專利名稱：三萜衍生物及其藥用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用作醫(yī)藥品的常春(藤苷)配基衍生物及其藥學上可接受的鹽以及它們的溶劑化物。
本發(fā)明的化合物具有抑制腎小球膜細胞增殖的作用，可用于治療腎炎。
背景技術(shù)：
根據(jù)主要病變部位，可將腎炎分為腎小球性腎炎、間質(zhì)性腎炎和腎盂腎炎等。其中最為代表性的是以腎小球為病變部位的腎小球性腎炎。目前，腎炎與腎小球性腎炎已作為同義詞使用(最新醫(yī)學辭典，第1版，570，1987年)。
在人的腎小球性腎炎中最經(jīng)常出現(xiàn)的且對預后很重要的病理組織學所見是腎小球膜細胞的增殖和腎小球膜細胞產(chǎn)生的基質(zhì)(以下稱腎小球膜基質(zhì))的增生。這些在IgA腎病、膜性增殖性腎小球性腎炎以及狼瘡性腎炎(lupus nephritis)等幾乎所有的增殖性腎小球性腎炎中均可發(fā)現(xiàn)(飯?zhí)?，腎と透析，35，505-509，1993)。并且，隨著腎小球膜細胞增殖和伴隨而來的腎小球膜基質(zhì)產(chǎn)生的進展，腎小球陷入末期即所謂的腎小球硬化。因此，可阻止腎小球膜細胞的增殖和腎小球膜基質(zhì)的產(chǎn)生的化合物作為腎小球性腎炎治療劑是極為有用的。
腎小球性腎炎中的腎小球膜細胞的增殖，已知有2條途徑。第1條途徑有補體、血小板和浸潤細胞等參與。在該途徑，首先出現(xiàn)由免疫學機理產(chǎn)生的免疫復合體在腎小球上的沉積，然后，出現(xiàn)補體和血小板的活化和巨噬細胞、中性白細胞等的浸潤。這些細胞等釋放出各種生長因子和細胞素等，將腎小球膜細胞活化，刺激其增殖。第2途徑有腎小球膜細胞自身參與。在該途徑，活化了的腎小球膜細胞自身釋放各種生長因子和細胞素，釋放細胞自身和鄰近的腎小球膜細胞活化或增殖。如此，腎小球膜細胞通過交合在一起的多個途徑而活化、增殖。
因此，在考慮腎小球性腎炎的治療時，即使抑制了上述第1途徑的某特定階段，如補體或血小板參與的階段，仍難以完全抑制腎小球膜細胞的增殖。事實上，已有報道，若單獨給予抗血小板藥，對人的活動期腎炎缺乏治療效果(土肥等，總合臨床，38，865-870，1989)。
已知在植物來源的天然物中有具有治療腎炎作用的化合物存在。例如，日本專利公開公報1986年第37749號(土當歸烯衍生物)、第85344號(土當歸烯衍生物)、1990年第73012號(bryonolic acid衍生物)、1992年第290846號(bryonolic acid衍生物)、1986年第43141號(羽扇烷衍生物)記載，五環(huán)三萜衍生物對腎炎等的治療有用。然而，顯示這些化合物對腎炎等的治療有用的試驗例未公開過，也無對腎小球膜細胞增殖的抑制作用的記載。
本發(fā)明的常春配基(3β，23-二羥基土當歸-12-烯-28-酸)是五環(huán)三萜衍生物，存在于無患子、日本常春藤、洋常春藤、八角金盤等植物中。已知常春配基具有降壓、鎮(zhèn)痙(Ann.Pharm.Fr.，30，555(1972))、促進毛發(fā)生長、抑制皮膚老化(法國專利公報第2669225號)、抗真菌(Ann.Pharm.Fr.，38，545(1980))、抗炎癥(Chem.Pharm.Bull.，28，1183(1980))、抗吸蟲(Rastit.Resur.，28，103(1992))、抗?jié)儭⒖惯^敏(Proc.Asian.Symp.Med.Plants Spices，4th，Meeting Date 1980，Volume 1，59)、防日曬(日本專利公開公報1989年42411號)、防體臭、抑制多汗癥(法國專利公報第2541895號)等作用，但不知其對治療腎炎有用。
此外，作為常春配基衍生物，已知有下述(1)～(15)的化合物，但不知它們可作為醫(yī)藥，用于腎炎等的治療。
(1)3β-羥基-23(4α)-乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酸(Chem.Pharm.Bull.，(1976)，24(6)，1314)(2)3β-羥基-23(4α)-甲氧基土當歸-12-烯-28-酸(Chem.Pharm.Bull.，(1976)，24(5)，1021)(3)3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酸(J.Chem.Soc.，Chem.Commun.，(1983)，(17)，939)(4)3β，23(4α)-二苯甲酰氧基土當歸-12-烯-28-酸(Bull.Soc.Roy.Sci.Liege，(1973)，42(5-6)，245)(5)3β，23(4α)-二甲酰氧基土當歸-12-烯-28-酸(CAS，Registry No.＝6055-17-0)(6)3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酸甲酯(J.Chem.Soc.，Chem.Commun.，(1981)，(21)，1136)(7)3β-羥基-23(4α)-乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酸甲酯(Phytochemistry，(1984)，23(3)，615)(8)3β-羥基-23(4α)-甲氧基土當歸-12-烯-28-酸甲酯(Chem.Pharm.Bull.，(1979)，27(10)，2388)(9)3β-乙酰氧基-23(4α)-羥基土當歸-12-烯-28-酸甲酯(Tetrahedron，(1993)，49(33)，7193)(10)3β-苯甲酰氧基-23(4α)-羥基土當歸-12-烯-28-酸甲酯(Tetrahedron，(1993)，49(33)，7193)(11)3β-甲氧基-23(4α)-羥基土當歸-12-烯-28-酸甲酯(Chem.Pharm.Bull.，(1982)，30(9)，3340)(12)3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酸甲酯(Chem.Pharm.Bull.，(1982)，30(9)，3340)(13)3β-乙酰氧基-23(4α)-甲氧基土當歸-12-烯-28-酸甲酯(Chem.Pharm.Bull.，(1972)，20(9)，1935)(14)3β，23(4α)-二苯甲酰氧基土當歸-12-烯-28-酸甲酯(Bull.Soc.Roy.Sci.Liege，(1973)，42(5-6)，245)(15)3β，23(4α)-二甲氧基土當歸-12-烯-28-酸甲酯(IndianJ.Chem.，Sect.B，(1990)，29B(5)，425)發(fā)明的公開由上述顯而易見，具有抑制腎小球膜細胞增殖作用的化合物可成為優(yōu)異的腎炎治療劑。本發(fā)明者為尋求這些化合物進行了深入的研究。
其結(jié)果，發(fā)現(xiàn)特定的常春(藤苷)配基衍生物具有優(yōu)異的抑制腎小球膜細胞增殖作用，由此完成了本發(fā)明。
本發(fā)明是以下式〔1〕表示的常春(藤苷)配基或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物為有效成分的腎炎治療用藥用組合物及新穎化合物。 式中，R1表示OR11或NR11R12，R11、R12可相同或不同，表示1)氫，2)可取代的烷基，3)可取代的環(huán)烷基，4)可取代的鏈烯基，5)可取代的炔基，6)可取代的芳基，或7)可取代的芳香族雜環(huán)基。
R2、R3可相同或不同，表示1)氫，2)可取代的烷基，3)可取代的環(huán)烷基，4)可取代的鏈烯基，5)可取代的炔基，6)可取代的?；?，7)可取代的一烷基氨基甲?；?，8)可取代的二烷基氨基甲?；?，或9)可取代的烷氧羰基，或R2和R3可一起表示羰基。
R11、R12、R2、R3中的取代基可相同或不同，分別選自1)鹵素，2)OR13，3)OCOR13，4)COOR13，5)氰基，6)NR13R14，7)環(huán)烷基，8)可被鹵素、烷基、羥基或氨基取代的芳基或9)可被鹵素、烷基、羥基或氨基取代的芳香族雜環(huán)基。R13、R14可相同或不同，表示1)氫，或2)可被羥基、烷氧基、氨基、一烷基氨基或二烷基氨基取代的烷基。
在式〔1〕表示的常春配基衍生物中，R1表示羥基，R2表示氫，R3表示氫的化合物是被稱為常春藤苷配基的公知天然物，與上述對治療腎炎有用的五環(huán)三萜衍生物在化學結(jié)構(gòu)上明顯不同。例如，日本專利公開公報1986年第37749號記載的土當歸-12-烯-3β，22β，23(4β)-三醇的22位被羥基取代，23位上的羥基是β取代，28位上是甲基，而常春配基的22位上無取代基，23位的羥基是α取代，28位是羧酸，在化學結(jié)構(gòu)上不同。
對于常春配基，迄今已知道上述多種生理作用，但對治療腎炎有用則未見報道。
此外，在式〔1〕表示的常春配基衍生物中，除下述(1)～(5)的化合物外，其他化合物均是未見文獻報道的新穎化合物。
(1)R1為羥基或甲氧基，R2為氫，R3為氫、乙酰基或甲基的化合物(2)R1為羥基，R2、R3均為甲?；?、乙酰基或苯甲?；幕衔?3)R1為甲氧基，R2為乙酰基，R3為氫、乙?；蚣谆幕衔?4)R1為甲氧基，R2為苯甲?；?，R3為氫或苯甲?；幕衔?5)R1為甲氧基，R2為甲基，R3為氫或甲基的化合物本發(fā)明的特征在于發(fā)現(xiàn)式〔1〕表示的化合物具有抑制腎小球膜細胞增殖的作用，可用于治療腎炎。
下面說明本發(fā)明中使用的術(shù)語。
“烷基”是指碳原子數(shù)為1-7個的直鏈或支鏈烷基，具體例子包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、正己基、異己基、正庚基、異庚基等。其中優(yōu)選碳原子數(shù)為1～3個的直鏈烷基，例如，甲基、乙基、正丙基。
“環(huán)烷基”是指碳原子數(shù)為3-7個的環(huán)烷基，具體例子包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基。
“鏈烯基”是指碳原子數(shù)為2-7個的直鏈或支鏈鏈烯基，具體例子包括乙烯基、1-丙烯基、異丙烯基、烯丙基、1-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、4-戊烯基、1-己烯基、5-己烯基、1-庚烯基、6-庚烯基等。
“炔基”是指碳原子數(shù)為2-7個的直鏈或支鏈炔基，具體例子包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、5-己炔基、1-庚炔基、6-庚炔基等。
“芳基”是指碳原子數(shù)為6～10個的芳基，具體例子包括苯基、1-萘基、2-萘基等。
“芳香族雜環(huán)基”是指含1～4個選自氮、氧和硫的雜原子的5～6員芳香環(huán)基，具體例子包括1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-噁唑基、2-噻唑基、1H-1，2，4-三唑-1-基、1H-四唑-5-基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、2-吡嗪基、1，3，5-三嗪-2-基等。
“鹵素”是指氟、氯、溴和碘。
“?；笔侵浮巴榛驶焙汀胺蓟驶薄！巴榛驶钡耐榛糠质侵干鲜鐾榛！胺蓟驶钡姆蓟糠质侵干鲜龇蓟！磅；钡木唧w例子有乙?；?、丙酰基、丁?；?、異丁?；⒈郊柞；?-萘?；?、2-萘?；?。
“烷氧基”、“烷氧羰基”“一烷基氨基甲酰基”、“二烷基氨基甲?；钡耐榛糠挚上嗤虿煌侵干鲜鐾榛?。
在本發(fā)明的化合物〔1〕中，作為腎炎治療劑而優(yōu)選的化合物為如下(1)～(5)的化合物群(1)R1為羥基、酰氧基烷氧基、苯基烷氧基、烷氧基烷氧基、羥基烷氧基、鹵代烷氧基、二(羥基烷基)氨基烷氧基、(烷氧基烷基)氨基、鹵代苯基氨基、(二烷基氨基烷基)氨基、〔二(羥基烷基)氨基烷基〕氨基、(羧基烷基)氨基、(烷氧羰基烷基)氨基、(氰基烷基)氨基或二氨基取代的三嗪基烷基氨基，R2為氫，R3為氫的化合物(2)R1為羥基、(烷氧基烷基)氨基、鹵代苯基氨基、(二烷基氨基烷基)氨基、〔二(羥基烷基)氨基烷基〕氨基、(烷氧羰基烷基)氨基或(氰基烷基)氨基，R2為乙酰氧基，R3為乙酰氧基的化合物(3)R1為苯基烷氧基，R2為羥基、(烷氧羰基烷基)氨基甲?；?烷氧烷基)氨基甲?；琑3為苯基烷基的化合物(4)R1為羥基，R2為(烷氧羰基烷基)氨基甲酰基或(烷氧烷基)氨基甲?；琑3為氫的化合物(5)R1為羥基或酰氧烷氧基，R2和R3一起表示羰基的化合物在本發(fā)明的化合物〔1〕中，作為腎炎治療劑而更優(yōu)選的化合物是R1為羥基、(烷氧烷基)氨基或酰氧基烷氧基，R2為氫，R3為氫的化合物。
在本發(fā)明的化合物〔1〕中，作為腎炎治療劑而最優(yōu)選的化合物是R1為羥基、2-甲氧基乙氨基或2-乙酰氧基乙氧基，R2氫，R3為氫的化合物。
常春配基可按例如下面所示的方法制得。
直接使用無患子(Sapindus mukorossi Gaertn.)，或?qū)⑵涓稍锖?，或干燥粉碎后，用水、醇類溶?如甲醇、乙醇、異丙醇等)或含水的醇類溶劑在50～80℃加熱提取1～4小時，然后將提取液在60℃以下減壓濃縮，得到提取物。
在所得提取物中加入1～5％無機酸(如鹽酸、硫酸、硝酸等)的醇(甲醇、乙醇、異丙醇等)溶液，加熱回流1～3小時，進行水解。水解后，用堿(如氫氧化鉀、氫氧化鈉等)調(diào)至pH6～7。往該醇溶液中加入活性炭并加熱，由此進行純化。減壓濃縮醇溶液，即得到常春配基。可將所得常春配基通過用乙腈、乙醇等適當溶劑進行洗滌、重結(jié)晶、柱色譜、薄層色譜等手段進行純化。
常春配基具有3個官能團，即，羧基和2個羥基。以常春配基為出發(fā)原料，可利用這些官能團的反應(yīng)性差異，制造所需的常春配基衍生物〔1〕。
從常春配基(即R1＝OH、R2＝H、R3＝H的化合物)出發(fā)，通過下述“1.羧基的反應(yīng)”，可制造28位的衍生物(R1≠OH、R2＝H、R3＝H)。
從28位的衍生物出發(fā)，通過下述“2.23位羥基的反應(yīng)”，可制造23位、28位的衍生物(R1≠OH、R2＝H、R3≠H)。
從23位、28位的衍生物出發(fā)，通過下述“3.3β位羥基的反應(yīng)”，可制造3β位、23位、28位的衍生物(R1≠OH、R2≠H、R3≠H)。
從28位上導入了保護基的28位的衍生物出發(fā)，通過下述“2.23位羥基的反應(yīng)”，在制造了23位、28位的衍生物后，通過28位去保護，可制造23位的衍生物(R1＝OH、R2＝H、R3≠H)。
從23位、28位上導入了保護基的23位、28位的衍生物出發(fā)，通過下述“3.3β位羥基的反應(yīng)”，在制造了3β位、23位、28位的衍生物后，通過23位、28位去保護，可制造3β位的衍生物(R1＝OH、R2≠H、R3＝H)。
從僅28位上導入了保護基的23位、28位的衍生物出發(fā)，通過下述“3.3β位羥基的反應(yīng)”，在制造了3β位、23位、28位的衍生物后，通過28位去保護，可制造3β位、23位的衍生物(R1＝OH、R2≠H、R3≠H)。
從僅23位上導入了保護基的23位、28位的衍生物出發(fā)，通過下述“3.3β位羥基的反應(yīng)”，在制造了3β位、23位、28位的衍生物后，通過23位去保護，可制造3β位、28位的衍生物(R1≠OH、R2≠H、R3＝H)。
從常春配基(即R1＝OH、R2＝H、R3＝H的化合物)出發(fā)，通過下述“4.3β位、23位二羥基的反應(yīng)”，可制造3β位、23位的衍生物(R1＝OH、R2≠H、R3≠H)。
從28位的衍生物(R1≠OH、R2＝H、R3＝H)出發(fā)，通過下述“4.3β位、23位二羥基的反應(yīng)”，可制造3β位、23位、28位的衍生物(R1≠OH、R2≠H、R3≠H)。
1.羧基的反應(yīng) 〔式中，R2、R3的定義同上。R110表示除氫以外的R11，X表示離去基團如氯、溴、碘等鹵素、甲磺?；韧榛酋；?、甲苯磺?；确蓟酋；！惩ㄟ^使羧酸〔3〕與化合物〔4〕反應(yīng)，可制造酯〔5〕。本反應(yīng)通?？稍跓o溶劑的條件下或在非質(zhì)子傳遞溶劑(如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)等極性溶劑、四氫呋喃(THF)、乙醚等醚類溶劑、氯仿、二氯甲烷等鹵代烴類溶劑、苯、甲苯、正己烷等烴類溶劑或它們的混合溶劑)中，于堿(如碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、三乙胺、氫化鈉等)的存在下，在-20～100℃進行。反應(yīng)時間根據(jù)化合物〔3〕和化合物〔4〕的種類、反應(yīng)溫度而異，通常以30分鐘～24小時為宜?；衔铩?〕的用量以相當于化合物〔3〕的1～1.2摩爾當量為宜。 〔式中，R2、R3的定義同上。R111表示無取代的烷基。〕通過使羧酸〔3〕與O-烷化劑反應(yīng)，可制造酯〔5〕。可使用重氮基烷烴(如重氮甲烷、重氮乙烷等)、三甲基硅基重氮甲烷、原酸酯(如原甲酸乙酯、原乙酸乙酯等)等作為O-烷化劑。本反應(yīng)通?？稍跓o溶劑的條件下或在與上述相同的非質(zhì)子傳遞溶劑中進行。反應(yīng)溫度根據(jù)O-烷化劑的種類而異，當使用重氮基烷烴、三甲基硅基重氮甲烷作為烷化劑時，以-20～30℃為宜，當使用原酸酯作為烷化劑時，以100～200℃為宜。反應(yīng)時間根據(jù)化合物〔3〕和O-烷化劑的種類、反應(yīng)溫度而異，通常以1分鐘～24小時為宜。O-烷化劑的用量以相當于化合物〔3〕的1～1.2摩爾當量為宜。 〔式中，R2、R3、R110的定義同上。Y表示離去基團如羥基或氯、溴、碘等鹵素、甲氧基等烷氧基、p-硝基苯氧基等芳基氧基、甲磺?；韧榛酋；⒓妆交酋；确蓟酋；?、咪唑基、烷基羧基或芳基羧基等。〕通過使化合物〔6〕與醇〔7〕反應(yīng)，可制造酯〔5〕。
具體地說，酯〔5〕可通過將化合物〔6〕(式中Y表示羥基以外的上述離去基團)如?；u(如酰基氯、?；宓?、烷基酯(如甲酯、乙酯等)、活性酯(如p-硝基苯基酯、對氯苯基酯等)、酰咪唑啉或混合酸酐(如與碳酸一烷基酯的混合酸酐、與磷酸一烷基酯的混合酸酐)等與醇〔7〕以適當方法加以制造，或通過使用縮合劑(如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺、二環(huán)己基碳二亞胺、碘化2-氯-N-甲基吡啶鎓、二苯基磷酰疊氮、氰磷酸二乙酯、三苯基膦-四氯化碳等)將化合物〔6〕(式中Y表示羥基)與化合物〔7〕直接縮合的方法加以制造。
當使用?；u時，酯〔5〕可通過在與上述相同的非質(zhì)子傳遞溶劑中，于與上述相同的堿的存在下，在-20～100℃反應(yīng)而加以制造。反應(yīng)時間根據(jù)?；u的種類、反應(yīng)溫度而異，通常以30分鐘～24小時為宜。醇〔7〕的用量以相當于?；u的1～1.2摩爾當量為宜。
?；u可通過將化合物〔6〕(式中Y表示羥基)和亞硫酰鹵(亞硫酰氯、亞硫酰溴等)于無溶劑的情況下或在與上述相同的非質(zhì)子傳遞溶劑中，在與上述相同的堿的存在下或無堿的存在下，于-20～100℃反應(yīng)而加以制造。反應(yīng)時間根據(jù)酰基鹵的種類、反應(yīng)溫度而異，通常以30分鐘～24小時為宜。亞硫酰鹵的用量需相當于化合物〔6〕(式中Y表示羥基)的1摩爾當量以上，可大量過剩，使用10摩爾當量以上。
當使用縮合劑時，酯〔5〕可通過在與上述相同的非質(zhì)子傳遞溶劑中，于與上述相同的堿的存在下或無堿的存在下，在-20～100℃反應(yīng)而加以制造。反應(yīng)時間根據(jù)縮合劑的種類、反應(yīng)溫度而異，通常以30分鐘～24小時為宜。醇〔7〕及縮合劑的用量以相當于化合物〔6〕(式中Y表示羥基)的1～1.2摩爾當量為宜。 〔式中，R2、R3、R11、R12、Y的定義同上?！惩ㄟ^使化合物〔6〕與胺〔8〕反應(yīng)，可制造酰胺〔9〕。
具體地說，酰胺〔9〕可通過將化合物〔6〕(式中Y表示羥基以外的上述離去基團)如?；u(如?；?、?；宓?、烷基酯(如甲酯、乙酯等)、活性酯(如p-硝基苯基酯、對氯苯基酯等)、酰咪唑啉或混合酸酐(如與碳酸一烷基酯的混合酸酐、與磷酸一烷基酯的混合酸酐)等與胺〔8〕經(jīng)適當方法加以制造，或通過使用縮合劑(如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺、二環(huán)己基碳二亞胺、二異丙基碳二亞胺、1-苯并三唑氧基·三(二甲氨基)鏻六氟磷酸鹽、二苯基磷酰疊氮、丙磷酸酐等)，在有或無添加劑(如N-羥基丁二酰亞胺、1-羥基苯并三唑、3-羥基-4-氧代-3，4-二氫-1，2，3-三嗪等)的存在下，將化合物〔6〕(式中Y表示羥基)與化合物〔8〕直接縮合的方法加以制造。
當使用?；u時，酰胺〔9〕可通過在與上述相同的非質(zhì)子傳遞溶劑中，于與上述相同的堿的存在下，在-20～100℃反應(yīng)而加以制造。反應(yīng)時間根據(jù)?；u的種類、反應(yīng)溫度而異，通常以30分鐘～24小時為宜。胺〔8〕的用量以相當于?；u的1～1.2摩爾當量為宜。
當使用縮合劑時，酰胺〔9〕可通過在與上述相同的非質(zhì)子傳遞溶劑中，于與上述相同的堿的存在下或無堿的存在下，在-20～100℃反應(yīng)而加以制造。反應(yīng)時間根據(jù)縮合劑的種類、反應(yīng)溫度而異，通常以30分鐘～24小時為宜。胺〔8〕及縮合劑的用量以相當于化合物〔6〕(式中Y表示羥基)的1～2摩爾當量為宜?？蓪贰?〕作為堿，以過量加以使用。
2. 23位羥基的反應(yīng) 〔式中，R2、X的定義同上。R10表示除羥基以外的R1。R30表示除氫以外的R3。〕通過使23-羥基化合物〔10〕與化合物〔11〕反應(yīng)，可制造化合物〔12〕(如醚、酯、碳酸酯、氨基甲酸酯)。本反應(yīng)通常可在無溶劑的條件下或在與上述相同的非質(zhì)子傳遞溶劑中，在有或無與上述相同的堿的存在下，在-20～100℃進行。反應(yīng)時間根據(jù)化合物〔10〕和化合物〔11〕的種類、反應(yīng)溫度而異，通常以30分鐘～24小時為宜。化合物〔11〕的用量以相當于化合物〔10〕的1～1.2摩爾當量為宜。 〔式中，R10的定義同上。R20表示除氫以外的R2。R4、R5可相同或不同，表示可被取代的烷基，該取代基可分別選自①鹵素、②OR6、③OCOR6、④COOR6、⑤氰基、⑥NR6R7、⑦環(huán)烷基、⑧可被鹵素、烷基、羥基或氨基取代的芳基和⑨可被鹵素、烷基、羥基或氨基取代的芳香族雜環(huán)基。R6、R7可相同或不同，表示①氫或②可被羥基、烷氧基、氨基、一烷基氨基或二烷基氨基取代的烷基?！惩ㄟ^使23-羥基化合物〔13〕與羰基化劑反應(yīng)，然后與胺〔23〕反應(yīng)，可制造氨基甲酸酯〔14〕。
羰基化劑的例子包括羰基二咪唑、p-氯甲酸硝基酯等。羰基化劑和胺〔23〕的用量以相當于化合物〔13〕的1～1.2摩爾當量為宜。
其他反應(yīng)條件與從上述化合物〔10〕和化合物〔11〕出發(fā)，制造化合物〔12〕的相同。也可將胺〔23〕作為堿，以過量加以使用。
3. 3β-位羥基的反應(yīng) 〔式中，R10、R20、R30、X的定義同上?！惩ㄟ^使3β-羥基化合物〔15〕與化合物〔16〕反應(yīng)，可制造化合物〔17〕(如醚、酯、碳酸酯、氨基甲酸酯)。本反應(yīng)可按與從上述化合物〔10〕和化合物〔11〕出發(fā)，制造化合物〔12〕的相同方法進行。 〔式中，R4、R5、R10、R30的定義同上?！惩ㄟ^使23-羥基化合物〔15〕與和上述相同的羰基化劑反應(yīng)，然后與胺〔23〕反應(yīng)，可制造氨基甲酸酯〔18〕。本反應(yīng)可按與從上述化合物〔13〕、羰基化劑和胺〔23〕出發(fā)，制造氨基甲酸酯〔14〕的相同方法進行。
4. 3β位、23位二羥基的反應(yīng) 〔式中，R1的定義同上?！惩ㄟ^使3β、23-二羥基化合物〔19〕與和上述相同的羰基化劑反應(yīng)，可制造3β、23-羰基二氧基化合物〔20〕。本反應(yīng)通?？稍跓o溶劑的條件下或在與上述相同的非質(zhì)子傳遞溶劑中，在有或無與上述相同的堿的存在下，在-20～100℃進行。反應(yīng)時間根據(jù)化合物〔19〕和羰基化劑的種類、反應(yīng)溫度而異，通常以30分鐘～24小時為宜。羰基化劑的用量以相當于化合物〔19〕的1～1.2摩爾當量為宜。 〔式中，R1的定義同上。R21表示?；！惩ㄟ^使3β、23-二羥基化合物〔19〕與羧酸酐〔21〕反應(yīng)，可制造3β、23-二酰氧基化合物〔22〕。本反應(yīng)通?？稍跓o溶劑的條件下或在與上述相同的非質(zhì)子傳遞溶劑中，在有或無與上述相同的堿的存在下，在-20～100℃進行。反應(yīng)時間根據(jù)化合物〔19〕和羧酸酐〔21〕的種類、反應(yīng)溫度而異，通常以30分鐘～24小時為宜。羧酸酐〔21〕的用量以相當于化合物〔19〕的2～2.2摩爾當量為宜。
在上述(1)～(4)的反應(yīng)中，當原料具有不希望發(fā)生反應(yīng)的取代基(如氨基、羥基、羧基等)時，也可按公知的方法，用芐基、乙?；?、叔丁氧羰基等保護后再用于反應(yīng)。反應(yīng)后，可通過接觸還原、堿處理、酸處理等公知的方法去除保護基。
當由上述反應(yīng)制得的化合物的R11、R12、R2或R3為被鹵素取代的烷基、被鹵素取代的鏈烯基、被鹵素取代的炔基、被鹵素取代的環(huán)烷基時，可通過公知的方法將鹵素變換成OR13(R13的定義同上；J.Org.Chem.，44，2307(1979)等)、OCOR13(R13的定義同上；Tetrahedron Lett.，1972，1853等)、NR13R14(R13、R14的定義同上；Org.Synth.，V，88(1973)等)、氰基(J.Org.Chem.，25，877(1960)等)。
當由上述反應(yīng)制得的化合物具有氰基時，可通過公知的方法變換成COOR13(R13的定義同上；Org.Synth.，III，557(1955)、Org.Synth.，I，27(1941)等)或三嗪基等芳香族雜環(huán)基(Org.Synth.，IV，78(1963)等)。
當由上述反應(yīng)制得的化合物具有烷氧羰基時，可通過公知的方法變換成羧基(Org.Synth.，IV，169(1963)、Org.Synth.，IV，608(1963)等)。
當由上述反應(yīng)制得的化合物具有羧基時，可通過公知的方法變換成烷氧羰基(Org.Synth.，III，381(1955)等)。
當由上述反應(yīng)制得的化合物具有羥基時，可通過公知的方法變換成OR13(R13的定義同上，但氫除外；J.Org.Chem.，44，2307(1979)等)、OCOR13(R13的定義同上；Org.Synth.，IV，263(1963)、Org.Synth.，VI，560(1988))。
當由上述反應(yīng)制得的化合物具有氨基時，可通過公知的方法變換成NR13R14(R13、R14的定義同上；Org.Synth.，V，88(1973)等)、吡咯基(Org.Synth.，II，219(1943)等)等芳香族雜環(huán)基。
具有羧基的常春配基衍生物〔1〕可直接以游離羧酸的形式用于治療，但也可用公知的方法轉(zhuǎn)換成藥學上可接受的鹽的形式后加以使用。鹽的具體例子包括鈉鹽、鉀鹽等堿金屬鹽和鈣鹽等堿土金屬鹽。
例如，常春配基衍生物〔1〕的堿金屬鹽可通過將1當量的氫氧化鈉或氫氧化鉀等加入最好溶解在醇類溶劑中的具有羧基的常春配基衍生物〔1〕中而制得。
常春配基衍生物〔1〕的堿土金屬鹽可通過將由上述方法制得的堿金屬鹽溶解在水、甲醇、乙醇或它們的混合溶劑中，再加入1當量的氯化鈣等而制得。
氨基未被取代的或被取代的常春配基衍生物〔1〕可直接以游離的胺的形式用于治療，但也可用公知的方法轉(zhuǎn)換成藥學上可接受的鹽的形式后加以使用。鹽的具體例子包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸等無機酸的鹽、乙酸、檸檬酸、酒石酸、馬來酸、琥珀酸、富馬酸、p-甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸等有機酸的鹽等。
例如，常春配基衍生物〔1〕的鹽酸鹽可通過將氨基未被取代或被取代的常春配基衍生物〔1〕溶解在氯化氫的醇溶液中而制得。
本發(fā)明的化合物〔1〕可由上述反應(yīng)混合物，通過常規(guī)的分離純化手段如提取、濃縮、中和、過濾、重結(jié)晶、柱色譜法、薄層色譜法等而加以分離純化。
化合物〔1〕或其鹽的溶劑化物(包括水合物)也包括在本發(fā)明的范圍中。溶劑化物通常可使用相應(yīng)的溶劑或含相應(yīng)溶劑的適當?shù)幕旌先軇?，將被溶劑化物重結(jié)晶而制得。
例如，本發(fā)明的化合物〔1〕的水合物可通過使用含水醇，將本發(fā)明的化合物〔1〕重結(jié)晶而制得。
本發(fā)明的化合物〔1〕有時呈多晶型。多晶型化合物也包括在本發(fā)明的范圍中。
將有效量的式〔1〕化合物對人及動物給藥以治療腎炎的方法也包括在本發(fā)明的范圍中。
式〔1〕化合物在制造腎炎治療藥物中的使用也包括在本發(fā)明的范圍中。
本發(fā)明的化合物如下述試驗例所示，具有優(yōu)異的抑制腎小球膜細胞增殖的作用。此外，其毒性低。由此，本發(fā)明的藥物組合物作為優(yōu)異的腎炎治療劑是十分有用的，對腎炎中的慢性腎小球性腎炎，尤其是增殖性腎小球性腎炎的治療有效。
將本發(fā)明的化合物作為醫(yī)藥給藥時，本發(fā)明的化合物可直接或以由藥學上可接受的無毒性的惰性載體和例如0.1～99.5％，最好為0.5～90％的化合物組成的藥物組合物的形式對包括人在內(nèi)的動物給藥。
作為載體，可使用一種或多種固體、半固體或液體的稀釋劑、填充劑及其他制劑輔料。藥物組合物宜以單位劑量形式投與。本發(fā)明的藥物組合物可以靜注、口服、組織內(nèi)給藥、局部給藥(經(jīng)皮給藥等)或經(jīng)直腸給藥等形式給藥。當然，應(yīng)使用與這些給藥方式相宜的劑型。尤以口服為佳。
腎炎治療用藥物組合物的用量宜在考慮年齡、體重等患者的狀態(tài)、給藥途徑、疾病性質(zhì)和程度等的基礎(chǔ)上加以確定。通常，對成年人而言，本發(fā)明的活性化合物的有效量一般在每日0.1～1000mg/人的范圍，優(yōu)選1～500mg/人。
視情況，也可小于或大于上述用量。可每日分2～3次用藥。本發(fā)明的最佳實施方式下面通過本發(fā)明化合物的實施例、試驗例和本發(fā)明藥物組合物的制劑例來對本發(fā)明作更詳細的說明。參考例1常春配基(3β，23-二羥基土當歸-12-烯-28-酸，化合物No.1)將無患子(Sapindus mukorossi Gaertn.)的干燥粉碎果皮6.0kg用甲醇60升在70℃加熱提取2小時，共進行2次，將提取液在50℃以下減壓濃縮，得到甲醇提取物3.88kg。
往該甲醇提取物300g中加入2.5％(v/v)硫酸的甲醇溶液1500ml，加熱回流2小時，進行水解。水解后，用5％(w/v)氫氧化鉀的甲醇溶液調(diào)至pH6～7，加入活性炭90g，回流0.5小時。讓該溶液通過硅藻土2g的均勻?qū)舆M行過濾，將濾液減壓濃縮至原體積的約1/10。往殘留物中加入蒸餾水1升，加熱洗滌后，放冷，減壓下蒸去殘存甲醇，抽濾沉淀，得到常春配基粗品。
將該常春配基粗品用乙腈1升加熱洗滌2次，用甲醇80ml加熱洗滌3次，得到為白色粉末狀純常春配基11.05g。熔點317-320℃。
元素分析值C30H48O4·1/4H2O計算值(％)C75.51 H10.24實測值(％)C75.49 H9.94IR(KBr)cm-13455，2946，1698，1464，1389，1038參考例2常春配基的鈉鹽(3β，23-二羥基土當歸-12-烯-28-酸鈉)往由參考例1制得的常春配基(1.0g)中加入1N氫氧化鈉的甲醇溶液(2.1ml)，在50℃攪拌2小時。反應(yīng)物經(jīng)濾紙濾去不溶物，濃縮后得到目的物(934mg)。熔點315℃。
元素分析值C30H47O4·Na·3H2O計算值(％)C65.67 H9.74實測值(％)C65.71 H9.51實施例13β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酸2-乙酰氧基乙酯(化合物No.2)往常春配基(473mg)在DMF中的溶液(10ml)加入乙酸2-溴乙酯(334mg)，再加入碳酸氫鉀(200mg)，于50℃攪拌8小時。將反應(yīng)溶液過濾后，減壓濃縮，蒸去DMF。再用乙酸乙酯提取所得的油狀物，然后用飽和食鹽水洗滌，并用無水硫酸鎂干燥，接著減壓濃縮。用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶8)進行純化，得到為無色結(jié)晶的目的物(490mg)。熔點158℃。
元素分析值C34H54O6計算值(％) C73.08 H9.74實測值(％) C72.90 H9.64實施例23β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酸芐酯(化合物No.3)使用芐基溴，按與實施例1同樣的方法得到目的物。熔點159℃。
元素分析值C37H54O4·1/5H2O計算值(％) C78.46 H9.68實測值(％) C78.50 H9.47實施例33β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酸2-甲氧基乙酯(化合物No.4)使用2-溴乙基·甲基醚，按與實施例1同樣的方法得到目的物。熔點161℃。
元素分析值C33H54O5·1/4H2O計算值(％) C74.05 H10.26實測值(％) C74.01 H9.92實施例43β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酸2-羥基乙酯(化合物No.5)將由實施例1制得的化合物(1.0g)溶解在甲醇(100ml)中，加入氫氧化鈉水溶液(5ml)，于80℃加熱回流后，蒸去甲醇。用乙酸乙酯提取殘留物，并用無水硫酸鎂干燥提取液后，過濾、濃縮，得到為無色結(jié)晶的目的物(880mg)。熔點237-238℃。
元素分析值C32H52O5計算值(％) C74.38 H10.14實測值(％) C74.06 H9.90實施例53β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酸3-溴丙酯(化合物No.6)使用1，3-二溴丙烷，按與實施例1同樣的方法得到目的物。實施例63β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酸3-N，N-二(2-羥乙基)氨基丙酯(化合物No.7)將由實施例5制得的化合物(622mg)溶解在DMF(60ml)中，加入二乙醇胺(2ml)，室溫下攪拌24小時。用乙酸乙酯提取，并用無水硫酸鎂干燥后，濃縮提取液，用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯∶正己烷＝3∶1)進行純化。將得到的結(jié)晶(580mg)溶解在20％氯化氫的甲醇溶液(20ml)，室溫下攪拌30分鐘后，濃縮，得到為無色結(jié)晶的目的物(572mg)。熔點267-268℃。
元素分析值C37H63NO6·HCl·1/2H2O計算值(％) C66.99 H9.88 N2.11實測值(％) C67.22 H9.40 N2.33實施例7-(1)N-(2-甲氧基乙基)-3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.8)步驟13β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酸將常春配基(500mg)溶解在吡啶(20ml)中，加入乙酸酐(2ml)，于80℃攪拌1小時。往反應(yīng)液中滴加1N鹽酸(5ml)，攪拌10分鐘。用氯仿(50ml)提取反應(yīng)液3次，并用無水硫酸鎂干燥提取液后，蒸去溶劑。將殘留物通過硅膠柱色譜法(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)進行純化，得到為白色固體的目的物(580mg)。步驟2N-(2-甲氧基乙基)-3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酰胺往由步驟1制得的化合物(570mg)中加入亞硫酰氯(20ml)，于70℃攪拌1.5小時后，減壓蒸去未反應(yīng)的亞硫酰氯，得到黃色油狀物。將其溶解在二氯甲烷(50ml)中，加入2-甲氧基乙胺(2ml)，室溫下攪拌12小時。用1N鹽酸(50ml)洗滌反應(yīng)液2次后，用無水硫酸鎂干燥有機層，蒸去溶劑，得到黃色固體。通過硅膠柱色譜法(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1→1∶1)將其純化，得到為白色固體的目的物(565mg)。實施例7-(2)N-(2-甲氧基乙基)-3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.8)步驟13β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酸將常春配基(1.2g)溶解在吡啶(15ml)中，加入乙酸酐(4ml)，于70℃攪拌1小時。往反應(yīng)液中滴加1N鹽酸(30ml)，攪拌10分鐘。用乙醚(20ml)提取反應(yīng)液3次，并用無水硫酸鎂干燥提取液后，蒸去溶劑。將殘留物通過硅膠柱色譜法(正己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)進行純化，得到為白色固體的目的物(1.35g)。步驟2N-(2-甲氧基乙基)-3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酰胺往由步驟1制得的化合物(1.2g)中加入亞硫酰氯(20ml)，于80℃攪拌1小時后，減壓蒸去未反應(yīng)的亞硫酰氯，得到黃色油狀物。往該油狀物中加入2-甲氧基乙胺(330mg)，室溫下攪拌1小時。用乙醚提取并用飽和食鹽水洗滌，然后用無水硫酸鎂干燥，蒸去溶劑，得到為黃色固體的目的物(950mg)。實施例8-(1)N-(2-甲氧基乙基)-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.9)將由實施例7-(1)制得的化合物(155mg)溶解在甲醇(30ml)中，加入1N氫氧化鈉水溶液(10ml)，加熱回流1小時。減壓下蒸去甲醇，用乙酸乙酯(30ml)提取殘留物3次。用無水硫酸鎂干燥提取液后，蒸去溶劑，將殘留物用正己烷/乙酸乙酯重結(jié)晶，得到為白色粉末的目的物(140mg)。熔點127-129℃。
元素分析值C33H55NO4·3/5H2O計算值(％) C73.32 H10.48 N2.59實測值(％) C73.21 H10.24 N2.85實施例8-(2)N-(2-甲氧基乙基)-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.9)將由實施例7-(2)制得的化合物(950mg)溶解在甲醇(35ml)中，加入1N氫氧化鈉水溶液(15ml)，室溫下攪拌1小時。減壓下蒸去甲醇，用氯仿提取殘留物。用無水硫酸鎂干燥提取液后，蒸去溶劑，將殘留物用乙酸乙酯重結(jié)晶，得到為白色結(jié)晶的目的物(830mg)。熔點142-143℃。
元素分析值C33H55NO4·3/5H2O計算值(％) C73.32 H10.48 N2.59實測值(％) C73.14 H10.25 N2.91實施例9N-(2-甲氧基乙基)-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.9)的另一制法將常春配基(100mg)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(84mg)、1-羥基-1H-苯并三唑(67mg)、2-甲氧基乙胺(33mg)懸浮在DMF(2ml)中，將混合物于50℃攪拌2小時。冷卻至室溫后，減壓濃縮。用乙酸乙酯提取殘留物，并用飽和食鹽水、1N鹽酸洗滌，再用無水硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。將殘留物通過硅膠柱色譜法(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶10→1∶5→1∶1)純化，得到為無色結(jié)晶的目的物(92mg)。理化數(shù)據(jù)與實施例8-(2)中的一致。實施例10N-(p-氟苯基)-3β， 23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.10)使用p-氟苯胺，按與實施例7-(1)同樣的方法得到目的物。實施例11N-(p-氟苯基)-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.11)使用由實施例10得到的化合物，按與實施例8-(1)同樣的方法得到目的物。熔點216-217℃。實施例12N-〔2-(N，N-二乙基氨基)乙基〕-3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.12)使用2-(N，N-二乙基氨基)乙胺，按與實施例7-(1)同樣的方法得到目的物。實施例13N-〔2-(N，N-二乙基氨基)乙基〕-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.13)使用由實施例12得到的化合物，按與實施例8-(1)同樣的方法得到目的物。熔點228-230℃。
元素分析值C36H62N2O3計算值(％) C75.74 H10.95 N4.91實測值(％) C75.74 H10.82 N5.03實施例14N-〔2-(N，N-二乙基氨基)乙基〕-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺鹽酸鹽(化合物No.14)將由實施例13得到的化合物溶解在20％氯化氫的甲醇溶液(20ml)中，室溫下攪拌30分鐘后，濃縮，得到目的物。熔點263-265℃。
元素分析值C36H62N2O3·HCl·5/2H2O計算值(％) C66.28 H10.51 N4.29實測值(％) C66.17 H10.30 N4.56實施例15N-〔3-〔N，N-二(2-羥乙基)氨基〕丙基〕-3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.15)使用3-〔N，N-二(2-羥乙基)氨基〕丙胺，按與實施例7-(1)同樣的方法得到目的物。實施例16N-〔3-〔N，N-二(羥乙基)氨基〕丙基〕-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.16)使用由實施例15得到的化合物，按與實施例8-(1)同樣的方法得到目的物。熔點136-139℃。
元素分析值C37H64N2O5·1/2H2O計算值(％) C71.00 H10.47 N4.48實測值(％) C70.90 H10.26 N4.54實施例17N-〔3-〔N，N-二(2-羥乙基)氨基〕丙基〕-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺鹽酸鹽(化合物No.17)使用由實施例16得到的化合物，按與實施例14同樣的方法得到目的物。熔點195℃。
元素分析值C37H64N2O5·HCl·5/3H2O計算值(％) C65.03 H10.08 N4.10實測值(％) C65.01 H9.96 N4.19實施例18N-乙氧羰基甲基-3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.18)使用鹽酸甘氨酸乙酯，按與實施例7-(1)同樣的方法得到目的物。實施例19N-羧甲基-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.19)使用由實施例18得到的化合物，按與實施例8-(1)同樣的方法得到目的物。熔點187-190℃。
元素分析值C32H51NO5·4/5H2O計算值(％) C70.63 H9.74 N2.57實測值(％) C70.51 H9.38 N2.60實施例20N-乙氧羰基甲基-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.20)將由實施例19得到的化合物(1.1g)溶解在17％氯化氫-乙醇(40ml)中，于80℃加熱2小時后，減壓蒸去乙醇。用氯仿提取殘留物，并用無水硫酸鎂干燥后，濃縮，通過硅膠柱色譜法(氯仿∶甲醇＝9∶1)進行純化，得到為無色結(jié)晶的目的物1.1g。熔點129-132℃。
元素分析值C34H55NO5·2/5H2O計算值(％) C72.28 H9.95 N2.48實測值(％) C72.29 H9.87 N2.61實施例21N-(3-甲氧基羰基丙基)-3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.21)使用4-氨基正丁酸甲酯鹽酸鹽，按與實施例7-(1)同樣的方法得到目的物。實施例22N-(3-羧丙基)-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.22)使用由實施例21得到的化合物，按與實施例8-(1)同樣的方法得到目的物。熔點203℃。
元素分析值C34H55NO5·H2O計算值(％) C70.92 H9.98 N2.43實測值(％) C71.14 H10.01 N2.49實施例23N-(3-乙氧羰基丙基)-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.23)使用由實施例22得到的化合物，按與實施例20同樣的方法得到目的物。熔點108-110℃。
元素分析值C36H59NO5·3/10H2O計算值(％) C73.13 H10.16 N2.37實測值(％) C72.91 H10.14 N2.35實施例24N-(2-氰基乙基)-3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.24)使用3-氨基丙腈，按與實施例7-(1)同樣的方法得到目的物。
TLC(Merck公司，Kieselgel 60 F254，乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1)Rf＝0.13實施例25N-(2-氰基乙基)-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.25)使用由實施例24得到的化合物，按與實施例8-(1)同樣的方法得到目的物。實施例26N-〔2-(2，4-二氨基-1，3，5-三嗪-6-基)乙基〕-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.26)將由實施例25得到的化合物(550mg)與雙氰胺(210mg)和氫氧化鉀(140mg)在甲基溶纖劑(50ml)中的懸浮液于125℃加熱回流2小時，減壓蒸去溶劑后，通過硅膠柱色譜法(氯仿→氯仿∶甲醇＝9∶1)純化。將得到的結(jié)晶用熱水洗滌，然后用多孔板漏斗收集結(jié)晶，得到為無色結(jié)晶的目的物。熔點214℃。
元素分析值C35H56N6O3·3/2H2O計算值(％) C66.11 H9.35 N13.22實測值(％) C65.91 H9.16 N13.12實施例27N-(3-甲氧基丙基)-3β，23(4α)-二乙酰氧基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.27)使用3-氨基丙基·甲基醚，按與實施例7-(1)同樣的方法得到目的物。實施例28N-(3-甲氧基丙基)-3β，23(4α)-二羥基土當歸-12-烯-28-酰胺(化合物No.28)使用由實施例27得到的化合物，按與實施例8-(1)同樣的方法得到目的物。熔點83℃。
元素分析值C34H57NO4·1/4H2O計算值(％) C74.48 H10.57 N2.55實測值(％) C74.49 H10.36 N2.90實施例293β-羥基-23(4α)-芐基土當歸-12-烯-28-酸芐酯(化合物No.29)將由實施例2得到的化合物(3.0g)溶解在DMF(40ml)中，加入氫化鈉(60％，552mg)，于0℃攪拌1小時。往反應(yīng)液中加入芐基氯(1.7g)。室溫下攪拌2小時。往反應(yīng)液中加水后，用乙酸乙酯提取，用無水硫酸鎂干燥，接著，過濾、濃縮。將殘留物通過硅膠柱色譜法(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶20)純化，得到目的物(3.4g)。實施例303β-乙氧羰基甲基氨基甲酰氧基-23(4α)-芐基土當歸-12-烯-28-酸芐酯(化合物No.30)將由實施例29得到的化合物(3.4g)、羰基二咪唑(3.0g)和吡啶(50ml)于80℃攪拌20小時。加入甘氨酸乙酯鹽酸鹽(4.3g)、4-二甲基氨基吡啶(3.8g)，于80℃加熱攪拌20小時，提取，濃縮，得到目的物。實施例313β-乙氧羰基甲基氨基甲酰氧基-23(4α)-羥基土當歸-12-烯-28-酸(化合物No.31)將由實施例30得到的化合物(3.4g)溶解在甲醇(200ml)中，加入5％鈀碳(500mg)，于氫氣氛下攪拌24小時后，過濾，濃縮，得到目的物。熔點196-197℃。
元素分析值C35H55NO7·1/4H2O計算值(％) C69.33 H9.23 N2.31實測值(％) C69.16 H9.04 N2.33實施例323β-(2-甲氧基乙基)氨基甲酰氧基-23(4α)-芐基土當歸-12-烯-28-酸芐酯(化合物No.32)使用2-甲氧乙胺，按與實施例30同樣的方法得到為無色結(jié)晶的目的物。實施例333β-(2-甲氧基乙基)氨基甲酰氧基-23(4α)-羥基土當歸-12-烯-28-酸(化合物No.33)使用由實施例32得到的化合物，按與實施例31同樣的方法得到為無色結(jié)晶的目的物。熔點183-184℃(用乙酸乙酯重結(jié)晶)。
元素分析值C34H55NO6計算值(％) C71.17 H9.66 N2.44實測值(％) C71.02 H9.61 N2.56實施例343β，23(4α)-羰基二氧基土當歸-12-烯-28-酸(化合物No.34)將常春配基(473mg)溶解在吡啶(10ml)中，加入羰基二咪唑(195mg)，于50℃加熱1小時。用乙酸乙酯提取，將有機層用1N鹽酸洗滌后，用無水硫酸鎂干燥，濃縮。將殘留物通過硅膠柱色譜法(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶5)純化，得到目的物(423mg)。熔點214-215℃。
元素分析值C31H46O5計算值(％) C74.61 H9.32實測值(％) C74.36 H9.05實施例353β，23(4α)-羰基二氧基土當歸-12-烯-28-酸2-乙酰氧乙酯(化合物No.35)使用由實施例1得到的化合物，按與實施例34同樣的方法得到目的物。熔點112℃。
元素分析值C35H52O7計算值(％) C71.89 H8.96實測值(％) C71.68 H8.86下面提供本發(fā)明的代表性化合物的藥理試驗結(jié)果，這些結(jié)果表明本發(fā)明化合物的有用性。試驗例1對大鼠的抗Thy-1抗體腎炎的作用抗Thy-1抗體腎炎是一種利用作為腎小球膜細胞的膜蛋白存在的Thy-1抗原和與其對應(yīng)的抗體反應(yīng)而構(gòu)成的腎小球性腎炎模型。在該模型中，可發(fā)現(xiàn)腎小球膜細胞損傷和腎小球膜細胞增殖性病變。人的慢性腎小球性腎炎多數(shù)是以腎小球膜細胞的增殖和膜基質(zhì)的增加為主要病變的增殖性腎小球性腎炎，抗Thy-1抗體腎炎被作為人增殖性腎小球性腎炎、尤其是腎小球膜細胞增殖性腎炎的模型(Ishizaki等，Acta.Pathol.Jpn.，36，1191(1986))。
(1)實驗動物實驗大鼠。
(2)實驗材料□抗Thy-1抗體的制備抗體的制備按上述Ishizaki等的方法進行。即，制備大鼠胸腺細胞的佐劑懸浮液，并將其注射至兔皮下以進行免疫。2次追加免疫后，采血，使分離得到的血清失活并吸附，由此制得抗血清(抗Thy-1抗體)。
(3)實驗方法將一定量的抗血清從尾靜脈靜注至大鼠體內(nèi)，誘發(fā)腎炎。從注射的次日起，每日1次，連續(xù)7天給大鼠口服受試藥的懸浮液。投藥開始后第8天，進行解剖，取出腎臟。將腎臟用10％磷酸鹽緩沖的福爾馬林固定后，按常規(guī)方法制備石蠟切片。用高碘酸-希夫氏染色液染色后，顯微鏡下檢查。作為病理組織學評價方法，使用光學顯微鏡，對各組織標本中腎小球內(nèi)的細胞(主要是腎小球膜細胞)數(shù)進行計數(shù)。統(tǒng)計學分析系采用非成對t檢驗的方法進行。結(jié)果見表1。
表1腎小球的病理組織學檢查
a)每個腎小球的細胞(腎小球膜細胞)數(shù)平均值±標準誤差(正常動物的平均細胞數(shù)為43個)*P＜0.05，**P＜0.01由上述結(jié)果可見，本發(fā)明的化合物對患抗Thy-1抗體腎炎的大鼠腎小球膜細胞增殖具有抑制作用。試驗例2對MRL/lpr小鼠的腎炎的作用MRL/lpr小鼠是一種由于自身免疫異常而自發(fā)地、繼發(fā)性地發(fā)生增殖性腎小球性腎炎的小鼠狼瘡性腎炎模型。使用該腎炎模型，對受試藥進行10周的長期口服試驗。
(1)實驗動物使用從Jackson研究所購入的、日本新藥株式會社繼代培養(yǎng)的MRL/lpr小鼠。
(2)實驗方法將受試藥的懸浮液從小鼠的8周齡起即給其口服，每日1次，每周6日，持續(xù)10周。給藥期間，進行尿蛋白的半定量檢測(試紙法)。給藥期間結(jié)束后，進行解剖，取出腎臟。將腎臟用10％磷酸鹽緩沖的福爾馬林固定后，按常規(guī)方法制備石蠟切片。用高碘酸-希夫氏染色液染色后，顯微鏡下檢查。作為病理組織學評價方法，使用光學顯微鏡，對各組織標本中腎小球損傷參照Berden的方法(J.Immunology，130，1699-1750(1983))，按病變程度分級，對各組的各等級的發(fā)生率(％)進行計算。按Mann Whitney氏的秩和檢驗法進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果見表2和表3。表2蛋白尿的發(fā)生率(給藥10周時)
-陰性，1+30～100mg/dl，2+100～300mg/dl，3+300～1000mg/dl，4+＞1000mg/dl*P＜0.05
表3腎小球的病理組織學評價(腎小球病變的發(fā)生率)
-無顯著變化，1+輕度，2+中度，3+重度，4+極重度**P＜0.01上述結(jié)果表明，本發(fā)明化合物對狼瘡性腎炎模型的MRL/lpr小鼠的尿蛋白和腎組織病變的進展具有抑制作用。試驗例3對腎小球膜細胞體外增殖的抑制作用(1)實驗材料和實驗方法用篩選法從大鼠腎臟分離出腎小球，得到腎小球膜細胞，并繼代培養(yǎng)。將腎小球膜細胞接種在培養(yǎng)皿上，24小時后，加入以LPS(脂多糖類)刺激的巨噬細胞培養(yǎng)上清液(含生長因子的溶液)和受試藥，培養(yǎng)72小時。培養(yǎng)結(jié)束后，將腎小球膜細胞固定并用結(jié)晶紫染色，測定吸光度。受試藥對腎小球膜細胞增殖的抑制活性系通過對同條件下培養(yǎng)的對照腎小球膜細胞的吸光度的抑制率(％)來評價。結(jié)果見表4。
表4對腎小球膜細胞體外增殖的抑制活性
上述結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物對腎小球膜細胞的體外增殖具有抑制活性。試驗例4急性毒性將受試藥的懸浮液以2g/kg的劑量給小鼠口服，觀察一般癥狀至1周后。受試藥系使用化合物No.1和化合物No.9。
其結(jié)果，在各給藥組中均未出現(xiàn)死亡例，也無異常癥狀。制劑例1片劑(口服用)在每片80mg中，化合物No.1 5.0mg玉米淀粉46.6mg結(jié)晶纖維素 24.0mg甲基纖維素 4.0mg硬脂酸鎂0.4mg將上述混合粉末壓片成型，即制得口服片劑。制劑例2片劑(口服用)在每片80mg中，化合物No.2 5.0mg玉米淀粉 46.6mg結(jié)晶纖維素 24.0mg甲基纖維素 4.0mg硬脂酸鎂 0.4mg將上述混合粉末壓片成型，即制得口服片劑。制劑例3片劑(口服用)在每片80mg中，化合物No.9 5.0mg玉米淀粉 46.6mg結(jié)晶纖維素 24.0mg甲基纖維素 4.0mg硬脂酸鎂 0.4mg將上述混合粉末壓片成型，即制得口服片劑。工業(yè)上應(yīng)用的可能性如上所述，本發(fā)明的化合物具有優(yōu)異的抑制腎小球膜細胞增殖的作用，對動物的腎炎模型有效，且毒性低，因此，可用于治療腎炎。
權(quán)利要求
1.用于治療腎炎的藥物組合物，其特征在于，以下式〔1〕表示的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物為有效成分， 式中，R1表示OR11或NR11R12，R11、R12可相同或不同，表示1)氫，2)可取代的烷基，3)可取代的環(huán)烷基，4)可取代的鏈烯基，5)可取代的炔基，6)可取代的芳基，或7)可取代的芳香族雜環(huán)基；R2、R3可相同或不同，表示1)氫，2)可取代的烷基，3)可取代的環(huán)烷基，4)可取代的鏈烯基，5)可取代的炔基，6)可取代的?；?，7)可取代的一烷基氨基甲酰基，8)可取代的二烷基氨基甲酰基，或9)可取代的烷氧羰基，或R2和R2可一起表示羰基。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，R11、R12、R2、R3中的取代基分別選自1)鹵素，2)OR13，3)OCOR13，4)COOR13，5)氰基，6)NR13R14，7)環(huán)烷基，8)可被鹵素、烷基、羥基或氨基取代的芳基或9)可被鹵素、烷基、羥基或氨基取代的芳香族雜環(huán)基；R13、R14可相同或不同，表示1)氫，或2)可被羥基、烷氧基、氨基、一烷基氨基或二烷基氨基取代的烷基。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，R1為羥基、酰氧基烷氧基、苯基烷氧基、烷氧基烷氧基、羥基烷氧基、鹵代烷氧基、二(羥基烷基)氨基烷氧基、(烷氧基烷基)氨基、鹵代苯基氨基、(二烷基氨基烷基)氨基、〔二(羥基烷基)氨基烷基〕氨基、(羧基烷基)氨基、(烷氧羰基烷基)氨基、(氰基烷基)氨基或二氨基取代的三嗪基烷基氨基，R2為氫，R3為氫。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，R1為羥基、(烷氧基烷基)氨基、鹵代苯基氨基、(二烷基氨基烷基)氨基、〔二(羥基烷基)氨基烷基〕氨基、(烷氧羰基烷基)氨基或(氰基烷基)氨基，R2為乙酰氧基，R3為乙酰氧基。
5.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，R1為苯基烷氧基，R2為羥基、(烷氧羰基烷基)氨基甲?；?烷氧烷基)氨基甲?；?，R3為苯烷基。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，R1為羥基，R2為(烷氧羰基烷基)氨基甲?；?烷氧烷基)氨基甲?；?，R3為氫。
7.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，R1為羥基或酰氧烷氧基，R2和R3一起表示羰基。
8.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，R1為羥基、2-甲氧基乙氨基或2-乙酰氧基乙氧基，R2為氫，R3為氫。
9.用于治療慢性腎小球性腎炎的藥物組合物，其特征在于，以權(quán)利要求1至8中任一項所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物為有效成分。
10.用于治療增殖性腎小球性腎炎的藥物組合物，其特征在于，以權(quán)利要求1至8中任一項所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物為有效成分。
11.權(quán)利要求1所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物，其特征在于，它們不是下述(1)～(5)的化合物(1)R1為羥基或甲氧基，R2為氫，R3為氫、乙酰基或甲基的化合物(2)R1為羥基，R2、R3均為甲?；?、乙?；虮郊柞；幕衔?3)R1為甲氧基，R2為乙?；?，R3為氫、乙?；蚣谆幕衔?4)R1為甲氧基，R2為苯甲?；琑3為氫或苯甲?；幕衔?5)R1為甲氧基，R2為甲基，R3為氫或甲基的化合物。
12.如權(quán)利要求11所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物，其特征在于，R11、R12、R2、R3中的取代基分別選自1)鹵素，2)OR13，3)OCOR13，4)COOR13，5)氰基，6)NR13R14，7)環(huán)烷基，8)可被鹵素、烷基、羥基或氨基取代的芳基或9)可被鹵素、烷基、羥基或氨基取代的芳香族雜環(huán)基；R13、R14可相同或不同，表示1)氫，或2)可被羥基、烷氧基、氨基、一烷基氨基或二烷基氨基取代的烷基。
13.如權(quán)利要求11所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物，其特征在于，R1為羥基、酰氧基烷氧基、苯基烷氧基、烷氧基烷氧基、羥基烷氧基、鹵代烷氧基、二(羥基烷基)氨基烷氧基、(烷氧基烷基)氨基、鹵代苯基氨基、(二烷基氨基烷基)氨基、〔二(羥基烷基)氨基烷基〕氨基、(羧基烷基)氨基、(烷氧羰基烷基)氨基、(氰基烷基)氨基或二氨基取代的三嗪基烷基氨基，R2為氫，R3為氫。
14.如權(quán)利要求11所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物，其特征在于，R1為羥基、(烷氧基烷基)氨基、鹵代苯基氨基、(二烷基氨基烷基)氨基、〔二(羥基烷基)氨基烷基〕氨基、(烷氧羰基烷基)氨基或(氰基烷基)氨基，R2為乙酰氧基，R3為乙酰氧基。
15.如權(quán)利要求11所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物，其特征在于，R1為苯基烷氧基，R2為羥基、(烷氧羰基烷基)氨基甲酰基或(烷氧烷基)氨基甲?；琑3為苯烷基。
16.如權(quán)利要求11所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物，其特征在于，R1為羥基，R2為(烷氧羰基烷基)氨基甲?；?烷氧烷基)氨基甲酰基，R3為氫。
17.如權(quán)利要求11所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物，其特征在于，R1為羥基或酰氧基烷氧基，R2和R3一起表示羰基。
18.如權(quán)利要求11所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物，其特征在于，R1為2-甲氧基乙氨基或2-乙酰氧基乙氧基，R2為氫，R3為氫。
19.治療腎炎的方法，其特征在于，將有效量的權(quán)利要求1所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物對人和動物給藥。
20.權(quán)利要求1所述的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物在制造腎炎治療用藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一種用于治療腎炎的藥物組合物，其特征在于，以下式[I]表示的常春配基衍生物或其藥學上可接受的鹽或它們的溶劑化物為有效成分，式中各取代基的定義詳見說明書。
文檔編號C07J63/00GK1151165SQ9519376
公開日1997年6月4日 申請日期1995年6月22日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月24日
發(fā)明者大林忠明, 吉房寬人, 神鳥和久 申請人:日本新藥株式會社