專利名稱：抗血栓形成劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可作為抗凝血劑用于哺乳動物體內(nèi)的凝血酶抑制劑。具體地說，它涉及具有高抗血栓形成活性、抗凝血劑活性和經(jīng)口生物藥效的肽衍生物。
血液凝固過程，即血栓形成，是由一個導(dǎo)致凝血酶生成的復(fù)雜蛋白質(zhì)分解系列反應(yīng)觸發(fā)的。凝血酶以蛋白質(zhì)分解方式脫除可溶于血漿中的纖維蛋白原的Aα-鏈和Bβ-鏈上的活化肽，引發(fā)不可溶血纖維蛋白形成。
目前，抗血凝是通過肝素和香豆素給藥實(shí)現(xiàn)的。
血凝和血栓形成的非經(jīng)腸藥物學(xué)控制是以通過使用肝素抑制凝血酶為基礎(chǔ)的。肝素通過加速內(nèi)生抗凝血酶III(凝血酶的主要生理抑制劑)的抑制效應(yīng)而間接作用于凝血酶。由于抗凝血酶III水平在血漿中是變化的，而且由于結(jié)合到表面上的凝血酶看來對這種間接機(jī)制有抗性，因而肝素可能是一種無效的治療。由于血凝試驗(yàn)據(jù)信與藥效有關(guān)，而且與安全性有關(guān)，因而血凝試驗(yàn)(尤其活化部分促凝血酶原激酶時間(APTT)試驗(yàn))時必須監(jiān)測肝素水平。香豆素通過阻止凝血酶原及同類其它蛋白的合成中的轉(zhuǎn)譯后羧基化而妨礙凝血酶產(chǎn)生。由于其作用機(jī)制，香豆素的效果只能在給藥后6～24小時慢慢表現(xiàn)出來。此外，它們不是選擇性抗凝血劑。血凝試驗(yàn)(尤其凝血酶原時間(PT)試驗(yàn))時，香豆素也需要監(jiān)測。
最近，對于能以類似于天然基質(zhì)的方式被蛋白質(zhì)水解酶認(rèn)識的小合成肽的興趣已經(jīng)增長。D-Phe-Pro-Arg-H、Boc-D-Phe-Pro-Arg-H和D-MePhe-Pro-Arg-H等三肽醛[Bajusz et al.，J.Med.Chem.，33，1729-1735(1990)]顯示出對凝血酶的強(qiáng)烈直接抑制。證實(shí)D-MePhe-Pro-Arg-H硫酸鹽是一種人體抗凝血劑的早期臨床研究已有報告〔見Sinoons et al.，Circulation，90，I-231，Abstr.1241(1994)]。很多研究者在開發(fā)藥劑的努力中已經(jīng)合成了類似物，例如Shuman et al.，J.Med.Chem.，36，314-319(1993)。美國專利No.4,346,078公開了一系列含有鯡精胺(1-氨基-4-胍基丁烷)基團(tuán)的抗凝血肽。鯡精胺衍生物及有關(guān)化合物也公開于國際公報號WO 93/11152的PCT申請中，以及1994年6月15日出版、公報號601459的歐洲專利申請中。此類化合物與前一系列的區(qū)別在于鯡精胺化合物缺少一個在含有Arg基團(tuán)的類似化合物中發(fā)現(xiàn)的羰基殘基。
盡管肝素和香豆素是有效的抗凝血劑，而且迄今為止尚無藥物源于已知的三肽醛，以及盡管此類化合物依然有前景，但存在著對如下抗凝血劑的需要能選擇性作用于凝血酶，與抗凝血酶III無關(guān)，給藥，較好經(jīng)口給藥后迅速產(chǎn)生抑制作用，而且不干擾保持止血所需要的血塊溶解。
本發(fā)明的目的在于發(fā)現(xiàn)如下面定義的本發(fā)明的化合物是有效的凝血酶抑制劑，這種抑制劑經(jīng)口服投藥后可能具有高生物利用率。此外，本發(fā)明的某些化合物還可能顯示出對因子Xa的抑制作用，它與血凝固分級有關(guān)。
因此，本發(fā)明的主要目的是提供新的肽衍生物，這種肽衍生物是有效的凝血酶抑制劑，可用作抗凝血劑。
對于精通本技術(shù)的行家來說，在讀過下面的說明書和權(quán)利要求書之后，其它目的、特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn)將是一目了然的。
本發(fā)明提供式I所示的一類能抑制凝血酶的化合物或其藥物上可接受的鹽；或所述化合物的藥物上可接受的溶劑化物或其鹽X-Y-NH-(CH2)r-GI其中X是脯氨酰基、高脯氨?；m-(CH2)g-NH-CH2C(O)-、 其中Rd是羧基或甲磺酰；Re是NHRc、NHCORc或NHCOORc；其中Rc是C1-C10烷基、C3-C8環(huán)烷基或含有4-10個碳原子的(C3-C8)環(huán)烷基(C1-C6)烷基基團(tuán)；T是C3-C8環(huán)烷基、C1-C8烷基、 a是0、1或2；以及O是-OH、C1-C4烷氧基，或-NH-A；A是氫、C1-C4烷基、R”SO2-、R”O(jiān)C(O)-、R”C(O)-、RnC(O)-或-(CH2)g-Rm；g是1、2或3；B是氫或C1-C4烷基；R’是氫或C1-C4烷基；R”是C1-C4烷基，C1-C4全氟烷基、-(CH2)d-Rm，或未取代的或取代的芳基，這里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代的或取代的芳族雜環(huán)，該雜環(huán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子，或是一個9元或10元的未取代的或取代的稠合雙環(huán)芳族雜環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子；Rm是COORb、-SO2(C1-C4烷基)、SO3H、-P(O)(ORb)2或四唑-5-基；Rn是COORb或四唑-5-基；各個Rb獨(dú)立地是氫或C1-C4烷基；d是1、2或3；m是0、1或2；n是0、1或2；和Z是氫、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素或RaSO2NH-、其中Ra是C1-C4烷基；
Y是 其中Rg是C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基，或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’；Rp是氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’；其中p是0、1、2、3或4；L是一個鍵，-O-、-S-或-NH-；q是0、1、2或3；T’是氫、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、-COOH、-CONH2，或Ar，其中Ar是未取代的或取代的芳基，這里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代的或取代的芳族雜環(huán)，該雜環(huán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子，或是一個9元或10元的未取代的或取代的稠合雙環(huán)芳族雜環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子；Ry是-CH2-、-O-、-S-，或-NH-；和Rz是一個鍵，或當(dāng)與Ry及3個鄰接的碳原子合在一起時形成一個含有5-8個原子的飽和碳環(huán)，其中一個原子可以是-O-、-S-，或-NH-；r是1、2或3；和G是-(CH2)s-R，其中s是0-5，-CH＝CH-(CH2)t-R，其中t是0-3，或者G是 其中D和E各自獨(dú)立地是N或CH；k是0或1；b是0或1；M是S、O、或NH；各個W獨(dú)立地是N或CH；以及R是-NH2、 或者G是 而且其中下面的芳環(huán)或雜芳環(huán)中的一個至所有其余未取代的碳原子可以帶有一個氟取代基
但其條件是(1)當(dāng)G是-(CH2)s-NH-C(NH)NH2、y是未取代的脯氨?；?Rp是氫)、及T是 時，A不是氫或叔丁氧羰基；(2)當(dāng)r＝1及s＝0時，R不是氨基或胍基；(3)當(dāng)G是-(CH2)s-R，其中R是 Y是 未取代的脯氨?；?Rp是氫)或4-羥基脯氨?；?Rp是OH)、R’是氫，T是環(huán)己基以及Q是-NH-A時，A不是氫、C1-C4烷基、甲磺酰或-(CH2)g-Rm；(4)當(dāng)G是-(CH2)s-R，其中R是 y是未取代的脯氨?；?Rp是氫)或4-甲基-硫代脯氨?；?Rp是-SCH3)，及Q是-NH-A時，R”SO2不是芳基磺酰；(5)當(dāng)G是 T是C1-C8烷基、 及Q是-NH-A時，A不是R”SO2-。
上述式I化合物中一組具體的化合物由下面定義的那些式I化合物組成，或其藥物上可接受的鹽；或所述化合物的藥物上可接受的溶劑化物或其鹽，其中X是脯氨酰基、高脯氨?；?、 T是C3-C8環(huán)烷基、C1-C8烷基、 a是0或1；Q是OH、C1-C4烷氧基、或-NH-A；A是氫或C1-C4烷基、R”SO2-、R”O(jiān)C(O)-、R”C(O)-、或-(CH2)g-COOH；g是1、2或3；B是氫或C1-C4烷基；R’是氫或C1-C4烷基；R”是C1-C4烷基、C1-C4全氟烷基、-(CH2)d-COOH，或未取代的或取代的芳基，這里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代的或取代的芳族雜環(huán)，該雜環(huán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子，或是一個9元或10元的未取代的或取代的稠合雙環(huán)芳族雜環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子；d是1、2或3；m是0、1或2；
n是0、1或2；和Z是氫、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素，或RaSO2NH-，其中Ra是C1-C4烷基；Y是 其中Rg是C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基，或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’；Rp是氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’；其中p是0、1、2、3或4；L是一個鍵，-O-、-S-或-NH-；q是0、1、2或3；T＇是氫、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、-COOH、-CONH2，或Ar，其中Ar是未取代的或取代的芳基，這里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代的或取代的芳族雜環(huán)，該雜環(huán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子，或是一個9元或10元的未取代的或取代的稠合雙環(huán)芳族雜環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子；Ry是-CH2-、-O-、-S-，或-NH-；和Rz是一個鍵，或當(dāng)與Ry及3個鄰接的碳原子合在一起時形成一個含有5-8個原子的飽和碳環(huán)，其中一個原子可以是-O-、-S-，或-NH-；r是1或2；及G是-(CH2)s-R，其中s是0-5，-CH＝CH-(CH2)t-R，其中t是0-3， 式中D和E各自獨(dú)立地是N或CH；k是0或1；b是0或1；M是S、O、或NH；各個W獨(dú)立地是N或CH；以及R是-NH2、 但其條件是(1)當(dāng)G是-(CH2)s-NH-C(NH)NH2、y是未取代的脯氨酰基(Rp是氫)、及T是 時，A不是氫或叔丁氧羰基；(2)當(dāng)r＝1及s＝0時，R不是氨基或胍基；(3)當(dāng)G是-(CH2)s-R，其中R是 Y是 未取代的脯氨酰基(Rp是氫)或4-羥基脯氨?；?Rp是OH)、R’是氫，T是環(huán)己基以及Q是-NH-A時，A不是氫、C1-C4烷基、甲磺?；?(CH2)g-COOH；(4)當(dāng)G是-(CH2)s-R，其中R是 y是未取代的脯氨?；?Rp是氫)或4-甲基-硫代脯氨?；?Rp是-SCH3)，及Q是-NH-A時，R”SO2不是芳基磺酰；(5)當(dāng)G是 T是C1-C8烷基、 及Q是-NH-A時，A不是R”SO2-。
本發(fā)明除了提供式I的化合物外，還提供含有式I化合物及藥物上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物制劑。
本發(fā)明也提供一種抑制哺乳動物中血栓形成的方法，包括對需要治療的哺乳動物施用抗血栓形成劑量的式I化合物。
本發(fā)明還提供一種抑制凝血酶的方法，包括對需要治療的哺乳動物施用凝血酶抑制劑量的式I化合物。
本發(fā)明涉及新型凝血酶抑制劑、含有該化合物作為活性組分的醫(yī)藥組合物以及該化合物作為抗凝血劑用于預(yù)防和治療血栓栓塞疾病，如靜脈血栓形成、肺栓塞、動脈血栓形成、尤其心肌缺血、心肌栓塞形成和腦血栓形成，普遍凝固性過高狀態(tài)和局部凝固性過高狀態(tài)，如血管成形術(shù)和冠狀動脈分流術(shù)之后出現(xiàn)的此類狀態(tài)，以及與發(fā)炎過程有關(guān)的全身化組織傷害。
“烷基”這一術(shù)語本身或作為另一個取代基的組成部分，系指有所述碳原子數(shù)的直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基和仲丁基?！叭榛边@一術(shù)語本身或作為另一個取代基的組成部分，系指其每個氫原子都被氟原子所取代、有所述碳原子數(shù)的直鏈或支鏈烷基，如三氟甲基、全氟乙基、全氟正丙基、全氟并丙基、全氟正丁基、全氟叔丁基、全氟異丁基和全氟仲丁基。
“C3-C8環(huán)烷基”這一術(shù)語系指有3～8個碳原子的飽和脂族環(huán)，如環(huán)丙基、甲基環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、4-甲基環(huán)己基、環(huán)辛基等。
“烷氧基”這一術(shù)語系指一個氧原子鍵合到母體部分、有所述碳原子數(shù)的直鏈或支鏈烷基?！胞u素”這一術(shù)語系指氯、氟、溴或碘?！耙阴！边@一術(shù)語系指CH3-C(O)-?！笆宥⊙跆减！边@一術(shù)語系指(CH3)3C-O-C(O)-，縮略為“Boc”?！捌S氧碳?！边@一術(shù)語系指C6H5CH2-O-C(O)-，縮略為“Cbz”。
“五元或六元雜環(huán)”這一術(shù)語系指含有一個或兩個氮原子、一個硫原子、一個氧原子、一個氮原子和一個硫原子、或一個氮原子和一個氧原子、能提供穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的任何一個五元或六元環(huán)。這種五元環(huán)有一個或兩個雙鍵，而這種六元環(huán)有兩個或三個雙鍵。這樣的雜環(huán)系統(tǒng)包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、、噻唑基、異噻唑基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噁嗪基和噻嗪基。
“九元或十元雜環(huán)”這一術(shù)語系指任何一種雙環(huán)基團(tuán)，其中上述任何一種五元或六元環(huán)稠合到一個苯環(huán)或另一個以上定義的六元雜環(huán)上，提供一種穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。這些雜環(huán)系統(tǒng)包括吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并吡唑基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基和苯并噻唑基。
要知道的是，上述許多雜環(huán)可能以互變異構(gòu)形式存在。所有這樣的形式都納入本發(fā)明的范圍。
為定義Ar或R”而列出的芳族基團(tuán)或雜芳族基團(tuán)全部獨(dú)立地是無取代的或者有一個或兩個能提供穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的取代基取代的，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、羥基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、氨基(-NH2)、-(C1-C4烷基)氨基、-(CH2)iCOOH、巰基、-S(O)h(C1-C4烷基)、-NHS(O)h(C1-C4烷基)、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-S(O)hNH2、-S(O)hNH(C1-C4烷基)或-S(O)hN(C1-C4烷基)2，h是0、1或2，且j是0、1、2、3或4。取代基R”(C)O-的一個特別好的此類數(shù)值是1-甲基吲哚-2-?；?。
在通式I的表述中，基團(tuán)X的羰基官能度連接到Y(jié)基團(tuán)的胺官能度上。然后，Y的羰基官能度連接到通式I中所畫的氨基上。
基團(tuán) ，式中Z和A均為氫，在此時時稱為苯基甘氨酰并縮略為Phg。其A為諸如甲基的化合物稱為Nα-甲基苯基甘氨?；鶊F(tuán)，并縮略為MePhg。其Z為氫以外的其它取代基的有取代化合物按取代基的類型和位置稱謂，如3’-氯苯基甘氨?；騊hg(3-Cl)。
基團(tuán) ，式中Z和A均為氫，在此時時稱為苯基丙氨酰并縮略為Phe。其A為諸如甲基的化合物稱為Nα-甲基苯基丙氨酰基團(tuán)，并縮略為MePhe。其Z為氫以外的其它取代基的有取代化合物按取代基的類型和位置稱謂，如3＇-氯苯基丙氨?；騊he(3-Cl)。
基團(tuán) 和 ，當(dāng)R’是氫時，在此時時分別稱為1-和3-四氫異喹啉碳酰，并分別縮略為1-Tiq和3-Tiq。
基團(tuán) 和 ，當(dāng)R’是氫時，在此時時分別稱為1-和3-全氫異喹啉碳酰，并分別縮略為1-Piq和3-Piq。如波紋線所指出的，存在著這些取代基的各種環(huán)稠合異構(gòu)體-本發(fā)明期待任何一種單個異構(gòu)體及其組合。
基團(tuán) 和 分別稱為脯氨酰和氮雜環(huán)丁烷-2-碳酰，并分別縮略為Pro和Azt。
基團(tuán) 代表4，5、5，5、6，5、7，5或8，5類型的飽和雙環(huán)系統(tǒng)。3a的立體化學(xué)對羰基是順式的；另一個橋頭鍵可以是順式的也可以是反式的，但對于4，5和5，5系統(tǒng)來說在這個橋頭必須是順式的。Ry和Rz的定義規(guī)定，這個包括所示三個碳原子在內(nèi)的可變環(huán)是一個有4～8個原子的飽和碳環(huán)系統(tǒng)。環(huán)原子可以全部是碳，或這些環(huán)原子之一可以是一個選自-O-、-S-和-NH-的雜原子。這個定義包括如 所代表的、從八氫吲哚-2-羧酸(縮略為“Ohi”)衍生的較好部分。這個部分的各種順式和反式形式都是本發(fā)明所期待的。
基團(tuán)Y中的星號表示-個(L)手性中心。基團(tuán)X中的星號表示一個(D)或(DL)手性中心；基團(tuán)X中的井號表示一個(L)手性中心。
此外，因烷基取代基的枝化而異，也可能存在非對映異構(gòu)體。本發(fā)明的化合物包括兩種或多種非對映體的混合物以及每種單個異構(gòu)體。
本發(fā)明的較好化合物包括這樣的通式I化合物，其中X是 高脯氨酰、1-或3-Tiq、或1-或3-Piq，且Y是脯氨酰，及其藥物上可接受的鹽和溶劑化物。具體地說，其Q為NHA且A為氫或氨磺酰(如A＝R”SO2-)、R’為氫、Z為氫和B為氫的化合物全都是較好的。此外，其R為胍基或尤其脒基的化合物也是較好的。
一種尤其好的取代基組合是其G為有R取代的苯基(即D＝E＝CH，K＝0)；特別好的是其G為一個4-脒基苯基基團(tuán)。
在其中 的芳環(huán)或雜芳環(huán)上一個至所有其它無取代的碳原子帶有一個氟取代基的化合物中，較好的一組是當(dāng)D或E為N時其D或E的α-或γ-位上沒有氟取代基的那些化合物。
本發(fā)明的另一組較好化合物包括其X為 的如上所定義通式I化合物，其中T是環(huán)己基，a是1，R’是氫，且Q是-NH-A。一個特定的亞組是其A為氫的亞組。第二個特定的亞組是其A為R”SO2-、尤其R”為乙基的亞組。第三個特定的亞組是其A為-(CH2)g-COOH、較好g為1的亞組。
對于其X、r和G有如上定義的通式I化合物，Y的特定值包括(L)-脯氨酰(Pro)、(S)-順式-八氫-1H-吲哚-2-碳酰(ohi)和N-(2-苯基乙基)甘氨?！睳(PhCH2CH2)G1y〕。
對于其R為-NH2的通式I化合物，較好的是X和Y的值選自以上定義的值，且r和G的值選自a)r為1且G為 式中苯胺基環(huán)可以帶有一個或兩個氟取代基；b)r為1且G為 和
c)r為1或2且G為 一組特別好的通式I化合物是這樣的化合物，其中Y為(L)-脯氨酰、r為1且G值為 ，式中D和E均為CH、k為0且R為脒基，而且可以通式Ia代表 式中芐脒環(huán)是無取代的、也可以帶有一個或兩個氟取代基、較好在脒基的間位，而且X有以上定義的任何值。
通式Ia化合物的一個更具體的值是其芐脒環(huán)無取代基這樣的值。
另一組特別好的通式I化合物是這樣的化合物，其中Y為(L)-脯氨酰、r為1且G值為 ，式中M為S、W均為CH且R為脒基，而且可以用通式Ib代表 式中X有以上定義的任何值。
還有一組較好的通式I化合物是這樣的化合物，其中Y為(L)-脯氨酰、r為1且G值為 ，式中D為N或CH、k為0且R為脒基，而且可以用通式Ic代表 式中X有以上定義的任何值，且D為N或CH。通式Ia、Ib或Ic化合物中X的一個較好的值是 式中R’為氫、a為1、T為環(huán)己基或苯基且Q為-NH-A。更具體地說，A是氫、乙磺?；螋燃谆的一個特別好的值是N-羧甲基-D-環(huán)己基丙氨酰。X的另一個較好的值是N-羧甲基-D-苯丙氨酰。
本發(fā)明通式I的特定化合物在實(shí)例中加以描述?？梢宰鳛樗幬锷峡山邮艿柠}或溶劑化物使用的一個較好的化學(xué)種，可以選自作為實(shí)例15、18、23、44、45、46、48、49、51、52、56、65、66、68、69、70、71、72、80、86、87、88和92公開的那些化學(xué)種。一個更好的化學(xué)種可以選自實(shí)例45、46、48、51、65、70、71和72所公開的化合物。以其意外優(yōu)異的性質(zhì)為依據(jù)，一種最好的化學(xué)種是實(shí)例48。另一種高度優(yōu)選的化學(xué)種是實(shí)例65。
如以上提到的，本發(fā)明包括上述通式I所定義的化合物的藥物上可接受的鹽。本發(fā)明的一種特定化合物可以具有一個或多個有足夠堿性的官能團(tuán)，因而能與許多無機(jī)酸和有機(jī)酸中的任何一種反應(yīng)，生成一種藥物上可接受的鹽。常用來生成酸加成鹽的酸是無機(jī)酸，如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸等，和有機(jī)酸，如對甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、對溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、檸檬酸、苯甲酸、乙酸等。因此，這樣一些藥物上可接受的鹽的實(shí)例是硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸-氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、r-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、扁桃酸鹽等。較好的藥物上可接受的酸加成鹽是與鹽酸、氫溴酸、硫酸等無機(jī)酸生成的鹽。
本發(fā)明的化合物已知能與適當(dāng)溶劑生成水合物和溶劑化物。用于制備溶劑化物形態(tài)的較好溶劑包括水、醇類、四氫呋喃、DMF和DMSO。較好的醇是甲醇和乙醇。其它適用溶劑可以根據(jù)溶劑分子的大小來選擇。小溶劑分子較好，有利于對應(yīng)的溶劑化物生成。溶劑化物或水合物典型地是在重結(jié)晶過程中或在鹽生成過程中形成的。關(guān)于溶劑化物的一篇有用的參考文獻(xiàn)是Sykes，Peter，A Guidebook to Mechanism inOrganic Chemistry，6th Ed.(1986，John Wiley & Sons，New York)。本文中使用的“溶劑化物”這一術(shù)語包括水合物形態(tài)，如一水合物和二水合物。
通式I化合物是用已知的肽偶合方法制備的。按照一種這樣的方法，酸P-X’-COOH(其中-X’-C(O)-是-X-，其含義與對通式I的定義相同，且P是一個氨基保護(hù)基)必要時與一種有羧基保護(hù)的Y化合物偶合，生成二肽(a)。然后將Y部分的羧基保護(hù)酯基脫除(解封或脫酯化)，并使該二肽的游離酸形式(b)與受保護(hù)的試劑(d)偶合。上述反應(yīng)序列用如下方案1說明 式中G’與G相同，只是R為-CN、-NHP、 ；每個P代表-個氨基保護(hù)基團(tuán)，必要時P’為H或P，alk是低級烷基或某種類似的羧酸保護(hù)基團(tuán)，且-Y’-與Y相同，也有可見的氨基和羧基官能度，即-Y-與-N-Y’-C(O)-目同。
若存在的話，G’中的氰基被精心制作成R的一種值；然后，用本門技術(shù)行家已知的步驟例如用金屬催化劑加氫使(c)中的保護(hù)基團(tuán)脫除，提供通式I化合物。
P-X’-COOH化合物與NH-Y’-COO-alk的偶合是首先保護(hù)該氨基酸的氨基(若有的話)來進(jìn)行的。采用的是常用于氨基基團(tuán)暫時保護(hù)或封閉的普通氨基保護(hù)基團(tuán)。
氨基保護(hù)基團(tuán)系指該氨基上的取代基，它們常用來封閉或保護(hù)氨基官能度同時使該化合物上的其它官能團(tuán)能發(fā)生反應(yīng)。此類氨基保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例包括甲?；?、三苯甲基、鄰苯二甲酰亞胺基、三氯乙酰基、氯乙酰基、溴乙?；偷庖阴；?，尿烷型封閉基團(tuán)如芐氧碳酰、叔丁氧碳酰、4-苯基芐氧碳酰、2-甲基芐氧碳酰、4-甲氧基芐氧碳酰、4-氟芐氧碳酰、4-氯芐氧碳酰、3-氯芐氧碳酰、2-氯芐氧碳酰、2，4-二氯芐氧碳酰、4-溴芐氧碳酰、3-溴芐氧碳酰、4-硝基芐氧碳酰、4-氰基芐氧碳酰、2-(4-聯(lián)苯基)異丙氧碳酰、1，1-二苯基乙-1-基氧碳酰、1，1-二苯基丙-1-基氧碳酰、2-苯基丙-2-基氧碳酰、2-(對甲苯基)丙-2-基氧碳酰、環(huán)戊基氧碳酰、1-甲基環(huán)戊基氧碳酰、環(huán)己基氧碳酰、1-甲基環(huán)己基氧碳酰、2-甲基環(huán)己基氧碳酰、2-(4-甲苯磺酰)乙氧碳酰、2-(甲磺酰)乙氧碳酰、2-(三苯膦基)乙氧碳酰、9-芴基甲氧碳酰(“FMOC”)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧碳酰、烯丙氧碳酰、1-(三甲基甲硅烷基甲基)丙-1-烯氧碳酰、5-苯并異噁唑基甲氧基碳酰、4-乙酰氧基芐氧碳酰、2，2，2-三氯乙氧碳酰、2-乙炔基-2-丙氧碳酰、環(huán)丙基甲氧碳酰、4-(癸氧基)芐氧碳酰、異冰片基氧碳酰、1-哌啶基氧碳酰等；苯甲酰甲磺酰基、2-(硝基)苯亞磺?；?、二苯氧膦基及諸如此類的氨基保護(hù)基團(tuán)。所采用的氨基保護(hù)基團(tuán)化學(xué)種并不十分重要，只要所衍生的氨基基團(tuán)適合于隨后在該分子其它位置上發(fā)生反應(yīng)的條件而且能在適當(dāng)時候脫除而不破壞該分子其余部分即可。較好的氨基保護(hù)基團(tuán)是芐氧碳酰、烯丙氧碳酰、叔丁氧碳酰和三苯甲基等基團(tuán)。以上術(shù)語也涵蓋頭孢菌素、青霉素和肽技術(shù)上使用的類似氨基保護(hù)基團(tuán)。以上術(shù)語所指的基團(tuán)的進(jìn)一步實(shí)例可參閱J.W.Barton，“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基”，J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，N.Y.，1973，Chapter 2，和T.W.Greene，“有機(jī)合成中的保護(hù)基”，John Wiley andSons，New York，N.Y.，1981，Chapter 7。“受保護(hù)氨基”這一相關(guān)術(shù)語定義有以上所討論氨基保護(hù)基取代的氨基。
在進(jìn)行偶合反應(yīng)時，對NH-Y’-COOH采用的酯保護(hù)基是一種可用能使氨基保護(hù)基團(tuán)保持原樣不變的條件脫除的保護(hù)基。因此，?；酨-X’-COOH的氨基保護(hù)基在隨后與胺(d)偶合生成(c)期間仍能充分保護(hù)該氨基。
本說明書中使用的羧基保護(hù)酯基系指在對該化合物的其它官能團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)時常用來封閉或保護(hù)羧酸基團(tuán)的羧酸基團(tuán)酯衍生物之一。這類羧酸保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例包括C1-C4烷基、芐基、4-硝基芐基、4-甲氧基芐基、3，4-二甲氧基芐基、2，4-二甲氧基芐基、2，4，6-三甲氧基芐基、2，4，6-三甲基芐基、五甲基芐基、3，4-亞甲基二氧芐基、二苯甲基、4，4’-二甲氧基二苯甲基、2，2’，4，4’-四甲氧基二苯甲基、叔丁基、叔戊基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4，4’-二甲氧基三苯甲基、4，4’，4”-三甲氧基三苯甲基、2-苯基丙-2-基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苯甲酰甲基、2，2，2-三氯乙基、β-(三甲基甲硅烷基)乙基、β-(二正丁基甲基甲基甲硅烷基)乙基、對甲苯磺酰乙基、4-硝基芐基磺酰乙基、烯丙基、肉桂基、1-(三甲基甲硅烷基甲基)丙-1-烯-3-基和諸如此類的基團(tuán)。所采用的羧基保護(hù)基團(tuán)的化學(xué)種并不十分重要，只要所衍生的羧酸對于該分子其它部位上后續(xù)反應(yīng)的條件是穩(wěn)定的而且可以在適當(dāng)時候脫除而不破壞該分子的其余部分即可。具體地說，重要的是不要讓該羧基保護(hù)的分子遭遇強(qiáng)親核堿或采用高度活化的金屬催化劑例如Raney鎳等還原性條件。(如此嚴(yán)厲的脫除條件在脫除以下討論的氨基保護(hù)基團(tuán)時也是要避免的。)這些基團(tuán)的進(jìn)一步實(shí)例詳見E.Haslam，“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基”，J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，N.Y.，1973，Chapter 5，和T.W.Greene，“有機(jī)合成中的保護(hù)基”，John Wiley and Sons，NewYork，N.Y.，1981，Chapter 5。
通式I化合物的制備也可以先合成HN-Y’-CONH(CH2)r-G’酰胺前體，然后與受保護(hù)的X-部分反應(yīng)。按照一種這樣的方法，制備(d)并如以下所示那樣使之與PN-Y’-COOH(g)偶合，給出酰胺(h)。
(g) (d) (h)式中P代表一個氨基保護(hù)基團(tuán)如芐氧碳酰(Cbz)基團(tuán)，叔丁氧碳酰(Boc)、對甲苯磺酰等。較好的是，所用的氨基保護(hù)基團(tuán)可通過加氫或者用一種溫和的酸(如三氟乙酸)或一種強(qiáng)酸(如HCl)處理來脫除。其它適用氨基保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例可參閱“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基”，第二版，T.W.Greene和Peter G.M.Wuts著，第7章，第309-405頁(1919)，John Wiley & Sohs，Inc.出版。Boc或其它適用保護(hù)基團(tuán)從Y殘基的氨基氮上脫除，然后用所希望的氨基酸?；鶊F(tuán)使之酰化，給出以下所示的二肽。
(c)氰基若存在于G’中則加以精心制作，并按以上所述脫除(C)上的保護(hù)基團(tuán)。
P-X’-COOH化合物的偶合是通過先保護(hù)氨基酸的氨基(如果有的話)來進(jìn)行的。采用的是常用于氨基暫時保護(hù)或封閉的普通氨基保護(hù)基團(tuán)。此類保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例見上述。
上述偶合反應(yīng)是在較低溫度下、較好在大約-20℃與大約15℃之間的溫度進(jìn)行。偶合反應(yīng)是在惰性有機(jī)溶劑如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、四氫呋喃、二氯甲烷、氯仿等常用溶劑或此類溶劑的混合物中進(jìn)行的。一般來說，當(dāng)在偶合反應(yīng)中使用該?；岬囊环N活潑酯時，要使用無水條件。
中間體(d)和(g)是通過下列方案中所總結(jié)的有機(jī)化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備的 式中-K-R是-(CH2)r-G。
按照以上序列，受保護(hù)的胍可以通過對S-甲基異硫脲進(jìn)行雙保護(hù)來制備。較好的封閉基團(tuán)是叔丁氧碳酰(Boc)基團(tuán)，它可以通過在草酸二叔丁酯存在下讓S-甲基異硫脲發(fā)生反應(yīng)來引進(jìn)。通常采用S-甲基異硫脲的一種酸鹽形式，可以通過使該鹽溶于水中并用堿水溶液處理而使之就地轉(zhuǎn)化成游離堿形式。然后，在一種水可混溶溶劑如叔丁醇中，把草酸二叔丁酯引進(jìn)該反應(yīng)，給出雙保護(hù)的S-甲基異硫脲。然后，在一種非活潑溶劑或溶劑組合中用適當(dāng)二胺H2N-K-NH2處理，生成所希望的雙保護(hù)的胍。典型地說，采用二甲基甲酰胺或水或其混合物等水可混溶溶劑是行之有效的。這樣的反應(yīng)一般在大約3～72小時內(nèi)完成。然后，可以如前面所述那樣使所得到的受保護(hù)的胍偶合，提供其R為 的通式I化合物的受保護(hù)中間體。
對于R＝-NH2的通式I化合物來說，中間體是一種單保護(hù)的二胺。在多數(shù)情況下，這種中間體只需讓一種無保護(hù)的二胺與一摩爾當(dāng)量的保護(hù)試劑反應(yīng)就能制備。最終胺(R＝-NH2)的其它引進(jìn)方法對于有機(jī)化學(xué)家是顯而易見的。例如，這種胺可以從某種其它前體官能度如一個硝基基團(tuán)或一個氰基基團(tuán)得到。在硝基基團(tuán)的情況下，轉(zhuǎn)化成氨基基團(tuán)通常是依靠那些有硝基直接連接到芳環(huán)、尤其苯基上的基質(zhì)來完成的。在這樣的情況下，利用技術(shù)上已知的許多方法中的任何一種，使硝基苯基還原成對應(yīng)的苯胺官能度。一種特別有效的方法是在一種非活潑溶劑如乙醇、水或其混合物中用亞硫酸氫鈉處理該硝基化合物。當(dāng)該硝基化合物在亞硫酸氫鈉存在下在一種水/乙醇混合物中加熱回流時，還原通常在苦干小時內(nèi)完成。氰基可類似地進(jìn)行還原，適當(dāng)時在一種溶劑如四氫呋喃中在一種還原劑如氫化鋁鋰、硼烷的存在下，或用金屬促進(jìn)的硼氫化鈉還原法進(jìn)行。
本發(fā)明的脒 也可以從一種腈前體制備。用于實(shí)現(xiàn)這種轉(zhuǎn)化的許多步驟是技術(shù)上已知的。具體地說，在吡啶和三乙胺的混合物中使用硫化氫、隨后用丙酮和甲基碘處理、最后在甲醇中用乙酸銨處理，是進(jìn)行這種轉(zhuǎn)化的一種較好和高效率的方法。此外，該腈與羥胺鹽酸鹽和一種堿如N，N-二異丙基乙胺一起在一種羥基溶劑如乙醇中加熱，隨后催化加氫(例如用炭載鈀氫解)，也可以用來進(jìn)行這種轉(zhuǎn)變。這種工藝提供了作為中間體的羥基脒 如果愿意可將其分離。
在本發(fā)明化合物的合成中用作最初起始原料的其它化合物是眾所周知的，而且在商業(yè)上不可得的情況下，也容易用技術(shù)上一般熟練人員常用的標(biāo)準(zhǔn)步驟合成。
用于制備本發(fā)明化合物的4-取代脯氨酸(Rp是C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’)的4-取代基相對于羰基部分全都具有順式構(gòu)型。用于將這種官能度引進(jìn)通式I化合物中的中間體是用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備的。
例如，其Rp基團(tuán)在與脯氨酸環(huán)的連接點(diǎn)上含有一個亞甲基基團(tuán)的4-取代脯氨酸衍生物可以用如下方式制備 式中R4＝R3CH2＝一個在與脯氨酸環(huán)的連接點(diǎn)上含有亞甲基基團(tuán)的Rp基團(tuán)。
4-羥基脯氨酸(順式和反式這兩種形態(tài)都是商業(yè)上可得的)首先用氨基保護(hù)基團(tuán)保護(hù)，Cbz基團(tuán)尤其可用于這一序列。然后將所得到的中間體酯化(甲酯或尤其乙酯是特別方便的)，然后氧化，給出對應(yīng)的酮。這種氧化是在Jones氧化或氯鉻酸吡啶鎓等許多氧化條件中任何一種條件下實(shí)現(xiàn)的，尤其可用于這種轉(zhuǎn)化的是在一種干的非活潑溶劑例如二氯甲烷中使用氯鉻酸吡啶鎓。當(dāng)令其進(jìn)行8～16小時反應(yīng)時，這個反應(yīng)一般在常溫進(jìn)行時就能完成。然后，讓這種易變的酮中間體與一種適用的Wittig試劑反應(yīng)，給出所希望的烯烴。典型地說，將有適當(dāng)Rp取代的鹵化三苯鏻添加到一種含有強(qiáng)堿(如叔丁醇鉀)的干惰性溶劑(如四氫呋喃)中。將這種酮引進(jìn)，在常溫下大約三小時后，可以分離出所希望的烯烴中間體。為了得到該烯烴的良好產(chǎn)率，較好是采用相對于該酮而言過量0.4～0.6摩爾的Wittig試劑。然后，用標(biāo)準(zhǔn)還原技術(shù)將該烯烴還原成所希望的Rp取代脯氨酸。催化加氫是在實(shí)驗(yàn)室中實(shí)現(xiàn)這種轉(zhuǎn)化的最簡便方法。在一種惰性溶劑如乙醇中在一種催化劑(如5％炭載鈀)存在下，該烯烴的加氫可在常壓進(jìn)行。在其氨基保護(hù)基為Cbz的中間體的情況下，加氫也使該保護(hù)基脫除，提供一種可用于偶合到P-X’-COOH上的化合物。如熟悉本門技術(shù)的人員將要知道的，這種工藝不能用于制備那些其Rp基團(tuán)通過一個雜原子或一個芳環(huán)連接到脯氨酸環(huán)上的化合物。因此，在以上方案中，R3是烷基、芳烷基(如芐基)、(環(huán)烷基)烷基等。
以下方案總結(jié)了一種用制備這些中間體的有關(guān)方法 以上反應(yīng)方案是上述Wittig反應(yīng)的一種替代，而且可用于制備那些無法為其制備Wittig試劑的化合物。例如，為了制備其Ra為烷基、苯基等的中間體，讓吡咯烷酮中間體與一種適當(dāng)Grignard試劑反應(yīng)。典型地說，采用稍微摩爾過量的Grignard試劑，通常在低溫(如-80～-60℃)在一種低凝固點(diǎn)惰性溶劑如四氫呋喃中進(jìn)行。在這些試劑添加后，可以讓反應(yīng)混合物回升到室溫，此后，反應(yīng)通常在若干小時內(nèi)完成。使所得到的中間體脫水，例如，用三氟乙酸處理。然后，用與以上對烯烴中間體還原所述相同的還原條件，使3，4-脫氫中間體還原成所希望的順式中間體。
其雜“L”基團(tuán)為氧并直接連接到脯氨酸環(huán)上(即P＝O)的中間體可以用Mitsunobu反應(yīng)(M1tsunobu，Synthesis，1(1981))制備
在這個反應(yīng)中，反式羥基吡咯烷羧酸酯在一種溶劑中，在Ar-O-H存在下，用三苯膦處理。將混合物冷卻至大約0℃，添加偶氮二羧酸二乙酯。回收至室溫后，對反應(yīng)混合物進(jìn)行后處理，提供所希望的順式中間體。雖然上述方案說明了其L＝-O-、p＝q＝0且T＝Ar的化合物的反應(yīng)，但這一序列也適用于制備其p＝0且L為-O-的其它化合物。
其L是硫且直接連接到環(huán)上的中間體，制備時可先將羥基轉(zhuǎn)化成甲苯磺酸鹽或其它類似離去基團(tuán)，然后用硫醇鹽陰離子置換(見，例如，Krapcho等，J.Med.Chem.，31，1148-1160(1988)；Smith等人，J.Med.Chem.，31，875-855(1988))。
其L是氮且直接連接到環(huán)上的中間體，制備時可先將羥基轉(zhuǎn)化成甲苯磺酸鹽或其它類似離去基團(tuán)，然后用疊氮化物置換。這種疊氮化物可以用已知方法還原，然后烷基化，從而提供所希望的官能度(見，例如，Smith等人，J.Med.Chem.，31，875-855(1988))。
含有順式-Ohi官能度的本發(fā)明化合物，其制備時先從對應(yīng)的酸制備(S)-二氫吲哚羧酸乙酯(見Vincent等人，Drug Design andDiscovery，Vol.9，pp 11-28 (1992))，然后在乙醇中用5％Pd/C加氫使這種中間體還原，給出八氫吲哚-2-羧酸酯，一般稱之為Ohi-酯，如以下所總結(jié)。 含有反式-Ohi官能度的本發(fā)明化合物，是用Vincent等人〔DrugDesign and Discovery，Vol.9，pp 11-28(1992)〕的方法制備的。這總結(jié)在以下所示方案中 含有雙環(huán)系統(tǒng)(有或無雜原子)的本發(fā)明化合物可以用Teetz等人〔Tetrahedron Letters，25，4479(1984)〕的方法制備。一般地是 式是P是一個保護(hù)基團(tuán)，Rx是烷基。
引進(jìn)用于制備本發(fā)明化合物的N-取代甘氨酸官能度(Y)所需的中間體是用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備的。
例如，一種鹵代乙酸酯如溴乙酸叔丁酯當(dāng)用適當(dāng)?shù)牟诽幚頃r可轉(zhuǎn)化成有所希望取代的化合物
讓這種溴乙酸叔丁酯與適當(dāng)?shù)陌贩磻?yīng)，可在純態(tài)下或較好在一種非活潑溶劑如一種醇中進(jìn)行。較好的是，用摩爾過量的胺迫使該反應(yīng)完成。較好的是，反應(yīng)混合物也含有一種非活潑的酸清除劑，例如至少一摩爾當(dāng)量的三乙胺。雖然反應(yīng)物合并時通常要冷卻(如0℃)，但通常讓反應(yīng)混合物回升到室溫，此后該反應(yīng)通常在24小時內(nèi)完成。盡管溴乙酸酯較好，但也可以采用其它鹵代乙酸酯如碘乙酸酯和氯乙酸酯進(jìn)行這種轉(zhuǎn)化。類似地，也可以采用其它酯基。叔丁酯之所以較好，是因?yàn)樵诤髞碛密钕忝押腿宜崽幚頃r可容易地使之脫除。
用于制備這些中間體的第二種方法可用以下方案概括式中R°-CH2-是一個在與甘氨酸部分的連接點(diǎn)的相鄰位置有一個無取代的亞甲基基團(tuán)的Rg-基團(tuán)。
在以上反應(yīng)方案中，適當(dāng)?shù)娜┰谝环N非活潑溶劑如甲醇或乙醇中與甘氨酸酯混合。如果使用該甘氨酸酯的鹽形式，則可以添加一摩爾當(dāng)量的堿如氫氧化鉀，使得能產(chǎn)生該氨酸酯的游離堿。醛與甘氨酸酯的反應(yīng)生成Schiff堿中間體，然后可以用一種還原劑如氰基硼氫化鈉處理使之就地還原。Schiff堿生成通常在不到1小時后發(fā)生；還原一般在10～15小時后完成。甲酯或乙酯是特別適用的，因?yàn)檫@些基團(tuán)在二噁烷水溶液中用氫氧化鋰處理時可以脫除(解封閉)。采用一種適用的酮代替醛R°-CHO，可制備其與甘氨酸胺連接的亞甲基基團(tuán)有取代的中間體。
此外，且尤其對于那些其Rg為Ar(即沒有介在烷基)的化合物，較好的是用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(例如讓活化形式的P-X’-COOH與ArNH2反應(yīng))制備中間體P-X’-CONHAr，然后按以上所述使這種中間體與鹵代乙酸烷酯反應(yīng)，給出P-X’-CONHAr-CH2-COO-alk，然后可以用常用方法使之進(jìn)一步轉(zhuǎn)化。
本發(fā)明的最終化合物或其中間體多數(shù)可以用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)相互轉(zhuǎn)化。例如，可以使有硝基取代的芳基化合物還原(例如，在亞硫酸氫鈉存在下，在一種非活潑溶劑如乙醇、水或其混合物中進(jìn)行)。當(dāng)該硝基化合物在亞硫酸氫鈉存在下在水/乙醇混合物中加熱回流時，還原通常在若干小時內(nèi)完成。所生成的胺可能存在于最終產(chǎn)物中；如果這種胺存在于一種中間體中，則可能理想的是將其轉(zhuǎn)化成其最終所希望的形式(例如，酰化，以提供?；陌?或加以保護(hù)，以避免在隨后的化學(xué)反應(yīng)期間發(fā)生副反應(yīng)。如果游離胺是所希望的化合物，則Cbz保護(hù)基團(tuán)在這一方面是特別有用的。這種類型的其它轉(zhuǎn)變和相互轉(zhuǎn)化對于熟練的有機(jī)化學(xué)家來說是顯而易見的。
如同本門技術(shù)的熟練人員將要知道的那樣，上述轉(zhuǎn)變可以依靠以上所說明的起始原料進(jìn)行，或者在大多數(shù)情況下也可以依靠含有各自相同官能團(tuán)的二肽或三肽中間體來實(shí)現(xiàn)。在后者的情況下，可以不管是否需要保護(hù)各種基團(tuán)；因此，所涉及的化學(xué)反應(yīng)順序與類型將制約保護(hù)基團(tuán)的需要與類型以及合成的進(jìn)行順序。如同熟練的技師們也將知道的，人們可以選用其它保護(hù)基團(tuán)，只要它們能在隨后的化學(xué)反應(yīng)期間達(dá)到保護(hù)官能團(tuán)的目的但也能在適當(dāng)條件下以適當(dāng)順序脫除從而能進(jìn)行隨后的轉(zhuǎn)化即可。例如，在方案1中，上述G’包括其R為-CN的取代基；這種腈基可以轉(zhuǎn)化成脒或還原成胺，后者可以任選地進(jìn)一步制作成本發(fā)明的胍。
本發(fā)明的化合物最好是以酸加成鹽的形式分離。通式I化合物與諸如以上提到的那些酸生成的鹽可作為藥物上可接受的鹽用于抗血栓形成劑給藥和用于制備這些藥劑的配方。其它酸加成鹽也可以制備，和用于此類肽的分離與純化。例如，與甲磺酸、正丁磺酸、對甲苯磺酸和萘磺酸等磺酸生成的鹽就可以這樣使用。
通式I的化合物是按如下制備的a)同時或依次脫除通式II對應(yīng)化合物的保護(hù)基團(tuán)P，(P)X-Y-NH-(CH2)r-G(P)II式中(P)X代表一個可帶有一個或多個保護(hù)基團(tuán)P的殘基X，所述P獨(dú)立地選自其X包含堿性NH殘片的通式I化合物的氨基保護(hù)基P，和其X包含羧基殘片的通式I化合物的羧基保護(hù)基P，而G(P)代表一個可帶有一個或多個獨(dú)立選擇的氨基保護(hù)基P的殘基G；或b)對于其R為 的通式I化合物，使其R為 的通式I對應(yīng)化合物氫解；然后，當(dāng)需要通式I化合物的一種鹽時，與一種藥物上可接受的酸生成鹽。
可能較好的是，過程b)與過程a)同時進(jìn)行。對于其酸保護(hù)基為叔丁酯和/或其氨基保護(hù)基為叔丁氧碳酰的通式I化合物，可通過在茴香醚存在下在一種惰性溶劑如二噁烷或二氯甲烷中用一種強(qiáng)酸如三氟乙酸或無水氯化氫處理來脫除保護(hù)基。對于其酸保護(hù)基為芐酯和/或其氨基保護(hù)基為芐氧碳酰的通式I化合物，可通過氫解、方便地在乙醇-HCl中用炭載鈀催化劑進(jìn)行來脫除保護(hù)基。
在制備所希望的穩(wěn)定鹽形式的同時使通式I化合物純化的較好方法是美國專利5,250,660中所述的方法。按照該方法，穩(wěn)定的硫酸鹽或鹽酸鹽是通過用C18逆相色譜法的制備型純化來提供的，其中含水部分包含pH2.5的硫酸或鹽酸，而乙腈是有機(jī)部分。這種酸性洗脫液的pH是用一種羥基形式的陰離子交換樹脂如Bio-Rad AG-1X8調(diào)節(jié)到約pH4與約pH6之間的。在pH調(diào)整之后，將三肽硫酸鹽或鹽酸鹽的溶液凍干，提供干粉形式的純鹽。在這種工藝的一個實(shí)例中，可將粗D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2硫酸鹽溶解在水中，并將溶液裝到VydacC18RP HPLC 5cm×50cm柱上。用10小時時間，使用2-10％B(A＝0.01％H2SO4；B＝乙腈)的梯度。收集多個級分，把分析型RP HPLC測定表明含有產(chǎn)物的級分合并在一起。合并級分的pH用氫氧化物形式的AG-1X8樹脂(Bio-Rad，3300 Ragatta Blvd.，Richmond，CA94804)調(diào)至pH4.0-4.5。將溶液過濾，濾液凍干，提供硫酸鹽形式的純D-、L-二酰胺。
這些非對映體在殘基X上的光學(xué)活性異構(gòu)體也被認(rèn)為是本發(fā)明的組成部分。這樣的光學(xué)活性異構(gòu)體可以從其各自的光學(xué)活性前體物用上述步驟制備，或通過使外消旋混合物拆析來制備。這種拆析可以通過與一種手性試劑衍生化、隨后用色譜法或用重復(fù)結(jié)晶法進(jìn)行。用標(biāo)準(zhǔn)方法將手性助劑脫除，提供基本上光學(xué)純的本發(fā)明化合物或其前體的異構(gòu)體。關(guān)于拆析的進(jìn)一步細(xì)節(jié)可參閱Jacques等人，Enantiomers，Racemates，and Resolutiorns.，John Wiley & Sons，1981。
作為本發(fā)明化合物合成中最初起始原料采用的化合物是眾所周知的，而且在商業(yè)上不可得的情況下，容易用有本門技術(shù)普通技能的人員常用的標(biāo)準(zhǔn)步驟合成。
下列實(shí)例是為進(jìn)一步描述本發(fā)明和提供比較例而提供的，不要理解成對本發(fā)明的限制。
本說明書中使用的縮略語有如下含義。
氨基酸殘基Arg＝精氨酰，Glu＝谷氨酰，Gly＝甘氨酰，Pro＝脯氨酰，hPro＝高脯氨酰，Azt＝氮雜環(huán)丁烷-2-碳酰，Phg＝苯甘氨酰，Phe＝苯丙氨酰，hPhe＝高苯丙氨酰，1-Tiq＝1，2，3，4-四氫異喹啉-1-碳酰，3-Tiq＝1，2，3，4-四氫異喹啉-3-碳酰，Cha＝β-環(huán)己基丙氨酰，hCha＝α-氨基-γ-環(huán)己基丁酰，NMI＝N-甲基吲哚-2-甲酰，Ohi＝順式-八氫吲哚-2-甲酰，1-Piq＝全氫異喹啉-1-碳酰，3-Piq＝全氫異喹啉-3-碳酰，Met＝甲硫氨酰，Met(O2)＝S，S-二氧代甲硫氨酰。
Agm＝胍基丁胺；鯡精胺Boc＝叔丁氧碳酰Bn＝芐基Cbz＝芐氧碳酰DCC＝二環(huán)己基碳化二亞胺DMF＝二甲基甲酰胺Et＝乙基DMSO＝二甲基亞砜EtOAc＝乙酸乙酯Et2O＝二乙醚EtOH＝乙醇Fmoc＝9-芴基甲氧碳酰FAB-MS＝快原子轟擊質(zhì)譜FD-MS＝場解吸質(zhì)譜IS-MS＝離子噴霧質(zhì)譜HRMS＝高分辨率質(zhì)譜HOBT＝1-羥基苯并三唑水合物IR＝紅外光譜RPHPLC＝逆相高性能液體色譜法Ph＝苯基TFA＝三氟乙酸
THF＝四氫呋喃TLC＝薄層色譜法采用了下列RPHPLC參數(shù)溶劑A0.05％鹽酸水溶液(3L水中1.5ml濃鹽酸)；溶劑B乙腈；梯度如每個實(shí)例中所定義；方法1柱Vydac C18-2.5cm×25cm；流量率5ml/分；方法2柱VydacC18-5cm×25cm；流量率10ml/分；方法3柱VydacC18-2.5cm×50cm；流量率10ml/分。
除非另有說明，否則pH調(diào)節(jié)和后處理都是用酸或堿水溶液進(jìn)行。
在顯示1H-NMR的實(shí)例中，反應(yīng)所給出的產(chǎn)品是用質(zhì)子NMR表征的，以證實(shí)得到了所指出的化合物；無此類數(shù)據(jù)的IR類似地指出得到了令人滿意的紅外光譜。HRMS用來證實(shí)那些沒有為所述步驟的產(chǎn)物獲得令人滿意的元素分析的化合物的準(zhǔn)確質(zhì)量；指出了所觀察離子(如MH+)的元素組成。
實(shí)例1 EtSO2-D-Phe-Pro-Agm·HClA)Boc-D-Phe-Pro-OBn的制備在0℃，向Boc-D-Phe-OH(89.1g，336mmol)、Pro-OBn鹽酸鹽(81.2g，336mmol)、HOBT(50g，370mmol)和N，N-二異丙基乙胺(176ml，1,008mmol)的二氯甲烷(600ml)溶液中添加1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(71g，370mmol)。攪拌18小時后，混合物用二乙醚(1L)稀釋，并依次用1N檸檬酸(250ml)洗滌3次、用水(250ml)洗滌1次、用飽和碳酸氫鈉水溶液(250ml)洗滌3次、用飽和氯化鈉水溶液(250ml)洗滌1次。有機(jī)相干燥(Na2SO4)、過濾、真空濃縮，給出140g(92.5％)淡黃色泡沫狀物。
FD-MS，m/e 452(M+)1H NMRB)D-Phe-Pro-OBn·TFA的制備在0℃攪拌下，向Boc-D-Phe-Pro-OBn(68g，150mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中添加茴香醚(20ml)，隨后添加三氟乙酸(400ml)。攪拌3小時后，溶劑真空蒸發(fā)，將稠油狀殘留物溶解在二乙醚(1.5L)，冷藏(72小時)。將白色沉淀物濾出、用二乙醚(300ml)洗滌、干燥，給出59.4g(85％)白色粉末。
1H NMRC)EtSO2-D-Phe-Pro-OBn的制備在-78℃攪拌下，向D-Phe-Pro-OBn·TFA(12g，25.7mmol)和三乙胺(7ml，50.2mmol)的二氯甲烷(200ml)溶液中，通過加料漏斗滴加乙磺酰氯(2.65ml，28.3mmol)。讓反應(yīng)容器回升到0℃，攪拌4小時后加水(10ml)。有機(jī)相用1N鹽酸(100ml)洗滌3次、用飽和氯化鈉溶液(100ml)洗滌1次，然后真空脫除溶劑。產(chǎn)物用硅膠閃急色譜法純化，以乙酸乙酯/己烷(6∶4)洗脫。含產(chǎn)物的級分(用TLC判斷)合并、濃縮，給出6.62g(58％)黃色油狀物，放置后凝固。1H NMRFD-MS，m/e 445(M+)分析C23H28N2O5S計(jì)算C，62.14；H，6.35；N，6.30實(shí)測C，61.87；H，6.37；N，6.18。
D)EtSO2-D-Phe-Pro-OH的制備在攪拌下，向EtSO2-D-Phe-Pro-OBn(4.5g，10.1mmol)的對二噁烷(150ml)溶液中添加氫氧化鋰一水合物(2.1g，50.5mmol)的水(75ml)溶液。攪拌16小時后，真空濃縮使溶液體積減半，溶液用水(300ml)和0.1N NaOH(100ml)稀釋。然后，水相用二乙醚(250ml)洗滌2次，用固體檸檬酸酸化，然后用乙酸乙酯(150ml)萃取3次。合并的乙酸乙酯萃取液用飽和氯化鈉水溶液(200ml)洗滌、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，給出3.6g(90％)白色固體。FD-MS，m/e 335(M+)分析C16H22N2O5S計(jì)算C，54.22；H，6.26；N，7.90實(shí)測C，54.40；H，6.42；N，7.85。
E)N，N’-二Boc-S-甲基異硫脲的制備在攪拌下，向草酸二叔丁酯(100g，458mmol)的叔丁醇(300ml)溶液中添加二-S-甲基異硫脲硫酸鹽(32.7g，117mmol)的水(150ml)溶液，隨后添加氫氧化鈉(19.2g，480mmol)的水(150ml)溶液。攪拌48小時后，混合物真空濃縮至原體積的大約1/3，用二乙醚(500ml)稀釋。有機(jī)相用水(250ml)洗滌1次，用1N檸檬酸(250ml)洗滌3次，再用水(250ml)洗滌1次。然后，將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出42g(62％)白色固體。1H NMRF)Ng，Ng’-二Boc-胍基丁胺的制備在攪拌下，向1，4-丁二胺(23g，258mmol)的2∶1二甲基甲酰胺水(300ml)溶液中，通過加料漏斗添加N，N’-二Boc-S-甲基異硫脲(15g，52mmol)的二甲基甲酰胺(100ml)溶液。攪拌2小時后，真空脫除溶劑，將殘留物溶解在1N檸檬酸(250ml)中，用水(250ml)稀釋，用乙酸乙酯(250ml)洗滌。乙酸乙酯相用1N檸檬酸(100ml)反萃，合并的水相用碳酸鈉堿化，用固體氯化鈉飽和，用乙酸乙酯(250ml)萃取2次。合并的乙酸乙酯萃取物用飽和氯化鈉水溶液(200ml)洗滌、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，給出12.5g(73％)稠糖漿狀物。1H NMRG)EtSO2-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2的制備在攪拌下，向Ng，Ng’-二Boc-胍基丁胺(2g，6mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中添加EtSO2-D-Phe-Pro-OH(2.1g，6mmol)、HOBT(810mg，6mmol)和N，N-二異丙基乙胺(1.6g，12mmol)，隨后添加1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(1.4g，73mmol)。攪拌20小時后，溶液用乙酸乙酯(300ml)稀釋，用1N檸檬酸(150ml)洗滌3次、用水(150ml)洗滌1次、用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌2次。然后，將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮。殘留物用硅膠柱色譜法純化，以乙酸乙酯∶己烷(1∶4)直至乙酸乙酯的步進(jìn)梯度洗脫。含產(chǎn)物的級分(用TLC判斷)合并、濃縮，給出2.4g(60％)稠油狀物。1H NMRFD-MS，m/e 668(M+)H)EtSO2-D-Phe-Pro-Agm·HCl的制備在攪拌下，將EtSO2-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2(1.6g，2.4mmol)的茴香醚(1ml)懸浮液溶解在三氟乙酸(20ml)中，在室溫攪拌14時。真空脫除溶劑，將殘留物分配在水(100ml)和二乙醚(50ml)之間。水相再次用二乙醚(50ml)洗滌，然后部分濃縮、凍干，得到1.4g粗三氟乙酸鹽。然后將此物料的一半溶解在水中，用RPHPLC(方法1；98/2(A/B)；遞減至50/50(A/B)；60分鐘)純化，給出490mg(81％)白色粉末。1H NMRFD-MS，m/e 467(M+)分析C21H34N6O4S·HCl·H2O計(jì)算C，48.41；H，7.16；N，16.13；Cl，6.80；實(shí)測C，48.01；H，6.81；N，16.15；Cl，6.97。
實(shí)例2 EtSO2-D-Cha-Pro-Agm·HClA)Boc-D-Cha-Pro-OBn的制備用大體上相當(dāng)于實(shí)例1-A中所述的那種方法，從Boc-D-Cha-OH和Pro-OBn·HCl制備Boc-D-Cha-Pro-OBn，產(chǎn)率91％(109g)。FD-MS，m/e 458(M+)B)D-Cha-Pro-OBn·TFA的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-B所述的那種方法，制備D-Cha-Pro-OBn·TFA(理論產(chǎn)率的116％，130g)。1H NMRFD-MS，m/e 359(M+)C)EtSO2-D-Cha-Pro-OBn的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-C所述的那種方法，制備EtSO2-D-Cha-Pro-OBn(產(chǎn)率20％，2.3g)。1H NMRFD-MS，m/e 450(M+)分析C23H34N2O5S計(jì)算C，61.31；H，7.61；N，6.22；實(shí)測C，61.55；H，7.59；N，6.28。
D)EtSO2-D-Cha-Pro-OH的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-D所述的那種方法，制備EtSO2-D-Cha-Pro-OH(產(chǎn)率48％，0.78g)。1H NMRFD-MS，m/e 361(M+)E)EtSO2-D-Cha-Pro-Agm(Boc)2的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從EtSO2-D-Cha-Pro-OH和Ng-Ng-di-Boc-Agm制備400mg(40％)EtSO2-D-Cha-Pro-Agm(Boc)2。1H NMRFD-MS，m/e 674(MH+)F)EtSO2-D-Cha-Pro-Agm·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備EtSO2-D-Cha-Pro-Agm·HCl(產(chǎn)率45％，100mg)。產(chǎn)品用RPHPLC(方法1，98/2(A/B)，遞減至50/50(A/B)，60分鐘)純化。1H NMRFD-MS，m/e 473(M+)分析C21H40N6O4S·1.2HCl·H2O計(jì)算C，47.20；H，8.15；N，15.73；Cl，7.96；實(shí)測C，47.47；H，7.84；N，16.10；Cl，7.80。
實(shí)例3 EtOCO-D-Phe-Pro-Agm·HClA)EtOCO-D-Phe-Pro-OH的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-C和1-D所述的那些方法，用氯甲酸乙酯代替乙磺酰氯，制備了6.59g(92％)EtOCO-D-Phe-Pro-OH。1H NMRFD-MS，m/e 335(M+)分析C17H22N2O5計(jì)算C，61.07；H，6.63；N，8.38；實(shí)測C，60.88；H，6.72；N，8.14。
B)EtOCO-D-Phe-Pro-Agm·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從EtOCO-D-Phe-Pro-OH和Ng-Ng’-di-Boc-Agm制備2.1g(54％)EtOCO-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2。然后，用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備390mg(77％)EtOCO-D-Phe-Pro-Agm·HCl產(chǎn)品用RPHPLC(方法1，98/2(A/B)，遞減至50/50(A/B)，60分鐘)純化。1H NMRFD-MS，m/e 447(M+)分析C22H34N6O4·0.9HCl·0.2TFA·H2O計(jì)算C，51.70；H，7.22；N，16.15；Cl，6.13；實(shí)測C，51.73；H，7.20；N，16.54；Cl，6.36。
實(shí)例4 NMI-D-Phe-Pro-Agm·HCl(N-[(1-甲基-1H-吲哚-2-基)碳酰]-D-苯丙氨酰-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-L-脯氨酰胺·-鹽酸鹽)A)NMI-D-Phe-Pro-OH的制備向N-甲基吲哚-2-羧酸(2.6g，14.9mmol)的干四氫呋喃(45ml)溶液中添加五氟苯酚(3g，16.5mmol)，隨后添加1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺(3.2g，16.5mmol)。讓混合物攪拌回流3.5小時，然后冷卻到室溫。向此混合物中添加D-Phe-Pro-OBn·TFA(7g，14.9mmol)和N，N-二異丙基乙胺(4g，30mmol)的四氫呋喃(25ml)溶液。在額外攪拌2小時后，真空脫除溶劑，殘留物溶解在乙酸乙酯(500ml)中，然后用0.1N硫酸氫鈉水溶液(250ml)洗滌3次。用1N碳酸鉀水溶液(250ml)洗滌3次。有機(jī)相干燥(Na2SO4)、過濾、真空濃縮，給出6.5g無定形固體(沾污了五氟苯酚的、所希望產(chǎn)品的混合物)。然后，用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-D所述的那種方法使這種粗產(chǎn)品水解，給出3.8g(62％)泛白色固體。1H NMRFD-MS，m/e 419(M+)B)NMI-D-Phe-Pro-Agm·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，制備了900mg(20％)NMI-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2。然后用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備了144mg(31％)NMI-D-Phe-Pro-Agm·HCl。這種粗產(chǎn)品溶解在冰乙酸中，用RPHPLC純化(方法1，90/10(A/B)，遞減至40/60(A/B)，80分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 532(M+)分析C29H37N7O3·0.9HCl·0.6TFA·0.5H2O計(jì)算C，56.46；H，6.29；N，15.27；Cl，4.97；實(shí)測C，56.77；H，6.58；N，15.35；Cl，5.28。
實(shí)例5 D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NH)NH2·HClA)Boc-D-Phe-Pro-OH的制備向Boc-D-Phe-Pro-OBn(145g，320mmol)的對二噁烷(660ml)溶夜中添加氫氧化鋰一水合物(54g，1,280mmol)的水(300ml)溶液，猛烈攪拌。4小時后，溶液真空濃縮到原體積的大約1/4，用水(350ml)和0.1N氫氧化鈉(100ml)稀釋。水相用二乙醚(250ml)洗滌3次，然后用固體檸檬酸酸化到pH3，引起一種沉淀物生成。將固體濾出、用水洗滌2次，然后高真空干燥，得到91g(78％)白色固體。1H NMRFD-MS，m/e 363(M+)B)Ng，Ng’-二Boc-6-氨基己基胍的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-F所述的那種方法，從1，6-己二胺制備4.7g(66％)Ng，Ng’-二Boc-6-氨基己基胍。
C)Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NBoc)NH(Boc)的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-D-Phe-Pro-OH和Ng，Ng’-二Boc-6-氨基己基胍制備1.3g(62％)Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NBoc)NH(Boc)。1H NMRFD-MS，m/e 703(M+)D)D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備了大約100mgD-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NH)NH2·HCl。FD-MS，m/e 389(M+)分析C21H34N6O2·0.9HCl·0.9TFA·0.5H2O計(jì)算C，49.97；H，6.95；N，15.34；實(shí)測C，49.60；H，7.13；N，15.23。
實(shí)例6 D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NH)NH2·HClA)Ng，Ng’-二Boc-5-氨基戊基胍的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-F所述的那種方法，從1，5-戊二胺制備1.73g(72％)Ng，Ng’-二Boc-5-氨基戊基胍。FD-MS，m/e 345(M+)1H NMRB)Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NBoc)NH(Boc)的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-D-Phe-Pro-OH和Ng，Ng’-二Boc-5-氨基戊基胍制備1.9g(92％)Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NBoc)NH(Boc)。1H NMRFD-MS，m/e 689(M+)C)D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備了大約100mg D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NH)NH2·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法1，98/2(A/B)，遞減至40/60(A/B)，40分鐘)。FD-MS，m/e 389(M+)分析C20H32N6O2·0.9HCl·0.9TFA·0.7H2O計(jì)算C，48.71；H，6.79；N，15.63；實(shí)測C，48.34；H，6.68；N，16.01。
實(shí)例7 D-Phe-Pro-NH(CH2)3NHC(NH)NH2·HClA)Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)3NHC(NBoc)NH(Boc)的制備向1，3-二氨基丙烷(2.2g，30mmol)的二甲基甲酰胺(25ml)溶液中添加N，N’-二Boc-S-甲基異硫脲(2.9g，10mmol)的二甲基甲酰胺(25ml)溶液。攪拌1小時后，混合物用二氯甲烷(400ml)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液的混合液(200ml)洗滌2次，用飽和氯化鈉水溶液(250ml)洗滌1次。有機(jī)相干燥(MgSO4)、過濾、真空法部分濃縮至約200ml體積。
然后，向此溶液中添加Boc-D-Phe-Pro-OH(3.6g，10mmol)、HOBT(1.3g，10mmol)和N，N-二異丙基乙胺(1.3g，10mmol)，隨后添加1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺· HCl(2.1g，11mmol)。攪拌16小時后，真空脫除溶劑，殘留物用乙酸乙酯(250ml)收集。有機(jī)相用1N檸檬酸(200ml)洗滌3次，用水(100ml)洗滌1次，用飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)洗滌2次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌1次。然后將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮。然后，殘留物用硅膠柱色譜法純化，以乙酸乙酯/己烷(1∶4)直至乙酸乙酯的步進(jìn)梯度洗脫。含產(chǎn)品的級分(用TLC判斷)濃縮，得到2.6g(40％)粘稠無色油狀物。1H NMRFD-MS，m/e 661(M+)B)D-Phe-Pro-NH(CH2)3NHC(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備460mg(71％)D-Phe-Pro-NH(CH2)3NHC(NH)NH2·HCl。產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法1，98/2(A/B)，遞減至40/60(A/B)，40分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 361(M+)分析C18H28N6O2·HCl·1.1TFA·1.1H2O計(jì)算C，44.66；H，6.20；N，15.47；實(shí)測C，44.69；H，6.10；N，15.19。
實(shí)例8 D-Phe-Pro-NHCH2-trans-CH＝CHCH2NHC(NH)NH2·HClA)Ng，Ng’-二Boc-4-氨基-反式-2-丁烯基胍的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-F所述的那種方法，從1，4-二氨基-反式-2-丁烯制備2.4g(42％)Ng，Ng’-二Boc-4-氨基-反式-2-丁烯基胍。
B)Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-反式-CH＝CHCH2NHC(NBoc)NHBoc的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-D-Phe-Pro-OH和Ng，Ng’-二Boc-4-氨基-反式-2-丁烯基胍制備2.7g(55％)Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-反式-CH＝CHCH2NHC(NBoc)NHBoc。1H NMRFD-MS，m/e 673(M+)
C)D-Phe-Pro-NHCH2-反式-CH＝CHCH2NHC(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備大約100mg D-Phe-Pro-NHCH2-反式-CH＝CHCH2NHC(NH)NH2·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法1，98/2(A/B)，遞減至40/60(A/B)，40分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 373(M+)分析C19H28N6O2·HCl·0.5TFA·2.5H2O計(jì)算C，47.01；H，6.81；N，16.45；實(shí)測C，47.36；H，6.53；N，16.70。
實(shí)例9 D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NHC(NH)NH2·2TFAA)p-H2NCH2C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-F所述的那種方法，從對二甲苯二胺制備2.3g(42％)p-H2NCH2C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc。
1H NMRB)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-D-Phe-Pro-OH和p-H2NCH2C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc制備2.8g(63％)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc。1H NMRFD-MS，m/e 723(M+)C)D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CH2NHC(NH)NH2·2TFA的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備725mg(81％)標(biāo)題二TFA鹽，但沒有用RPHPLC進(jìn)一步純化。1H NMRFD-MS，m/e 423(M+)分析C23H30N6O2·2.1TFA·H2O計(jì)算C，48.05；H，5.05；N，12.36；實(shí)測C，48.06；H，4.85；N，12.28。
實(shí)例10 D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2·HClA)N-Boc-對(氨基甲基)芐胺的制備在攪拌下，向?qū)Χ妆蕉?10g，73mmol)的二甲基甲酰胺/水(1∶1，100ml)溶液中添加草酸二叔丁酯(8g，37mmol)。攪拌20小時后，混合物真空濃縮，殘留物在二乙醚(200ml)和1N檸檬酸(200ml)之間分配。水相再次用二乙醚(200ml)洗滌，然后用固體碳酸氫鈉堿化，用固體氯化鈉飽和。然后，水相用乙酸乙酯(200ml)萃取4次。合并的乙酸乙酯萃取液干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，給出2.1g(24％)稠油狀物。1H NMRFD-MS，m/e 237(M+)分析C13H20N2O2計(jì)算C，66.07；H，8.53；N，11.85；實(shí)測C，66.33；H，8.44；N，12.11。
B)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NHBoc的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-D-Phe-Pro-OH和N-Boc-對(氨基甲基)芐胺制備1.1g(63％)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NHBoc。1H NMRFD-MS，m/e 581(M+)分析C32H44N4O6計(jì)算C，66.19；H，7.64；N，9.65；實(shí)測C，65.99；H，7.63；N，9.42。
C)D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備大約100mg D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法1，98/2(A/B)，遞減至40/60(A/B)，40分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 381(M+)分析C22H28N4O2·HCl·1.1TFA·H2O計(jì)算C，51.87；H，5.77；N，10.00；實(shí)測C，51.78；H，5.88；N，10.28。
實(shí)例11 D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2·HClA)N-Boc-間(氨基甲基)芐胺的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例10-A所述的那種步驟，從間二甲苯二胺制備2.6g(30％)N-Boc-間(氨基甲基)芐胺。1H NMRFD-MS，m/e 237(MH+)分析C13H20N2O2計(jì)算C，66.07；H，8.53；N，11.85；實(shí)測C，65.81；H，8.48；N，11.98。
B)Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CH2NHBoc的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-D-Phe-Pro-OH和N-Boc-間(氨基甲基)芐胺制備1.6g(95％)Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CH2NHBoc。1H NMRFD-MS，m/e 581(M-)C)D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備約100mg D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 381(M+)分析C22H28N4O2·HCl·TFA·H2O計(jì)算C，52.51；H，5.87；N，10.21；實(shí)測C，52.13；H，6.21；N，10.48。
實(shí)施例12 D-Phe-Pro-NHCH2-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷·HClA)N-Boc-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷羧酸的制備向反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷羧酸(50g，318mmol)的1N氫氧化鈉(334ml，334mmol)和叔丁醇(400ml)溶液中添加草酸二叔丁酯(73g，334mmol)的四氫呋喃(50ml)溶液。攪拌20小時后，真空脫除溶劑，殘留物在水(500ml)和二乙醚(250ml)之間分配。水相再次用二乙醚(250ml)洗滌，然后用固體檸檬酸酸化，導(dǎo)致生成白色沉淀。將此固體過濾、用水(100ml)洗滌2次、真空干燥，給出48g(59％)白色粉末。1H NMRB)HOCH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)環(huán)己烷的制備在0℃攪拌下，向N-Boc-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷羧酸(15g，58mmol)的四氫呋喃(150ml)溶液中添加N-甲基嗎啉(5.9g，58mmol)，隨后添加氯甲酸乙酯(6.3g，58mmol)。攪拌30分鐘后，添加硼氫化鈉(6.5g，175mmol)，然后用5分鐘時間通過加料漏斗添加甲醇(300ml)。讓混合物攪拌1小時，然后真空脫除溶劑。將殘留物溶解在乙酸乙酯(500ml)中，用1N檸檬酸(250ml)洗滌2次，用水(100ml)洗滌1次，用飽和碳酸氫鈉水溶液(250ml)洗滌2次，用飽和氯化鈉水溶液(250ml)洗滌1次。將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，給出13g(91％)標(biāo)題化合物。1H NMRC)NH2CH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)環(huán)己烷的制備在攪拌下，向HOCH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)環(huán)己烷(13g，53mmol)和三苯膦(21g，80mmol)的四氫呋喃(300ml)溶液中添加偶氮二羧酸二乙酯(13.9g，80mmol)，隨后添加二苯基磷酰疊氮(22g，80mmol)的四氫呋喃(100ml)溶液。攪拌16小時后，真空脫除溶劑，殘留物用硅膠柱色譜法分離，用乙酸乙酯/己烷(1∶3)直至乙酸乙酯/己烷(3∶1)的步進(jìn)梯度洗脫。含產(chǎn)品的級分(用TLC判斷)合并、濃縮，給出17.4g粗產(chǎn)品(有較高Rf化合物沾污)。這種粗疊氮化物溶解在甲醇(200ml)中，此溶液添加到正在攪拌的微細(xì)Na2S·9H2O(51g，212mmol)和三乙胺(lg，11mmol)的甲醇(100ml)懸浮液中。所形成的混合物加熱回流(16小時)，然后冷卻到室溫，真空脫除溶劑。殘留物用水(250ml)稀釋，用固體檸檬酸酸化。水相用乙酸乙酯(250ml)洗滌2次，用固體碳酸氫鈉堿化，用固體氯化鈉飽和。然后，水相用乙酸乙酯(200ml)萃取3次，合并的萃取液干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，給出6.4g(45％)稠油狀物。1H NMRD)N-Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)環(huán)己烷的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-D-Phe-Pro-OH和NH2CH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)環(huán)己烷制備4.5g(74％)N-Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-反式-4-(N-Boc-氨基甲基)環(huán)己烷。1H NMRFD-MS，m/e 587(M+)E)D-Phe-Pro-NHCH2-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備了588mg(75％)D-Phe-Pro-NHCH2-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷·HCl。在這種情況下，中間體TFA鹽的分析型RPHPLC純化是非常清潔的，但該鹽是吸濕的。因此，將該鹽溶解在0.1N HCl(20ml)中，把pH調(diào)到5，將此樣品再次凍干，得到穩(wěn)定的白色固體鹽酸鹽。1H NMRFD-MS，m/e 387(M+)分析C22H34N4O2·HCl·TFA·2H2O計(jì)算C，50.30；H，7.04；N，9.78；實(shí)測C，50.44；H，7.20；N，9.62。
實(shí)例13 D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2·HClA)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-D-Phe-Pro-OH和對-NO2-芐胺·HCl制備8g Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NO2。將此中間體溶解在乙醇(250ml)中，加熱回流。在攪拌下，向此溶液中添加Na2S2O4(12.3g，70mmol)的水(125ml)溶液。攪拌回流2小時后，真空脫除溶劑，殘留物分配在乙酸乙酯(250ml)和水(250ml)之間。水相再次用乙酸乙酯(250ml)萃取，將合并的有機(jī)相干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出2.4g(21％)淡黃色固體。1H NMRFD-MS，m/e 466(M+)分析C26H34N4O4計(jì)算C，66.93；H，7.34；N，12.01；實(shí)測C，66.69；H，7.32；N，12.28。
B)D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備了180mg(60％)D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法1，98/2(A/B)，遞減至60/40(A/B)，60分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 366(M+)分析C21H26N4O2·HCl·0.6TFA·0.5H2O計(jì)算C，55.51；H，6.00；N，11.66；實(shí)測C，55.16；H，6.14；N，11.57。
實(shí)例14 D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2·HClA)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例13-A所述的那種方法，從Boc-D-Phe-Pro-OH和對-NO2-苯乙胺·HCl制備3g(23％)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2。1H NMRFD-MS，m/e 480(M+)分析C27H36N4O4計(jì)算C，67.48；H，7.55；N，11.66；實(shí)測C，67.30；H，7.54；N，12.34。
B)D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備了175mg(58％)D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法1，98/2(A/B)，遞減至60/40(A/B)，60分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 380(M+)分析C22H28N4O2·HCl·0.7TFA·0.7H2O計(jì)算C，55.18；H，6.15；N，11.00；實(shí)測C，55.12；H，6.18；N，10.99。
實(shí)例15 D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(D-苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)A)對(氨基甲基)芐腈·TFA的制備在攪拌下，向氫化鈉(2.2g，56mmol，60％油分散液)的四氫呋喃(100ml)懸浮液中添加4-(溴甲基)芐腈(10g，51mmol)。通過加料漏斗向此混合物中緩緩添加亞氨基二羧酸二叔丁酯(12.2g，56mmol)溶液。攪拌16小時后，此混合物用二乙醚(300ml)稀釋，用水(150ml)洗滌2次。然后，將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過濾、濃縮。然后，將所生成的固體溶解在少量二氯甲烷中。添加茴香醚(10ml)，使溶液冷卻到0℃。然后，此溶液用三氟乙酸(200ml)稀釋，將其攪拌1小時。然后真空脫除溶劑，油狀殘留物與二乙醚(100ml)-起猛烈攪拌，幾分鐘后此產(chǎn)品凝固。將沉淀物過濾、用二乙醚洗滌、真空干燥，給出11.3g(90％)白色粉末。IR1H NMRFD-MS，m/e 132(M+)B)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-D-Phe-Pro-OH和對(氨基甲基)芐腈·TFA制備7.4g(78％)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN。在這種情況下，產(chǎn)品用二乙醚重結(jié)晶法純化。IR1H NMRFD-MS，m/e 476(M+)C)Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2的制備硫化氫氣體通過Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN(2g，4.2mmol)的吡啶(25ml)和三乙胺(2.5ml)溶液鼓泡30分鐘。然后將反應(yīng)容器密封，在室溫靜置2天。然后該溶液用水(100ml)稀釋，用乙酸乙酯(200ml)萃取2次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉水溶液洗滌2次，干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮。
將殘留物溶解在丙酮(50ml)中，添加甲基碘(10ml)，溶液加熱回流(2小時)。真空脫除溶劑，將殘留物溶解在甲醇(20ml)中，添加NH4OAc(712mg，9.2mmol)，溶液加熱回流(12小時)。再次真空脫除溶劑，殘留物溶解在1N檸檬酸(100ml)中，水相用乙酸乙酯(200ml)洗滌2次，然后用固體碳酸氫鈉堿化，用固體氯化鈉飽和，用乙酸乙酯(200ml)萃取2次。合并的乙酸乙酯萃取液干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，給出1.4g(67％)稠油狀物。1H NMRFD-MS，m/e 494(M+)D)D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-H所述的那種方法，制備了7.7g(57％)D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法3，98/2(A/B)，遞減至70/30(A/B)，300分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 394(M+)分析C22H27N5O2·HCl·1.4TFA·0.5H2O計(jì)算C，49.76；H，5.12；N，11.70；實(shí)測C，49.75；H，5.19；N，11.58。
實(shí)例16 D-phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2·0.75HClA)間(氨基甲基)芐腈·TFA的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例15-A所述的那種方法，從間(溴甲基)芐腈制備10.8g(86％)間(氨基甲基)芐腈·TFA。IR1H NMRFD-MS，m/e 132(M+)B)Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CN的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-D-Phe-Pro-OH和間(氨基甲基)芐腈·TFA制備7.5g(79％)Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CN。在這種情況下，產(chǎn)品用二乙醚重結(jié)晶法純化。IR1H NMRFD-MS，m/e 476(M+)分析C27H32N4O4計(jì)算C，68.05；H，6.77；N，11.76；實(shí)測C，68.27；H，6.82；N，11.96。
C)Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例15-C所述的那種方法，制備了1.1g(53％)Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2。FD-MS，m/e 494(M+)D)D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2·0.75HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，制備了0.65g(63％)D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2·0.75HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法2，98/2(A/B)，遞減至75/25(A/B)，120分鐘)。FD-MS，m/e 394(M+)分析C22H27N5O2·0.75HCl·1.2TFA·0.5H2O計(jì)算C，51.72；H，5.33；N，12.36；Cl，4.69；實(shí)測C，51.79；H，4.93；N，11.96Cl，4.82。
實(shí)例17 D-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(D-高脯氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)A)Cbz-D-hPro-OH的制備D-hPro-OH(5.0g，38.7mmol)溶解在四氫呋喃(100ml)和水(30ml)中。溶液的pH用2N氫氧化鈉調(diào)節(jié)到9.5，滴加氯甲酸芐酯(5.5ml，38.7mmol)，pH用2N氫氧化鈉保持在9.5。反應(yīng)混合物在室溫再攪拌1小時。有機(jī)溶劑真空蒸發(fā)，向殘留物中添加二乙醚(100ml)和水(50ml)。將水層分離，溶液的pH用3N鹽酸調(diào)節(jié)至2.8，添加乙酸乙酯(150ml)。將有機(jī)層分離、干燥(MgSO4)；濾液真空濃縮，給出9.6g(95％)透明油狀物。1H NMRFD-MS，m/e 264(MH+)B)Cbz-D-hPro-Pro-OH的制備Cbz-D-hPro-OH(9.5g，36mmol)溶解在乙酸乙酯(100ml)中，將溶液冷卻到0℃。向溶液中添加2，4，5-三氯苯酚(7.1g，36mmol)和1，3-二環(huán)己基碳化二亞胺(7.4g，36mmol)。反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時，并在室溫攪拌1小時。把沉淀物濾出，濾液真空濃縮成油狀物。此油狀溶解在吡啶(100ml)中，添加Pro-OH(4.2g，36mmol)和三乙胺(5.0ml，36mmol)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌(24小時)。反應(yīng)溶劑真空脫除，成為一種油狀物。殘留物溶解在水(100ml)中，添加二乙醚(50ml)，pH用2N氫氧化鈉調(diào)節(jié)至9.5。水層用二乙醚萃取2次。將水層分離，pH用3N鹽酸調(diào)節(jié)至2.8，添加乙酸乙酯(150ml)。將有機(jī)層分離、干燥(MgSO4)，濾液真空濃縮，成為一種無定形固體(11.4g，88％)。FD-MS，m/e 361(M+)分析C19H24N2O5計(jì)算C，63.32；H，6.71；N，7.77；實(shí)測C，63.42；H，6.84；N，7.96。
C)Cbz-D-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4CN的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Cbz-D-hPro-Pro-OH和p-NH2CH2C6H4CN·TFA制備了2.2g(84％)Cbz-D-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4CN。1H NMRFD-MS，m/e 474(M+)分析C27H30N4O4計(jì)算C，68.34；H，6.37；N，11.81；實(shí)測C，68.36；H，6.47；N，11.57。
D)D-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例15-C所述的那種方法，制備了Cbz-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2(28mmol，理論值)。然后將這種粗材料溶解在乙酸(35ml)中，HBr氣體通過該溶液鼓泡30分鐘。在另外攪拌1小時后，溶劑真空脫除，將殘留物溶解在水(200ml)中，用乙酸乙酯(100ml)洗滌2次。然后，水相用離子交換樹脂(BiO RadAG1-X8，堿性形式)調(diào)節(jié)到pH4、凍干，給出松散白色固體。然后將此產(chǎn)物重新溶解在水(25ml)中，用制備型RPHPLC純化(方法3，98/2(A/B)，遞減至70/30(A/B)，300分鐘)，給出5g(41％)hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·0.9HCl·0.9HBr·0.5H2O。1H NMRFD-MS，m/e 357(M+)分析C19H27N5O2·0.9HCl·0.9HBr·0.5H2O計(jì)算C，48.34；H，6.36；N，14.83；Cl，6.76；Br，15.23；實(shí)測C，48.66；H，6.36；N，14.62；Cl，7.14；Br，14.90。
實(shí)例18 1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl(N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-1-[[(4aS，8aS)-十氫-1(R)-異喹啉基]碳酰]-L-脯氨酰胺·二鹽酸鹽)A)Cbz-D-1-Piq-Pro-OH的制備1-異喹啉羧酸(50g，0.288mol)的EtOH(150ml)和60ml 5NHCl溶液用5％Rh/Al2O3(14g)、以52巴(750psi)氫、在高壓裝置中于50℃還原17小時。還原混合物通過一層硅藻土過濾，濾液真空濃縮。固體與水一起研制、過濾、干燥，給出DL-全氫化-1-異喹啉羧酸(DL-1-Piq-OH)(30g，48％)FD-MS184(MH+)。
DL-1-Piq-OH(30.2g，137mmol)溶解在四氫呋喃(150ml)和水(150ml)中。溶液的pH用5N NaOH調(diào)節(jié)至9.8，滴加氯甲酸芐酯(21.6ml，151mmol)，用2N NaOH使pH保持在9.5。反應(yīng)混合物在室溫攪拌另外2小時。有機(jī)溶劑真空蒸發(fā)，向殘留物中添加二乙醚(150ml)和水(50ml)。將水層分離，溶液的pH用5H HCl調(diào)節(jié)至2.5，添加乙酸乙酯(200m1)。將有機(jī)層分離、干燥(MgSO4)，濾液真空濃縮，給出一種透明油。將該油溶解在二乙醚(150ml)中，溶液在室溫靜置(24小時)。將沉淀物濾出、干燥，給出2-Cbz-DL-全氫化-1-異喹啉羧酸(Cbz-DL-1-Piq-OH)(32g，75％)FD-MS 318(MH+)。
Cbz-DL-1-Piq-OH(31.8g，100mmol)溶解在DMF(100ml)中，冷卻至0℃。向反應(yīng)混合物中添加脯氨酸叔丁酯(17.1g，100mmol)、1-羥基苯并三唑(13.5g，100mmol)和DCC(20.6g，100mmol)。反應(yīng)混合物在0℃攪拌3小時，在溫室攪拌24小時。將反應(yīng)沉淀濾出，濾液真空濃縮成一種油狀物。該油狀物溶解在EtOAc(200ml)和水(100ml)中。將有機(jī)層分離，依次用1N NaHCO3、水、1.5N檸檬酸和水洗滌。有機(jī)層干燥(MgSO4)，濾液蒸發(fā)成油狀物、干燥，給出2-Cbz-DL-全氫化-1-異喹啉碳酰-L-脯氨酸叔丁酯(Cbz-DL-1-Piq-Pro-O-t-Bu)(47.0g，100％) FAB-MS 470(MH+)。
(Cbz-DL-1-Piq-Pro-O-t-Bu)(47.0g，100mmol)放入一個盛有三氟乙酸(100ml)、CH2Cl2(35ml)、茴香醚(5ml)的圓底燒瓶中，在室溫攪拌(1小時)。反應(yīng)混合物真空濃縮而無加熱，添加二乙醚(100ml)和水(100ml)。溶液的pH用5N NaOH調(diào)節(jié)至9.8。水層分離，溶液的pH用5N HCl調(diào)節(jié)至2.5，添加乙酸乙酯(200ml)。將有機(jī)層分離、干燥(MgSO4)，濾液真空濃縮，給出一種透明油狀物。該油狀物溶解在二乙醚(700ml)中，向溶液中添加(L)-(-)-α-甲基芐胺。讓該溶液在室溫靜置5天。將所生成的固體濾出，用二乙醚洗滌。濾液用1.5N檸檬酸和水洗滌。有機(jī)層干燥(MgSO4)，濾液蒸發(fā)成油狀物。將該油狀物溶解在二乙醚(400ml)中，在室溫靜置(48小時)。將所生成的固體濾出，用二乙醚洗滌、干燥，給出2-Cbz-D-全氫化-1-異喹啉碳酰-L-脯氨酸(Cbz-D-1-Piq-Pro-OH)(5.86g，36％)FAB-MS 415(MH+)；[α]D＝-34.2°(C＝0.5，MeOH)。
B)N-Boc-對(氨基甲基)芐腈的制備在攪拌下，向氫化鈉(4.6g，115mmol，60％油分散液)的四氫呋喃(150ml)懸浮液中添加4-(溴甲基)芐腈(20.5g，105mmol)。向此混合物中(通過加料漏斗緩慢)添加亞氨基二羧酸二叔丁酯(25g，115mmol)溶液。在攪拌16小時后，混合物用二乙醚(500ml)稀釋，用水(250ml)洗滌2次。然后將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，給出40.2g粗固體。
然后，將所生成的固體(28.3g，85mmol)溶解在四氫呋喃(150ml)中，添加氫氧化鈉(3.4g，85mmol)的甲醇(300ml)溶液。攪拌過濾之后，將溶液濃縮至大約一半體積，加水以促進(jìn)產(chǎn)品沉淀。將沉淀物濾出、真空干燥，給出18.5g(94％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 232(M+)分析 C13H16N2O2計(jì)算 C，67.22；H，6.94；N，12.06；實(shí)測 C，67.19；H，7.16；N，11.82。
C)P-(BocNHCH2)C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例15-C所述的那種方法，把N-Boc-對(氨基甲基)芐腈(32.7g，140mmol)精心制作成P-(BocNHCH2)C6H4C(NH)NH2。將此步驟的殘留物溶解在二甲基甲酰胺(700ml)中，添加N，N-二異丙基乙胺(72g，560mmol)。在攪拌下，向此溶液中滴加氯甲酸芐酯(48g，280mmol)。攪拌16小時后，加水(100ml)，然后真空脫除溶劑。將殘留物分配在水(250ml)和乙酸乙酯(500ml)之間。將兩相分離，有機(jī)相用飽和氯化銨水溶液(250ml)洗滌3次，用水(200ml)洗滌1次，用飽和碳酸氫鈉水溶液(250ml)洗滌2次。然后將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，產(chǎn)品用二乙醚重結(jié)晶，給出14g(26％)白色固體。
1H NMRFD-MS，m/e 384(M+)D)P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl的制備在0℃向P-(BocNHCH2)C6H4C(NH)NHCbz(11g，28.7mmol)的二氯甲烷(125ml)溶液中添加茴香醚(10ml)，隨后添加三氟乙酸(125ml)。攪拌2小時后，真空脫除溶劑，將殘留物溶解在1N鹽酸(50ml)中，用二乙醚(50ml)洗滌2次。用離子交換樹脂(Bio RadAG1-X8，堿形式)將PH調(diào)節(jié)至3，將該溶液凍干，給出9.2g(90％)白色粉末。
1H NMRFD-MS，m/e 284(M+)
E)Cbz-1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Cbz-1-Piq-Pro-OH和P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制備了4.4g(79％)Cbz-1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。在這種情況下，由于溶解度問題，反應(yīng)是用P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl。在二甲基甲酰胺中進(jìn)行的。
1H NMRFD-MS，m/e 681(MH+)分析 C39H45N5O6計(jì)算 C，68.91；H，6.67；N，10.30；實(shí)測 C，68.71；H，6.93；N，10.38。
F)1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制備向Cbz-1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz(4.2g，6.1mmol)的乙醇(200ml)溶液中添加1N鹽酸(18.3ml，18.3mmol)和水(100ml)。在攪拌下向此溶液中添加5％Pd/C(1g)，讓氫氣通過該溶液鼓泡2小時。然后，該混合物用氮?dú)獯祾撸缓笸ㄟ^一層硅藻土過濾。然后將濾液真空濃縮、重新溶解于水(25ml)中，用RPHPLC純化(方法2，98/2(A/B)，遞減至60/40(A/B)，300分鐘)，給出1.3g(53％)1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。
1H NMRFD-MS，m/e 412(M+)分析 C23H33N5O2·1.9HC·2.5H2O計(jì)算 C，52.53；H，7.65；N，13.32；Cl，12.81實(shí)測 C，52.63；H，7.36；N，13 47；Cl，12.95。
實(shí)例19 D-3-Piq-Pro-p-NH-CH2C6H4C(NH)NH2·3HCl
A)Cbz-D-3-Piq-Pro-OH的制備D-苯丙氨酸(50g，302mmol)與37％甲醛溶液(120ml)和濃HCl(380ml)回流反應(yīng)。30分鐘后，再添加50ml甲醛，反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行3小時。讓反應(yīng)混合物冷卻到-10℃，把沉淀物過濾出來。此固體真空干燥，給出D-1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸(24.2g，45％)，F(xiàn)D-MS 178(MH+)。
D-1，2，3，4-四氫-3-異喹啉羧酸(17g，96mmol)的水(200ml)和20ml 5N HCl溶液用5％Rh/Al2O3(8.5g)以138巴(2000psi)在高壓裝置中于120℃加氫16小時。反應(yīng)混合物通過一層硅藻土過濾，濾液冷凍干燥，給出D-全氫化-3-異喹啉羧酸(D-3-Piq-OH)(21g，100％)FD-MS 184(MH+)。
D-3-Piq-OH(21.0g，95.8mmol)溶解在四氫呋喃(75ml)和水(50ml)中。溶液的pH用5N NaOH調(diào)節(jié)至10.0，滴加氯甲酸芐酯(16.4ml，115mmol)，pH用2N NaOH保持在9.5。反應(yīng)混合物在室溫又?jǐn)嚢?小時。有機(jī)溶劑真空蒸發(fā)，向殘留物中添加二乙醚(100ml)和水(50ml)。將水層分離，溶液的pH用3N HCl調(diào)節(jié)至3.0，添加乙酸乙酯(250ml)。將有機(jī)層分離、干燥(MgSO4)。濾液真空濃縮，給出2-Cbz-D-全氫化-3-異喹啉羧酸(Cbz-D-3-Piq-OH)的透明油狀物(25.8g，85％)，F(xiàn)D-MS318(MH+)。
Cbz-D-3-Piq-OH(17.2g，54mmol)溶解在DMF(50ml)中，冷卻至0℃。向此反應(yīng)混合物中添加脯氨酸叔丁酯(9.2g，54mmol)、1-羥基苯并三唑(7.3g，54mmol)和DCC(11.1g，54mmol)。反應(yīng)混合物在0℃攪拌3小時，在室溫攪拌24小時。將反應(yīng)沉淀物濾出，濾液真空濃縮成油狀物。將該油狀物溶解在EtOAc(200ml)和水(100ml)中。將有機(jī)層分離，依次用1N NaHCO3、水、1.5N檸檬酸和水洗滌。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，濾液蒸發(fā)成油狀物，干燥后給出2-Cbz-D-全氫化-3-異喹啉碳酰-L-脯氨酸叔丁酯(Cbz-D-3-Piq-Pro-O-Bu)(23.8，94％)FAB-MS 471(MH+)。
Cbz-D-3-Piq-Pro-O-t-Bu(31.2g，66.3mmol)放置在一個盛有三氟乙酸(100ml)、茴香醚(5ml)的圓底燒瓶中，在室溫攪拌(1時)。反應(yīng)混合物真空濃縮而無加熱，添加二乙醚(150ml)和水(100ml)。溶液的pH用5N NaOH調(diào)節(jié)至9.8。將水層分離，溶液的pH用3N HCl調(diào)節(jié)至2.8，添加乙酸乙酯(200ml)。將有機(jī)層分離、干燥(MgSO4)、過濾。濾液真空濃縮，給出一種透明油狀物。該油狀物溶解在二乙醚(300ml)中，溶液在室溫靜置(24小時)。將所形成的固體濾出、用二乙醚洗滌、干燥，給出2-Cbz-全氫化-3-異喹啉碳酰-L-脯氨酸(Cbz-D-3-Piq-Pro-OH)(13.5g，49％)FAB-MS 415(MH+)。分析C23H30N2O5計(jì)算C，66.65；H，7.29；N，6.76；實(shí)測C，66.90；H，7.33；N，6.81。
B)Cbz-D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-E所述的那種方法，從Cbz-D-3-Piq-Pro-OH和P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制備了1.6g(49％)Cbz-D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。MD-MS，m/e 680(M+)。
C)D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·3HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例17-C所述的那種方法，制備150mg D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·3HCl。產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法2，98/2(A/B)，遞減至60/40(A/B)，240分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 412 (M+)分析 C23H33N5O2·3HCl·0.5H2O計(jì)算 C，52.13；H，7.04；N，13.22；實(shí)測 C，52.35；H，7.23；N，12..95。
實(shí)施例20
D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·3HCl((S-順式)-N[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-八氫-1-D-高脯氨酰-1H-吲哚-2-甲酰胺·三鹽酸鹽)A)Cbz-D-hPro-Ohi-OH的制備HCl氣體通入正在攪拌的(S)-二氫吲哚-2-羧酸(20g，110mmol)的乙醇(500ml)懸浮液中。當(dāng)這種酸完全溶解時，讓溶液開始回流。16小時后，使溶液冷卻，真空脫除溶劑。殘留物用二乙醚研制，所形成的灰白色固體用過濾法收集、用乙烷洗滌、在30℃的真空烘箱中干燥過夜，給出(S)-二氫吲哚-2-羧酸乙酯·HCl(25.7g，78％)。
將此固體溶解在乙醇(800ml)中，添加5％Pd/C(25g)，所形成的懸浮液在帕爾搖動器上加氫8小時(4.1巴，60psi)。溶液過濾，真空脫除溶劑。殘留物溶解、與二乙醚研制，用過濾法收集18.8g(73％)灰白色固體(順式-Ohi-OEt·HCl )。
用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-A所述的那種方法，從Cbz-D-hPro-OH和順式-Ohi-OEt·HCl制備了13.5(93％)Cbz-D-hPro-順式-Ohi-OEt1H NMRFD-MS，m/e 442(M+)分析 C25H34N2O5計(jì)算 C，67.85；H，7.74；N，6.33；實(shí)測 C，67.59；H，7.72；N，6.48。
用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-D所述的那種方法，制備了12.5g(102％)Cbz-D-hPro-順式-Ohi-OH。1H NMRFD-MS，m/e 414(M+)分析 C23H30N2O5計(jì)算 C，66.65；H，7.29；N，6.76；實(shí)測 C，66.46；H，7.30；N，6.86。
B) Cbz-D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-E所述的那種方法，從Cbz-D-hPro-Ohi-OH和P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制備了3.3g(67％)Cbz-D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。1H NMRPD-MS，m/e 681 (MH+)C)D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·3HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-F所述的那樣方法，制備了2.2g(66％)D-hPro-Ohi-p-NHCH2-C6H4C(NH)NH2·3HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法2，98/2(A/B)，遞減至60/40(A/B)，3000分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 412 (M+)分析 C23H33N5O2·3HCl·0.5H2O計(jì)算 C，52.13；H，7.04；N，13.22；實(shí)測 C，51.98；H，7.04；N，13.35。
實(shí)施例21 D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl(D-高脯氨酰-N(α)-(2-苯基乙基)-N-〔〔4-(氨基亞氨基甲基)苯基〕甲基〕甘氨酰胺·二鹽酸鹽)A)Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-OH的制備在0℃向苯乙胺(58ml，461mmol)和三乙胺(21ml，154mmol)的乙醇(200ml)溶液中添加溴乙酸叔丁酯(30g，154mmol)的乙醇(50ml)溶液，在一小時內(nèi)完成。撤去冷浴，讓溶液回升室溫。攪拌過夜后，真空脫除溶劑，將殘留物溶解在1N檸檬酸中。該水溶液用二乙醚洗滌2次，用固體碳酸氫鈉堿化，然后用乙酸乙酯(200ml)萃取3次。合并的乙酸乙酯萃取液干燥(MgSO4)、過濾、靜置24小時。所形成的沉淀物濾出、用二乙醚洗滌、干燥，給出10.5g白色固體。母液濃縮至約100ml體積，然后用二乙醚(400ml)稀釋。靜置30分鐘后，將溶液過濾，得到另外23.5g白色固體，合計(jì)34g(94％)N(PhCH2CH2)Gly-O-t-Bu。1H-NMRFD-MS、m/e 235(M+)用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-A所述的那種方法，從Cbz-D-hPro-OH和N(PhCH2CH2)Gly-O-t-Bu制備了10.8g(56％)Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-o-t-Bu。1H NMRFD-MS，m/e 480 (M+)分析 C28H36N2O5計(jì)算 C，69.98；H，7.55；N，5.83；實(shí)測 C，69.68；H，7.56；N，5.77。
用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-A所述的那種方法，即Cbz-DL-1-Piq-Pro-O-t-Bu脫保護(hù)，制備了9.2g(100％)Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-OH。1H NMRFD-MS，m/e 425 (M+)分析 C24H28N2O5計(jì)算 C，67.91；H，6.65；N，6.60實(shí)測 C，68.19；H，6.68；N，6.71B) Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2-C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-E所述的那種方法，從Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-OH和P-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制備了3.2g(55％)Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-HNCH2C6H4C(NH)NHCbz。1H NMRFD-MS，m/e 690(M+)分析 C40H43N5O6計(jì)算 C，69.65；H，6.28，N，10.15實(shí)測 C，69.80；H，6.46，N，10.14
C)D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2-C6H4C(NH)NH2·2HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例19-F所述的那種方法，制備了770mg(54％)D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。此產(chǎn)品用RPHLC純化(方法2，98/2(A/B)，遞減至85/15(A/B)，120分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 423(MH+)分析 C24H31N5O2·2HCl計(jì)算 C，58.30；H，6.73；N，14.16；實(shí)測 C，58.05；H，6.60；N，14.28。
實(shí)施例22 D-hPro-Pro(4-cis-Pho)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl(順式-D-高脯氨酸-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-4-苯氧基-L-脯氨酰胺·二鹽酸鹽)A)Cbz-D-hPho-Pro(4-cis-Pho)-OH的制備在0℃向Cbz-Pro(4-反式-OH)-Et(58.8g，200mmol)、三苯膦(65.6g，250mmol)和苯酚(23.5g，250mmol)的四氫呋喃(500ml)溶液中，在1小時內(nèi)滴加偶氮二羧酸二乙酯(40ml，250mmol)的四氫呋喃(50ml)溶液。然后撤去冷裕，讓溶液回升到室溫(16小時)。然后真空脫除溶劑，剩余的琥珀糖漿狀物用二乙醚研制。過濾法除去白色固體，濾液濃縮。然后，殘留物用硅膠(1kg)柱色譜法純化，用乙烷直至1∶1乙酸乙酯/己烷的步進(jìn)梯度洗脫。含純產(chǎn)品的級分(用TLC判斷)合并，真空濃縮，給出36.3g(50％)無色糖漿狀Cbz-Pro(4-順式-苯氧基)-OEt。1H NMRFD-MS，m/e 369(M+)分析 C21H23NO5計(jì)算 C，68.28；H，6.28；N，3.79；實(shí)測 C，68.38；H，6.30；N，3.89。
向Cbz-Pro(4-順式-苯氧基)-OEt(25g，67.7mmol)的乙醇(400ml)溶液中添加5％Pd/C(5g)。在向該溶液中通入氫氣3小時之后，溶液通過一層硅藻土過濾，添加3ml濃鹽酸，將溶液真空濃縮。殘留物懸浮在二乙醚中，猛烈攪拌，然后過濾、干燥，給出14.2g(77％)白色固體狀Pro(4-順式-苯氧基)-OEt.HCl。1H NMRFD-MS，m/e 235(M+)分析 C13H18NO3Cl計(jì)算 C，57.46；H，6.68；N，5.15；實(shí)測 C，57.68；H，6.78；N，5.18；用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-A所述的那種方法，從Cbz-D-hPro-OH和Pro(4-順式-苯氧基)-OEt·HCl制備了19.4g(100％)Cbz-D-hPro-Pro(4-順式-苯氧基)-OEt。1H NMRFD-MS，m/e 480(M+)分析 C27H32N2O6計(jì)算 C，67.48；H，6.71；N，5.83；實(shí)測 C，67.71；H，6.79；N，5.89。
用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-D所述的那種方法，制備了16g(100％)Cbz-D-hPro-Pro(4-順式-苯氧基)-OH。1H NMRFD-MS，m/e 452(M+)分析 C25H28N2O6計(jì)算 C，66.36；H，6.24；N，6.19；實(shí)測 C，66.22；H，6.18；N，6.17。
B)Cbz-D-hPro-Pro-(4-cis-Pho)-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-E所述的那種方法，從Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-Pho)-OH和p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制備了4.55g(75％)Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-Pho)-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。1H NMRFD-MS，m/e 718(M+)C)D-hPro-Pro(4-cis-Pho)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-F所述的那種方法，制備了873mg(40％)D-hPro-Pro(4-Cis-Pho)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法2，98/2(A/B)，遞減到85/15(A/B)，120分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 451(MH+)分析 C25H31N5O3·2HCl計(jì)算 C，57.47；H，6.37；N，13.40；實(shí)測 C，57.22；H，6.29；N，13.47。
實(shí)例23 EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(N-(乙磺酰)-D-苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)A)p-NH2CH2-C6H4CN·HCl的制備正在0℃攪拌的、N-Boc-對氨基甲基芐腈(15g，64.6mmol)的乙酸乙酯(400ml)溶液中通入HCl氣體10分鐘。撤去冷浴，攪拌1.5小時后，真空脫除溶劑，將殘留物懸浮在二乙醚中、過濾、用二乙醚洗滌、干燥，給出10.1g(93％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 132(M+)分析 C8H9N2Cl計(jì)算；C，56.98；H，5.38；N，16.61；Cl，21.02；實(shí)測C，56.36；H，5.46；N，16.22；Cl，21.31。
B)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CN的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從EtSO2-D-Phe-Pro-OH和p-NH2CH2-C6H4CN·HCl制備了1.5g(80％)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CN。IR1H NMRFD-MS，m/e 468(M+)分析 C24H28N4O4S計(jì)算 C，61.52；H，6.02；N，11.90；實(shí)測 C，61.23；H，6.13；N，11.80。
C)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(＝NOH)NH2HCl的制備向EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CN(1g，2.1mmol)的絕對乙醇(35ml)溶液中添加N，N-二異丙基乙胺-(0.47ml，2.7mmol)，隨后添加鹽酸羥胺(185mg，2.7mmol)，使溶液開始回流。16小時后，使溶液冷卻、真空脫除溶劑。此物料取250mg繼續(xù)進(jìn)行下一步，其余部分用RPHPLC純化(方法1，90/10(A/B)；在200分鐘內(nèi)遞減至60/60(A/B))。IR1H NMRFD-MS，m/e 501(M+)分析 C24H31N5O5S·1.2HCl·H2O計(jì)算 C，51.17；H，6.12；N，12.42；Cl，7.55；實(shí)測 C，51.04；H，5.81；N，12.39；Cl，7.18。
D)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制備向EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl(250mg，0.52mmol)的乙醇(40ml)和水(19ml)溶液中添加1N HCl(1ml)，隨后添加5％Pd/C(250mg)。這種攪拌的懸浮液在氫氣氛下放置18小時，然后過濾、濃縮、用RPHPLC純化(方法1，90/10(A/B)，在200分鐘內(nèi)遞減至60/40(A/B))，給出140mg(52％)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 486(M+)分析C24H31N5O4S·HCl·1.5H2O計(jì)算C，52.50；H，6.42；N，12.75；實(shí)測C，52.56；H，6.19；N，12.59。
另5g產(chǎn)品用實(shí)例15所述的方法制備，用RPHPLC純化(方法3；98/2(A/B)，60分鐘，在300分鐘內(nèi)遞減至60/40(A/B))。
實(shí)例24 EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HClA)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(＝NOH)NH2的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23所述的那些方法，用m-BrCH2-C6H4CN代替p-BrCH2-C6H4CN，制備了EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2-C6H4C(＝NOH)NH2。此結(jié)晶中間體的140mg(13％)予以保留，其余部分繼續(xù)進(jìn)行步驟B。1H NMRFD-MS，m/e 502(M+)分析C24H31N5O5S計(jì)算C，57.47；H，6.23；N，13.96；實(shí)測C，57.28；H，6.21；N，13.66。
B)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-C和23-D所述的那種方法，制備了0.27g(28％，2步)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 486(M+)分析C24H31N5O4S·1.1HCl·2H2O計(jì)算C，51.32；H，6.48；N，12.47；Cl，6.94；實(shí)測C，51.33；H，6.09；N，12.20；Cl，6.66。
實(shí)例25 D-1-Piq-Pro-m-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl用基本上相當(dāng)于實(shí)例23所述的那種方法，從Cbz-D-1-Piq-Pro-OH和m-NH2CH2-C6H4CN·HCl制備了0.86g D-1-Piq-Pro-m-NHCH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 412(M+)分析C23H33N5O2·2.5HCl·0.5H2O計(jì)算C，53.99；H，7.19；N，13.69；實(shí)測C，54.19；H，7.02；N，13.81。
實(shí)例26 EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl
A)對氰基-反式-肉桂酸甲酯的制備在0℃攪拌下，向NaH(6.1g 60％油懸浮液，153mmol)和對氰基苯甲醛(20g，1531mmol)的四氫呋喃(250ml)懸浮液中，通過加料漏斗添加膦酰乙酸三甲酯(28g，153mmol)的四氫呋喃(50ml)溶液。攪拌48小時后，真空脫除溶劑，粗殘留物溶解在乙酸乙酯(500ml)中。乙酸乙酯溶液用水洗滌1次，用飽和NaHSO3水溶液洗滌3次，用鹽水洗滌1次。然后，有機(jī)相用MgSO4干燥、過濾、真空濃縮，給出28g(98％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 187(M+)B)對氰基-二氫肉桂酸甲酯的制備向?qū)η杌?反式-肉桂酸甲酯(13.6g，73mmol)的甲苯(485ml)溶液中添加5％Pd/ BaSO4(2.7g)。在4巴(60psi)的氫氣下9小時后，將溶液過濾、真空濃縮、硅膠柱色譜法純化，用己烷直至30％乙酸乙酯/己烷的步進(jìn)梯度洗脫。含產(chǎn)品的級分合并、濃縮，給出10.6g(77％)無色油狀物。IR1H NMRFD-MS，m/e 189(M+)C)對氰基-二氫肉桂酸的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-D所述的那種方法，利用1.1當(dāng)量LiOH·H2O，從對氰基-二氫肉桂酸甲酯制備5.1g(58％)對氰基-二氫肉桂酸。IR1H NMRFD-MS，m/e 175(M+)D)Boc-p-NHCH2CH2-C6H4CN的制備向?qū)η杌?二氫肉桂酸(6.7g，38.2mmol)和三乙胺(5.9ml，42mmol)的叔丁醇(150ml)溶液中添加二苯基磷酰疊氮(11.6g，42mmol)，使溶液開始回流。攪拌過夜后，使溶液冷卻，真空脫除溶劑。殘留物溶解在乙酸乙酯中，用1N檸檬酸洗滌3次，用鹽水洗滌1次，用飽和NaHCO3水溶液洗滌2次，然后干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮。然后，殘留物用硅膠柱色譜法純化，以10％乙酸乙酯/己烷直到50％乙酸乙酯/己烷洗脫。用TLC判斷的含產(chǎn)品級分合并、濃縮，給出5.4g(57％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 246(M+)分析C14H18N2O2計(jì)算C，68.27；H，7.37；N，11.37 ；實(shí)測C，68.39；H，7.50；N，11.40.
E)p-NH2CH2CH2-C6H4CN·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A所述的那些方法，制備了3.6g(98％)p-NH2CH2CH2-C6H4CN·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 147(MH+)分析C9H11N2Cl計(jì)算C，59.18；H，6.07；N，15.34；Cl，19.41；實(shí)測C，58.90；H，6.16；N，15.20；Cl，19.30.
F)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4CN的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那些方法，從EtSO2-D-Phe-Pro-OH和p-NH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制備了1.5g EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4CN.。IR1H NMRFD-MS，m/e 482(M+)G) EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl的制備在攪拌下，向EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4CN(1g，2.07mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.45ml，2.59mmol)的溶液中添加鹽酸羥胺(180mg，2.59mmol)，使溶液開始回流。18小時后，讓溶液冷卻、真空脫除溶劑、殘留物溶解在乙酸(15ml)中，用RPHPLC純化(方法2，90/10(A/B)；在200分鐘內(nèi)遞減至60/40(A/B))。用分析型RPHPLC確定的、含有純EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl的級分合并，像以上所述那樣調(diào)節(jié)pH、凍干，給出0.35g(31％)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 516(M+)分析 C25H33N5O5S·HCl·H2O計(jì)算C，52.67；H，6.36；N，12.28；Cl，6.22；實(shí)測C，52.40；H，6.10；N，12.25；Cl，6.51H)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-D所述的那種方法，從EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl制備了0.098g(50％)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 500(M+)分析 C25H33N5O4S·2.6HCl·H2O計(jì)算C，49.03；H，6.19；N，11.44；實(shí)測C，48.87；H，5.79；N，11.15.
實(shí)例27 EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HClA)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例26-A至26-E和24-A所述的那些方法，從間氰基苯甲醛制備了0.15g EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2。1H NMRFD-MS，m/e 516(M+)分析 C25H33N5O5S計(jì)算C，58.23；H，6.45；N，13.50；實(shí)測C，57.99；H，6.57；N，13.28.
B)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于24-B所述的那種方法，從EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2制備了0.21g(20％)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 500(M+)分析 C25H33N5O4S·2.1HCl·0.7H2O計(jì)算C，51.00；H，6.25；N，11.89；實(shí)測C，50.79；H，5.86；N，11.54.
實(shí)例28 D-l-Piq-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·2HCl用基本上相當(dāng)于實(shí)例23所述的那種方法，從Cbz-D-1-Piq-Pro-OH和p-NH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制備了0.85g 1-Piq-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·2HCl。1H NMRFD-MS、m/e 426 (M+)分析 C24H35N5O2·2HCl·2H2O計(jì)算C，53.93；H，7.73；N，13.10 ；實(shí)測C，53.94；H，7.60；N，13.06.
實(shí)例29 D-1-Piq-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·2HCl用基本上相當(dāng)于實(shí)例23所述的那種方法，從Cbz-D-1-Piq-Pro-OH和m-NH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制備了0.8g 1-Piq-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·2HCl。1H NMRFD-MS，m/e 426(M+)分析 C24H35N5O2·2HCl·2H2O計(jì)算C，53.93；H，7.73；N，13.10 ；實(shí)測C，53.62；H，7.57；N，13.18.
實(shí)例30 EtSO2-3-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HClA)p-HOCH2CH2CH2-C6H4CN的制備在攪拌下，向?qū)η杌?二氫肉桂酸甲酯(10g，53mmol)的四氫呋喃(150ml)溶液中添加LiBH4(1.15g，53mmol)，溶液加熱回流。2小時后，將溶液冷卻，滴加磷酸鈉緩沖劑(pH7)。氣體釋放完成后，添加乙酸乙酯和水，將兩層分離。水相用乙酸乙酯萃取1次，合并的乙酸乙酯相用鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥，過濾。濃縮，給出8.1g(95％)粘稠無色油狀物。IR1H NMRFD-MS，m/e 161(M+)B)p-BrCH2CH2CH2-C6H4CN的制備在攪拌下，向p-HOCH2CH2CH2-C6H4CN(8.1g，50mmol)的四氫呋喃(100ml)溶液中添加三苯膦(14.4g，55mmol)，隨后添加四溴化碳(18.2g，55mmol)。攪拌18小時后，真空脫除溶劑，殘留物用硅膠柱色譜法純化，以己烷直至20％乙酸乙酯/己烷的步進(jìn)梯度洗脫。用TLC判斷的含產(chǎn)品級分合并、濃縮，給出7.3g(65％)粘稠無色油狀物。IR1H NMRFD-MS，m/e 223 (M+)分析C10H10BrN計(jì)算C，53.60；H，4.50；N，6.25；實(shí)測C，53.90；H，4.67；N，6.24.
C)p-Boc2NCH2CH2CH2-C6H4CN的制備在攪拌下，向NaH(1.4g 60％油分散液，34mmol)的DMF(100ml)懸浮液中，通過加料漏斗滴加亞氨基二羧酸二叔丁酯(7.4g，34mmol)的DMF(20ml)溶液。氣體釋放完成后，通過加料漏斗添加p-BrCH2CH2CH2-C6H4CN(7g，31mmol)的DMF溶液，把溶液加熱到70℃。攪拌12小時后，將溶液冷卻、真空脫除溶劑。殘留物溶解在二乙醚中，用水洗滌3次。有機(jī)相用MgSO4干燥、過濾、濃縮，殘留物用硅膠柱色譜法純化，以己烷直至20％乙酸乙酯/己烷洗脫。含產(chǎn)品的級分合并、濃縮，給出9.38g(84％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 361(M+)分析C20H28N2O4計(jì)算C，66.64；H，7.83；N，7.77；實(shí)測C，66.40；H，7.81；N，7.57.
D)p-NH2CH2CH2CH2-C6H4CN·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A所述的那種方法，制備了4.3g(84％)p-NH2CH2CH2CH2-C6H4CN·HCl。IR1H NMRFD-MS，m/e 160(M+)E)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl的的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G和26-G所述的那些方法，從EtSO2-D-Phe-Pro-OH和p-NHCH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制備了0.32g EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 530(M+)分析 C26H35N5O5S·1.2HCl·H2O計(jì)算C，52.88；H，6.51；N，11.84；實(shí)測C，52.71；H，6.26；N，11.76.
F)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-D所述的那種方法，從EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl制備了0.13g(67％)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 514 (M+)分析 C26H35N5O4S·1.5HCl·2H2O計(jì)算C，51.67；H，6.75；N，11.59；實(shí)測C，51.36；H，6.46；N，11.28.
實(shí)例31 EtSO2-D-phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HClA)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G和26-G所述的那些方法，從間氰基-二氫肉桂酸制備了0.32g EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 530(M+)分析 C26H35N5O5S·HCl·1.1H2O計(jì)算C，53.30；H，6.57；N，11.95；Cl，6.05；實(shí)測C，52.97；H，6.19；N，11.96；Cl，6.13.
B)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-D所述的那種方法，從EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NOH)NH2·HCl制備了0.12g(62％)EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 514(M+)分析 C26H35N5O4S·1.5HCl·H2O計(jì)算C，53.26；H，6.62；N，11.94 ；實(shí)測C，53.19；H，6.25；N，12.00.
實(shí)例32 1-Piq-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·2HCl用基本上相當(dāng)于實(shí)例23所述的那種方法，從1-Piq-Pro-OH和p-NH2CH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制備了0.66g(48％)1-Piq-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 440(M+)分析 C25H37N5O2·2.1HCl·H2O計(jì)算C，56.21；H，7.75；N，13.11；實(shí)測C，56.36；H，7.44；N，12.79.
實(shí)例33 1-Piq-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·2HCl用基本上相當(dāng)于實(shí)例23所述的那種方法，從1-Piq-Pro-OH和m-NH2CH2CH2CH2-C6H4CN·HCl制備了0.64g(46％)1-Piq-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(＝NH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 440(M+)分析 C25H37N5O2·2HCl·H2O計(jì)算C，56.60；H，7.79；N，13.20；實(shí)測C，56.92；H，7.55；N，13.26.
實(shí)例34 EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·HClA)Boc-p-NHCH2C6H4NO2的制備在攪拌下，向4-硝基芐胺鹽酸鹽(15g，79mmol)和N，N-二異丙基乙胺(14ml，79mmol)的二氯甲烷(200ml)溶液中添加草酸二叔丁酯(17g，79mmol)。48小時后，真空脫除溶劑，殘留物溶解在乙酸乙酯(500ml)中，用1M檸檬酸洗滌2次，用水洗滌1次，用飽和NaHCO3水溶液洗滌1次。有機(jī)相用MgSO4干燥、過濾、真空濃縮，給出一種灰白色固體，后者用氯仿/己烷重結(jié)晶。將三茬晶體合并、用己烷洗滌、真空干燥，給出11.5g(58％)灰白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 252(M+)分析C12H16N2O4計(jì)算C，57.13；H，6.39；N，11.10；實(shí)測C，57.27；H，6.60；N，11.13.
B)p-BocNHCH2C6H4NH2的制備在0℃攪拌下，向p-BocNHCH2C6H4NO2(7.5g，29.7mmol)和NiCl2·6H2O(17.7g，74.3mmol)的甲醇(150ml)溶液中，在30分鐘內(nèi)分若干小批添加NaBH4(5.6g，149mmol)。NaBH4添加完成之后15分鐘，使溶液真空蒸發(fā)，殘留物溶解在濃氫氧化銨中，用二氯甲烷萃取2次。合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，用MgSO4干燥、過濾、真空濃縮，給出6.4g(97％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 222 (M+)分析C12H18N2O2計(jì)算C，64.84；H，8.16；N，12.60 ；實(shí)測C，65.10；H，8.42；N，12.76.
C)N，N’二Cbz-S-甲基異硫脲的制備在攪拌下，向二-S-甲基異硫脲硫酸鹽(20g，144mmol)的二氯甲烷(200ml)懸浮液中添加5N氫氧化鈉(16ml)。使溶液冷卻到0℃，滴加氯甲酸芐酯(41ml，288mmol)。同時，以能使溶液的pH保持在大約11的速率添加2N氫氧化鈉。然后撤去冷浴，回升到室溫后，將兩相分離，水相用二氯甲烷(250ml)萃取。然后，合并的有機(jī)相用0.1N HCl(250ml)洗滌2次、用鹽水(250ml)洗滌1次。然后，有機(jī)相用MgSO4干燥、過濾、真空濃縮，給出41g(79％)粘稠無色糖漿狀物。1H NMRD)p-BocNHCH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz的制備在攪拌下，向p-BocNHCH2C6H4NH2(5g，22.5mmol)的四氫呋喃(50ml)溶液中添加N，N,N’二Cbz-S-甲基異硫脲(8.9g，24.7mmol)。48小時后，真空脫除溶劑，殘留物溶解在氯仿中，添加硅膠，真空脫除溶劑，給出一種灰白色粉末，然后將其干裝填到硅膠柱上。然后，該柱以5％乙酸乙酯/己烷直至30％乙酸乙酯/己烷的步進(jìn)梯度洗脫。含產(chǎn)品的級分(用TLC確定)合并、真空濃縮，給出7.6g(63％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 532(M+)分析C29H32N4O6計(jì)算C，65.40；H，6.06；N，10.52；實(shí)測C，65.66；H，6.35；N，10.59.
E)HCl·p-NH2CH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A所述的那種方法，從p-BocNHCH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz制備4.7g(89％)白色固體狀HCl·p-NH2CH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz。IR1H NMRFD-MS，m/e 433(MH+)F)EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G和實(shí)例18-F所述的那些方法，從EtSO2-D·Phe-ProOH和HCl·p-NH2CH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz制備了1.1g EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl。IR1H NMRFD-MS，m/e 501 (M+)分析C24H32N6O4S·HCl·H2O計(jì)算C，51.73；H，6.36；N，15.14；實(shí)測C，52.32；H，5.99；N，14.79.
實(shí)例35 EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl用基本上相當(dāng)于實(shí)例34所述的那些方法，從4-硝基苯乙胺·HCl制備1.8g EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4CNH(NH)NH2·HCl。IR1H NMRFD-MS，m/e 515(MH+)HRMS(FAB)，m/e計(jì)算C25H35N6O4S515.2441實(shí)測515.2483。
實(shí)例36 EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl用基本上相當(dāng)于實(shí)例30-C和34-B直至34-F所述的那些方法，從3-硝基芐基溴制備了1.8g EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl。IR1H NMRFD-MS，m/e 501(MH+)HRMS(FAB)，m/e計(jì)算C24H33N6O4S501.2284實(shí)測501.2280。
實(shí)例37 EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl用基本上相當(dāng)于實(shí)例26-D、26-B(用5％Pd/C代替Pd/BaSO4，用乙酸乙酯代替甲苯)和34-D直至34-F所述的那些方法，從3-硝基肉桂酸制備了0.85g EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 515(MH+)分析 C25H34N6O4S·2.2HCl·0.5H2O計(jì)算C，49.73；H，6.21；N，13.92 ；實(shí)測C，49.45；H，5.82；N，13.55.
實(shí)例38 D-1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl用基本上相當(dāng)于實(shí)例34所述的那些方法，制備了0.94g D-1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl。最終產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法2，98/2(A/B)，遞減至70/30(A/B)，180分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 427(MH+)分析 C23H34N6O2·2HCl計(jì)算C，55.31；H，7.26；N，16.82；Cl，14.20；實(shí)測C，55.05；H，7.23；N，16.55；Cl，14.24.
實(shí)例39 D-1-piq-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl用基本上相當(dāng)于實(shí)例35所述的那些方法，制備了1.03g D-I-Piq-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl。最終產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法2，98/2(A/B)，遞減至70/30(A/B)，180分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 441(M+)分析 C24H36N6O2·2HCl·1.5H2O計(jì)算C，53.33；H，7.65；N，15.55；Cl，13.12；實(shí)測C，53.41；H，7.45；N，15.37；Cl，13.48.
實(shí)例40 D-1-Piq-Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl用基本上相當(dāng)于實(shí)例36所述的那些方法，制備了1.04g D-1-Piq-Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl。最終產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法2，98/2(A/B)，遞減至70/30(A/B)，180分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 427(M+)分析 C23H34N6O2·2HCl·H2O計(jì)算C，53.38；H，7.40；N，16.24；Cl，13.70；實(shí)測C，53.25；H，7.50；N，16.23；Cl，13.88.
實(shí)例41 D-1-Piq-Pro-m-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl
用基本上相當(dāng)于實(shí)例37所述的那些方法，制備了0.96g D-1-Piq-Pro-m-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2·2HCl。最終產(chǎn)品用RPHPLC純化(方法2，98/2(A/B)，遞減至70/30(A/B)，180分鐘)。1H NMRFD-MS，m/e 441(M+)分析 C24H36N6O2·2.1HCl·1.5H2O計(jì)算C，52.97；H，7.61；N，15.44；Cl，13.68 ；實(shí)測C，52.80；H，7.57；N，15.46；Cl，13.35.
實(shí)例42 D-l-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HClA)Cbz-DL-1-Piq-Cis-Ohi-OEt的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-A所述的那種方法，從Cbz-DL-1-Piq-OH和Cis-Ohi-OEt·HCl制備了16.6g(100％)Cbz-DL-1-Piq-cis-Ohi-OEt。1H NMRFD-MS，m/e 496(M+)分析C29H40N2O5計(jì)算C，70.13；H，8.12；N，5.64 ；實(shí)測C，69.96；H，8.23；N，5.73.
B)Cbz-D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-D和18-E所述的那些方法，從Cbz-D，L-1-Piq-Pro-OH和p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制備了Cbz-D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz和Cbz-L-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。這些非對映體用硅膠柱色譜法分離，利用乙酸乙酯/己烷梯度洗脫。含前導(dǎo)非對映體的級分(Rf＝0.31，乙酸乙酯)合并、濃縮，給出1.3g Cbz-L-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。含拖尾非對映體的級分(Rf＝0.19，乙酸乙酯)合并、濃縮，給出1.5g白色泡沫狀Cbz-D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。1H NMRFD-MS，m/e 735(MH+)分析C43H51N5O6計(jì)算C，70.37；H，7.00；N，9.54；實(shí)測C，70.20；H，7.22；N，9.36C)D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-F所述的那種方法，從Cbz-D-1-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz制備了0.61g(63％)D-1-piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。這種情況下使用的HPLC梯度是在120分鐘內(nèi)從98/2(A/B)遞減至70/30(A/B)。1H NMRFAB-MS，m/e 466.4(MH+)分析 C27H39N5O2·2HCl·1H2O計(jì)算C，58.27；H，7.79；N，12.58；實(shí)測C，58.66；H，7.56；N，12.78.
實(shí)例43 D-3-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HClA)D-3-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-A、1-D、18-E和18-F所述的那些方法，制備了1.3g 3-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。這種情況下使用的HPLC梯度是在120分鐘內(nèi)從98/2(A/B)遞減至70/30(A/B)。1H NMRFAB-MS，m/e 466.4(MH+)分析 C27H39N5O2·2HCl計(jì)算C，60.22； H，7.67；N，13.00；實(shí)測C，59.95； H，7.73；N，12.89.
實(shí)例44 EtSO2-Phg-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl((S-順式)-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-1-[N-(乙磺酰)-D-苯甘氨酰]-1H-引哚-2-羧酰胺·鹽酸鹽)A)Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-A所述的那種方法，從Boc-D-Phg-OH和(S)-順式-八氫吲哚-2-羧酸乙酯·HCl制備了14.9g(58％)Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt。1H NMRFD-MS，m/e 430(M+)分析C24H34N2O5計(jì)算C，66.95；H，7.96；N，6.51；實(shí)測C，66.69；H，8.02；N，6.40.
B)D-Phg-cis-Ohi-OEt·HCl的制備向冷(0℃)攪拌的Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt的乙酸乙酯溶液中通入HCl氣體10分鐘。在回升到室溫同時攪拌2小時之后，真空脫除溶劑。所形成的固體懸浮在二乙醚中，隨后用過濾法分離，給出10.7g(97％)D-Phg-cis-Ohi-OEt·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 331(M+)分析C19H27N2O3Cl計(jì)算C，62.20；H，7.41；N，7.64；實(shí)測C，62.42；H，7.36；N，7.85.
C)EtOS2-D-Phg-cis-Ohi-OEt的制備在-78℃，向D-Phg-cis-Ohi-OEt·HCl(10g，27mmol)和N，N-二異丙基乙胺(10.7ml，61mmol)的THF(200ml)溶液中，通過加料漏斗滴加乙磺酰氯(3.9g，30mmol)的THF(20ml)溶液。然后撤去冷浴，讓溶液慢慢回升至室溫。約18小時后，溶液真空濃縮。殘留物溶解在乙酸乙酯(200ml)中，用1N檸檬酸(200ml)、飽和NaHCO3水溶液(200ml)和鹽水(200ml)各洗滌2次。然后，有機(jī)相用MgSO4干燥、過濾，真空濃縮，給出11.2g(97％)黃色泡沫狀物。1H NMRFD-MS，m/e 422(M+)分析C21H30N2O5S計(jì)算C，59.69；H，7.16；N，6.63；實(shí)測C，59.94；H，7.08；N，6.78.
D)EtSO2-Phg-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-D、18-E和18-F所述的那些方法，得到了0.62g EtSO2-Phg-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。這種情況下使用的HPLC梯度是在120分鐘內(nèi)從90/10(A/B)遞減至60/40(A/B)。1H NMRFAB-MS，m/e 526.3(MH+)分析C27H35N5O4S·HCl計(jì)算C，57.69；H，6.45；N，12.46；實(shí)測C，57.47；H，6.48；N，12.20.
實(shí)例45 EtSO2-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl((S-順式)-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-1-[N-(乙磺酰)-D-苯丙氨酰]-1H-引哚-2-羧酰胺·鹽酸鹽)A) EtSO2-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例44所述的那些方法，從Boc-D-Phe-OH制備了1.5g EtSO2-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。1H NMRFAB-MS，m/e 540.3(MH+)分析C28H37N5O4S·HCl·H2O計(jì)算C，56.51； H，6.94；N，11.77；實(shí)測C，56·24；H，6.55；N，11.72.
實(shí)例46 HOOCCH2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(N-(羧甲基)-D-苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)
A)N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OBn的制備向D-Phe-Pro-OBn·HCl(20g，51mmol)的DMF(100ml)溶液中一次性添加溴乙酸叔丁酯(9.9g，56mmol)，并在30分鐘內(nèi)滴加N，N-二異丙基乙胺(17.4ml，101mmol)。此混合物在室溫攪拌18小時。然后，一次性添加草酸二叔丁酯(16.6g，76mmol)和N，N-二異丙基乙胺(13.2ml，76mmol)，反應(yīng)混合物再攪拌24小時。真空脫除溶劑，讓殘留物在乙酸乙酯(1L)和1 M檸檬酸水溶液(500ml)之間分配。將兩層分離，有機(jī)相用1M檸檬酸水溶液洗滌1次、用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌2次、用鹽水洗滌1次(各500ml)。有機(jī)相干燥(Na2SO4)、過濾、真空濃縮。這種琥珀色油狀物用硅膠柱色譜法純化，以乙酸乙酯/己烷梯度(己烷到30％乙酸乙酯/己烷)洗脫，含產(chǎn)品的級分合并、濃縮，給出19.0g(66％)無色油狀物，靜置時慢慢結(jié)晶。1H NMRFD-MS，m/e 566(M+)分析C32H42N2O7計(jì)算C，67.82；H，7.47；N，4.94；實(shí)測C，68.06；H，7.33；N，5.17.
B)N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH的制備向N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OBn(18.5g，33mmol)的乙酸乙酯(250ml)溶液中添加5％Pd/C催化劑(5g)。此溶液真空脫氣若干次，在氫氣氛下攪拌放置2小時。取走氫氣源，添加硅藻土，漿狀物用一層硅藻土過濾。濾液真空濃縮，給出13.2g(84％)白色泡沫狀物。1H NMRFD-MS，m/e 476(M+)分析C25H36N2O7計(jì)算C，63.01；H，7.61；N，5.88；實(shí)測C，63.23；H，7.73；N，5.59.
C)N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-E的方法，從N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH和p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制備了2.7g(90％)N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。1H NMRFD-MS，m/e 743 (MH+)分析C41H51N5O8計(jì)算C，66.38；H，6.93；N，9.44；實(shí)測C，66.08；H，6.92；N，9.16.
D)HOOCCH2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備向冷卻的(℃)，N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz(2.2g，3mmol)的二噁烷(100ml)溶液中通入HCl氣體10分鐘。在回升至室溫的同時攪拌3小時之后，真空脫除二噁烷。殘留物溶解在絕對乙醇(150ml)、水(75ml)和1N HCl(6ml)的混合液中。向其中添加5％Pd/C(1g)。真空脫氣之后，此混合物在氫氣氛下放置16小時同時在室溫攪拌。添加硅藻土，形成的漿狀物用一層硅藻土過濾。濾液真空濃縮成殘留物，此殘留物立即用HPLC方法2純化(2小時內(nèi)從98/2(A/B)遞減至70/30(A/B))。含純產(chǎn)品的級分合并、凍干，給出1.1g(72％)白色固體。1H NMRFAB-MS，m/e 452.3(MH+)分析C24H29N5O4·2HCl計(jì)算C，54.97；H，5.96；N，13.35；實(shí)測C，55.21；H，6.11；N，13.39.
實(shí)例47 HOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl
A)t-BuOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-OEt的制備向D-Phe-cis-Ohi-OEt·HCl(30g，79mmol)的乙腈(400ml)溶液中添加N，N-二異丙基乙胺(41ml，236mmol)和溴乙酸叔丁酯(14ml，87mmol)。將此溶液溫?zé)嶂?0℃，并在此溫度保持3小時。冷卻至室溫后，溶液真空濃縮。殘留物溶解在乙酸乙酯(300ml)中，此溶液用飽和氯化銨水溶液(200ml)洗滌2次、用飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)洗滌2次、用鹽水(200ml)洗滌2次。有機(jī)層干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出一種橙色油狀物，用硅膠柱色譜法純化，以己烷至1∶1己烷/乙酸乙酯的梯度洗脫。含產(chǎn)品的級分(用TLC判斷)合并、濃縮，給出33,2g(92％)無色油狀物。1H NMRFD-MS，m/e 458(M+)分析C26H38N2O5計(jì)算C，68.10；H，8.35；N，6.11 ；實(shí)測C，68.37；H，8.47；N，5.90.
B)N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-cis-Ohi-OH的制備向t-BuOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-OEt(30g，65mmol)的THF(200ml)溶液中添加N，N-二異丙基乙胺(17ml，98mmol)和草酸二叔丁酯(15.7g，72mmol)。讓此溶液開始緩緩回流并使之保持16小時。停止加熱，一旦冷卻就使溶液真空濃縮。殘留物溶解在乙酸乙酯(400ml)中，用1.0M檸檬酸(200ml)洗滌2次、用飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)洗滌2次、用鹽水(200ml)洗滌2次。有機(jī)溶液干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出一種黃色油狀物。將一份這種油狀物(24.8g，44mmol)溶解在300ml二噁烷中。向其中添加一種含有2.05gLiOH·H2O(49mmol)和150ml水的溶液。此混合物在室溫攪拌5小時，此時添加100ml飽和氯化銨水溶液。真空脫除溶劑，殘留物在飽和碳酸氫鈉水溶液與二乙醚之間分配。將兩層分離，水層用檸檬酸酸化到pH3。這種酸性水溶液用二乙醚(200ml)萃取3次，這些萃取物合并、干燥(MgSO4)、過濾、濃縮，給出24.3g白色泡沫狀N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-cis-Ohi-OH。1H NMRFD-MS，m/e 530(M+)分析C29H42N2O7計(jì)算C，65.64；H，7.98；N，5.28 ；實(shí)測C，65.39；H，8.04；N，5.39.
C)HOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-E和46-D所述的那些方法，得到1.2g(67％)HOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。1H NMRFAB-MS，m/e 506.3(MH+)分析C28H35N5O4·2HCl·H2O計(jì)算C，57.24；H，6.52；N，11.92 ；實(shí)測C，57.40；H，6.30；N，11.69.
實(shí)例48 HOOCCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺)A)HOOCCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例46所述的那些方法，制備了0.92g HOOCCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 458(M+)分析C24H35N5O4·HCl·0.5H2O計(jì)算C，57.30；H，7.41；N，13.92；實(shí)測C，57.52；H，7.29；N，13.83.
實(shí)例49 HOOCCH2-D-Cha-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl((S-順式)-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-1-[N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰]-1H-吲哚-2-羧酰胺·鹽酸鹽)A)HOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例實(shí)例1-A和1-D、18-E、44-B、47-A(用溴乙酸芐酯)和18-F所述的那些方法，從Boc-D-Cha和cis-Ohi-OEt·HCl出發(fā)，得到了0.75g HOOCCH2-D-Cha-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。用HPLC方法2，利用在3小時內(nèi)從98/2(A/B)至70/30(A/B)的梯度，進(jìn)行這種材料的純化。1H NMRFAB-MS，m/e 512.3(MH+)分析C28H41N5O4·HCl計(jì)算C，61.36；H，7.72；N，12.78；實(shí)測C，61.08；H，7.47；N，12.53.
實(shí)例50 HOOCCH2-D-Phe-Pro(4-順-異戊基)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HClA)Cbz-Pro(4-反式-OH)-OEt的制備向Cbz-Pro(4-反式-OH)-OH(33g，124mmol)的乙醇(500ml)溶液中添加對甲苯磺酸(1g)，溶液加熱回流。16小時后，將溶液冷卻至室溫，真空脫除溶劑。殘留物溶解在乙酸乙酯(400ml)中，用飽和NaHCO3水溶液洗滌2次、用飽和氯化鈉水溶液洗滌2次。該乙酸乙酯溶液用MgSO4干燥、過濾、真空濃縮，給出34.5g(95％)無色油狀物。1H NMRFD-MS，m/e 293(M+)分析C15H19NO5計(jì)算C，61.42；H，6.53；N，4.77 ；實(shí)測C，61.20；H，6.65；N，4.73.
B)Cbz-Pro(4-氧代)-OEt的制備在1L圓底燒瓶中，用機(jī)械攪拌法，使Cbz-Pro(4-順式-OH)-OEt(32.7g，111mmol)溶解在二氯甲烷(500ml)中。向此溶液中分批添加3A分子篩(100g)和氯鉻酸吡啶鎓(60g，278mmol)，每批數(shù)量要小到足以保持有效攪拌。在室溫攪拌12小時之后，添加二乙醚(200ml)，將黑色漿狀物從焦油狀殘留物中潷析出來，并使之迅速通過硅膠(200g)柱。殘留物用二氯甲烷(200ml)洗滌2次，合并的洗滌液也通過該硅膠柱。濾液迅速通過一根硅膠柱，以1∶1乙酸乙酯/己烷(4L)洗脫，收集500ml級分。所有含產(chǎn)品的級分(用TLC判斷)合并、真空濃縮，給出23.8g(74％)無色油狀物。1H NMRFD-MS，m/e 291(M+)分析C15H17NO5計(jì)算C，61.85；H，5.88；N，4.81；實(shí)測C，61.57；H，5.82；N，4.71.
C)Cbz-Pro(4-異丁基次甲基)-OEt的制備在-個配備氮?dú)馊肟?、磁攪拌棒和加料漏斗的、烘箱干燥?頸2L圓底燒瓶中，使叔丁醇鉀(34g，288mmol)懸浮在四氫呋喃(800ml)中。向此懸浮液中分若干批添加溴化異戊基三苯鏻(120g，288mmol)。攪拌30分鐘后，用1小時時間通過加料漏斗滴加Cbz-Pro(4-氧代)-OEt(70g，240mmol)的四氫呋喃(150ml)溶液。再攪拌2小時后，添加飽和NH4Cl水溶液(100ml)。此溶液用乙酸乙酯(750ml)稀釋，將各層分離。有機(jī)層用1N檸檬酸洗滌2次、用飽和NaHCO3水溶液洗滌2次、用飽和氯化鈉水溶液洗滌2次。有機(jī)溶液用MgSO4干燥、過濾、濃縮，給出一種黃色油狀物。這種油狀物用硅膠閃急色譜法純化，以2∶1己烷/乙酸乙酯洗脫。含產(chǎn)品的級分(用TLC判斷)合并，真空濃縮，給出37g(45％)無色油狀物。1H NMRFD-MS，m/e 345(M+)分析C20H27NO4計(jì)算C，69.54；H，7.88；N，4.05；實(shí)測C，69.74；H，7.85；N，3.99.
D)Pro(4-順式-異戊基)-OEt·HCl的制備向Cbz-Pro(4-異丁基次甲基)-OEt(37g，107mmol)的乙醇(500ml)溶液中添加5％Pd/C(5g)。向此溶液中通入氮?dú)?分鐘，然后通入氫氣3小時。此溶液通過一層硅藻土過濾。然后，向該溶液中通入氯化氫氣體直至飽和，然后將該溶液真空濃縮，給出26g(97％)琥珀色油狀物。1H NMRFD-MS，m/e 214(M+)分析C12H24ClNO2計(jì)算C，57.70；H，9.68；N，5.61；實(shí)測C，57.46；H，9.50；N，5.82.
E)HOOCCH2-D-Phe-Pro(4-cis-異戊基)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-A和1-D、18-E、44-B、47-A(用溴乙酸芐酯)與18-F所述的那些方法，從Boc-D-Cha和Pro(4-cis-異戊基)-OEt·HCl出發(fā)，得到0.27g HOOCCH2-D-Phe-Pro(4-cis-異戊基)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。用HPLC方法2，以在3小時內(nèi)從98/2(A/B)到50/50(A/B)的梯度，進(jìn)行此材料的純化。1H NMRFAB-MS，m/e 528.4(MH+)分析C29H45N5O4·1.9HCl計(jì)算C，58.34；H，7.92；N，11.73；Cl，11.28；實(shí)測C，58.30；H，7.85；N，11.83；Cl，11.27.
實(shí)例51 D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl(D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·二鹽酸鹽)A)Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-A、46-E和18-E所述的那些方法，從Boc-D-Cha-Pro-OH出發(fā)，制備了32.5g(94％)Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。1H NMRFD-MS，m/e 634(MH+)分析C35H47N5O6計(jì)算C，66.33；H，7.47；N，11.05；實(shí)測C，66.30；H，7.47；N，11.26.
B)D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A所述的那種方法，從Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz制備了9.6g(101％)D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl。1H NMRFD-MS，m/e 534(M+)分析C30H41N5O4Cl2計(jì)算C，59.40；H，6.81；N，11.54；Cl，11.69；實(shí)測C，59.54；H，6.80；N，11.77；Cl，11.21.
C)D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-F所述的那種方法，制備了0.74g(62％)D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·2HCl。用HPLC方法2，以在2.5小時內(nèi)從98/2(A/B)到75/25(A/B)的梯度，進(jìn)行此材料的純化。1H NMRFAB-MS，m/e 400.3(M+)分析C22H33N5O2·2.1HCl計(jì)算C，55.50；H，7.43；N，14.71；Cl，15.64；實(shí)測C，55.64；H，7.50；N，14.65；Cl，15.81.
實(shí)例52 HOOCCH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(N-(2-羧乙基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)A)HOOCCH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備在攪拌下，將D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl(2.5g，4.1mmol)懸浮在EtOAc(100ml)中。向此懸浮液中添加1M KHCO3溶液(100ml)，混合物攪拌直至所有固體溶解。把混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，將兩層分離。有機(jī)層干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出1.24g白色固體狀游離堿。此固體溶解在EtOH(100ml)中。添加丙烯酸芐酯(0.41g，2.6mmol)，此溶液在室溫攪拌2天。然后，向此溶液中添加水(50ml)、1N HCl(4.6ml)和5％Pd/C(0.5g)，使正在攪拌的懸浮液脫氣并置于氫氣氛之下。16小時后。添加硅藻土，漿狀物用一層硅藻土過濾。濾液真空濃縮到25ml體積，用制備型RPHPLC方法2、以在2.5小時內(nèi)從98/2(A/B)到75/25(A/B)的梯度純化。含純產(chǎn)品的級分(用分析型HPLC判斷)合并、濃縮、凍干，給出0.27g(23％)HOOCCH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。1H NMRFAB-MS，m/e 472.4(MH+)分析C25H37N5O4·1.9HCl計(jì)算C，55.50；H，7.25；N，12.94；Cl，12.45；實(shí)測C，55.26；H，7.26；N，13.21；Cl，12.85.
實(shí)例53 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-哌啶·HCl
A)Boc-4-(氨基甲基)吡啶的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例34-A所述的那種方法，從4-(氨基甲基)吡啶制備19g(87％)Boc-4-(氨基甲基)吡啶。1H NMRB)4-BocNHCH2-N-Cbz-哌啶的制備4-BocNHCH2-吡啶(10g，48m0l)溶解在乙醇(280ml)中，添加5％Rh/C(10g)。此懸浮液在60℃、在氫氣氛(4.1巴，60psi)下?lián)u蕩過夜。然后將催化劑濾出，溶液真空濃縮，給出9.0g灰色固體。將1份3.2g該固體溶解在四氫呋喃(75ml)中，添加碳酸鉀(4.2g，30mmol)水溶液(75ml)。向這種正在攪拌的溶液中添加氯甲酸芐酯(2.3ml，16mmol)。15分鐘后，溶液真空濃縮到原體積的約1/2，然后用乙酸乙酯稀釋。將有機(jī)相分離、用鹽水洗滌、然后干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出4.6g(76％)白色固體。1H NMRFD-MS，m/e 349(M+)C)4-NH2CH2-N-Cbz-哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A所述的那種方法，從4-BocNHCH2-N-Cbz-哌啶制備了3g(84％)4-NH2CH2-N-Cbz-哌啶·HCl。IR1H NMRFD-MS，m/e 249(MH+)D)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH的制備N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH(13g，27mmol)溶解在乙醇(750ml)中，添加PtO2(13g)。此懸浮液在40℃、在4.1巴(60psi)氫氣氛下?lián)u蕩16小時。然后將催化劑濾出、濾液真空濃縮，給出11.7g(90％)白色泡沫狀物。IR1H NMRFD-MS，m/e 483(M+)分析C25H42N2O7計(jì)算C，62.22；H，8.77；N，5.80；實(shí)測C，62.99；H，8.96；N，5.48.
E)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G和實(shí)例46-D所述的那些方法，從N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH和HCl·4-NH2CH2-N-Cbz-哌啶制備了1.1g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-哌啶·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2以在2小時內(nèi)從98/2(A/B)遞減至70/30(A/B)的梯度純化。IR1H NMRFD-MS，m/e 423(M+)分析 C22H38N4O4·2HCl.1.5H2O計(jì)算C，50.57；H，8.29；N，10.72；實(shí)測C，50.31；H，8.46；N，10.93.
實(shí)例54 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-哌啶·HClHO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例52所述的那些方法，從4-氨基乙基吡啶制備了0.59g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-哌啶·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2以在2小時內(nèi)從98/2(A/B)直至70/30(A/B)的梯度純化。IR1H NMRFD-MS，m/e 437(M+)分析C23H40N4O4·2.5HCl·1.5H2O計(jì)算C，49.80；H，8.27；N，10.10；實(shí)測C，49.95；H，8.08；N，10.34.
實(shí)例55 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-哌啶·HClA)4-羥丙基-N-Cbz-哌啶的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例53-B所述的那些方法，從4-羥丙基吡啶制備28g(67％)4-羥丙基-N-Cbz-哌啶。1H NMRB)4-(NH2CH2CH2CH2)-N-Cbz-哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例30-B、30-C和30-D所述的那些方法，從4-羥丙基-N-Cbz-哌啶制備了7.3g 4-(NH2CH2CH2CH2)-N-Cbz-哌啶·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 276(M+)C)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例53-D和53-E所述的那些方法，從N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH和4-氨基丙基-N-Cbz-哌啶·HCl制備了0.39g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-哌啶·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2以在2小時內(nèi)從98/2(A/B)直到70/30(A/B)的梯度純化。IR1H NMRIS-MS，m/e 451.4(MH+)分析 C24H42N4O4·2HCl·H2O計(jì)算C，53.23；H，8.56；N，10.35；實(shí)測C，53.43；H，8.63；N，10.19.
實(shí)例56 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基哌啶·HCl(N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-六氫吡啶-4-基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于34-D、23-A、1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH)、18-E和1-H所述的那些方法，從4-BocNHCH2哌啶制備了0.35g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基哌啶·HCl。最終產(chǎn)品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)遞減至75/25(A/B)，150分鐘)純化。IR1H NMRFAB-MS，m/e 465(MH+)分析 C23H40N6O4·2HCl計(jì)算C，51.39；H，7.88；N，15.63；Cl，13.19；實(shí)測C，51.66；H，7.98；N，15.80；Cl，13.48.
實(shí)例57 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-1-咪基哌啶·HClHO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-1-咪基哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例34-D、23-A、1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH)，18-E和1-H所述的那些方法，從4-BocNHCH2CH2-哌啶制備了0.34g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-1-咪基哌啶·HCl。此最終產(chǎn)品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)遞減至75/25(A/B)，150分鐘)純化。IR1H NMRFAB-MS，m/e 479.4(MH+)分析C24H42N6O4·2HCl計(jì)算C，52.26；H，8.07；N，15.24；Cl，12.86；實(shí)測C，52.56；H，8.15；N，15.37；Cl，13.07。
實(shí)例58
HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，4-脫氫哌啶·HClA)4-BocNHCH2-N-甲基吡啶鎓碘化物的制備在攪拌下，向4-BocNHCH2-吡啶(20g，96mmol)的乙腈(200ml)溶液中添加碘甲烷(8.9ml，144mmol)。16小時后，溶液真空濃縮，給出33.8g(96％)粘稠淡黃色油狀物。FD-MS，m/e 223.1(M+)B)4-BocNHCH2-N-Fmoc-3，4-脫氫哌啶的制備在攪拌下，向碘化4-BocNHCH2-N-甲基吡啶鎓(7.7g，34mmol)的1，2-二氯乙烷(100ml)溶液中添加1，8-二(二甲胺基)萘(1.5g，6.8mmol)，隨后添加氯甲酸2-氯乙酯(5.3g，37ml)。溶液加熱回流，2小時后將溶液冷卻到室溫，真空脫除溶劑，殘留物迅速通過硅膠柱，用20％乙酸乙酯/己烷洗脫。真空脫除有機(jī)溶劑，殘留物溶解在甲醇(300ml)中，加熱回流20分鐘。然后添加飽和NaHCO3水溶液(100ml)，真空脫除溶劑。殘留物溶解在水(200ml)中，用己烷洗滌2次，然后用固體NaCl飽和，用乙酸乙酯萃取若干次。合并的乙酸乙酯萃取液干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出淡黃色油狀物，后者溶解在二氯甲烷(75ml)中。然后，向這種正在攪拌的溶液中添加N，N-二異丙基乙胺(2.1ml，12.2mmol)，然后添加氯甲酸9-芴基甲酯(3.2g，12.2mmol)。2小時后，真空脫除溶劑，殘留物溶解在乙酸乙酯(250ml)中，用1N檸檬酸洗滌2次、用鹽水洗滌1次、用飽和NaHCO3水溶液洗滌2次、最后用鹽水洗滌1次。然后將有機(jī)相干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，殘留物用硅膠柱色譜法純化，以5％乙酸乙酯/己烷直至50％乙酸乙酯/己烷的步進(jìn)梯度洗脫。含產(chǎn)品的級分(用TLC判斷)合并、濃縮，給出4g(27％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 435(M+)C)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-N-Fmoc-3，4-脫氫哌啶的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A和1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH)所述的那些方法，從4-BocNHCH2-N-Fmoc-3，4-脫氫哌啶制備了2.5g N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-N-Fmoc-3,4-脫氫哌啶。IR1H NMRFD-MS,m/e 799(M+)D)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，4-脫氫哌啶的制備N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-N-Fmoc-3，4-脫氫哌啶(1.5g，1.9mmol)溶解在嗎啉(25ml)中，攪拌5小時后真空蒸發(fā)溶劑。殘留物溶解在乙酸乙酯中，用飽和NaHCO3水溶液洗滌2次、干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮。然后將殘留物溶解在少量氯仿中，用硅膠柱色譜法純化，以5％～10％A/B(A＝9∶1甲醇/濃NH4OH；B＝氯仿)的梯度洗脫。用TLC判斷的含產(chǎn)品級分合并、真空濃縮，給出890mg(82％)白色固體。1H NMRFD-MS，m/e 576(MH+)E)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，4-脫氫哌啶·HCl的制備向N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，4-脫氫哌啶(820mg，1.4mmol)和茴香醚(1ml)的二噁烷(25ml)溶液中，在0℃通入HCl氣體10分鐘。攪拌12小時后，真空脫除溶劑，殘留物溶解在水(50ml)中，用二乙醚洗滌2次。然后將水相真空濃縮到約20ml的體積，用RPHPLC純化(方法2，98/2(A/B)直到70/30(A/B)，2小時)。用分析型RPHPLC判斷的含產(chǎn)品的級分合并、部分地真空濃縮、凍干，給出442mg(68％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 423(MH+)分析C22H36N4O4·2HCl·1.5H2O計(jì)算C，50.57；H，8.29；N，10.72；實(shí)測C，50.31；H，8.46；N，10.93。
實(shí)例59 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-3，4-脫氫哌啶·HClHO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-3，4-脫氫哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例58所述的那些方法，從4-BocNHCH2CH2-吡啶制備了73mg HO2CCH2-D-Cha·Pro-4-NHCH2CH2-3，4-二氫哌啶.HCl。最終產(chǎn)品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小時)純化。IR1H NMRIS-MS，m/e 435.2(MH+)分析C23H38N4O4·2.3HCl·3H2O計(jì)算C，48.26；H，8.15；N，9.79；Cl，14.24；實(shí)測C，48.31；H，7.93；N，9.66；Cl，14.56。
實(shí)例60 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-3，4-脫氫哌啶·HCl
HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-3，4-脫氫哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例5 8所述的那些方法，從4-BocNHCH2CH2CH2-吡啶制備了205mg HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-3，4-脫氫哌啶·HCl。IR1H NMRIS-MS，m/e 449.2(MH+)分析C24H40N4O4·2.3HCl·H2O計(jì)算C，52.37；H，3.11；N，10.18；實(shí)測C，51.64；H，7.72；N，10.31；Cl，14.69。
實(shí)例61 (1R，4aR，8aR)-1-Piq-Pro-Agm·3HCl(N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丁基]-1-[[(4aR，8aR)-十氫-1(R)-異喹啉基]碳酰]-1-脯氨酰胺·三鹽酸鹽)本實(shí)例中的Rf值是用硅膠薄層色譜法(Kieselgel 60F-254)以下列系統(tǒng)(體積比)(A)氯仿∶甲醇∶乙酸(135∶15∶1)(B)乙酸乙酯∶乙酸∶絕對乙醇( 90∶10∶10)(C)乙酸乙酯∶己烷(70∶30)(D)氯仿A)N-甲氧碳酰苯乙胺在攪拌下，向苯乙胺(75.2ml，0.6mol)和三乙胺(83ml，0.6mol)的THF(500ml)溶液中緩緩地加入氯甲酸甲酯(46.2ml，0.6mol)的THF(50ml)溶液。反應(yīng)混合物在室溫再攪拌1小時后，添加二乙醚(2L)和1N HCl(800ml)。有機(jī)層用水洗滌、干燥(MgSO4)、過濾、濾液真空濃縮，給出純標(biāo)題化合物的透明油狀物(102g，95％)。
B)2-甲氧碳酰-DL-1.2，3,-4-四氫異喹啉-l-羧酸向N-甲氧碳酰苯乙胺(102g，0.57mol)的三氟乙酸(300ml)溶液中添加二羥乙酸(63g，0.68mol)，將混合物加熱到回流溫度?；亓?小時后，將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，真空脫除溶劑、向殘留物中添加二乙醚(800ml)/水(100ml)。用5N NaOH使反應(yīng)混合物pH上升到12，將水層分離。向水層中添加二乙醚(500ml)，用5N HCl使溶液酸化到pH 2.5。將有機(jī)層分離、干燥(MgSO4)、過濾、濾液真空濃縮，給出純標(biāo)題化合物的油狀物(107g，80％)；FAB-MS 236(MH+)。
C)2-甲氧碳酰-DL-1，2，3，4-四氫異喹啉-1-羧酸叔丁酯在攪拌、冷卻(0℃)下，向2-甲氧碳酰-DL-1，2，3，4-四氫異喹啉-1-羧酸(2)(105g，0.45mol)的CH2Cl2(200ml)溶液中添加叔丁醇(52ml，0.54mol)和DCC(92g，0.45mol)。在0℃2小時和在室溫24小時后，真空脫除溶劑， 向殘留物中添加乙酸乙酯(800ml)/1N NaHCO3(300ml)。將有機(jī)層分離，用水、1.5N檸檬酸和水洗滌。有機(jī)層干燥(MgSO4)、過濾、濾液真空濃縮，給出純標(biāo)題化合物的油狀物(106g，81％)；FAB-MS 292(MH+)；TLC Rf(A)0.61；元素分析(計(jì)算值)C16H21NO4C，65.96；H，7.27；N，4.81；實(shí)測值C，66.24；H，7.28；N，4.73。
D)2-甲氧碳酰-(1RS，4aSR，8aSR)-全氫化異喹啉-1-羧酸叔丁酯2-甲基碳酰-DL-1，2，3，4-四氫異喹啉-1-羧酸叔丁酯(105g，0.36mol)的叔丁醇(800ml)溶液用5％Rh/Al2O3(52.5g)、以55巴(800psi)氫氣、在高壓裝置中于50℃還原24小時，反應(yīng)混合物通過一層硅藻土過濾，濾液真空濃縮。所形成的油狀物干燥，給出純標(biāo)題化合物(96.5g，90％)FD-MS 298(MH+)；TLC Rf(C)0.63。
E)2-甲氧碳酰-(1RS，4aRS，8aRS)-全氫化異喹啉-1-羧酸乙酯向2-甲氧碳酰-(1RS，4aSR，8aSR)-全氫化異喹啉-1-羧酸叔丁酯(81.2g，273mmol)的EtOH(500ml)溶液中添加乙醇鈉(21％乙醇溶液)(88.4ml，273mmol)，反應(yīng)混合物回流(24小時)。有機(jī)溶劑真空蒸發(fā)，向殘留物中添加乙酸乙酯(400ml)和水(100ml)。將有機(jī)層分離、用水洗滌2次、干燥(MgSO4)、過濾、濾液真空濃縮，給出純標(biāo)題化合物的油狀物(70g,95％)；FAB-MS 270(MH+)；TLC Rf(A)0.61。
F)2-甲氧碳酰-(1RS，4aRS，8aRS)-全氫化異喹啉-1-羧酸向步驟E的產(chǎn)品(70g，260mmol)的THF(250ml)溶液中添加2N NaOH(156ml，312mmol)，反應(yīng)混合物在室溫攪拌(30小時)。有機(jī)溶劑真空蒸發(fā)，向殘留物中添加二乙醚(400ml)和水(100ml)。將水層分離，添加乙酸乙酯(400ml)。溶液的pH用5N HCl調(diào)至2.0。有機(jī)層干燥(MgSO4)、過濾、濾液真空濃縮，給出一種透明油狀物。該油狀物用己烷(200ml)結(jié)晶，給出純標(biāo)題化合物(46.4g，74％)；FAB-MS 242(MH+)；TLC Rf(A)0.36；元素分析(計(jì)算值)C12H19NO4C，59.74；H，7.94；N，5.81；實(shí)測值C，59.95；H，7.88；N，5.54。NMR排布是同核去偶、COSY、HMQC和DEPT實(shí)驗(yàn)確定的。
G)2-Cbz-(1RS，4aRS，8aRS)-全氫化異喹啉-1-羧酸在室溫攪拌下，在惰性氣氛下，向步驟F的產(chǎn)品(46g，191mmol)的無水CH3CN(200ml)溶液中添加碘三甲基甲硅烷(62.4ml，440mmol)的CH3CN(60ml)溶液。反應(yīng)混合物在55℃攪拌30分鐘，冷卻到室溫。反應(yīng)用水(100ml)終止，隨后添加偏亞硫酸氫鈉(1g)。用5N NaOH使反應(yīng)混合物的pH上升到10.0，滴加氯甲酸芐酯(27.3ml，191mmol)，同時用2N NaOH使pH保持在10。反應(yīng)混合物在室溫再攪拌30分鐘后，真空蒸發(fā)有機(jī)溶劑，添加二乙醚(200ml)。讓反應(yīng)混合物在室溫靜置(2小時)，添加乙酸乙酯(200ml)。水溶液用5N HCl酸化到pH2.5；將有機(jī)層分離、干燥(MgSO4)、過濾、濾液真空濃縮，給出油狀純標(biāo)題化合物(39.5g，65％)； FAB-MS 318(MH+)；元素分析(計(jì)算值)C18H23NO4C，68.12；H，7.30；N，4.41；實(shí)測值 C，66.37；H，7.52；N，4.37。
H)2-Cbz-(1RS，4aRS，8aRS)-全氫化異喹啉-1-碳酰-Pro-O-t-Bu在攪拌、冷卻(0℃)下，向步驟G的產(chǎn)品(39g，123mmol)的DMF(200ml)溶液中添加脯氨酸叔丁酯(21.1g，123mmol)、1-羥基苯并三唑(16.6g，123mmol)和DCC(25.3g，123mmol)。反應(yīng)混合物在0℃攪拌2小時、在室溫攪拌24小時。將反應(yīng)沉淀物濾出，濾液真空濃縮成油狀物。該油狀物溶解在EtOAc(200ml)和水(100ml)中。有機(jī)層依次用1N NaHCO3、水、1.5N檸檬酸、水洗滌。有機(jī)層干燥(MgSO4)、過濾、濾液蒸發(fā)成標(biāo)題化合物的無定形固體，呈非對映體混合物形式(52.7g，91％)FAB-MS 471(MH+)。
I)2-Cbz-(4aR，8aR)-全氫化異喹啉-1(R)-碳酰-Pro-OH在攪拌下，向步驟H的產(chǎn)品(52.4g，111mmol)的CH2Cl2(20ml)溶液中添加三氟乙酸(70ml)和茴香醚(5ml)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌1小時，真空濃縮而無加熱。殘留物用二乙醚(400ml)、水(100ml)稀釋，溶液的pH用5N NaOH調(diào)節(jié)到10.0。將水層分離，添加乙酸乙酯(300ml)。溶液的pH用5N HCl調(diào)節(jié)到2.5；將有機(jī)層分離、干燥(MgSO4)、過濾，濾液真空濃縮，給出一種透明油狀物。該油狀物溶解在二乙醚(500ml)中，向該溶液中添加(L)-(-)-α-甲基芐胺。讓此溶液在室溫靜置(24小時)。將所形成的固體濾出、用二乙醚洗滌、干燥。將此固體懸浮在乙酸乙酯中，用1.5N檸檬酸和水洗滌。有機(jī)層干燥(MgSO4)、過濾、濾液蒸發(fā)，給出油狀標(biāo)題化合物(20.2g，44％)FAB-MS 415(MH+)；[α]D＝3.2°(c＝0.5，MeOH)；元素分析(計(jì)算值)C23H30N2O5C，66.65；H，7.30；N，6.76。實(shí)測值C，66.38；H，7.36；N，6.63。
J)2-Cbz-(4aR，8aR)-全氫化異喹啉-1(R)-碳酰-Pro-NH-(CH2)4-NH-Boc在燒瓶1中，將步驟I的產(chǎn)品(1.06g，2.55mmol)溶解在DMF(10ml)中，冷卻到-15℃，添加N-甲基嗎啉(0.28ml，2.55mmol)，隨后添加氯甲酸異丁酯(0.33ml，2.55mmol)。反應(yīng)混合物在-15℃攪拌2分鐘。
在燒瓶2中，將N-Boc-1，4-二氨基丁烷(0.48g，2.55mmol)溶解在DMF(10ml)中、冷卻至0℃，向該溶液中添加N-甲基嗎啉(0.28ml，2.55mmol)。反應(yīng)混合物在0℃攪拌2分鐘。
將燒瓶2的內(nèi)容物添加到燒瓶1中，反應(yīng)混合物攪拌4小時(-15℃)并在室溫攪拌24小時。向該反應(yīng)混合物中添加1N NaHCO3(1ml)，將反應(yīng)溶劑真空脫除，給出一種油狀物。將此殘留物溶解在EtOAc(200ml)中，依次用1.5N檸檬酸、水、1N NaHCO3(100ml)和水洗滌。有機(jī)溶液干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮至干，給出固體狀粗標(biāo)題化合物(1.47g，99％)；FAB-MS 585(MH+)；TLC Rf(A)0.70。
K)(4aR，8aR)-全氫化異喹啉-1(R)-碳酰-Pro-Agm·3HCl在攪拌下，向步驟J的產(chǎn)品(1.4g，2.4mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液中添加三氟乙酸(25ml)和茴香醚(2.5ml)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌30分鐘，真空濃縮而無加熱。反應(yīng)混合物用二乙醚(100ml)稀釋，將上清液潷析。所得到的油狀物用二乙醚研制2次、干燥。干燥的油狀物溶解在THF(20ml)中，向混合物中添加三乙胺(0.66ml，4.8mmol)和二Cbz-S-甲基異硫脲(0.859g，2.4mmol)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌48小時。有機(jī)溶劑真空蒸發(fā)，殘留物溶解在EtOAc(200ml)中，依次用1N NaHCO3(100ml)和水洗滌。有機(jī)溶液干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮至干，給出一種粗固體(1.5g，79％)TLC Rf(D)0.33。此粗固體(1.5g，1.93mmol)溶解在乙醇(50ml)、水(10ml)和1N HCl(5.8ml，5.8mmol)中，在5％Pd/C催化劑(2.5g)存在下，在常溫、常壓下加氫。用過濾法除去催化劑，濾液真空濃縮成油狀物。此油狀物溶解在三氟乙酸(10ml)中，向該混合物中添加硫代茴香醚(1.0ml)和三氟甲磺酸(1.0ml)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌0.5小時，添加二乙醚(100ml)。將上清液潷析，所得到的油用二乙醚研制2次、真空干燥，給出一種粗固體(1.3g)。將該固體(1.3g)溶解在0.05％HCl中，加到一根5×25cm Vydac C18樹脂柱中。用CH3CN濃度遞增(2％至25％)的梯度使肽從該柱上洗脫。根據(jù)分析型RPHPLC分布，將各級分收集、合并、凍干，給出純標(biāo)題化合物(0.139g，15％)FAB-MS 393(MH+)；元素分析(計(jì)算值)C20H36N6O2·5HCl·3H2OC，38.28；實(shí)測值C，38.34。
實(shí)例62 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4NH2·HClHO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH)、23-D和5 8-E所述的那些方法，從4-硝基芐胺鹽酸鹽制備了0.17g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4NH2·HCl。最終產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小時)。IR1H NMRFAB-MS，m/e 431.3(MH+)分析C23H34N4O4·2.2HCl·1.5H2O計(jì)算C，51.37；H，7.35；N，10.42；Cl，14.50；實(shí)測C，50.87；H，6.72；N，10.41；Cl，14.18.
實(shí)例63 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2C6H4NH2·HCl
HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2C6H4NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例62所述的那些方法，從4-硝基苯乙胺鹽酸鹽制備了0.19g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2C6H4NH2·HCl。最終產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小時)。IR1H NMRFAB-MS，m/e 445.3(MH+)分析 C24H36N4O4·2.2HCl·0.5H2O計(jì)算C，54.00；H，7.40；N，10.50；Cl，14.61；實(shí)測C，53.65；H，7.59；N，10.24；Cl，14.33.
實(shí)例64 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HClA)4-BoC2NCH2-3-F-C6H3NO2的制備在攪拌下，向2-氟-4-硝基甲苯(5g，32mmol)的四氯化碳(160ml)溶液中添加N-溴琥珀酰亞胺(5.7g，32mmol)，隨后添加過氧化苯甲酰(0.78g，3.2mmol)，將溶液加熱到回流、12小時后，除去熱量，混合物用四氯化碳(100ml)稀釋，用水洗滌。然后，有機(jī)相用乙酸乙酯(300ml)稀釋、干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮。殘留物溶解在四氫呋喃(50ml)中，并添加到正在攪拌的NaH(60％油分散液；1.3g，32mmol)和亞氨基二羧二叔丁酯(6.9g，32mmol)的四氫呋喃(100ml)溶液中。攪拌過夜后，溶劑真空脫除，殘留物用硅膠柱色譜法純化，以己烷直至20％乙酸乙酯/己烷的步進(jìn)梯度洗脫。含產(chǎn)品的級分(用TLC判斷)合并、真空濃縮，給出3.9g(33％)白色固體。IR1H NMRFD-MS、m/e 370(M+)分析C17H23N2O6計(jì)算C，55.13；H，6.26；N，7.56；實(shí)測C，55.27；H，6.23；N，7.44.
B)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A、1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH)、23-D和58-E所述的那些方法，制備了0.44gHO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HCl。最終產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小時)。IR1H NMRFAB-MS，m/e 449.3(MH+)分析 C23H33N4O4F·1.3HCl計(jì)算C，55.70；H，6.97；N，11.30；Cl，9.29；實(shí)測C，55.38；H，6.97；N，11.05；Cl，9.31.
實(shí)例65 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-咪基噻吩·HCl(N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[5-(氨基亞氨基甲基)噻吩-2-基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)A)2-氰基-5-甲酰噻吩的制備在氮?dú)夥障?，向火焰干燥?頸1L圓底燒瓶中添加二異丙胺(9ml，66mmol)和THF(150ml)。將該燒瓶冷卻到瓶內(nèi)溫度為-78℃(干冰/丙酮)。在攪拌下，通過注射器向此溶液中添加正丁基鋰(1.6M己烷溶液，41.3ml，66.1mmol)，將混合物攪拌5分鐘。用10分鐘時間向此溶液中添加2-噻吩腈(6.55g，60mmol)的THF(30ml)溶液。所形成的亮紅色溶液在-78℃攪拌45分鐘，此時通過注射器添加二甲基甲酰胺(23.3ml，300mmol)。此混合物在-78℃攪拌2小時，然后添加固體檸檬酸(約10g)，隨后加水(60ml)。真空脫除揮發(fā)性溶劑，將殘留物分配于二乙醚和鹽水(各200ml)之間。將兩層分離，水相用二乙醚洗滌1次。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌1次，干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出一種黃色固體，再用硅膠柱色譜法純化，以乙酸乙酯/己烷梯度(己烷至50％乙酸乙酯/己烷)洗脫。含純產(chǎn)品的級分合并、真空濃縮，給出6.9g(84％)2-氰基-5-甲酰噻吩。1H NMRB)2-氰基-5-(羥甲基)噻吩的制備向2-氰基-5-甲酰噻吩(6.9g，50mmol)的EtOH(100ml)溶液中分批添加硼氫化鈉(1.9g，50mmol)。攪拌5分鐘后，真空脫除溶劑，殘留物分配于乙酸乙酯與鹽水之間。將兩層分離，有機(jī)相用1M檸檬酸洗滌1次、用鹽水洗滌1次，然后干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出6.1g(88％)2-氰基-5-(羥甲基)噻吩。1H NMRFD-MS，m/e 140(M+)分析C6H5NOS計(jì)算C，51.78；H，3.62；N，10.06；實(shí)測C，51.54；H，3.62；N，9.86.
C)2-氰基-5-(溴甲基)噻吩的制備向2-氰基-5-(羥甲基)噻吩(6.0g，43mmol)的THF(50ml)溶液中添加三苯膦(15.7g，47mmol)和四溴化碳(12.3g，47mmol)。在氮?dú)夥障略谑覝財嚢柽^夜，真空脫除溶劑，殘留物溶解在氯仿中，然后吸附到硅膠上并裝進(jìn)-根硅膠柱中。產(chǎn)品用乙酸乙酯/己烷梯度洗脫。含純產(chǎn)品的級分(用TLC判斷)合并、真空濃縮，給出6.5g(75％)2-氰基-5-(溴甲基)噻吩。1H NMRFD-MS，m/e 203(M+)分析C6H4NSBr計(jì)算C，35.66；H，1.99；N，6.93；實(shí)測C，35.71；H，2.03；N，6.95.
D)2-氰基-5-(氨基甲基)噻吩·HCl的制備向2-氰基-5-(溴甲基)噻吩(6.0g，30mmol)的THF(50ml)冷(0℃)溶液中，在氮?dú)夥障路峙砑覰aH(60％油分散液，1.3g，33mmol)。在攪拌下，向此懸浮液中添加亞氨基二羧酸二叔丁酯(7.1g，33mmol)的THF(50ml)溶液，在30分鐘內(nèi)加完。攪拌3小時后，添加飽和氯化銨水溶液(100ml)。然后真空脫除揮發(fā)性溶劑，殘留物分配于乙酸乙酯與水之間。將兩層分離，有機(jī)相用鹽水洗滌2次、干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出10.5g(100％)2-氰基-5-Boc2NCH2-噻吩，靜置時結(jié)晶。這種固體溶解在EtOAc(200ml)中，用冰/水浴冷卻到0℃。該溶液通入無水HCl氣體10分鐘，混合物攪拌2小時同時使之回升至室溫。真空脫除溶劑，所形成的固體懸浮在二乙醚中，用過濾法分離。此白色固體真空干燥過夜，給出5.2g(100％)2-氰基-5-(氨基甲基)噻吩·HCl。1H NMRFD-MS，m/e 139(M+)分析C6H7N2SCl計(jì)算C，41.26；H，4.04；N，16.04；實(shí)測C，41.19；H，4.12；N，15.82.
E)N-(t-BuO2CCH2)·N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氰基噻吩的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G (用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH)所述的那種方法，從2-氰基-5-(氨基甲基)噻吩·HCl制備了4.6g(93％)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氰基噻吩。IR1H NMRFD-MS，m/e 602(M+)F)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-C(NH)NHBoc-噻吩的制備向N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氰基噻吩(1.5g，2.5mmol)和三乙胺(4.5ml)的吡啶(45ml)溶液中通入硫化氫氣體5分鐘，然后將反應(yīng)器密封、靜置過夜。次日早上向該溶液中通入氮?dú)?分鐘，真空脫除溶劑。殘留物溶解在乙酸乙酯中，用水洗滌1次、用鹽水洗滌1次，然后干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮。然后，將殘留物溶解在甲苯中，真空濃縮2次。
然后將殘留物溶解在丙酮(100ml)中，添加碘甲烷(5ml)。在室溫攪拌過夜后，真空脫除溶劑。然后把所形成的金色泡沫狀物溶解在甲醇(20ml)中，添加NH4OAc(0.39g，5mmol)，溶液加熱回流。1小時后真空脫除溶劑，殘留物溶解在四氫呋喃(10ml)中。在攪拌下，向此溶液中添加K2CO3(1.73g，12.5mmol)的水(10ml)溶液，隨后添加草酸二叔丁酯(2.2g，10mm0l)。攪拌1小時后，懸浮液用乙酸乙酯(400ml)稀釋，用水洗滌，然后用鹽水洗滌。然后，有機(jī)相真空濃縮、用硅膠柱色譜法純化、以10％乙酸乙酯/己烷直至75％乙酸乙酯/己烷的步進(jìn)梯度洗脫。用TLC判斷的含產(chǎn)品級分合并、真空濃縮，給出1.1g(61％)白色泡沫狀物。1H NMRFD-MS，m/e 720(M+)分析C36H57N5O8S計(jì)算C，60.06；H，7.98；N，9.73；實(shí)測C，59.76；H，8.07；N，9.52.
G)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-咪基噻吩·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例58-E所述的那種方法，制備了500mg HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-咪基噻吩·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小時)。IR1H NMRFAB-MS，m/e 464.2(MH+)分析 C22H33N5O4S·2HCl·H2O計(jì)算C，47.65；H，6.73；N，12.63；Cl，12.79；實(shí)測C，47.53；H，6.57；N，12.59；Cl，12.67.
實(shí)例66 HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基吡啶·HCl(N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[5-(氨基亞氨基甲基)吡啶-2-基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)A)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-氰基比啶的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例64-A、23-A和1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH)所述的那些方法，從2-甲基-5-氰基吡啶制備了4.4g N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-氰基吡啶。IR1H NMRFD-MS，m/e 597(M+)B)HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基吡啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例65-F和65-G所述的那些方法，從N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-氰基吡啶制備了130mgHO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基吡啶·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小時)。IR1H NMRFAB-MS，m/e 459.3(MH+)HRMS (FAB)，m/e計(jì)算值C23H35N6O4459.2720實(shí)測值459 2707
實(shí)例67 HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基哌啶·HClHO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A、23-B和1-B所述的那些方法，精心制作了N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-氰基吡啶(1.2g，2mmol)。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小時)。分析型RPHPLC判斷的含少量產(chǎn)品的級分合并、真空部分濃縮、凍干，給出93mg(9％)淡綠色固體。IR1H NMRIS-MS，m/e 465.5(MH+)HRMS(FAB)，m/e計(jì)算值C23H41N6O4465.3189實(shí)測值465.3191實(shí)例68 HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基-5，6-脫氫哌啶·HCl(N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[5-(氨基亞氨基甲基)-l，2，3，4-四氫吡啶-2-基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-咪基-5，6-脫氫哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A、23-B和1-B所述的那些方法，精心制作了N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-氰基吡啶(1.2g，2mmol)。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小時)。用分析型RPHPLC判斷的含大量產(chǎn)品的級分合并、部分濃縮、凍干，給出422mg(39％)白色固體。IR1H NMRIS-MS，m/e 463.3(MH+)分析C23H38N6O4·2.9HCl·2H2O計(jì)算C，45.71；H，7.49；N，13.91；Cl，17.01 ；實(shí)測C，45.51；H，6.83；N，13.66；Cl，16.83.
實(shí)例69 HO2CCH2-D-Cha-Pro-3-NHCH2-6-咪基噠嗪·3HCl(N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[6-(氨基亞氨基甲基)噠嗪-3-基]甲基]-L-脯氨酰胺·三鹽酸鹽A)3-甲基-6-氰基噠嗪的制備在攪拌下，向3-甲基噠嗪(11g，118mmol)的二氯甲烷(200ml)溶液中添加AlCl3(0.05g)，隨后添加三甲基甲硅烷基氰(21g，211mmol)。20分鐘后，通過加料漏斗添加對甲苯磺酰氯(38g，201mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液，該溶液繼續(xù)攪拌過夜。次日早上真空脫除溶劑，將殘留物懸浮在乙醇中，攪拌15分鐘，然后過濾，給出一種白色固體。此固體溶解在四氫呋喃(200ml)中，在攪拌下向此溶液中添加1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(16ml，105mmol)。1小時后，真空脫除溶劑，殘留物分配于己烷和飽和NH4Cl水溶液之間。將兩相分離，水相用固體Na2CO3堿化，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的乙酸乙酯相干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出9g(64％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 119.1(M+)B)HO2CCH2-D-Cha-Pro-3-NHCH2-6-咪基噠嗪·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例66所述的那些方法，從3-甲基-6-氰基噠嗪制備了90mg HO2CCH2-D-Cha-Pro-3-NHCH2-6-咪基噠嗪·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小時)。IR1H NMRFAB-MS，m/e 460.3(MH+)分析C22H33N7O4·3HCl·2H2O計(jì)算C，43.68；H，6.66；N，16.21；實(shí)測C，44.04；H，6.45；N，15.57.
實(shí)例70 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基-3，4-脫氫哌啶·HCl(N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-1，2，3，6-四氫吡啶-4-基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)
A)N，N’-Boc2-硫脲的制備在0℃攪拌下，向NaH(60％油分散，9.4g，234mmol)的四氫呋喃(500ml)懸浮液中添加硫脲(4.0g，52mmol)。30分鐘后，撤去冷浴，讓反應(yīng)混合物在室溫攪拌30分鐘。再次使反應(yīng)器冷卻到0℃，通過加料漏斗添加草酸二叔丁酯(25g，115mmol)的四氫呋喃(100ml)溶液。在0℃攪拌30分鐘并在室溫再攪拌2小時后，添加飽和NaHCO3水溶液。然后，將溶液真空濃縮至原體積的大約一半，添加乙酸乙酯。然后，有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液洗滌、隨后用鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥、過濾、濃縮，給出11.9g(83％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 276(M+)分析C11H20N2O4S計(jì)算C，47.81；H，7.30；N，10.14；實(shí)測C，47.69；H，7.28；N，10.34.
B)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-(N，N’-Boc2-咪基)-3，4-脫氫哌啶的制備在攪拌下，向N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，4-脫氫哌啶(0.6g，1mmol)和三乙胺(0.35g，3.4mmol)的二甲基甲酰胺(10ml)溶液中添加N，N’-Boc2-硫脲(0.28g，1mmol)，隨后添加HgCl2(0.28g，1mmol)。4小時后，真空脫除溶劑，殘留物溶解在乙酸乙酯中，用鹽水洗滌2次。然后，有機(jī)相用MgSO4干燥、過濾、真空濃縮。產(chǎn)品用硅膠柱色譜法純化，以20％乙酸乙酯/己烷直至75％乙酸乙酯/己烷的梯度洗脫。用TLC判斷的含產(chǎn)品級分合并、真空濃縮，給出800mg(94％)白色泡沫狀物。IR1H NMRFD-MS，m/e 820(MH+)分析C42H70N6O10計(jì)算C，61.59；H，8.61；N，10.26；實(shí)測C，61.81；H，8.79；N，10.45.
C)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基-3，4-脫氫哌啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例58-E所述的那些方法，從N·(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-(N，N’-Boc2-咪基)-3，4-脫氫哌啶制備了0.22g(55％) HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-咪基-3，4-脫氫哌啶·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小時)。IR1H NMRFAB-MS，m/e 463.3(MH+)分析C23H38N6O4·2.2HCl·2H2O計(jì)算C，47.73；H，7.70；N，14.52；Cl，13.47；實(shí)測C，47.49；H，7.64；N，14.55；Cl，13.48.
實(shí)例71 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-芐脒·HCl(N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)-2-氟苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-芐脒·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例66所述的那些方法，從3-F-4-Me-芐腈制備了0.27g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-芐脒·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，2小時)。IR1H NMRFAB-MS，m/e 476.3(MH+)分析 C24H34N5O4F·2HCl·1.5H2O計(jì)算C，50.09；H，6.83；N，12.17；Cl，12.32；實(shí)測C，49.89；H，6.65；N，12.17；Cl，12.42.
實(shí)例72 HO2CCH2-0-Cha-Pro-4-NHCH2-3，5-F2-芐脒·HCl(N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)-2，6-二氟苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，5-F2-芐脒·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例65所述的那些方法，從3，5-F2-芐腈制備了0.28g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3，5-F2-芐脒·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，150分鐘)。IR1H NMRFAB-MS，m/e 494.2(MH+)分析C24H33N5O4F2·2HCl·1.5H2O計(jì)算C，48.57；H，6.45；N，11.80；Cl，11.95；實(shí)測C，48.26；H，6.17；N，11.89；Cl，11.90.
實(shí)例73 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氨基吡啶·HClA)4-甲基-2-鄰苯二甲酰亞胺基吡啶的制備在攪拌下，向4-甲基-2-氨基吡啶(50g，460mmol)的乙酸(1L)溶液中添加鄰苯二甲酸酐(68g，460mmol)，反應(yīng)混合物加熱回流。12小時后，添加乙酸酐(43ml，460mmol)，溶液繼續(xù)攪拌回流另外48小時。然后真空脫除溶劑，將固體殘留物懸浮在甲苯中，真空濃縮2次。然后將固體懸浮在乙酸乙酯中，猛烈攪拌、過濾。重復(fù)這種乙酸乙酯洗滌步驟之后，固體真空干燥過夜，給出46.6g(42％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 238(M+)分析C14H10N2O2計(jì)算C，70.58；H，4.23；N，11.76；實(shí)測C，70.42；H，4.29；N，11.70.
B)N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-鄰苯二甲酰亞胺基吡啶的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例64-A、23-A和1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH)所述的那些方法，從4-甲基-2-鄰苯二甲酰亞胺基吡啶制備了2.4g N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-鄰苯二甲酰亞胺基吡啶。IR1H NMRFD-MS，m/e 717.7(M+)
C)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl的制備在攪拌下，向N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-鄰苯二甲酰亞胺基吡啶(1-6g，2.2mmol)的乙醇(25ml)溶液中添加水合肼(0.52ml，10.4mmol)。1小時后，真空脫除溶劑，殘留物溶解在乙酸乙酯中、真空濃縮2次。殘留物用基本上相當(dāng)于實(shí)例58-E所述的那種步驟精心制作，給出380mg(37％)白色固體。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(AB)，150分鐘)。IR1H NMRFAB-MS，m/e 432.3(MH+)分析 C22H33N5O4·2.1HCl·H2O計(jì)算C，50.23；H，7.11；N，13.31；實(shí)測C，50.05；H，7.08；N，13.54.
實(shí)例74 HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HClHO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例73所述的那些方法，從5-甲基-2-氨基吡啶制備了0.88g HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2純化(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，150分鐘)。IR1H NMRFAB-MS，m/e 432.3(MH+)分析 C22H33N5O4·2HCl·H2O計(jì)算C，50.58；H，7.14；N，13.40；實(shí)測C，50.79；H，7.20；N，13.58.
實(shí)例75 HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2-2-氨基吡啶·HClA)5-Me-2-Boc2N-吡啶的制備在0℃攪拌下，向5-甲基-2-氨基吡啶(10.5g，100mmol)的二氯甲烷(200ml)溶液中添加N，N-二異丙基乙胺(25.8g，200mmol)，隨后添加草酸二叔丁酯(55g，250mmol)，最后添加4-(N，N-二甲基氨基)吡啶(12.2g，100mmol)。撤去冷浴，讓溶液繼續(xù)攪拌過夜。然后，混合物用乙酸乙酯(600ml)稀釋，用飽和NH4Cl水溶液洗滌3次，用鹽水洗滌1次，用飽和NaHCO3水溶液洗滌2次，再用鹽水洗滌1次。然后，有機(jī)相干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，用硅膠柱色譜法純化，以10％乙酸乙酯/己烷直至75％乙酸乙酯/己烷的梯度洗脫。用TLC判斷的含產(chǎn)品級分合并、真空濃縮，給出12.8g(42％)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 308(M+)分析C16H24N2O4計(jì)算C，62.32；H，7.84；N，9.08；實(shí)測C，62.51；H，8.11；N，9.37.
B)5-BrCH2-2-Boc2N-吡啶的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例64-A所述的那些方法，從5-Me-2-Boc2N-吡啶制備了大約11.6g 5-BrCH2-2-Boc2N-吡啶(沾污了起始原料)。1H NMRFD-MS，m/e 386.3(M+)分析C16H23N2O4Br計(jì)算C，49.62；H，5.99；N，7.23；實(shí)測C，49.86；H，6.00；N，7.07.
C)5-NCCH2-2-Boc2N-比啶的制備在攪拌下，向輕微不純的5-BrCH2-2-Boc2N-吡啶(9.7g，25mmo1)的二甲基甲酰胺(150ml)溶液中添加18-冠醚-6(1.32g，5mmol)，隨后添加KCN(1.95g，30mmol)。在攪拌6小時之后，真空脫除溶劑，殘留物用硅膠柱色譜法純化，以己烷直到40％乙酸乙酯/己烷的步進(jìn)梯度洗脫。用TLC判斷的含產(chǎn)品級分合并、真空濃縮，給出2.6g(31％，用2步)白色固體。IR1H NMRFD-MS，m/e 333.4(M+)分析C17H23N3O4計(jì)算C，61.25；H，6.95；N，12.60；實(shí)測C，61.09；H，6.92；N，12.53.
D)HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2-2-氨基吡啶·HCl的制備在攪拌下，向5-NCCH2-2-Boc2N-吡啶(2.5g，7.5mm0l)的甲醇(150ml)溶液中添加CoCl2(0.97g，7.5mmol)和水(0.81g，45mmol)。5分鐘后，用15分鐘時間分小批添加NaBH4(2.84g，75mmol)。再過15分鐘之后真空脫除溶劑，殘留物溶解在濃NH4OH水溶液中，用乙酸乙酯萃取若干次。合并的乙酸乙酯萃取液用MgSO4干燥、過濾、真空濃縮。
然后，用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-A和73-C所述的那些方法，將殘留物精心制作，給出1.2g(33％)HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2-2-氨基吡啶·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)直至60/40(A/B)，150分鐘)純化。IR1H NMRFAB-MS，m/e 446.3(MH+)HRMS(FAB)計(jì)算值C23H36N5O4446.2767實(shí)測值446.2769。
實(shí)例76 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-2-氨基吡啶·HClA)4-BocNHCH2CH2-2-CN-吡啶的制備向4-BocNHCH2CH2-吡啶(2.22g，10mmol)的丙酮(50ml)溶液中，在10分鐘內(nèi)通過加料漏斗添加間氯過苯甲酸(5.2g，30mmol)的丙酮(50ml)溶液。在攪拌過夜后，真空脫除溶劑，殘留物分配于水(100ml)和二乙醚(100ml)之間。將有機(jī)相分離，用水萃取3次。然后，合并的水相用固體NaCl飽和，用二氯甲烷(100ml)萃取3次。合并的二氯甲烷萃取液用鹽水洗滌1次，用Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮成小體積，然后添加二乙醚。將白色沉淀物(2.0g)濾出、真空干燥。
將所分離固體的一半(4.2mmol)溶解在二氯甲烷(10ml)中，在攪拌下向此溶液中添加三甲基甲硅烷基氰(0.84ml，6.3mmol)，隨后添加N，N-二甲基氨基甲酰氯(0.58ml，6.3mmol)。攪拌過夜后，緩緩添加1M KHCO3水溶液(1ml)，將混合物分配在乙酸乙酯和水之間。然后，有機(jī)相用鹽水洗滌2次，用MgSO4干燥、過濾、真空濃縮，給出0.6g(58％)琥珀色油狀物，靜置時結(jié)晶。IR1H NMRFD-MS，m/e 247(M)分析C13H17N3O2計(jì)算C，63.31；H，7.02；N，16.99；實(shí)測C，63.31；H，7.02；N，16.71.
B)4-BocNHCH2CH2-2-CbzNH-吡啶的制備在攪拌下，向4-BocNHCH2CH2-2-CN-比啶(0.5g，2mmol)的甲醇(2.4ml)溶液中添加5N NaOH(1.6ml，8mmol)，此溶液加熱回流。24小時后，將溶液冷卻到室溫，并使之再攪拌48小時。然后用1N HCl將pH調(diào)節(jié)至7，真空脫除溶劑。
殘留物懸浮在甲苯(50ml)中，加熱回流。在攪拌下，向此溶液中依次添加三乙胺(0.36ml，2.6mmol)、芐醇(0.27ml，2.6mmol)和二苯磷酰疊氮(0.72g，2.6mmol)。攪拌回流過夜之后，使溶液冷卻，然后用乙酸乙酯(200ml)稀釋，用飽和NH4Cl水溶液洗滌2次，用鹽水洗滌2次。然后，有機(jī)相用MgSO4干燥、過濾、真空濃縮。然后，殘留物用硅膠柱色譜法純化，以己烷直至50％乙酸乙酯/己烷的步進(jìn)梯度洗脫。由TLC確定的含產(chǎn)品級分合并、真空濃縮，給出0.37g(50％)白色固體。1H NMRFD-MS，m/e 371.2(M+)分析C20H25N3O4計(jì)算C，64.67；H，6.78；N，11.31；實(shí)測C，64.90；H，7.07；N，11.06.
C)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-2-氨基吡啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A、1-G(用N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH)、23-D和58-E所述的那些方法，從4-BocNHCH2CH2-2-CbzNH-吡啶制備了48mg HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-2-氨基吡啶·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，150分鐘)純化。IR1H NMRFAB-MS，m/e 446.4(MH+)分析 C23H35N5O4·1.5HCl·H2O計(jì)算C，53.30；H，7.49；N，13.51；實(shí)測C，53.64；H，7.27；N，13.80.
實(shí)例77 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-F-苯胺·HClHO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-F-苯胺·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例64所述的那些方法，從3-F-4-NO2-甲苯制備了0.55g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-F-苯胺·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)直至60/40(A/B)，180分鐘)純化。IR1H NMRFAB-MS，m/e 449.3(MH+)分析 C23H33N4O4F·0.9HCl·H2O計(jì)算C，55.32；H，7.25；N，11.22；Cl，6.39；實(shí)測C，55.49；H，6.93；N，11.15；Cl，6.23.
實(shí)例78 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2·HClHO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例10所述的那些方法，以N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH代替Boc-D-Phe-ProOH，制備了0.53g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，150分鐘)純化。IR1H NMRFD-MS，m/e 445.4(MH+)分析 C24H36N4O4·2.2HCl·0.5H2O計(jì)算C，54.00；H，7.40；N，10.50；Cl，14.61；實(shí)測C，54.18；H，7.54；N，10.31；Cl，14.86.
實(shí)例79 HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H10CH2NH2·HCl
HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H10CH2NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例12所述的那些方法，以N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH代替Boc-D-Phe-ProOH，制備了0.04g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H10CH2NH2·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2(98/2(A/B)直至70/30(A/B)，150分鐘)純化。1H NMRFD-MS，m/e 451(MH+)分析 C24H42N4O4·2.7HCl·0.5H2O計(jì)算C，51.65；H，8.25；N，10.04；實(shí)測C，51.47；H，7.87；N，9.97.
實(shí)例80 EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(N-(乙磺酰)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18所述的那些方法，以EtSO2-D-Cha-ProOH代替Cbz-D-1-Piq-ProOH，制備了3.6g EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2(90/10(A/B)直至50/50(A/B)，180分鐘)純化。IR1H NMRFAB-MS，m/e 492.3(MH+)分析 C24H37N5O4S·HCl；計(jì)算C，54.58；H，7.25；N，13.26；Cl，6.71；實(shí)測C，54.31；H，7.31；N，13.37；Cl，6.71.
實(shí)例81 EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2·HClEtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例10所述的那些方法，以EtSO2-D-Cha-ProOH代替Boc-D-Phe-ProOH，制備了EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2(90/10(A/B)直至50/50(A/B)，180分鐘)純化。IR1H NMRFAB-MS，m/e 479.4(MH+)分析 C24H38N4O4S·HCl·H2O計(jì)算C，54.07；H，7.75；N，10.51；Cl，6.65；實(shí)測C，54.13；H，7.44；N，10.51；Cl，6.78.
實(shí)例82 EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HClEtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例64所述的那些方法，以EtSO2-D-Cha-ProOH代替N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH，制備了0.35g EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2(90/10(A/B)直至50/50(A/B)，180分鐘)純化。IR1H NMRFAB-MS，m/e 483.3(MH+)分析 C23H35N4O4SF·1.1HCl·0.5H2O計(jì)算C，51.95；H，7.03；N，10.54；Cl，7.33；實(shí)測C，52.09；H，6.94；N，10.39；Cl，7.24.
實(shí)例83 EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氨基吡啶·HClEtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例73所述的那些方法，以EtSO2-D-Cha-ProOH代替N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH，從4-甲基-2-氨基吡啶制備了0.22g EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2(90/10(A/B)直至50/50(A/B)，180分鐘)純化。1H NMRFAB-MS，m/e 466.4(MH+)分析 C22H35N5O4S·1.1HCl計(jì)算C，52.25；H，7.19；N，13.85；Cl，7.71；實(shí)測C，52.49；H，6.96；N，13.96；Cl，7.76.
實(shí)例84 EtSO2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HClEtSO2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例73所述的那些方法，以EtSO2-D-Cha-ProOH代替N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH，從5-甲基-2-氨基吡啶制備了0.24g EtSO2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-氨基吡啶·HCl。此產(chǎn)品用RPHPLC方法2(90/10(A/B)直至50/50(A/B)，180分鐘)純化。1H NMRFAB-MS，m/e 466.4(MH+)分析 C22H35N5O4S·1.15HCl計(jì)算C，52.06；H，7.18；N，13.80；Cl，8.03；實(shí)測C，52.38；H，6.97；N，14.20；Cl，8.46.
實(shí)例85 HOOCCH2CH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(N-(3-羧基丙基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)
A) Cbz-MeOOCCH＝CHCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備向D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl(2.5g，4.1mmol)的DMF(50ml)溶液中添加N，N-二異丙基乙胺(2.2ml，12.2mmol)和3-溴巴豆酸甲酯(0.95g，4.5gmmol)。攪拌48小時后，添加Cbz-Cl(0.7ml，5mmol)和額外的N，N-二異丙基乙胺(0.85ml，5mmol)。再攪拌16小時后，真空脫除揮發(fā)物。殘留物分配于乙酸乙酯(100ml)和飽和氯化銨水溶液(100ml)之間。將兩層分離，有機(jī)相用飽和氯化銨(50ml)水溶液洗滌1次，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)洗滌2次，用鹽水(50ml)洗滌2次。有機(jī)相干燥(MgSO2)、過濾、真空濃縮。粗產(chǎn)品用閃急色譜法(乙酸乙酯/己烷梯度)純化，給出660mg(22％)白色泡沫狀物。1H NMRFD-MS，m/e 766(M+)分析C43H51N5O8計(jì)算C，67.43；H，6.71；N，9.14；實(shí)測C，67.22；H，6.57；N，8.98.
B)HOOCCH2CH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備向Cbz-MeOOCCH＝CHCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz(0.5g，0.65mmol)的乙醇(5ml)溶液中添加1N氫氧化鈉(0.65ml)。在室溫攪拌5小時后，添加1N HCl(3ml)、10％Pd/C(0.5g)、H2O(15ml)和乙醇(25ml)。在攪拌下使該懸浮液真空脫氣，然后在氫氣氛下放置18小時。添加硅藻土，然后將漿狀物過濾。濾液真空濃縮，用RPHPLC(方法2，98/2(A/B)，在150分鐘內(nèi)遞減至75/25(A/B))純化。含純產(chǎn)品的級分合并、凍干，給出46mg(13％)。1H NMRFAB-MS，m/e 486.3(MH+)分析C26H39N5O4·2.1HCl計(jì)算C，55.15；H，7.35；N，12.19；Cl，13.24；實(shí)測C，55.55；H，7.37；N，12.19；Cl，13.58.
實(shí)例86 HOOCCH2-D-Chg-Pro-p-N-HCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(N-(羧甲基)-D-環(huán)己基甘氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)A)D-環(huán)己基甘氨酸的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例53-B所述的那種方法，從D-苯基甘氨酸出發(fā)制備了16.1g(16％)D-環(huán)己基甘氨酸。1H NMRFD-MS，m/e 117(M+)分析C8H15NO2計(jì)算C，61.12；H，9.62；N，8.91；實(shí)測C，61.23；H，9.56；N，8.73.B)Boc-D-環(huán)己基甘氨酸的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1 7-A所述那種方法(采用草酸二叔丁酯)，制備了22g(90％)Boc-D-環(huán)己基甘氨酸。1H NMRFD-MS，m/e 258(M+)分析C13H23NO4計(jì)算C，60.68；H，9.01；N，5.44；實(shí)測C，60.91；H，9.18；N，5.38.
C)Boc-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-Pro-OH和NH2CH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl制備了20.5g(76％)Boc-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。1H NMRFD-MS，m/e 481(M+)分析C26H32N4O5計(jì)算C，64.98；H，6.71；N，11.66；實(shí)測C，64.76；H，6.78；N，11.62.
D)Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A所述的那種方法，制備了18.4g(100％)Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl。1H NMRFD-MS，m/e 381(M+)分析C21H26N4O3Cl2計(jì)算C，55.63；H，5.78；N，12.36；實(shí)測C，54.19；H，6.27；N，12.15.
E)Boc-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，制備了3.6g(97％)Boc-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。1H NMRFD-MS，m/e 619(M+)分析C34H45N5O6計(jì)算C，65.89；H，7.32；N，11.30；實(shí)測C，67.59；H，8.07；N，10.99.
F)Cbz-t-BuOOCCH2-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A和85-A(使用溴乙酸叔丁酯和氯甲酸芐酯)所述的那些方法，制備了1.6g(45％)N-Cbz-N-(t-BuOOCCH2)-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。1H NMRFD-MS，m/e 769(M+)分析C43H53N5O8計(jì)算C，67.26；H，6.96；N，9.12；實(shí)測C，67.50；H，6.97；N，9.11.
G)HOOCCH2-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A(以二噁烷作為溶劑)和18-F所述的那些方法，制備了411mg(61％)HOOCCH2-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。1H NMRFAB-MS，m/e 444.3(MH+)分析C23H33N5O4·2.5HCl計(jì)算C，51.67；H，6.69；N，13.10；實(shí)測C，51.84；H，6.50；N，13.15.
實(shí)例87 HOOCCH2-D-hPhe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(N-(羧甲基)-D-高苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)A)HOOCCH2-D-hPhe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例86所述的那些方法，從Boc-D-hPhe-OH出發(fā)制備了335mg HOOCCH2-D-hPhe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。1H NMRFAB-MS，m/e 466.3(MH+)分析 C25H31N5O4·2.1HCl.H2O計(jì)算C，53.61；H，6.32；N，12.50；Cl，13.29；實(shí)測C，53.58；H，6.08；N，12.59；Cl，13.67.
實(shí)例88 HOOCCH2-D-hCha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(N-(羧甲基)-D-高環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)A)Boc-D-hCha-OH的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例53-D所述的那種方法，從Boc-D-hPhe-OH制備了5.1g(100％)Boc-D-hCha-OH。1H NMRFD-MS，m/e 240(M+)分析C15H27NO4計(jì)算C，63.13；H，9.54；N，4.91；實(shí)測C，63.38；H，9.39；N，5.12.
B)HOOCCH2-D-hCha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例86所述的那些方法，制備了135mgHOOCCH2-D-hPhe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。1H NMRFAB-MS，m/e 472.3(MH+)分析 C25H37N5O4·2.2HCl·0.5H2O計(jì)算C，53.54；H，7.22；N，12.49；Cl，13.91；實(shí)測C，53.29；H，7.01；N，12.46；Cl，14.30.
實(shí)例89 HOOCCH2-Gly-N-C6H5CH2CH2Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HClA)HOOCCH2-Gly-N-C6H5CH2CH2Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G、1-D、1-G、23-A、85-A和18-F所述的那些方法，制備了365mg N-HOOCCH2-Gly-N-C6H5CH2CH2-Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。1H NMRFAB-MS，m/e 426.2(MH+)分析 C22H27N5O4·2.2HCl·1.5H2O計(jì)算C，49.60；H，6.09；N，13.15；Cl，14.64；實(shí)測C，49.79；H，5.71；N，13.31；Cl，14.49.
實(shí)例90 (C2H5)2CHCO-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HClA)Boc-(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G所述的那種方法，從Boc-(γ-OBn)-Glu-OH和Pro-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl出發(fā)，制備了2.7g(64％)Boc-(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz。1H NMRFD-MS，m/e 700(M+)分析C38H45N5O8計(jì)算C，65.22；H，6.48；N，10.01；實(shí)測C，65.00；H，6.56；N，10.06.B)(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例23-A所述的那種方法，制備了2.38g(98％)(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl。1H NMRFD-MS，m/e 600(M+)分析C33H39N5O6Cl2計(jì)算C，58.93；H，5.84；N，10.41；實(shí)測C，58.64；H，6.00；N，10.63.C)(C2H5)2CHCO-(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz的制備在攪拌下，向(γ-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz·2HCl(1.3g，2mmol)的THF/H2O(各50ml)混合物中添加K2CO3(1.38g，10mmol)和2-乙基丁酰氯(0.3g，2.2mmol)。攪拌10分鐘后，真空脫除揮發(fā)物。所形成的殘留物分配于水和乙酸乙酯(各100ml)之間。將兩層分離，有機(jī)相用飽和氯化銨水溶液和鹽水各洗滌2次，干燥(MgSO4)、過濾、真空濃縮，給出1.45g(100％)。1H NMRFD-MS，m/e 698(M+)分析C39H47N5O7計(jì)算C，67.13；H，6.79；N，10.04 ；實(shí)測C，67.11；H，6.70；N，9.74.
D)(C2H5)2CHCO-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例18-F所述的那種方法，制備了425mg(47％)(C2H5)2CHCO-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。此產(chǎn)品用HPLC方法2(在150分鐘內(nèi)從98.2(AB)遞減至75/25(A/B))。1H NMRFAB-MS，m/e 474.3(MH+)分析 C24H35N5O5·1.5HCl·1.1H2O計(jì)算C，51.10；H，6.91；N，12.41；Cl，9.43；實(shí)測C，51.10；H，6.81；N，12.41；Cl，9.62.
實(shí)例91 (C2H5)2CHCO-Met(O2)-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HClA)(C2H5)2CHCO-Met(O2)-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例90所述的那些方法，制備了530mg(C2H5)2CHCOMet(O2)-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。1H NMRFAB-MS，m/e 508.2(MH+)分析 C24H37N5O5S·1.1HCl計(jì)算C，52.63；H，7.01；N，12.79；Cl，7.12；實(shí)測C，52.42；H，7.03；N，12.80；Cl，6.99.
實(shí)例92 MeSO2CH2CO-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl(N-(甲磺酰乙酰)-L-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺·鹽酸鹽)MeSO2CH2CO-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl的制備用基本上相當(dāng)于實(shí)例1-G和18-F所述的那些方法，制備了550mgMeSO2CH2CO-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2·HCl。1H NMRFAB-MS，m/e 520.5(MH+)分析C25H37N5O5S·1.2HCl·H2O計(jì)算C，51.64；H，6.97；N，12.04；Cl，7.32；實(shí)測C，51.58；H，6.84；N，12.18；Cl，7.61.
相信本發(fā)明化合物能選擇性抑制凝血酶而不抑制其它蛋白酶和非酶蛋白參與血凝，無顯著干擾人體天然的血塊溶解能力(此類化合物對血纖維蛋白溶解作用的抑制效應(yīng)低)。進(jìn)而，相信這樣的選擇性使得能使用血栓溶解劑而無實(shí)質(zhì)性干擾血栓溶解作用和血纖維蛋白溶解作用。此外，相信本發(fā)明化合物有經(jīng)口活性。
在其諸多方面之一，本發(fā)明提供哺乳動物體內(nèi)凝血酶的抑制方法，包括對需要治療的哺乳動物給藥一有效(凝血酶抑制)劑量的通式I化合物。
本方法所期待的凝血酶抑制包括適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)治療性處理和/或預(yù)防性處理。
在一個進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療人體或哺乳動物中需要凝血酶抑制的病癥。預(yù)期本發(fā)明化合物可在包括人在內(nèi)的動物中用于治療或預(yù)防血栓形成和血液與組織中的過高可凝固性。此類化合物有潛在效用的疾病狀態(tài)就在于血栓形成和血液與組織中過高可凝固性的治療或預(yù)防。此類化合物在治療和/或預(yù)防中有潛在效用的疾病狀態(tài)包括靜脈血栓形成和肺栓塞、動脈血栓形成、例如心幾缺血、心肌梗塞形成、不穩(wěn)定心絞痛、血栓形成引起的中風(fēng)和未梢動脈形成。進(jìn)而，此類化合物在動脈粥樣硬化疾病如冠狀動脈病、腦動脈病和末梢動脈病的預(yù)防方面有預(yù)期效用。進(jìn)而，此類化合物預(yù)期可與血栓溶解劑一起用于(預(yù)防和治療)心肌梗塞形成。進(jìn)而，此類化合物在血栓溶解、經(jīng)皮穿透血管成形術(shù)(PTCA)和冠狀動脈旁通手術(shù)之后重新閉合的治療或預(yù)防方面有預(yù)期的效用。進(jìn)而，此類化合物在防止顯微外科之后重新形成血栓方面有預(yù)期效用。進(jìn)而，此類化合物預(yù)期可用于與人造器官和心瓣膜有關(guān)的抗血凝治療。進(jìn)而，此類化合物在血液透析和播散性血管內(nèi)凝血的抗凝血治療方面有預(yù)期效用。進(jìn)一步的預(yù)期效用在于患者活體使用的導(dǎo)管與機(jī)械器具的漂洗，和作為抗凝劑用于血液、血漿及其它血液產(chǎn)品的離體保存。再進(jìn)一步，此類化合物在血液凝固可能成為其基本貢獻(xiàn)過程或二次病理學(xué)來源的其它疾病如癌癥(包括轉(zhuǎn)移瘤)和發(fā)炎性疾病(包括關(guān)節(jié)炎和糖尿病)方面也有預(yù)期效用。這種抗凝化合物是經(jīng)口或非經(jīng)腸如靜脈內(nèi)輸注(iv)、肌內(nèi)注射(im)或皮下注射(sc)給藥的。
按照本發(fā)明給藥的化合物獲得治療和/或預(yù)防效果的具體劑量，當(dāng)然將決定于圍繞該病例的特定情況，包括諸如給藥的化合物、給藥速率和所治療的病癥。
以上各效用的典型日劑量在約0.01mg/kg和約1000mg/kg之間。劑量制度可以不同，例如，對于預(yù)防用途，可以給藥單一日劑量，或者每日3～5次這樣的多劑量也可能是合適的。在危急的護(hù)理情況下，本發(fā)明化合物是以約0.01mg/kg/h和約20mg/kg/h之間、較好在約0.1mg/kg/h和約5mg/kg/h之間的速率，用iv輸注法給藥的。
本發(fā)明的方法也與血塊溶解劑如組織纖維蛋白溶酶原激酶(t-PA)、改性t-PA、鏈激酶或尿激酶結(jié)合實(shí)施。在血塊形成已經(jīng)發(fā)生而且動脈或靜脈被部分阻塞或完全阻塞的情況下，通常采用一種血塊溶解劑。本發(fā)明化合物可在該溶解劑之前或與其一起或在其單獨(dú)使用之后給藥，進(jìn)而較好的是與阿司匹林一起給藥，以防止血塊形成的再發(fā)生。
本發(fā)明的方法也與能抑制血小板凝聚的血小板糖蛋白受體(IIb/IIIa)拮抗藥結(jié)合實(shí)施。本發(fā)明的化合物可在(IIb/IIIa)拮抗藥之前或與其一起或其使用之后給藥，以防止血塊形成的再發(fā)生。
本發(fā)明的方法也與阿司匹林結(jié)合實(shí)施。本發(fā)明的化合物可在阿司匹林之前或與其一起給藥，或在其使用之后給藥，以防止血塊形成的再發(fā)生。如上所述，較好的是本發(fā)明化合物與血塊溶解劑及阿司匹林結(jié)合給藥。
本發(fā)明也提供可用于上述治療方法的醫(yī)藥配方。本發(fā)明的醫(yī)藥配方包含有效凝血酶抑制 量的通式I化合物，以及藥物上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。為了經(jīng)口給藥，把抗血栓形成化合物配制成明膠膠囊或片劑，它們可以含有粘結(jié)劑、潤滑劑、崩解劑等這樣一些賦形劑。為了非經(jīng)腸給藥，把抗血栓形成劑配制在一種藥物上可接受的稀釋劑如生理鹽水(0.9％)、5％右旋葡萄糖、林格溶液等中。
本發(fā)明的化合物可以配制成含有約0.1mg至約1000mg劑量的單元劑量配方。較好的是，此類化合物呈藥物上可接受的鹽的形式，例如，硫酸鹽、乙酸鹽或磷酸鹽。單元劑量配方的實(shí)例是在10ml無菌玻璃安瓿中含有5mg作為藥物上可接受的鹽的本發(fā)明化合物。單元劑量配方的另一個實(shí)例是在一個無菌安瓿所含的20ml等滲鹽水中含有約10mg作為藥物上可接受的鹽的本發(fā)明化合物。
此類化合物可以經(jīng)各種各樣的途徑給藥，其中包括經(jīng)口、經(jīng)直腸、經(jīng)皮、經(jīng)皮下、經(jīng)靜脈內(nèi)、經(jīng)肌內(nèi)和經(jīng)鼻內(nèi)。本發(fā)明化合物較好在給藥之前制成配方。因此，本發(fā)明的另一種實(shí)施方案是一種醫(yī)藥配方，其中包含有效量的通式I化合物或其藥物上可接受的鹽或溶劑化物，及其藥物上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
此類配方中的活性組分占該配方重量的0.1％至99.9％。所謂“藥物上可接受”，系指該載體、稀釋劑或賦形劑必須能與該配方的其它組分兼容，而且對其接受者無害。
本發(fā)明醫(yī)藥配方是用眾所周知和容易得到的組分通過已知步驟制備的。在制作本發(fā)明的組合物時，通常使活性組分摻合一種載體、或用一種載體稀釋、或包容在一種載體內(nèi)，后者可以呈膠囊、小藥囊、紙或其它容器的形式。當(dāng)載體起稀釋劑作用時，它可以是一種固體、半固體或液體材料，充當(dāng)該活性組分的載體、賦形劑或介質(zhì)。因此，此類組合物可以呈片劑、丸劑、粉末劑、錠劑、小藥囊劑、小扁囊劑、酏劑、懸浮液劑、乳液劑、溶液劑、糖漿劑、氣霧劑(固體狀或在液體介質(zhì)中)、軟和硬膠囊劑、栓劑、無菌可注射溶液、無菌包裝的粉末劑等形式。本發(fā)明的組合物可以用技術(shù)上已知的步驟配制，使得能在對患者給藥之后迅速、持久或延時釋放出活性組分。
以下配方實(shí)例只是舉例說明，無意以任何方式限制本發(fā)明的范圍?！盎钚越M分”當(dāng)然是指按照通式I的化合物或其藥物上可接受的鹽或溶劑化物。
配方1用下列組分制備硬膠囊劑數(shù)量(mg/膠囊)活性組分 250干燥淀粉 200硬脂酸鎂 10合計(jì) 460配方2用下列組分制備一種片劑數(shù)量(mg/片)活性組分 250微晶纖維素400煙氣二氧化硅 10硬脂酸 5合計(jì) 665將這些成分摻合、壓片、形成每片重665mg的片劑。
配方3制備含有下列成分的氣溶膠溶液重量活性組分 0.25乙醇 25.75推進(jìn)劑22(氯二氟甲烷)70.00合計(jì)100.00將活性化合物與乙醇混合，把混合物添加到一部分推進(jìn)劑22中，冷卻到-30℃，并轉(zhuǎn)移到一臺灌裝機(jī)中。然后，將所需數(shù)量灌入一個不銹鋼容器中，用該推進(jìn)劑的剩余部分稀釋.然后給該容器裝上閥門單元。
配方4每片含有60mg活性組分的片劑制作如下活性組分 60mg淀粉 45mg微晶纖維素 35mg聚乙烯基吡咯烷酮(10％水溶液) 4mg羧甲基淀粉鈉 4.5mg硬脂酸鎂 0.5mg滑石粉 1mg合計(jì) 150mg讓活性組分、淀粉和纖維素通過45號目美國篩、充分混合。使含有聚乙烯基吡咯烷酮的水溶液與所形成的粉末混合，然后讓混合物通過14號目美國篩。這樣產(chǎn)生的顆粒在50C干燥，并使之通過18號目美國篩。然后，把事先通過60號目美國篩的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石粉添加到該顆粒中，混合后在壓片機(jī)上壓片，得到每片重150mg的片劑。
配方5每個含有80mg活性組分的膠囊制作如下活性組分 80mg淀粉 59mg微晶纖維素59mg硬脂酸鎂 2mg合計(jì) 200mg將活性組分、纖維素、淀粉和硬脂酸鎂摻合、通過45號目美國篩、以小200mg數(shù)量灌裝到硬膠囊中。
配方6每個含有225mg活性組分的栓劑制作如下活性組分225mg包和脂肪酸甘油酯2.000mg合計(jì)2.225mg讓活性組分通過60號目美國篩，并懸浮在事先用必要的最低限度熱量熔融的飽和脂肪酸甘油酯中。然后把混合物傾入標(biāo)稱2g容量的栓劑模具中，并使之冷卻。
配方7每5ml劑量各含50mg活性組分的懸浮液劑制作如下活性組分 50mmg羧甲基纖維素鈉50mg糖漿 1.25ml苯甲酸溶液0.10ml芳香劑適量色素 適量純化水添加至總量 5ml使活性組分通過45號目美國篩，與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合，形成一種均勻膏狀物。苯甲酸溶液、芳香劑和色素用一部分水稀釋，在攪拌下添加到膏狀物中。然后添加足夠的水以產(chǎn)生所需要的體積。
配方8一種靜脈內(nèi)配方可以制備如下活性組分100mg等滲鹽水1,000ml上述組分的溶液一般是以1ml/分鐘的速率對患者靜脈內(nèi)給藥的。
本發(fā)明(通式I)所提供的化合物是有經(jīng)口活性的，而且能選擇性抑制哺乳動物中凝血酶的作用。
本發(fā)明化合物作為一種有效并具有經(jīng)口活性的凝血酶抑制劑的能力是用下列一種或多種試驗(yàn)評估的。
凝血酶的抑制是用凝血酶的酰胺酶活性的離體抑制證實(shí)的，這是用凝血酶使產(chǎn)色基質(zhì)N-苯甲酰-L-苯丙氨酰-L-纈氨酰-L-精氨酰-對硝基苯胺水解的試驗(yàn)測定的。
此試驗(yàn)按如下進(jìn)行使50μl緩沖劑(0.03M Tris，0.15M NaCl，pH7.4)與25μl牛凝血酶或人凝血酶溶液(0.21mg/ml血栓性郁血牛凝血酶，Parke-Davis，或純化的人凝血酶，印第安納州南本德市酶研究實(shí)驗(yàn)室，大約8NIH單位/ml，緩中劑相同)和25μl試驗(yàn)化合物溶液(溶劑是50％甲醇水溶液，體積比)混合。添加150μ產(chǎn)色基質(zhì)水溶液(0.25mg/ml)，通過在405nm監(jiān)測對硝基苯胺的釋放反應(yīng)，測定該基質(zhì)的水解速度。以游離凝血酶濃度對水解速度作圖，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后，把用試驗(yàn)化合物觀察到的水解速度，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成各試驗(yàn)中的“游離凝血酶”值。
(與試驗(yàn)化合物結(jié)合的)結(jié)合凝血酶是通過從試驗(yàn)中所用的凝血酶的已知初始量減去每個試驗(yàn)中觀察到的游離凝血酶數(shù)量計(jì)算得到的。每個試驗(yàn)中的游離抑制劑數(shù)量是通過從所添加抑制劑(試驗(yàn)化合物)的摩爾數(shù)減去結(jié)合凝血酶的摩爾數(shù)計(jì)算得到的。
Kass值是凝血酶與試驗(yàn)化合物(I)之間的反應(yīng)的假設(shè)平衡常數(shù)。
凝血酶+I凝血酶-I Kass是對試驗(yàn)化合物的一系列濃度計(jì)算的，其平均值以升/摩爾的單位報告。
大體上遵照以上對人體凝血酶所述的步驟，并使用其它人體血凝系統(tǒng)絲氨酸蛋白酶和血纖維蛋白溶解系統(tǒng)蛋白酶以及以下識別的適當(dāng)產(chǎn)色基質(zhì)，評估了本發(fā)明化合物對血凝因子絲氨酸蛋白酶和對血纖維蛋白溶解系統(tǒng)絲氨酸蛋白酶的選擇性，以及它們基 本上不干擾血纖維蛋白溶解系統(tǒng)的絲氨酸蛋白酶。凝血酶抑制劑較好應(yīng)不傷害尿激酶、組織纖維蛋白溶酶原激酶(t-PA)和鏈激酶誘發(fā)的血纖維蛋白溶解。這對于此類藥劑作為鏈激酶、t-PA或尿激酶血栓溶解治療的輔助藥物的治療用途，和對于此類藥劑作為不傷害內(nèi)生血纖維蛋白溶解(相對于t-PA和尿激酶)的抗血栓形成劑的用途，都會是重要的。除了不干擾血纖維蛋白溶解蛋白酶的酰胺酶活性外，這樣的血纖維蛋白溶解系統(tǒng)保護(hù)還可以利用人體血漿塊及其被各自的血纖維蛋白溶酶原激酶溶解來研究。
人體因子X、Xa、IXa、XIa和XIIa購自酶研究實(shí)驗(yàn)室(印第安納州南本德)；人體尿激酶購自Leo醫(yī)藥公司(丹麥)；重組體活化的蛋白C(aPC)是在Eli Lilly公司基本上按照美國專利4,981,952制備的。產(chǎn)色基質(zhì)N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-對硝基苯胺(用于因子Xa)；N-Cbz-D-Arg-Gly-Arg-對硝基苯胺(用于因子IXa試驗(yàn)作為因子Xa基質(zhì))；焦谷氨酰-Pro-Arg-對硝基苯胺(用于因子XIa和用于aPC)H-D-Pro-Phe-Arg-對硝基苯胺(用于因子XIIa)；和焦谷氨酰-Gly-Arg-對硝基苯胺(用于尿激酶)；這些購自Kabi Vilrum(瑞典斯德爾摩)或購自Midwest Biotech(印第安納州Fishers)。牛胰蛋白酶購自Worthington Biochemieals(新譯西州弗里霍爾德)；人體血漿激肽釋放酶購自Kabi Vitrum(瑞典斯德哥爾摩)。用于血漿激肽釋放酶的產(chǎn)色基質(zhì)H-D-Pro-Phe-Arg-對硝基苯胺購自Kabi Vitrum(瑞典斯德哥爾摩)。N-苯甲酰-Phe-Val-Arg-對硝基苯胺這種用于人體凝血酶和用于胰蛋白酶的基質(zhì)是按照以上對本發(fā)明化合物所述的步驟用已知的肽偶合方法從商業(yè)上可得的反應(yīng)物合成的，或購自Midwest Biotech(印第安納州Fishers)。
人體血纖維蛋白溶酶購自Boehringer Mannheim(印第安納州印第安納波利斯)；nt-PA以單鏈活性參考物形式購自American Diagnostica(康涅狄格州格林威治)；改性的t-PA6(mt-PA6)是在El；Lilly公司用技術(shù)上已知的步驟(見Burck等人，J，Biol，Chem，265,5120-5177(1990))制備的。血纖維蛋白溶酶產(chǎn)色基質(zhì)H-D-Val-Leu-Lys-對硝基苯胺和組織血纖維蛋白溶酶原激酶(t-PA)基質(zhì)H-D-Ile-Pro-Arg-對硝基苯胺購自KabiVitrum(瑞典斯德哥爾摩)。
在以上所述的產(chǎn)色基質(zhì)中，三字母符號Ile、Glu、Gly、Pro、Arg、Phe、Val、Leu和Lys分別用來指出對應(yīng)的氨基酸基團(tuán)異亮氨酸、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和賴氨酸。
以下表1列出了用所指出的、通式I代表的化合物得到的Kass值。
表1抑制性能-----Kass×106(1/摩爾)----實(shí)例 人體凝血酶Xa 胰蛋白酶 血纖維蛋白溶酶 t-PA1 3.3 0.0017 0.38 0.010 0.0822 4.4 0.0092 1.0 0.045 0.0233 2.1 0.0021 0.24 0.0046 0.0334 13. 0.0057 0.0760.0033 0.0745 0.035 0.00039 0.00015 0.00022 ＜0.0016 2.3 0.00024 0.0016 0.00023 ＜0.0017 1.9 0.0041 0.0081 0.000220.00378 5.3 0.00038 0.0220.000800.00129 0.033 0.00058 0.00017＜0.001＜0.00110 1.4 0.0000240.0770.0045 0.0005511 0.064 0.0000680.0036 0.0060 ＜0.00112 0.440.0000420.0022 0.000870.00004213 0.490.00098 0.00066 0.00011 ＜0.00114 0.021 0.00014 0.000056 0.000046 ＜0.00115 220 0.0070 2.6 0.017 0.00416 0.970.0051 0.02 0.0017 0.001217 33 0.049 3.8 0.024 0.003418 180 0.2114 0.085 0.009419 11 0.1441 0.16 0.005620 10 0.1019 0.10 0.007721 3.6 0.620.96 0.031 0.00222 3.0 0.043 8.5 0.042 0.00423 770 0.1421 0.44 0.3124 0.78 ＜0.001 0.03 ＜0.001＜0.00125 0.43 ＜0.001 0.01 ＜0.001 0.0126 13. 0.010.21 0.01 0.01270.29 0.020.02 ＜0.001 0.02280.95 0.010.11 ＜0.001＜0.001290.76 0.020.02 ＜0.001＜0.001300.55 0.020.03 ＜0.001＜0.001
31 0.07 0.14 0.05 ＜0.001 ＜0.00132 0.13 0.03 0.04 ＜0.001 0.0133 0.04 0.04 0.02 ＜0.001 ＜0.00134 0.65 ＜0.0010.49 0.010.0135 0.09 ＜0.0010.04 ＜0.001 ＜0.00136 0.06 ＜0.0010.01 ＜0.001 ＜0.00137 0.02＜0.00938 1.1＜0.0010.07 ＜0.00139 0.12 ＜0.001 ＜0.02 ＜0.00140 0.03 ＜0.0010.01 ＜0.00141 0.01 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.00142 38. 0.07 43 0.120.0143 1.4 0.05 100 0.300.0144 630 0.66 2,6001.8 0.0445 610 1.5 110 1.1 0.7746 240 0.07 48 0.130.0147 45 0.04 82 0.180.0148 4,1005.5 250 0.430.0549 400 3.4 940 0.840.0450 40 4.3 2,2001.8 0.0451 1,3000.84 27 0.130.0152 700 0.46 47 0.110.0153 0.36 ＜0.0010.1＜0.001 ＜0.00154 2.8＜0.0010.52 0.01 ＜0.00155 0.01 ＜0.0010.1＜0.001 ＜0.00156 490 0.20 3.6 0.01 ＜0.00157 39 0.01 0.24 0.01 ＜0.00158 0.60 ＜0.0010.40 ＜0.001 ＜0.00159 1.10 ＜0.0010.21 ＜0.001 ＜0.00160 0.24 ＜0.0010.03 ＜0.001 ＜0.00161 63 0.03 1.0 0.004 0.00862 7.663 0.3164 15 0.0165 4,500 570.
66 120 4.667 1168 60069 340 3.770 430 9.871 1,400 240.72 2,300 28073 2874 2975 0.4576 120.3677 1178 118.679 2.0 0.2480 1,700.90.81 5.3 2.182 5.083 2.4 0.0384 2.9 0.0785 265 30.886 200 0.6387 302.588 410 3.989 0.14 0.07190 0.61 0.00291 3.6 0.00792 130 7.7要說明的是，其X含有D-環(huán)己基丙氨酰部分的化合物意外地改善了關(guān)于凝血酶抑制的強(qiáng)度，而且當(dāng)與其X含有D-苯丙氨酰部分的對應(yīng)化合物比較時顯示出特別令人驚訝地增強(qiáng)的關(guān)于因子Xa抑制的強(qiáng)度。
材料狗血漿是從有意識混種狗(任意一種性別的Hazelton-LRE，Kalamazoo，美國密歇根州)用靜脈穿刺到3.8％檸檬酸鹽中得到的。血纖維蛋白原是從新鮮狗血漿制備的，而人血纖維蛋白原則是按照以前的步驟和規(guī)格從當(dāng)日ACD人血以I-2級分制備的(Smith，Biochem.J.，185，1-11(1980)；和Smith等人，Biochemistry，11，2958-2967(1972))。人血纖維蛋白原(98％純度/無血纖維蛋白溶酶)購自AmericanDiagnostica(康涅狄格州格林威治)。血纖維蛋白原I-2制劑的放射標(biāo)記是按以前報告的方法進(jìn)行的(Smith等人，Biochemistry，11、2958-2967，)(1972))。尿激酶購自Leo醫(yī)藥公司(丹麥)，2200 Ploug單位/管形瓶。鏈激酶購自Hoechst-Roussel醫(yī)藥公司(新澤西州薩默維爾)。
方法對人體血漿塊被t-PA溶解的影響人體血漿塊是通過在微試管中向100μl含有0.0229μCi碘-125標(biāo)記的血纖維蛋白原的人體血漿中添加50μl凝血酶(73NIH單位/ml)形成的。該血漿塊溶解是通過在血漿塊上疊加50μl尿激酶或鏈激酶(50，100或1000單位/ml)并在室溫培養(yǎng)20小時進(jìn)行的。培養(yǎng)后，這些試管用一臺Beckman微離心機(jī)離心分離。把25μl上清液添加到1.0ml體積的0.03M Tris/0.15M NaCl緩沖劑中進(jìn)行r計(jì)數(shù)。100％溶解計(jì)數(shù)對照是通過省略凝血酶(且用緩沖劑代替)而得到的。通過在疊加溶液中以1、5和10μg/ml濃度包括本化合物，評估凝血酶抑制劑對血纖維蛋白溶解的可能干擾。通過把數(shù)據(jù)點(diǎn)線性外推到一個能代表該血纖維蛋白溶解劑特定濃度的50％溶解的數(shù)值，估計(jì)IC50值的粗略近似。
抗凝血劑活性材料狗血漿和大鼠血漿是從有意識混種狗(任意性別，Hazelton-LRE，Kalamazoo，美國密歇根州)或從麻醉的雄性Sprague-Dawley大鼠(HarlanSprague-Dawley公司，美國印第安納州印第安納波利斯)靜脈穿刺到3.8％檸檬酸鹽得到的。血纖維蛋白原是按照以前的步驟和規(guī)格(Smith，Biochem.J.185，1-11(1980)；和Smith等人，Biochemistry，11，2958-2967(1972)從當(dāng)日ACD人體血液以I-2級分形式制備的。人體血纖維蛋白原也以98％純度/無血纖維蛋白溶酶形式購自AmericanDiagnostica(康涅狄格州格林威治)。血凝試劑ACTIN、組織促凝血酶原激酶和人體血漿購自Baxter Healthcare公司Dade分公司(佛羅里達(dá)州邁阿密)。購自Parke-Davis(密歇根州安底特律)的牛凝血酶用于血漿凝固試驗(yàn)方法抗凝血測定凝血試驗(yàn)步驟如以前所述(Smith等人，Thrombosis Research，50，163-174(1988))。用一臺CoASCreener凝血儀(American LABor公司)進(jìn)行所有凝血試驗(yàn)測定。凝血酶原時間(PT)是通過向0.05ml試驗(yàn)血漿中添加0.05ml鹽水和0.05ml組織促凝血酶原激酶-C試劑測定的。活化的部分組織促凝血酶原激酶時間(APTT)是用0.05ml試驗(yàn)血漿與0.05ml肌動蛋白試劑一起溫育120秒隨后添加0.05ml CaCl2(0.02M)測定的。凝血酶時間(TT)是通過向0.05ml試驗(yàn)血漿中添加0.05ml鹽水和0.05ml凝血酶(10NIH單位/ml)測定的。向人體或動物血漿中添加濃度范圍廣泛的通式I化合物，以確定其對APTT、PT和TT試驗(yàn)的延時效應(yīng)。進(jìn)行線性外推，以估計(jì)使每個試驗(yàn)的凝固時間延長一倍所需要的濃度。
動物雄性Sprague Dawley大鼠)350-425g，Harlan Sprague Dawley公司，印第安納州印第安納波利斯)用甲苯噻嗪(20mg/kg，皮下注射)和氯胺酮(120mg/kg，皮下注射)麻醉，并在加熱水毯(37℃)上保溫。給頸靜脈插上導(dǎo)管以便輸注。
動靜脈支路模型左頸靜脈和右頸動脈各插入一根20cm長度的PE60聚乙烯管。其腔內(nèi)有一根棉線(5cm)的一根6cm長中心段大管(PE190)摩擦配合于兩根較長的管段之間，以完成該動靜脈分支回路。血液通過該支路循環(huán)15分鐘，然后小心取出棉線并稱重。濕棉線的重量從該棉線與血栓的總重量中扣除(見JR.Smith，Br.J.Pharmacol.，77，29(1982))。
當(dāng)實(shí)例48的化合物與D-MePhe-Pro-Arg-H(以上第2頁討論的)在此動靜脈支路模中比較時，發(fā)現(xiàn)抗血栓形成強(qiáng)度在連續(xù)靜脈內(nèi)輸注期間大9倍。為了使血栓重量減少到相同程度(減少到對照組的大約20％)，實(shí)例48的化合物使血漿凝血酶時間延長了約3倍，而在標(biāo)準(zhǔn)化合物輸注期間血漿凝血酶時間被延長了20倍以上。在實(shí)例48化合物輸注期間，凝血酶原時間和APTT只被延長到對照組的約120％(少數(shù)幾秒)。
FeCl3動脈損傷模型頸動脈是通過中線前側(cè)頸切口分離的，每根動脈下設(shè)置一只熱電偶，用紙帶式記錄儀連續(xù)記錄血管溫度。一個沿縱向切開的管套(0.058ID×0.077OD×4mm，Baxter Med.Grade Silicone)放置在緊貼該熱電偶上面的每根頸動脈周圍。六水合FeCl3溶解在水中，濃度(20％)僅以FeCl3的實(shí)際重量表達(dá)。為了傷害該動脈和誘發(fā)血栓形成，用移液管取2.85μl置于該管套上，以浸蝕該熱電偶探針上方的動脈。溫度迅速下降時表明動脈閉塞。閉塞時間以分鐘報告，代是施用FeCl3和血管溫度迅速下降之間經(jīng)過的時間(見K.D.Kurz，Thromb.Res.，60，269(1990))。
自發(fā)血栓溶解模型離體數(shù)據(jù)表明，肽凝血酶抑制劑能抑制凝血酶及其它絲氨酸蛋白酶，如血纖維蛋白溶酶和組織血纖維蛋白溶酶原激酶。為了評價本發(fā)明化合物是否會抑制活體血纖維蛋白溶解，通過把一種有標(biāo)記的全血塊移植到肺循環(huán)中，測定自發(fā)血栓溶解速度。將大鼠血液(1ml)與牛凝血酶(4IU，Parke Davis)和125I人體血纖維蛋白原(5μCi，ICN)迅速混合，立即吸入硅橡膠管中，在37℃溫育1小時。將老化的血栓從該管中擠出，切成1cm段，用常用鹽水洗滌3次，每段都用r計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。把一個有已知計(jì)數(shù)的血栓段吸進(jìn)一根導(dǎo)管中，隨后將其移植到頸靜脈中。把導(dǎo)管前端推進(jìn)到右心房附近，將該血栓塊擠出，使之漂移到肺循環(huán)中。移植后1小時，將心臟和肺臟摘取、分別計(jì)數(shù)。血栓溶解用百分率表示，其中 移植的血栓塊的血纖維蛋白溶解是依賴于時間而發(fā)生的(見J.P.Clozel，Cardiovas.Pharmacol.，12，520(1988))。
血凝參數(shù)血漿凝血酶時間(TT)和活化的部分組織促凝血酶原激酶時間(APTT)是用血纖維計(jì)(firometer)測定的。血液從頸導(dǎo)管采樣，并收集在含有檸檬酸鈉(3.8％，1份對9份血液)的注射器中。測定TT時，將大鼠血漿(0.1ml)與鹽水(0.1ml)和牛凝血酶(0.1ml，30U/ml Tris緩沖劑溶劑；Parke Davis)在37℃混合。測定APTT時，血漿(0.1ml)和APTT溶液(0.1ml，Organon Teknika)一起溫育5分鐘(37℃)，添加CaCl2(0.01ml，0.025M)以開始凝固。試驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行，取平均值。
生物利用度指數(shù)生物活性的量度，即血漿凝血酶時間(TT)，用來代替母體化合物試驗(yàn)所依據(jù)的假設(shè)是，TT的增量僅源于母體化合物的凝血酶抑制作用。凝血酶抑制劑對TT的影響的時程是在對麻醉大鼠經(jīng)靜脈內(nèi)(iv)濃縮藥團(tuán)給藥之后和在對禁食的有意識大鼠經(jīng)口(po)處理之后測定的。由于血液體積的限制，和確定從處理時間到其響應(yīng)回到處理前數(shù)值的時間的時程所需要的點(diǎn)數(shù)，使用了兩個大鼠種群。每個樣品種群代表交替順序的時點(diǎn)。該時程內(nèi)的平均TT用來計(jì)算曲線下面積(AUC)。生物利用度指數(shù)是用以下所示公式計(jì)算的，并以百分相對活性表示。
確定血漿TT時程的曲線下面積(AUC)，并按劑量加以調(diào)整。這種生物利用度指數(shù)稱為“％相結(jié)活性”，按如下計(jì)算 化合物化合物溶液是每日用常用鹽水新鮮制備的，以濃縮藥團(tuán)方式注射，或在實(shí)驗(yàn)干擾前15分鐘開始輸注并在整個實(shí)驗(yàn)干擾中繼續(xù)輸注，這種實(shí)驗(yàn)干擾在動靜脈支路模型中是15分鐘，而在FeCl3動脈損傷模型中和在自發(fā)血栓溶解模型中是60分鐘。濃縮藥團(tuán)注射體積對iv(經(jīng)靜脈內(nèi))是1ml/kg，對po(經(jīng)口給藥)是5ml/kg，輸注體積是3ml/hr。
統(tǒng)計(jì)結(jié)果用平均+/-SEM表示。用單向方差分析來檢測統(tǒng)計(jì)上顯著的差異，然后運(yùn)用Dunnett試驗(yàn)來確定哪些平均值是不同的。等平均值零假設(shè)剔除的顯著水平是P＜0.05。
動物雄性狗(Beagles；18個月～2年；12～13kg，Marshall Farms，NorthRose，New York 14516)被禁食過夜，并在給藥后240分鐘喂養(yǎng)Purina認(rèn)證的配方食譜(Purina Mills，St.Louis，Missouri)。水可隨意攝取。室溫保持在66～74°F， 相對濕度45～50％照明時間早6時至晚6時。
藥物動力學(xué)模型試驗(yàn)化合物是在給藥前即時配制的，將其溶解在無菌0.9％鹽水中配成5mg/ml制劑。用經(jīng)口管飼法給狗以單劑量2mg/kg試驗(yàn)化合物。血樣在給藥后0.25、0.5、0.75、1、2、3、4和6小時采自頭側(cè)靜脈。樣品用加檸檬酸的Vacutainer管收集。并在用離心法還原成血漿之前在冰上保存。血漿樣品用二硝基苯肼衍生，用HPLC(Zorbax SB-C8柱)分析，以用磷酸調(diào)至pH7的甲醇/500mM乙酸鈉(60∶40，體積比)洗脫。記錄血漿中的試驗(yàn)化合物濃度，用來計(jì)算藥物動力學(xué)參數(shù)消除速度常數(shù)，Ke；總清除率，Clt；分布體積，VD；血漿中試驗(yàn)化合物最大濃度的時間，tmax；tmax的試驗(yàn)化合物最大濃度，Cmax；血漿半衰期；t0.5，曲線下面積，A.U.C.；和吸收的試驗(yàn)化合物分?jǐn)?shù)，F(xiàn)。
犬冠狀動脈血栓形成模型狗的外科準(zhǔn)備和儀器化按Jackson等人(Circulation，82，930-940(1990))所述那樣進(jìn)行。混種狗(6～7)個同齡，任意性別，Hazelton-LRE，Kalamazoo，MI，USA)用戊巴比妥鈉(30mg/kg經(jīng)靜脈內(nèi))i.v.))麻醉、插管、用室內(nèi)空氣通氣。調(diào)整潮間體積和呼吸速度，以使血液PO2、PCO2和pH保持在正常極限之內(nèi)。插入皮下針狀電極，以記錄導(dǎo)程II心電圖。
通過左中側(cè)頸切口分離左頸靜脈和共用頸動脈。用插入頸動脈中的預(yù)標(biāo)定Millar換能器(MPC-500型，Millar Instruments，美國得克薩斯州休斯頓)連續(xù)測量動脈血壓(ABP)。頸靜脈中插入套管，用于在實(shí)驗(yàn)期間采血樣。此外，兩只后腳的股靜脈都插入套管，用于試驗(yàn)化合物給藥。
在第五肋間空間進(jìn)行左胸廓造口術(shù)，使心臟懸在一個心包支架上。在靠近第一主對角線心室分支的位置分離出一段1～2cm長的左彎曲冠狀動脈(LCX)。一根3～4cm長的、有26號針尖的導(dǎo)線陽極電極(有Teflon涂層的30號鍍銀銅絲)插入LCX中，使之與該動脈的內(nèi)膜表面接觸(在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時予以證實(shí))。此模擬電路是通過在皮下位置(s.c)放置陰極完成的。在電極區(qū)上方的LCX周圍放置一個可調(diào)塑料合器。在靠近該陽極的LCX周圍放置一個預(yù)標(biāo)定的電磁流量探針(CarolinaMedical Electronics，King，NC，USA)用于測定冠狀血液流量(CBF)。調(diào)節(jié)該合器，以產(chǎn)生在LCX 10秒鐘機(jī)械閉塞后觀察到的充血性血液流動反應(yīng)的40～50％抑制作用。用數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)(M3000型，ModularInstruments，Malvern，PA，USA)記錄和分析所有血液動測量與心電圖測量。
血栓形成與化合物給藥方案通過給該陽極施加100μA直流電(DC)，產(chǎn)生LCX內(nèi)膜的電解性損傷。此電流保持60分鐘，然后使之中斷，不管血管是否已經(jīng)閉塞。血栓形成自發(fā)進(jìn)行，直至LCX完全閉塞(根據(jù)零CBF和S-T段增大來確定)。使閉塞性血栓能老化1小時之后，開始化合物給藥。本發(fā)明化合物以0.5和1mg/kg/h的劑量輸注2小時，同時開始輸注血栓溶解劑(如組織血纖維蛋白溶酶原激酶、鏈激酶、APSAC)。試驗(yàn)化合物給藥后進(jìn)行3小時再灌注。成功的血栓溶解之后冠狀動脈的再閉塞定義為零CBF持續(xù)≥30分鐘。
血液學(xué)和模板流血時間測定用血液學(xué)分析儀(Cell-Dyn 900，Sequoia-Turner，MountView，CA，USA)，以40μl加檸檬酸鹽(3.8％)的血液樣品(1份檸檬酸鹽9份血液)，測定全血細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白和血細(xì)胞比容值。用一臺Simplate II流血時間測定儀(Organon Teknika Durham，N.C.，USA)測定牙齦模板流血時間。用該測定儀在狗的上或下左顎牙齦上做2個橫向切口。每個切口均為3mm寬×2mm深。在做切口時，用秒表測定出血到底發(fā)生多長時間。當(dāng)血液從切口滲出時用棉簽吸取血液。模板流血時間是從切口到流血停止的時間。流血時間是在試驗(yàn)化合物臨給藥前(0分鐘)、輸注60分鐘、試驗(yàn)化合物給藥結(jié)束時(120分鐘)和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時取值的。
所有數(shù)據(jù)都進(jìn)行單向方差分析(ANOVA)，隨后進(jìn)行Student-Neuman-Kuels此后t檢驗(yàn)，以確定其顯著性水平。用重復(fù)測定ANOVA來確定各實(shí)驗(yàn)期間各時點(diǎn)之間的顯著差異。各數(shù)值均確定為至少在p＜0.05的水平上是有統(tǒng)計(jì)差異的。所有數(shù)值都是平均±SEM。所有研究都按照美國生理學(xué)學(xué)會的指導(dǎo)原則進(jìn)行。關(guān)于這些步驟的進(jìn)一步細(xì)節(jié)，詳見Jackson等人，J.Cardiovasc.pharmacol.，21，587-599(1993)。
表2人體血漿抗凝血2×凝固時間(ng/ml)％經(jīng)口/經(jīng)靜脈內(nèi)實(shí)例 TTAPTT PT 活性(大鼠)1250 NT NT 82170 NT NT NT3590 NT NT NT4230 NT NT NT5 30,000 NT NT NT6390 NT NT NT7490 NT NT NT8130 NT NT NT9 ＞91,000 NT NT NT10420 NT NT NT11 8,800 NT NT NT12 1,700 NT NT NT13660 NT NT NT14 21,000 NT NT NT15 9 89 2004166508,6008,500 NT17 26 370 400 1518 7 79 170 1219 58 300 540 NT20 62 550 600 23211602,0001,000 NT221702,3001,000 NT23 7 86 120 1224 1,000 25,900 25,000 NT25 1,430 34,600 40,400 NT26 37 870 750 NC127 1,940 27,800 27,000 NT285208,1008,300 NT297509,800 15,800 NT30 1,000 14,000 14,400 NT31 10,800 34,500 30,000 NT323,100 28,500 47,800 NT33 18,900 59,300 70,900 NT34 530 4,900 5,500 NT354,500 50,400 78,400 NT367,700 ＞91,000＞91,000 NT37 ＞9,000＞9,000 ＞9,000 NT38 540 6,100 11,100 NT395,300 69,200 78,600 NT40 35,100 ＞91,000＞91,000 NT41 82,200 ＞91,000＞91,000 NT42 20270 320 NC243 280 1,100 930 NT444. 100 170 NT458200 330 NC2462.67 77 NC347 12. 140 270 NC2482.33 59 22495130 130 NC250 35460 420 NT512 48 110 NT526 80 170 NT531,400 33,800 34,500 NT54 140 3,300 2,200 NT55 55,800 ＞91,000＞91,000 NT565160 200 NT57 14360 340 NT58 710 14,300 11,400 NT59 420 5,500 7,000 NT603,200 22,200 77,700 NT61 45679 756 NT62 54 NT63 680 NT64 23900 650 NC3651 48 85 NT66 7.9180 270 NT67 34. 1,8001,300 NT68 4. 49 190 NT69 5. 110 220 NT70 2 160 180 NT71 189 150 NC172 1 160 160 NC173 21 340 330 NT74 20 420 350 NT75NT76 29 490 560 NT77 53 1,600 890 NT78 46 430 760 NT79140 1,7002,400 NT80 440 130 NT81 110 1,5002,700 NT82 130 3,8003,000 NT8391 1,0001,300 NT84 110 1,5001,900 NT85 4.9 100 197 NT86 481 180 NT87 9 260 310 NT88 4 100 200 NT89 57051,000 37,000 NT90 33014,500 14,600 NT9163 3,0003,500 NT92 8.9 210 340 NT表2注釋NC1表示篩選沒有完成；在20mg/kg(經(jīng)口給藥)時觀察到低或非常低的活性。
NC2表示篩選沒有完成；在60mg/kg(經(jīng)口給藥)時觀察到低或非常低的活性。
NC3表示篩選沒有完成；在50mg/kg(經(jīng)口給藥)時觀察到低或非常低的活性。
NT表示沒有試驗(yàn)，視為空白項(xiàng)目。
權(quán)利要求
1.式I所示的化合物或其藥物上可接受的鹽；或所述化合物的藥物上可接受的溶劑化物或其鹽X-Y-NH-(CH2)r-GI其中X是脯氨酰基、高脯氨?；?、Rm-(CH2)g-NH-CH2C(O)-、 其中Rd是羧基或甲磺酰；Re是NHRc、NHCORc或NHCOORc；其中Rc是C1-C10烷基、C3-C8環(huán)烷基或含有4-10個碳原子的(C3-C8)環(huán)烷基(C1-C6)烷基基團(tuán)；T是C3-C8環(huán)烷基、C1-C8烷基、 a是0、1或2；以及Q是-OH、C1-C4烷氧基，或-NH-A；A是氫、C1-C4烷基、R”SO2-、 R”O(jiān)C(O)-、R”C(O)-、R11C(O)-或-(CH2)g-Rm；g是1、2或3；B是氫或C1-C4烷基；R’是氫或C1-C4烷基；R”是C1-C4烷基，C1-C4全氟烷基、-(CH2)d-Rm，或未取代的或取代的芳基，這里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代的或取代的芳族雜環(huán)，該雜環(huán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子，或是一個9元或10元的未取代的或取代的稠合雙環(huán)芳族雜環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子；Rm是COORb、-SO2(C1-C4烷基)、SO3H、-P(O)(ORb)2或四唑-5-基；Rn是COORb或四唑-5-基；各個Rb獨(dú)立地是氫或C1-C4烷基；d是1、2或3；m是0、1或2；n是0、1或2；和Z是氫、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素或RaSO2NH-、其中Ra是C1-C4烷基；Y是其中Rg是C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基，或-(CH2)p-L-(CH2)q-T＇；Rp是氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’；其中p是0、1、2、3或4；L是-個鍵，-O-、-S-或-NH-；q是0、1、2或3；T＇是氫、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、-COOH、-CONH2，或Ar，其中Ar是未取代的或取代的芳基，這里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代的或取代的芳族雜環(huán)，該雜環(huán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子，或是一個9元或10元的未取代的或取代的稠合雙環(huán)芳族雜環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子；Ry是-CH2-、-O-、-S-，或-NH-；和Rz是一個鍵，或當(dāng)與Ry及3個鄰接的碳原子合在一起時形成一個含有5-8個原子的飽和碳環(huán)，其中一個原子可以是-O-、-S-，或-NH-；r是1、2或3；和G是-(CH2)s-R，其中s是0-5，-CH＝CH-(CH2)t-R，其中t是0-3，或者G是 其中D和E各自獨(dú)立地是N或CH；k是0或1；b是0或1；M是S、O、或NH；各個W獨(dú)立地是N或CH；以及R是-NH2、 或 或者G是 而且其中下面的芳環(huán)或雜芳環(huán)中的-個至所有其余未取代的碳原子可以帶有-個氟取代基 但其條件是(1)當(dāng)G是-(CH2)s-NH-C(NH)NH2、y是未取代的脯氨?；?Rp是氫)、及T是 時，A不是氫或叔丁氧羰基；(2)當(dāng)r＝1及s＝0時，R不是氨基或胍基；(3)當(dāng)G是-(CH2)s-R，其中R是 Y是 未取代的脯氨酰基(Rp是氫)或4-羥基脯氨?；?Rp是OH)、R＇是氫，T是環(huán)己基以及Q是-NH-A時，A不是氫、C1-C4烷基、甲磺?；?(CH2)g-Rm；(4)當(dāng)G是-(CH2)s-R，其中R是 y是未取代的脯氨?；?Rp是氫)或4-甲基-硫代脯氨酰基(Rp是-SCH3)，及Q是-NH-A時，R”SO2不是芳基磺酰；(5)當(dāng)G是 T是C1-C8烷基、 及Q是-NH-A時，A不是R”SO2-。
2.如權(quán)利要求1所要求的式I化合物，或其藥物上可接受的鹽；或所述化合物的藥物上可接受的溶劑化物或其鹽，其中；X是脯氨?；?、高脯氨酰基、 T是C3-C8環(huán)烷基、C1-C8烷基、 a是0或1；Q是OH、C1-C4烷氧基、或-NH-A；A是氫或C1-C4烷基、R”SO2-、R”O(jiān)C(O)-、R”C(O)-、或-(CH2)g-COOH；g是1、2或3；B是氫或C1-C4烷基；R＇是氫或C1-C4烷基；R”是C1-C4烷基、C1-C4全氟烷基、-(CH2)d-COOH，或未取代的或取代的芳基，這里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代的或取代的芳族雜環(huán)，該雜環(huán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子，或是一個9元或10元的未取代的或取代的稠合雙環(huán)芳族雜環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子；d是1、2或3；m是0、1或2；n是0、1或2；和Z是氫、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素，或RaSO2NH-，其中Ra是C1-C4烷基；Y是 其中Rg是C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基，或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’；Rp是氫、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、或-(CH2)p-L-(CH2)q-T’；其中p是0、1、2、3或4；L是一個鍵，-O-、-S-或-NH-；q是0、1、2或3；T＇是氫、C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基、-COOH、-CONH2，或Ar，其中Ar是未取代的或取代的芳基，這里芳基是指苯基、萘基、5元或6元的未取代的或取代的芳族雜環(huán)，該雜環(huán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子，或是一個9元或10元的未取代的或取代的稠合雙環(huán)芳族雜環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)含有1個或2個選自硫、氧和氮的相同或不同的雜原子；Ry是-CH2-、-O-、-S-，或-NH-；和Rz是一個鍵，或當(dāng)與Ry及3個鄰接的碳原子合在一起時形成一個含有5-8個原子的飽和碳環(huán)，其中一個原子可以是-O-、-S-，或-NH-；r是1或2；及G是-(CH2)s-R，其中s是0-5，-CH＝CH-(CH2)t-R，其中t是0-3， 式中D和E各自獨(dú)立地是N或CH；k是0或1；b是0或1；M是S、O、或NH；各個W獨(dú)立地是N或CH；以及R是-NH2、 但其條件是(1)當(dāng)G是-(CH2)s-NH-C(NH)NH2、y是未取代的脯氨?；?Rp是氫)、及T是 時，A不是氫或叔丁氧羰基；(2)當(dāng)r＝1及s＝0時，R不是氨基或胍基；(3)當(dāng)G是-(CH2)s-R，其中R是 Y是 未取代的脯氨?；?Rp是氫)或4-羥基脯氨?；?Rp是OH)、R’是氫，T是環(huán)己基以及Q是-NH-A時，A不是氫、C1-C4烷基、甲磺?；?(CH2)g-COOH；(4)當(dāng)G是-(CH2)s-R，其中R是 y是未取代的脯氨?；?Rp是氫)或4-甲基-硫代脯氨?；?Rp是-SCH3)，及Q是-NH-A時，R”SO2不是芳基磺酰；(5)當(dāng)G是 T是C1-C8烷基、 及Q是-NH-A時，A不是R”SO2-。
3.如權(quán)利要求1或2中所要求的化合物或鹽或溶劑化物，其中烷基本身或作為另一取代基的一部分，可以是甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基或仲丁基；全氟烷基本身或作為另一取代基的一部分，可以是三氟甲基、全氟乙基、全氟正丙基、全氟異丙基、全氟正丁基、全氟叔丁基、全氟異丁基或全氟仲丁基；C3-C8環(huán)烷基是環(huán)丙基、甲基環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、4-甲基環(huán)己基或環(huán)辛基；鹵素是氯、氟、溴或碘；5元或6元雜環(huán)基是呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噁嗪基噻嗪基；9元或10元雜環(huán)基是吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并吡唑基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基或苯并噻唑基；而且此處Ar或R”定義中所列出的任何一個芳族基團(tuán)或雜芳族基團(tuán)各自可以獨(dú)立地是未取代的，或被1個或2個能提供穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、羥基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、氨基(-NH2)、-(C1-C4烷基)氨基、-(CH2)j-COOH、巰基、-S(O)h(C1-C4烷基)、-NHS(O)h(C1-C4烷基)、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-S(O)hNH2、-S(O)hNH(C1-C4烷基)，或-S(O)hN(C1-C4烷基)2，h是0、1或2，j是0、1、2、3或4。
4.如權(quán)利要求1、2或3中所要求的化合物或其鹽或溶劑化物，其中X是 高脯氨酰基、1-或3-Tig、或1-或3-Piq；Y是脯氨?；籕是NHA，其中A是氫或R”SO2-，R＇是氫，Z是氫，B是氫；以及R是胍基或脒基基團(tuán)。
5.如權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)所要求的化合物或其鹽或溶劑化物，其中G是4-脒基苯基。
6.如權(quán)利要求1、2或3所要求的化合物或其鹽或溶劑化物，其中X是 其中T是環(huán)己基，a是1，R＇是氫，Q是-NH-A，式中A是氫、R”SO2-或-(CH2)g-COOH。
7.如權(quán)利要求6所要求的化合物或其鹽或溶劑化物，其中A是R”SO2-，R”是乙基。
8.如權(quán)利要求6所要求的化合物或其鹽或溶劑化物，其中A是-(CH2)g-COOH，g是1。
9.如權(quán)利要求1-3或6-8中任何一項(xiàng)所要求的化合物或其鹽或溶劑化物，其中Y是(L)-脯氨?；?、(S)-順式-八氫-1H-吲哚-2-羰基，或N-(2-苯基乙基)甘氨酰。
10.一種選自如下的化合物或其藥物上可接受的鹽或溶劑化物a)式Ia所示的化合物 其中苯甲脒環(huán)是未取代的或可帶有一個或2個氟取代基，b)式Ib所示的化合物 以及c)式Ic所示的化合物 其中D是N或CH；且X可為權(quán)利要求1-4及6-8中所定義的任何一個值。
11.如權(quán)利要求10所要求的化合物，或其鹽或溶劑化物，該化合物是式Ia所示的化合物，其中苯甲脒環(huán)是未被取代的。
12.如權(quán)利要求10或11所要求的化合物，或其鹽或溶劑化物，其中X是 其中R＇是氫，a是1，T是環(huán)己基或苯基，Q是-NH-A，式中A是氫，乙磺酰或羧甲基。
13.如權(quán)利要求1所要求的化合物，或其鹽或溶劑化物，該化合物選自a)D-苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，b)N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-1-[[(4aS，8aS)-十氫-1(R)-異喹啉基]羰基]-L-脯氨酰胺，c)N-(乙磺酰)-D-苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，d)(S-順式)-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-1-[N-(乙磺酰)-D-苯基甘氨酰]-1H-吲哚-2-羧酰胺，e)(S-順式)-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-1-[N-(乙磺酰)-D-苯丙氨酰]-1H-吲哚-2-羧酰胺，f)N-(羧甲基)-D-苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，g)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，h)(S-順式)-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-1-[N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰]-1H-吲哚-2-羧酰胺，i)D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，j)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，k)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-六氫吡啶-4-基]甲基]-L-脯氨酰胺，1)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[5-(氨基亞氨基甲基)噻吩-2-基]甲基]-L-脯氨酰胺，m)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[5-(氨基亞氨基甲基)吡啶-2-基]甲基]-L-脯氨酰胺，n)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[5-(氨基亞氨基甲基)-1，2，3，4-四氫吡啶-2-基]甲基]-L-脯氨酰胺，o)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[6-(氨基亞氨基甲基)噠嗪-3-基]甲基]-L-脯氨酰胺，p)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-1，2，3，4-四氫吡啶-4-基]甲基]-L-脯氨酰胺，q)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)-2-氟苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，r)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)-2，6-二氟苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，s)N-(乙磺酰)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，t)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，u)N-(羧甲基)-D-高苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，v)N-(羧甲基)-D-高環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，和w)N-(甲磺酰乙酰)-L-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺。
14.如權(quán)利要求1所要求的化合物，或其鹽或溶劑化物，該化合物選自i)(S-順)-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-1-[N-(乙磺酰)-D-苯丙氨酰]-1H-吲哚-2-羧酰胺，ii)N-(羧甲基)-D-苯丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，iii)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，iv)D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，v)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[5-(氨基亞氨基甲基)噻吩-2-基]甲基]-L-脯氨酰胺，vi)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[1-(氨基亞氨基甲基)-1，2，3，6-四氫吡啶-4-基]甲基]-L-脯氨酰胺，vii)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)-2-氟苯基]甲基]-L-脯氨酰胺，viii)N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)-2，6-二氟苯基]甲基]-L-脯氨酰胺。
15.如權(quán)利要求2所要求的化合物或其鹽或溶劑化物，該化合物是N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]-L-脯氨酰胺。
16.如權(quán)利要求2所要求的化合物或其鹽或其溶劑化物，該化合物是N-(羧甲基)-D-環(huán)己基丙氨酰-N-[[5-(氨基亞氨基甲基)噻吩-2-基]甲基]-L脯氨酰胺。
17.含有如權(quán)利要求1-16中任何一項(xiàng)所要求的式I、Ia、Ib或Tc的化合物，或其藥物上可接受的鹽或其溶劑化物，以及藥物上可接受的載體、稀釋劑、或賦形劑的藥物制劑。
18.制備如權(quán)利要求1-9中任何一項(xiàng)所要求的式I化合物的方法X-Y-NH-(CH2)r-GI該方法包括a)同時或依次脫除通式II對應(yīng)化合物的保護(hù)基團(tuán)P，(P)X-Y-NH-(CH2)r-G(P)II式中(P)X代表一個可帶有一個或多個保護(hù)基團(tuán)P的殘基X，所述P獨(dú)立地選自其X包含堿性NH殘片的通式I化合物的氨基保護(hù)基P，和其X包含羧基殘片的通式I化合物的羧基保護(hù)基P，而G(P)代表一個可帶有一個或多個獨(dú)立選擇的氨基保護(hù)基P的殘基G；或b)對于其R為 的通式I化合物，使其R為 的通式I對應(yīng)化合物氫解；然后，當(dāng)需要通式I化合物的一種鹽時，與一種藥物上可接受的酸生成鹽。
19.一種抑制哺乳動物中凝血酶的方法，包括對需要抑制凝血酶的哺乳動物施用有效劑量的如權(quán)利要求1-16中任何一項(xiàng)所要求的化合物或其藥物上可接受的鹽或其溶劑化物。
全文摘要
本發(fā)明涉及凝血酶抑制劑化合物，其通式(I)為X-Y-NH-(CH
文檔編號C07D401/00GK1147205SQ95192899
公開日1997年4月9日 申請日期1995年3月3日 優(yōu)先權(quán)日1994年3月4日
發(fā)明者G·F·史密夫, M·R·懷利, A·L·沙特, R·T·舒曼 申請人:伊萊利利公司