專利名稱：抑制白細胞介素5的產(chǎn)生的抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種對白細胞介素5的產(chǎn)生的抑制劑，該抑制劑含有作為活性成分的紅霉素衍生物。
已知白細胞介素5(下文中簡寫為IL-5)為刺激嗜伊紅性粒細胞分化和生長的重要因子，并且后者會加劇過敏性炎癥。因此作用于產(chǎn)生白細胞介素5的抑制劑對治療如支氣管哮喘、過敏性鼻炎、特應性皮炎、藥物過敏和嗜伊紅性粒細胞肺炎等各種過敏性疾病是有利的。
紅霉素是一種抗生素，臨床上廣泛將它用作由革蘭氏陽性菌、一些革蘭氏陰性菌和支原體等引起的感染的治療劑。最近報導了紅霉素和羅希紅霉素對產(chǎn)生IL-5產(chǎn)生有抑制活性[“日本變態(tài)反應學雜志”(Japanese Joumal ofAllergology)，44(3-2)，第424頁(1993)]，但紅霉素和羅希紅霉素對產(chǎn)生IL-5的抑制活性是不足的。
本發(fā)明的目的就是提供一種有強有力的抑制IL-5產(chǎn)生的活性的紅霉素衍生物。
本發(fā)明的發(fā)明者已廣泛研究了紅霉素衍生物對IL-5產(chǎn)生的抑制活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了以下紅霉素衍生物顯示出對產(chǎn)生IL-5有強有力的抑制活性，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明提供了一種作用于產(chǎn)生IL-5的抑制劑，該抑制劑含有作為活性成分的6-O-甲基紅霉素A9-[O-(2-氯苯甲基)肟]，6-O-甲基紅霉素A9-[O-(3-甲氧基-4-叔丁基芐基)肟]11，12-環(huán)碳酸酯，11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-芐胺11-N，12-O-環(huán)甲氨酸酯，或其藥學上可接受的酸加成鹽。
用于本發(fā)明的藥學上可接受的酸加成鹽包括乙酸鹽、丙酸鹽、丁酸鹽、甲酸鹽、三氟乙酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、乙基琥珀酸鹽、乳糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-乙基乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、P-甲苯磺酸鹽、十二烷基硫酸鹽、蘋果酸鹽、天冬氨酸鹽、谷氨酸鹽、己二酸鹽、半胱氨酸鹽、鹽酸化物、氫溴化物、磷酸鹽、硫酸鹽、氫碘酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、苦味酸鹽、硫代氰酸鹽、十一烷酸鹽、丙烯酸聚合物的鹽和羧基乙烯聚合物的鹽。
本發(fā)明中所應用的6-O-甲基紅霉素A9-[O-(2-氯苯甲基)肟]和6-O-甲基紅霉素A9-[O-(3-甲氧基-4-叔丁基芐基)肟]11，12-環(huán)碳酸酯可以例如下法制備。步驟(1)在堿存在時，將溶于惰性溶劑的6-O-甲基紅霉素A9-肟(美國專利4,680,386中所描述的)與2-氯苯甲基氯化物反應制備6-O-甲基紅霉素A9-[O-(2-氯苯甲基)肟]。適宜的惰性溶劑為丙酮、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氧雜環(huán)己烷和其混合物。適宜的堿包括氫化物、氫氧化鈉和氫氧化鉀。反應溫度在-20℃到50范圍內(nèi)變化，優(yōu)選在0℃到25℃范圍內(nèi)變化。
步驟(2)除用3-甲氧基-4-叔丁基芐基溴化物替代2-氯苯甲基氯化物外，重復上述步驟(1)。將得到的化合物與乙酸酐或乙酰氯反應，使在2′-位置乙?；Ｔ谟帽鋮s的條件下，在堿如吡啶存在下，于惰性溶劑中將所得的化合物和反應劑如碳酰氯二聚物或碳酰氯三聚物反應，然后在2′-位置上去乙?；玫?-O-甲基紅霉素A9-[O-(3-甲氧基-4-叔丁基芐基)肟]11，12-環(huán)碳酸酯。適宜的惰性溶劑丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氫呋喃、乙腈和N，N-二甲基甲酰胺。反應溫度在-20℃-50℃的范圍內(nèi)變化，優(yōu)選在0℃-25℃范圍內(nèi)變化。
本發(fā)明中所應用的11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-芐胺11-N，12-O-環(huán)甲氨酸酯可以例如用下法來制備。
在適宜的酸存在下，將WO92/09014中所描述的11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-亞胺11-N，12-O-環(huán)甲氨酸酯和還原劑反應，得到11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-胺11-N、12-O-環(huán)甲氨酸酯，然后在適家的溶劑中將它和甲酸與苯甲醛反應制備11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-芐胺-11-N，12-O-環(huán)甲氨酸酯。適宜的溶劑包括甲醇、乙醇、N，N-二甲基甲酰胺和它們的混合物。適宜的酸包括有乙酸和甲酸。有用的還原劑有硼氫化鈉和硼氰化鈉。
根據(jù)本發(fā)明，這些化合物可以以片劑、膠囊、顆粒劑、粉劑、藥粉、錠劑、藥膏、油膏、乳劑、懸浮劑、栓劑和可注射溶液的形式口服或非口服方式給藥。這些劑型可以通過常規(guī)方法，如“日本藥典”(第12次修訂本)所規(guī)定的方法制備。根據(jù)患者的健康狀況和年齡以及治療目的來選擇適宜的劑型。在制備各種劑型中，可以應用普遍使用的載體(如，晶狀體蛋白纖維素、淀粉、乳糖和甘露醇)、結(jié)合劑(如，羥丙基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮)、潤滑劑(如，硬脂酸鎂和滑石)、崩解劑(如，羧甲基纖維素鈣)及其類似物等等。
本發(fā)明的化合物的劑量為，例如，成人口服給藥每天2-3分劑時在50-2000mg的范圍內(nèi)，同時根據(jù)患者的年齡、體重和健康狀況可以作適度變化。
根據(jù)本發(fā)明，這些化合物顯示出對IL-5的產(chǎn)生有強有力的抑制活性，并且可用作為人和動物(包括家畜)體內(nèi)的IL-5產(chǎn)生的抑制劑。因此，本發(fā)明的這些化合物對于由IL-5產(chǎn)生所導致的各種疾病是有效的，即對例如支氣管哮喘、過敏性鼻炎、特應性皮炎、藥物過敏和嗜伊紅性粒細胞肺炎等各種過敏性疾病是有效的。
現(xiàn)在參考實施例對本發(fā)明進行更為詳細的說明。
實施例1制備6-O-甲基紅霉素A9-[O-(2-氯苯甲基)肟]將5.33g(7mmol)6-O-甲基紅霉素A9-肟溶于80ml二氧雜環(huán)己烷，在用冰冷卻下，向溶液中加入1.69g(10.5mmol)2-氯苯甲基氯化物和536mg(9.1mmol)的95％的氫氧化鉀，再于室溫下攪拌2小時。用乙酸乙酯抽提反應混合物，并用飽合氯化鈉不溶液洗滌抽提物，再將抽提物于無水硫酸鎂上干燥，然后于減壓下蒸發(fā)來除去溶劑。用硅膠柱色譜法(洗脫液氯仿/甲醇/氨水＝19∶1∶0.1)純化殘余物，得到3.92g標題化合物，為黃色泡沫狀物。熔點145-147℃1H核磁共振(NMR)[300兆赫(MHz)，CDCl3]，化學位移(δ)ppm1.43(3H，S)，2.33(6H，S)，3.01(3H，S)，3.32(3H，S)，5.10，5.17(2H，ABq，J＝13.8Hz)，7.19-7.44(4H，m)。13C-NMR(75MHz，CDCl3)δppm40.3，49.5，50.8，171.1，175.6，
紅外光譜(KBr)，cm-13431，1734。
實施例2制備6-O-甲基紅霉素A9-[O-(3-甲氧基-4-叔丁基芐基)肟]11，12-環(huán)碳酸酯(1)除用95％氫氧化鉀和3-甲氧基-4-叔丁基芐基溴化物以外，重復同實施例1中的反應，從4.96g起始物質(zhì)(6-O-甲基紅霉A9-肟)得到4.25g的6-O-甲基紅霉素A9-[O-(3-甲氧基-4-叔丁基芐基)肟]。荷質(zhì)比(FAB)m/z939[MH]+(2)將1.6g(1.70mmol)的以上(1)中得到的化合物溶解于15ml丙酮，向溶液中加入0.32ml(3.41mmol)乙酸酐，然后于室溫下攪拌2小時。在減壓下蒸發(fā)除去溶劑，得到1.8g的2＇-乙?；幕衔?，為泡沫狀物。將得到的化合物溶解于20ml二氯甲烷，在用冰冷卻的同時加入2.06ml(25.6mmol)吡啶和0.51ml(4.26mmol)三氯甲基氯甲酸酯，然后攪拌2.5小時。向反應混合物加入冰以及碳酸氫鈉，再以常規(guī)方法對混合物進行后處理。在減壓下蒸發(fā)以除去溶劑。將殘余物于甲醇中加熱使在2＇-位置去乙酰化，得到881mg標題化合物。荷質(zhì)比(FAB)m/z965[MH]+1H-NMR(200MHz，CDCl3)δppm2.44(6H，S)，2.85(3H，S)，3.32(3H，S)，3.85(3，S)IR(KBr)cm-13457，2972，1815，1741，1461實施例3制備11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-芐胺11-N，12-O-環(huán)甲氨酸酯(l)將12g(15.1mmol)的11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-亞胺11-N，12-O-環(huán)甲氨酸酯溶于20ml的乙醇/N，N-二甲基甲酰胺(1/l)的混合溶劑中，向溶液中加入1.72ml(30.0mmol)乙酸和3.78g(60.2mmol)的NaBH3CN，再回流加熱4小時。向混合物中加入1.42g(22.6mmol)的NaBH3CN，繼續(xù)回流加熱1.5小時。蒸發(fā)除去溶劑，并向殘余物中加入2N氫氧化鈉水溶液。用乙酸乙酯抽提反應混合物，并依次用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌有機層。然后將有機層于無水硫酸鈉上干燥。在減壓下蒸發(fā)掉溶劑，從乙酸乙酯/二氯甲烷中再結(jié)晶殘余物，得到10.9g的11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-胺11-N，12-O-環(huán)甲氨酸酯。
(2)將1g(1.25 mmol)上述(1)中得到的化合物溶解于5ml乙醇，向溶液中加入0.5ml(4.92mmol)苯甲醛和0.1ml(2.35mmol)的90％甲酸，再回流加熱1小時，然后向溶液中分4份加入0.8ml(18.8mmol)的90％的甲酸，并繼續(xù)加熱21小時。反應后，以與實施例(1)中相同的方式對反應混合物進行后處理。以硅膠柱色譜法(氯仿/甲醇/氨水＝20∶1∶0.1)純化粗產(chǎn)物，并從二氯甲烷/正乙烷中再結(jié)晶，得到329mg標題化合物。熔點141-143℃和210-225℃荷質(zhì)比(FAB)m/z890[MH]+1H-NMR(300MHz，CDCl3)δppm2.29[6H，3′-N(CH3)2]，3.31(3H，6-OCH3)，3.32(3H，3″-OCH3)，4.04(2H，NCH2)，7.18-7.35(5H，苯基)13C-NMR(75 MHz，CDCl3)δppm40.3[3＇-N(CH3)2]，42.1(NCH2)，42.8(NCH2)49.4[3″-N(CH3)2]，50.9(6-OCH3)，62.1(9-NCH2)，127.0，128.3，129.0，140.2(苯基)實施例4將10g實施例1中制備的化合物，550g乳糖，300g玉米淀粉、100g羧甲基纖維素鈣和30g聚乙烯吡咯烷酮充分混合，以常規(guī)方法用乙醇將混合物粒化，干燥并分粒。將顆粒和10g硬脂酸鎂混合，以常規(guī)方法將混合物壓片，得到每片重100mg的藥片。
實施例5根據(jù)以下的M.Hikida等人，“免疫學通訊”(Immunology Letters)，第34卷，297-302頁(1992)中披露的方法檢測對鼠體內(nèi)IL-5產(chǎn)生的作用。
由ATCC購得鼠Th2克隆(D10.G4.1細胞)。通過將1×10-7個8周齡雌C3H/HeN鼠的脾臟細胞懸浮于5ml RPMI-1640培養(yǎng)基制備產(chǎn)生抗原的細胞，并將它和50μg/ml絲裂霉素C(MMC)一起37攝氏度培養(yǎng)30分鐘，然后用3份各50ml的RPMI-640洗滌。向含有10％牛血清的RPMI-1640中加入0.5單位白細胞介素2(IL-2)(由Genzyme生產(chǎn))和5×10-5M的2-巰基乙醇來制備用于組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基。將試驗化合物溶于二甲基亞砜(DMSO)，并用組織培養(yǎng)基稀釋至DMSO終濃度為0.1％和具有不同的試驗化合物濃度。
在一個96-孔微量滴定板(由Coming Glass Works制造)的每一孔中加入每孔50μl的濃度為4×10-5個細胞/每毫升D10.G4.1細胞，2×106個細胞/每毫升MMC處理過的產(chǎn)生抗原的細胞、400μg/每毫升作為抗原的伴清蛋白，以及溶于組織培養(yǎng)基的試驗化合物。再于5％CO2和37℃的條件下培溫48小時。培溫結(jié)束后，收集培養(yǎng)物的上層液體，離心分離細胞。用ENDOGEN生產(chǎn)的的IL-5酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)試劑盒測定上層液體中的IL-5。用50％抑制的濃度(IC50)來表示試驗化合物產(chǎn)生IL-5的抑制作用，見于以下表1。
表1試驗化合物 IC50(M)實施例1的化合物 2.7×10-7實施例2的化合物 1.2×10-7實施例3的化合物 1.2×10-7羅希紅霉素 9.3×10-7紅霉素 4.5×10-6實施例6向分成5組的ICR雄鼠經(jīng)口給藥實施例1、2和3的化合物。在100mg/kg的劑量水平時未觀察到死亡，證明這些化合物有高度的安全性。
權(quán)利要求
1.一種對白細胞介素5產(chǎn)生的抑制劑，該抑制劑含有作為活性成分的6-O-甲基紅霉素A9-[O-(2-氯苯甲基)肟]、6-O-甲基紅霉素A-9-[O-(3-甲氧基-4-叔丁基芐基)肟]11，12-環(huán)碳酸酯、11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-芐胺11-N，12-O-環(huán)甲氨酸酯，或其藥學上可接受的酸加成鹽。
2.6-O-甲基紅霉素A9-[O-(2-氯苯甲基)肟]、6-O-甲基紅霉素A-9-[O-(3-甲氧基-4-叔丁基芐基)肟]11，12-環(huán)碳酸酯、11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-芐胺11-N，12-O-環(huán)甲氨酸酯，或其藥學上可接受的酸加成鹽在制備對白細胞介素5的產(chǎn)生的抑制劑中的應用。
3.一種治療過敏性疾病的方法，該方法包括給藥6-O-甲基紅霉素A9-[O-(2-氯苯甲基)肟]、6-O-甲基紅霉素A-9-[O-(3-甲氧基-4-叔丁基芐基)肟]11，12-環(huán)碳酸酯、11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-芐胺11-N，12-O-環(huán)甲氨酸酯，或其藥學上可接受的酸加成鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供一種對白細胞介素5的產(chǎn)生有強有力的抑制活性的紅霉素衍生物，它是一種對白細胞介素5的產(chǎn)生的抑制劑，含有作為活性成分的6-O-甲基紅霉素A9-[O-(2-氯苯甲基)肟]、6-O-甲基紅霉素A-9-[O-(3-甲氧基-4-叔丁基芐基)肟]11，12-環(huán)碳酸酯、11-氨基-9-N，11-N-環(huán)1，2-亞乙基-9-去氧代-11-脫氧-6-O-甲基紅霉素A9-芐胺11-N，12-O-環(huán)甲氨酸酯，或其藥學上可接受的酸加成鹽。
文檔編號C07H17/08GK1159756SQ9519537
公開日1997年9月17日 申請日期1995年8月10日 優(yōu)先權(quán)日1994年8月12日
發(fā)明者星野明彥, 村政人, 朝賀俊文, 井上知之, 奧平博一 申請人:大正制藥株式會社