專利名稱：生產(chǎn)α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生產(chǎn)α-L-天冬氨酰二肽酰胺類人造甜味劑的方法。
本發(fā)明所包括的α-L-天冬氨酰-D-氨基酸-N-(S)-α-烷基芐基酰胺是美國(guó)專利5,286,509中所公開(kāi)的一種人造甜味劑。該專利公開(kāi)了上述化合物的生產(chǎn)方法，該方法包括利用二環(huán)己基碳二亞胺，使L-天冬氨酸中的氨基和β-羧基得到保護(hù)的N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-β-芐酯與D-氨基酸-N-(S)-α-烷基芐基酰胺縮合，然后通過(guò)催化還原脫除芐氧羰基和芐基，即得到目標(biāo)化合物。該方法在工業(yè)生產(chǎn)中需要使用昂貴的二環(huán)己基碳二亞胺。此外，目標(biāo)化合物中會(huì)含有少量由二環(huán)己基碳二亞胺反應(yīng)衍生的二環(huán)己基脲，從而導(dǎo)致品質(zhì)下降。
該專利指出N-芐氧羰基-L-天冬氨酸酐或N-甲酰基-L-天冬氨酸酐可以用以前的方法中所提到的化合物來(lái)代替，但卻沒(méi)有公開(kāi)具體的方法或條件。當(dāng)D-氨基酸酰胺上的氨基進(jìn)攻天冬氨酸β位羧基的羰基碳時(shí)，除目的α-L-天冬氨酰-D-氨基酸氨基衍生物外，還作為副產(chǎn)物而生成β-L-天冬氨酰-D-氨基酸酰胺衍生物。該β副產(chǎn)物也需要去除，因而降低了目的化合物的產(chǎn)率。
本發(fā)明的目的是提供一種經(jīng)濟(jì)的、不使用昂貴的二環(huán)己基碳二亞胺且不生成β副產(chǎn)物的生產(chǎn)α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物的方法。
本發(fā)明研究了制取目的α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物的方法使式(1)的天冬氨酸衍生物與氯甲酸烷基酯混合生成混合酸酐，與式(2)的氨基酸胺衍生物混合以優(yōu)良的產(chǎn)率生成被保護(hù)的α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物，然后在酸性條件下將該化合物水解，脫除天冬氨酸上的氨基保護(hù)基，并將β-羧酸酯轉(zhuǎn)化成羧酸，
式(1) 其中R1是含有1-4個(gè)碳原子的烷基或烷氧基，或含有6-10個(gè)碳原子的芳基；R2是含有1-4個(gè)碳原子的烷基或含有6-10個(gè)碳原子的芳基；R3是含有1-4個(gè)碳原子的烷基或芐基；A是質(zhì)子化的叔胺或二環(huán)己胺或堿金屬，式(2) 其中R1是含有1-6個(gè)碳原子的烷基或含有2-7個(gè)碳原子的烷氧甲基；R2是芐基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基、苯基、或其2、3或4位上帶有取代基的苯基，所述取代基選自F、Cl、Br、I、羥基、含1-6個(gè)碳原子的烷氧基、氰基、硝基乙?；?、氨基、乙酰氨基、在其2，3或3，4位帶有亞甲二氧基、三亞甲基、四亞甲基的苯基、或2-、3-或4-吡啶基、或2-或3-呋喃基、或2-或3-噻吩基；含有C*的分子結(jié)構(gòu)在R1是烷基時(shí)為(S)或(RS)，在R1是烷氧甲基時(shí)為(R)、(S)或(RS)；如果R1是烷基，R2是芐基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基或苯基，則X是D-α-氨基酸殘基或DL-α-氨基酸殘基，選自D-正亮氨酸、D-亮氨酸、D-異亮氨酸、D-別異亮氨酸、D-蘇氨酸、D-O-甲基蘇氨酸、D-別蘇氨酸、D-O-甲基別蘇氨酸、D-或DL-呋喃基甘氨酸、或含3-6碳原子的環(huán)或非環(huán)α，α-二烷基氨基酸殘基；如果R1是烷基，R2是2、3或4位上帶有取代的苯基，所述取代基選自F、Cl、Br、I、羥基、含1-6個(gè)碳原子的烷氧基、氰基、硝基、乙?；?、氨基、乙酰氨基、在其2，3或3，4位帶有亞甲二氧基、三亞甲基或四亞甲基的苯基、或2-、3-或4-吡啶基、或2-或3-呋喃基、或2-或3-噻吩基，以及R1是烷氧甲基時(shí)，則X是D-α-氨基酸殘基或DL-α-氨基酸殘基，選自D-丙氨酸、D-α-氨基丁酸、D-正纈氨酸、D-纈氨酸、D-正亮氨酸、D-亮氨酸、D-異亮氨酸、D-別異亮氨酸、D-t-亮氨酸、D-絲氨酸、D-O-甲基絲氨酸、D-蘇氨酸、D-O-甲基蘇氨酸、D-別蘇氨酸、D-O-甲基別蘇氨酸、D-苯基甘氨酸、D-或DL-呋喃基甘氨酸、或含3-6個(gè)碳原子的環(huán)或非環(huán)α，α-二烷基氨基酸殘基；L-Asp和X是α鍵合的。
式(1)天冬氨酸衍生物的生產(chǎn)方法是在適當(dāng)?shù)娜軇┲惺筁-天冬氨酸β-烷基酯與“A”堿和作為氨基保護(hù)基的β-二酮或乙酰乙酸酯混合。適當(dāng)?shù)娜軇┛梢允撬?、醇?如甲醇和乙醇)、醚類(如四氫呋喃和1，4-二噁烷、腈類(如乙腈)、二甲基甲酰胺、二甲亞砜及其他混合溶劑。
L-天冬氨酸β-烷基酯易于用以下方法制取在相應(yīng)的烷基醇中(H.Schwarz等，J.Am.Chem.Soc.，795697，1957)或含有鹵化氫的烷基醇中(D.W.Coleman等，J.Chem.Soc.，1951，2294)，等等，用亞硫酰氯處理L-天冬氨酸。
A代表叔胺，如三乙胺、三丁胺、三辛胺和N-甲基嗎啉；具有大取代基和弱親核性的仲胺，如二環(huán)己胺；以及含堿金屬的無(wú)機(jī)堿，如氫氧化鈉、氫氧化鉀和碳酸鈉。特別推薦叔胺，如三丁胺和三辛胺，因?yàn)槭灏吩谙乱徊襟E中具有漿液性質(zhì)。
氨基保護(hù)基包括乙酰乙酸酯，如乙酰乙酸甲酯和乙酰乙酸乙酯；以及β-二酮，如乙酰丙酮和苯甲酰丙酮。
由上述三種物質(zhì)混合而生成的式(1)天冬氨酸衍生物與反應(yīng)中將要生成的水共存。質(zhì)子性溶劑如水和醇對(duì)反應(yīng)有干擾，所以在下一步驟與氯甲酸烷基酯的反應(yīng)開(kāi)始之前，需要將這種溶劑以適當(dāng)方式除去。為蒸餾掉水和醇，可將反應(yīng)液濃縮。如果它們?cè)诜磻?yīng)液中固化，則可用過(guò)濾或其他方法從液體中分出固體物。
為了由式(1)化合物和氯甲酸烷基酯生成混合酸酐，可以用非質(zhì)子性溶劑將(1)化合物溶解或懸浮，然后可以加入氯甲酸烷基酯，得到混合酸酐。
非質(zhì)子性溶劑包括芳烴，如苯和甲苯；乙酸酯，如乙酸乙酯和乙酸丁酯；酮類，如丙酮和甲乙酮；鹵化烴，如二氯甲烷和氯仿；醚類，如四氫呋喃和二噁烷。總的來(lái)說(shuō)，就反應(yīng)液的液體性質(zhì)和下一個(gè)脫保護(hù)過(guò)程而言，芳烴和乙酸酯是理想的。
反應(yīng)最好在低溫下進(jìn)行，以抑制副反應(yīng)。達(dá)到最佳產(chǎn)率的溫度是≤5℃，優(yōu)選≤0℃，理想的是≤-10℃。
式(1)化合物與氯甲酸烷基酯的混合摩爾比是1(等摩爾)較為經(jīng)濟(jì)，但是0.6-1.5的摩爾比范圍是可接受的。
氯甲酸烷基酯包括氯甲酸甲酯、氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯及氯甲酸芐酯。
將含有所生成的混合酸酐的反應(yīng)液與氨基酸衍生物混合，很容易得到式(5)的被保護(hù)α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物。
式(5) 其中R1是含1-4個(gè)碳原子的烷基或烷氧基，或含6-10個(gè)碳原子的芳基；R2是含1-4個(gè)碳原子的烷基或含6-10個(gè)碳原子的芳基；R3是含1-4碳原子的烷基或芐基；R4是含1-6個(gè)碳原子的烷基或含2-7個(gè)碳原子的烷氧甲基；R5是芐基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基和苯基，或其2、3或4位上帶有取代基的苯基，所述取代基選自F、Cl、Br、I、羥基、含1-6個(gè)碳原子的烷氧基、氰基、硝基、乙酰基、氨基和乙酰氨基、或在其2，3或3，4位帶有亞甲二氧基、三亞甲基或四亞甲基的苯基、或2-、3-或4-吡啶基、2-或3-呋喃基、或2-或3-噻吩基。C*的構(gòu)型在R4是烷基時(shí)為(S)或(RS)，在R4是烷氧甲基時(shí)為(R)、(S)或(RS)。如果R4是烷基，R5是芐基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基或苯基，則X是D-α-氨基酸殘基或DL-α-氨基酸殘基，選自D-正亮氨酸、D-亮氨酸、D-異亮氨酸、D-別異亮氨酸、D-蘇氨酸、D-O-甲基蘇氨酸、D-別蘇氨酸、D-O-甲基別蘇氨酸、D-或DL-呋喃基甘氨酸、或含3-6碳原子的環(huán)或非環(huán)α，α-二烷基氨基酸殘基；如果R4是烷基，R5是2、3或4位上帶有取代的苯基，所述取代基選自F、Cl、Br、I、羥基、含1-6個(gè)碳原子的烷氧基、氰基、硝基、乙?；?、氨基、乙酰氨基、在其2，3或3，4位帶有亞甲二氧基、三亞甲基或四亞甲基的苯基、或2-、3-或4-吡啶基、或2-或3-呋喃基、或2-或3-噻吩基，以及R4是烷氧甲基時(shí)，則X是D-α-氨基酸殘基或DL-α-氨基酸殘基，選自D-丙氨酸、D-α-氨基丁酸、D-正纈氨酸、D-纈氨酸、D-正亮氨酸、D-亮氨酸、D-異亮氨酸、D-別異亮氨酸、D-t-亮氨酸、D-絲氨酸、D-O-甲基絲氨酸、D-蘇氨酸、D-O-甲基蘇氨酸、D-別蘇氨酸、D-O-甲基別蘇氨酸、D-苯基甘氨酸、D-或DL-呋喃基甘氨酸、或含3-6個(gè)碳原子的環(huán)或非環(huán)α，α-二烷基氨基酸殘基；L-Asp和X是α鍵合的。
如美國(guó)專利5286509所公開(kāi)，從N-芐氧羰基或N-叔丁氧羰基氨基酸衍生物上脫除保護(hù)基，就能夠制取本發(fā)明的氨基酸酰胺衍生物。也可以利用初始由式(3)氨基酸衍生物的混合酸酐得到的有機(jī)層來(lái)制取，即使其與式(4)的胺衍生物縮合，然后使其與酸性水溶液接觸，得到含有氨基酸酰胺衍生物的水溶液，再用有機(jī)溶劑在堿性條件下萃取。
式(3) 其中R1是含1-4個(gè)碳原子的烷基或烷氧基，或含6-10個(gè)碳原子的芳基；R2是含1-4個(gè)碳原子的烷基或含6-10個(gè)碳原子的芳基；X是D-α-氨基酸殘基或DL-α-氨基酸殘基，選自D-丙氨酸、D-α-氨基丁酸、D-正纈氨酸、D-纈氨酸、D-正亮氨酸、D-亮氨酸、D-異亮氨酸、D-別異亮氨酸、D-t-亮氨酸、D-絲氨酸、D-O-甲基絲氨酸、D-蘇氨酸、D-O-甲基蘇氨酸、D-別蘇氨酸、D-O-甲基別蘇氨酸或D-苯基甘氨酸、D-或DL-呋喃基甘氨酸、或含3-6個(gè)碳原子的環(huán)或非環(huán)α，α-二烷基氨基酸殘基。
A代表質(zhì)子化的叔胺、二環(huán)己胺或堿金屬，式(4) 其中R1是含有1-6個(gè)碳原子的烷基或含有2-7個(gè)碳原子的烷氧甲基；R2是芐基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基、苯基、或其2、3或4位上帶有取代基的苯基，所述取代基選自F、Cl、Br、I、羥基、含1-6個(gè)碳原子的烷氧基、氰基、硝基、乙?；?、氨基、乙酰氨基、或在其2，3或3，4位帶有亞甲二氧基、三亞甲基、四亞甲基的苯基、或2-、3-或4-吡啶基、或2-或3-呋喃基、或2-或3-噻吩基；C*的構(gòu)型在R1是烷基時(shí)為(S)或(RS)，在R1是烷氧甲基時(shí)為(R)、(S)或(RS)。
在該方法中，混合酸酐反應(yīng)和縮合反應(yīng)的條件仍與前述相同式(4)胺衍生物與氨基酸衍生物的縮合及縮合化合物與天冬氨酸組分的混合都采用相同的原料(如氯甲酸烷基酯和叔胺)和溫度。這意味著該方法在工業(yè)上特別有利，因?yàn)楣餐褂孟嗤馁A罐和反應(yīng)器。
在所得的混合物中存在被保護(hù)的α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物。通過(guò)脫除保護(hù)基而得到目的α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物的方法如下在反應(yīng)混合物中加入無(wú)機(jī)酸溶液如稀鹽酸，使在室溫下處于酸性條件下30分鐘至數(shù)小時(shí)。這樣可以很容易地脫除氨基保護(hù)基，生成式(6)的α-L-天冬氨酰二肽酰胺β-烷基酯。如果使用不易溶解式(5)化合物的溶劑，則該物質(zhì)可以以晶體或固體形式存在。在這種情況下，進(jìn)行固/液分離操作如過(guò)濾，得到固體物，再向其中加入稀鹽酸即得到相應(yīng)于式(6)的物質(zhì)，式(6) 其中R1是含1-4個(gè)碳原子的烷基或芐基；R2是含1-6個(gè)碳原子的烷基或含2-7個(gè)碳原子的烷氧甲基；R3是芐基、環(huán)己基甲基、苯基、或其2、3或4位上帶有取代基的苯基，所述取代基選自F、Cl、Br、I、羥基、含1-6個(gè)碳原子的烷氧基、氰基、硝基、乙酰基、氨基、乙酰氨基、在其2，3或3，4位帶有亞甲二氧基、三亞甲基或四亞甲基的苯基、或2-、3-或4-吡啶基、或2-或3-呋喃基、或2-或3-噻吩基；C*的構(gòu)型在R2是烷基時(shí)為(S)或(RS)，在R2是烷氧甲基時(shí)為(R)、(S)或(RS)。如果R2是烷基，R3是芐基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基或苯基，則X是D-α-氨基酸殘基或DL-α-氨基酸殘基，選自D-正亮氨酸、D-亮氨酸、D-異亮氨酸、D-別異亮氨酸、D-蘇氨酸、D-O-甲基蘇氨酸、D-別蘇氨酸、D-O-甲基別蘇氨酸、D-或DL-呋喃基甘氨酸、或含3-6碳原子的環(huán)或非環(huán)α，α-二烷基氨基酸殘基；如果R2是烷基，R3是2、3或4位上帶有取代的苯基，所述取代基選自F、Cl、Br、I、羥基、含1-6個(gè)碳原子的烷氧基、氰基、硝基、乙?；被?、乙酰氨基、或在其2，3或3，4位帶有亞甲二氧基、三亞甲基或四亞甲基的苯基、或2-、3-或4-吡啶基、2-或3-呋喃基、或2-或3-噻吩基，以及R2是烷氧甲基時(shí)，則X是D-α-氨基酸殘基或DL-α-氨基酸殘基，選自D-丙氨酸、D-α-氨基丁酸、D-正纈氨酸、D-纈氨酸、D-正亮氨酸、D-亮氨酸、D-異亮氨酸、D-別異亮氨酸、D-t-亮氨酸、D-絲氨酸、D-O-甲基絲氨酸、D-蘇氨酸、D-O-甲基蘇氨酸、D-別蘇氨酸、D-O-甲基別蘇氨酸、D-苯基甘氨酸、D-或DL-呋喃基甘氨酸、或含3-6個(gè)碳原子的環(huán)或非環(huán)α，α-二烷基氨基酸殘基；L-Asp和X是α鍵合的。
式(6)的物質(zhì)在酸性條件下水解，將天冬氨酸中的β-酯轉(zhuǎn)化為羧酸，并生成目的α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物。該反應(yīng)需要比簡(jiǎn)單脫除氨基保護(hù)基劇烈的反應(yīng)條件。所需的酸濃度為1N至6N鹽酸，溫度為室溫至80℃。反應(yīng)時(shí)間在30分至24小時(shí)之間，從而使酯水解但卻不裂解目的物質(zhì)的酰胺鍵。例如，可以把較高的酸濃度與相對(duì)較低的溫度和較短的時(shí)間相組合。
如果β位上是芐基酯，則該酯基可通過(guò)催化還原來(lái)脫除。從酸溶液中脫除氨基保護(hù)基，然后加入催化劑如鈀/碳，同時(shí)在氫氣氛下攪拌即可轉(zhuǎn)化成羧酸。過(guò)濾除去催化劑后再將混合物中和，即得到目的α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物。
氨基保護(hù)基的脫除和酯的水解可以同時(shí)進(jìn)行。優(yōu)選的是，如果使用易水解的溶劑如乙酸乙酯，可通過(guò)濃縮或過(guò)濾從反應(yīng)液中分離出式(5)化合物。所得的式(5)化合物可置于酯水解條件下，以同時(shí)脫除氨基保護(hù)基。如果使用不易水解的溶劑如甲苯，則可將縮合反應(yīng)液置于水解條件下。
所得的含有α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物的酸溶液可以用堿如氫氧化鈉進(jìn)行中和，然后可通過(guò)濃縮或冷卻來(lái)控制結(jié)晶過(guò)程，從而得到結(jié)晶形式的目的α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物。
以下實(shí)施例將詳細(xì)敘述本發(fā)明。HPLC條件如下柱InertsilODS-2，6φ×150mm；洗脫劑0.1M KH2PO4(pH3.0)/MeCN＝80/20(V/V)；流速1ml/分；溫度室溫；檢測(cè)紫外(210nm)。
實(shí)施例1在20ml甲醇中加入1.27g(6.90mmol)L-天冬氨酸β-甲酯鹽酸鹽、0.80g(6.9mmol)乙酰乙酸甲酯、4.88g(13.8mmol)三辛胺(溶液I)。使溶液I回流3小時(shí)，然后減壓濃縮。在殘余物(漿狀)中加入27ml乙酸乙酯，攪拌下冷卻到-10℃以下，加入10ml含有0.66ml(6.9mmol)氯甲酸乙酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持反應(yīng)液的溫度為-11℃至-12℃。20分鐘后，在反應(yīng)液中加入15ml含有1.37g(5.85mmol)D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-13℃至-17℃。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，加?0ml 1NHCl，并在室溫下攪拌1小時(shí)。待溶液分層后，乙酸乙酯層用稀鹽酸萃取兩次。收集水層進(jìn)行HPLC分析，測(cè)出1.81g(4.97mmol)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺甲酯。產(chǎn)率為85.0％。
濃縮水層，在殘余物中加入12ml 2NHCl，并在60℃下維持5小時(shí)。水解液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)出1.55g(4.45mmol)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺。產(chǎn)率為89.4％。
用25％NaOH將水解液pH調(diào)至pH6，所得漿狀液在5℃下攪拌過(guò)液，并減壓過(guò)濾。所得的α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺晶體用少量水沖洗，并減壓干燥，得量為1.42g。結(jié)晶收率為91.4％。
實(shí)施例2
在50ml甲醇中加入5.85g(50.0mmo1)D-纈氨酸、5.81g(50.0mmol)乙酰乙酸甲酯和9.05g(50.0mmol)二環(huán)己胺(溶液II)。將溶液II加熱回流3小時(shí)，并減壓濃縮。在殘余物中加入165ml乙酸乙酯和0.48g(4.7mmol)N-甲基嗎啉，冷卻下進(jìn)行攪拌，加入60ml含有6.18ml(4.72mmol)氯甲酸異丁酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-17℃至-20℃。20分鐘后，再在混合物中加入100ml含有5.42g(40.1mmol)(S)-α-乙基芐胺的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度不變。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝兀缓筮^(guò)濾除去沉淀的二環(huán)己胺鹽酸鹽晶體，在濾液中加入100ml 1NHCl?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?0分鐘，分層。水層用1N NaOH調(diào)至pH11，用約200ml乙酸乙酯萃取。所得的226ml乙酸乙酯層中含有6.63g(28.3mmol)D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺。產(chǎn)率為70.5％。
在30ml甲醇中加入3.06g(16.7mmol)L-天冬氨酸甲酯鹽酸鹽、2.25g(19.4mmol)乙酰乙酸甲酯和6.51g(35.9mmol)二環(huán)己胺，然后加熱回流3小時(shí)，減壓濃縮反應(yīng)混合物。在殘余物中加入乙酸乙酯并進(jìn)行過(guò)濾，以除去沉淀的二環(huán)己胺鹽酸鹽。濃縮濾液得到8.38g漿狀殘余物。在殘余物中加入50ml乙酸乙酯和0.85g(8.4mmol)N-甲基嗎啉。如上所述冷卻所得混合物，并加入含有2.17ml(16.7mmol)氯甲酸異丁酯的乙酸乙酯溶液。20分鐘后，加入由120ml乙酸乙酯層制備的約35ml濃縮物(含15mmol D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺)。將溫度提高到室溫，減壓過(guò)濾得到沉積的晶體。晶體用100ml 0.5NHCl在室溫下水解2小時(shí)，然后過(guò)濾除去沉淀的二環(huán)己胺鹽酸鹽，濾液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)出3.60g(9.91mmol，產(chǎn)率66.0％)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺β-甲酯和0.116g(0.332mmol，產(chǎn)率2.2％)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺。母液與稀鹽酸混合并分層，得到的水層進(jìn)行HPLC分析，測(cè)出0.545g(1.50mmol，產(chǎn)率10.0％)α-L-天冬氨酸-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺甲酯和26mg(0.073mmol；產(chǎn)率0.5％)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺。縮合反應(yīng)總產(chǎn)率為78.7％。將上述兩個(gè)水解液合并并濃縮，在殘余物中加入200ml 2N HCl并保持在60℃下4小時(shí)，然后測(cè)出3.58g(10.26mmol，產(chǎn)率86.9％)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺。
實(shí)施例3在40ml甲醇中加入1.84g(10.0mmol)L-天冬氨酸β-甲酯鹽酸鹽、1.00g(10.0mmol)乙酰丙酮和3.63g(20.0mmol)二環(huán)己胺(溶液III)。溶液III加熱回流3小時(shí)并減壓濃縮。在所得的漿狀殘余物中加入50ml乙酸乙酯，冷卻到-10℃并攪拌。加入11ml含有0.96ml(10mmol)氯甲酸乙酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持反應(yīng)液溫度為-11℃至-12℃。20分鐘后，加入45ml含有1.91g(9.27mmol)D-α-氨基丁酸-N-(S)-α-甲基芐基酰胺的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持反應(yīng)液溫度為-13℃至-17℃。使溶液溫?zé)嶂潦覝兀缓筮^(guò)濾除去二環(huán)己胺鹽酸鹽并濃縮濾液。在殘余物中加入乙腈和40ml 2N HCl，于60℃下加熱4小時(shí)。所得溶液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)出1.79g(5.58mmol)α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸、N-(S)-α-甲基芐基酰胺。產(chǎn)率為60.6％。
實(shí)施例4在30ml甲醇中加入1.02g(5.00mmol)L-天冬氨酸β-芐酯、0.63ml(5.0mmol)乙酰乙酸乙酯和0.909g(5.00mmol)二環(huán)己胺(溶液IV)。溶液IV在室溫下攪拌過(guò)夜并減壓濃縮。在殘余物中加入22ml乙酸乙酯和0.3ml三乙胺，攪拌混合物，同時(shí)冷卻到-10℃以下。加入7ml含有0.47ml(4.94mmol)氯甲酸乙酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持反應(yīng)液溫度為-20±5℃。30分鐘后，在反應(yīng)液中加入由34ml實(shí)施例2的乙酸乙酯層制得的約6ml濃縮物(含有4.22mmol D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺)，同時(shí)保持溫度為-20±3℃。使混合物溫?zé)嶂潦覝兀缓筮^(guò)濾除去二環(huán)己胺鹽酸鹽，在濾液中加入11ml 1N HCl，混合物在室溫下攪拌1小時(shí)并濃縮。在漿狀殘余物中加入40ml乙酸，然后加入0.36g 10％Pd/C，混合物于氫氣氣氛下攪拌3天進(jìn)行催化還原。除去催化劑后，母液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)出0.592g(1.70mmol)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基芐基酰胺。產(chǎn)率為40.2％。
實(shí)施例5在13ml甲醇中加入1.52g(130mmol)D-纈氨酸、1.51g(13.0mmol)乙酰乙酸甲酯、2.36g(13.0mmol)二環(huán)己胺，該溶液加熱回流3小時(shí)并減壓濃縮。在殘余物中加入45ml乙酸乙酯和0.13g(1.3mmol)N-甲基嗎啉，攪拌并冷卻(溶液V)。在溶液V中加入15ml含有1.71ml(13.0mmol)氯甲酸異丁酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-15℃至-17℃。20分鐘后，加入25ml含有1.59g(10.5mmol)(R)-α-甲氧甲基芐胺的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度不變。使該溶液升溫至室溫，然后過(guò)濾除去沉淀的二環(huán)己胺鹽酸鹽。在濾液中加入25ml 1N HCl，然后將溶液于室溫下攪拌90分鐘使其分層。所得的水層用1N NaOH調(diào)至pH11，混合物用約50ml乙酸乙酯萃取。所得的乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鎂干燥，混合物過(guò)濾后減壓濃縮濾液，然后干燥，得到2.16g(8.63mmol)淺黃色透明漿狀的D-纈氨酸-N-(R)-α-甲氧甲基芐基酰胺。產(chǎn)率為82.2％。
在18ml甲醇中加入1.84g(10.0mmol)L-天冬氨酸β-甲酯鹽酸鹽、1.16g(10.0mmol)乙酰乙酸甲酯和3.63g(20.0mmol)二環(huán)己胺，然后將該混合物加熱回流3小時(shí)并減壓濃縮。在殘余物中加入乙酸乙酯，然后過(guò)濾除去沉淀的二環(huán)己胺鹽酸鹽。濃縮濾液得到4.74g漿狀殘余物。在殘余物中加入30ml乙酸乙酯和0.51g(5.0mmol)N-甲基嗎啉，并如上所述進(jìn)行冷卻，加入含有1.31ml(10.0mmol)氯甲酸異丁酯的乙酸乙酯溶液。20分鐘后，在混合物中加入將2.13g(8.52mmol)D-纈氨酸-N-(R)-α-甲氧甲基芐基酰胺溶于20ml乙酸乙酯中制得的溶液。使該溶液溫?zé)嶂潦覝兀p壓濃縮蒸出乙酸乙酯。在殘余物中加入乙腈和200ml2N HCl，并于60℃加熱20小時(shí)。對(duì)該溶液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)出2.49g(6.81mmol)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(R)-α-甲氧甲基芐基酰胺。產(chǎn)率為79.9％。
水解液用25％NaOH調(diào)至pH6并減壓濃縮，將所得漿液冷卻并減壓過(guò)濾。所得的α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(R)-α-甲氧甲基芐基酰胺晶體用少量水、乙酸乙酯和氯仿沖洗，并減壓干燥。得量為2.00g。結(jié)晶收率為80.3％。
實(shí)施例6在25ml甲醇中加入1.47g(8.0mmol)L-天冬氨酸甲酯鹽酸鹽、0.93g(8.0mmol)乙酰乙酸甲酯和5.66g(16.0mmol)三辛胺(溶液VI)。溶液VI加熱回流3小時(shí)并減壓濃縮。在所得漿狀殘余物中加入30ml乙酸乙酯，攪拌下冷卻至-10℃。在該混合物中加入15ml含有0.77ml(8.0mmol)氯甲酸乙酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-11℃至-12℃。20分鐘后，加入20ml含有1.79g(6.78mmol)D-纈氨酸-N-(R)-α-乙氧甲基芐基酰胺的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-13℃至-17℃。使溶液溫?zé)嶂潦覝兀诜磻?yīng)液中加入25ml 1N HCl，溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。分層后，乙酸乙酯層用稀鹽酸溶液萃取兩次。濃縮水層，在殘余物中加入15ml 2N HCl，混合物于60℃下加熱8小時(shí)。水解液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)出2.25g(5.94mmol)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(R)-α-乙氧甲基芐基酰胺。產(chǎn)率為87.6％。
水解液用25％NaOH調(diào)至pH6，所得漿液于5℃下攪拌過(guò)夜，然后減壓過(guò)濾。所得的α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(R)-α-乙氧甲基芐基酰胺晶體用少量水沖洗，并減壓干燥。得量為2.01g。結(jié)晶收率為89.4％。
實(shí)施例7在40ml甲醇中加入1.84g(10.0mmol)L-天冬氨酸β-甲酯鹽酸鹽、1.00g(10.0mmol)乙酰丙酮和3.63g(20.0mmol)二環(huán)己胺(溶液VII)。將溶液VII加熱回流3小時(shí)并減壓濃縮。在所得漿狀殘余物中加入50ml乙酸乙酯，并在攪拌下冷卻至-10℃。加入15ml含有0.96ml(10.0mmol)氯甲酸乙酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-11℃至-12℃。20分鐘后，在反應(yīng)液中加入40ml含有2.15g(9.11mmol)D-α-氨基丁酸-N-(R)-α-甲氧甲基芐基酰胺的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-13℃至-17℃。將溶液溫度提高到室溫，將混合物過(guò)濾除去二環(huán)己胺鹽酸鹽。濃縮濾液，在殘余物中加入乙腈和40ml 2N HCl，混合物于60℃下加熱5小時(shí)。對(duì)溶液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)得2.16g(6.16mmol)α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸－N-(R)-α-甲氧甲基芐基酰胺。產(chǎn)率為67.6％。
實(shí)施例8在50ml甲醇中加入2.04g(10.0mmol)L-天冬氨酸β-芐基酯、1.26ml(10.0mmol)乙酰乙酸乙酯和1.82g(10.0mmol)二環(huán)己胺(溶液VIII)。溶液VIII在室溫下攪拌過(guò)夜，并減壓濃縮。在所得殘余物中加入50ml乙酸乙酯和0.6ml三乙胺，將溶液在攪拌下冷卻至-10℃，加入15ml含有0.95ml(10.0mmol)氯甲酸乙酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-13℃至-17℃。30分鐘后，在溶液中加入15ml含有2.38g(9.51mmol)D-纈氨酸-N-(R)-α-甲氧甲基芐基酰胺的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-13℃至-17℃。將溶液溫度提高到室溫，將混合物過(guò)濾，在濾液中加入25ml 1N HCl，混合物于室溫下攪拌1小時(shí)并濃縮。在漿狀殘余物中加入80ml乙酸乙酯，加入0.75g 10％Pd-C，混合物于氫氣氣氛下攪拌3天進(jìn)行催化還原。過(guò)濾除去催化劑后的母液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)出1.83g(5.01mmol)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(R)-α-甲氧芐基酰胺。產(chǎn)率為52.7％。
實(shí)施例9在17ml甲醇中加入2.00g(19.4mmol)D-α-氨基丁酸、2.25g(19.4mmol)乙酰乙酸甲酯和3.52g(19.4mmol)二環(huán)己胺，加熱回流3小時(shí)，并將混合物減壓濃縮。加入60ml乙酸乙酯和0.20g(1.9mmol)N-甲基嗎啉，將混合物于冷卻下攪拌(溶液IX)。在溶液IX中加入20ml含有2.55ml(19.4mmol)氯甲酸異丁酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-15℃至-17℃。20分鐘后，在同樣溫度下加入30ml含有2.37g(15.7mmol)(S)-α-乙基對(duì)羥基芐胺的乙酸乙酯溶液。使溶液溫?zé)嶂潦覝夭⑦^(guò)濾。于室溫下向?yàn)V液中加入30ml 1N HCl，并攪拌90分鐘，然后分層。所得的水層用1N NaOH調(diào)至pH11，然后用約70ml乙酸乙酯萃取。所得的乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鎂干燥，然后過(guò)濾，濾液減壓濃縮并干燥。測(cè)出2.72g(11.5mmol)淺黃色透明漿狀D-α-氨基丁酸-N-(S)-α-乙基對(duì)羥基芐基酰胺。產(chǎn)率為73.2％。
在25ml甲醇中加入2.74g(14.9mmol)L-天冬氨酸β-甲酯鹽酸鹽、1.73g(14.9mmol)乙酰乙酸甲酯和5.41g(29.8mmol)二環(huán)己胺，該混合物加熱回流3小時(shí)并減壓濃縮。在所得殘余物中加入乙酸乙酯，并將混合物過(guò)濾。濃縮濾液后得到漿狀殘留物。加入45ml乙酸乙酯和0.75g(7.5mmol)N-甲基嗎啉，并如上所述進(jìn)行冷卻，加入含有1.96ml(14.9mmol)氯甲酸異丁酯的乙酸乙酯溶液。20分鐘后，在混合物中加入將2.67g(11.3mmol)D-α-氨基丁酸-N-(S)-α-乙基對(duì)羥基芐基酰胺溶于30ml乙酸乙酯中得到的溶液。使該溶液溫?zé)嶂潦覝兀瑴p壓濃縮該溶液，蒸出乙酸乙酯。在殘余物中加入乙腈和200ml 2N HCl，并于60℃下加熱10小時(shí)。對(duì)溶液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)出2.94g(8.37mmol)α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸-N-(S)-α-乙基對(duì)羥基芐基酰胺。產(chǎn)率為74.1％。水解液用25％NaOH調(diào)至pH6并減壓濃縮。所得漿液用冰冷卻并減壓過(guò)濾。所得的α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸-N-(S)-α-乙基對(duì)羥基芐基酰胺晶體用少量水、乙酸乙酯和氯仿沖洗，然后減壓干燥。得量為2.43g。結(jié)晶收率為82.7％。
實(shí)施例10在25ml甲醇中加入1.47g(8.00mmol)L-天冬氨酸β-甲酯鹽酸鹽、0.93g(8.0mmol)乙酰乙酸甲酯和5.66g(16.0mmol)三辛胺，并加熱回流3小時(shí)(溶液X)，將溶液X減壓濃縮。在所得的漿狀殘余物中加入30ml乙酸乙酯，并在攪拌下冷卻至-10℃或其以下。在反應(yīng)混合物中加入15ml含有0.77ml(8.0mmol)氯甲酸乙酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-11℃至-12℃。20分鐘后，加入20ml含有D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基對(duì)羥基芐基酰胺的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-13℃至-17℃。使溶液溫?zé)嶂潦覝?，向溶液中加?5ml 1N HCl，并在室溫下攪拌1小時(shí)。溶液分層后，乙酸乙酯層用稀鹽酸萃取兩次。濃縮水層，殘余物中加入15ml 2N HCl，并在60℃下加熱5小時(shí)。對(duì)水解液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)得1.70g(4.66mmol)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基對(duì)羥基芐基酰胺。產(chǎn)率為69.9％。
水解液用25％NaOH調(diào)至pH6，所得漿液在5℃下攪拌過(guò)夜并減壓過(guò)濾。所得的α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基對(duì)羥基芐基酰胺晶體用少量水沖洗，減壓干燥。得量為1.51g。結(jié)晶收率為88.8％。
實(shí)施例11在17ml甲醇中加入2.00g(17.1mmol)D-纈氨酸、1.98g(17.1mmol)乙酰乙酸甲酯、3.10g(17.1mmol)二環(huán)己胺，并加熱回流3小時(shí)(溶液XI)，將溶液XI減壓濃縮。在所得殘余物中加入60ml乙酸乙酯、0.17g(1.7mmol)N-甲基嗎啉，并在攪拌下冷卻。在混合物中加入20ml含有2.24ml(17.1mmol)氯甲酸異丁酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-15℃至-17℃。20分鐘后，在混合物中加入30ml含有2.34g(13.8mmol)(S)-α-乙基對(duì)氯芐胺的乙酸乙酯溶液。使溶液溫?zé)嶂潦覝夭⑦^(guò)濾。在濾液中加入30ml 1N HCl，并將溶液于室溫下攪拌90分鐘，然后分層。所得的水層用1N NaOH調(diào)至pH11，并用約60ml乙酸乙酯萃取。所得的乙酸乙酯層用無(wú)水硫鎂酸干燥，并過(guò)濾除去硫酸鎂。濾液減壓濃縮并干燥，測(cè)得3.14g(11.7mmol)淺黃色透明漿狀D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基對(duì)氯芐基酰胺。產(chǎn)率為84.8％。
在25ml甲醇中加入2.41g(13.1mmol)L-天冬氨酸β-甲酯鹽酸鹽、1.52g(13.1mmol)乙酰乙酸甲酯和4.75g(26.2mmol)二環(huán)己胺，加熱回流3小時(shí)，然后減壓濃縮。在所得殘余物中加入乙酸乙酯，然后過(guò)濾混合物。濾液濃縮后得到漿狀殘余物。在殘余物中加入40ml乙酸乙酯和0.66g(6.6mmol)N-甲基嗎啉，并如上所述進(jìn)行冷卻，然后加入1.72ml(13.1mmol)氯甲酸異丁酯。20分鐘后，在混合物中加入將3.01g(11.2mmol)D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基對(duì)氯芐基酰胺溶于25ml乙酸乙酯中制得的溶液。使所得溶液溫?zé)嶂潦覝?，將反?yīng)液減壓濃縮蒸出乙酸乙酯。殘余物中加入乙腈和200ml 2N HCl，并在60℃下加熱9小時(shí)。對(duì)溶液進(jìn)行HPLC分析，并測(cè)得3.44g(8.98mmol)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基對(duì)氯芐基酰胺。產(chǎn)率為80.2％。
水解液用25％NaOH調(diào)至pH6并減壓濃縮，所得漿液用冰冷卻并減壓過(guò)濾。所得的α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(S)-α-乙基對(duì)氯芐基酰胺晶體用少量水、乙酸乙酯和氯仿沖洗，然后減壓干燥。得量為2.95g。結(jié)晶收率為85.8％。
實(shí)施例12在17ml甲醇中加入2.00g(19.4mmol)D-α-氨基丁酸、2.25g(19.4mmol)乙酰乙酸甲酯和3.52g(19.4mmol)二環(huán)己胺(溶液XII)，將溶液XII加熱回流3小時(shí)并減壓濃縮。在所得殘余物中加入60ml乙酸乙酯和0.20g(1.9mmol)N-甲基嗎啉，攪拌下冷卻，在反應(yīng)液中加入20ml含有2.55ml(19.4mmol)氯甲酸異丁酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-15℃至-17℃。20分鐘后，在溶液中加入30ml含有2.71g(16.2mmol)(R)-α-甲氧甲基對(duì)羥基芐胺的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度不變。使溶液溫?zé)嶂潦覝夭⑦^(guò)濾。在濾液中加入30ml 1N HCl，并在室溫下攪拌90分鐘。水層用1N NaOH調(diào)至pH11，并用約70ml乙酸乙酯萃取。所得的乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鎂干燥，濾掉硫酸鎂，濾液減壓濃縮，測(cè)得3.08g(12.2mmol)淺黃色透明漿狀的D-α-氨基丁酸-N-(R)-α-甲氧甲基對(duì)羥基芐基酰胺。產(chǎn)率為75.3％。
在25ml甲醇中加入2.74g(14.9mmol)L-天冬氨酸β-甲酯鹽酸鹽、1.73g(14.9mmol)乙酰乙酸甲酯和5.41g(29.8mmol)二環(huán)己胺，加熱回流3小時(shí)，然后減壓濃縮。在所得殘余物中加入乙酸乙酯，然后將該混合物過(guò)濾。濃縮濾液得到漿狀殘余物。在殘余物中加入45ml乙酸乙酯和0.75g(7.5mmol)N-甲基嗎啉，如上所述冷卻溶液，加入含有1.96ml(14.9mmol)氯甲酸異丁酯的乙酸乙酯溶液。20分鐘后，在混合物中加入將2.98g(11.8mmol)所述D-α-氨基丁酸-N-(R)-α-甲氧甲基對(duì)羥基芐基酰胺溶于30ml乙酸乙酯中制得的溶液。使溶液溫?zé)嶂潦覝兀磻?yīng)液減壓濃縮，蒸出乙酸乙酯。在溶液中加入一些乙腈和200ml 2NHCl，并于60℃下加熱6小時(shí)。對(duì)所得混合物進(jìn)行HPLC分析，測(cè)得3.38g(9.19mmol)α-L-天冬氨酰-D-α-氨基丁酸N-(R)-α-甲氧甲基對(duì)羥基芐基酰胺。產(chǎn)率為77.9％。該水解液用25％NaOH調(diào)至pH6并減壓濃縮。所得漿液減壓下用冰冷卻。所得的α-L-天冬氨酰-D-氨基丁酸-N-(R)-α-甲氧甲基對(duì)羥基芐基酰胺用少量水、乙酸乙酯和氯仿沖洗，并減壓干燥。產(chǎn)率為3.03g。結(jié)晶收率為89.6％。
實(shí)施例13在25ml甲醇中加入1.50g(8.17mmol)L-天冬氨酸β-甲酯鹽酸鹽、0.95g(8.2mmol)乙酰乙酸甲酯和5.78g(16.3mmol)三辛胺(溶液XIII)，將溶液XIII加熱回流3小時(shí)并減壓濃縮。在漿狀殘余物中加入30ml乙酸乙酯，并在攪拌下冷卻到-10℃，在混合物中加入15ml含有0.79ml(8.2mmol)氯甲酸乙酯的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-11℃至-12℃。20分鐘后，加入20ml含有1.84g(6.92mmol)D-纈氨酸-N-(R)-α-甲氧甲基對(duì)羥基芐基酰胺的乙酸乙酯溶液，同時(shí)保持溫度為-13℃至-17℃。使混合物溫?zé)嶂潦覝?，在反?yīng)液中加入25ml 1N HCl，并在室溫下攪拌1小時(shí)。溶液分層后乙酸乙酯層用稀鹽酸萃取兩次。水層濃縮后在所得殘余物中加入15ml 2N HCl，并于60℃下加熱5小時(shí)。對(duì)水解液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)得1.92g(5.02mmol)α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(R)-α-甲氧甲基對(duì)羥基芐基酰胺。產(chǎn)率為72.5％。
水解液用25％NaOH調(diào)至pH6，所得漿液在5℃下攪拌過(guò)夜，然后減壓過(guò)濾。所得的α-L-天冬氨酰-D-纈氨酸-N-(R)-α-甲氧甲基對(duì)羥基芐基酰胺晶體用少量水沖洗并減壓干燥。得量為1.45g。結(jié)晶收率為75.5％。
本發(fā)明涉及用經(jīng)濟(jì)的保護(hù)基、活化劑和不生成β-肽副產(chǎn)物的簡(jiǎn)便方法來(lái)生產(chǎn)α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物。本發(fā)明可用于生產(chǎn)甜味劑化合物，即美國(guó)專利5,286,509的α-L-天冬氨酰-D-氨基酸-N-(S)-α-烷基芐基酰胺、日本專利申請(qǐng)42818/1995的天冬氨酰二肽衍生物、以及日本專利申請(qǐng)144844/1995的天冬氨酰二肽酰胺衍生物。
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物的方法，該方法包括使式(1)的L-天冬氨酸衍生物與氯甲酸烷基酯和式(2)的氨基酸酰胺衍生物混合，并在酸性條件下進(jìn)行水解式(1) 其中R1是含有1-4個(gè)碳原子的烷基或烷氧基，或含有6-10個(gè)碳原子的芳基；R2是含有1-4個(gè)碳原子的烷基或含有6-10個(gè)碳原子的芳基；R3是含有1-4個(gè)碳原子的烷基或芐基；A是質(zhì)子化的叔胺、二環(huán)己胺或堿金屬；式(2) 其中R1是含有1-6個(gè)碳原子的烷基或含有2-7個(gè)碳原子的烷氧甲基；R2是芐基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基、苯基、或其2、3或4位上帶有取代基的苯基，所述取代基選自F、Cl、Br、I、羥基、含1-6個(gè)碳原子的烷氧基、氰基、硝基、乙?；被?、乙酰氨基、在其2，3或3，4位帶有亞甲二氧基、三亞甲基或四亞甲基的苯基、或2-、3-或4-吡啶基、或2-或3-呋喃基、或2-或3-噻吩基；C*的構(gòu)型在R1是烷基時(shí)為(S)或(RS)，在R1是烷氧甲基時(shí)為(R)、(S)或(RS)；如果R1是烷基，R2是芐基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基或苯基，則X是D-α-氨基酸殘基或DL-α-氨基酸殘基，選自D-正亮氨酸、D-亮氨酸、D-異亮氨酸、D-別異亮氨酸、D-蘇氨酸、D-O-甲基蘇氨酸、D-別蘇氨酸、D-O-甲基別蘇氨酸、D-或DL-呋喃基甘氨酸、或含3-6碳原子的環(huán)或非環(huán)α，α-二烷基氨基酸殘基；如果1)R1是烷基，R2是2、3或4位上帶有取代的苯基，所述取代基選自F、Cl、Br、I、羥基、含1-6個(gè)碳原子的烷氧基、氰基、硝基、乙酰基、氨基、乙酰氨基、在其2，3或3，4位帶有亞甲二氧基、三亞甲基或四亞甲基的苯基、或2-、3-或4-吡啶基、或2-或3-呋喃基、或2-或3-噻吩基，或2)R1是烷氧甲基時(shí)，則X是D-α-氨基酸殘基或DL-α-氨基酸殘基，選自D-丙氨酸、D-α-氨基丁酸、D-正纈氨酸、D-纈氨酸、D-正亮氨酸、D-亮氨酸、D-異亮氨酸、D-別異亮氨酸、D-t-亮氨酸、D-絲氨酸、D-O-甲基絲氨酸、D-蘇氨酸、D-O-甲基蘇氨酸、D-別蘇氨酸、D-O-甲基別蘇氨酸、D-苯基甘氨酸、D-或DL-呋喃基甘氨酸、或含3-6個(gè)碳原子的環(huán)或非環(huán)α，α-二烷基氨基酸殘基；L-Asp和X是α鍵合的。
2.權(quán)利要求1的方法，其中氨基酸酰胺衍生物是在由以下方法得到的有機(jī)層中使式(3)的氨基酸衍生物與氯甲酸烷基酯混合，使該化合物與式(4)的胺衍生物混合，與酸性水溶液接觸得到含有氨基酸酰胺衍生物的水溶液，并用有機(jī)溶劑在堿性條件下萃取，式(3) 其中R1是含1-4個(gè)碳原子的烷基或烷氧基，或含6-10個(gè)碳原子的芳基；R2是含1-4個(gè)碳原子的烷基或含6-10個(gè)碳原子的芳基；X是D-α-氨基酸殘基或DL-α-氨基酸殘基，選自D-丙氨酸、D-α-氨基丁酸、D-正纈氨酸、D-纈氨酸、D-正亮氨酸、D-亮氨酸、D-異亮氨酸、D-別異亮氨酸、D-t-亮氨酸、D-絲氨酸、D-O-甲基絲氨酸、D-蘇氨酸、D-O-甲基蘇氨酸、D-別蘇氨酸、D-O-甲基別蘇氨酸或D-苯基甘氨酸、D-或DL-呋喃基甘氨酸、或含3-6個(gè)碳原子的環(huán)或非環(huán)α，α-二烷基氨基酸殘基；A代表質(zhì)子化的叔胺、二環(huán)己胺或堿金屬；式(4) 其中R1是含有1-6個(gè)碳原子的烷基或含有2-7個(gè)碳原子的烷氧甲基；R2是芐基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基、苯基、或其2、3或4位上帶有取代基的苯基，所述取代基選自F、Cl、Br、I、羥基、含1-6個(gè)碳原子的烷氧基、氰基、硝基、乙?；?、氨基、乙酰氨基、或在其2，3或3，4位帶有亞甲二氧基、三亞甲基、四亞甲基的苯基、或2-、3-或4-吡啶基、或2-或3-呋喃基、或2-或3-噻吩基；C*的構(gòu)型在R1是烷基時(shí)為(S)或(RS)，在R1是烷氧甲基時(shí)為(R)、(S)或(RS)。
全文摘要
本發(fā)明提供用于生產(chǎn)α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物的方法。用乙酰乙酸酯或β-二酮保護(hù)L-天冬氨酸β-烷基酯的氨基。用氯甲酸烷基酯將所得化合物轉(zhuǎn)化為混合酸酐，與氨基酸酰胺衍生物縮合后在酸性條件下水解，使氨基保護(hù)基脫保護(hù)并將酯部分轉(zhuǎn)化為羧酸，從而得到目的α-L-天冬氨酰二肽酰胺衍生物。
文檔編號(hào)C07K5/075GK1131160SQ9512063
公開(kāi)日1996年9月18日 申請(qǐng)日期1995年12月28日 優(yōu)先權(quán)日1994年12月28日
發(fā)明者土屋豐人, 竹本正, 中村良一郎, 網(wǎng)野裕右, 杉山直子 申請(qǐng)人:味之素株式會(huì)社