他方法制備本發(fā)明的化合物構(gòu)成限制。
在一個實施方案中，可用方案Ⅰ的方法制備式Ⅰ的化合物。在方案Ⅰ中，式Ⅱ的2′-羥基保護的紅豆杉醇與二乙氨基硫三氟化物(DAST)反應(yīng)，除得到式ⅩⅩⅤ的8-去甲基-7，8-環(huán)丙紅豆杉醇(或簡稱為7，8-環(huán)丙紅豆杉醇)衍生物外還得到式Ⅲ的7-α-氟代紅豆杉醇衍生物。步驟(a)。步驟(a)的反應(yīng)可在多種溶劑中進行，如四氫呋喃、二氯甲烷、二乙醚、甲苯、1，1-二甲氧基乙烷(DME)等，或它們的任意組合/混合物。已普遍觀察到，當步驟(a)在THF/二乙醚的混合物或大約10∶1～8∶1的甲苯;四氫呋喃中進行時，可獲得較高的7-α-氟代紅豆杉醇Ⅲ與7，8-環(huán)丙紅豆杉醇ⅩⅩⅤ之比。在此所用的R3為常用的羥基保護基。可將式Ⅲ的化合物與化合物ⅩⅩⅤ分離開，或者不經(jīng)任何分離將混合物用于步驟(b)，在步驟(b)之后將產(chǎn)物I1與化合物ⅩⅩⅥ分離開?；衔锏姆蛛x可用本領(lǐng)域的技術(shù)人員常用的任何常規(guī)純化技術(shù)來進行。分離方法包括色譜法、分級結(jié)晶法等。特別適用于分離的方法是HPLC(高壓液相色譜)。
在此使用的常規(guī)羥基保護基(或簡稱為羥基保護基)是可用于保護羥基官能團的部分，它們是本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的。所說的基團最好是可用不會明顯破壞分子的其余部分的方法除去的基團。這種易于除去的羥基保護基的實例包括氯乙?；?、甲氧甲基、2，2，2-三氯乙氧甲基、2，2，2-三氯乙氧羰基(或簡稱為三氯乙氧羰基)、四氫吡喃基、四氫呋喃基、叔丁基、芐基、對硝基芐基、對甲氧基芐基、二苯基甲基、三C1-6烷基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基等。其他適用的保護基見Chapter 2 of“Protecting Groups in Organic Synthesis”，Second Ed.，by Theodora W.Greene and Peter G.M.Wuts(1991，John Wiley & Sons)。特別是有利的式Ⅱ化合物的保護基是芐氧羰基，它可通過催化氫解除去，或是三C1-6烷基甲硅烷基，它可用氟離子除去。
在另一個實施方案中，可用方案Ⅱ的方法制備式I2的化合物。在方案Ⅱ中，用還原劑如氫硼化四丁銨從式I1的化合物中除去(C)13-側(cè)鏈，得到式Ⅳ的7-α-氟代漿果赤霉素Ⅲ。步驟(a)。隨后在步驟(b)中氮雜環(huán)丁酮ⅩⅤ與式Ⅳ的化合物反應(yīng)。普通種類的式ⅩⅤ的氮雜環(huán)丁酮是眾所周知的。它們的合成或其前體的合成已有報道，例如見Holton的歐洲專利申請0，400，971A2(1990年12月5日公開);Holton的歐洲專利申請0，534，709A1，0，534，708A1，和0，534，707A1(均于1993年3月31日公開);Ojima等人的Tetrahedron，48，No.34，pp6985-7012(1992);Journal of Organic Chemistry，56，pp1681-1683(1991);和Tetrahedron Letters，33，No.39，pp5737-5740(1992);Brieva等人的J.Org.Chem.，58，pp1068-1075;以及Palomo等人的Tetrahedron Letters，31，No.44，pp6429-6432(1990);這九篇文獻均作為參考文獻。為了生產(chǎn)式ⅩⅤ范圍內(nèi)的其它氮雜環(huán)丁酮對方法進行改動，但未在此具體公開或在以上九篇文獻中公開或在其它文獻中報道過的方法對本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說應(yīng)是顯而易見的。
歐洲專利申請0，400，971A2，0，534，709A1，0，534，708A1，和0，534，707A1，以及Tetrahedron，48，No.34，pp6985-7012(1992)也描述了這樣的方法，即式ⅩⅤ的氮雜環(huán)丁酮與漿果赤霉素Ⅲ衍生物或其金屬醇鹽的(C)13-羥基反應(yīng)，得到具有多種(C)13一側(cè)鏈的紅豆杉醇類似物。在方案Ⅱ的步驟(b)中，在偶聯(lián)之前將(C)13-碳上的羥基(用星號標示)轉(zhuǎn)化為金屬醇鹽是有利的。所說的金屬醇鹽的金屬陽離子最好選自Ⅰa或Ⅱa族金屬?？赏ㄟ^使Ⅳ的化合物與強金屬堿反應(yīng)形成所需的金屬醇鹽，強金屬堿如二異丙基氨化鋰、C1-6烷基鋰、雙(三甲基甲硅烷基)氨化鋰、苯基鋰、氫化鈉、氫化鉀、氫化鋰，或類似的堿。例如當需要醇鋰時，可在惰性溶劑如四氫呋喃中使式Ⅳ的化合物與正丁基鋰反應(yīng)。在步驟(c)中從式Ⅴ的化合物去除R3得到式I3的化合物。當R3是三C1-6烷基甲硅烷基時，如三乙基甲硅烷基，可用氟離子或在醇或乙腈中用無機酸除去R3。用氟離子除去R3是在惰性溶劑如四氫呋喃、二氯甲烷、1，4-二惡烷、DMF、氯仿、或類似的溶劑中進行的;反應(yīng)介質(zhì)最好用弱酸如乙酸進行緩沖。如果有7，8-環(huán)丙衍生物存在，實質(zhì)上也不會影響方案Ⅱ的各步驟，條件是應(yīng)考慮到由于7，8-環(huán)丙衍生物的存在會消耗適量的試劑。通常會發(fā)現(xiàn)在步驟(a)之后，但在步驟(b)之前分離7，8-環(huán)丙衍生物較好。
方案Ⅲ描述了一種獲得式I5的化合物的方法，式中Rm為-O-COR、-OSO2R、-OCONRoR、-OCONHR、-OCOO(CH2)tR、或-OCOOR。式ⅩⅩⅩ的起始化合物中做了充分描述或者可用紅豆杉醇領(lǐng)域中熟知的方法來制備。例如，如方案Ⅲa所示，式ⅩⅩⅩⅧ的化合物能與RC(＝O)L，R(CH2)tOC(＝O)L，ROC(＝O)L，LSO2R，LCONRoR，LCONHR，O＝C＝N-R或它們的酐衍生物反應(yīng)，其中L是典型的離去基團如氯、溴、甲磺酰基、三氟甲磺?；⒒蚣妆交酋；?，得到式ⅩⅩⅩⅨ的化合物。在步驟(a)中通常需要堿以脫去C-10羥基中的質(zhì)子。特別適用于步驟(a)的堿為強堿如C1-6烷基鋰、雙(三甲基甲硅烷基)氨化鋰、或類似的堿，其用量大約為1.1當量。用堿去質(zhì)子最好在非質(zhì)子傳遞溶劑如四氫呋喃中，在低溫下，通常在-40°～0℃下進行。在步驟(b)中，式ⅩⅩⅩⅩⅨ的化合物可與式ⅩⅤ的氮雜環(huán)丁酮以與方案Ⅱ步驟(b)基本上相同的方式進行反應(yīng)，得到式ⅩL的化合物，除去式ⅩL化合物上的R3基團，得到式ⅩⅩⅩ的化合物。
在式Ⅰ化合物范圍內(nèi)的式Ⅰ3化合物可用方案Ⅳ的方法制備。在步驟(a)中，當式Ⅵ的化合物用1～2當量常用的羥基保護試劑，優(yōu)選氯甲酸三氯乙酯進行處理時，可同時得到2′-和7-羥基保護的(式ⅩⅢ化合物)和2′-和10-羥基保護的(式ⅤⅡ化合物)紅豆杉醇衍生物的混合物。
在步驟(b)中式ⅩⅢ化合物隨后與1，1，2-三氟-2-氯三乙胺反應(yīng)，得到式Ⅷ的二烯酮。在步驟(c)中，除去保護基R3。(三氯乙氧羰基的去除或在乙酸中用鋅粉來完成)。在步驟(d)中，對式ⅠⅩ化合物的二烯進行催化加氫，得到式Ⅹ化合物。隨后在步驟(e)中，再次對2′-羥基加以保護，這次最好用芐氧羰基，得到式ⅩⅠ化合物。用DAST處理式Ⅺ化合物，得到式Ⅻ的氟代化合物。在步驟(g)中除去保護基R3，得到式I3化合物。
方案Ⅴ描述了一種制備式I4化合物的方法，式I4化合物也包括在式Ⅰ化合物的范圍內(nèi)。在步驟(a)中，式Ⅶ的化合物與DAST反應(yīng)，得到式ⅩⅣ的化合物。除去R3保護基，得到式I4的化合物。
式Ⅵ的化合物或者是已知的，或者可用方案Ⅵ的方法容易地制備。步驟(a)與方案Ⅱ的步驟(b)基本上相同。在7-和10-羥基上具有保護基的式ⅩⅩⅩⅢ的漿果赤霉素Ⅲ衍生物也可以是已知的或者可從10-脫乙?；鶟{果赤霉素Ⅲ容易地制備。例如見分別于1988年1月20日和1993年1月13日公開的歐洲專利申請0，253，738A1和0，522，958A1。在步驟(b)中除去羥基保護基，得到式Ⅵ的化合物。
在本申請中，符號“C”后面的下標是指某一特定基團可含有的碳原子數(shù)。例如，C1-6烷基是指具有1～6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，這樣的基團包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、正己基、3-甲基戊基、或類似的烷基;C2-6鏈烯基是指直鏈或支鏈的鏈烯基如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、異丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、甲代烯丙基、1，1-二甲基烯丙基、1-己烯基、2-己烯基、或類似的基團;C3-6環(huán)烷基是指環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基;C2-6炔基是指直鏈或支鏈炔基如乙炔基、炔丙基(2-炔丙基)、1-炔丙基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-己炔基、4-甲基-2-戊炔基、和類似的基團;C2-6烯烴二基是指這樣的基團如乙烯-1，2-二基(1，2-亞乙烯基)，2-甲基-2-丁烯-1，4-二基、2-己烯-1，6-二基、和類似的基團;C1-6烷氧基是指直鏈或支鏈烷氧基如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基、或3-甲基戊氧基等;鹵素是指氟、氯、溴或碘。氮雜環(huán)丁酮是指氮雜環(huán)丁-2-酮。在本申請中，所有符號一經(jīng)定義就保持相同的含意。
方案Ⅰ
方案Ⅱ
方案Ⅱ(續(xù))
方案Ⅲ
方案Ⅲa
方案Ⅳ
方案Ⅳ(續(xù))
方案Ⅴ
方案Ⅳ(續(xù))
方案Ⅵ
方案Ⅶ
下面的具體實施例說明了本發(fā)明有代表性化合物的合成，它們不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成限制。為了生產(chǎn)本發(fā)明所包括的化合物可對方法做某些本文公開內(nèi)容以外的改動。此外，以稍有不同的方式生產(chǎn)相同的化合物而對方法所做的改動對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說也是顯而易見的。
應(yīng)明確的是所有溫度在未做規(guī)定時均為攝氏度(℃)。核磁共振(NMR)波譜特性是指化學位移(δ)，以每百萬的份數(shù)(ppm)表示，以四甲基硅烷(TMS)作為參照標準。對于在質(zhì)子NMR波譜數(shù)據(jù)中各種不同的位移所記載的相對面積相應(yīng)于分子中某一特定官能類型的氫原子數(shù)。關(guān)于峰裂數(shù)位移的性質(zhì)被記載為寬單峰(bs)、寬雙峰(bd)、寬三峰(bt)、寬多重峰(bm)、寬四重峰(bq)、單峰(s)、多重峰(m)、雙峰(d)、四重峰(q)、三峰(t)、雙雙峰(dd)、雙三峰(dt)，和雙四重峰(dq)。記錄NMR譜所用的溶劑為DMSO-d6(全氘二甲亞砜)、D2O(氘化水)、CDCl3(含氘氯仿)和其它常規(guī)氘化溶劑?！癊xch.”意指可與CD3OD交換的。(例如，“d plus exch.”意指雙峰加上一個可交換的信號。總信號在另一個質(zhì)子發(fā)生交換之后正好收縮為一個雙峰)?！癐ncl.”意指包括。
紅外(IR)光譜的描述只包括具有官能團鑒定值的吸收波數(shù)(cm-1)。
Celite是Johns-ManvilleProductsCorporation對硅藻土的注冊商標。
本文中所用的縮寫符號都是本領(lǐng)域中廣泛使用的常規(guī)縮寫符號。其中一些縮寫符號為Ac乙?；鵄r芳基Bz苯甲?；鵆bz芐氧羰基DCI解吸化學電離DMF二甲基甲酰胺DMSO二甲亞砜FAB快原子轟擊h小時HRMS高分辨質(zhì)譜分析i-PrOH異丙醇min分鐘MS質(zhì)譜分析NOBA間硝基苯甲醇Ph苯基rt室溫tBu叔丁基TES三乙基甲硅烷基
THF四氫呋喃tlc薄層色譜V/V體積/體積Y產(chǎn)率表1和表2列出了一些化合物，在下面的實施例中描述了這些化合物的合成
表1
表1-續(xù)
表1續(xù)
表2
實施例12′-O-(芐氧羰基)紅豆杉醇(Ⅱa)室溫下向攪拌中的紅豆杉醇(150mg，0.176mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(93μl，0.534mmol，3eq)于無水CH2CL2(4ml)的溶液中加入氯甲酸芐酯(75μL，0.525mmol，3eq)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時。將反應(yīng)混合物濃縮到2ml體積，產(chǎn)物用硅膠柱色譜提純(洗脫劑;1∶1EtOAc/己烷)，得到150mg(0.125mmol，Y;86%)標題化合物(Ⅱa)，為白色粉末。mp＝140-150℃(分解)。D20-53.5°(c＝0.2，95% EtOH);1H-NMR(300 MHz，acetone-d6)δppm;1.18(3H，s，17-H3)，1.92(3H，s，16-H3)，1.66(3H，s，19-H3)，1.96(3H，s，18-H3)，2.16(3H，s，10-OAc)，2.5(3H，s，4-OAc)，3.53(1H，d，J＝5.89Hz，7-OH，exchanged with D2O)，3.85(1H，d，J＝7.19Hz，3-H)，3.9(1H，s，1-OH，exchanged with D2O)，4.17(2H，ABq，20-H2)，4.25(1H，m，7-H)，4.97(1H，d，J＝9.56Hz，5-H)，5.19(2H，ABq，OCH2C6H5)，5.54(1H，d，J＝5.5Hz，2′-H)，5.68(1H，d，J＝7.13Hz，2-H)，6.01(1H，dd，J＝5.5，9.05Hz，3′-H)，6.17(1H，bt，J＝9.0Hz，13-H)，6.42(1H，s，10-H)，7.28-7.69(16H，m)，7.87(2H，"d"，J＝8Hz，3′-NHCOPh)，8.14(2H，"d"，J＝8Hz，2-CO2Ph)，8.55(1H，d，J＝9.06Hz，NH，exchanged with D2O);MS(FAB-NOBA/NaI+KI);m/e988(M+H)+，1010(M+Na)+，1026(M+K)+;IR(KBr)νmax;3448，1748(C＝O)，1726(CONH)，1250(C-O)cm-1;UV(MeOHH2O，1∶1)λmax∶198(ε7.3x104)，230nm(ε2.7x104).
HRMS calcd for C55H58NO16(MH+);988.3756.Found;988.3766.
Anal.calcd for C55H57NO16·H2O;C，65.67;H，5.92;N，1.40.Found;C，65.99;H，5.64;N，1.33.
實施例22′-O-(芐氧羰基)-7-α-氟代紅豆杉醇(Ⅲa)將DAST(18.7μL，0.141mmol)溶于無水二氯甲烷(0.5ml)，將該溶液冷卻至0℃。加入化合物Ⅱa(71mg，0.072mmol)于無水二氯甲烷(1ml)的溶液，所得溶液在0℃保持30分鐘，室溫下保持4小時。然后向反應(yīng)混合物中加水(0.15ml)以中止反應(yīng)，濃縮該混合物得到殘余物。殘余物用硅膠柱色譜提純(洗脫劑;40%乙酸乙酯/己烷)，得到61mg化合物(Ⅲa)和2′-O-芐氧羰基-8-去甲基-7，8-環(huán)丙紅豆杉醇(ⅩⅩⅤa)的混合物;
1H-NMR(mixture of Ⅲa and ⅩⅩⅤa，CDCl3)δ8.08(d，J＝8.7Hz，2H)7.65-7.17(m，18H)6.85(exch.d，J＝9.4Hz，1H)，6.49(s，1H，H-10)6.25-6.14(m，1H，H-13)5.92(dd，J＝9.4Hz，J′＝2.4Hz，1H，H-3′)5.68(d，J＝7.2Hz，1H，H-2)5.38(m，1H，H-2′)5.06(m，2H)4.96(bd，1H，H-5)4.80-4.35(m，1H，H-7)4.31-4.20(m，2H，H-20)，3.94(d，H＝7.2Hz，1H，H-3)2.47-1.64(m，17Hincl.sat2.38，3H，at2.11，3H，at1.78，3H，1.65，3H)1.10(s，3H)，1.07(s，3H).
實施例37-α-氯代紅豆杉醇(Ⅰa)將化合物Ⅲa和2′-O-芐氧羰基-8-去甲基-7，8-環(huán)丙紅豆杉醇(89mg)的1∶1混合物溶于乙酸乙酯(3ml)，混合物在10%Pd/C(29mg，0.027mmol)存在下，在稍高于一個大氣壓的氫壓下進行攪拌，12小時后，除去溶劑，殘余物用硅膠色譜提純(洗脫劑;40%乙酸乙酯/己烷)，得到67.7mg標題化合物和8-去甲基-7，8-環(huán)丙紅豆杉醇(ⅩⅩⅥa)的混合物;為白色固體;1H-NMR(mixture of ⅩⅩⅥa and Ⅰa，CDCl3)δ8.11(d，J＝8.7Hz，2H)7.72-7.07(m，14H)6.50(s，1H，H-10)6.14(bt，1H，H-13)5.80(dd，J＝9.0Hz，J′＝2.4Hz，1H，H-3′)5.74(d，J＝7.2，1H，H-2)4.98(d，J＝8.1Hz，1H，H-5)4.77(m，1H，H-2′)4.70-4.40(m，1H，H-7)4.40-4.21(m，2H，H-20)4.02(d，J＝7.2Hz，1H，H-3)2.60-1.55(m，17H，incl.s at 2.37，3H，2.20，3H，1.77，3H，1.74，3H)1.14(s，3H)，1.12(s，3H).
可使用下述HPLC方法從8-去甲基-7，8-環(huán)丙紅豆杉醇分離α-氟代紅豆杉醇方法1儀器泵PE系列4柱SHANDONHYPERCARB(石墨化碳)，7μ，100×4.6mm，＃59864750(有關(guān)制備型柱的資料可從KEYSTONESCIENTIFIC，BELLEFONTE，PA獲取)注射器;PEISS-100檢測器;HP-1040M條件流動相;85∶15二氯甲烷∶己烷未損失分離∶80∶19∶1二氯甲烷∶己烷∶異丙醇流速;2.5ml/分鐘檢測器;254nm稀釋劑;樣品溶于二氯甲烷方法2使用DYNAMAX-60A(Si83.121-C)制備型HPLC柱(30cm×2.5cm)，以1∶1乙酸乙酯和己烷作洗脫劑，流速為10ml/分，7-α-氟代紅豆杉醇的保留時間為15.59分鐘，8-去甲基-7，8-環(huán)丙紅豆杉醇的保留時間為16.65分鐘。
實施例47-α-氟代紅豆杉醇(Ⅰa)將化合物Ⅱa(258mg，0.26mmol)溶于THF(1.7ml)和二乙醚(3.4ml)，將溶液冷卻至-78℃。將DAST(69μL，0.52mmol)加到溶液中，混合物在-78℃攪拌30分鐘，然后在室溫下過夜。加水(0.3ml)終止反應(yīng)，混合物經(jīng)濃縮得到殘余物。殘余物用硅膠色譜提純(洗脫劑;30%乙酸乙酯/己烷)，得到87mg(Y;33.7%)2′-O-(芐氧羰基)-7-α-氟代紅豆杉醇(Ⅲa)，為非晶固體。1H-NMR譜基本上與實施例2相同;19F-NMR(CDCl3)φ(vs.CF3COOH)90(ddd，JF，H7＝49.6Hz，JF，H6＝40.1Hz，JF，H6′＝21.6Hz).
如實施例3所述脫除2′-O-芐氧羰基，得到標題化合物，產(chǎn)率87%。1H-NMR譜與結(jié)構(gòu)一致。HRMS計算值MH+;856.3344，實測值;856.3367。
實施例5N-脫苯甲?；?N-叔丁氧羰基-2′-O-三乙基甲硅烷基-7-α-氟代紅豆杉醇(Ⅴa)7-α-氟代紅豆杉醇和2′-O-芐氧羰基-8-去甲基-7，8-環(huán)丙紅豆杉醇的混合物(572mg，3∶2混合物)用溶于無水二氯甲烷(7ml)的四丁基銨氫硼化物(286mg，1.111mmol)于室溫下處理過夜。過量的氫硼化物用乙酸(0.4ml)淬滅，蒸除溶劑后得到粗產(chǎn)物。粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜提純(洗脫劑;50%乙酸乙酯/己烷)，得到271mg7-α-氟代漿果赤霉素Ⅲ(Ⅳ)和8-去甲基-7，8-環(huán)丙漿果赤霉素Ⅲ(ⅩⅩⅦ)的混合物，為白色泡沫。NMR譜與結(jié)構(gòu)一致。
將化合物Ⅳ和8-去甲基-7，8-環(huán)丙漿果赤霉素Ⅲ的混合物(130mg)于無水THF(1ml)的溶液冷卻至-40℃，氬氣下滴加正丁基鋰(1.63M己烷溶液，0.164ml，0.260mmol)。15分鐘后，加入1-叔丁氧羰基-(3R，4S)-順式-3-三乙基甲硅烷基氧基-4-苯基氮雜環(huán)丁酮(ⅩⅤa)(203mg，0.530mmol)于無水THF(0.5ml)的溶液，將混合物升溫至0℃。使反應(yīng)在0℃持續(xù)90分鐘，然后用飽和氯化銨水溶液中止反應(yīng)。用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物。乙酸乙酯層經(jīng)干燥、過濾和真空濃縮，得到粗產(chǎn)物油狀物。經(jīng)硅膠色譜提純(洗脫劑;40%乙酸乙酯/己烷)，得到143mg標題化合物和N-脫苯甲?；?N-叔丁氧羰基-2′-O-三乙基甲硅烷基-8-去甲基-7，8-環(huán)丙紅豆杉醇(ⅩⅩⅥⅡa)的混合物，為白色泡沫;
1H-NMR(mixture of XXVIIIa and Va，300MHz，CDCl3)δ8.14(d，2H)，7.45-7.17(m，8H)，6.56(s，0.6H，H-10)6.32(s，0.4H，H-10)，6.28(m，1H，H-13)5.72(d，0.6H，H-2)5.62(d，0.4H，H-2)5.44(m，1H，H-3′)5.28(exch.m，1H，N-H)5.00(d，1H，H-5)4.70-4.45(m，1H，H-7)4.50(bs，1H，H-2′)4.40-4.35(m，2H，H-20)4.05(d，1H，H-3)2.63-1.15(m，32H)0.73(m，9H)0.34(m，6H).
實施例6N-脫苯甲酰基-N-叔丁氧羰基-7-α-氟代紅豆杉醇(Ⅰb)在-5℃向含有化合物Ⅴa和N-脫苯甲?；?N-叔丁氧羰基-2′-O-三乙基甲硅烷基-8-去甲基-7，8-環(huán)丙紅豆杉醇混合物(100mg)的乙腈(1ml)溶液中加入HCl水溶液(0.0192ml，0.30mmol，36%溶液)。反應(yīng)混合物攪拌10分鐘，用乙酸乙酯(1.5ml)稀釋。有機相用水洗滌、干燥、過濾和濃縮，得到殘余物。殘余物經(jīng)硅膠色譜提純(用40%乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到73mg標題化合物和N-脫苯甲酰基-N-叔丁氧羰基-8-去甲基-7，8-環(huán)丙紅豆杉醇(ⅩⅩⅨa)的混合物，為白色泡沫;
1H-NMR(mixtue of XXIXa and Ib，300MHz，CDCl3)δ8.11(m，2H)7.60-7.22(m，8H)6.50(s，0.6H，H-10)6.30(s，0.4H，H-10)6.22(m，1H，H1-13)5.72(d，0.6H，H-2)5.61(d，0.4H，H-2)5.50-5.42(m，1H，H-3′)5.28(exch.bd，1H，N-H)5.00(d，1H，H-5)4.70-4.40(m，1H，H-7)4.60(bs，1H，H-2′)4.40-4.23(m，2H，H-20)4.02(d，1H，H-3)3.40(exch.bs，1H，O-H)2.65-1.10(m，32H).HRMS Calcd.for MH+852.3607，found 852.3604.
實施例77α-氟代漿果赤霉素Ⅲ(Ⅳ)
在惰性氣氛下向一干燒瓶中加入2′-O-(芐氧羰基)紅豆杉醇(Ⅱa)(4g，4mmol)和無水甲苯(80ml)。生成的漿液在環(huán)境溫度下攪拌，同時滴加無水四氫呋喃(16ml)至無色溶液形成。將上述溶液在干冰/丙酮浴中冷卻至-78℃，然后用二乙氨基硫三氟化物(DAST，1.2ml，2.5eq.)處理。攪拌反應(yīng)混合物16小時，逐漸升至環(huán)境溫度。過濾得到的懸液，濾液(用乙酸乙酯(30ml)稀釋)用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水先后洗滌。有機層經(jīng)干燥(MgSO4)和濃縮，得到白色泡沫狀粗產(chǎn)物。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜部分提純(用10%CH3CN/CH2Cl2洗脫)，得到1.45g7-α-氟代衍生物Ⅲa和7，8-環(huán)丙加合物(ⅩⅩⅤa)的混合物(1H-NMR譜示出82∶18混合物)。
將上述混合物1.45g浸溶于乙酸乙酯(60ml)，用Pd/C(300mg)處理。在50psi氫壓下振搖4小時后，將反應(yīng)混合物傾出，經(jīng)短塞硅膠過濾并濃縮，得到的混合產(chǎn)物為白色泡沫(1.24g，Y;99%，1H-NMR示出為90∶10混合物)。將7-α-氟代-和7，8-環(huán)丙紅豆杉醇混合物浸溶于無水二氯甲烷(30ml)，用四丁基銨氫硼化物(745mg，2.9mmol.2eq.)處理，攪拌6小時。然后用乙酸(1ml)中止反應(yīng)，用另一份二氯甲烷(30ml)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。干燥(MgSO4)和濃縮有機部分。取代的紅豆杉烷核心(taxanecore)粗混合物經(jīng)硅膠柱色譜部分提純(用10%CH3CN/CH2Cl2洗脫)，得到標題化合物漿果赤霉素Ⅲ(510mg，60%)，為7-α-氟代和7，8-環(huán)丙類似物的混合物(1H-NMR譜示出90∶10混合物)，為白色泡沫。泡沫經(jīng)熱異丙醇結(jié)晶，得到7-α-氟代漿果赤霉素Ⅲ(Ⅳ)，為白色針晶(Y;410mg);m.p.＝234-236℃(分解);
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.14(d，2H，J＝6Hz)，7.65-7.52(m，1H)，7.52-7.49(m，2H)，6.57(s，1H)，5.72(d，1H，J＝9Hz)，5.03(d，1H，J＝9Hz)，4.86-4.79(m，1H)，4.55(dd，C-7 proton 1H，J＝3.9，JH-F＝47.1Hz)，4.36(A of ABq，1H，J＝7.8Hz)，4.27(B of ABq，1H，J＝7.8Hz)，4.12(d，1H，J＝6.9Hz)，2.60-2.48(m，2H)，2.30-1.07(m，22H including singlets at 2.30;2.21;2.08;1.77;1.58;1.13;1.07).
實施例81-叔丁氧羰基-(3R，4S)-順式-3-三乙基甲硅烷基氧基-4-苯基氮雜環(huán)丁酮(ⅩⅤa)的制備，方案Ⅶ將溶于無水二氯甲烷(15ml)的(L)蘇氨酸甲酯鹽酸鹽(1.26g，7.44mmol)與咪唑(1.01g，14.89mmol)和叔丁氧基二苯基甲硅烷基氯(2.274g，7.816mmol)在室溫下一起攪拌16小時。反應(yīng)混合物用水和二氯甲烷分層。有機層用5%碳酸氫鈉水溶液和水洗滌、干燥、濃縮，得到2.88g粗油狀物，粗產(chǎn)物直接用于下一步驟;
上述的油狀物(548mg，1.414mmol)于無水二氯甲烷(10ml)的溶液用苯甲醛(0.158ml，1.55mmol)在4A分子篩存在下于室溫處理過夜，就地得到式ⅩⅤⅡa的化合物。將含有化合物ⅩⅤⅡa的溶液冷卻至-40℃，加入三乙胺(0.20ml，1.698mmol)，接著加入乙酰氧基乙酰氯(ⅩⅥa)(0.182ml，1.698mmol)，用時10分鐘。使混合物用4小時升至室溫，產(chǎn)物用水和二氯甲烷分層。有機層再用水和鹽水洗滌，干燥，濃縮。經(jīng)硅膠色譜提純(用1∶4EtOAc/己烷洗脫)，得到411mg化合物ⅩⅤⅢa，為大約10∶1的3R，4S∶3S，4R非對映體的混合物。
用乙酸(0.15ml)和四丁基銨氟化物(TBAF，1M THF溶液，1.20ml)處理非對映體混合物(245.1mg，0.414mmol)于無水THF(2ml)的溶液。溶液在室溫下攪拌14小時，然后用乙酸乙酯和5%碳酸氫鈉水溶液分層，有機相干燥和濃縮。經(jīng)快速硅膠色譜提純(用1∶1乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到66mg(Y;50%)化合物ⅩⅠⅩa(一種非對映體)，為泡沫狀物。1H-NMR(CDCl3)δ7.42-7.25(m，5H)，5.90(d，J＝4.8Hz，1H)，5.09(d，J＝4.8Hz，1H)4.28(m，1H)4.01(d，J＝4.8Hz，1H)3.70(s，3H)1.73(s，3H)1.19(d，J＝6.6Hz，3H).
在-78℃，用三乙胺(9.40ml，0.0671mol)和甲磺酰氯(MsCl，3.5ml，0.0457mol)處理化合物ⅩⅠⅩa(9.8g，0.0305mol)于無水二氯甲烷(100ml)的溶液。使溶液升至室溫，然后用水和二氯甲烷分層，有機相用5%碳酸氫鈉水溶液，稀HCl水溶液，水和鹽水洗滌，濃縮后得到化合物ⅩⅩa，為粗油狀殘余物。粗殘余物(10.0g)溶于二氯甲烷(250ml)，在-78℃用臭氧處理至溶液的顏色呈藍色。加入二甲硫(11ml)，濃縮反應(yīng)混合物，得到化合物ⅩⅩⅠa(粗產(chǎn)物)。
將化合物ⅩⅩⅠa溶于THF(150ml)，在-78℃用水合肼(10ml)處理。2小時后，將混合物傾入稀HCl和乙酸乙酯中，分離兩相。有機相用更多的酸，水和鹽水洗滌，濃縮后得到粗產(chǎn)物。粗產(chǎn)物用硅膠色譜提純(洗脫劑;1-5%甲醇/二氯甲烷)，得到4.40g(Y;71%)式ⅩⅩⅡa的化合物1H-NMR(CDCl3)δ7.38-7.24(m，5H)6.31(bs，1H)5.87(bm，1H)5.04(d，J＝4.8Hz，1H)1.67(s，3H).
向冷卻的(-5℃)1MKOH水溶液(140ml)和乙腈(100ml)的混合物中滴加化合物ⅩⅩⅡa(2.39g，11.22mmol)于乙腈(130ml)的溶液?；旌衔镌?℃攪拌1小時，用乙酸乙酯(300ml)，水(50ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)稀釋。分離有機相，水相用乙酸乙酯萃取(3×200ml)。合并有機相，干燥，過濾和濃縮，得到式ⅩⅩⅡa的化合物(粗產(chǎn)物)，然后用己烷/丙酮重結(jié)晶，mp＝184-186℃，產(chǎn)量;1.53g(Y;82%)。
向式ⅩⅩⅢa的氮雜環(huán)丁酮(580mg，3.55mmol)于無水THF(5.0ml)的溶液中加入咪唑(265.5mg，3.90mmol)，然后加入三乙基甲硅烷基氯(TESCl，0.654ml，3.90mmol)?；旌衔飻嚢?小時，加入乙酸乙酯，有機層用鹽水和10%HCl水溶液洗滌并干燥。經(jīng)硅膠色譜提純(洗脫劑;25%乙酸乙酯/己烷)，得到670mg(Y;68%)式ⅩⅩⅣa的化合物，為泡沫狀物。
在0℃和氬氣下，向攪拌中的化合物ⅩⅩⅣa(2.20g，7.92mmol)于無水THF(25ml)的溶液中加入二異丙基乙胺(1.65ml，9.51mmol)。攪拌溶液5分鐘，然后加入二叔丁基碳酸酯(BoC2O，2.08g，9.51mmol)和4-二甲氨基吡啶(193.6mg，1.58mmol)。反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時，用乙酸乙酯(250ml)稀釋，混合物用鹽水，10%碳酸氫鈉水溶液和10%HCl水溶液洗滌并用硫酸鎂干燥，濃縮后得到油狀物。經(jīng)快速硅膠色譜提純(洗脫劑;15%乙酸乙酯/己烷)，得到2.40g(Y;83%)式ⅩⅤa的化合物，為白色固體;
1H-NMR(CDCl3)δ7.28(m，5H)5.03(m，2H)1.38(s，9H)0.76(t，J＝7.56，9H)0.43(m，6H).
實施例97-α-氟代-2′-O-三乙基甲硅烷基-3′-脫苯基-3′-(2-呋喃基)-N-脫苯甲酰基-N-叔丁氧羰基紅豆杉醇(Ⅴb)
用惰性氣體吹掃7-α-氟代漿果赤霉素Ⅲ(Ⅳ)(59.3mg，0.1mmol)于無水四氫呋喃(5ml)的溶液，并于干冰/丙酮浴中冷卻至-55℃。用注射器向溶液中滴加六甲基二硅氮烷鋰(0.5M THF溶液，0.24ml，1.2eq.)。將得到的淺黃色溶液攪拌5分鐘，然后加入外消旋1-叔丁氧羰基-順式-3-三乙基甲硅烷基氧基-4-(2-呋喃基)氮雜環(huán)丁酮(ⅩⅤb)(178.4mg，6eq.)的四氫呋喃(2ml)溶液，用時5分鐘。用冰/鹽水浴取代冷卻浴，溶液在0℃攪拌1小時。通過加入飽和NH4Cl溶液(2ml)中止反應(yīng)，然后用乙酸乙酯(25ml)稀釋和用水洗滌(2×10ml)。有機層干燥(MgSO4)和濃縮，得到所需的粗產(chǎn)物，為無色油狀物，經(jīng)硅膠色譜提純(洗脫劑∶己烷∶乙酸乙酯＝7∶3)，得到標題化合物，為無色玻璃體(80.5mg，Y;84%);
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.13(d，2H，J＝9.0Hz)，7.62-7.56(m，1H)，7.51-7.46(m，2H)，7.38(s，1H)，6.59(s，1H)，6.45(dd，1H，J＝1.8，3.2Hz)，6.21(d，2H，J＝3.2Hz)，5.76(d，1H，J＝7.2Hz)，5.33(bt，2H)，5.03(d，1H，J＝7.5Hz)，4.75(s，1H)，4.57(dd，C-7 proton1H，J＝4.3，JH-F＝46.9Hz)，4.37(A of ABq，1H，J＝8.4Hz)，4.27(B of ABq，1H，J＝8.4Hz)，4.05(d，1H，J＝7.2Hz)，2.49-1.16(m，11H，including singlets at2.47(3H)，2.20(3H)，1.88(3H)，1.72(3H)，1.38(9H)，0.83(t，9H，J＝5Hz)，0.55-0.37(m，6H);13C-NMR(75.6MHz，CDCl3)δ206.0，171.1，169.4，169.1，167.2，155.2，152.1，141.8，141.4，133.6，131.8，130.1，129.2，128.7，110.6，107.1，96.2，93.9，81.9，80.7，80.0，78.7，77.9，77.8，75.0，72.3，70.8，56.9，56.7，52.7，42.6，40.0，35.5，33.9，33.6，28.1，28.0，25.5，22.5，21.2，20.7，14.6，14.5，14.3，14.2，6.4，4.2.
實施例107-α-氟代-2′-O-三乙基甲硅烷基-3′-脫苯基-3′-(2-噻吩基)-N-脫苯甲?；?N-叔丁氧羰基紅豆杉醇(Ⅴc)
按實施例9所述方法制備，得到所需的白色泡沫狀產(chǎn)物(Y;78%，基于回收的起始原料);
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.14(d，2H，J＝9.0Hz)，7.63-7.58(m，1H)，7.51-7.48(m，2H)，7.24(dd，2H，J＝2.4，3.6Hz)，7.00-6.93(m，2H)，6.58(s，1H)，6.23(t，1H，J＝9Hz)，5.77(d，1H，J＝6Hz)，5.51-5.42(m，2H)，5.03(d，1H，J＝9Hz)，4.57(d，1H，J＝3Hz)，4.59(dd，C-7 proton 1H，J＝6，JH-F＝48Hz)，4.38(A of ABq，1H，J＝6Hz)，4.27(B of ABq，1H，J＝6Hz)，4.05(d，1H，J＝7Hz)，2.57-1.15(m，11H，including singlets at2.44(3H)，2.20(3H)，1.88(3H)，1.70(3H)，1.32(9H)，0.86(t，9H，J＝5Hz)，0.56-0.41(m，6H);13C-NMR(75.6MHz，CDCl3)δ206.0，171.0，169.4，168.8，167.2，161.4，142.9，141.3，133.6，131.8，130.2，129.2，128.7，126.9，124.6，124.5，96.3，93.9，81.9，80.8，80.0，78.8，77.9，77.8，77.2，76.5，75.2，75.0，71.0，65.4，56.9，53.7，42.7，40.3，35.6，33.6，28.1，22.7，21.3，20.8，18.8，14.5，14.3，10.4，6.3，4.5.
實施例117-α-氟代-3′-脫苯基-3′-(2-呋喃基)-N-脫苯甲?；?N-叔丁氧羰基紅豆杉醇(Ie)
將化合物(Ⅴb)(80mg，0.08mmol)于乙腈(2ml)的溶液在冰/鹽水浴中冷卻至0℃，向溶液中加入1N HCl溶液(0.5ml，6eq.)，攪拌反應(yīng)30分鐘。然后真空蒸出溶劑，殘余物用乙酸乙酯(25ml)和水(10ml)分層。有機層干燥(MgSO4)和濃縮，得到白色泡沫，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜提純(洗脫劑;10%CH3CN/CH2Cl2)，得到標題化合物，為白色泡沫(45.6mg，Y;77%，基于回收的起始原料);D＝-26.2°(c.0.8mg/mL，CH2Cl2);1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.12(d，2H，J＝6Hz)，7.63-7.58(m，1H)，7.50(t，2H，J＝6Hz)，7.41(s，1H)，6.57(s，1H)，6.37-6.36(m，1H)，6.33-6.31(m，1H)，6.20(t，1H，J＝6Hz)，5.76(d，1H，J＝6Hz)，5.37-5.23(m，2H)，5.02(d，1H，J＝9Hz)，4.71(bs，1H)，4.57(dd，C-7 proton 1H，J＝4.2，JH-F＝46.8Hz)，4.36(A of ABq，1H，J＝8.7Hz)，4.27(B of ABq，1H，J＝8.1Hz)，4.04(d，1H，J＝7.2Hz)，3.28(bs，1H)，2.59-2.20(m，5H，including singlets at2.41(3H)，2.21(3H)，1.85(s，3H)，1.43-1.17(m，18H);13C-NMR(75.6MHz，CDCl3)δ205.7，169.2，169.0，167.1，142.3，140.6，133.5，132.1，130.0，129.1，128.6，110.5，107.2，95.9，93.6，81.8，80.6，78.5，77.8，77.7，74.7，72.1，71.6，56.9，55.8，51.5，42.5，39.9，35.4，33.8，33.5，28.0，27.9，25.6，22.2，20.9，20.7，14.5，14.1，14.0;HRMS calcd for MH+(C43H53NO15F);842.3399;Found;842.3389.
實施例127-α-氟代-3′-脫苯基-3′-(2-噻吩基)-N-脫苯甲?；?N-叔丁氧羰基紅豆杉醇(Ⅰf)
按實施例11所述方法制備，得到所需的白色泡沫狀產(chǎn)物(22.5mg，Y;61%);
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.12(d，2H，J＝9Hz)，7.64-7.59(m，1H)，7.50(t，2H，J＝9Hz)，7.28-7.26(m，2H)，7.09-7.07(m，1H)，7.01-6.98(m，1H)，6.56(s，1H)，6.19(t，1H，J＝9Hz)，5.76(d，1H，J＝6Hz)，5.53(bd，1H，J＝12Hz)，5.35(d，1H，J＝9Hz)，5.00(d，1H，J＝9Hz)，4.65-4.63(m，1.5H，C-7 proton hidden)，4.48(d，0.5H，J＝9Hz)，4.36(A of ABq，1H，J＝8.7Hz)，4.27(B of ABq，1H，J＝8.1Hz)，4.04(d，1H，J＝7.2Hz)，3.28(bs，1H)，2.59-2.20(m，5H，including singlets at2.39(3H)，2.18(3H)，1.72(s，3H)，1.43-1.17(m，18H);13C-NMR(75.6MHz，CDCl3)δ205.6，172.1，169.3，169.0，167.0，141.5，140.6，133.6，132.1，130.1，129.3，129.0，128.6，126.9，125.2，125.1，95.9，93.5，81.8，80.8，80.2，78.5，77.8，77.7，77.3，76.8，74.7，73.3，72.2，56.9，52.5，42.5，39.9，35.5，33.8，33.5，28.0，27.9，25.6，22.3，20.9，20.7，14.6，14.1，14.0;[α]D＝-156°(c.0.25mg/mL，CH2Cl2).
實施例13三苯甲醛縮二氨的制備PhCH(-N＝CHPh)2向一裝有機械攪拌器和溫度計的3升三頸燒瓶中加入1升濃NH4OH(大約30%，14.8mol)。一次加入苯甲醛(265g，2.50mol)于500ml 2-丙醇的溶液。在大約22℃強烈攪拌混合物43小時，過濾得到的漿液，濾餅用水(1L)洗滌。真空干燥后，得到242.4g三苯甲醛縮二氨，為白色固體，mp＝100-102℃，產(chǎn)率為97.4%。
按照上述步驟，可以制備下面式RgCH(-N＝CHRg)2的二亞胺;
糠醛胺(Rg＝2-呋喃基)hydrothienamide(Rg＝2-噻吩基)實施例14(±)-順式-3-乙酰氧基-1-〔(苯基)(亞芐基亞氨基)甲基〕-4-苯基氮雜環(huán)丁-2-酮(ⅩⅩⅩⅤa)
向一裝有磁性攪拌器，溫度計和滴液漏斗的1升三頸圓底燒瓶中加入三苯甲醛縮二氨(30.00g，100.5mmol)和乙酸乙酯(150ml)。在攪拌和氬氣下，將反應(yīng)混合物冷卻至5℃，加入三乙胺(16.8ml，121mmol)。然后用90分鐘滴加乙酰氧基乙酰氯(12.4ml，116mmol)于乙酸乙酯(300ml)的溶液。在此溫度保持16小時后，反應(yīng)混合物用1.5小時升至20℃，將其移至分液漏斗中。有機相相繼用NH4Cl水溶液(飽和，150ml，100ml)，NaHCO3水溶液(飽和，120ml)和鹽水(120ml)洗滌。為進行表征，可在此階段通過用MgSO4干燥有機相，過濾和真空脫除溶劑分離標題化合物。這可以定量粗產(chǎn)率得到所需的產(chǎn)物，為紅色玻璃體。HPLC純度(面積);87.9%(非對映體1∶1混合物);
1H-NMR(CDCl3，200MHz)δ8.45(s，1H，N＝CH)，7.80-7.85(m，1H，Ph)，7.60-7.65(m，1H，Ph)，7.26-7.50(m，9H，Ph)，7.00-7.10(m，4H，Ph)，6.28(s，0.5H，NCHN)，6.23(s，0.5H，NCHN)，5.81(d，J＝4.8Hz，0.5H，H-3)，5.76(d，J＝4.8Hz，0.5H，H-3)，5.30(d，J＝4.8Hz，0.5H，H-4)，4.75(d，J＝4.8Hz，0.5H，H-4)，1.63(s，3H，CH3CO);IR(KBr);ν(cm-1)＝1763(C＝O)，1641(C＝N);UV(methanol);λmax(nm)＝216，252.
實施例5(±)-順式-3-乙酰氧基-4-苯基氮雜環(huán)丁-2-酮(ⅩⅩⅩⅥa)
將實施例14的化合物于乙酸乙酯(500ml)的溶液在氬氣流下謹慎地移到一個容積兩升，內(nèi)含有10%Pd/活性炭(6.00g)的帕爾(Parr)燒瓶中?；旌衔镉脷錃?4個大氣壓)處理20小時，然后用CeliteR(硅藻土，Johns Manville)濾除催化劑。濾餅用乙酸乙酯(200ml)制漿，攪拌10分鐘并過濾。用乙酸乙酯(100ml)沖洗濾餅，合并濾液。有機層用10%HCl(300ml)洗滌，兩層都用燒結(jié)玻璃漏斗過濾，以除去白色沉淀物(二芐胺·HCl)，沉淀物用乙酸乙酯(100ml)沖洗。分離各相，有機相用另一份10%HCl(200ml)洗滌。合并在10%HCl洗液再用乙酸乙酯(200ml)萃取，合并的有機相用NaHCO3水溶液(飽和，300ml)和鹽水(250ml)洗滌。有機相經(jīng)MgSO4干燥，過濾并真空濃縮至75ml終體積。混合物冷卻至4℃，過濾分離沉淀產(chǎn)物。濾餅用己烷(200ml)洗滌，得到16.12g(自三苯甲醛縮二氨的總產(chǎn)率為78.1%)標題化合物，為白色針晶。
mp＝150-151℃;HPLCpurity(area);99.8%1H-NMR(CDCl3，200MHz)δ＝7.30-7.38(m，5H，Ph)，6.54(bs，exchangeable，1H，NH)，5.87(dd，J＝2.7，4.7Hz，1H，H-3)，5.04(d，J＝4.7Hz，1H，H-4)，1.67(s，3H，CH3CO);IR(KBr);ν(cm-1)＝3210(N-H)，1755，1720(C＝O);KF;0.17%;
C11H11NO3的計算值C，64.38;H，5.40;N，6.83.
實測值;C，64.07;H，5.34;N，6.77.
實施例16(±)-順式-3-乙酰氧基-1-〔(2-呋喃基亞甲基亞氨基)甲基〕-4-(2-呋喃基)氮雜環(huán)丁-2-酮(ⅩⅩⅩⅤb)
按實施例14的方法，不同的是采用糠醛胺取代三苯甲醛縮二氨，且反應(yīng)規(guī)模為18.6mmol(前例是100mmol)，得到標題化合物。因此，采用糠醛胺(5.00g，18.6mmol)，三乙胺(3.11ml，22.3mmol)和乙酰氧基乙酰氯(2.30ml，21.4mmol)，得到6.192g(90.4%)標題化合物，為淺紅色漿體。得到的是非對映體1∶1混合物;
1H-NMR(CDCl3;200MHz)δ8.211(s，0.5H，N＝CH)，8.208(s，0.5H，N＝CH)，7.14-7.56(m，3H，furyl)，6.90(d，J＝3.5Hz，0.5H，furyl)，6.83(d，J＝3.5Hz，0.5H，furyl)，6.10-6.53(m，6H，furyl，NCHN)，5.90(d，J＝4.9Hz，0.5H，H-3)，5.86(d，J＝4.8Hz，0.5H，H-3)，5.35(d，J＝4.8Hz，0.5H，H-4)，4.90(d，J＝4.9Hz，0.5H，H-4)，1.91(s，1.5H，CH3CO)，1.88(s，1.5H，CH3CO);IR(film);ν(cm-1)＝1778，1753(C＝O)，1642(C＝N);UV(methanol);λmax(nm)＝220，278.
實施例17(±)-順式-3-(乙酰氧基)-4-(2-呋喃基)氮雜環(huán)丁-2-酮(ⅩⅩⅩⅥb)
按實施例15的方法，不同的是產(chǎn)物通過制備性薄層色譜分離，基于初始的糠醛胺的量，反應(yīng)以2.7mmol的規(guī)模進行，得到標題化合物。因此，將實施例16的粗產(chǎn)物(1.00g)再溶于乙酸乙酯(50ml)，將其加到10%Pd/活性炭(150mg)中。通過制備性薄層色譜(2mm硅膠，1∶1乙酸乙酯/己烷)純化粗產(chǎn)物固體，得到386mg(65.8%，糠醛胺的修正總產(chǎn)率)標題化合物，為黃色固體。產(chǎn)物用乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶。
mp＝118-119℃;HPLCpurity(area);99.4%1H-NMR(CDCl3，200MHz)δ7.44(t，J＝1.3Hz，2H，furyl)，6.39(d，J＝1.3Hz，1H，furyl)，6.21(bs，exchangeable，1H，NH)，5.88(dd，J＝2.2，4.6Hz，1H，H-3)，5.05(d，J＝4.6Hz，1H，H-4)，1.92(s，3H，CH3CO);IR(KBr);ν(cm-1)＝3203(N-H)，1756，1726，(C＝O);UV(methanol)λmax(nm)＝222.
實施例18(±)-順式-3-乙酰氧基-1-〔(2-噻吩基)(2-噻吩基亞甲基亞氨基)甲基〕-4-(2-噻吩基氮雜環(huán)丁-2-酮(ⅩⅩⅩⅤc)
按實施例14的方法，不同是采用hydrothienamide取代三苯甲醛縮二氨，得到標題化合物。因此，使用hydrothienamide(30g，94.7mmol)，三乙胺(15.84ml，114mmol)和乙酰氧基乙酰氯(11.6ml，108mmol)，得到標題化合物，為粘油狀產(chǎn)物。得到的是非對映體混合物;
1H-NMR(CDCl3)δ8.52(s，1H)，8.502(s，1H)，7.51(d，J＝4.9Hz，1H)，7.45(d，J＝4.4Hz，1H)，7.41(d，J＝3.1Hz，1H)，7.37(d，1H)，7.30(m，3H)，7.16(m，1H)，7.16(m，3H)，7.09(m，2H)，6.94(m，1H)，6.89(m，1H)，6.81-6.74(m，4H)，6.48(s，1H)，6.43(s，1H)，5.85(m，2H)，5.59(d，J＝4.8Hz，1H)，5.17(d，J＝4.8Hz，1H)，1.87(s，3H)，1.86(s，3H).
實施例19(±)-順式-3-(乙酰氧基)-4-(2-噻吩基)氮雜環(huán)丁-2-酮(ⅩⅩⅩⅥc)
在25℃，將70%乙酸水溶液(0.35ml冰乙酸和0.15ml水)一次加到化合物ⅩⅩⅩⅤc(0.431g，1.03mmol)于二氯甲烷(2.93ml)的攪拌溶液中。使反應(yīng)混合物回流，攪拌2.5小時。用50ml二氯甲烷稀釋反應(yīng)，用75ml份的飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，然后用一份50ml飽和鹽水洗滌。將有機提取物真空濃縮為褐色油狀物，溶于少量二氯甲烷，然后將其置于4″×0.5″硅膠柱上。采用梯度洗脫(10-60%EtOAc/己烷)，先得到較低極性的副產(chǎn)物，然后是標題化合物(0.154g，Y;75%)，為白色固體。
1H-NMR(CDCl3)δ7.32(dd，J＝4.7，1.5Hz，1H)，7.03(m，2H)，6.75(bs，1H)，5.86(dd，J＝4.6，2.7Hz，1H)，5.27(d，J＝5.3Hz，1H)，1.83(s，3H);13C-NMR(CDCl3)δ169.3，165.5，138.4，127.1，127.07，126.2，78.3，54.0，20.0.
實施例207-α-氟代-10-去乙酰氧基紅豆杉醇(Ⅰc)
10-去乙酰基紅豆杉醇Ⅵa(140mg，0.173mmol)于無水二氯甲烷(3.5ml)的溶液在0℃用吡啶(0.028ml，0.346mmol)和氯甲酸三氯乙酯(0.0724ml，0.260mmol)處理。在此溫度1小時后撤掉冷卻浴，混合物在室溫下攪拌過夜。蒸出溶劑，殘余物用硅膠柱色譜提純(用30-50%乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到92.3mg(Y;46%)化合物ⅩⅢa，為泡沫狀物。繼續(xù)洗脫還獲得了化合物Ⅶa，產(chǎn)率16%，為泡沫狀物。
化合物ⅩⅢa(92.3mg，0.079mmol)于無水二氯甲烷(2ml)的溶液用1，1，2-三氟-2-氯代三乙胺(0.0384ml，0.238mmol)處理。將溶液攪拌過夜，蒸出溶劑，殘余物用硅膠色譜提純(用25%乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到42.8mg(Y;47%)化合物Ⅷa，為白色固體。
將二烯酮Ⅷa(39mg，0.034mmol)溶于甲醇(0.5ml)和乙酸(0.5ml)。加入鋅粉(66.4mg，1.02mmol)，混合物在40℃保持1小時。濾除不溶物，濃縮濾液，殘余物用硅膠色譜提純(用60%乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到22mg(Y;81.5%)化合物Ⅸa，為泡沫。
在室溫下在10%Pd/C(14.7mg)存在下，以稍高于一個大氣壓的壓力氫化二烯酮Ⅸa(22mg，0.028mmol)于乙酸乙酯的溶液5.5小時。濾除催化劑，產(chǎn)物用硅膠色譜提純(用1∶1乙酸乙酯/己烷活脫)，得到15mg(Y;68%)化合物Ⅹa，為泡沫狀物。
化合物Ⅹa(27mg，0.034mmol)于二氯甲烷(1ml)的溶液先用氯甲酸芐酯(0.0146ml，0.102mmol)處理，接著用二異丙基乙胺(0.0177ml，0.102mmol)處理。反應(yīng)混合物在0℃攪拌45分鐘，在室溫攪拌12小時。蒸出溶劑，殘余物用硅膠色譜提純(用40%乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到25.5mg(Y;81%)化合物Ⅵa，為泡沫狀物。
在0℃，用DAST(0.0071ml，0.055mmol)處理化合物ⅩⅠa(25.5mg，0.028mmol)于二氯甲烷(0.8ml)的溶液。在0℃保持45分鐘后，使反應(yīng)在室溫下再進行5小時。蒸出溶劑和色譜提純，得到ⅩⅡa，為粗產(chǎn)物泡沫狀物。該化合物溶于乙酸乙酯(1ml)，在Pd/C(10%，8.9mg)存在下，在稍高于一個大氣壓的氫壓下于室溫攪拌12小時。濾除催化劑，產(chǎn)物用硅膠色譜提純，得到10mg(Y;40%，兩步驟)化合物Ⅰc，為泡沫狀物。
1H-NMR(CDCl3)δ8.08(d，2H)7.70(d，2H)，7.68-7.28(m，11H)7.04(d，1H)6.04(bt，1H)5.75(dd，1H)5.69(d，1H)4.92(d，1H)，4.72(dd，1H)4.55(dd，JH-F＝47Hz)4.30-4.21(m，3H)3.81(dd，1H)3.47(d，exch，1H)3.37(bd，1H)2.48-1.30(m，13H，incl.singlets at 2.30，1.72，1.61)1.07(s，3H)，1.02(s，3H);HRMS Calcd for MH+798.3290，found，798.3264.
實施例217-α-氟代-10-去乙?；t豆杉醇(Ⅰd)化合物Ⅶa(如上述所得，120mg，0.103mmol)于二氯甲烷(2ml)的溶液在0℃冷卻，用DAST(0.0266ml，0.207mmol)處理。溶液在0℃攪拌30分鐘，在室溫下攪拌4小時。加水(0.05ml)中止反應(yīng)。濃縮反應(yīng)混合物，殘余物經(jīng)硅膠色譜提純(洗脫劑;30%乙酸乙酯/己烷)，得到81mg(Y;68%)化合物ⅩⅣa，為泡沫狀物。將該化合物(63mg，0.054mmol)溶于甲醇(0.5ml)和乙酸(0.5ml)，在45℃用鋅粉(104mg，1.62mmol)處理90分鐘。過濾反應(yīng)混合物，濃縮濾液。殘余物經(jīng)硅膠色譜提純(洗脫劑;40%己烷/60%乙酸乙酯)，得到38mg(Y;86%)化合物Ⅰd，為白色固體。
1H-NMR(CDCl3)δ8.17(d，2H)7.78(d，2H)7.66-7.26(m，11H)7.15(d，1H)6.20(bt，1H)5.83(dd，1H)5.76(d，1H)，5.22(s，1H)5.01(d，1H)，4.80(m，1H)4.56(dd，JH-F＝47Hz)4.40(m，2H)4.10(d plusexch.s，2H)3.55(d，exch.1H)2.66-1.70(m，13H，incl.s at 2.41，1.82，1.76)1.12(s，3H)1.03(s，3H);HRMS calcd for MH+814.3239，found 814.3214.
實施例22(±)-順式-3-三乙基甲硅烷基氧基-4-(2-呋喃基)-氮雜環(huán)丁-2-酮(ⅩⅩⅩⅦa)
乙酰氧基內(nèi)酰胺ⅩⅩⅩⅥb(3.78g，19.4mmol)于60ml甲醇的溶液與K2CO3(20mg，0.14mmol)一起攪拌90分鐘，溶液用Dowex50W-X8中和并過濾。濃縮濾液，將殘余物溶于80ml無水THF，于0℃與咪唑(1.44g，21.2mmol)和TESCl(3.4ml，20.2mmol)一起攪拌30分鐘。溶液用乙酸乙酯稀釋和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。殘余物用硅膠色譜提純(用3∶1己烷/乙酸乙酯洗脫)，得到4.47g(Y;86%)標題化合物，為無色油狀物。
IR(film)3276(broad)，1768，1184，732cm-1;1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ7.38(s，1H)，6.39(bs，1H)，6.35(s，2H)，5.05(dd，J＝4.6，2.3Hz，1H)，4.78(d，J＝4.6Hz，1H)，0.82(t，J-8.5Hz，6H)，0.50(dq，J＝8.5，1.8Hz，9H);13C-NMR(CDCl3，75.5Hz)δ169.6，150.4，142.6，110.5，109.1，79.6，53.2，6.4，4.4.
實施例23(±)-順式-3-三乙基甲硅烷基氧基-4-(2-呋喃基)-N-叔丁氧羰基氮雜環(huán)丁-2-酮(ⅩⅤb)
TES內(nèi)酰胺ⅩⅩⅩⅦa(2.05g，7.7mmol)于30ml二氯甲烷的溶液在0℃與二異丙基乙胺(1.5ml，8.6mmol)和二叔丁基碳酸酯(2.0g，9.2mmol)一起攪拌，加入催化量的二甲基氨基吡啶(DMAP)。溶液用二氯甲烷稀釋和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。殘余物用硅膠色譜提純(用8∶1己烷/乙酸乙酯洗脫)，得到2.0g(Y;70%)標題化合物，為蠟狀固體。
實施例24(±)-順式-3-三乙基甲硅烷基氧基-4-(2-噻吩基)-氮雜環(huán)丁-2-酮(ⅩⅩⅩⅦb)
將3-乙氧基內(nèi)酰胺ⅩⅩⅩⅥc(2.5g，11.8mmol)溶于甲醇(10ml)并用飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)處理，在環(huán)境溫度下將得到的漿液攪拌3小時。然后用乙酸乙酯(20ml)稀釋反應(yīng)并用水(15ml)洗滌。用乙酸乙酯反萃取水相數(shù)次，用MgSO4干燥合并的有機相，濃縮后得到一種黃色固體(Y;1.7g)。將粗制物溶于干四氫呋喃(20ml)并在冰/水浴中使溶液冷卻至5℃。然后加入咪唑(752mg，1.1eq)。攪拌5分鐘后，滴加三乙基氯硅烷(1.85ml，1.1eq)。在此溫度下將得到的懸浮液攪拌3小時;然后濾除固體。用水洗滌有機相(2×20ml)，然后干燥(MgSO4)并濃縮。用硅膠柱色譜(洗脫劑為己烷/乙酸乙酯7∶3)提純粗產(chǎn)物，得到預(yù)期產(chǎn)物，為無色固體(1.5g，Y;45%)。m.p.70-71℃;
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.32-7.30(m，1H);7.05-6.98(m，2H)，5.06-5.05(m，2H)，0.82(t，9H，J＝8Hz)，0.55-0.46(m，6H);13C-NMR(75.6MHz，CDCl3)δ169.1，139.7，126.5，126.4，125.8，79.4，55.1，6.3，4.4.
實施例25(±)-順式-3-三乙基甲硅烷基氧基-4-(2-噻吩基)-N-叔丁氧羰基氮雜環(huán)丁-2-酮(ⅩⅤc)
將甲硅烷基氮雜環(huán)丁酮ⅩⅩⅩⅦb(425.7mg，1.48mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中并在冰/水浴中冷卻在5℃。用催化劑量的DMAP，接著用二異丙基乙胺(0.25ml，1.0eq)，再用二叔丁基碳酸酯(388.4mg，1.2eq)處理該反應(yīng)。在此溫度下攪拌2小時后，用飽和碳酸氫鈉水溶液(5ml)中止反應(yīng)，用水(5ml)洗滌有機相，然后干燥(MgSO4)，通過一個硅膠短塞，濃縮后得到預(yù)期產(chǎn)物，為一種無色油狀物(525.3mg，Y;93%);
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.31-7.29(m，1H)，7.08-7.07(m，1H)，7.00-6.58(m，1H)，5.31(d，1H，J＝6Hz)，5.03(d，1H，J＝6Hz)，1.40(s，9H)，0.83(t，9H，J＝8Hz)，0.56-0.47(m，6H);13C-NMR(75.6MHz，CDCl3)δ165.5，147.5，136.4，127.6，126.2，126.1，83.3，77.3，57.9，27.7，6.2，4.3.
實施例26按照本文所述的方法和實施例，可合成下列式Ⅰ的特定紅豆杉醇衍生物;
7-α-氟代-3′-脫苯基-3′-(2-噻吩基)紅豆杉醇(Rg＝2-噻吩基，R1＝苯甲?；琑2＝OAc)7-α-氟代-3′-脫苯基-3′-(2-呋喃基)紅豆杉醇(Rg＝2-呋喃基，R1＝苯甲酰基，R2＝OAc)7-α-氟代-10-去乙?；?10-苯甲?；?3′-脫苯基-3′-(2-呋喃基)紅豆杉醇(Rg＝2-呋喃基，R1＝苯甲?；琑2＝-O-COC6H5)7-α-氟代-10-去乙?；?10-苯甲?；?3′-脫苯基-3′-(2-噻吩基)紅豆杉醇(Rg＝2-噻吩基，R1＝苯甲?；?，R2＝-O-COC6H5)7-α-氟代-10-去乙?；?10-甲基-3′-脫苯基-3′-(2-噻吩基)紅豆杉醇(Rg＝2-噻吩基，R1＝苯甲?；琑2＝OCH3)7-α-氟代-10-去乙?；?10-苯基甲基羰基-3′-脫苯基-3′-(2-呋喃基)紅豆杉醇(Rg＝2-呋喃基，R1＝苯甲?；?，R2＝-OC(＝O)OCH2C6H5)7-α-氟代-10-去乙酰基-10-正丁基羰基-3′-脫苯基-3′-(2-噻吩基)紅豆杉醇(Rg＝2-噻吩基，R1＝苯甲酰基，R2＝OCOCH2CH2CH2CH3)7-α-氟代-10-去乙?；?10-甲基磺?；?3′-脫苯基-3′-(2-呋喃基)紅豆杉醇(Rg＝2-呋喃基，R1＝苯甲酰基，R2＝-OSO2CH3)實施例27選擇性地衍生10-去乙?；鶟{果赤霉素的C-10位的代表性實例10-苯甲?；?10-去乙酰基-7-三乙基甲硅烷基漿果赤霉素(ⅩⅩⅩⅠⅩa)在氬氣氛下，將式ⅩⅩⅩⅧ的漿果赤霉素衍生物(其中R3＝SiEt3)(43.5mg，0.066mmol)溶于干四氫呋喃(1.0ml)中，使溶液冷卻至-40℃并緩慢加入n-BuLi(0.050ml，0.82mmol，1.6M溶液)。攪拌5分鐘后，加入苯甲酰氯(0.030ml，0.26mmol)并使反應(yīng)混合物溫熱至0℃。將反應(yīng)混合物攪拌1.5小時，然后用氯化銨的飽和溶液(2ml)中止反應(yīng)。用乙酸乙酯萃取水相(2×5ml)，干燥(硫酸鎂)，蒸發(fā)后得到一種油狀物。用快速硅膠色譜(洗脫劑為50%乙酸乙酯/己烷)提純，得到標題化合物(30mg，Y;60%，式ⅩⅩⅩⅠⅩ的化合物，其中R3＝Si(Et)3，Rm＝OCOC6H5)，為一種泡沫狀物;
1H-NMR(CDCl3)δ8.17-8.05(m，4H)，7.64-7.42(m，6H)，6.67(s，1H)，5.67(d，1H)，4.95(d，1H)，4.81(m，1H)，4.56(dd，1H)，4.30(d，1H)，4.14(d，1H)，3.92(d，1H)，2.50(m，1H)，2.30-2.0(m，18H)，1.92-1.80(m，1H)，1.72-1.62(bs，4H)，1.30(s，3H)，1.00(s，3H)，0.89(t，3H)，0.56(q，6H);HRMS(FAB/NOBA)Calculated for C42H54O11Si(MH+)762.3435.Found 762.3427.
用這種方法，可制備C-10碳酸鹽、磺酸鹽、氨基甲酸鹽、醚類等。當使用六甲基二硅氮烷鋰時，產(chǎn)率更好。
生物學數(shù)據(jù)體外細胞毒性數(shù)據(jù)本發(fā)明的7-氟代紅豆杉醇衍生物對人結(jié)腸癌細胞HCT-116和HCT-116/VM46具有體外胞毒活性。HCT-116/VM46細胞是預(yù)選出來的替尼泊甙(teniposide)抗性細胞，它們可表達多種藥物抗性表型，包括對紅豆杉醇的抗性。在HCT-116人結(jié)腸癌細胞中通過XTT(2，3-雙(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-〔(苯基氨基)羰基〕2H-四唑鎓氫氧化物)測定法(如D.A.Scudiero等人所報道的，見“Evaluation of soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines”，Cancer Res.484827-4833，1988)估測了細胞毒性。在96孔微量滴定板中以每孔4000個細胞對細胞進行平板培養(yǎng)，24小時后加入藥物并進行系列稀釋。將細胞于37℃下溫育72小時，此時加入四唑鎓染料，XTT?；罴毎械拿摎涿甘筙TT還原為在450nm處可吸光的形式，該形式可用分光光度測定法進行定量測定。吸光度越大，活細胞數(shù)目越大。結(jié)果以IC50表示。IC50是抑制細胞增殖(即，450nm處的吸光度)至未經(jīng)處理的對照細胞的50%所需的藥物濃度。在該測定中所評估的化合物的IC50值在表Ⅰ中給出。
表Ⅰ對人結(jié)腸癌細胞的體外細胞毒性數(shù)據(jù)IC50(μM)化合物HCT-116HCT-116/VM46Ic 0.301 0.979(3.3)*Id0.0531.30(25)
Ia0.0110.158(14)紅豆杉醇0.0040.440(124)＊括號中的數(shù)值是相對于HCT-116細胞抗性的倍數(shù)。
小鼠M109模型如William Rose所述(Evaluation of Madison 109 Lung Carcinoma as a Model for Screening Antitumor Drugs，Cancer Treatment Report，65，No.3-4(1981))，將0.5ml 2%(W/V)的M109肺癌漿腹膜內(nèi)注入到Balb/c×DBA/2F1雜交小鼠體內(nèi)。
用待研究的化合物處理小鼠，即，小鼠在腫瘤移值后的第1天、第5天和第9天或者在移植后的第5天和第8天接受各種不同劑量的腹膜內(nèi)注射。每天觀察小鼠的存活情況直到腫瘤移植后大約75-90天為止。每次實驗有一組小鼠不做處理，作為對照組。
將化合物處理的(T)小鼠的半數(shù)存活時間與對照(C)小鼠的半數(shù)存活時間做對比。各化合物處理組小鼠這兩個值之比乘以100即為%T/C，有代表性的化合物的%T/C見表Ⅱ。
表ⅡIPM109數(shù)據(jù)化合物%T/C(劑量mg/kg/注射;時間)Ⅰb147(40;第5天和第8天)本發(fā)明的式Ⅰ化合物在哺乳動物中具有腫瘤抑制活性。因此，本發(fā)明的另一個方面是關(guān)于抑制對式Ⅰ化合物敏感的哺乳動物腫瘤的方法。本發(fā)明還提供了可用于制備式Ⅰ的7-氟代紅豆杉醇衍生物的中間體。
式Ⅰ的化合物也可用于制備水溶性藥物前體。已經(jīng)描述了許多種紅豆杉醇的水溶性藥物前體。例如見美國專利5，059，699(Kingston等人，1991年10月22日授權(quán));美國專利4，942，184(Haugwitz等人，1990年7月17日授權(quán));美國專利4，960，790(Stella等人，1990年10月2日授權(quán));這三篇美國專利作為參考文獻。在上述三篇美國專利中所述的水溶解部分也可與式Ⅰ化合物的2′-和/或10-羥基相連接使之更易溶于水。因此本發(fā)明提供了可用于制備其藥物前體的抗腫瘤化合物。
本發(fā)明還提供了含有式Ⅰ化合物以及一種或多種藥物上可接受的、惰性的或生理活性的載體、賦形劑、稀釋劑或佐劑的藥物組合物。配制紅豆杉醇或其相關(guān)衍生物的實例(包括可能的劑量)在許多文獻中有述，例如見美國專利4，960，790和4，814，470，可以按照這樣的實例配制本發(fā)明的化合物。例如，新化合物可以片劑、丸劑、粉末混合物、膠囊、注射劑、溶液、栓劑、乳劑、分散液、食物預(yù)混物的形式以及其他適宜的形式給藥。含有該化合物的藥物制劑可方便地與無毒性的有機藥物載體或無毒性的無機藥物載體混合，通常是每劑量單位約0.01mg～2500mg，或更高，優(yōu)選50～500mg。典型的藥物上可接受的載體為，例如，甘露糖醇、脲、葡聚糖、乳糖、馬鈴薯淀粉和玉米淀粉、硬脂酸鎂、滑石、植物油、聚亞烷基二醇、乙基纖維素、聚(乙烯基吡咯烷酮)、碳酸鈣、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、苯甲酸芐酯、碳酸鈉、明膠、碳酸鉀、硅酸、以及其他常用的可接受的載體。藥物制劑還可含有無毒性的輔助性物質(zhì)如乳化劑、防腐劑、潤濕劑等等，例如脫水山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、聚氧乙烯單硬脂酸酯、甘油三棕櫚酸酯、二辛基磺基琥珀酸鈉等等。
本發(fā)明的化合物也可被冷凍干燥，需要時再與其他藥物上可接受的賦形劑混合制成適合于胃腸外可注射給藥的制劑。對于這樣的給藥，可使制劑重新溶于水(普通水或鹽水)或水與有機溶劑如丙二醇、乙醇等的混合物。
在治療哺乳動物腫瘤中，本發(fā)明的化合物可按照與紅豆杉醇基本相同的方式使用。在人類癌癥患者中紅豆杉醇的給藥方式、劑量和時間已被廣泛研究。例如見Ann.Int.Med.，111，pp273-279(1989)。對于本發(fā)明的化合物，給藥劑量，是單劑量、多劑量、還是日劑量，當然要隨著所用具體化合物的不同而變化，因為化合物的藥效是不同的，同時還要取決于所選擇的給藥途徑、病人的身材以及病癥的性質(zhì)。給藥劑量沒有一定的限制，通常是有效量，或以藥理學活性游離形式的摩爾計等量，藥理學活性游離形式是當活性藥物的代謝達到其預(yù)期的藥理學和生理學效果時由劑量制劑產(chǎn)生的。給藥劑量一般為0.8-8mg/kg/體重或大約50-275mg/病人的m2。癌癥治療領(lǐng)域中的腫瘤學家參照紅豆杉醇及其衍生物的早期研究不必經(jīng)過多的實驗就能確定適合于本發(fā)明化合物有效用藥的方案。
權(quán)利要求
1.一種式Ⅰ的化合物
式中R1為-CORz，其中的Rz為RO-或R；Rg為C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基、或式-W-Rx的基團，其中的W是一個鍵、C2-6烯烴二基、或-(CH2)t-其中的t為1-6；Rx為萘基、呋喃基、噻吩基或苯基，此外，Rx可被1-3個相同或不同的C1-6烷基，C1-6烷氧基，鹵素或-CF3基選擇性地取代；R2為-OCOR、H、OH、-OR、-OSO2R、-OCONR0R、-O-CONHR、-OCOO(CH2)tR、或-OCOOR；R和R0各自為C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C3-6環(huán)烷基、C2-6炔基、或苯基，苯基可被1～3個相同或不同的C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素或-CF3基選擇性地取代。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1為叔丁氧羰基或C6H5CO-;R2為-OCOCH3、H、或OH;Rg為苯基、2-噻吩基或2-呋喃基。
3.權(quán)利要求2的化合物，該化合物為7-α-氟代紅豆杉醇。
4.權(quán)利要求2的化合物，該化合物為N-脫苯甲酰基-N-叔丁氧羰基-7-α-氟代紅豆杉醇。
5.權(quán)利要求2的化合物，該化合物為7-α-氟代-10-去乙酰氧基紅豆杉醇。
6.權(quán)利要求2的化合物，該化合物為7-α-氟代-10-去乙?；t豆杉醇。
7.權(quán)利要求2的化合物，該化合物為7-α-氟代-3′-脫苯基-3′-(2-呋喃基)-N-脫苯甲?；?N-叔丁氧羰基紅豆杉醇。
8.權(quán)利要求2的化合物，該化合物為7-α-氟代-3′-脫苯基-3′-(2-噻吩基)-N-脫苯甲?；?N-叔丁氧羰基紅豆杉醇。
9.權(quán)利要求2的化合物，該化合物為7-α-氟代-3′-脫苯基-3′-(2-噻吩基)紅豆杉醇。
10.權(quán)利要求2的化合物，該化合物為7-α-氟代-3′-脫苯基-3′-(2-呋喃基)紅豆杉醇。
11.一種藥物組合物，該組合物包括作為有效成分的如權(quán)利要求1～10任一項所述的化合物以及一種或多種藥物上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
12.一種治療哺乳動物腫瘤的方法，該方法包括給哺乳動物服用腫瘤敏感量的如權(quán)利要求1-10任一項所述的化合物。
13.式Ⅳ的氟代漿果赤霉素Ⅲ
全文摘要
本發(fā)明涉及式I的氟化紅豆杉醇，式I中各取代基的定義見說明書。本發(fā)明還提供了藥物組合物以及對式I的氟化紅豆杉醇有用的中間體。還提供了一種用式I的化合物治療哺乳動物腫瘤的方法。
文檔編號C07F9/6558GK1082541SQ9310765
公開日1994年2月23日 申請日期1993年6月30日 優(yōu)先權(quán)日1992年7月1日
發(fā)明者S·H·陳, V·法里納, D·維阿斯, J·肯特 申請人:布里斯托爾-米爾斯·斯奎布公司