專利名稱：作為多巴胺受體的配體的新的稠合異喹啉的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及多巴胺受體的新配體。更具體的說，本發(fā)明涉及任意取代的四氫-1H-萘并〔1，2，3-de〕異喹啉化合物和它們在治療與多巴胺相關的中樞和外周神經系統(tǒng)機能障礙的藥物配方中的應用。
背景技術：
與發(fā)明概述多巴胺，一種中樞神經系統(tǒng)的神經遞質，與許多神經病學的病癥有關。例如曾經假設對多巴胺受體亞型的過多刺激與精神分裂癥有關。另外，普遍認為在中樞和/或外周神經系統(tǒng)的過多或不足功能的多巴胺能活性可以導致高血壓，發(fā)作性睡眠，和其它行為的，神經病學的，生理的和運動的障礙，包括帕金森氏病，一種慢性、進行性的以不能控制隨意運動系統(tǒng)為特征的疾病。
基于藥理學的和功能的證據，傳統(tǒng)上將多巴胺受體分為兩族(D1和D2)之一。D1受體優(yōu)先識別苯基四氫苯并氮雜類并導致腺苷酸環(huán)化酶的刺激，而D2受體識別丙基芐基酮類和苯甲酰胺類并且負(negatively)(或完全不)偶聯(lián)到腺苷酸環(huán)化酶。目前已知存在有多巴胺受體的一些亞型并且至少有五種基因編碼的多巴胺受體亞型D1、D2、D3、D4和D5。然而傳統(tǒng)的分類方法仍有用，如D1-類組包括D1(D1A)和D5(D1B)受體，而D2-類組包括D2，D3和D4受體。
對多巴胺受體表現出親和性的中樞神經系統(tǒng)藥物通常不僅由它們的受體選擇性，還由它們的激動劑(受體刺激)或拮抗劑(受體阻斷)活性來分類的。雖然和多巴胺與不同受體亞型間的相互作用相關的生理活性并未完全了解，但已經知道配體顯示出對一種特定的受體亞型的選擇性將產生或多或少可預期的神經藥物結果。選擇性多巴胺受體拮抗劑和激動劑化合物的獲得將使設計實驗以增加對D1受體多重功能作用的了解成為可能，并且導致產生對各種中樞和外周神經系統(tǒng)病癥的新的治療法。
起初，對多巴胺受體的研究集中于D2族，然而多巴胺D1受體在神經系統(tǒng)功能中的關鍵作用最近已變得明顯。對選擇性D1受體的配體的先前工作主要集中在來自單一化學種類的分子，苯基四氫苯并氮雜類，如拮抗劑SCH 23390(1)
一些苯基四氫苯并氮雜已被發(fā)現為D1受體激動劑；然而，從這一種類衍生的激動劑(包括例如SKF 38393(+)-2)通常缺少完全的內在效能。即使是SKF 82958，據稱是一種完全激動劑，最近表明在降低的受體貯量的標本中并不具有完全的內在效能。而完全效能的和部分效能的激動劑之間的區(qū)別對醫(yī)藥研究團體是重要的，這是因為這些化合物對復雜的中樞神經系統(tǒng)介導的事態(tài)有著不同的影響。例如，dihydrexidine和完全激動劑A-77636，在MPTP-處理的猴模型中有特別的抗-帕金森氏病的效果，而都分激動劑卻沒有明顯的活性。更新的數據表明完全和部分激動劑在其它的復雜神經功能中的影響也有不同。
因此，研究者致力于設計的配體是完全激動劑，它具有完全的內在效能。一個這樣的化合物是dihydrexidine(3)，如下式的六氫苯并〔a〕菲啶
dihydrexidine(3)的結構與其它D1激動劑不同，因為附加的環(huán)系是被栓住的，這使得分子相對剛性。dihydrexidine(3)的分子模型研究表明，該化合物具有有限數目的低能量構象，在所有的這些構象中芳香環(huán)處于相對共平面的排列。最近對dihydrexidine(3)活性對映體的構型的闡明與從該模型的預言相符合的。
不同于其它的高親合力，高度內在活性的D1激動劑如3位取代的氨基甲基異苯并二氫吡喃類，dihydrexidine(3)提供了半剛性模板來發(fā)展多巴胺配體模型。該模型的重要特征包括存在有一個反向β-苯基多巴胺部分，在堿性氮原子上有平伏鍵指向的孤電子對，和與兒茶酚環(huán)近于共平面的下垂的苯環(huán)。以dihydrexidine為基礎的模型有反向β-苯基多巴胺部分，而具有多巴胺作用的苯基四氫苯并氮雜類有順向的β-苯基多巴胺構象。以dihydrexidine為基礎的模型已作為設計其它的D1受體激動劑的基礎。設計并合成具有高度內在活性的D1受體激動劑，對醫(yī)藥研究團體是重要，因為完全激動劑對治療復雜中樞神經系統(tǒng)介導的事態(tài)以及涉及外周多巴胺受體的狀況有著潛在的應用價值。例如，本發(fā)明的組合物作為降低血壓的試劑有著潛在的應用價值。
本發(fā)明的一個實施方案是一類如下通式的新的多巴胺受體激動劑
和其可藥用的鹽，和該化合物的藥物配方。本發(fā)明化合物可用于治療，中樞神經系統(tǒng)與多巴胺相關的機能障礙以及涉及外周多巴胺受體的病情的患者，表現為明顯的神經病學的、心理學的、生理的、或行為的病癥。附圖簡述

圖1描述反應流程圖1的化學反應步驟，將O-甲基苯甲酸乙酯轉變成2-甲基-2，3-二氫-4(1H)-異喹諾酮。試劑a)NBS，過氧化苯甲酰，CCl4，回流；b)肌氨酸乙酯HCl，K2CO3，丙酮；c)NaOEt，EtOH，回流，ii.HCl，回流。
圖2描述反應流程圖2的化學反應步驟，將2，3-二甲氧基-N，N′-二乙基苯甲酰胺轉變至dinapsoline試劑a)i.仲丁基鋰，TMEDA，Et2O，-78℃，ii.化合物7，iii.TsOH，甲苯，回流；b)i.1-氯乙基氯甲酸酯，(CH2Cl)2，ii.CH3OH；c)TsCl，Et3N；d)H2/pd-C，HOAc；e)BH3-THF；f)濃H2SO4，-40℃至-5℃；g)Na-Hg，CH3OH，Na2HPO4；h)BBr3，CH2Cl2。
圖3是dinapsoline(三角形)，(+)-dihydrexidine(正方形)和(+)-SCH23390(實心圓)對紋狀體D1受體親和力的圖示。大鼠紋狀體D1受體用[3H]SCH 23390(1)標記，加入未標記的dinapsoline，(+)-dihydrexidine或(+)-SCH 23390以測定每個化合物對D1受體的特異結合。
圖4是dinapsoline(4)，(+)-dihydrexidine〔(+)-3〕和(+)-SKF 38393〔(+)-2〕在大鼠紋狀體勻漿中相對于多巴胺刺激cAMP聚積的能力的圖示。
圖5是dinapsoline(4)，(+)-dihydrexidine〔(+)-3〕和(+)-SKF 38393〔(+)-2〕在C-6神經膠質瘤細胞(表達主要D1A受體)中相對于多巴胺刺激cAMP聚積的能力的圖示。
圖6是dinapsoline(三角形)，(+)-dihydrexidine(正方形)和(+)-SCH23390(實心圓)對紋狀體D2是受體親和力的圖示。大鼠紋狀體D2受體用〔3H〕SCH 23390標記，加入未標記的dinapsoline，(+)-dihydrexidine或(+)-SCH 23390以測定每個化合物對D2受體的特異結合。發(fā)明詳述這里提供按本發(fā)明的通式(I)的化合物
和其可供藥用的鹽，其中R和R5是氫或C1-C4的烷基；R1是氫，C1-C4的烷基或苯氧基保護基團；X是氫，鹵素或式-OR6的基團，其中R6為氫，C1-C4烷基或苯氧基保護基團，并且R2，R3和R4是獨立地選自包括氫，C1-C4烷基，苯基，鹵素，或-OR1的基團，其中R1如上述定義，并且當X是式-OR6的基團時，基團R1和R6可以一起形成式-CH2-的基團。
這里使用的用語“C1-C4烷基”指的是分支的或直鏈的烷烴基團，包括一個至四個碳原子，包括，但并不局限于，甲基，乙基，丙基，異丙基，亞丁基，叔丁基和環(huán)丙基甲基。
用語“可供藥用的鹽”指的是用有機或無機酸形成的那些鹽，而這些鹽對人或低等動物無不希望的毒性，刺激性，過敏性反應等。與具有胺官能團的生物活性化合物適于形成可供藥用的鹽的酸是本領域中眾所周知的。這些鹽可以依照常規(guī)方法在本發(fā)明化合物的最后分離和純化中就地制備，或通過用適宜成鹽的酸與以游離堿形式分離的化合物反應加以制備。
這里使用的用語“苯氧基保護基團”指的是酚的氧上的取代基，它在合成中防止不希望的反應和降解并且以后可以除去而不影響分子中其它的官能團。這樣的保護基團和它們應用和除去的方法在本領域中是眾所周知的。它們包括醚類，例如環(huán)丙基甲基，環(huán)己基，烯丙基醚等；烷氧烷基醚例如甲氧基甲基或甲氧基乙氧基甲基醚等；烷硫基烷基醚或甲硫基甲基醚；四氫吡喃基醚；芳基烷基醚例如芐基，鄰-硝基芐基，對甲氧基芐基，9-蒽基甲基，4-吡啶甲基醚等；三烷基硅醚例如三甲基硅烷基，三乙基硅烷基，叔丁基二甲基硅烷基，叔丁基二苯基硅烷基醚等；烷基和芳基酯例如乙酸酯，丙酸酯，正丁酸酯，異丁酸酯，三甲基乙酸酯，苯甲酸酯等；碳酸酯例如甲基，乙基，2，2，2-三氯乙基，2-三甲基硅烷基乙基，芐基等的酯；和氨基甲酸酯例如甲基，異丁基，苯基，芐基，二甲基等的酯。
這里使用的用語“C1-C4烷氧基”指的是分支的或直鏈烷基基團，包括一個至四個碳原子通過一個氧原子結合，它包括但并不局限于，甲氧基，乙氧基，丙氧基和叔丁氧基。
此外，按照本發(fā)明的其它實施方案，本發(fā)明化合物可在常規(guī)的藥物劑型中配制，并用于治療患有多巴胺相關的中樞或外周神經系統(tǒng)功能障礙的患者的方法中。本發(fā)明化合物的有效劑量取決于許多因素，包括治療的適應癥，給藥途經，和病人的總的狀況。對于口服給藥，例如，本發(fā)明化合物的有效劑量預期范圍從約0.1至約50mg/kg，更典型的是約0.5至約25mg/kg。腸胃外的有效劑量范圍從約0.01至約5mg/kg體重。通常，本發(fā)明化合物所用的治療程序包括每天以多次劑量或單一劑量施用從約1mg至約500mg的本發(fā)明的化合物。
用于口服給藥的液體劑型可以包括可供藥用的乳劑，微乳劑，溶液劑，懸浮劑，和糖漿劑。包含有在本領域中經常使用的惰性稀釋劑，例如水。這樣的組合物也可以包括輔料如潤濕劑，乳化和懸浮劑，甜味，和調味劑。本發(fā)明的化合物的可注射制劑可利用本領域認可的產品來配制，這是通過將效劑量的化合物分散或溶解在可供腸胃外用的稀釋劑例如水，或更優(yōu)選為等滲的氯化鈉水溶液中加以配制。腸胃外配方可使用本領域認可的微過濾技術滅菌。
本發(fā)明的化合物亦可配制成固體劑型供口服給藥，如膠囊，片劑，粉劑，丸劑等。典型的是將活性化合物與惰性稀釋劑或載體例如糖或淀粉和其它合適于劑型的賦形劑相混合。因此片劑的配方將包括可接受的潤滑劑，粘合劑和/或崩解劑。粉劑組合物任選地包括將本發(fā)明的一種活性化合物和，例如，淀粉或糖載體填入至明膠膠囊中供口服給藥。本發(fā)明的化合物的其它劑型可使用本領域認可的技術配制成適用于特定給藥方式的劑型。
按本發(fā)明提供的一種化合物是(±)-8，9-二羥基-2，3，7，11b-四氫-1H-萘并〔1，2，3-de〕異喹啉，在此后命名為“dinapsoline”。Dinapsoline是依照圖1和2中一般描述的過程，從2-甲基-2，3-二氫-4(1H)-異喹諾酮合成的。在過氧化苯甲酰存在下，用NBS側鏈溴化O-甲苯甲酸乙酯(5a)生成化合物5b。用化合物5b烷基化肌氨酸乙酯得到化合物6，在迪克曼(Dieckmann)縮合后并隨之酸性水解脫羧得到化合物7。
如反應流程圖2(圖2)所示，用仲丁基鋰/TMEDA在乙醚中于-78℃對鄰位鋰代2，3-二甲氧基-N，N′-二乙基苯甲酰胺(8)并將該鋰化物與化合物7縮合，隨之與對甲苯磺酸一起回流得到螺內酯9，中等產率。用1-氯乙基氯甲酸酯對9N-去甲基化，隨之甲醇解中間體，得到化合物10，再用對甲苯磺酰氯和三乙基胺處理得到化合物11。
曾試圖合成化合物11，即，直接通過用鋰化的化合物8在THF或乙醚中與2-對甲苯磺?；?2，3-二氫-4(1H)-異喹諾酮縮合，隨之用酸內酯化，僅得到極少量(＜5％)的化合物11。在堿性反應條件下2-對-甲苯磺?；?2，3-二氫-4(1H)-異喹諾酮的烯醇化是對低收率的一個明顯的解釋。
在10％鈀/碳存在下，在冰醋酸中氫解化合物11得到化合物12，用乙硼烷還原得到中間體化合物13。用濃硫酸在低溫下環(huán)化化合物13得到化合物14。用Na/Hg在磷酸氫二鈉緩沖的甲醇中對化合物14進行N-去甲苯磺?；玫交衔?5。最后，用三溴化硼處理化合物15使甲基醚斷裂得到dinapsoline(4)，為其氫溴酸鹽。
對(+)-反式-10，11-二羥基-5，6，6a，7，8，12b-六氫苯并〔a〕菲啶〔(+)-dihydrexidine〕和dinapsoline的11bR對映體〔它與(+)-dihydrexidine在其12bS手性中心同手性〕，比較了它們的低能量構象的空間填充表示(Space-filling representations)。兩個主要結構特征是顯而易見的。第一，dihydrexidine(3)中由C(7)-C(8)亞乙基橋所給出的立體位阻被去除了。第二，下垂的苯基環(huán)與兒茶酚環(huán)的平面的角度略有改變。這是最明顯的，從正面看，在dihydrexidine(3)芳香氫H(1)的位置突出于兒茶酚環(huán)之上。然而，在dinapsoline中，這個位置被用于通過亞甲基單位將下垂的苯基環(huán)與兒茶酚環(huán)相栓??；這迫使下垂的苯基環(huán)相對于dihydrexidine(3)，向順時針方面扭轉，當從上方觀察時。氨基也在相似的位置，給予雜環(huán)一定的構象柔韌性。另外，兩個分子均可在平伏鍵方向存在一個N-H矢量，這是藥效基團的特征，據信對D1受體激動劑是重要的。同那些觀察相一致，這兩個分子的藥理性質是相似的。
進行實驗以測定dinapsoline在D1受體上的結合。對大鼠紋狀體的D1受體，發(fā)現dinapsoline有著同dihydrexidine(3)幾乎一致的親合力(Ki＝5.9nM)。另外，使用非標記的SCH 23390(1)作為競爭劑的競爭實驗表明dinapsoline以高親合力競爭，具有淺的(shallow)競爭曲線(nH＝0.66)，表明為激動劑性質(見圖3)。在體外實驗中通過測量dinapsoline在大鼠紋狀體和C-6-mD1細胞(見下面所示的實驗數據)中dinapsoline增加了cAMP生成的能力，證實了dinapsoline在D1受體上的激動劑性質。在大鼠紋狀體和C-6-mD1細胞中，dinapsoline具有完全激動劑活性，通過D1受體在刺激cAMP合成中其EC50約為30nM。
因此藥理數據確認dinapsoline對〔3H〕SCH 23390標記的多巴胺D1受體有高的親合力，而這幾乎與(+)-反式-10，11-二羥基-5，6，6a，7，8，12b-六氫苯并〔a〕菲啶(dihyrexidine)相等。另外(±)-8，9-二羥基-2，3，7，11b-四氫-1H-萘并〔1，2，3-de〕-異喹啉〔dinapsoline〕，在大鼠紋狀體的膜和克隆表達的主要的D1A受體中相對于多巴胺是完全的激動劑，并同dihydrexidine(3)相似但不象部分激動劑(+)-SKF38393(見圖4與圖5(+)-SKF38393＝(+)-2；(±)-反式-10，11-二羥基-5，6，6a，7，8，12b-六氫苯并〔a〕菲啶＝(±)-3，和(±)-8，9-二羥基-2，3，7，11b-四氫-1H-萘并〔1，2，3-de〕異喹啉＝4)。
基于下面的D1藥效基團的模型，可以預期外消旋體dinapsoline(和其取代的類似物)的親合性和內在活性都只存在于其對映體之一11bR的絕對構型中(和它的同手性類似物)。使用本領域認可的分離技術拆分外消旋體，預期得到dinapsoline的一個異構體，它有著約兩倍于消旋體表現出的D1親合性，這樣使得它對D1受體的親合性類似于(+)-反式-10，11-二羥基-5，6，6a，7，8，12b-六氫苯并〔a〕菲啶。
如圖3和表1所示，dinapsoline要比dihydrxidine對D2-類受體有更強的親合性。首次合成dihydrxidine時，預期它可能對D1受體比對D2-類受體有相當的選擇性。然而，測定dihydrexidine只有約10倍的D1∶D2的選擇性。此外，dihydrexidine在有預期的多巴胺激動劑活性的同時，也具有不尋常的性質，在這里稱為“功能的選擇性”。具體地說，在大鼠(在體內或在體外)中，dihydrexidine作為激動劑作用于位于突觸后的D2-類受體，但是作為拮抗劑作用于位于突觸前的D2-類受體。之所以如此據信是由于位于突觸后的配體-受體-G蛋白復合體與突觸前的有所不同，如測定存在于給定的細胞環(huán)境中的特異G蛋白所示。
已經指出，dihydrexidine的這些D2性質存在于同樣的對映體(即，6aR，12bS)中，它是在D1受體上高度親合的完全激動劑。以此為基礎，期望dinapsoline的D1和D2性質也都存在于同手性對映體中。dinapsoline的光學異構體，和合適的類似物，構成重要的工具以研究“功能的選擇性”這一現象。
以前已有報道，在帕金森氏疾病的MPTP模型中，dihydrexidine的抗帕金森氏病的效果，并且預期dinapsoline將表現出相似的效果。因此，dinapsoline和其衍生物對帕金森氏病和在多巴胺受體的紊亂可治療的情況中它們有著潛在的臨床效用價值。此外，亦有報道，對dihydrexidine的適當修飾將產生一些類似物它們可以多巴胺受體族特異的亞群為靶目標。對dinapsoline同樣的策略應產生具有新的受體亞型選擇性和/或功能化特征的化合物。
在以下所述的試驗方法中，熔點用Thomas Hoover熔點儀測定并且未校正。1H NMR譜是用Varian VXR 500S(500MHz)NMR儀記錄的并且報導的化學位移是相對于TMS的δ值(ppm)。IR譜是以KBr壓片或液膜用Perkin Elmer 1600系列FTIR分光計記錄的?；瘜W電離質譜(CIMS)用Finnigan 4000四極質譜儀記錄。高分辨CI譜在Kratos MS50質譜儀上記錄。無素分析數據獲得自普渡大學的微量分析實驗室，WestLafayette，IN。
THF在使用前，臨時于氮氣中從二苯酮-鈉蒸餾而得；1，2-二氯乙烷在使用前從五氧化二磷中蒸餾得到。
實例12-甲基-2，3-二氫-4(1H)-異喹諾酮的制備2-溴甲基苯甲酸乙酯(5b)。
將O-甲基苯甲酸乙酯(41.2g，0.25mole)的四氯化碳(200mL)溶液在0℃下逐滴加入攪拌著的過氧化苯甲酰(100mg)，四氯化碳(200mL)和NBS(44.5g，0.25mole)的混合物中。在氮氣下加熱回流混合物3.5小時，放置過夜使冷至室溫。過濾除去沉淀的琥珀酰亞胺并用四氯化碳洗滌濾餅。將合并的濾液相繼用2N NaOH(100mL)，和水(2×100mL)洗滌，并用無水MgSO4干燥溶液，過濾(硅藻土)，真空蒸發(fā)得到油狀產品。高真空下干燥過夜得到化合物5b的粗品60.5g(99％)；產品的1HNMR表明存有約15％未反應的起始原料。因為該混合物用色譜法或真空蒸餾法不易分離，所以沒有進一步分離即用于下一步驟。1H NMR(CDCl3)δ1.43(t，J＝7Hz，3H，CH2CH3)，4.41(q，J＝7Hz，2H，CH2CH3)，4.96(s，1H，CH2Br)，7.24(m，1H，ArH)，7.38(m，1H，ArH)，7.48(m，2H，ArH)。
N-(2-乙氧羰基)肌氨酸乙酯(6)。
于室溫和氮氣下，向肌氨酸乙酯鹽酸(32.2g，0.21mole)，碳酸鉀(325目；86.9g，0.63mole)，和丙酮(800mL)的混合物中，加入化合物5b(60.7g；獲得自0.25mole的O-甲基苯甲酸乙酯；85％轉化至化合物6；計算為0.21mol)的丙酮(100mL)溶液。將該混合物攪拌回流2小時并隨之置于室溫20小時。過濾(硅藻土)除去固體并用丙酮洗滌殘留物。合并濾液并在減壓下蒸發(fā)，得到油狀物。將油狀物溶于250mL 3N HCl中并用乙醚洗滌。用NaHCO3水溶液堿化水層，并用乙醚(3×250mL)萃取。蒸發(fā)乙醚溶液得到油狀物，真空蒸餾給出45.33g(77％)的化合物6bp140-142℃(0.5mm Hg)[bp182-183℃(10mm Hg)]；1H NMR(CDCl3)δ1.24(t，3H，J＝7.1Hz，CH3)，1.36(t，3H，J＝7.1Hz，CH3)，2.35(s，3H，NCH3)，3.27(s，2H，CH2Ar)，4.00(s，2H，NCH2)，4.14(q，2H，J＝7.1Hz，CH2CH3)，4.32(q，2H，J＝7.1Hz，CH2CH3)，7.28(t，1H，J＝7.4Hz，ArH)，7.42(t，1H，J＝7.6Hz，ArH)，7.52(d，1H，J＝7.8Hz，ArH)，7.74(d，1H，J＝7.7Hz，ArH).
2-甲基-2，3-二氫-4(H)異喹諾酮(7)。
將新切的鈉(10.9g，0.47克原子〕在氮氣中加入至無水乙醇(110mL)中并將反應混合物加熱至回流。金屬鈉消失后，向反應混合物中緩慢加入化合物6(35.9g，0.128mole)在干燥甲苯(160mL)的溶液。然后加熱回流并將乙醇通過迪安-斯達克榻分水器共沸分離。冷卻后，溶劑在減壓下蒸發(fā)。將剩余的黃色半固體殘留物溶解于水(5mL)，95％乙醇(60mL)，和濃鹽酸(240mL)的混合物中，并加熱回流26小時。冷卻后，混合物在真空下濃縮并用固體NaHCO3小心地堿化。將堿性溶液用乙醚萃取，干燥(MgSO4)，并蒸發(fā)至油狀物，蒸餾后者得到化合物7(17.11g，83％)bp130-132℃(5mm Hg)(bp 81-83℃(0.4mm Hg)；mp(HCl)250℃]；IR(neat)1694(C＝O)cm-1；1H NMR(CDCl3)δ2.48(s，3H，CH3)，3.31(s，2H，CH2)，3.74(s，2H，CH2)，7.22(d，1H，J＝7.7Hz，ArH)，7.34(t，1H，J＝7.9Hz，ArH)，7.50(t，1H，J＝7.5Hz，ArH)，8.02(d，1H，J＝7.9Hz，ArH).8，9-二羥基-2，3，7，11b-四氫-1H-萘并-(1，2，3-de)異喹啉的合成于-78℃在氮氣下，向2，3-二甲氧基-N，N’一二乙基苯甲酰氨(化合物8)(14.94g，63mmol)的乙醚(1400mL)溶液中通過橡膠隔膜經注射器順序逐滴加入，N，N，N′，N′-四甲基乙二胺(TMEDA，9.45mL，63mmol)，仲丁基鋰(53.3ml，69mmol，1.3M的己烷溶液〕。1小時后，加入新蒸餾的化合物7(10.1g，62.7mmol)至多相的混合物中。移去冷卻浴并使反應混合物經9小時溫至室溫。然后加入飽和的NH4Cl溶液(400mL)并攪拌混合物15分鐘。分離乙醚層并將水層用二氯甲烷(4×100mL)萃取。合并有機層，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)至棕色油狀物。溶解該油狀物于甲苯(500mL)中，和3.0g的對甲苯磺酸一起加熱回流8小時，冷卻，并在真空下濃縮。將殘留物溶于二氯甲烷中，用稀的NaHCO3水溶液和水分別洗滌，然后干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)得到膠狀殘留物。與乙酸乙酯-己烷(50∶50)研制后，沉淀出固體。從乙酸乙酯-己烷重結晶得到12.75g(63％)的化合物9(2′，3′-二氫-4，5-二甲氧基-2′-甲基螺[異苯并呋喃-1(3H)-4′(1′H)異喹啉]-3-酮)mp 193-194℃；IR(KBr)1752cm-1(C＝O)；1H NMR(CDCl3)δ2.47(s，3H，NCH3)，2.88(d，1H，J＝11.6Hz)，3.02(d，1H，J＝11.7Hz)，3.76(d，1H，J＝15.0Hz)，3.79(d，1H，J＝15.1Hz)，3.90(s，3H，OCH3)，4.17(s，3H，OCH3)，6.83(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.03(d，1H，J＝8.2Hz，ArH)，7.11(m 3H，ArH)，7.22(m，1H，ArH)；MS(CI)m/z 326(100)；元素分析(C19H19NO4)C，H，N.
2′，3′-二氫-4，5-二甲氧基-螺[異苯并呋喃-1(3H)，4′(1′H)異喹啉]-3-酮(10)。
將1-氯-乙基氯甲酸酯(5.1ml，46.3mmol)于0℃在氮氣下，逐滴加入至化合物9(6.21g，19.2mmol)在100mL的1，2-二氯乙烷的懸浮液中。在0℃下攪拌混合物15分鐘，然后加熱回流8小時。冷卻混合物，在減壓下濃縮。向該混合物中加入75mL的甲醇并將反應加熱回流過夜。冷卻后，減壓蒸發(fā)溶劑得到化合物10的鹽酸鹽，近定量產率。產品有足夠純度用于下一步驟而不必進一步純化mp(HCl)220-222℃mp(base)208-210℃；IR(CH2Cl2，base)1754cm-1(C＝O)；1H NMR(CDCl3，base)δ3.18(d，1H，J＝13.5Hz)，3.30(d，1H，J＝13.5Hz)，3.84(s，3H，OCH3)，3.96(s，3H，OCH3)，4.02(s，2H，CH2N)，6.67(d，1H，J＝7.5Hz，ArH)，7.12(m，2H，ArH)，7.19(d，1H，J＝7.5Hz，ArH)，7.26(t，1H，J＝7.5Hz，ArH)，7.41(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)；MS(CI)m/z 312(100)；HRCIMS Calculated for C18H17NO4312.1236；Found312.1198；元素分析(C18H17NO4)H，N；C理論值69.44；實測值68.01.
2′，3′-二氫-4，5-二甲氧基-2′-對甲苯磺酰基螺[異苯并呋喃-1(3H)，4′(1′H)異喹啉]-3-酮(11)。
將7mL的三乙基胺，于0℃在氮氣下，逐滴加入至對甲苯磺酰氯(3.6g，18.9mmole)，化合物10(以HCl鹽形式，得自19.2mmol的化合物9)和氯仿(10mL)的混合物中。滴加完畢后，移去冰浴并將反應混合物在室溫攪拌1小時。然后用100mL冷的0.1N HCl水溶液酸化，用二氯甲烷(2×100mL)萃取，并干燥(MgSO4)有機萃取液，過濾，在真空下蒸發(fā)得到粘性液體，在0℃將其與乙酸乙酯-己烷研制得到固體。自乙酸乙酯-己烷重結晶得到8.74g(97％，自化合物9計算)的化合物11mp208-210℃；IR(KBr)1767cm-1(C＝O)；1H NMR(CDCl3)δ2.43(s，1H，CH3)，3.22(d，1H，J＝11Hz)，3.88(d，1H，J＝11Hz)，3.90(s，3H，OCH3)，3.96(d，1H，J＝15Hz)，4.17(s，3H，OCH3)，4.81(d，1H，J＝15Hz)，6.97(d，1H，J＝7.7Hz，ArH)，7.16(m，3H，ArH)，7.26(m，1H，ArH)，7.38(d，2H，J＝8Hz，ArH)，7.72(d，2H，J＝8Hz，ArH)；MS(CI)m/z 466(100)；元素分析(C25H23NO6S)C，H，N.
3，4-二甲氧基-6-[(2-對甲苯磺?；?1，2，3，4-四氫異喹啉)-4-基]苯甲酸(12)。
將化合物11(2.56g，5.51mmol)在冰乙酸(250mL)，中的溶液與10％鈀/活性碳(6.30g)于Parr氫化器上在室溫下以50磅/平方英寸震搖48小時過濾除去催化劑，蒸發(fā)溶劑得到2.55g(99％)的化合物12，它有足夠純度進行下一步驟。分析用樣品用乙醇-水重結晶mp182-184℃；IR(KBr)1717cm-1(COOH)；1H NMR(DMSO-d6)δ2.35(s，3H，CH3)，3.12(m，1H)，3.51(dd，1H，J＝5，11.5Hz)，3.71(s，6H，OCH3)，4.10(m，1H，Ar2CH)，4.23(s，2H，ArCH2N)，6.52(d，1H，J＝7.5Hz，ArH)，6.78(d，1H，J＝7.5Hz，ArH)，6.90(m，1H，ArH)，7.07(t，1H，J＝8Hz，ArH)，7.14(t，1H，J＝6.5Hz，ArH)，7.20(d，1H，J＝7.5Hz，ArH)，7.38(d，2H，J＝8Hz，ArH)，7.63(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)；MS(CI)m/z 468(16)，450(63)，296(100)；HRCIMS理論值for C25H25NO6S468.1481；實測值468.1467；元素分析(C25H25NO6S)C，H，N.2-N-對甲苯磺?；?4-(2-羥甲基-3，4-二甲氧基苯基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(13)。
在0℃于氮氣下，向化合物12(1.4g，2.99mmol)在干燥四氫呋喃的溶液中，加入1.0M甲硼烷-四氫呋喃(8mL)。加入完成后將混合物回流攪拌過夜。加入另外的乙硼烷(4mL)并繼續(xù)攪拌30分鐘。冷卻和減壓蒸發(fā)后，小心地加入甲醇(30mL)，并于低壓下除去溶劑。重復該步驟三次以保證中間體甲硼烷復合物的甲醇解。蒸發(fā)溶劑給出1.10g(81％)的化合物13粗品。分析用樣品是通過閃黃色譜(硅膠，EtOAc/己烷)，隨之從乙酸乙酯/己烷重結晶純化的mp162-164℃；1H NMR(CDCl3)δ2.38(s，3H，CH3)，3.18(dd，1H，J＝7.5，11.9Hz)，3.67(dd，1H，J＝4.5，11.8Hz)，3.81(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H，OCH3)，4.27(d，1H，J＝15Hz)，4.40 d，1H，J＝15Hz)，4.57(t，1H，J＝6Hz，CHAr2)，4.71(s，2H，CH2OH)，6.58(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，6.74(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，6.84(d，1H，J＝7.7Hz，ArH)，7.08(t，2H，J＝7.6Hz，ArH)，7.14(t，1H，J＝6.6Hz，ArH)，7.27(d，2H，J＝8Hz，ArH)，7.65(d，2H，J＝8Hz，ArH)；MS(CI)m/z 454(2.57)，436(100)；元素分析(C25H27NO5S)C，H，N.
8，9-二甲氧基-2-對甲苯磺?；?2，3，7，11b-四氫-1H-萘(1，2，3-de)異喹啉(14)。
于-40℃在氮氣下，于劇烈地機械攪拌下，將粉狀化合物13(427mg，0.98mmol)分批加入至50mL冷的濃硫酸中。加完后，將反應混合物2小時內溫熱至-5℃，然后傾入至碎冰(450g)中并攪拌1小時。產品用二氯甲烷(2×150mL)萃取，水(2×150mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并蒸發(fā)，得到油狀物，在0℃用乙醚研制得到化合物14(353mg，82％〕，為白色固體，未進一步純化即用于下一步驟。分析用樣品是通過用50％乙酸乙酯-己烷為洗脫劑進行離心旋轉色譜，隨之從EtOAc/己烷中重結晶來制備的mp 204-206℃；1H NMR(CDCl3)δ2.40(s，3H，CH3)，2.80(m，1H，H-1a)，3.50(dd，1H，J＝4.5，17.5Hz，H-1b)，3.70(dd，1H，J＝7，14Hz，H-3a)，3.828(s，3H，OCH3)，3.832(s，3H，OCH3)，3.9(m，1H，H-11b)，4.31(d，1H，J＝17.6Hz，H-7a)，4.74(ddd，1H，J＝1.7，6.0，11.2Hz，H-7b)，4.76(d，1H，J＝14.8Hz，H-3b)，6.77(d，1H，J＝8.3Hz，ArH)，6.87(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，6.94(d，1H，J＝7.6Hz，ArH)，7.13(t，1H，J＝7.5Hz，Ar-H-5)，7.18(d，1H，J＝7.2Hz，ArH)，7.33(d，2H，J＝8.1Hz，ArH)，7.78(d，2H，J＝8.2Hz，ArH)；MS(CI)m/z 436(55)，198(86157(100)；HRCIMS理論值for C25H25NO4S436.1583；實測值436.1570；元素分析(C25H25NO4S)C，H，N.
8，9-二甲氧基-2，3，7，11b-四氫-1H-萘(1，2，3，-de)異喹啉(15)。
在氮氣中于室溫下，攪拌化合物14(440mg，1.01mmol)，干燥甲醇(10mL)和磷酸氫二鈉(574mg，4.04mmol)的混合物。向該混合物中分三批加入6.20g的6％Na-Hg并將反應加熱回流2小時。冷卻后，加入水(200mL)并用乙醚(3×200mL)萃取混合物。合并乙醚層，干燥(MgSO4)，過濾(硅藻土)，并蒸發(fā)給出油狀物，在真空下固化。旋轉色譜處理后，得到142mg(50％)的化合物15，為油狀物。該油狀物暴露于空氣中很快變深并立即在下一步驟中使用。小部分的油用乙醚HCl處理并且將化合物15的鹽酸鹽從乙醇-乙醚中重結晶
mp(HCl salt)190℃(dec)；1H NMR(CDCl3，base)δ3.13(dd，1H，J＝10.8，12Hz，H-1a)，3.50(dd，1H，J＝3.4，17.4Hz，H-1b)，3.70(m，1H，H-11b)，3.839(s，3H，OCH3)，3.842(s，3H，OCH3)，4.03(dd，1H，J＝6，12Hz，H-7a)，4.08(s，2H，H-3)，4.33(d，1H，J＝17.4Hz，H-7b)，6.78(d，1H，J＝8.24Hz，ArH)，6.92(m，3H，ArH)，7.11(t，1H，J＝7.5Hz，ArH)，7.18(d，1H，J＝7.5Hz，ArH)；MS(CI)m/z 282(100)；HRCIMS理論值for C18H19NO2282.1494；實測值282.1497.
8，9-二羥基-2，3，7，11b-四氫-1H-萘(1，2，3-de)異喹啉(4)。
在-78℃下向化合物15(25mg，0.089mmole)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三溴化硼(0.04ml，0.106g，0.42mmol)。在-78℃于氮氣下攪拌2小時后，移去冷卻浴并將反應混合物在室溫靜置5小時。然后冷卻至-78℃并小心地加入甲醇(2mL)。室溫下攪拌15分鐘后，減壓蒸發(fā)溶劑。加入更多的甲醇并將該過程重復三次。將所得灰色固體從乙醇-乙酸乙酯中重結晶，得到總量為12mg(41％)的化合物4的氫溴酸鹽mp258℃(dec)；1H NMR(HBr salt，CD3OD)δ3.43(t，1H，J＝12Hz，H-1a)，3.48(dd，1H，J＝3.5，18Hz，H-1b)，4.04(m，1H，H-11b)，4.38(dd，2H，J＝5.5，12Hz，H-7)，4.44(s，2H，H-3)，6.58(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，6.71(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，7.11(d，1H，J＝7.5Hz，ArH)，7.25(t，1H，J＝7.5Hz，ArH)，7.32，d，1H，J＝7.5Hz，ArH)；MS(CI)m/z254(100)； HRCIMS理論值for C16H15NO2254.1181；實測值254.1192.
Dinapsoline的藥理方法成年雄性Sprague Dawley大鼠(200-250g)得自Charles River養(yǎng)殖實驗室(Raleigh，NC)或Harlan實驗室(Indianapolis IN)。斷頭處死大鼠，將整個腦取出并在冰冷的鹽水中短時間冷卻。在解剖砧板(block)幫助下將腦薄切片，并將中央紋狀體從合有這一區(qū)域主要部分的兩個冠狀部分切下。立即用干冰冷凍組織并于-70℃保存直到實驗那一天。細胞培育。表達恒河猴D1A受體(C-6-mD1A)；Machida等1992)的C-6神經膠質瘤細胞是在含有4,500mg/L葡萄糖，L-谷氨酰胺，5％胎牛血清和600ng/mL G418或2μg/mL嘌呤霉素的DMEM-H培養(yǎng)基中生長的。細胞于37℃用5％CO2在濕潤的孵育箱中保持。
膜制備。
細胞在75cm3的燒瓶中生長至融合。用10mL冰冷的低滲緩沖劑(HOB)(5mM Hepes，2.5mM MgCl2，1mM EDTA；pH7.4)將細胞于4℃清洗并溶解10分鐘。使用Baxter(Mc Gaw Park，IL)的無菌細胞刮器將細胞從燒瓶中刮下。用5mL的HOB最后漂洗燒瓶。自各燒瓶回收的細胞懸浮液的最終體積約14mL。然后合并從幾個瓶中刮到的膜。均漿化(10次撞擊)合并的細胞懸浮液，每次14mL，使用15mL的Wheaton Teflon-玻璃勻漿器。合并細胞勻漿并于4℃在43,000xg(Sorvall RC-5B/SS-34，Du Pont，Wilmington，DE)旋轉20分鐘。去除上清液，對每個原來的瓶子的勻漿化了的細胞，將沉淀再懸浮(10次沖擊)于1mL的冰冷的HOB中。于4℃在43,000xg將該勻漿液重新旋轉20分鐘。移出上清液并將最終沉淀物于冰冷貯存的緩沖液(50mM Hepes，6mM MgCl2，1mM EDTA；pH7.4)中再懸浮(10次撞擊)，得到終濃度為約2.0mg蛋白/mL。于-80℃在微量離心管中保存等分的最終勻漿。在它們用于腺苷酸環(huán)化酶測定之前；各膜制品的蛋白水平用適用于微量板讀數器Molecular Devices；MenloPark，(A)的BCA蛋白分析試劑(Pierce，Rockfbrd，IL)，定量測定。
多巴胺受體結合檢驗。
在8mL冰冷的含4.0mM MgCl2(pH7.4)的50nM HEPES緩沖液中將冰凍的大鼠紋狀體通過7次人工撞擊在Wheaton Teflon-玻璃勻漿器中勻漿化。組織在27,000xg下離心10分鐘，棄去上清液，將沉淀物勻化(5次撞擊)并在冰冷的緩沖液中重懸浮并再次離心。最終沉淀物以2.0mg濕重/mL的濃度懸浮。加入至各測定管中的組織的量為1.0mg，在最終的1.0mL的測定體積中。D1受體用[3H]SCH 233390 0.30nM)標記；D2受體用[3H]螺哌隆(0.07nM)標記；加入未標記的酮色林(50nM)以摭蔽結合至5-HT2的位置?？偨Y合定義為在無任何競爭性藥物的存在下的放射配體結合。非特異結合是通過分別加入未標記的SCH 23390(1μM)或未標記的氯丙嗪(1μM)，對D1和D2受體結合試驗來加以測定的。作為內標，每個試驗包括有六個濃度的未標記的SCH23390(D1結合)或氯丙嗪(D2結合)的競爭曲線。每個藥物濃度進行三次測定。在37℃將測試管孵育15分鐘，并且結合是通過于Skatron 12井細胞收獲器(skatron，Inc.，Sterling，VA)用玻璃纖維過濾墊(skatronno.7034)在冰冷的緩沖液中過濾加以測定的。使濾瓶干燥并加入1.0mL的Optiphase HI-SAF II閃爍流體。放射活性是在LKB Wallac 1219RackBeta流體閃爍計數器(Wallac，Gaithersburg，MD)上測定的。通過用BCA蛋白分析試劑(Pierce Rockford，IL)測定組織蛋白水平。
放射受體檢驗的數據分析。
分別分析來自各測定的結合數據。通過將在每個競爭劑濃度下的平均dpm表示為總結合的百分率將數據歸一化。然后對這些數據進行非線性回歸分析，這是通過應用曲線一擬合程序Inplot(Graphpad Inc.SanFrancisco，CA)或EBDA和LIGAND軟件，并經McPherson修改以適用于IBM-PC，對數據進行S形曲線計算，對每個曲線產生K0.5值和Hill系數(nH)對偏差的分析表明擬合的很好，對本實驗的所有曲線，r值大于0.99。
大鼠紋狀體中腺苷酸環(huán)化酶的活性。
通過從其它標記的核苷酸分離cAMP，使用Schulz和Mailman的自動HPLC方法測定腺苷酸環(huán)化酶活性。簡言之，將來自大鼠紋狀體的組織在wheaton-Teflon玻璃勻漿器中用8次手動撞擊，在含有2mM EGTA(50mL/g組織)的5mM HEPES緩沖劑(pH7.5)中使之勻漿化。在加入并混合50mL/g的含有2mM EGTA的50mM HEPES緩沖劑之后，加入20μL該組織勻漿的等分樣品至制備好的反應混合物(最終體積為100μL)，該混合物含有0.5mM ATP，0.5mM異丁基甲基黃嘌呤，〔32P〕ATP(0.5μCi)1mM cAMP，2mM MgCl2，100mM HEPES緩沖劑，2μM GTP，0-100μM多巴胺，DHX或SKF38393，10mM磷酸肌酸和5U肌酸磷酸激酶。對各藥物濃度進行三次測定。
反應在30℃進行15分鐘并通過加入100μL的3％十二烷基硫酸鹽(SDS)終止。通過加入各300μL的4.5％ZnSO4和10％Ba(OH)2，沉淀蛋白質及許多非環(huán)核苷酸。離心(10,000xg 8-9分鐘)樣品，將上層清液注入HPLC系統(tǒng)(Waters Z-模件(module)或RCM 8×10模件，配置C18，10微米柱)。流動相為有23％甲醇的150mM乙酸鈉(pH5.0)用UV檢測器(254nM檢測)將未標記的cAMP定量加入至樣品中作為內標。每份中的放射活性是通過直通型放射檢測器(InusSystems，Tampa，FL)，用Cerenkov記數器加以測定的。樣品回收是基于用UV測量總的未標記cAMP的峰面積，通過用PE Nelson(Cupertino，CA)型900數據收集模件和TurboChrom軟件定量的。使用BCA蛋白分析試劑(Pierce，Rockford，IL)測定組織蛋白水平。
在C-6mD1∧細胞中腺苷酸環(huán)化酶的測定。
解凍冷凍的膜并加入至含有制備好的反應混合物和選擇藥物的檢驗管中。該混合物含有100nM Hepes，(pH7.4)，100mM NaCl，4mMMgCl2，2mM EDTA，500μM異丁基甲基黃嘌呤(IBMX)，0.01％抗壞血酸，10μM帕吉林，2mM ATP，5μM GTP，20mM磷酸肌酸，5單位的肌酸磷酸激酶(CPK)，1μM普萘洛爾。
最終反應體積為100μL。
基礎的cAMP活性是通過在無藥物加入的反應混合物中孵育組織來測定的。兩次測定檢驗管并且，于30℃孵育15分鐘后，通過加入500μl0.1N HCl以停止反應。將檢驗管略加振搖，然后在BHG HermLe Z230M微量離心儀中在15,000xg旋轉5分鐘以沉淀顆粒。
cAMP的放射免疫測定(RIA)。
各樣品中cAMP的濃度由乙?；腸AMP的RIA測定，后者來自前述的修飾。cAMP的碘化通過Patel和Linden報道的方法進行。試驗緩沖劑是有0.1％疊氮化鈉的50mM乙酸鈉(pH4.75)。cAMP的標準曲線是在緩沖劑中于濃度2至500fmol/檢驗管制備的。為提高靈敏度，用10μl2∶1的三乙胺∶乙酸酐的溶液乙?；械臉悠芳皹藴势贰悠窚y定兩次。各檢驗管(總體積300μL)包含25μL的各樣品，75μL緩沖劑，100μL初級抗體(綿羊，抗-cAMP，1∶100,000用含1％BSA的緩沖劑稀釋)和100μL的〔125I〕-cAMP(50,000dpm/100μL的緩沖劑)。旋轉檢驗管并在0℃過夜約18小時保存。通過加入25μL的BioMag兔，抗-山羊IgG(Advanced Magnetics，Cambridge MA)，并隨之旋轉并在4℃孵育1小時，將抗體-結合的放射活性分離。向這些樣品加入1mL的12％聚乙二醇/50mM乙酸鈉緩沖劑(pH6.75)并將檢驗管在1700xg離心10分鐘。吸出上清液并用LKB Wallac gamma計數器(Gaithersburg，MD)測定沉淀顆粒中的放射性活度。
對腺苷酸環(huán)化酶研究的數據分析。
各樣品的數據起初以pmol/mg/分鐘cAMP表示。從各藥物條件下產生的cAMP總量減去cAMP的基線值。各藥物的數據是用相對于由100μMDA產生的刺激來表示。結果在大鼠紋狀體勻漿中，dinapsoline對D1受體的結合和功能效果。如圖3所示，dinapsoline在大鼠紋狀體勻漿中的D1受體上以高親合性競爭，與完全D1激動劑dihydrexidine相同的親合性。dinapsoline和dihydrexidine兩者與原型D1拮抗劑SCH 23390(1)相比，它們的競爭曲線有更淺的斜率。
表1概述了(+)-3和(±)-4對大鼠腦中的多巴胺受體的親合性。在大鼠紋狀體的勻漿中進行對多巴胺受體放射配體結合研究，在50nM未標記的酮色林(D2位置)的存在下，使用0.3nM3H-SCH23390(D1位置)和0.07nM3H-螺哌隆。用非線性回歸分析競爭曲線以測定K0.5和Hillslope(nH)的估計值。數據表示來自各試驗化合物的三個獨立分析的平均和標準誤差。表1。(+)-3和(±)-4在大鼠腦中的多巴胺受體的親合性的摘要。
D1結合D2結合化合物 K0.5(nM) nH K0.5(nM) nH(±)-45.93±0.45 0.66±0.01 31.3±4.4 0.71±0.03(+)-3 4.59±0.28 0.65±0.01 43.2±3.2 0.72±0.04(+)-2 17±4 0.75±0.08 Not Tested --------(+)-1 0.30±0.01 1.05±0.01 Not Tested --------氯丙嗪沒有試驗-------- 0.92±0.12 0.93±0.01
試驗化合物〔(+)-SKF 38393＝(+)-2；(±)-反式-10，11-二羥基-5，6，6a，7，8，12b-六氫苯并〔a〕菲啶＝(±)-3；和(±)-8，9-二羥基-2，3，7，11b-四氫-1H-萘并〔1，2，3-de〕異喹啉＝4〕刺激cAMP聚積的能力在大鼠紋狀體的勻漿中加以檢測。包括高親合性的完全激動劑(±)-3和部分激動劑(+)-2以作比較。這些試驗的數據示于圖4中，平均±SEM得自至少三個試驗。dinapsoline和dihydrexidine兩者的飽和濃度(10μM)導致在cAMP合成上同樣程度的增加(dinapsoline為95.8％±4.7和dihydrexidine為91.3％±4.6)，這和多巴胺(100μM)濃度的最大作用一樣。相反地，部分激動劑(+)-2導致小于50％刺激(40.7±7.0對SKF 38393)。這些作用被D1拮抗劑SCH 23390所阻滯。
在C-6神經膠質細胞瘤細胞(C-6-mD1細胞)上表達的克隆的靈長類D1A受體上亦測試了dinapsoline的功能性效能。如圖5所示，化合物dinapsoline在此制備物中也表現出完全效能，EC50約為30nM(數據代表了重復進行兩次試驗的平均值)。(+)-反式-10，11-二羥基-5，6，6a，7，8，12b-六氫苯并〔a〕菲啶(dihydrexidine)在此制備物中也表現出完全效能，然而(+)-2僅為部分效能。
在D2受體的結合。研究了dinapsoline在大鼠紋狀體勻漿中的D2受體競爭的能力。如圖6和表1所示，dinapsoline對大鼠紋狀體勻漿中的D2-類似受體的親合力(K0.5＝31nM)實際上高于dihydrexidine對D2-類似受體的親合力(K0.5＝50nM)。在圖6中也可看出，dinapsoline和dihydrexidine兩者的競爭曲線的斜率都比原型的D2拮抗劑氯丙嗪的要淺。
使用相同的在實例1中所述通用方法，如表II中所列實例2-48的化合物，是通過使用相應于反應式1和2(圖1和2)中描述的起始化合物合成的，但用適當的功能基加以取代，以提供合適的取代類型，如每個實例中所示的稠合的萘并異喹啉產物上所描述的。因此，例如，化合物5a(反應式1)的3，4和/或5取代類似物分別提供在式I上相應的取代基R4，R3和R2。在反應式I的步驟b中用N-甲基丙氨酸酯或N-甲基纈氨酸酯代替肌氨酸酯將提供相應的式I的化合物，其中R5分別地是甲基和異丙基。用其它的2和3取代的苯甲酰胺(反應式2中化合物8的類似物)提供在式1中C8和C9相應的取代類型。實例序號R R1R2R3R4R5X2 H HCH3H HHOH3 H HHCH3HHOH4 H HHH CH3HOH5 H HC6H5H HHOH6 CH3HCH3H HHOH7 C3H7HHCH3HHOH8 H HC2H5H HHOH9 H HHC2H5HHOH10H HHCH3CH3HBr11C3H7HCH3CH3HHOH12C2H5HHCH3CH3HBr13CH3HHH C2H5HOH14C2H9HHOH HHOH15H HCH3OH HHOH16H HHF HHOH17H HOH H HHBr18H HBr H HHOH19H CH3HBr HHOCH320H CH3HH Br HOCH321H CH3CH3Br HHOCH322CH3HFH HHOH23CH3HHF HHOH24CH3HHH FHOH實例序號 R R1R2R3R4R5X25C3H6HH OH HH F26C2H5HCH3OH HH F27C2H5HCH3O HCH3H F28C3H7HH CH3OHH Cl29C3H7HH CH3CH3OH Cl30C3H7HC2H5O HHH OH31C3H3HH HOH H OH32C4H9HCH3HHH OH33C4H9HH OH CH3H OH34C4H9HOHCl-HH OH35C4H9HOHCl HH OH36C4H9HH CH3HH I37HHH HHH H38HHCH3HHH H39HHH CH3HH H40HHH HCH3H H41HHH HHCH3OH42HHH HHCH2(CH3)2OH43HHH HHCH3H44HHH HHCH2(CH3)2H45HHCH3HHCH3OH46HHH CH3HCH3OH47HHH HCH3CH3OH48HHH HHCH2CH3OH
前述的實例為本發(fā)明的闡明但并不意于將本發(fā)明局限在已公開的化合物。對所舉化合物的變更和修飾，對熟悉本領域工作者是明顯的，也在如下述權利要求中所詳述的本發(fā)明的范圍和本發(fā)明實質內。
權利要求
1.下式的化合物
及其可供藥用的鹽，其中R和R5是氫或C1-C4烷基；R1是氫，C1-C4烷基或苯氧基保護基團；X是氫，鹵素或式-OR6的基團，其中R6是氫，C1-C4烷基或苯氧基保護基團，此外，當X是式-OR6的基團時，R1和R6可以一起形成式-CH2-的基團；和R2，R3和R4獨立地選自包括氫，C1-C4烷基，苯基，鹵素，或-OR1基團，其中R1如上述定義。
2.權利要求1的化合物，其中X是羥基和R1是氫。
3.權利要求1的化合物，其中R和R5是氫。
4.權利要求2的化合物，其中R和R5是氫。
5.權利要求1的化合物，其中R2，R3，R4和R5分別是氫。
6.權利要求1的化合物，其中X和R1是氫。
7.權利要求1的化合物，其中R5是氫。
8.權利要求1的化合物，其中R5是C1-C4烷基。
9.治療對中樞或外周神經系統(tǒng)有與多巴胺相關的機能障礙的患者的方法，該機能障礙表現為明顯的神經病學的，心理的，生理的，或行為的病癥，該方法包括將有效量的下式化合物及其可供藥用的鹽給藥于患者的步驟以降低所述癥狀，
其中R和R5是氫或C1-C4烷基；R1是氫，C1-C4烷基或苯氧基保護基團；X是氫，鹵素或式-OR6的基團，其中R6是氫，C1-C4烷基或苯氧基保護基團，此外，當X是式-OR6基團時，基團R1和R6可以一起形成式-CH2-的基團；R2，R3和R4獨立地選自包括氫，C1-C4烷基，苯基，鹵素，或OR1基團，其中R1如上述定義。
10.治療中樞神經系統(tǒng)的與多巴胺相關的機能障礙的藥物組合物，該組合物包含有治療有效量的下式的化合物及其可供藥用的鹽，和可供藥用的載體，
其中R和R5是氫或C1-C4烷基；R1是氫，C1-C4烷基或苯氧基保護基團；X是氫，鹵素或式-OR6的基團，其中R6是氫，C1-C4烷基或苯氧基保護基團，此外，當X是式-OR6基團時，基團R1和R6可一起形成式-CH2-基團；R2，R3和R4獨立選自包括氫，C1-C4烷基，苯基，鹵素，或OR1基團，其中R1如上述定義。
全文摘要
本發(fā)明涉及右式的新的多巴胺受體的配體,這些化合物的藥物配方,和使用這些化合物治療患有中樞或外周神經系統(tǒng)與多巴胺相關的機能障礙的患者的方法。
文檔編號C07D491/056GK1199338SQ9619747
公開日1998年11月18日 申請日期1996年8月16日 優(yōu)先權日1995年8月18日
發(fā)明者D·E·尼科爾斯, R·邁爾曼, D·勾思 申請人:普渡研究基金會, 北卡羅來納-查佩爾山大學