專利名稱：混合膠束的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型的混合膠束及含這種混合膠束的組合物。
由膽烷酸鹽、天然磷脂(如蛋類卵磷脂或大豆卵磷脂)形成的混合膠束以及含這種混合膠束的組合物是已知的(如Patent PublicationDE-A-2730570)。這種膠束體系可用于使難溶于水或不溶于水的活性物質(zhì)在水溶液中增溶。如用于藥用活性物質(zhì)在非腸道給藥配方中的增溶，以提高上述活性物質(zhì)與水溶性活性物在非腸道給藥配方中的兼容性(見EP-A-0280887)；或提高藥用活性物質(zhì)或化妝品對(duì)皮膚的滲透性(見EP-A-0439042)。天然磷脂中含有不飽和脂肪酸的存在可導(dǎo)致過(guò)氧化物的形成，即使添加抗氧化劑及螯合劑，這種過(guò)氧化物也會(huì)影響配料中對(duì)氧化敏感的活性物質(zhì)的穩(wěn)定性。相應(yīng)于天然的但含有飽和脂肪酸殘基的磷脂避免了形成過(guò)氧化物的缺點(diǎn)。但是，混合膠束只在臨界溫度(相轉(zhuǎn)變溫度)以上存在，具有飽和長(zhǎng)鏈脂肪酸殘基的磷脂的相轉(zhuǎn)變溫度顯著地高于大豆卵磷脂或蛋類卵磷脂(如完全氫化的大豆卵磷脂為約50℃而非氫化的大豆卵磷脂約為-18℃)。這一情況妨礙了如預(yù)氫化大豆卵磷脂在制造儲(chǔ)存溫度為室溫或低于室溫的混合膠束方面的應(yīng)用。
帶短鏈羧酸(＜C8)的卵磷脂具有低的相轉(zhuǎn)變溫度。因此，原則上混合膠束可在室溫下制備。但是這些卵磷脂具有高毒性或高溶血性，所以不能用于非腸道給藥；然而，已提出了由二己酰卵磷脂與蛋類卵磷脂或大豆卵磷脂形成的混合膠束這類申請(qǐng)(見EP-A-0011745)。
二月桂基磷脂膽堿(DLPC)的相轉(zhuǎn)變溫度為約0℃，其本身沒有溶血性。但它缺少蛋卵磷脂和大豆卵磷脂典型的抗溶血作用，而抗溶血作用對(duì)其在膽烷酸鹽混合膠束中的應(yīng)用又是很重要的，因此DLPC膽烷酸鹽混合膠束同樣不能用于非腸道給藥。
人們已經(jīng)驚奇地發(fā)現(xiàn)，用含帶支鏈的飽和脂肪酸殘基的磷脂可在常(室)溫或在低于室溫下形成混合膠束。
本發(fā)明因此涉及混合膠束，由下列成分形成a)帶支鏈飽和脂肪酸殘基的磷脂及b)膽烷酸鹽或二己酰卵磷脂。
本發(fā)明也涉及到這類混合膠束在使那些難溶于水或不溶于水的活性物質(zhì)在水溶液中增溶方面的應(yīng)用。例如，用于藥用活性物質(zhì)的非腸道給藥配方中以提高水溶性活性物質(zhì)與非水溶性物質(zhì)在非腸道給藥配方中的兼容性，或提高藥用活性物質(zhì)或化妝品對(duì)皮膚的滲透性以及用于蛋白質(zhì)如膜一界面受體(membrance-bound receptors)穩(wěn)定性的診斷中。
優(yōu)選的磷脂含帶支鏈的、直鏈上有14-20個(gè)碳原子的飽和脂肪酸殘基，其相轉(zhuǎn)變溫度低于20℃優(yōu)選低于10℃。支鏈可以是單個(gè)的或多個(gè)的，對(duì)于單個(gè)支鏈的飽和脂肪酸殘基來(lái)說(shuō)，如為甲基或乙基單取代的脂肪酸殘基是優(yōu)選的。在鏈的中部(如在8、10或12位碳原子上)有取代基的或支鏈的脂肪酸殘基是優(yōu)選的。此外，含直鏈上有奇數(shù)碳原子的脂肪酸殘基的磷脂是優(yōu)選的。根據(jù)本發(fā)明的帶支鏈飽和脂肪酸殘基的實(shí)例是10-甲基十九烷酰基、10-甲基硬脂?；?，8-甲基十七烷?；?、8-甲基十六烷酰基及10-乙基硬脂?；?。可用于本發(fā)明的磷脂的實(shí)例是1，2-二(10-甲基十九烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸，1，2-二(10-甲基硬脂酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸，1，2-二(8-甲基十七烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸，1，2-二(8-甲基十六烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸，1，2-二(10-乙基硬脂酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸，以及它們的對(duì)映體。根據(jù)本發(fā)明磷脂的其它實(shí)例是具有支鏈飽和脂肪酸殘基的磷脂酰乙醇胺，如1，2-二(10-甲基十九烷酰)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，1，2-二(10-甲基硬脂酰)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，1，2-二(8-甲基十七烷酰)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，1，2-二(8-甲基十六烷酰)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，及1，2-二(10-乙基硬脂酰)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。
1，2-二(10-甲基十九烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸是特別重要的，在冷凍條件下也可形成含此種膽堿磷酸的混合膠束。
根據(jù)本發(fā)明的混合膠束可由下列成分，即膽烷酸鹽或二己酰卵磷脂與含支鏈飽和脂肪酸殘基或十五烷酰殘基的磷脂，按照已知的方法(Patent Publications DE-A-2730570和WO90/08534中公開的)在水溶液中制備。例如，通過(guò)混合各個(gè)組分或?qū)⒛z束前體及活性物質(zhì)(必要時(shí)添加)溶解在有機(jī)溶劑(如二氯甲烷、乙醇和/或甲醇)中后，方便地用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，接著將殘?jiān)芙庠谒谢蛉芙庠谒幱幂o助劑(如緩沖液或等滲試劑)的水溶液中；或?qū)⒂坞x膽烷酸懸浮在水中并必要時(shí)外加藥用輔助劑和/或水溶性活性物質(zhì)，將磷脂和必要時(shí)的藥用活性物質(zhì)或化妝品分散在該懸浮液中并用堿(如堿金屬氫氧化物)中和產(chǎn)物。
含有膽烷酸鹽的混合膠束是優(yōu)選的。
根據(jù)本發(fā)明混合膠束所考慮的膽烷酸鹽的實(shí)例為堿金屬鹽如膽酸、甘氨膽酸、?；悄懰?、脫氧膽酸、甘氨或?；敲撗跄懰?、鵝脫氧膽酸以及甘氨或?；蛆Z脫氧膽酸的鈉鹽。甘氨膽酸鈉是優(yōu)選的。磷脂∶膽烷酸鹽的摩爾比約為0.1∶1至2∶1，優(yōu)選0.8∶1至1.5∶1。但是，膽烷酸鹽的濃度總應(yīng)高于具體的膽烷酸鹽的臨界膠束形成濃度(CMC)由1，2-二(10-甲基十九烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸及甘膽酸鈉形成的混合膠束是特別優(yōu)選的。
根據(jù)需要，根據(jù)本發(fā)明的混合膠束可含用于非腸道給藥、局部給藥或口服給藥的藥用活性物質(zhì)，特別是不溶于水或難溶于水的活性物質(zhì)，或含化妝品以及各種輔助劑如緩沖液(磷酸鹽、檸檬酸鹽或三羥甲基氨基甲烷緩沖液)、或等滲試劑(如氯化鈉、甘露糖醇、山梨醇或葡萄糖)，或防腐劑(如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯、苯甲醇或苯酚)。能存在于本發(fā)明混合膠束中的藥用活性物質(zhì)的實(shí)例有視黃素類化合物(如所有反式、13-順式和9-順式視黃酸及包括它們的芳香化合物的衍生物(如阿維A酯)，維生素K、維生素D及它們的衍生物，含過(guò)氧化物的活性的物質(zhì)(如青蒿素、arteflene及苯甲酰過(guò)氧化物)；水溶性的低分子及高分子活性物質(zhì)如嘧啶類似物(5-氟脲嘧啶)；肝素及蛋白質(zhì)。這類蛋白質(zhì)的實(shí)例有干擾素(IFN)(如IFN-α，IFN-β，IFN-γ)；混雜干擾素；介白細(xì)胞素(IL)(如IL-1(ETAF、LAF)、IL-2(TCGF)、IL-3(multi-CSF、MCGF)、IL-4(BSF-1、BCGF-2)、IL-5(TRF、BCGF-11)、IL-7(淋巴細(xì)胞生成素1)；淋巴細(xì)胞毒素(TNF-β)；巨噬細(xì)胞抑制因子(MIF)；胸腺生成素(TPO)；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(TGF-α)；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)；腫瘤壞死因子(TNF-α、Cachectin DIF)；uromodulin(Tamm-Horsfall蛋白質(zhì))；神經(jīng)白細(xì)胞素；CD4)；粒性細(xì)胞菌落刺激因子(G-CSF)，粒性細(xì)胞巨噬細(xì)胞菌落刺激因子(GM-CSF、CSF-2)，巨噬細(xì)胞菌落刺激因子(CSF-1，M-CSF)；抗體或抗體一藥物結(jié)合，雜化蛋白質(zhì)(如IL-2白喉毒素及制備抗艾滋病毒、抗瘧疾、抗肝炎、抗皰疹、抗流行性感冒、抗脊髓灰質(zhì)炎以及抗其它傳染疾病疫苗的蛋白質(zhì))。
能存在于本發(fā)明混合膠束中的化妝品實(shí)例為維生素E、泛酰醇及保濕劑(如乳酸、吡咯烷酮羧酸及它們的鹽)。
根據(jù)本發(fā)明的混合膠束可存在于水溶液中或可存在于有機(jī)一水溶液中或以這類溶液的冷凍干燥物存在?；旌夏z束在水溶液中的濃度可高達(dá)約200mg磷脂/ml。該混合膠束溶液可含藥用活性物質(zhì)或化妝品的優(yōu)選量至多約20mg/ml。
具有支鏈脂肪酸殘基的磷脂是眾所周知的。它們存在于如母乳中及皮膚脂質(zhì)中。它們的制備方法正如下文或類似文獻(xiàn)中所述的，用相應(yīng)的帶支鏈飽和脂肪酸與甘油進(jìn)行部分酯化而得到二酸酯，然后對(duì)二酸酯進(jìn)行磷酸化再與適當(dāng)?shù)哪憠A鹽(如甲苯磺酸膽堿)發(fā)生反應(yīng)。
用下列實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作更詳細(xì)的說(shuō)明。
實(shí)施例11，2-二(10-甲基十九烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸的制備
a)向90.2g 10-甲基十九烷酸(70％)和21.0g(R)-芐氧基-1，2-丙二醇在2升二氯甲烷中的溶液中加入59.8g二環(huán)己基碳化二亞胺及35.4g 4-二甲氨基吡啶。然后，在室溫下攪拌該混合物24小時(shí)。過(guò)濾析出的脲，用正己烷漂洗三次，每次200ml正己烷，合并濾液并于35℃及水噴射泵真空條件下濃縮。粗產(chǎn)品用500ml正己烷處理，邊攪拌邊溫?zé)嶂?0℃，其后在攪拌下冷卻至0-5℃。將析出的脲用250ml正己烷漂洗，濾液在35℃及水噴射泵真空度下蒸發(fā)。將殘留物溶解在210ml正己烷中并用約23升正己烷/乙酸乙酯(95∶5)，以2.5千克硅膠(10.5升正己烷中)進(jìn)行色層分離。合并含產(chǎn)物的餾分、濃縮，并溶解在100ml甲苯中，用4千克硅膠色層分離提純，首先用約35升甲苯、然后用約15升正己烷/乙酸乙酯(95∶5)洗提。合并按色層分離相同的餾分并在40℃及水噴射泵真空條件下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮。
b)由(a)所得的56.5g二酯溶解在2升乙酸乙酯中，在室溫下用5.6g5％鈀/碳進(jìn)行處理、過(guò)夜。反應(yīng)混合物在300g硫酸鈉上過(guò)濾，用1.5升乙酸乙酯漂洗。合并的乙酸乙酯相于40℃在水噴射泵真空條件下濃縮，得到淡黃色油狀物。
c)在氬氣氛下，于室溫、邊攪拌邊將由b)所得的20g油狀物溶解在280ml氯仿中。接著，在室溫下邊攪拌邊加入4ml(43.6mmol)磷酰氯，2分鐘后加入5.2ml(43.6mmol)喹啉。反應(yīng)混合物在30℃攪拌2小時(shí)，然后冷卻到室溫，接著先用17.8g喹啉甲苯磺酸鹽、再用16.8ml吡啶處理。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜(16-18小時(shí))。然后在攪拌下于5分鐘內(nèi)向反應(yīng)混合物滴加44ml去離子水，接著用11.5g碳酸氫鈉處理反應(yīng)混合物并攪拌30分鐘。用250ml氯仿和100ml甲醇處理反應(yīng)混合物并猛烈搖動(dòng)，分離出有機(jī)相，連續(xù)地用260ml去離子水/甲醇(8∶5)，290ml 1N鹽酸/甲醇(16∶13)，320ml去離子水/甲醇(1∶1)及320ml去離子水/甲醇(1∶1)洗滌。水相逐次用100ml氯仿回洗。合并的氯仿相在硫酸鈉上干燥，并在40℃水噴射泵真空條件下濃縮。油狀殘留物吸收在300ml甲醇中，在30-35℃攪拌10分鐘，然后冷卻至0℃并在該溫度下攪拌1小時(shí)。在冰浴中放置20分鐘后，分離出沉積的油狀物。將澄清的濾液冷卻至-5℃并在此溫度下放置10分鐘，再分離出沉積的油狀物。上層清液于40℃在水噴射泵真空條件下濃縮。殘留物溶解于100ml二乙基醚中并在攪拌下用150ml丙酮處理，在35℃除去醚，油相用130ml二乙基醚溶解并用120ml丙酮處理。在35℃除去醚后，殘留物用50ml丙酮處理，冷卻至18℃潷去丙酮。由此得到的油狀1，2-二(10-甲基十九烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷脂，于室溫在1mbar真空條件下干燥。
實(shí)施例2混合膠束溶液的制備由含20m10.1M 1，2-二(10-甲基十九烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸的二氯甲烷溶液與20ml0.1M甘膽酸鈉的甲醇溶液的原料液，經(jīng)蒸發(fā)溶劑，用2ml軟化水溶解留下的殘留物(象一薄層)而制得混合膠束溶液。
實(shí)施例3包括下列組分的混合膠束溶液(常規(guī)的及根據(jù)本發(fā)明的)的制備
/01 /02 /03 /04 /059-順式-視黃酸 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5mg乙醇 94％(w/w) 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0mg甘氨膽酸 88.5 88.5 88.5 88.5 88.5mg異卵磷脂*163 163 mg大豆卵磷脂 152 152 152mg用NaoH調(diào)整 pH6.0 pH6.0 pH6.0 pH6.0 pH6.0苯甲醇10.0 10.0 10.0 10.0 10.0mgdl-α-維生素E -- 10.0-- 10.0 10.0μg抗壞血酸-- 50.0---- 50.0μg水 ad 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0ml*1，2-二-(10-甲基十九烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸為了制備該溶液，乙醇和水是經(jīng)脫氣的，所有操作都在紅光和氮?dú)夥障逻M(jìn)行。將水溶性賦形劑溶于水中并調(diào)整PH至6.0，將9-順式-視黃酸和維生素E溶于乙醇中。向卵磷脂乙醇溶液添加水溶性物質(zhì)溶液，并攪拌至形成清沏的溶液(18小時(shí))。然后添加9-順式-視黃酸乙醇溶液，并調(diào)整其體積。由此得到的混合膠束溶液裝入帶聚四氟乙烯塞子的燒瓶中并在120℃滅菌20分鐘。上列溶液在不同溫度下儲(chǔ)存三個(gè)月后，由表1可見，該溶液中9-順式-視黃酸的化學(xué)穩(wěn)定性是明顯的。結(jié)果表明，與常規(guī)溶液相對(duì)比本發(fā)明溶液中的9-順式-視黃酸沒有發(fā)生氧化降解。根據(jù)本發(fā)明溶液中的9-順式-視黃酸經(jīng)滅菌后的損失不是由于氧化降解造成的，而是由于異構(gòu)化產(chǎn)生了異物體所致。
此外，可以表明，根據(jù)本發(fā)明的混合膠束(如實(shí)施例3所述的配方/02)在其溶血性活性及抗溶血性活性方面可比得上常規(guī)混合膠束(如實(shí)施例3中配方/05)。
表1 混合膠束中9-順式-視黃酸的化學(xué)穩(wěn)定性<
toc維生素Easc抗壞血酸ster滅菌
權(quán)利要求
1.由下列成分構(gòu)成的混合膠束a)具有支鏈飽和脂肪酸殘基的磷脂，及b)膽烷酸鹽或二己酰卵磷脂。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的混合膠束，其中支鏈脂肪酸殘基的直鏈部分碳鏈含14至20個(gè)碳原子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的混合膠束，其中支鏈脂肪酸殘基的直鏈部分碳鏈的碳原子數(shù)為奇數(shù)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3的混合膠束，其中支鏈脂肪酸殘基是甲基或乙基單取代的脂肪酸殘基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4的混合膠束的相轉(zhuǎn)變溫度低于20℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5的混合膠束，其中磷脂是1，2-二(10-甲基十九烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸，1，2-二(10-甲基硬脂酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸，1，2-二(8-甲基十七烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸，1，2-二(8-甲基十六烷酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸，或1，2-二(10-乙基硬脂酰)-sn-甘油基-3-膽堿磷酸，或它們的對(duì)映體或相應(yīng)的磷酸乙醇胺。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6的混合膠束，它含有膽烷酸鹽。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7的混合膠束，它含有藥用活性物質(zhì)或化妝品。
9.含有根據(jù)權(quán)利要求1-7的混合膠束的水液組合物及其冷凍干燥物。
10.制備根據(jù)權(quán)利要求1-9的混合膠束的方法，該方法包括混合各個(gè)組分或?qū)⒛z束前體及必要時(shí)添加的活性物質(zhì)溶于有機(jī)溶劑中(如二氯甲烷、乙醇和/或甲醇)，方便地用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑)，將殘留物溶解于水中或溶解于藥用輔助劑的水溶液(如緩沖液或等滲試劑)中；或?qū)⒂坞x膽烷酸懸浮在水中，必要時(shí)外加藥用輔助劑和/或水溶性活性物質(zhì)，將磷脂和必要時(shí)添加的藥用活性物質(zhì)或化妝品分散在懸浮液中，并用堿中和產(chǎn)物。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-7的混合膠束用于非腸道給藥配方中難溶于水或不溶于水的藥用活性物質(zhì)在水溶液中的增溶，以提高上述活性物質(zhì)與水溶性活性物質(zhì)在非腸道給藥配方中的兼容性或提高藥用活性物質(zhì)或化妝品對(duì)皮膚的滲透性的應(yīng)用。
全文摘要
供難溶于水或不溶于水的活性物質(zhì)在水溶液中增溶并提高活性物質(zhì)儲(chǔ)存穩(wěn)定性的混合膠束，是由帶支鏈飽和脂肪酸殘基或帶十五烷酰殘基的磷脂與膽烷酸鹽或二己酰卵磷脂所組成。
文檔編號(hào)C07F9/00GK1138585SQ9610219
公開日1996年12月25日 申請(qǐng)日期1996年3月6日 優(yōu)先權(quán)日1995年3月7日
發(fā)明者F·皮特羅夫, H·斯蒂芬 申請(qǐng)人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司