專利名稱：迷迭香酸二聚體化合物及其分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然植物的成分分離，屬于藥品的加工方法。
本發(fā)明分離出的迷迭香酸二聚體與丹酚酸B共存于丹參中。丹參Salvia miltiorrhiza Bung為唇形科植物之根，中醫(yī)傳統(tǒng)使用的安神止痛，活血化瘀藥。70年代以來，由于發(fā)現(xiàn)丹參對心絞痛、冠心病等心血管疾病有較好的臨床療效，對其化學(xué)成分的研究進(jìn)行得比較深入，從50年前分離出黃色結(jié)晶物算起，至今已有30余種化學(xué)成分被分離和完成結(jié)構(gòu)測定。這些成分可分為脂溶性和水溶性兩類，水溶性成分大多為酚性醛、酚性酸、二萜酸等。
本發(fā)明的目的是提供一種新化合物迷迭香酸二聚體化合物，并提供其水溶性分離方法，揭示該化合物還有治療消化性潰瘍的藥理作用。迷迭香酸二聚體的結(jié)構(gòu)式
命名(根據(jù)有機(jī)化學(xué)的國際命名法)I.4-Carboxylethenyl-7-hydroxyl-2-(3、4-dihydroxyphenyl)benzofuran-3-carboxylic acid
性質(zhì)為白色無定形化合物，易溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑中。
該迷迭香酸二聚體化合物的分離方法是，將粉碎的丹參根莖用95％(v/v)的乙醇在室溫下冷浸，然后用60～70％(v/v)乙醇水溶液多次提取，乙醇提取液經(jīng)濃縮后溶于水，并用乙酸乙酯萃取，得出酚酸類為主的混合物。其特點是將該混合物用濕硅膠H柱進(jìn)行粗分離，用氯仿-甲醇-甲酸混合液洗脫，得出含丹酚酸B與迷迭香酸二聚體的混合物。用硅膠H干柱對丹酚酸和迷迭香酸二聚體混合物進(jìn)行分離，并用氯仿-乙酸乙酯多次洗脫，再用反相HPLC分離，用ODS柱，洗脫液為甲醇∶水＝85∶15(v/v)，流速3ml/min。
迷迭香酸二聚體為首次從丹參根莖中分離出來的一種新化合物，經(jīng)初步試驗表明，它和丹酚酸B分別或作為混合物都具有預(yù)防和治療消化性潰瘍的藥理作用。這為丹參生藥和單成分的制備又拓展了一種新用途。
在用已知技術(shù)萃取得出酚酸類混合物后，又利用本發(fā)明的提取方法分離出丹酚酸B與迷迭香酸二聚體的混合物，經(jīng)檢測證明這其中的丹酚酸B與已知該成分完全相同。丹酚酸B，其結(jié)構(gòu)式為
分子式及分子量為C36H30O16718.60命名3-Benzofurancarboxylic acid，4-[3-[1-Garboxy-2-(3.4-dihydroxyphenyl)ethoxy]-3-oxo-l propenyl]-2-(3.4-dihydroxy-phenyl)-2，3-dihydro-7-hydroxy-，3-[1-Carboxy-2-(3.4-dihydroxy-phenyl)ethyl]ester
命名依據(jù)《植物藥有效成分手冊》人民衛(wèi)生出版社1986年3月第一版迷迭香酸二聚體的四譜分析結(jié)果如下IRν(δ)KBr(cm-1)3395(-OH，S)，2855～2500(-CH2，-CH，W)，max1793(-COOM，S)，1614(-COOM，-CH＝CH-，M)，1525
-COOM)，1286-1179
，867，812(苯環(huán)上的CH面外搖擺振動)；1H-NMRδ4.43(1H，d，J＝4.2)δ5.85(1H，d，J＝4.2)，δ6.26(1H，d，J＝16.0)，δ6.46(1H，d，J＝8.0)，δ6.68(1H，d，J＝8.0)，δ6.92(1H，d J＝8.4)δ7.22(1H，d，J＝8.4)，δ7.65(1H，d，J＝16.0)13C-NMR[(CD3)2CO]δ56.86(C8′)，87.20(C7′)，113.29(C2′)，115.93(C8)，115.93(C5)116.920c5′)，117.82(C6′)，121.28(C6)，125(C2)，127.60(C1′)，133.12(C1)，142(C7)，144.65(C3′，C4，C4′)，148.24(C3)，168(C9)，170(C9′)質(zhì)譜EI-MS m/e
迷迭香酸二聚體化合物的分離方法是，包括已知的水溶性提取方法將粉碎的丹參根莖用95％(v/v)的乙醇在室溫下冷浸，然后用60～70％(v/v)乙醇水溶液多次提取，乙醇提取液經(jīng)濃縮后溶于水，并用乙酸乙萃取，得出酚酸類為主的混合物。本方法的特點是用濕硅膠H柱對此酚酸類混合物進(jìn)行粗分離用氯仿-甲醇-甲酸混合液洗脫，得出含丹酚酸B與迷迭香酸二聚體混合物及其它酸類化合物。進(jìn)一步分離；用硅膠H干柱進(jìn)行，先用約20mg丹酚酸B與迷迭香酸二聚體混合物拌少量硅膠H，自然干燥后倒入硅膠干柱中(硅膠干柱高度為11cm)，放入樣品層高度＜1cm；然后用氯仿液約60ml洗脫，接著用氯仿∶乙酸乙酯＝4∶1(v/v)，30ml洗脫之后用氯仿∶乙酸乙酯＝1∶1(v/v)30ml洗脫，再用氯仿∶乙酸乙酯＝2∶3(v/v)50ml洗脫，得丹酚酸B；繼續(xù)用氯仿∶乙酸乙酯＝2∶3(v/v)50ml洗脫出迷迭香酸二聚體，再用反相HPLC分離，用ODS柱，洗脫液為甲醇∶水＝85∶15(v/v)，流速為3ml/min。
迷迭香酸二聚體和丹酚酸B這兩種單成分物質(zhì)，除具有丹參已知的安神止痛、活血化瘀、治療心血管疾病的藥效外，還分別或作為混合物對消化性潰瘍有顯著的抑制、愈合作用，這為丹參全成分及單成分的利用開拓了一種新用途。用大鼠乙醇性胃潰瘍?yōu)槟Ｐ驮囼灻?00g體重腹腔注射2mg丹酚酸B，對潰瘍發(fā)生面有明顯的抑制和愈合作用。對迷迭香酸二聚體藥用劑量的動物試驗正在進(jìn)行中，但其混合物的藥效已觀察到有明顯效果。
權(quán)利要求
性質(zhì)為白色無定形化合物，易溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑中。
2.一種迷迭香酸二聚體化合物的分離方法是，包括將粉碎的丹參用95％(v/v)的乙醇在室溫下冷浸，然后用60～70％(v/v)乙醇水溶液多次提取，乙醇提取液經(jīng)濃縮后溶于水，并用乙酸乙酯萃取，得出酚酸類為主的混合物；其特征是將此酚酸類混合物用濕硅膠H柱進(jìn)行粗分離，用氯仿一甲醇一甲酸混合液洗脫，得出含丹酚酸B與迷迭香酸二聚體混合物，用硅膠H干柱進(jìn)行分離，用氯仿一乙酸乙酯多次洗脫，再用反相HPLC分離，用ODS柱，洗脫液為甲醇∶水＝85∶10(v/v)，流速3ml/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的迷迭香酸二聚體化合物的提取方法，其特征是所述的多次洗脫及各次所用洗脫劑配比和用量都不相等；粗分離后得到的分離物先用氯仿液，用量100份，洗脫后，接著用氯仿∶乙酸乙酯＝4∶1(v/v)，用量50份洗脫，再用該洗脫劑1∶1(v/v)，用量50，然后用該劑2∶3，用量80洗脫，得丹酚酸B后用該劑2∶3，用量80。
4.一種迷迭香酸二聚體化合物的用途，包括存在于已知丹參生藥整體中的用途為活血化瘀、治療心血管疾病，其特點在于還是治療消化性潰瘍的藥物。
5.一種丹酚酸B的用途，包括存在于已知丹參生藥整體中的用途為活血化瘀、治療心血管疾病，其特點在于還是治療消化性潰瘍的藥物。
6.一種迷迭香酸二聚體與丹酚酸B混合物的用途，包括存在于已知丹參生藥整體中的用途為活血化瘀、治療心血管疾病，其特點在于還是治療消化性潰瘍的藥物。
全文摘要
迷迭香酸二聚體化合物及其分離方法，用水溶性提取方法從丹參根莖中提出酚酸類混合物，其特征是將含丹酚酸B與迷迭香酸二聚體混合物用濕硅膠H干柱進(jìn)行粗分離，用氯仿-乙酸乙酯多次洗脫，再用反相HPLC，用ODS柱，分別提取出上述兩種物質(zhì)。特點是除已知丹參生藥中的用途為活血化瘀、治療心血管疾病外，這兩種物質(zhì)分別或作為混合物都是治療消化性潰瘍的藥物。
文檔編號C07D307/00GK1153778SQ9511397
公開日1997年7月9日 申請日期1995年12月8日 優(yōu)先權(quán)日1995年12月8日
發(fā)明者李和泉, 王玉林, 路生滿, 高明奇, 劉守蘭 申請人:中國醫(yī)科大學(xué)