專利名稱：治療肥大細(xì)胞炎性疾病的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及有效地預(yù)防和治療由肥大細(xì)胞介導(dǎo)的炎性病癥的組合物及方法。本發(fā)明包括了有效地預(yù)防和治療與呼吸道有關(guān)的炎性疾病，如哮喘和變應(yīng)性鼻炎的組合物及方法。本發(fā)明的組合物及方法特別適用于預(yù)防和治療與慢性哮喘有關(guān)的后期支氣管狹窄和氣道應(yīng)答過強(qiáng)。此外，本發(fā)明的組合物和方法也用于治療其它類型免疫介導(dǎo)的炎性疾病，例如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、結(jié)膜炎和炎性腸疾病，以及各種皮膚病。另外，本發(fā)明組合物及方法也用于治療呼吸道合胞體病毒。
背景技術(shù)：
就哮喘的急性和慢性二種表現(xiàn)形式而言，哮喘是涉及多種生化介體的復(fù)雜的疾病。越來越多的人認(rèn)為哮喘是一種炎性疾病(參見例如Hood等人，Immunology，第2版，Benjamin-Cummings，1984)。哮喘常常是以氣管和支氣管對特異免疫反應(yīng)性變應(yīng)原和一般性的化學(xué)或物理刺激的應(yīng)答過強(qiáng)逐漸發(fā)展為特征的，現(xiàn)確信哮喘的細(xì)支氣管組織的應(yīng)答過強(qiáng)導(dǎo)致慢性炎性反應(yīng)，這就刺激和損害了氣道內(nèi)壁的上皮并造成基礎(chǔ)組織的病理學(xué)增厚。支氣管活組織檢查提出即使是輕度哮喘的病人也具有氣道壁發(fā)炎的特征。
炎癥過程的一個起始點(diǎn)是對吸入的變應(yīng)原的變應(yīng)性應(yīng)答。載有IgE受體的白細(xì)胞，特別是肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，但也包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和嗜伊紅性粒細(xì)胞存在于支氣管的上皮細(xì)胞和基礎(chǔ)的平滑肌組織中，由于IgE受體結(jié)合了吸入的特殊的變應(yīng)原而使它們開始活化?；罨姆蚀蠹?xì)胞釋放出一系列起作用的或初級的炎性應(yīng)答化學(xué)介體和酶，及進(jìn)一步的，活化肥大細(xì)胞經(jīng)過酶作用在原地產(chǎn)生各種二級炎性介體，包括過氧化物和類脂體衍生介體。此外，由于肥大細(xì)胞的去?；饔冕尫懦鰩追N大分子蛋白聚糖、過氧化物酶、芳基硫酸酯酶B，以及特別是蛋白酶類胰蛋白酶和胰蛋白酶的蛋白酶(chymase)，參見DrugTherapy of Asthma，PP1054-54。
肥大細(xì)胞的這種化學(xué)釋放可以說明敏感的個體在接觸空氣中的變應(yīng)原以后出現(xiàn)早期的細(xì)支氣管壓縮體的應(yīng)答。在接觸變應(yīng)原15分鐘左右早期的哮喘反應(yīng)最大，在隨后的1-2小時里開始恢復(fù)。有25-35％的個體在早期哮喘反應(yīng)之后，接著是在接觸后幾小時開始的呼吸功能繼續(xù)下降，在6-12小時之間達(dá)到最嚴(yán)重。這種后期的哮喘反應(yīng)伴隨著滲透細(xì)支氣管平滑肌和上皮組織的炎性細(xì)胞的數(shù)量顯著增加并進(jìn)入氣道。這些細(xì)胞包括嗜伊紅性粒細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，所有這些細(xì)胞都由于產(chǎn)生趨化劑(Chemotatic agents)的肥大細(xì)胞的釋放而被吸收于該位置上。在后期的反應(yīng)中滲透細(xì)胞本身被活化。確信后期的哮喘反應(yīng)是由巨噬細(xì)胞的分泌活性部分介導(dǎo)的二級炎性反應(yīng)。
炎胰蛋白酶是人肥大細(xì)胞的主要分泌蛋白酶，并認(rèn)為其與神經(jīng)肽的作用(processing)以及組織的炎癥有關(guān)。成熟的人的類胰蛋白酶是糖基化的，與肝素相關(guān)的四聚體，是不均一的、催化活性的亞單位。參見Vanderslice等人Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，873811-3815(1990)；Miller等人，J.Clin.Invest.，86864-870(1990)；Miller等人，J.Clin.Invest.，841188-1195(1989)；和Vanderslice等人，Biochemistry，284148-4155(1989)。
類胰蛋白酶貯于肥大細(xì)胞分泌顆粒中。在肥大細(xì)胞活化后，在各種生物體液中很容易測定出人的類胰蛋白酶。例如在過敏反應(yīng)之后，類胰蛋白酶開始出現(xiàn)在血液中，并可保持在幾小時內(nèi)都可測出。參見Schwartz等人，N.En.J.Med.，3161622-1626(1987)。在用特異性抗體激發(fā)的變應(yīng)性受試者的鼻樣品和肺洗出液檢測出了類胰蛋白酶。參見Castells和Schwartz，J.Allerg.Clin.Immunol.，82348-355(1988)和Wenzel等人，Am.Rev.Resp.Dis.，141563-568(1988)。在支氣管內(nèi)變應(yīng)性激發(fā)之后變應(yīng)性受試者的肺洗出液中類胰蛋白酶水平增加。某些吸煙者的支氣管肺泡洗出液中類胰蛋白酶水平比非吸煙對照組明顯提高，有一種假設(shè)是由活化的肥大細(xì)胞釋放出蛋白酶可能造成吸煙者肺氣腫時的肺損傷，而上述發(fā)現(xiàn)為這種假設(shè)提供了一些證據(jù)。參見Kalenderian等人，Chest 94119-123(1988)。此外，已經(jīng)證明類胰蛋白酶是成纖維細(xì)胞有效的促細(xì)胞分裂原，可能與肺纖維化和間質(zhì)肺疾病有關(guān)。參見Ruoss等人，J.Clin.Invest.，88493-499(1931)。
已知類胰蛋白酶參與各種生物過程，包括血管舒張和支氣管放松神經(jīng)肽的降解(參見Caughey等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.，244133-137(1988)；Franconi等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.，248947-951(1988)；和Tam等人，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.，3227-32(1990))和支氣管對組胺的應(yīng)答過強(qiáng)時的調(diào)節(jié)(參見Sekizawe等人，J.Clin.Invest.，83175-179(1989)。這些研究表明類胰蛋白酶可能通過破壞支氣管擴(kuò)張肽提高哮喘時的支氣管縮小。
另外，已知類胰蛋白酶可分裂出血纖蛋白原α-鏈，以及可能釋放出激肽的高分子量的激肽原，因此和肝素一起到局部抗凝劑的作用。類蛋白酶通過MMP-3活化前溶基質(zhì)素(Pro-MMP-3)和前膠原酶(Pro-MMP-1)的能力說明它也與組織的炎癥和重組有關(guān)。此發(fā)現(xiàn)也說明類胰蛋白酶在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)損傷中也起作用。此外，還證明類胰蛋白酶分裂出降鈣素基因相關(guān)肽。因此這種肽與神經(jīng)原的炎癥有關(guān)，類胰蛋白酶是在皮膚神經(jīng)原炎癥中調(diào)節(jié)潮紅反應(yīng)的一個因素。參見Caughey，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.，4387-394(1991)。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)呼吸合胞體病毒是人類呼吸疾病的病因。這種病毒會引起幼兒和兒童的呼吸道感染，如支氣管炎和支氣管肺炎。已經(jīng)證明某些化合物，特別是芳族脒基級生物通常被作為類胰蛋白酶、尿激酶和血纖溶酶的抑制劑，以阻斷由呼吸合胞體病毒誘發(fā)的細(xì)胞融合是有效的，并顯著減少了病毒的產(chǎn)生。參見R.R.Tidwell等人，J.Med.Chem.，26(2)294-298(1983)和Tidwell等人，Antimicrobial Agents and Chemotherapy26591(1984)。
介導(dǎo)炎性疾病的肥大細(xì)胞和合胞體病毒感染是目前不斷增長的公共健康問題，特別是哮喘已成為工業(yè)國家常見的慢性病。因此，需要提供有效地治療這些疾病的組合物和方法。
發(fā)明綜述本發(fā)明提供了下式的對稱化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和其前藥 2Y其中Z是氨基、胍基或脒基；Y是選擇取代的環(huán)(C3-14)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-14)亞烷基；X1是選擇取代的(C3-6)亞烷基，選擇取代的氧雜(C4-6)亞烷基或-X6-X7-X8-(其中X7是選擇取代的亞苯基，選擇取代的環(huán)(C3-6)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-6)亞烷基，以及X6和X8分別是選擇取代的(Cn6)亞烷基和選擇取代的雜環(huán)(Cn8)亞烷基，其中n6和n8的和等于1、2、3或4，條件是當(dāng)Z是氨基時n6不是0)；X2和X4各自獨(dú)立地是-C(O)-，-C(O)O-，-OC(O)-，-C(O)N(R1)-，-N(R1)C(O)-，-OC(O)N(R1)-，-N(R1)C(O)O-，-N(R1)C(O)N(R1)-，或-OC(O)O-，(其中R1各自獨(dú)立地是氫、選擇取代的(C1-8)烷基或選擇取代的環(huán)(C3-8)烷基)；X3是選擇取代的(C1-8)亞烷基，-X9-X10或-X10-X9-(其中X9是選擇取代的(Cn9)亞烷基，其中的n9是0、1或2，以及X10是選擇取代的環(huán)(C3-8)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-8)亞烷基，條件是在X10含有的雜原子和X2或X4含有的雜原子之間不能出現(xiàn)共價鍵)；以及X5是選擇取代的(Cn5)亞烷基，其中n5是0、1或2。
本發(fā)明提供了下式的不對稱化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和其前藥R2-Y-R3其中R2和R3獨(dú)立地是Z-X1-X2-X3-X4-X5，其中Z是氨基、胍基或脒基；Y是選擇取代的環(huán)(C3-14)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-14)亞烷基；X1是選擇取代的(C3-6)亞烷基，選擇取代的氧雜(C4-6)亞烷基或-X6-X7-X8-(其中X7是選擇取代的亞苯基，選擇取代的環(huán)(C3-6)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-6)亞烷基，以及X6和X8分別是選擇取代的(Cn6)亞烷基和選擇取代的雜環(huán)(Cn8)亞烷基，其中n6和n8的和等于1、2、3或4，條件是當(dāng)Z是氨基時n6不是0)；
X2和X4各自獨(dú)立地是-C(O)-，-C(O)O-，-OC(O)-，-C(O)N(R1)-，-N(R1)C(O)-，-OC(O)N(R1)-，-N(R1)C(O)O-，-N(R1)C(O)N(R1)-，或-OC(O)O-，(其中R1各自獨(dú)立地是氫、選擇取代的(C1-8)烷基或選擇取代的環(huán)(C3-8)烷基)；X3是選擇取代的(C1-8)亞烷基，-X9-X10或-X10-X9-(其中X9是選擇取代的(Cn9)亞烷基，其中的n9是0、1或2，X10是選擇取代的環(huán)(C3-8)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-8)亞烷基，條件是在X10含有的雜原子和X2或X4含有的雜原子之間不能出現(xiàn)共價鍵)；X5是選擇取代的(Cn5)亞烷基，其中n5是0、1或2；條件是R2和R3是不同的。
本發(fā)明提供了藥物組合物，該組合物含有本發(fā)明化合物或其一種或多種藥學(xué)上可接受的鹽，和與之混合的一種或多種適宜的賦形劑，以及所說的組合物中進(jìn)一步含有β-腎上腺素能激動劑。
本發(fā)明提供了治療哺乳動物呼吸道的免疫介導(dǎo)的炎性疾病的方法，所述的方法包括給所述哺乳動物施用治療有效量的本發(fā)明化合物或其一種或多種藥學(xué)上可接受的鹽，或施用含有所述化合物，所述一種或多種鹽的藥物組合物或進(jìn)一步含有β-腎上腺素能激動劑的所述組合物。
本發(fā)明提供了治療哺乳動物免疫介導(dǎo)的類性皮膚病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、結(jié)膜炎或合胞體病毒感染的方法，該方法包括給所述哺乳動物施用治療有效量的本發(fā)明化合物或其一種或多種藥學(xué)上可接受的鹽，或施用含有所述化合物、一種或多種鹽的藥物組合物。
本發(fā)明的藥物組合物可以是各種形式，包括口服劑型、吸人形式以及可注射和輸注的溶液。當(dāng)以吸入劑或氣霧劑形式使用時，本發(fā)明化合物與藥學(xué)上可接受的載體溶液或可轉(zhuǎn)化成氣霧劑形式的干粉結(jié)合使用。與此類似，當(dāng)此口服給藥使用時，本發(fā)明化合物與適用于口服給藥的藥學(xué)上可接受載體結(jié)合使用。當(dāng)用于治療免疫介導(dǎo)的炎性皮膚病時，本發(fā)明組合物與無毒的、藥學(xué)上可接受的局部用載體結(jié)合使用。本發(fā)明化合物可與抗炎藥或其它哮喘治療劑，如β-腎上腺素能激動劑、抗炎的皮質(zhì)類固醇、抗膽堿能藥、支氣管擴(kuò)張藥如甲基占噸等結(jié)合使用。
本文所述化合物用于預(yù)防和治療免疫介導(dǎo)的炎性疾病，特別是包括哮喘在內(nèi)的與呼吸道相關(guān)的疾病，以及特別是與慢性哮喘相關(guān)的應(yīng)答過強(qiáng)，和變應(yīng)性鼻炎。因此本發(fā)明也提供了治療免疫介導(dǎo)的炎性疾病的方法，該方法包括給有免疫介導(dǎo)的炎性疾病的患者施用治療有效劑型或劑量的本發(fā)明化合物。另外，本發(fā)明所述化合物還用于治療合胞體病毒感染。
附圖簡要說明

圖1表示相對于用對照物處理的羊而言，用雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)處理激活羊的抗原的特異性肺耐受性(SRL)與處理時間(小時)的函數(shù)關(guān)系，所述處理是用上述化合物氣霧劑給藥3次，50μg劑量。
圖2是相對于對照物處理的羊而言，用雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)處理激活羊的抗原的氣道應(yīng)答過強(qiáng)(以PC400測定)的柱狀圖，所述處理是用上述化合物氣霧劑給藥3次，50μg劑量。
圖3表示相對于用對照物處理的羊而言，用雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)處理激活羊的抗原的特異性肺耐受性(SRL)與處理時間(小時)的函數(shù)關(guān)系，所述處理是以3，2mg的劑量口服上述化合物。
圖4是相對于對照物處理的羊而言，用雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)處理激活羊的抗原的氣道應(yīng)答過強(qiáng)(以PC400測定)的柱狀圖，所述處理是以3次，2mg的劑量口服上述化合物。
圖5是相對于用對照物處理的羊而言，用雙(4-胍基芐基氨基甲?；装被哙呼人?-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物2)處理激活羊的抗原的特異性肺耐受性(SRL)對激活時間(小時)的函數(shù)，所述處理是以3次，0.1mg劑量以氣霧劑給藥上述化合物。
圖6是相對于用對照物處理的羊而言，用雙(4-胍基芐基氨基甲?；装被哙呼人?-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物2)處理激活羊的抗原的氣道應(yīng)答過強(qiáng)(以PC400測定)的柱狀圖，所述處理是以3次，0.1mg的劑量氣霧劑給藥上述化合物。
圖7是相對于對照物處理的羊而言，用雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)處理激活羊的抗原的特異性肺耐受性(SRL)對激活時間(小時)的函數(shù)，所述處理是在抗原激活前0.5小時時給藥上述化合物0.5mg劑量，然后每天氣霧劑給藥0.5mg，共3天。
圖8是相對于對照物處理的羊而言，用雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)處理激活羊的抗原的氣道應(yīng)答過強(qiáng)(以PC400測量)的柱狀圖，所述處理是在抗原激活前0.5小時時給藥上述化合物0.5mg劑量，然后每天氣霧劑給藥0.5mg，共3天。
優(yōu)選實施方案的描述1.定義確定下面的定義以說明和定義本發(fā)明所用各種術(shù)語的意義和范圍。
“免疫介導(dǎo)的炎性病癥”一般包括與肥大細(xì)胞介體釋放相關(guān)的和對用類胰蛋白酶抑制劑治療敏感的那些疾病。這些疾病的實例包括直接型過敏癥如哮喘，變應(yīng)性鼻炎，蕁麻疹和血管性水腫，和濕疹性皮炎(特應(yīng)性皮炎)和過敏反應(yīng)，以及增生性皮膚病，消化性潰瘍，炎性腸疾病，眼的結(jié)膜炎的春季結(jié)膜炎，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，炎性皮膚病等等。
“應(yīng)答過強(qiáng)”是指與慢性哮喘有關(guān)的支氣管狹窄后期和氣道反應(yīng)過度。據(jù)信哮喘的細(xì)支氣管組織的應(yīng)答過強(qiáng)會引起慢性炎癥反應(yīng)，這就刺激和損害了氣道內(nèi)壁的上皮并造成基礎(chǔ)組織的病理學(xué)增厚。
“鹵素”是指氟、溴、氯和碘原子。
“羥基”是指基團(tuán)-OH。
“氨基”是指基團(tuán)-NH2。
本文使用的“氧雜”是指二價氧基團(tuán)-O-。
“硫醇”或“巰基”是指基團(tuán)-SH。
術(shù)語“(C1-8)烷氧基”是表示-OR基團(tuán)，其中的R是下文定義的(C1-8)烷基，取代的(C1-8)烷基，芳基，取代的芳基，芳烷基或取代的芳烷基。
在(C1-4)烷基或(C1-8)烷基中的“烷基”是指有1至所指定數(shù)目的碳原子的直鏈或支鏈的飽和烴基基團(tuán)，此術(shù)語的實例例如下述基團(tuán)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、異戊基、正戊基、己基等等?！斑x擇取代的(C1-8)烷基”是指如上文的烷基基團(tuán)上有一個或多個例如下述的官能基團(tuán)選擇取代鹵素，羥基，氨基，-NRR′(其中R和R′獨(dú)立地是氫，選擇取代的烷基、選擇取代的環(huán)烷基，選擇取代芳基或選擇取代的酰基)，巰基或選擇取代的下述基團(tuán)(C1-8)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、芳基、芳基(C1-4)烷基、?；?、(C1-8)烷氧基、芳氧基、(C3-8)環(huán)烷氧基、芳基(C1-4)烷氧基、(C1-8)烷硫基、芳硫基、(C3-8)環(huán)烷硫基、芳基(C1-4)烷硫基、酰氧基等等。
“環(huán)烷基”，如在(C3-8)環(huán)烷基中的環(huán)烷基是指具有指定數(shù)目碳原子的飽和單環(huán)烴基。此術(shù)語的具體實例如下述基團(tuán)環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。選擇取代的(C3-8)環(huán)烷基是指上文定義的環(huán)烷基基團(tuán)由一個或多個下述官能基選擇取代鹵素，羥基，氨基，-NRR′(其中R和R′獨(dú)立地是氫、選擇取代的烷基、選擇取代的環(huán)烷基、選擇取代的芳基或選擇取代的酰基)，巰基或選擇取代的下述基團(tuán)(C1-8)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、芳基、芳基(C1-4)烷基、酰基、(C1-8)烷氧基、芳氧基、(C3-8)環(huán)烷氧基、芳基(C1-4)烷基、(C1-8)烷硫基、芳硫基、(C3-8)環(huán)烷硫基、芳基(C1-4)烷硫基、酰氧基等。
“芳基”是指由含有6-14個碳原子的芳族烴基衍生的有機(jī)基團(tuán)，包括單環(huán)和或稠合芳族碳環(huán)，例如苯基、萘基、蒽基、菲基等。選擇取代的芳基是指上文定義的芳基基團(tuán)由一個或多個下述官能基選擇取代鹵素、羥基、氨基、-NRR′(其中R和R′獨(dú)立地是氫、選擇取代的烷基、選擇取代的環(huán)烷基、選擇取代的芳基或選擇取代的?；?，巰基或選擇取代的下述基團(tuán)(C1-8)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、芳基、芳基(C1-4)烷基、?；?、(C1-8)烷氧基、芳氧基、(C3-8)環(huán)烷氧基、芳基(C1-4)烷氧基、(C1-8)烷硫基、芳硫基、(C3-8)環(huán)烷硫基、芳基(C1-4)烷硫基、酰氧基等。基、芳基(C1-4)烷硫基、酰氧基等。
在(C1-3)烷氧基或(C1-8)烷氧基中的“烷氧基”表示-OR基團(tuán)，其中R是如上文定義的選擇取代的烷基。
“芳氧基”、“環(huán)烷氧基”和“芳基(C1-4)烷氧基”表示-OR基團(tuán)，其中R分別是上文定義的選擇取代芳基、選擇取代的環(huán)烷基和選擇取代的芳基(C1-4)烷基。
“烷硫基”表示-SR基團(tuán)，其中R是如上文定義的選擇取代的烷基。
“芳硫基”、“環(huán)烷硫基”和“芳基(C1-4)烷硫基”表示-SR基團(tuán)，其中R分別是上文定義的選擇取代的芳基、選擇取代的環(huán)烷基和選擇取代的芳基(C1-4)烷基。
“?；北硎?C(O)R基團(tuán)，其中R是上文定義的選擇取代的烷基、選擇取代的環(huán)烷基或選擇取代的芳基。
“酰氧基”表示-OC(O)R基團(tuán)，其中R是上文定義的選擇取代的烷基、選擇取代的環(huán)烷基或選擇取代的芳基。
“氨基(C1-4)烷基”、“氨基(C1-4)烷氧基”和“氨基(C1-4)鏈烯基”是指在上文定義的烷基、烷氧基或鏈烯基基團(tuán)的端基碳原子上(Ω-)連接著氨基。
在本申請中使用的“亞烷基”(“Alkylene”)是指具有指定數(shù)目碳原子的、飽和或不飽和的二價基團(tuán)。此術(shù)語的具體實例例如是下述基團(tuán)亞甲基(-CH2-)、亞乙基(-CH2CH2-)、三亞甲基(-CH2CH2CH2-)等?！斑x擇取代的亞烷基”是指上文定義的二價基團(tuán)由一個或多個例如下述官能基選擇取代鹵素、羥基、氨基、-NRR′(其中R和R′獨(dú)立地是氫、選擇取代的烷基、選擇取代的環(huán)烷基、選擇取代的芳基或選擇取代的?；?，巰基或選擇取代的下述基團(tuán)(C1-8)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、芳基、芳基(C1-4)烷基、?；?、(C1-8)烷氧基、芳氧基、(C3-8)環(huán)烷氧基、芳基(C1-4)烷氧基、(C1-8)烷硫基、芳硫基、(C3-8)環(huán)烷硫基、芳基(C1-4)烷硫基、酰氧基等。
在氧雜(C4-6)亞烷基中的“氧雜亞烷基”表示-R-O-R′-二價基團(tuán)，其中R和R′獨(dú)立地是上文定義的、具有指定碳原子數(shù)的亞烷基。此術(shù)語的具體實例例如是2-氧雜三亞甲基(-CH2-O-CH2-)、2-氧雜四亞甲基-(CH2-O-CH2CH2-)、2-氧雜四亞甲基-(CH2-O-CH2CH2-)、3-氧雜四亞甲基(-CH2CH2-O-CH2-)、3-氧雜五亞甲基(-CH2CH2-O-CH2CH2-)、3-氧雜六亞甲基(-CH2CH2-O-CH2CH2CH2-)等?！斑x擇取代的氧雜亞烷基”是指上文定義的二價基團(tuán)由一個或多個例如下述官能基選擇取代鹵素、羥基、氨基、-NRR′(其中R和R′獨(dú)立地是氫、選擇取代的烷基、選擇取代的環(huán)烷基、選擇取代的芳基或選擇取代的?；?，巰基或選擇取代的下述基團(tuán)(C1-8)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、芳基、芳基(C1-4)烷基、?；?、(C1-8)烷氧基、芳氧基、(C3-8)環(huán)烷氧基、芳基(C1-4)烷氧基、(C1-8)烷硫基、芳硫基、(C3-8)環(huán)烷硫基、芳基(C1-4)烷硫基、酰氧基等。
在本申請中，在“(C3-14)環(huán)烷亞基”中所用的“亞環(huán)烷基”是指具有3至指定碳原子數(shù)目的，單環(huán)或多環(huán)，飽和或非芳香性不飽和的二價基團(tuán)。此術(shù)語的具體實例例如是以下基團(tuán)亞環(huán)丙基、亞環(huán)丁基、亞環(huán)戊基、亞環(huán)己基、亞環(huán)己烯基、雙環(huán)己烷亞基、雙環(huán)己烯亞基、亞環(huán)辛基等?！斑x擇取代的亞環(huán)烷基”是指上文定義的二價基團(tuán)由一個或多個例如下述官能基選擇取代鹵素、羥基、氨基、-NRR′(其中R和R′獨(dú)立地是氫、選擇取代的烷基、選擇取代的環(huán)烷基、選擇取代的芳基或選擇取代的?；?，巰基或選擇取代的下述基團(tuán)(C1-8)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、芳基、芳基(C1-4)烷基、?；?C1-8)烷氧基、芳氧基、(C3-8)環(huán)烷氧基、芳基(C1-4)烷氧基、(C1-8)烷硫基、芳硫基、(C3-8)環(huán)烷硫基、芳基(C1-4)烷硫基、酰氧基等。
本發(fā)明的“雜環(huán)烷亞基”是指具有3至指定原子數(shù)目的，有一個或多個選自N、O或S的雜原子單環(huán)或多環(huán)、飽和或非芳香性不飽和的二價基團(tuán)。此術(shù)語的具體實例例如1，5-氧雜辛烷亞基、4，8-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷亞基等?！斑x擇取代的雜環(huán)烷亞基”是指上文定義的二價基團(tuán)由一個或多個例如下述官能基選擇取代鹵素、羥基、氨基、-NRR′(其中R和R′獨(dú)立地是氫、選擇取代的烷基、選擇取代的環(huán)烷基、選擇取代的芳基或選擇取代的?；?，巰基或選擇取代的下述基團(tuán)(C1-8)烷基、(C3-8)環(huán)烷基、芳基、芳基(C1-4)烷基、?；?、(C1-8)烷氧基、芳氧基、(C3-8)環(huán)烷氧基、芳基(C1-4)烷氧基、(C1-8)烷硫基、芳硫基、(C3-8)環(huán)烷硫基、芳基(C1-4)烷硫基、酰氧基等。
“藥學(xué)上可接受的鹽”是指保持了母體化合物的生物有效性和其性質(zhì)的，不是生物上或其它方面所不希望的那些鹽類。
“前藥”是指在給藥后通過體內(nèi)代謝過程化學(xué)轉(zhuǎn)化的化合物。
“選擇地”是指可以出現(xiàn)，也可以不出現(xiàn)的作用或情況，所述內(nèi)容包括該作用或情況出現(xiàn)和不出現(xiàn)的實例。例如短語“選擇取代的(C1-8)烷基”是指不取代或者進(jìn)一步取代的烷基基團(tuán)。二種情況都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
“藥學(xué)上或治療學(xué)上可接受的載體”是指不影響活性組分生物活性的有效性并且是對宿主或患者無毒的載體介質(zhì)。
“立體異構(gòu)體”是指一化合物與另外一化合物具有相同分子量，化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)，但是其原子組合不同。這就是說，某些相同的化學(xué)組成部分處于空間的不同方向上，因此，在純物質(zhì)時，它具有旋轉(zhuǎn)偏振光平面的能力。但是，某些純立體異構(gòu)體可以有光學(xué)旋轉(zhuǎn)，此種旋轉(zhuǎn)是如此之小以至于用現(xiàn)在的儀器不能測出。本發(fā)明的化合物包括各種立體異構(gòu)體，所有的立體異構(gòu)體均在本發(fā)明的保護(hù)范圍以內(nèi)。
“治療”(“treatment”or“treating”)是指將本發(fā)明化合物在體外和體內(nèi)用藥，并包括下述二種作用(I)抑制疾病的癥狀；和/或(ii)減少或抑制疾病的病程。
本發(fā)明的化合物是按照“化學(xué)文摘”(“Chemical Abstracts”)所用的通?？山邮艿拿?guī)則命名的。例如，n5是0，Z-X1-是4-胍基芐基，X2是-NH-C(O)-，X3是1，4-亞哌嗪基，X4是-C(O)O-，和Y是順式-1，5-亞環(huán)辛基的化合物命名為雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；n5是1，Z-X1-是反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基，X2是-NH-C(O)-，X3是1，4-亞哌嗪基，X4是-C(O)O-，和Y是反式-1，4-亞環(huán)己基的化合物命名為雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-反式-1，4-亞環(huán)己基二亞甲基酯；n5是0，Z-X1-是4-(2-氨基乙基)苯基，X2是-C(O)-，X3是1，4-亞哌嗪基，X4是-C(O)O-和Y是順式-1，5-亞環(huán)辛基的化合物命名為雙{4-[4-(2-氨基乙基)苯甲?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；n5是0，Z-X1-是反式-4-氨基甲基環(huán)己基，X2是-NHC(O)O-，X3是X3是亞乙基，X4是-N(CH3)C(O)O-，和Y是順式-1，5-亞環(huán)辛基的化合物命名為雙{N-2-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基氨基甲酰氧基)乙基-N-甲基氨基羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
II.化合物本發(fā)明提供了下式的對稱化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和其前藥[Z-X1-X2-X3-X4-X5]2Y其中Z是氨基、胍基或脒基；Y是選擇取代的環(huán)(C3-14)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-14)亞烷基；X1是選擇取代的(C3-6)亞烷基，選擇取代的氧雜(C4-6)亞烷基或-X6-X7-X8-(其中X7是選擇取代的亞苯基，選擇取代的環(huán)(C3-6)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-6)亞烷基，以及X6和X8分別是選擇取代的(Cn6)亞烷基和選擇取代的雜環(huán)(Cn8)亞烷基，其中n6和n8的和等于1、2、3或4，條件是當(dāng)Z是氨基時n6不是0)；X2和X4各自獨(dú)立的是-C(O)-，-C(O)O-，-OC(O)-，-C(O)N(R1)-，-N(R1)C(O)-，-OC(O)N(R1)-，-N(R1)-C(O)O-，-N(R1)C(O)N(R1)-，或-OC(O)O-，(其中R1各自獨(dú)立的是氫、選擇取代的(C1-8)烷基或選擇取代的環(huán)(C3-8)烷基)；X3是選擇取代的(C1-8)亞烷基，-X9-X10或-X10-X9-(其中X9是選擇取代的(Cn9)亞烷基，其中的n9是0、1或2，X10是選擇取代的環(huán)(C3-8)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-8)亞烷基，條件是在X10含有的雜原子和X2或X4含有的雜原子之間不能出現(xiàn)共價鍵)；X5是選擇取代的(Cn5)亞烷基，其中n5是0、1或2。
在本發(fā)明的綜述中確定了本發(fā)明最寬的定義范圍，本發(fā)明的一些化合物是優(yōu)選的。例如通常優(yōu)選Z是氨基，n6是1或2，n8是1和X6是1，4-亞苯基、1，4-亞環(huán)己基、1，4-雙環(huán)[2.2.2]辛烷亞基、1，4-雙環(huán)[2.2.1]庚烷亞基、1，3-亞苯基、1，3-亞環(huán)己基、1，3-雙環(huán)[2.2.2]辛烷亞基、1，3-雙環(huán)[2.2.1]庚烷亞基，或者Z是胍基或脒基，n6是0，n8是1和X6是1，4-亞苯基或1，3-亞苯基；X2是-C(O)-，-C(O)NH-或-NH-C(O)O-；X3是1，4-亞哌嗪基、1，4-亞哌啶基、1，4-全氫-7H-1，4-二吖庚因亞基或是-X9-X10(其中X9是亞甲基和X10是1，4-亞哌啶基)，和X4是-C(O)-或-C(O)O-；或者X3是(C1-4)亞烷基和X4是-N(R1)-C(O)O-(其中R1是氫或甲基)；和Y是亞環(huán)辛基、亞環(huán)己基、亞環(huán)戊基、順式-十氫萘、反式-十氫萘、菲烷、雙環(huán)[2.2.1]庚烷亞基、雙環(huán)[2.2.2]辛烷亞基、雙環(huán)[3.3.1]壬烷亞基、二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷亞基或四環(huán)[3.3.1.13,7]癸烷亞基。
更優(yōu)選的那些化合物是其中的Z是氨基，n6和n8各自是1和X6是反式-1，4-亞環(huán)己基，或者Z是胍基或脒基，n6是0，n8是1和X1是1，4-亞苯基；X2是-C(O)-或-NH-C(O)-；X3是1，4-亞哌嗪基；X4是-C(O)O-；和n5是0和Y是反式-1，5-亞環(huán)辛基或n5是2和Y是順式-亞環(huán)辛基。
特別優(yōu)選的化合物的實例包括雙(4-胍基芐基氨基甲酰基甲基氨基羧酸)-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯，或者，按照IUPAC的命名法其名稱為名稱是雙[N-(p-胍基芐基甘氨?；?-(N)-(α)-羧酸-1，1-反式-1，4-雙(4-環(huán)己烷亞基二亞甲基)酯；雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯，或按照IUPAC的命名法其名稱為名稱是雙[N-(p-胍基芐基甘氨?；?-(N)-(α)-羧酸-1，1′-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；和雙[4-(4-胍基苯乙酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
一般來說，本發(fā)明化合物可用常規(guī)技術(shù)和試劑合成。要注意的是多種基團(tuán)，X1，X2，X3，X4和X5中的兩個基團(tuán)之間的鍵，這包括碳連接于酰胺或氨基甲酸酯的氮，連接于氨基甲酸酯或脲的氧，或連接于羰基的碳。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員都知道形成這些鍵的方法和試劑是已知的，并且是容易得到的。參見例如March，Advaned Organic Chemistry，第4版(Wiley，1992)；Larock，Comprehensive OrganicTransformation(VCH1989)和Furniss等人，Vogel′s Textbook ofPractical Organic Chemisty，第5版(Longman 1989)，這些都引用作為本申請的參考。還應(yīng)該理解的是，所存在的任一官能基團(tuán)都可能需要保護(hù)，并且在合成本發(fā)明化合物的不同階段將其脫保護(hù)。本領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員知道這些技術(shù)也是已知的(參見例如Green和Wats，ProtectiveGroups in Organic Chemisty，Wiley，1991，也引用作為本申請的參考)。
本發(fā)明化合物包括的各種基團(tuán)X1，X2，X3，X4和X5可以單個的組合起來，或者將它們進(jìn)行更大的組合。例如，X3是亞甲基和X4是-NHC(O)O-的化合物可用下述方法制備先使適當(dāng)?shù)沫h(huán)烷二醇(如順式-1，5-環(huán)辛二醇，反式-1，4-環(huán)己烷亞基二甲醇等)與過量的適當(dāng)?shù)漠惽杌宜狨シ磻?yīng)以形成當(dāng)n5為0時X4和X5或Y之間的甲酰氧鍵，水解后得到相應(yīng)的二酸，然后使此二酸與適當(dāng)保護(hù)的胺(例如4-叔丁氧羰基氨基芐基胺等)在有適當(dāng)偶合劑存在下進(jìn)行反應(yīng)。
另外，將適當(dāng)?shù)沫h(huán)烷二醇用光氣處理轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的二(氯代甲酸酯)，使其與適當(dāng)?shù)囊槐Ｗo(hù)的二胺反應(yīng)，形成當(dāng)n5為0時X3和X5或Y之間的甲酰氧鍵，脫保護(hù)得到帶有二個反應(yīng)活性胺的中間體，使未保護(hù)的中間體與適當(dāng)保護(hù)的異氰酸酯(例如4-叔丁氧羰基氨基苯基甲基異氰酸酯等)反應(yīng)，脫保護(hù)，并進(jìn)行任何必要的后續(xù)反應(yīng)步驟(例如將氨基苯基轉(zhuǎn)化為胍基苯基)。X2中是-C(O)-的本發(fā)明化合物也可通過上述反應(yīng)制備，但是應(yīng)使未保護(hù)的中間體與適當(dāng)?shù)聂人?例如4-氨基苯甲酸，4-氨基甲基苯甲酸等)進(jìn)行反應(yīng)。其中Z是胍基取代時的本發(fā)明化合物可由相應(yīng)的二(胺)與氨基氰胺反應(yīng)制備。其中Z是脒基取代的本發(fā)明化合物可由相應(yīng)的二(腈)與氯化氫和乙醇反應(yīng)，接著與氨接觸來制備。這里和前述段落所述反應(yīng)步驟可用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行。
本發(fā)明提供了下式的不對稱化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和其前藥R2-Y-R3其中R2和R3獨(dú)立的是Z-X1-X2-X3-X4-X5-，其中Z是氨基、胍基或脒基；
Y是選擇取代的環(huán)(C3-14)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-14)亞烷基；X1是選擇取代的(C3-6)亞烷基，選擇取代的氧雜(C4-6)亞烷基或-X6-X7-X8-(其中X7是選擇取代的亞苯基，選擇取代的環(huán)(C3-6)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-6)亞烷基，以及X6和X8分別是選擇取代的(Cn6)亞烷基和選擇取代的雜環(huán)(Cn8)亞烷基，其中n6和n8的和等于1、2、3或4，條件是當(dāng)Z是氨基時n6不是0)；X2和X4各自獨(dú)立的是-C(O)-，-C(O)O-，-OC(O)-，-C(O)N(R1)-，-N(R1)C(O)-，-OC(O)N(R1)-，-N(R1)C(O)O-，-N(R1)C(O)N(R1)-，或-OC(O)O-，(其中R1各自獨(dú)立的是氫、選擇取代的(C1-8)烷基或選擇取代的環(huán)(C3-8)烷基)；X3是選擇取代的(C1-8)亞烷基，-X9-X10或-X10-X9-(其中X9是選擇取代的(Cn9)亞烷基，其中的n9是0、1或2，X10是選擇取代的環(huán)(C3-8)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-8)亞烷基，條件是在X10含有的雜原子和X2或X4含有的雜原子之間不能出現(xiàn)共價鍵)；X5是選擇取代的(Cn5)亞烷基，其中n5是0、1或2；條件是R2和R3是不同的。
本發(fā)明的不對稱化合物可按照上文所述制備本發(fā)明對稱化合物的類似方法制備，但是要獨(dú)立地引入各種X1、X2、X3、X4和X5基團(tuán)。例如，其中-X4-X5或R2和R3是相同的，以及R2的Z-X1-X2-X3-和R3是不同的本發(fā)明化合物通過下述方式制備將適當(dāng)?shù)沫h(huán)烷二醇轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的雙(氯代甲酸酯)，將其與1摩爾當(dāng)量的適當(dāng)一保護(hù)的二胺反應(yīng)得到相應(yīng)的單氯代甲酸酯，將其與適當(dāng)?shù)囊槐Ｗo(hù)二胺反應(yīng)得到式P-X4-X5-Y-X5-X4-P′化合物，其中P和P′是化學(xué)上不同的保護(hù)基團(tuán)(例如叔丁氧羰基和芐基)，正交地(Orthogonally)去除一個或其它保護(hù)基團(tuán)，然后按上述制備本發(fā)明對稱化合物的方法進(jìn)行。適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)和選擇性脫保護(hù)的方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員知道可以用類似方法制備其中R2和R3的Z、X1、X2、X3、X4和X5各自不同的本發(fā)明不對稱化合物。
在某些情況下，X3選自雜環(huán)烷亞基和取代的雜環(huán)烷亞基，例如哌嗪、均哌嗪(homopepetazine)和羥基哌啶。這些基團(tuán)可以類似的方法單個的引入，或者用常規(guī)的已知合成技術(shù)，如上述March，Larock ofFurniss中所述的方法由適當(dāng)?shù)墓倌芑瘉喭榛谠幰搿?br> 本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員可以理解的是連接基團(tuán)-X1-X2-X3-X4-和它們的各種亞型基團(tuán)可以用本領(lǐng)域已知技術(shù)形成，或用本申請列出的與實施例類似的方法制備。還可以理解的是氨基酸提供了構(gòu)成各種包括連接基團(tuán)-X1-X2-X3-X4-在內(nèi)的官能團(tuán)的結(jié)構(gòu)單元。
本發(fā)明使用的氨基酸包括20種天然存在的L-氨基酸及其D-對映異構(gòu)體，以及它們的衍生物。氨基酸衍生物包括例如正纈氨酸、肌氨酸、羥基脯氨酸、N-甲基-L1-亮氨酸、氨基異丁酸、抑制素(Statine)、γ-羧基谷氨酸、絲氨酸-O-磷酸酯、色氨酸-O-磷酸酯、色氨酸-O-硫酸酯、焦谷氨酸和4-(E)-丁烯基-(R)-甲基-N-甲基-L-蘇氨酸。其它氨基酸衍生物包括天然的L-和非天然的D-氨基酸，其中的側(cè)鏈官能團(tuán)被衍生化或者用常用的保護(hù)基如叔丁氧羰基(BOC)保護(hù)起來。很多其它的非天然氨基酸是已知的并且是由業(yè)來源可以獲得的，例如由Alarin Chemical Co.，Milwankee，WI或者Sigma Chemical Co.，圣路易斯，密蘇里州。這些材料包括β-丙氨酸和更長烷基鏈的同系物，1-氨基-1-環(huán)丙烷羧酸和更長烷基鏈的同系物，2-氨基-2-降冰片烯羧酸和異哌啶甲酸。用于合成、純化和鑒定這些化合物的技術(shù)和方法是已知的，并且在例如Synthetic PeptideAPractice Approach，Atherton等人編輯(IRL Press，1989)中描述，此書也引用作為本申請參考。
本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員可以理解的是本發(fā)明化合物可以從幾種不同的合成方案衍生得到。例如，N-叔丁氧羰基-4-氨基芐基異氰酸酯或N，N′-雙叔丁氧羰基-4-胍基芐基異氰酸酯與適當(dāng)?shù)囊槐Ｗo(hù)烷基二胺或氨基烷醇反應(yīng)給出適當(dāng)?shù)闹虚g體，用該中間體以與上述類似的方法可制備本發(fā)明化合物。
本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員還可以理解的是本發(fā)明化合物可以轉(zhuǎn)化成其前藥衍生物。適當(dāng)?shù)那八幙捎檬?T-X1-X2-X3-X4-X5)2Y表示，其中各個X1、X2、X3、X4和X5如在發(fā)明綜述中所定義，T是-NHR4、-C(NHR4)(NR4)或-NHC(NHR4)(NHR4)，其中R4是-C(O)OCH(R5)OC(O)R6，以及R5和R6獨(dú)立地是(C1-10)烷基或環(huán)(C3-8)烷基。類似的，適當(dāng)?shù)那八幰部梢允絉7-Y-R8表示，其中R7和R8各自獨(dú)立地是T-X1-X2-X3-X4-X5-，其中T、X1、X2、X3、X4和X5如上文定義，條件是R7和R8不相同。本發(fā)明化合物的前藥可用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法制備(參見Saulnier等人，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters，41985(1994))。例如，適當(dāng)?shù)那八幙捎帽景l(fā)明非衍生化合物與適當(dāng)?shù)陌被柞；噭┓磻?yīng)(例如，1，1-酰氧基烷基氯化碳(Carbonochloridate)，對硝基苯基碳酸酯等)。
根據(jù)本發(fā)明化合物官能團(tuán)性質(zhì)不同，可以與多種無機(jī)或有機(jī)酸或堿形成加成鹽。典型的無機(jī)酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；典型的有機(jī)酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸等等。
也可以由羧酸殘余物用堿金屬或堿金屬堿例如堿金屬氫氧化物或堿金屬醇鹽處理而形成鹽，或者用堿土金屬或堿土金屬堿例如堿土金屬氫氧化物或堿土金屬醇鹽處理而形成鹽。另外，也可以由羧酸和有機(jī)堿如三乙胺、二乙胺、乙醇胺、哌啶、異丙胺、膽堿、咖啡堿等等形成鹽。
這些鹽可用常規(guī)方法形成，例如使產(chǎn)品的游離酸或堿形成與一當(dāng)量或更多的適當(dāng)堿或酸在該鹽不溶的溶劑或介質(zhì)中進(jìn)行反應(yīng)，或在一溶劑如水中反應(yīng)，然后將其真空除去，或冷凍干燥，或用適當(dāng)?shù)碾x子交換樹脂使鹽上的陽離子交換成另一種陽離子。III.體外和體內(nèi)試驗篩選有效抑制劑抑制類胰蛋白酶的能力的體外試驗方法是本領(lǐng)域中已知的。參見例如Sturzebecher等人，(1992)Biol.Chem.Hoppe-seyler，3731025-1030。具體地說，這些試驗測試了類胰蛋白酶誘導(dǎo)的肽基生色物質(zhì)的水解。舉例說明的方法在下文詳細(xì)描述。
此外，本發(fā)明化合物的活性也可以用哮喘的各種動物模型之一的體內(nèi)試驗進(jìn)行評價。參見Larxon，“Experimental Models of ReversibleAirway Obstruction”，in the LungScientific Fundations，Crystal，West等人編輯，Reven Press，紐約，1991；Warner等人(1990)，Am.Rev.Respir.Dis.，141253-257。理想的動物模型應(yīng)該重復(fù)人類哮喘的主要臨床和生理學(xué)特征，這包括氣道對化學(xué)介體和物理刺激的應(yīng)答過強(qiáng)；對人的哮喘有用的藥物使氣道阻礙逆轉(zhuǎn)(β-明上腺素能、甲基占噸、皮質(zhì)類固醇等)；有滲入活化白細(xì)胞的氣道炎病和慢性炎性退行性改變，如基礎(chǔ)膜增厚、平滑肌過度生長和上皮損傷。用作動物模型的動物種類包括小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗和羊。所有的動物模型都有一定的限制，因此要根據(jù)所需說明的問題適當(dāng)選擇動物模型。
初始的哮喘應(yīng)答可以用豚鼠和狗來評價，特別是用basenji-greyhound cross strain，它可以用來研究對多種非特應(yīng)性物質(zhì)如甲基膽堿和檸檬酸氣道的非特異性應(yīng)答過強(qiáng)。一些經(jīng)過選擇的羊在用Ascaris蛋白進(jìn)行抗體刺激之后可顯示出雙重反應(yīng)。在雙重反應(yīng)動物中，在接觸后6-8小時，初始哮喘反應(yīng)(LAR)之后是后期哮喘反應(yīng)(LAR)。在這些顯示LAR動物用抗體激發(fā)后24小時，對膽堿能激動劑卡巴可的過敏增加。
變應(yīng)性羊模型(見下文)用于評價本發(fā)明化合物抗哮喘作用的潛在效能。在接觸特定的變應(yīng)原之前或之后以口服和吸入劑或氣霧劑劑型給變應(yīng)性羊施用含有本發(fā)明化合物的組合物，結(jié)果表明這些組合物實質(zhì)上減少或消除了后期哮喘反應(yīng)和必然產(chǎn)生的應(yīng)答過強(qiáng)。
本發(fā)明化合物也用于治療其它免疫介導(dǎo)的炎性疾病，在這些疾病中是類胰蛋白酶造成了它們的病理癥狀。這些疾病包括與肥大細(xì)胞有關(guān)的炎性疾病，例如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、結(jié)膜炎、類風(fēng)濕脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、病風(fēng)關(guān)節(jié)炎和其它關(guān)節(jié)病，炎性腸疾病，消化性潰瘍和各種皮膚病。另外，本發(fā)明化合物還可用于治療合胞體病毒感染。
本發(fā)明化合物用于治療大多數(shù)免疫介導(dǎo)的炎性疾病的效能可以用體外或體內(nèi)二種方法評價。因此，本發(fā)明化合物的抗炎效果可用本領(lǐng)域已知的試驗證明，例如應(yīng)用反相被動Arthus反應(yīng)(RPAR)-PAW技術(shù)(參見例如Gangly等人，(1992)，USP5,126,352)。確定本發(fā)明化合物治療各種皮膚病如增生性皮膚病的治療價值的試驗是本領(lǐng)域已知的，例如花生四烯酸小鼠Ear試驗。按照Chiu等人(1984)在ArchivesInternationales de Pharmacodynamie et de Therapie，270128-140中所描述的方法可以評價本發(fā)明化合物的抗?jié)兓钚浴?br> 本發(fā)明化合物在阻斷由合胞體病毒感染引起的細(xì)胞溶合方面的效能可由Tidwell等人于J.Med.Chem.，26(294-298)1983中所確定的一般方法來評價。IV.體內(nèi)給藥按照本發(fā)明，給患有免疫介導(dǎo)的炎性疾病的患者施用治療學(xué)或藥學(xué)上有效的本發(fā)明化合物。按照一個實施方案，本發(fā)明的組合物可用于預(yù)防和改善哮喘。在為了治療哮喘而使用本發(fā)明組合物時，可在接觸變應(yīng)原或其它誘發(fā)因素之前預(yù)防性地施用本發(fā)明化合物，或者在接觸之后施用。特別是把本發(fā)明化合物用于改善季節(jié)性的和常年的鼻炎均會出現(xiàn)的后期組織破壞。本發(fā)明的另一方面是關(guān)于預(yù)防和治療與肥大細(xì)胞有關(guān)的，免疫介導(dǎo)的疾病，如蕁麻疹和血管性水腫，和濕疹性皮膚病(變應(yīng)性皮膚病)，和過敏反應(yīng)，以及增生性皮膚病，消化性潰瘍等等。本發(fā)明的另一方面是將本發(fā)明化合物用于治療合胞體病毒感染，特別是呼吸道合胞體病毒感染。
可施用含有化合物的本發(fā)明組合物以進(jìn)行治療性和/或預(yù)防性處理。在治療應(yīng)用中，對已患有疾病的患者按上文所述施用該組合物，其用量足以能夠治療或者至少能部分緩解疾病和其并發(fā)病的癥狀。適當(dāng)?shù)牧慷x為“治療有效量或劑量”。這里所用的有效量取決于疾病的嚴(yán)重程度和病程，前面的治療，患者的健康狀況和對藥物的反應(yīng)，以及治療醫(yī)生的診斷。
在預(yù)防應(yīng)用中，對特定疾病敏感的或有患特定疾病的危險性的患者施用足以能預(yù)防或改善癥狀發(fā)作狀況的含有本發(fā)明化合物的組合物。這個量定義為“預(yù)防有效量或劑量”。它們可以口服或吸入的方式施用。確切的量取決于患者的健康狀況、體重等。
當(dāng)患者的癥狀開始得到改善后，必須施用以維持劑量。其結(jié)果是，與癥狀相關(guān)的施用的劑量或者頻率，或者兩者都可以減少，其水平可減少到能維持癥狀改善的狀況。當(dāng)癥狀也緩解到所要求的水平時可以停止治療。但是，對長期治療而言，根據(jù)再出現(xiàn)的任何疾病癥狀患者可要求間歇性治療。
一般來說，本發(fā)明化合物適當(dāng)?shù)挠行┝渴窃诿總€受試者每天0.05-1000mg的范圍內(nèi)，優(yōu)選每天0.1-100mg。優(yōu)選在一整天中以適當(dāng)?shù)拈g隔把所需劑量以一次、二次、三次、四次或多次亞劑量施用，這些亞劑量可以單位劑量形式施用，如每單位劑量含0.01-1000mg，優(yōu)選0.01-100mg活性成分。
在這些治療中使用的組合物可以是多種形式。這包括固體、半固體和液體劑型，如片劑、丸劑、粉劑、液體溶劑或懸浮劑、微脂粒、可注射和輸注的溶液。可吸入的制劑，例如氣霧劑也包括在內(nèi)。優(yōu)選的劑型是能直接口服、鼻內(nèi)給藥、局部和非經(jīng)腸道應(yīng)用的形式，但可以理解的是優(yōu)選的形式取決于當(dāng)時具體地治療應(yīng)用方式。含有本發(fā)明化合物的組合物的制劑和制備的方法是在領(lǐng)域已知的，例如在Remington′s Phar-maceutical Sciences and The Merck Index，第11版(Merck & Co.，1989)已有描述。
本發(fā)明的活性組分可以單獨(dú)使用，優(yōu)選活性組分作為藥物制劑的一部分。本發(fā)明的制劑為和藥學(xué)上可接受的載體一起，至少含有一種以治療學(xué)或藥學(xué)上為有效劑量的本申請所述化合物。藥物組合物中本發(fā)明化合物的濃度是足以能釋放出適宜的劑量。例如當(dāng)適宜的劑量是每天0.05mg時，藥物組合物中本發(fā)明化合物的濃度為每劑量0.5mg，每天使用1劑時。對于吸入劑或氣霧劑組合物，組合物中本發(fā)明化合物的濃度一般取決于每劑量的量。吸入劑或氣霧劑組合物中本發(fā)明化合物的典型濃度是由大約0.01至大約30 mg/ml。在制劑中還可含有其它臨床應(yīng)用的化合物，例如β-腎上腺素能(如舒喘靈、特普他林、formoteral、吩丙喘寧和prenaline)和皮質(zhì)類固醇(如倍氯米松、去炎松、flurisolide和三甲基醋酸地塞米松)。
實施例下面的實施例僅用于說明而不以任何方式限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。一般材料與方法用本領(lǐng)域熟知的方法合成本文描述的化合物，例如在March，Advanced Organic Chemistry(Wiley，1992)；Larock，ComprehensiveOrganic Transformation(VCH，1989)和Furniss等人，Vogel′s TextbookofPractical Organic Chemistry，第5版，(Longman，1989)中所描述的，所列的每本書都引用作為本申請的參考?？梢岳斫獾氖?，本文所述的合成要求一個或多個保護(hù)和脫保護(hù)步驟，相應(yīng)地，雖然沒有特別地說明，本申請的方法中必須使用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基。除本文所述此外，這些保護(hù)和脫保護(hù)步驟可用標(biāo)準(zhǔn)方法完成，例如在Wats，Protective Groups in OrganicSynthesis(Wiley，1991)中所述，此書也引用作為本申請的參考。
如果需要，本文所述化合物和中間體的分離和純化可以任何適宜的分離或純化步方法進(jìn)行，例如，過濾、萃取、結(jié)晶、柱色譜、薄層色譜或厚層色譜、易壓液相色譜(HPLC)，或者把這些方法結(jié)合使用。對適宜分離或純化方法的具體說明可參見下文的實施例。但是，當(dāng)然也可以使用其它相當(dāng)?shù)姆蛛x(Separation or isolation)方法。
核磁共振(NMR)波譜用General Electric“QE Plus”儀(300 MHz)測定。紅外(IR)光譜用Perkin-Elmer 1600付里葉變換紅外(FTIR)測定。分析用HPLE用Ultrafast Microprotein Analyzer，Michrom BioResourcesInc.，測定，配備有PLRP或C18柱，1mm×150mm。制備HPLC用GilsonLC進(jìn)行，使用VYDAC1×25cm C18反相柱(RP)或Waters，LC2000系統(tǒng)制備色譜，使用Vydac5×25cm C18RP柱。質(zhì)譜(MS)用FinniganSSQ710測定，以ESI源，直接輸入，或者用HPLC MS(UltrafastMicroprotein Analyzer，C18柱，2mm×150mm)。
除非另有說明，所有的試劑和設(shè)備或者是按已公開的方法制備，或者由商業(yè)渠道購買，如購自Aldrich Chemical Co.(Milwaukee，WI)，SigmaChemical Co.，(St.Louis，MO)和ICN Chemical Co.，(Irvine，CA)。下文所述合成中采用的技術(shù)是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所知常規(guī)技術(shù)(參見例如上文所述March，Larock或Furniss的著作)。
下面非限制性實施例用于說明本發(fā)明，本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員知道在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以進(jìn)行某些變化和修改。
實施例1雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯(化合物1)下面的實施例描述了本發(fā)明下述化合物的制備Z是胍基，X1是-X6-X7-X8，n6是0，n8是1和X7是1，4-亞苯基；X2是-NH-C(O)-；X3是亞甲基；X4是-NHC(O)O-；和Y是反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基。
雙(乙氧基羰基甲基氨基羧酸)-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯在反式-1，4-環(huán)己二醇(482mg，3.34mmol)的DMF(5ml)溶液中加入氯化銅(I)(99mg，1.0mmol)，接著加入異氰酸基乙酸乙酯(800μl，7.13mmol)，將得到的懸浮液在室溫攪拌12小時。在混合物中加入水(25ml)和二氯甲烷(25ml)，水相用另外的二氯甲烷(25ml)萃取，合并的有機(jī)相先用水(2×25ml)，再用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮和真空干燥得到雙[(甘氨酸乙酯)-(N)-(α)-羧酸]-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯(1.19g，89％)，為無色固體。1H-NMR(300MHz，CDC13)7.42(tr，2H)，4.15(q，4H)，3.75(d，4H)，3.70(d，4H)，1.80-1.60(m，4H)，1.55-1.40(m，2H)，1.15(tr，6H)，1.00-0.80(m，4H).
雙(乙氧基羰基甲基氨基羧酸)-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯在雙(N-甲氧基羰基甘氨酸)-反式-1，4-環(huán)己烷亞基基酯(1.19g，2.96mmol)的四氫呋喃∶甲醇3∶1(25ml)的溶液中加入氫氧化鈉水溶液(1.6M，6ml，9.7mmol)，混合物于室溫攪拌12小時，將水溶液濃縮，通過滴加濃鹽酸水溶液使溶液酸化至pH＝1得到白色沉淀，過濾和真空干燥得到雙(N-甲氧基羰基甘氨酸)-反式-1，4-環(huán)己烷亞基酯，為無色固體。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)12.50(s，2H)，7.30(tr，2H)，3.75(d，4H)，3.60(d，4H)，1.80-1.60(m，4H)，1.55-1.50(m，2H)，1.00-0.80(m，4H).
雙(4-氨基芐基氨基甲?；谆被人?-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯
0℃下把雙(N-甲氧基羰基甘氨酸)-反式-1，4-環(huán)己烷亞基基酯(306mg，0.88mmol)、羥基苯并三唑水合物(260mg，1.92mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺氫氯化物(360mg，1.88mmol)溶于DMF(5ml)，把得到的溶液攪拌1小時。然后在混合物中加入4-氨基苯甲酰胺(300μl，2.64mmol)，接著溫?zé)嶂潦覝?，再攪?2小時。真空去除DMF，接著加入水(25ml)，過濾出不溶物，真空干燥得到所需的苯胺，為棕色固體。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)8.10(tr，2H)，7.20(tr，2H)，6.90(d，4H)，6.50(d，4H)，5.40(br s，2H)，4.05(d，4H)，3.75(d，4H)，3.55(d，4H)，1.80-1.60(m，4H)，1.50-1.40(m，2H)，1.00-0.80(m，4H).
雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯(化合物1)把雙(4-氨基芐基氨基甲?；谆被人?-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯(87mg，0.16mmol)和氰胺(0.5g，11.9mmol)在60℃加熱得到無色溶液，接著再加入鹽酸(4M，在二惡烷中，160μl，0.64mmol)，得到的黃色液體在60℃攪拌1.5小時，接著冷卻至室溫。加入乙醚(25ml)后得到不溶的黃色油，將其用另外的乙醚(3×25ml)重復(fù)洗滌去除殘余的氰胺，接著真空干燥。接著將黃色油溶于水中并用制備反相HPLC純化得到雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯(化合物1)的雙三氟乙酸鹽，為無色固體。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)9.80(s，2H)，8.40(tr，2H)，7.20(tr，2H)，7.40(s，8H)，7.30(d，4H)，7.10(d，4H)，4.25(d，4H)，3.75(d，4H)，3.60(d，4H)，1.80-1.60(m，4H)，1.55-1.40(m，2H)，1.00-0.85(m，4H).
Electrospray LRMSCalculated for C30H42N10O6MH+639.7；MH2+2/2320.4 FoundMH+639.1；MH2+2/2319.8
按照實施例1所述類似的方式，但是代之以不同的起始原料制備出下述化合物雙{4-[3-(1-脒基哌啶-4-基)丙?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物5)，Electrospray LRMSC36H64N8O6的計算值MH+731；測定值MH+730.7；雙{4-[3-(4-脒基苯基)丙酰基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物6)，Electrospray(電噴射)LRMSC38H52N8O6的計算值MH+716.9；測定值MH+717.9；雙{[4-(1-脒基哌啶-4-基)乙酰基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物7)，1H-NMR(30MHz，DMSO-d6)7.2(m，8H)，4.6(s，2H)，3.8(d，8H)，3.4(m，16H)，2.9(t，4H)，2.3(s，4H)，1.9(m，2H)，1.6(m，10H)，1.1(m，4H).
實施例2雙[(N-(4-胍基芐基氨基甲酰基甲基氨基羧酸)]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物2)下面的實施例描述了本發(fā)明下述化合物的制備Z是胍基，X1是-X6-X7-X8，n6是0，n8是1和X7是1，4-亞苯基；X2是-NH-C(O)-；X3是亞甲基；X4是-NHC(O)O-；和Y是順式-1，5-亞環(huán)辛基。
雙(乙氧基羰基甲基氨基羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯在順式-1，5-環(huán)辛二醇(514mg，3.56mmol)的DMF(5ml)溶液中加入氯化銅(I)(110mg，1.1mmol)，接著加入異氰酸基乙酸乙酯(850μl，7.6mmol)，將得到的懸浮液在室溫攪拌12小時。在混合物中加入水(25ml)和二氯甲烷(25ml)，水相用另外的二氯甲烷(25ml)萃取，合并的有機(jī)相先用水(2×25ml)，再用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮和真空干燥得到雙(乙氧基羰基甲基氨基羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯，為無色油。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.40(tr，2H)，4.60(m，2H)，4.05(q，4H)，3.65(d，4H)，1.80-1.40(m，12H)，1.15(tr，6H).
雙(N-甲氧基羰基甘氨酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯在雙(乙氧基羰基甲基氨基羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(1.26g，3.1mmol)的四氫呋喃∶甲醇3∶1(25ml)的溶液中加入氫氧化鈉水溶液(1.6M，6ml，9.4mmol)，混合物于室溫攪拌12小時，濃縮后通過滴加濃鹽酸水溶液使溶液酸化至pH1，并用乙酸乙酯(3×25ml)萃取該水溶液得到粗制的二酸。用無水硫酸鎂干燥合并的有機(jī)相，然后過濾和真空濃縮得到雙(N-甲氧基羰基甘氨酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯，為無色油。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.25(tr，2H)，4.60(m，2H)，3.60(d，4H)，1.80-1.40(m，12H).
雙(4-胍基芐基氨基甲酰基甲基氨基羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物2)把雙(N-甲氧基羰基甘氨酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(64mg，0.19mmol)的二甲基甲酰胺溶液冷卻至0℃，先加入羥基苯并三唑水合物(61mg，0.45mmol)，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺氫氯化物(76mg，0.40mmol)。把得到的溶液于0℃攪拌1小時，然后用套管將其加入到冷卻至0℃的、含有4-胍基苯基甲胺二三氟乙酸鹽(290mg，0.74mmol)和三乙胺(500μl，3.6mmol)于二甲基甲酰胺(2m)的漿液中，然后使其在12小時內(nèi)緩慢溫?zé)嶂潦覝兀又婵諠饪s。將殘余物溶于水(10ml)，滴加飽和碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH至11-12，潷析含水液收集不溶物，把不溶物再加回到用濃鹽酸溶液將pH值酸化到1-2的含水液中。將此物料用制備反相HPLC純化得到雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物2)二(三氟乙酸)鹽，為無色油。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)9.80(s，2H)，8.40(tr，2H)，7.40(s，8H)，7.25(d，4H)，7.20(tr，2H)，7.10(d，4H)，4.60(m，2H)，4.25(d，4H)，3.60(d，4H)，1.80-1.40(m，12H).Electrospray LRMSCalculated for C30H42N10O6MH+639.7；MH2+2/2320.4FoundMH+639.1；MH2+2/2319.84-胍基芐基胺二(三氟乙酸)鹽把4-氨基芐基胺(11.0g，90mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液冷卻至0℃，并在溶液中加入二碳酸二叔丁酯(18.65g，85mmol)，使混合物在12小時內(nèi)緩慢溫?zé)嶂潦覝?，過濾后先用飽和氯化銨的二氯甲烷溶液，再用飽和氯化鈉的二氯甲烷溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮后得到4-氨基-N-叔丁基羰基芐基胺黃色油。將此苯胺的甲醇溶液用鹽酸的二惡烷溶液(1當(dāng)量)酸化，在酸溶液中加入乙醚結(jié)晶出鹽酸鹽。過濾和真空干燥得到鹽酸鹽，為黃色結(jié)晶固體，此產(chǎn)品無須進(jìn)一步純化可進(jìn)行胍基化。
把4-氨基-N-叔丁氧基羰基芐基胺氫氯化物(25.77g，99.6mmol)和氰胺(55g，1.3mol)在65℃加熱1.5小時，然后把混合物冷卻至室溫并加入乙醚(250ml)。將得到不溶黃色油將其用另外的乙醚重復(fù)洗滌的以去除痕量的氰胺，真空干燥得到4-胍基-N-叔丁氧基芐基胺氫氯化物，為無定形的黃色物質(zhì)，無須進(jìn)一步純化即可使用。
把4-胍基-N-叔丁氧基羰基芐基胺氫氯化物(14.4g，48mmol)溶于三氟乙酸(35ml)，攪拌得到的黃色溶液30分鐘，濃縮和真空干燥得到4-胍基芐基胺二(三氟乙酸)鹽黃色油。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)10.25(s，1H)，8.40(br s，3H)，7.65(br s，4H)，7.50(d，2H)，7.25(d，2H)，4.00(d，2H).
實施例3雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)下面的實施例描述了本發(fā)明下述化合物的制備Z是胍基，X1是-X6-X7-X8，n6是0，n8是1和X7是1，4-亞苯基；X2是-NH-C(O)-；X3是1，4-亞哌嗪基；X4是-C(O)O-；和Y是-順式-1，5-亞環(huán)辛基。
方法A順式-1，5-環(huán)辛二醇二(氯甲酸)鹽把順式-1，5-環(huán)辛二醇(3.05g，21.2mmol)加入到光氣的甲苯溶液(1.9M，28.0ml，53mmol)中，并在氮?dú)夥罩邪鸦旌衔锢鋮s至0℃。接著用注射器加入吡啶(3.4ml，43mmol)，使得到的懸浮液在12小時內(nèi)溫?zé)嶂潦覝?。在反?yīng)混合物中加入二氯甲烷(50ml)和水(50ml)，有機(jī)層用0.1N鹽酸水溶液洗滌(2×25ml)。然后二氯甲烷溶液用無水硫酸鎂干燥，過濾和真空濃縮得到粗制的氯甲酸鹽(3.7g，產(chǎn)率65％)，為無色結(jié)晶固體。用硅膠快速色譜純化，以乙醚∶己烷1∶10為洗脫液，得到純的氯甲酸鹽無色結(jié)晶固體。1H-NMR(300MHz，CDCl3)5.00-4.85(m，2H)，2.20-1.60(m，12H).
雙[4-(叔丁氧基羰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯把順式-1，5-環(huán)辛二醇 二(氯甲酸)鹽(3.69g，13.7mmol)和二異丙基乙基胺(7.2ml，41mmol)溶于DMF(25ml)，接著加入1-哌嗪羧酸叔丁基酯(5.1.g，274mmol)，將混合物在室溫攪拌12小時。真空濃縮成半固體的殘余物，加入二氯甲烷(50ml)和水(50ml)，有機(jī)層用0.1N鹽酸水溶液洗滌(2×25ml)，得到所需氨基甲酸酯是粗制溶液。該二氯甲烷溶液用無水硫酸鎂干燥，過濾和真空濃縮得到雙[4-(叔丁氧基羰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。為無定形的固體，該固體無須進(jìn)一步純化即可使用。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)4.80(m，2H)，3.40(br s，16H)，2.00-1.40(m，12H)，1.40(s，18H).
雙(1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯二氫氯化物室溫下將上述步驟得到的雙[4-(叔丁氧基羰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯用三氟乙酸(15ml)處理，接著真空濃縮。把得到的油溶于水(30ml)并過量的固體碳酸鉀堿化。然后此二胺用二氯甲烷萃取(3×25ml)，合并的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥，過濾和濃縮得到雙(1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯無色油。將此二胺溶于甲醇(15ml)，并用鹽酸的二惡烷溶液(4.0M，5.3ml)處理，加入乙醚(250ml)。過濾收集沉淀，用乙醚洗滌，接著真空干燥得到雙(1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯二氫氯化物無色油。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)9.50(br s，4H)，4.65(m，2H)，3.60(s，8H)，3.05(s，8H)1.90-1.40(m，12H).
雙[4-((對叔丁氧基羰基氨基芐基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯將雙(1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯二氫氯化物(1.94g，4.5mmol)溶于二氯甲烷(75ml)，接著加入二異丙基乙基胺(2.0ml，11.5mmol)。然后加入4-氨基苯基甲基異氰酸叔丁基氨基甲酸酯(2.26g，9.1mmol)，將得到的混合物在室溫攪拌2小時。將此二氯甲烷溶液用0.5N鹽酸水溶液洗滌(2×50ml)，接著用無水硫酸鎂干燥和過濾，真空濃縮后用硅膠快速色譜純化，先用乙醚，再用乙酸乙酯∶乙醇10∶1作為洗脫液得到純的雙[4-((對叔丁氧基羰基氨基芐基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(3.5g，產(chǎn)率90％)，為無色泡沫體。1H-NMR(300MHz，CDCl3)7.25(dd AB，8H)，6.70(s，2H)，5.00(tr，2H)，4.80(m，2H)，4.30(d，4H)，3.45-3.30(m，16H)，2.00-1.40(m，12H)，1.50(s，18H).
雙[4-((對氨基芐基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯室溫下將雙[4-((對叔丁氧基羰基氨基芐基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(3.5g，4.0mmol)用鹽酸的二惡烷溶液(4.0M，20ml)處理，接著用乙醚(100ml)稀釋。從鹽酸鹽沉淀中小心潷析出溶劑并真空干燥得到雙[4-((對氨基芐基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯二氫氯化物，為吸濕的固體，無須純化即可使用。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)10.25(br s，6H)，7.30(dd AB，8H)，7.15(tr，2H)，4.60(m，2H)，4.20(d，4H)，3.30(s，16H)，1.80-1.40(m，12H).
雙[4-((4-胍基芐基)氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)在60-65℃把上述步驟得到的雙[4-((對氨基芐基)氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯和過量的氰胺(8.0g，190mmol)加熱1.5小時。將得到的黃色溶液冷卻至室溫并加入乙醚(250ml)。不溶的殘余物用另外的乙醚(3×100ml)洗滌，把粗制的鹽酸鹽真空干燥。然后把無定形的物料溶于水(40ml)，用紙型GV(0.22μm)Millipore過濾器過濾分散液，得到的含水濾液用制備反相HPLC純化，接著冷凍干燥得到雙[4-((4-胍基芐基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)二氫氯化物，為白色固體。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)9.70(s，2H)，7.40(s，8H)，7.20(ddAB，8H)，7.15(tr，2H)，4.65(m，2H)，4.20(d，4H)，3.30(s，16H)，1.80-1.40(m，12H).Electrospray LRMSCalculated for C36H52N12O6MH+749.9；MH2+2/2375.5FoundMH+749.9；MH2+2/2375.3[4-(叔丁氧基羰基氨基)芐基胺氫氯化物把4-氨基芐基胺(5.56g，45.6mmol)溶于水(45ml)并加入檸檬酸(9.36g，50mmol)。在上述溶液中滴加二叔丁基二碳酸酯(9.94g，45.5mmol)的二惡烷(20ml)溶液，在室溫攪拌該混合物48小時。然后過濾黃色的懸浮液，含水溶液用過量的固體碳酸鈉堿化。水溶液用乙酸乙酯萃取(3×35ml)，接著有機(jī)層用飽和氯化鈉溶液洗滌，用無水硫酸鈉干燥得到粗制的芐基胺。過濾并真空濃縮后得到白色固體，將其溶于甲醇(30ml)并用鹽酸的二惡烷溶液(4M，8.4ml，33.6mmol)酸化，再加入乙醚(100ml)，過濾得到的懸浮液，真空干燥得到[4-(叔丁氧基羰基氨基)芐基胺氫氯化物(7.2g，產(chǎn)率61％)無色固體。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)9.43(s，1H)，8.20(br s，3H)，7.40(dd AB，4H)，3.92(m，2H)，1.50(s，9H). 哌嗪二(三氟乙酸)鹽把4-胍基芐基胺二(三氟乙酸)鹽(380mg，0.97mmol)溶于DMF(2.0ml)，接著加入和二異丙基乙基胺(700μl，4.0mmol)，接著加入1-哌嗪羧酸叔丁基酯-4-氨基甲酰氯(241mg，0.97mmol)，將混合物在室溫攪拌1小時。真空濃縮得到的溶液并溶于水(5ml)。過濾得到的懸浮液，接著用過量的固體碳酸鈉堿化水溶液給出不溶的黃色油，通過由水相潷析得到該油。真空干燥并用三氟乙酸(5ml)處理15分鐘，濃縮后給出粗制的苯基胍二(三氟乙酸)鹽，為橙色油。將該鹽溶于水(5ml)，該物料用制備反相色譜純化和冷凍干燥得到1-[(4-胍基芐基)氨基甲?；鵠哌嗪二(三氟乙酸)鹽，為無定形的黃色固體。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)10.15(s，1H)，9.10(br s，2H)，7.65(s，4H)，7.40(tr，1H)，7.25(dd AB，4H)，4.25(d，2H)，3.55(m，4H)，3.10(s，4H).Electrospray LRMSCalculated for C13H20N6OMH+277.4；MH2+2/2139.2FoundMH+277.4；MH2+2/2139.3雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)把1-[(4-胍基芐基)氨基甲酰基]哌嗪二(三氟乙酸)鹽(138mg，0.27mmol)溶于DMF(1.5ml)，接著加入和二異丙基乙基胺(71.5μl，0.4mmol)和順式-1，5-環(huán)辛烷二醇二(氯甲酸)酯(36.0mg，0.14mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌12小時和真空濃縮。將無定形的殘余物溶于水(5ml)，該物料用制備反相色譜純化和冷凍干燥得到雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)灰白色固體。
方法CN-叔丁基-N′-氨基芐基脲氫氯化物把4-氨基芐基胺(50.34g，0.412mol)的二氯甲烷(200ml)溶液置于配備有機(jī)械攪拌裝置的1升三頸園底燒瓶中，并把溶液冷卻至0℃。用30分鐘時間滴加二叔丁基二碳酸酯(89.9g，0.412mol)的二氯甲烷(200ml)溶液，得到的懸浮液在0℃攪拌2小時，此時得到一幾乎是均相的溶液。然后該二氯甲烷溶液先氫氧化鈉水溶液(1.0M，500ml)，再用水(500ml)洗滌，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾和真空濃縮得到4-氨基-N-叔丁基氨基甲酰基芐基胺黃色油。然后將該苯胺溶于乙醚∶甲醇(2∶1，225ml)，使溶液冷卻至0℃。用鹽酸的二惡烷溶液(4.0M，115ml，0.412mmol)酸化，再加入乙醚(200ml)得到淺黃色粗沉淀。過濾和用乙醚(500ml)洗滌，真空干燥得到N-叔丁基-N′-氨基芐基脲氫氯化物(100.23g，產(chǎn)率94％)，為淺黃色固體。無須進(jìn)一步純化即可使用。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)10.40-10.20(br s，3H)7.40(tr，1H)，7.30(s，4H)，4.10(d，2H)，1.40(s，9H).
N-叔丁基-N-4-胍基芐基脲把氰胺(100g，2.4mol)置于500毫升園底燒瓶中并加熱至60-65℃直到物料完全熔化為止。然后把N-叔丁基-N′-氨基芐基脲氫氯化物(25.3g，97.8mmol)直接加入到液體氰胺中，得到的黃色混合物在60-65℃再加熱2小時。在溶液中加水(100ml)后使溶液冷卻至室溫。水溶液用乙醚(1L)洗滌，接著有機(jī)相用水(2×100ml)反萃。合并的有機(jī)層再用乙醚(500ml)洗滌，水溶液在冰水浴中冷卻和用氫氧化鈉水溶液(10M，100ml)堿化，得到的不溶的油緩慢的結(jié)晶，過濾收集，物料用水洗滌和真空干燥得到N-叔丁基-N-4-胍基芐基脲(18.3g，產(chǎn)率70.8％)，為無色結(jié)晶固體。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)9.70(s，1H)，7.42(tr，1H)，7.40(s，4H)，7.25(d，2H)，7.15(d，2H)，4.10(d，2H)，1.40(s，9H).
4-氯羰基-1-哌嗪羧酸叔丁基酯把三光氣(25g，85.2mmol)溶于二氯甲烷(200ml)并使得到的溶液冷卻至0℃。然后在三光氣溶液中滴加1-哌嗪羧酸叔丁基酯(40g，214.8mmol)和吡啶(35ml，432.7mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液，使得到的反應(yīng)混合物在30分鐘內(nèi)溫?zé)嶂潦覝亍Ｔ诨旌衔镏屑尤臌}酸水溶液(0.1N，200ml)使反應(yīng)停止，水相用二氯甲烷(50ml)洗滌，合并的有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥，過濾和真空濃縮得到4-氯羰基-1-哌嗪羧酸叔丁基酯(45.6mg，產(chǎn)率85％)黃色固體，無須進(jìn)一步純化即可使用。該物料可以用乙醚/己烷進(jìn)一步結(jié)晶純化。1H-NMR(300MHz，CDCl33.70(m，2H)，3.60(m，2H)，3.50(m，4H)，1.50(s，9H).
4-胍基芐基氨基甲?；?1-哌嗪羧酸叔丁基酯三氟乙酸鹽室溫下將N-叔丁基-N-4-胍基芐基脲(41.77g，0.158mol)用三氟乙酸(100ml)處理30分鐘，把所得到的幾乎無色的溶液于5℃真空濃縮，然后然后用乙醚(3×400ml)研磨和真空干燥成無色泡沫體。在殘余物中先加入甲醇(200ml)，再加入二異丙基乙基胺(55ml，0.32mol，以存在過量的TFA為基礎(chǔ))并使溶液冷卻至0℃。在反應(yīng)混合物中加入接著加入1-哌嗪羧酸叔丁基酯-4-氨基甲酰氯(39.3g，0.158mol)的二氯甲烷(120ml)溶液，再加入二異丙基乙基胺(30ml)，使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?2小時。真空濃縮成橙色油，接著加水(200ml)，過濾收集得到的粗沉淀。用乙腈/乙醚重結(jié)晶粗制的胍TFA鹽得到4-胍基芐基氨基甲?；?1-哌嗪羧酸叔丁基酯三氟乙酸鹽(62.0mg，產(chǎn)率80％)的淺黃色固體。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)10.15(s，1H)，9.10(br s，2H)，7.65(s，4H)，7.40(tr，1H)，7.25(dd AB，4H)，4.25(d，2H)，3.55(m，4H)，3.10(s，4H).Electrospray LRMSCalculated for C13H20N6OMH+277.4；MH2+2/2139.2 FoundMH+277.4；MH2+2/2139.3.
雙[4-(4-胍基芐基氨基羰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物3)室溫下將4-胍基芐基氨基甲?；?1-哌嗪羧酸叔丁基酯三氟乙酸鹽(50g，0.102mol)用三氟乙酸(50ml)處理15分鐘得到均相溶液，真空除去大部分的TFA給出水溶性無定形殘余物。然后將此物料溶于水(100ml)，并小心加入10M氫氧化鈉水溶液把pH調(diào)節(jié)至7.0-7.5。在上述水溶液中加入二氯甲酸順式-1，5-環(huán)亞辛基酯(13.5g，0.05mol)的THF(75ml)溶液，混合物于室溫攪拌。用標(biāo)準(zhǔn)實驗室用pH計監(jiān)測此混合物的pH，如果需要，加入10M氫氧化鈉水溶液再把pH調(diào)節(jié)至7.0-8.0。在pH值穩(wěn)定以后(大約1小時)，用反相分析HPLC確定反應(yīng)已經(jīng)完成。在幾乎是均相的溶液中加入乙醚(50nl)，接著用過量的10M氫氧化鈉水溶液堿化兩相混合物得到芳基胍游離堿白色懸浮液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去懸浮液中的大部分THF，過濾收集細(xì)沉淀。然后把糊狀粘稠固體用水洗滌一次和真空干燥得到雙[4-(4-胍基芐基氨基羰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(31mg，產(chǎn)率81％)，為白色固體(經(jīng)HPLC測定純度大于97％)。將此游離堿溶于鹽酸水溶液，過濾除去痕量的不溶物并冷凍干燥得到雙[4-(4-胍基芐基氨基羰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯氫氯化物。1H-NMR(hydrochloride salt)(300MHz，DMSO-d6)9.70(s，2H)，7.40(s，8H)，7.20(dd AB，8H)，7.15(tr，2H)，4.65(m，2H)，4.20(d，4H)，3.30(s，16H)，1.80-1.40(m，12H).E1ectrospray LRMS(hydrochloride salt)Galculated-forC36H52N12O6MH+749.9；MH2+2/2375.5FoundMH+749.9；MH2+2/2375.3.
按照實施例3，方法A所述類似的方式，但是代之以不同的起始原料制備出下述化合物雙{4-[3-(1-脒基哌啶-4-基)乙基氨基甲?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物8)，1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.4(s，8H)，6.6(s，2H)，4.6(s，2H)，3.8(d，4H)，3.6(s，8H)，3.3(s，14H)，3.0(m，20H)1.0(m，4H)；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基羰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物9)，
Electrospray LRMSC38H62N6O6的計算值MH+647.9；測定值MH+648.1；雙[4-(4-胍基苯基乙酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物10)，Electrospray LRMSC36H50N10O6的計算值MH+718.9；測定值MH+717.3；雙[4-[3-(4-胍基苯基)丙?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物11)，Electrospray LRMSC38H54N10O6的計算值MH+746.9；測定值MH+745.5；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基氨基甲?；?-1-(全氫-7-H-1，4-二吖庚因)羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物12)，Electrospray LRMSC38H68N8O6的計算值MH+734；MH2+2/2367.5，測定值MH2+2/2367.7；雙[4-(4-氨基甲基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物13)，Electrospray LRMSC36H52N8O6的計算值MH+693.9；測定值MH+693.5；雙{4-[4-(2-氨基乙基)芐基氨基甲?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物14)；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.34，7.15(d，8H)，4.64(bt，4H)，4.15(m，2H)，3.92(d，4H)，3.54(m，4H)，3.25(appd，16H)，1.73-1.47(m，12H)；Electrospray LRMSC38H56N8O6的計算值MH+721；測定值MH+721；[4-(4-氨基甲基雙環(huán)[2.2.2]辛烷-1-基甲基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物15)；
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)4.18(m，2H)，3.40(m，4H)，3.21(d，16H)，2.8(d，4H)，1.75-1.39(m，36H)；雙{4-[4-(2-氨基乙基)苯基乙酰基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物16)；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.13，6.93(d，8H)，5.8(d，4H)，3.68(m，4H)，3.56，3.39(d，16H)，4.0(m，2H)，2.69(t，4H)，2.69(t，4H)，1.82-1.50(m，12H)；Electrospray LRMSC38H54N6O6的計算值MH+691；測定值MH+691；雙{4-[4-(2-氨基乙基)苯甲?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物17)，Electrospray LRMSC36H50N6O6的計算值MH+662.8；測定值MH+664；雙{4-[4-(1-氨基丙基)苯甲?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物18)；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.33(s，8H)，4.6(m，2H)，3.35-3.06(m，18H)，2.97(m，4H)，1.73-1.5(m，12H)，1.22(d，6H)，1.82-1.50(m，12H)；Electrospray LRMSC36H54N6O6的計算值MH+691；測定值MH+692；雙{4-[4-(2-氨基乙基)哌啶-1-基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物19)；
1H-(300MHz，DMSO-d6)3.62(d，8H)，3.42，3.19(s，16H)，2.97(t，4H)，2.82(t，4H)，1.77-1.55(m，24H)，1.13(m，4)；Electrospray LRMSC34H60N8O6的計算值MH+676.9；測定值MH+677；雙{4-[反式-4-(2-氨基乙基)環(huán)己基乙?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物20)；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)3.52(m，16H)，2.97(t，4H)，2.39(d，4H)，1.81-1.5(m，34H)，1.32(m，6H)，0.99(m，2H)；Electrospray LRMSC38H64N6O6的計算值MH+.703；測定值MH+703；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-反式-1，4-亞環(huán)己基酯(化合物21)；Electrospray LRMSC32H44N21O4的計算值MH+688.8；測定值MH+689；和雙{4-[-4-(2-氨基乙基)環(huán)己基羰基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物22)，1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)3.56，3.49(d，16H)，2.96(t，4H)，1.77(m，20H)，1.51(m，6H)，1.33(m，6H)，1.01(m，4H)；Electrospray LRMSC32H66N6O6的計算值MH+674.9；測定值MH+675。
按照實施例3，方法B所述類似的方式，但是代之以不同的起始原料制備出下述化合物雙{4-[4-(氨基甲基)哌啶-1-基羰基氨基甲基]-1-哌嗪羧酸}-反式-1，4-亞環(huán)己基酯(化合物23)，1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)8.0(s，4H)，6.5(s，2H)，4.5(m，8H)，3.9(m，4H)，3.8(m，2H)，2.8(s，2H)，2.6(m，16H)，1.6(m，16H)，1.0(m，10H)；雙[4-(4-脒基苯基乙?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物24)，Electrospray LRMSC34H48N8O6的計算值MH+688.8；測定值MH+689.6；雙{4-[4-(氨基甲基)哌啶-1-基羰基氨基]丁基氨基羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物25)，1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)8.1(s，6H)，7.0(s，2H)，4.6(s，2H)，4.2(m，12H)，3.9(d，4H)，2.9(m，8H)，2.6(m，8H)，1.6(m，20H)，1.3(s，6H)，1.0(m，4H)，Electrospray LRMSC31H64N8O6的計算值MH+652.9；測定值MH+653.7；雙{4-[4-(氨基甲基)哌啶-1-基羰基氨基甲基]-1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物26)，1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)8.1(s，6H)，6.5(s，2H)，4.6(s，4H)，4.0(m，24H)，2.9(d，4H)，2.6(m，12H)，1.6(m，20H)，0.9(m，14H)Electrospray LRMSC34H64N8O6的計算值MH+705；測定值MH+706.6；
雙[4-(1-脒基哌啶-4-基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物27)，1H-NMR(300-MHz，DMSO-d6)7.2(s，8H)，6.6(m，2H)，4.6(m，4H)，3.8(d，6H)，3.4(m，31H)，2.9(m，8H)，1.7(m，16H)，1.1(m，4H)；雙[4-(4-氨基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物28)，1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)9.4(s，4H)，7.8(d，4H)，7.6(d，4H)，7.4(m，2H)，4.8(m，2H)，4.4(m，4H)，3.4(m，40H)，1.8(m，10H)；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-反式-2，6-(4，8-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷亞基酯(化合物29)，Electrospray LRMSC34H46N12O8的計算值MH+751.8，MH2+2/2376.4；測定值MH+751.2，MH2+2/2376.4；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-反式-2，3-雙環(huán)[2.2.2]辛-5-烯基亞甲基酯(化合物30)，Electrospray LRMSC38H52N12O6的計算值MH+773.9，MH2+2/2387.5；測定值MH+773.2，MH2+2/2387.2；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-四環(huán)[3.3.1.13，7]癸烷亞基二亞甲基酯(化合物31)，Electrospray LRMSC40H58N12O4的計算值MH+768，MH2+2/2384.5；測定值MH+769.48，MH2+2/2385.4；雙[4-(4-脒基苯甲?；被谆?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物44)，
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)9.43(s，2H)，9.16(s，2H)，8.77(t，1H)，8.00(d，2H)，7.86(d，2H)，4.61(br s，1H)，3.91(br d，2H)，3.14(br s，2H)，2.69(br s，2H)，1.79-1.54(m，8H)，1.51-1.42(m，1H)，0.99(q，2H)；Electrospray LRMSC38H54N8O6的計算值MH+716.9，MH2+2/2358.5；測定值MH+717.5，MH2+2/2359.5；雙[4-(4-脒基哌啶-1-基羰基氨基甲基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物45)，1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)8.8(d，4H)，6.57(s，1H)，4.61(s，1H)，4.06(d，2H)，3.9(d，2H)，2.84(br s，2H)，2.73-2.5(m，4H)，1.77-1.4(m，10H)，0.89(q，2H)；Electrospray LRMSC36H66N10O6的計算值MH+732.9，MH2+2/2366.9；測定值MH+731.6，MH2+2/2366.9；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪甲醛]-順式-1，5-四環(huán)[3.3.1.13，7]癸烷亞基二亞甲基酯(化合物32)，Electrospray LRMSC40H58N12O6的計算值MH+801.9；測定值MH+802.1；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪甲醛]-1，2-亞環(huán)己基酯(化合物46)，Electrospray LRMSC34H48N12O4的計算值MH2+2/2345.7；測定值MH2+2/2345.3；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-1，4-雙環(huán)[2.2.2]亞辛基二亞甲基酯(化合物47)，Electrospray LRMSC38H54N12O6的計算值MH2+2/2388.3；測定值MH2+2/2388.3；雙[4-(4-胍基苯基羰基氨基甲基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物48)，
Electrospray LRMSC38H54N10O6的計算值MH2+2/2374.5；測定值MH2+2/2374.6；和雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，4-亞環(huán)己基二亞甲基酯(化合物49)，Electrospray LRMSC36H52N12O6的計算值MH2+2/2375.4；測定值MH2+2/2375.1。
實施例4雙[4-((反式-4-氨基甲基亞環(huán)己基亞甲基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物4)下面的實施例描述了本發(fā)明下述化合物的制備Z是氨基，X1是-X6-X7-X8(其中，n6是1，和X7是反式1，4-亞環(huán)己基；X2是-NH-C(O)-；X3是1，4-亞哌嗪基；X4是-C(O)O-；和Y是-順式-1，5-亞環(huán)辛基。
反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲醇?xì)渎然锇?.0M硼烷的四氫呋喃溶液(250ml，260mmol)緩慢地滴加反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷羧酸(10.0g，64.0mmol)的四氫呋喃溶液(250ml)中，可觀察到氣體逸出。反應(yīng)混合物加熱回流14小時。把得到的溶液冷卻至0℃，小心地滴加1N甲醇鹽酸溶液(250ml)，可觀察到氣體逸出。將得到的白色懸浮液于3℃攪拌1小時，然后濃縮。在殘余物中加入甲醇，濃縮懸浮液。重復(fù)此步驟二次，得到反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲醇?xì)渎然?10.6g，產(chǎn)率93％)白色固體。1H NMR(CD3OD)3.38(d，2H)，2.71(d，2H)，1.88(d，4H)，1.48(m，2H)，1.01(m，2H)N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲醇把碳酸鈉(1.33g，12.4mmol)加入到反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲醇?xì)渎然?1.5g，8.3mmol)于1∶1二惡烷∶水(40ml)的溶液中，0℃下于反應(yīng)混合物中加入二叔丁基二碳酸酯(2.0.g，9.13mmol)，將混合物在室溫攪拌5小時，然后分配在含10％甲醇的二氯甲烷和水之間。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥和濃縮得到N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲醇(1.97g，產(chǎn)率98％)白色固體。1H NMR(CDCl3)4.58(br，1H)，3.44(d，2H)，2.95(tr，2H)，1.81(m，4H)，1.54(m，2H)，1.44(s，9H)，0.92(tr，4H)N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲基甲苯磺酸酯將對甲苯磺酰氯(3.3.g，17.0mmol)加入到含有4分子篩的N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲醇(3.5g，14.0mmol)的吡啶(15ml)溶液中，于23℃攪拌23.5小時。濃縮得到的白色懸浮液，殘余物分配在二氯甲烷和0.05N鹽酸之間。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥和濃縮，得到粗制的N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲基甲苯磺酸酯(5.73g)黃色固體。1H NMR(CDCl3)7.78(d，2H)，7.34(d，2H)，4.56(br，1H)，3.82(d，2H)，2.94(tr，2H)，2.48(s，3H)，1.74(d，4H)，1.64(m，2H)，1.48(s，9H)，0.91(tr，4H)N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲基疊氮化物將疊氮化鈉(4.7.g，70.0mmol)加入到含有4分子篩的N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲基甲苯磺酸酯(5.73g，14.0mmol)的DMF(50ml)溶液中，得到的懸浮液于23℃攪拌190小時，然后濃縮。得到的殘余物分配在二氯甲烷和水之間。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥和濃縮，得到N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲基疊氮化物(3.22g，產(chǎn)率86％)，為黃色油。
1H NMR(CDCl3)3.14(d，2H)，2.99(tr，2H)，1.82(tr，4H)，1.51(m，2H)，1.48(s，9H)，0.99(m，4H)N-叔丁氧基羰基-反式-1，4-環(huán)己烷雙(甲胺)氫氯化物在氮?dú)庵袑⒁掖?40ml)加入到N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲基疊氮化物(1.79g，6.67mmol)和55鈀/碳(270mg，0.15％重量)溶液中，反應(yīng)混合物在大氣壓下，氫氣中于23℃攪拌6小時。過濾黑色的懸浮液和濃縮濾液得到N-叔丁氧基羰基-反式-1，4-環(huán)己烷雙(甲胺)黃色油。把粗制的胺溶于甲醇(2.0ml)，接著加入鹽酸的二惡烷溶液(4.0M，2.0ml，8.0mmol)和乙醚(25ml)，過濾收集得到的沉淀得到N-叔丁氧基羰基-反式-1，4-環(huán)己烷雙(甲胺)氫氯化物(1.42g，產(chǎn)率76％)，為無色固體。1H NMR(D2O)3.00-2.80(m，4H)，1.90-1.70(m，4H)，1.70-1.50(m，2H)，1.40(s，9H)，1.10-0.90(m，4H).Electrospray LRMSCalculated for C13H27N2O2(MH+)243Found243N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲基異氰酸酯將N-叔丁氧基羰基-反式-1，4-環(huán)己烷雙(甲胺)氫氯化物(1.45g，5.2mmol)溶于二氯甲烷(25ml)，接著加入吡啶(1.75ml，21mmol)，把混合物冷卻至0℃。然后在上述溶液中加入三光氣(617mg，2.1mmol)，在2小時內(nèi)使混合物溫?zé)嶂潦覝亍Ｓ袡C(jī)溶液用0.1N鹽酸水溶液洗滌(2×25ml)，接著用無水硫酸鎂干燥，過濾和濃縮，得到N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲基異氰酸酯(1.38g，產(chǎn)率99％)，為黃色結(jié)晶固體。
1H-NMR(CDCl3)4.60(br s，1H)，3.15(d，2H)，2.95(tr，2H)，1.85-1.75(m，4H)，1.50-1.40(m，2H)，1.45(s，9H)，1.05-0.90(m，4H).
雙[4-((反式-4-叔丁氧基羰基氨基甲基環(huán)己烷亞基亞甲基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯將雙(1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯二氫氯化物(229.7mg，0.53mmol)和二異丙基乙基胺(200μl，2.3mmol)溶于DMF(4.0ml)中，把混合物冷卻至0℃。然后在該混合物中加入N-叔丁氧基羰基-反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷甲基異氰酸酯(285mg，1.06mmol)，在12小時內(nèi)使混合物溫?zé)嶂潦覝亍饪s和在殘余物中加入二氯甲烷(25ml)，然后有機(jī)溶液用0.1N鹽酸水溶液洗滌(2×25ml)，接著用無水硫酸鎂干燥得到粗制產(chǎn)物。過濾和濃縮后得到雙[4-((反式-4-叔丁氧基羰基氨基甲基環(huán)己烷亞基亞甲基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(534mg，產(chǎn)率56％)，為無色固體。1H NMR(CDCl3)4.80(m，2H)，4.70(tr，2H)，4.65(tr，2H)，3.45(m，8H)，3.35(m，8H)，3.10(tr，4H)，2.95(tr，4H)，1.95-1.50(m，24H)，1.45(s，18H)，1.00-0.90(m，8H).
雙[4-((反式-4-氨基甲基環(huán)己烷亞基亞甲基)氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物4)將雙[4-((反式-4-叔丁氧基羰基氨基甲基環(huán)己烷亞基亞甲基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(534mg，0.59mmol)用三氟乙酸(5ml)處理，15分鐘后成為把混合物真空濃縮成為紅色油。將粗制的產(chǎn)物溶于水(10ml)，通過紙型GV(0.22μm)Millipore過濾器過濾含水懸浮液得到黃色溶液。用反相制備HPLC純化并冷凍干燥得到雙[4-((反式-4-氨基甲基環(huán)己烷亞基亞甲基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物4)二氫氯化物，為幾乎無色的固體。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)8.00(br s，6H)，6.60(m，2H)，4.65(m，2H)，3.40(s，8H)，3.30(s，8H)，2.85(m，4H)，2.60(tr，4H)，1.80-1.30(m，24H)，0.90-0.70(m，8H).Electrospray LRMS計算值C36H64N8O6MH+706.0；MH2+2/2353.5測定值MH+705.7；MH2+2/2353.3按照實施例4所述類似的方式，但是代之以不同的起始原料制備出本發(fā)明的下述化合物雙{4-[2-(4-脒基苯基)乙基氨基甲酰基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物33)，1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)9.3(s，4H)，9.0(s，4H)，7.7(d，4H)，7.4(d，4H)，6.7(t，2H)，4.6(m，2H)，3.8(m，52H)，2.8(t，4H)，1.7(m，10H)；雙[4-(5-氨基戊基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物34)，Electrospray LRMSC30H56N8O6的計算值MH+625.8；測定值MH+625.7；雙[4-(6-氨基己基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物35)，Electrospray LRMSC32H60N8O6的計算值MH+653.9；測定值MH+654.2；雙[4-(5-氨基-2-戊烯基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物36)，Electrospray LRMSC30H52N8O6的計算值MH+621.8；測定值MH+621.5；
雙[4-(4-氨基丁基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物37)，Electrospray LRMSC28H52N8O6的計算值MH+597.8，測定值MH+596.9；雙{4-[2-(2-氨基乙氧基)乙基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物38)，Electrospray LRMSC28H52N8O8的計算值MH+628.8，測定值MH+628.5；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基氨基甲酰氧基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物39)，Electrospray LRMSC36H62N6O8的計算值MH+706.9；測定值MH+707.7；雙[N-2-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基氨基甲酰氧基)乙基-N-甲基氨基羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物40)，Electrospray LRMSC32H56N6O8的計算值MH+654.9；測定值MH+655；雙[N-2-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲酰氧基)乙基-N-甲基氨基羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物41)，Electrospray LRMSC34H62N6O8的計算值MH+683.9；測定值MH+683.5；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯(化合物42)，Electrospray LRMSC36H64N8O6的計算值MH+706；測定值MH+704.6；和雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲酰氧基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(化合物43)，Electrospray LRMSC38H64N6O8的計算值MH+736；測定值MH+735.6。
實施例5
4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(5-氨基戊基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛基酯(化合物50)下面的實施例描述了本發(fā)明下述化合物的制備R2是4-(4-氨基丁基氨基甲酰基)哌嗪-1-基甲酰氧基，R3是4-(4-氨基丁基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基，和Y是順式-1，5-亞環(huán)辛基。
將二氯甲酸順式-1，5-環(huán)辛二醇二氯甲酸酯(1.91g，7.1mmol)溶于二氯甲烷(20ml)，向其中滴加1-哌嗪羧酸叔丁基酯(1.3g，7.1mmol)和二異丙基乙基胺((1.3ml，7.1mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液?；旌衔镉谑覝財嚢?0分鐘，然后加入鹽酸水溶液(0.1m，30ml)，分離有機(jī)層，用無水硫酸鎂干燥，過濾和濃縮。用硅膠快速色譜法純化殘余物，以乙醚/己烷(1∶1)作洗脫液，得到順式-5-氯代甲酰氧基環(huán)辛基4-叔丁氧羰基-1-哌嗪-1-基羧酸酯(663.1mg，1.6mmol)，為無色油。
室溫下用純凈的三氟乙酸(2ml)處理4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸)-叔丁基酯(383.7mg，1.1mmol)，直到成為均相溶液。真空濃縮該溶液成為粘稠的油。將該油溶于水(10ml)，滴加5M氫氧化鈉水溶液直到溶液的pH為7.5-8.0。在溶液中加入順式-5-氯代甲酰氧基環(huán)辛基4-叔丁氧羰基-1-哌嗪-1-基羧酸酯(447.7mg，1.1mmol)的THF(3ml)溶液，同時快速攪拌，繼續(xù)加入5M氫氧化鈉水溶液使溶液的pH保持7.5-8.0。加入5M氫氧化鈉水溶液使溶液(10ml)調(diào)節(jié)pH為14，然后加入乙醚(1ml)，使混合物在室溫靜置15分鐘給出白色固體。過濾收集此固體，用冰水(1×)、乙腈(1×)和乙醚(1×)洗滌并干燥得到4-胍基芐基氨基甲?；?1-哌嗪羧酸順式-5-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛基酯(527.2mg，0.85mmol)白色固體。
將4-胍基芐基氨基甲?；?1-哌嗪羧酸-順式-5-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛酯(129mg，0.196mol)用三氟乙酸(1ml)處理，直到形成均相溶液。真空濃縮該溶液得到無色油。將該油溶于N，N-二甲基甲酰胺(2ml)，然后加入二異丙基乙基胺(340μl，2mmol)，在溶液中加入5-(叔丁氧基羰基)氨基戊基異氰酸酯(44mg，0.2mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(500μl)溶液，混合物于室溫攪拌12小時。真空濃縮混合物，殘余物與水(5ml)合并，用三氟乙酸(2ml)處理直到形成均相溶液。真空濃縮該溶液，將殘余物溶于水(5ml)。用制備HPLC純化，接著進(jìn)行冷凍冷凍干燥得到4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(5-氨基戊基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛酯無色油。
Electrospray LRMSC33H54N10O6的計算值MH+687.9；測定值MH+687.6。
按照實施例5所述類似的方式或本文所述的其它方法，但是代之以不同的起始原料制備出本發(fā)明的下述化合物4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(4-氨基丁基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛酯(化合物51)，Electrospray LRMSC32H52N10O6的計算值MH+673.8；測定值MH+673.8；4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(4-反式-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛酯(化合物52)，Electrospray LRMSC36H57N10O6的計算值MH+726.9；測定值MH+727.3；4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(3-氨基丙基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛酯(化合物53)，Electrospray LRMSC31H50N10O6的計算值MH+659.8；測定值MH+659.2；4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(6-氨基己基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛酯(化合物54)，Electrospray LRMSC34H54N9O6的計算值MH+686.9；測定值MH+686.4。
實施例6
雙(4-{4-[1，2，3-三(1-乙酰氧基乙氧基羰基)胍基]芐基氨基甲酰基}-1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯下面的實施例描述了本發(fā)明下述化合物的前藥衍生物的制備 Z是胍基，X1是-X6-X7-X8(其中，n6是0，n8是1和X7是1，4-亞苯基；X2是-NH-C(O)-；X3是1，4-亞哌嗪基；X4是-C(O)O-；Y是-順式-1，5-亞環(huán)辛基和R4是1-乙酰氧基乙氧基羰基。
將雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(49mg，0.065mmol)懸浮于N，N-二甲基甲酰胺(2ml)，依次加入二異丙基乙基胺((50ml，0.26mmol)和對硝基苯甲酸乙酰氧基乙基酯(70.4mg，0.026mmol)?；旌衔镉谑覝財嚢?小時后真空濃縮。殘余物溶于二氯甲烷(25ml)，該溶液用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×)和0.1M鹽酸水溶液洗滌(1×)，用無水硫酸鎂干燥，過濾和濃縮。殘余物用硅膠快速色譜純化，以乙酸乙酯/乙醇(20∶1)作洗脫液。濃縮后得到雙(4-{4-[1，2，3-三(1-乙酰氧基乙氧基羰基)胍基]芐基氨基甲?；鶀-1-哌嗪羧酸)順式-1，5-亞環(huán)辛基酯(40mg，0.031mmol)，為無色固體。
Electrospray LRMSC56H76N12O22的計算值MH+1269.3；測定值MH+1269.4。
按照實施例6所述類似的方式或本文所述的其它方法，但是代之以不同的起始原料制備出本發(fā)明的下述化合物的前藥衍生物4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(5-N-乙酰基甘氨?；被旎被柞；?哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛酯，Electrospray LRMSC37H59N11O8的計算值MH+786.9；測定值MH+786.5；雙(4-{4-[1，2-二(1-乙酰氧基乙氧基羰基)脒基]芐基氨基甲酰基}-1-哌嗪羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯Electrospray LRMSC64H92N12O22的計算值MH+1381.7；測定值MH+1403。VI.體外類胰蛋白酶試驗將試驗化合物(大約1mg)溶于200μl二甲亞砜(DMSO)，并以1∶10用緩沖溶液稀釋，該緩沖液含有50毫摩爾(mM)Tris-HCl(pH8.2)、100mM氯化鈉和0.05％聚氧乙烯山梨糖醇-月桂酸醋(吐溫-20°，購自Sigma，圣路易斯，密蘇里州)。把原始稀釋液加入補(bǔ)充有10％DMSO的相同緩沖液中制成7份另外三倍稀釋的稀釋液。在96井U形底微量滴至板上將8份稀釋液的每一份的等分部分(50微升，μl)按系列移上各個井之中，在每井中加入25μl類胰蛋白酶貯備液，于室溫下混合和孵化樣品一小時(類胰酶可由人體肺和皮膚組織制劑HMC-1(人體肥大細(xì)胞株)純化得到，也可以由商業(yè)渠道購得(ICN Biomedicals，Irvine，加利福尼亞州；Athens Research&Technology，阿森斯，佐治亞州)。從所有這些來源獲得的類胰蛋白酶對各種抑制劑有相似的親和力。類胰蛋白酶溶液的制備是把60μg/ml類胰蛋白酶加入10mM MES2-[N-嗎啉代]乙烷磺酸)溶液中，該溶液中含有2mM CaCl2、20％甘油和50μg/ml肝素。加入合成的三肽基質(zhì)，甲苯磺酰基-Gly-Pro-Lys-對硝基苯胺(購自Sigma，25μl；最后濃度0.5mM)使酶反應(yīng)開始。把微量滴定板立刻轉(zhuǎn)移至UV？MAX Kinetic Microplate讀數(shù)器(Molecular Devices)，接著顯色基質(zhì)發(fā)生水解，在405納米(nM)分光光度法測定5分鐘。在此條件下酶試驗常規(guī)地得到線性發(fā)育曲線，起始速度測定值通過動力學(xué)分析程序(Batchki；Petr Kuzmic，威斯康星大學(xué)，麥迪遜，威星康星州)由發(fā)育曲線計算得到，該程序用來測定化合物1、2和4的表現(xiàn)抑制常數(shù)。
本發(fā)明潛在的類胰蛋白酶抑制劑化合物3可分類為緊密結(jié)合的抑制劑，因為它對類胰蛋白酶的表現(xiàn)親合力(用Batchki程序計算Ki′值為200pM)與試驗中所有酶濃度相當(dāng)。但是，Ki′值隨試驗中所用的酶濃度變化。在此試驗中，在加入基質(zhì)(500μM甲苯磺?；?gly-pro-lys-對硝基苯胺)前1小時類胰蛋白酶和化合物3濃度在預(yù)孵化混合物中的濃度變化分別是0.25，0.50，1.0和2.0nM和40，110，340和680pM。在每種類胰蛋白酶濃度下測定化合物3的IC50值。將IC50(縱坐標(biāo))對類胰蛋白酶濃度(橫坐標(biāo))重新作圖，其Y截距為Ki′值。競爭抑制劑的實際離解常數(shù)Ki可由下面關(guān)系式(參見Morrison，J.F.，Methods inEnzymology，63，437-467(1969))計算出來Ki＝Ki′/(1+S/Km)，
其中S＝500μM和Km＝300μM。
由此方法計算得到化合物3對類胰蛋白酶的離解常數(shù)為60pM。
測定本發(fā)明化合物的抑制常數(shù)(Ki′，微摩爾(μm))。按照本發(fā)明，作為類胰蛋白酶抑制劑的，標(biāo)有術(shù)語“活性的”或“有效的”化合物是指它的Ki′為小于5μm的化合物。
在上述體外試驗中，得到如下化合物的Ki′(μm)值化合物1 (0.004)， 化合物2 (0.002)，化合物3 (0.0002)， 化合物4 (0.0158)，化合物5 (0.002)， 化合物6 (0.00037)，化合物7 (0.005)， 化合物8 (0.03)，化合物9 (0.493)， 化合物10(0.00047)，化合物11 (0.207)， 化合物12(0.026)，化合物13 (0.00013)，化合物14(1.3)，化合物15 (0.302)， 化合物16(0.0015)，化合物17 (0.0049)， 化合物18(0.713)，化合物19 (1.51)， 化合物20(0.00081)，化合物21 (0.0609)， 化合物22(0.009)，化合物23 (0.119)， 化合物24(0.00016)，化合物25 (0.734)， 化合物26(0.332)，化合物27 (0.614)， 化合物28(0.0087)，化合物29 (0.0038)， 化合物30(0.008)，化合物31 (0.0266)， 化合物32(0.0122)，化合物33 (0.44)， 化合物34(0.011)，化合物35 (1.44)， 化合物36(0.125)，化合物37 (0.508)， 化合物38(0.75)，化合物39 (0.858)， 化合物40(1.39)，化合物41 (1.1)，化合物42(0.064)，化合物43 (1.45)， 化合物44(0.008)，化合物45 (0.114)， 化合物46(0.772)，化合物47 (0.00042)，化合物48(2.3)，化合物49 (0.00034)，化合物50(0.00045)，化合物51 (0.0038)， 化合物52(0.00048)，化合物53 (0.044)， 化合物54(0.02)。VII.體內(nèi)試驗用哮喘的變應(yīng)性羊模型進(jìn)行體內(nèi)試驗以評價本發(fā)明化合物作為抗哮喘藥的作用。以前已經(jīng)公布了這些方法(參見Abraham等人(1983)，Am.Rev.Respir.Dis.，128839-844；Allegra等人(1983)，J.Appl.Physiol.，55726-730；Russi等人(1985)，J.Appl.Physiol.，591416-1422；Soler等人(1989)，J.Appl.Physiol.，67406-413)。每只羊作為本身的對照。動物的體重在20-50kg范圍內(nèi)。
在此試驗中，將50μg化合物3溶于緩沖的鹽水，并在抗體激發(fā)前0.5小時，激發(fā)后4小時和激發(fā)后24小時的時候以氣霧劑形式釋放出全部溶液(總劑量＝150μg，n＝3)。此化合物使抗體激發(fā)的早期或后期反應(yīng)大大減少，其減少值以特異性肺耐受性(Specific LungResistance)(CSRL)測量，結(jié)果見圖1。早期反應(yīng)的峰值可作為立即出現(xiàn)后刺激最大值的平均值。后期反應(yīng)的峰值由6-8小時時間內(nèi)由每只動物得到的平均歇反應(yīng)值計算得到。此方法保持或減少了由于簡單平均可能出現(xiàn)的后期反應(yīng)的減少。
對照和藥物試驗組兩組在抗體刺激羊24小時后，試驗羊發(fā)展為氣道應(yīng)答過強(qiáng)。氣道應(yīng)答過強(qiáng)用PE400表示，即引起400％SRL增加時碳酰膽堿的濃度，因此，PC400減少就是指應(yīng)答過強(qiáng)。發(fā)現(xiàn)化合物3可阻斷已產(chǎn)生的應(yīng)答過強(qiáng)。如圖2所示，此化合物使PC400基本上保護(hù)在基線的32呼吸單元的數(shù)值。在此動物的對照試驗中，呼吸單元數(shù)為12。用本發(fā)明的化合物3進(jìn)行治療可大大改善抗體激發(fā)的羊的氣道功能。如此類似，化合物2也得到類似的結(jié)果，如圖6所示。
還發(fā)現(xiàn)化合物3有口服活性。在抗體激發(fā)前1小時，激發(fā)4小時和激發(fā)后24小時時通過胃管給羊施用3劑量的化合物(10ml水中2mg)，如圖5所示，用此化合物處理的動物的早期SRL為175，當(dāng)處理動物的SRL為250。對于后期反應(yīng)而言，用此化合物處理的動物的SRL為大約50，而作為對照的未處理動物的SRL大于200。因此，此化合物在口服使用時顯示出良好的抗哮喘性能。
還發(fā)現(xiàn)在抗體激發(fā)前用化合物3進(jìn)行氣霧劑處理對減少抗體刺激的早期或晚期反應(yīng)也是有效的，這可通過特異性肺耐受性(SRL)來測定。在此試驗中，試驗動物通過氣霧劑給藥，預(yù)先施用化合物3(0.5mg/天×3天，在抗體激發(fā)前1.5小時再給0.5mg)。圖7說明由于經(jīng)過化合物3預(yù)處理使抗體刺激的早期和晚期反應(yīng)大大減少。與此類似，圖8說明氣道功能大大改善。
因此，本發(fā)明提供了用于預(yù)防和治療免疫介導(dǎo)的炎性疾病的化合物和組合物，這些疾病中特別是與呼吸道相關(guān)的疾病，包括哮喘，以及與慢性哮喘有關(guān)的應(yīng)答過強(qiáng)癥狀，此外還有變應(yīng)性鼻炎。本發(fā)明還包括對用本發(fā)明化合物治療敏感的免疫介導(dǎo)的炎性疾病的治療方法。
在本申請中公開的所有論文和參考書，包括專利和專利申請均引用來作為參考。
可以理解的是，上述說明書是用于說明而不構(gòu)成限制。在參閱上述說明書之后，許多實施方案對本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來說是顯而易見的。因此，本發(fā)明的范圍不能參照上述說明書確定，而應(yīng)該參照附上的權(quán)利要求書，同時參照權(quán)利要求書中命名的等同物來確定。
權(quán)利要求
1.下式化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽和其前藥[Z-X1-X2-X3-X4-X5]2Y其中Z是氨基、胍基或脒基；Y是選擇取代的環(huán)(C3-14)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-14)亞烷基；X1是選擇取代的(C3-6)亞烷基，選擇取代的氧雜(C4-6)亞烷基或-X6-X7-X8-(其中X7是選擇取代的亞苯基，選擇取代的環(huán)(C3-6)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-6)亞烷基，以及X6和X8分別是選擇取代的(Cn6)亞烷基和選擇取代的雜環(huán)(Cn8)亞烷基，其中n6和n8的和等于1、2、3或4，條件是當(dāng)Z是氨基時n6不是0)；X2和X4各自獨(dú)立地是-C(O)-，-C(O)O-，-OC(O)-，-C(O)N(R1)-，-N(R1)C(O)-，-OC(O)N(R1)-，-N(R1)C(O)O-，-N(R1)C(O)N(R1)-，或-OC(O)O-，(其中每個R1獨(dú)立地是氫、選擇取代的(C1-8)烷基或選擇取代的環(huán)(C3-8)烷基)；X3是選擇取代的(C1-8)亞烷基，-X9-X10或-X10-X9-(其中X9是選擇取代的(Cn9)亞烷基，其中的n9是0、1或2，X10是選擇取代的環(huán)(C3-8)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-8)亞烷基，條件是在X10含有的雜原子和X2或X4含有的雜原子之間不能出現(xiàn)共價鍵)；以及X5是選擇取代的(Cn5)亞烷基，其中n5是0、1或2。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中X2是-C(O)-，-C(O)NH-，-NHC(O)-，-NHC(O)O-，和X4是-C(O)-或-C(O)O-。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中Y是亞環(huán)辛基、亞環(huán)己基、亞環(huán)戊基、順式-十氫萘、反式-十氫萘、菲烷、雙環(huán)[2.2.1]庚烷亞基、雙環(huán)[2.2.2]辛烷亞基、二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷亞基或四環(huán)[3.3.1.13，7]癸烷亞基。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中X3是1，4-亞哌嗪基、1，4-亞哌啶基、1，4-全氫-7H-1，4-二吖庚因亞基或是-X9-X10(其中X9是亞甲基和X10是1，4-亞哌啶基)，和X4是-C(O)-或-C(O)O-；或者X3是(C1-4)亞烷基和X4是-N(R1)C(O)O-(其中R1是氫或甲基)。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中n8和n5獨(dú)立地是0或1。
6.權(quán)利要求5的化合物，其中n5是0和Y是亞環(huán)辛基。
7.權(quán)利要求6的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中Z是胍基，X1是-X6-X7-X8-(其中n6是0，n8是1和X7是1，4-亞苯基)，X2是-NHC(O)-，X3是1，4-亞哌嗪基，X4是-C(O)O-，以及Y是順式-1，5-亞環(huán)辛基，此化合物即雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
8.權(quán)利要求6的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中Z是氨基，X1是-X6-X7-X8-(其中n6是0，n8是1和X7是反式-1，4-亞環(huán)己基)，X2是-NHC(O)-，X3是1，4-亞哌嗪基，X4是-C(O)O-，以及Y是順式-1，5-亞環(huán)辛基，此化合物即雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
9.權(quán)利要求6的化合物，其中Z是胍基，X1是-X6-X7-X8-(其中n6是0，n8是1和X7是1，4-亞苯基)，X2是-NHC(O)-，X3是亞甲基，X4是-NHC(O)O-，以及Y是順式-1，5-亞環(huán)辛基，此化合物即雙[4-胍基芐基氨基甲?；谆被人醈-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
10.權(quán)利要求6的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中Z是胍基，X1是-X6-X7-X8-(其中n6是0，n8是1和X7是1，4-亞苯基)，X2是-C(O)O-，X3是1，4-亞哌嗪基，X4是-C(O)O-，以及Y是順式-1，5-亞環(huán)辛基，此化合物即雙[4-(4-胍基苯乙?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
11.權(quán)利要求6的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中選自下述化合物雙{4-[4-(2-氨基乙基)芐基氨基甲?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(5-氨基戊基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[4-(氨基甲基)哌啶-1-基羰基氨基]丁氨基羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(6-氨基己基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[4-(氨基甲基)哌啶-1-基羰基氨基甲基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?-1-(全氫-7H-1，4-二吖庚因)羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；[4-(4-氨基甲基雙環(huán)[2.2.2]辛-1-基)甲基氨基甲?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(5-氨基-2-戊烯基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-氨基丁基)氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[2-(2-氨基乙氧基)乙基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基氨基甲酰氧基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{N-2-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基氨基甲酰氧基)乙基-N-甲基氨基羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-氨基甲基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{N-2-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲酰氧基)乙基-N-甲基氨基羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲酰氧基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[3-(4-胍基苯基)丙?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[2-(1-脒基哌啶-4-基)乙基氨基甲酰基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基羰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[4-(2-氨基乙基)苯乙?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[4-(2-氨基乙基)苯甲酰基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[4-(1-氨基乙基)芐基氨基甲?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[3-(1-脒基哌啶-4-基)丙?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[3-(4-氨基苯基)丙?；鵠-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[4-(2-氨基乙基)哌啶-1-基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[反式-4-(2-氨基乙基)環(huán)己基羰基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[反式-4-(2-氨基乙基)環(huán)己基乙酰基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙{4-[2-(4脒基苯基)乙基氨基甲酰基]-1-哌嗪羧酸}-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(1-脒基哌啶-4-基乙酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(1-脒基哌啶-4-基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-脒基苯基乙酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-脒基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-脒基苯甲?；被谆?-1-哌啶羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-脒基哌啶-1-基羰基氨基甲基)-1-哌啶羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；和雙[4-(4-胍基苯基羰基氨基甲基)-1-哌啶羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
12.權(quán)利要求5的化合物，其中的n5是1和Y是亞環(huán)己基。
13.權(quán)利要求12的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中Z是胍基，X1是-X6-X7-X8-(其中n6是0，n8是1和X7是1，4-亞苯基)，X2是-NHC(O)-，X3是亞甲基，X4是-NHC(O)O-，以及Y是反式-1，4-亞環(huán)己基二亞甲基，此化合物即雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人醈-反式-1，4-亞環(huán)己基二亞甲基酯。
14.權(quán)利要求12的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中選自下述化合物雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-反式-1，4-亞環(huán)己基二亞甲基酯；雙[4-(4-氨基甲基)哌啶-1-基羰基氨基甲基)-1-哌嗪羧酸]-反式-1，4-亞環(huán)己基二亞甲基酯；和雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-反式-1，4-亞環(huán)己基二亞甲基酯。
15.權(quán)利要求5的化合物，其中的n5是0和Y是亞環(huán)己基。
16.權(quán)利要求15的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中選自下述化合物反式-1，4-亞環(huán)己基雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪甲醛]；反式-1，4-亞環(huán)己基雙[4-(2-氨基乙基)苯甲?；?1-哌嗪甲醛]；和1，2-亞環(huán)己基雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪甲醛]。
17.權(quán)利要求5的化合物，其中的n5是0和Y是4，8-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷亞基。
18.權(quán)利要求17的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中Z是胍基，X1是-X6-X7-X8-(其中n6是0，n8是1和X7是1，4-亞苯基)，X2是-NHC(O)-，X3是亞哌嗪基，X4是-C(O)O-，以及Y是反式-2，6-(4，8-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷亞基)，此化合物即雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-反式-2，6-(4，8-二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷亞基)酯。
19.權(quán)利要求5的化合物，其中的n5是1和Y是雙環(huán)[2.2.2]辛-5-烯亞基。
20.權(quán)利要求19的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中Z是胍基，X1是X6-X7-X8-(其中n6是0，n8是1和X7是1，4-亞苯基)，X2是-NHC(O)-，X3是亞哌嗪基，X4是-C(O)O-，以及Y是反式-2，3-雙環(huán)[2.2.2]辛-5-烯亞基二亞甲基，此化合物即雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-反式-2，3-雙環(huán)[2.2.2]辛-5-烯亞基二亞甲基酯。
21.權(quán)利要求5的化合物，其中的n5是1和Y是四環(huán)[3.3.1.13，7]癸烷亞基。
22.權(quán)利要求21的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中選自下述化合物雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-四環(huán)[3.3.1.3，7]癸烷亞基二亞甲基酯；和四環(huán)[3.3.1.13，7]癸烷亞基雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪甲醛]。
23.權(quán)利要求5的化合物，其中的n5是1和Y是雙環(huán)[2.2.2]辛烷亞基。
24.權(quán)利要求23的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中Z是胍基，X1是-X6-X7-X8-(其中n6是0，n8是1和X7是1，4-亞苯基)，X2是-NHC(O)-，X3是亞哌嗪基，X4是-C(O)O-，以及Y是1，4-雙環(huán)[2.2.2]辛烷亞基二亞甲基，此化合物即雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-1，4-雙環(huán)[2.2.2]辛烷亞基二亞甲基酯。
25.下式化合物，及其藥學(xué)上可接受的鹽和其前藥R2-Y-R3其中R2和R3獨(dú)立地是Z-X1-X2-X3-X4-X5，其中Z是氨基、胍基或脒基；Y是選擇取代的環(huán)(C3-14)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-14)亞烷基；X1是選擇取代的(C3-6)亞烷基，選擇取代的氧雜(C4-6)亞烷基或-X6-X7-X8-(其中X7是選擇取代的亞苯基，選擇取代的環(huán)(C3-6)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-6)亞烷基，以及X6和X8分別是選擇取代的(Cn6)亞烷基和選擇取代的雜環(huán)(Cn8)亞烷基，其中n6和n8的和等于1、2、3或4，條件是當(dāng)Z是氨基時n6不是0)；X2和X4各自獨(dú)立的是-C(O)-，-C(O)O-，-OC(O)-，-C(O)N(R1)-，-N(R1)C(O)-，-OC(O)N(R1)-，-N(R1)C(O)O-，-N(R1)C(O)N(R1)-，或-OC(O)O-，(其中R1各自獨(dú)立的是氫、選擇取代的(C1-8)烷基或選擇取代的環(huán)(C3-8)烷基)；X3是選擇取代的(C1-8)亞烷基，-X9-X10-或-X10-X9-(其中X9是選擇取代的(Cn9)亞烷基，其中的n9是0、1或2，X10是選擇取代的環(huán)(C3-8)亞烷基或選擇取代的雜環(huán)(C3-8)亞烷基，條件是在X10含有的雜原子和X2或X4含有的雜原子之間不能出現(xiàn)共價鍵)；以及X5是選擇取代的(Cn5)亞烷基，其中n5是0、1或2；條件是R2和R3是不同的。
26.權(quán)利要求25化合物，其中X2是-C(O)NH-，-NHC(O)-或-NHC(O)O-，和X4是-C(O)-或-C(O)O-。
27.權(quán)利要求26的化合物，其中Y是亞環(huán)辛基、亞環(huán)己基、亞環(huán)戊基、順式-十氫萘、反式-十氫萘、菲烷、雙環(huán)[2.2.1]庚烷亞基、雙環(huán)[2.2.2]辛烷亞基、二氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷亞基或四環(huán)[3.3.1.13，7]癸烷亞基。
28.權(quán)利要求27的化合物，其中X3是1，4-亞哌嗪基、1，4-亞哌啶基、1，4-全氫-7H-1，4-二吖庚因亞基或是-X9-X10-(其中X9是亞甲基和X10是1，4-亞哌啶基)，和X4是-C(O)-或-C(O)O-；或者X3是(C1-4)亞烷基和X4是-N(R1)C(O)O-(其中R1是氫或甲基)。
29.權(quán)利要求28的化合物，其中n8和n5獨(dú)立地是0或1。
30.權(quán)利要求29的化合物，其中n5是0和Y是亞環(huán)辛基。
31.權(quán)利要求30的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R2是4-(4-胍基芐基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基，R3是4-(4-反式-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基，和Y是順式-1，5-亞環(huán)辛基，此化合物即4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(4-反式-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲酰基)哌嗪-1-基甲酰氧基)環(huán)辛酯。
32.權(quán)利要求31的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中選自下述化合物4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(5-氨基戊基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛酯；4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(4-氨基丁基氨基甲酰基)哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛酯；4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(3-氨基丙基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛酯；和4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸-順式-5-[4-(6-氨基己基氨基甲?；?哌嗪-1-基甲酰氧基]環(huán)辛酯。
33.用于治療免疫介導(dǎo)的炎性疾病的氣霧劑組合物，包括在可氣霧化的藥學(xué)上可接受載體溶液或干粉中含有權(quán)利要求1的化合物。
34.權(quán)利要求33的氣霧劑組合物，其中的化合物選自雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯；雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；和雙[4-(4-胍基苯乙?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
35.權(quán)利要求33的氣霧劑組合物，其中的炎性疾病是哮喘。
36.權(quán)利要求33的氣霧劑組合物，其中的炎性疾病是變應(yīng)性鼻炎。
37.權(quán)利要求33的氣霧劑組合物，其中所述的化合物存在于藥學(xué)上可接受載體溶液之中，該溶液的濃度在大約0.01和30mg/ml之間。
38.權(quán)利要求33的氣霧劑組合物，其中還含有β-腎上腺素能激動劑化合物。
39.藥物組合物，含有與藥學(xué)上可接受的載體相結(jié)合的權(quán)利要求1的化合物。
40.權(quán)利要求39的藥物組合物，其中的化合物選自雙(4-胍基芐基氨基甲酰基甲基氨基羧酸)-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯；雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；和雙[4-(4-胍基苯乙?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
41.權(quán)利要求39的藥物組合物，其中所述的組合物含有藥學(xué)上可接受的局部用載體。
42.氣霧劑裝置，包括在藥學(xué)上可接受載體溶液或干粉中的權(quán)利要求1的化合物，以及含有將所述溶液或干粉轉(zhuǎn)化成適于吸入的氣霧劑形式的裝置。
43.權(quán)利要求42的氣霧劑裝置，其中的化合物選自雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯；雙(4-胍基芐基氨基甲酰基甲基氨基羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；和雙[4-(4-胍基苯乙?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
44.權(quán)利要求42的氣霧劑裝置，其中還包含β-腎上腺素能激動劑化合物。
45.權(quán)利要求44的氣霧劑裝置，其中所述的β-腎上腺素能激動劑化合物選自舒喘炎，特普他林，formoterol，吩丙喘寧和prenaline。
46.治療哺乳動物呼吸道的免疫介導(dǎo)的炎性疾病的方法，所述方法包括給所述哺乳動物施用吸入劑組合物，該組合物包含在藥學(xué)上可接受載體溶液或干粉中的權(quán)利要求1化合物。
47.權(quán)利要求46的方法，其中的化合物選自雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯；雙(4-胍基芐基氨基甲酰基甲基氨基羧酸)-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；和雙[4-(4-胍基苯乙?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
48.權(quán)利要求47的方法，進(jìn)一步包括β-腎上腺素能激動劑化合物。
49.權(quán)利要求48的方法，其中所述的β-腎上腺素能激動劑化合物選自舒喘炎，特普他林，formoterol，吩丙喘寧和prenaline。
50.治療哺乳動物呼吸道的免疫介導(dǎo)的炎性皮膚病的方法，所述方法包括給所述哺乳動物局部施用含有治療有效量的權(quán)利要求1化合物和藥學(xué)上可接受的局部用載體的局部用組合物。
51.治療免疫介導(dǎo)的炎性疾病的口服組合物，包含權(quán)利要求1化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
52.權(quán)利要求51的口服組合物，其中的化合物選自雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯；雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；和雙[4-(4-胍基苯乙?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
53.權(quán)利要求52的口服組合物，其中的化合物是雙[4-(4-胍基芐基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
54.治療哺乳動物類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的方法，包括給所述哺乳動物施用治療有效量的權(quán)利要求1化合物以緩解所述的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。
55.治療哺乳動物結(jié)膜炎的方法，包括給所述哺乳動物施用治療有效量的權(quán)利要求1化合物以緩解所述的結(jié)膜炎。
56.治療哺乳動物合胞體病毒感染的方法，包括給所述哺乳動物施用治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
57.權(quán)利要求56的方法，其中的化合物選自雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-反式-1，4-環(huán)己烷亞基二亞甲基酯；雙(4-胍基芐基氨基甲?；谆被人?-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(4-胍基芐基氨基甲酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；雙[4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基甲基氨基甲?；?-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯；和雙[4-(4-胍基苯乙酰基)-1-哌嗪羧酸]-順式-1，5-亞環(huán)辛基酯。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的化合物、組合物以及有效地預(yù)防和治療肥大細(xì)胞介導(dǎo)的炎性疾病的方法，這些化合物、組合物以及方法對于預(yù)防和治療呼吸道炎性疾病如哮喘和變應(yīng)性鼻炎以及其它類型免疫介導(dǎo)的炎性疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、結(jié)膜炎和炎性腸疾病，各種皮膚病，以及某些病毒感染疾病是有效的。這些化合物對肥大細(xì)胞蛋白酶類胰蛋白酶是有效的和選擇性的抑制劑。治療這些疾病的組合物可以是口服、吸入、局部和非經(jīng)腸道使用的制劑以及含有這些制劑的裝置。
文檔編號C07D295/205GK1160398SQ95195191
公開日1997年9月24日 申請日期1995年9月14日 優(yōu)先權(quán)日1994年9月23日
發(fā)明者肯·D·賴斯, 杰弗里·M·登納, 安東尼·R·甘拉夫, 伊萊恩·伊玲·庫 申請人:阿瑞斯藥物公司