專利名稱：具有藥理活性的化合物,其制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療與激素核受體(NHR)族相關(guān)的失調(diào)的化合物及其用途。更具體地說，本發(fā)明涉及的化合物具有特定的三維空間取向，能夠與NHR結(jié)合由此改變其功能。這樣的化合物可以用作與NHR有關(guān)的失調(diào)的治療藥物，所述受體例如類視色素X受體(RXR)。本發(fā)明還涉及治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松、骨質(zhì)損失、關(guān)節(jié)炎、炎癥，癌癥和皮膚病的組合物和方法。
背景技術(shù)：
及現(xiàn)有技術(shù)當今開發(fā)緩解主要疾病的治療藥物的方法側(cè)重于分子生物學(xué)、酶學(xué)、晶體學(xué)、藥物合成、分子建模和藥理學(xué)間的各學(xué)科交叉方法。典型的方法有鑒定、分離、純化和結(jié)晶與所研究疾病相關(guān)的某目標蛋白；建立該蛋白結(jié)合和活性位點的模型；建立化合物的模型，合成和評價該化合物，以優(yōu)化它們的藥理活性。雖然現(xiàn)有技術(shù)已是高度發(fā)展，但是制藥產(chǎn)業(yè)仍然需要極大的努力來開發(fā)新藥，尤其是預(yù)見結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系。所以，仍然需要開發(fā)用于治療特定疾病的藥理活性化合物的高效和經(jīng)濟的鑒定方法。
骨質(zhì)疏松癥以骨質(zhì)減少為特征，同時骨密度降低，骨間隙加大，造成骨孔和骨脆。男性和女性都可能隨年齡的增長而患此病，尤其是絕經(jīng)后的婦女。該病主要是骨基質(zhì)形成的失調(diào)。通常，成骨細胞(即骨形成性細胞群)的數(shù)量減少。在局部骨源因子(bone-derived factor)的調(diào)控下，成骨細胞產(chǎn)自鄰近的間質(zhì)前體。破骨細胞(即降解骨質(zhì)并與骨吸收有關(guān)的細胞群)數(shù)量并不減少。破骨細胞較大，通常是在礦化骨再吸收表面上的多核細胞。破骨細胞由源自骨骼外造血前體的單核前體融合而成。
破骨吸收作用的所有已知局部刺激物(包括甲狀旁腺激素，1,25D,IL-2和TNF)都通過最初對成骨細胞的作用來介調(diào)(modulate)其對破骨細胞的刺激作用。所以，成骨細胞被認為控制新骨形成速度和產(chǎn)生刺激破骨吸收作用的信號，由此在調(diào)節(jié)骨的更新中起著主要作用。
NHR族與介調(diào)哺乳動物細胞的繁殖與分化有關(guān)。這些細胞過程受調(diào)控基因表達的信號分子的調(diào)控。以類視色素受體為例的NHR與許多疾病和失調(diào)有關(guān)，例如骨質(zhì)疏松、癌癥、粉刺、AIDS、關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、紅斑狼瘡等。類視色素X受體(RXR)的作用是介調(diào)細胞轉(zhuǎn)錄活性，由此控制細胞的繁殖。
現(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)認識到，成骨細胞在骨形成中起著非常復(fù)雜的作用。一般認為，破骨細胞起溶骨作用(吸收)，使得成骨細胞然后能夠沉積更多的骨質(zhì)。那么，可以認為能夠抑制過度骨吸收或刺激成骨細胞繁殖的化合物將可用于防止骨質(zhì)損失或刺激骨的生長。
Takashi等(日本專利公開JP03130216 A2,6/4/94)揭示了具有以下結(jié)構(gòu)的二苯基化合物
其中X是-CH2-或-C(=O)-，它們是用于治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的。
Labroo(95年2月14日授權(quán)的美國專利5,389,646)揭示了具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
其中R1是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基或(C1-C17)烷基羰基；R2是-(CH2)(1-6)-CH2-雜環(huán)；R3是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基或(C1-C17)烷基羰基；它們是用于治療或預(yù)防骨質(zhì)損失的。
還有其它化合物被建議用來治療骨質(zhì)疏松，例如以下化合物
即便如此，由于這些化合物的效果有限，它們都沒有被廣泛地使用。所以，仍然需要治療骨質(zhì)疏松更有效的化合物。
Kamala等(Indian J.Chem.(1983),22B,1194-96)和Waisser等(Collect.Czech.Chem.Commun.(1991),56,2978-2985)分別揭示了以下化合物的合成及其作為合成中間體和抗結(jié)核藥的用途。
二芳香化合物用于治療癌癥和腫瘤是眾所周知的。這類化合物通常有效抑制DNA的復(fù)制，由此對哺乳動物細胞具有細胞毒性作用。迄今，仍然沒有發(fā)現(xiàn)能夠通用于這類多種癌癥和腫瘤的化合物。所以，仍然需要更有效的廣譜抗癌和抗腫瘤藥物。
本發(fā)明的目的之一是克服治療藥物建模領(lǐng)域的固有局限，即提供了一種利用確定的三維空間特性來選擇候選化學(xué)物質(zhì)的方法。這些具有確定空間結(jié)構(gòu)的化合物還在某種程度上克服了現(xiàn)有成骨藥物的局限，即提供了刺激骨成型蛋白產(chǎn)生的藥物，并由此提供了用于在骨質(zhì)損失造成的疾病中刺激成骨細胞繁殖的組合物。
本發(fā)明的目的還在于提供結(jié)合激素核受體(NHR)族中與疾病相關(guān)的其它受體的物質(zhì)。
本發(fā)明的另一目的是提供用特定的藥理活性化合物治療或預(yù)防與NHR有關(guān)的生理失調(diào)或疾病，例如骨質(zhì)疏松、關(guān)節(jié)炎、癌癥、腫瘤等的方法。
本發(fā)明的目的還在于提供用于選擇能夠刺激成骨細胞繁殖和分化，并可用于治療NHR相關(guān)性疾病(尤其是與骨質(zhì)損失相關(guān)的疾病)的藥理活性化合物的方法。
本發(fā)明的目的還在于提供用于選擇和篩選能夠刺激成骨細胞繁殖和分化的藥理活性組合物的方法。由此選出的組合物可用于治療或預(yù)防與NHR相關(guān)的骨質(zhì)疏松和其它生理失調(diào)。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了刺激成骨細胞繁殖的方法，和選擇藥理活性化合物的方法。在實施方案之一中，刺激成骨細胞繁殖的方法包括選擇具有通式Ⅰ的物質(zhì)X-L-Z，其中X選自
L選自
Z選自
其中，R1選自H,OH,C1-C4烷基、C1-C4烷氧基，C1-C4烷硫基，鹵素和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R2選自H,OH，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烯基，C1-C6烷氧基和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R3選自H,OH，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烯基和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R4選自H,OH，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R5選自H，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-OC(=O)Me，鄰苯二甲酰亞胺和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R6選自H,OH,-NH2,C1-C4烷基和C1-C4烷氧基；R7選自H,C1-C4烷基，C1-C4烷基-羰基和(C7-C10)芳基烷基；R8選自H,OH，鹵素,-CF3,C1-C4鹵代烷基，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me和-N(C1-C4烷基)2；R9選自H,OH，鹵素，-CN,-NO2,C1-C4鹵代烷基，-CF3,C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me；R10選自H,OH，鹵素，-CN,-NO2,C1-C4鹵代烷基，-CO2H,C1-C12烷基，C1-C12烷氧基，苯基，C1-C12烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，-NHC(=O)Me,(C1-C4)烷基羰基，(C1-C12)烷基-羰基氧基和雜芳基；R11選自H,OH,鹵素，C1-C4鹵代烷基，-CF3,C1-C4烷基，-NH2,C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基，(C1-C4)烷基-羰基氧基；R12選自H,OH,-NH2,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和(C1-C4)烷基羰基；R13選自H,OH，鹵素，-NH2,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和-N(C1-C4烷基)2；和令包含成骨細胞的細胞與有效量的藥理活性化合物接觸。
這些方法可望刺激成骨細胞的繁殖，并用于防止骨質(zhì)損失和/或促進骨生長。
在更具體的實施方案中，作為本方法一部分的選定藥物更具體的定義為R10和R11可以相互結(jié)合成一個5至7元碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)和氧雜碳環(huán)互不相干地被一個或多個以下基團所取代(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，OH，鹵素，羧基、H和芳基，由此形成藥理活性化合物。
在本發(fā)明范圍內(nèi)還認為，通式Ⅰ藥理活性化合物可能結(jié)合一種以上不同類型的激素核受體(NHR)，因此可以用于治療與NHR相關(guān)的其它疾病。
雖然不想局限于任何一種具體的作用機制，本發(fā)明認為，通式Ⅰ藥理活性化合物可能通過加強BMP-2啟動子活性來促進成骨細胞的生長或富集成骨細胞群。
在本發(fā)明范圍內(nèi)，還認為，通式Ⅰ藥理活性化合物可以與其它化合物合用來刺激或促進成骨細胞的生長。它們還可以用于刺激骨生長或抑制骨質(zhì)損失和/或骨吸收。
本發(fā)明的另一方面內(nèi)容提供了一種選擇藥理活性化合物或候選藥理活性化合物的方法。在實施方案之一中，所述藥理活性化合物能夠刺激BMP-2啟動子的活性。實施方案之一的方法包括選擇具有通式Ⅱ確定空間三維結(jié)構(gòu)的候選化合物W-L-Y通式Ⅱ其中，W含有一個具有以字母“A”表示的質(zhì)心(centeroid)的芳香基；Y含有一個具有有以字母“B”表示的質(zhì)心的碳環(huán)基團；L是連接X和Z的基團；W內(nèi)的芳香基原子形成一個“P”平面；質(zhì)心“B”位于“P”平面以上或以下約1或約0.7埃；質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”相距約6或約6.6至約8或約8.5埃；由此形成具有確定空間結(jié)構(gòu)的分子；和選擇能夠刺激BMP-2啟動子活性的具有確定空間結(jié)構(gòu)的分子。
在部分實施方案中，上述方法中的具有確定空間結(jié)構(gòu)的分子被進一步定義為具有至少兩個受氫鍵基團，位于L內(nèi)或其附近，受氫鍵基團被進一步定義為1)受氫鍵基團相距約2或約2.3至約5或約5.4埃；2)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約4或約4.5至約7或約7.7埃，而距質(zhì)心“B”約2或約2.7至約3或約3.8埃；而且3)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約2或約2.6至約3或約3.8埃，而距質(zhì)心“B”約4或約4.6至約7或約6.9埃。
在部分方法實施方案中，L進一步定義為據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限約小于或等于3埃(約3.1埃更好)的空間，沿平面“P”的法相測定，位于平面“P”之上或之下并與之正交。在其它實施方案中，L甚至被進一步定義為據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限約為4埃(約4.7至6.0埃更好)的空間，與質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”的連線垂直并位于平面“P”內(nèi)。
本發(fā)明還要求保護所述化合物的藥學(xué)上可接受的制劑，并用于提供刺激成骨細胞繁殖和/或減少骨吸收的藥理活性制劑。
在本發(fā)明范圍內(nèi)，本發(fā)明認為，通式Ⅱ藥理活性化合物可能具有除刺激成骨細胞繁殖和抑制骨吸收之外的其它活性。這些活性主要與結(jié)合一個或多個激素核受體有關(guān)，并由此提供了一種治療與受體活性相關(guān)的各種疾病的方法。
在本發(fā)明范圍內(nèi)，本發(fā)明還認為，可能有許多藥理活性化合物雖然沒有在此具體說明，但是也符合通式Ⅱ的確定的空間結(jié)構(gòu)。這些具有確定空間結(jié)構(gòu)的分子也在本發(fā)明方法的范圍之內(nèi)，它們能夠刺激BMP-2啟動子活性，或者刺激成骨細胞的繁殖，或者具有其它所需的藥理活性。所以，這些化合物可以用于刺激骨形成或抑制骨組織損失。
應(yīng)該理解的是，通式Ⅱ化合物還包涵沒有在此說明的其它結(jié)構(gòu)參數(shù)，這些都屬于本發(fā)明范圍之內(nèi)。所述的其它結(jié)構(gòu)參數(shù)與在此所述的參數(shù)相比一般相對次要。即，雖然給W或Y加上一個特定的取代基可能使得通式Ⅱ化合物的活性高于或低于沒有該特定取代基的化合物，但是只要具有以上就通式Ⅱ或任何本文中其它通式化合物所言的特征，具有此取代基的化合物仍然屬于本發(fā)明方法范圍內(nèi)。
本發(fā)明的另一實施方案提供了一種治療和/或預(yù)防惡性細胞繁殖的方法。方法實施方案之一包括給包含惡性細胞的細胞群使用惡性細胞繁殖抑制量的、確定空間結(jié)構(gòu)如通式Ⅱ:W-L-Y所述的藥理活性化合物；和抑制惡性細胞，其中的藥理活性化合物據(jù)其三維結(jié)構(gòu)進一步定義為W含有具有以字母“A”表示的質(zhì)心的芳香基；Y含有具有以字母“B”表示的質(zhì)心的碳環(huán)；L是連接X和Z的基團；W內(nèi)的芳香基原子形成一個平面“P”；質(zhì)心“B”位于“P”平面以上或以下約1或約0.7埃；質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”相距約6或約6.6至約8或約8.5埃。
上述方法中的藥理活性分子可進一步定義為具有至少兩個受氫鍵基團，位于L內(nèi)或其鄰近，受氫鍵基團被進一步定義為
1)受氫鍵基團相距約2或約2.3至約5或約5.4埃；2)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約4或約4.5至約7或約7.7埃，而距質(zhì)心“B”約2或約2.7至約3或約3.8埃；而且3)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約2或約2.6至約3或約3.8埃，而距質(zhì)心“B”約4或約4.6至約7或約6.9埃。
在部分方法實施方案中，L進一步定義為據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限小于或等于約2.5，約3或約3.1埃的空間，沿平面“P”的法相測定，位于平面“P”之上或之下并與之正交。在其它實施方案中，藥理活性化合物被進一步定義為其中L據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限約為4埃(約4.7至5埃，或約6.0埃更好)的空間，與質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”的連線垂直并位于平面“P”內(nèi)。
本發(fā)明的其它內(nèi)容提供了刺激BMP-2啟動子活性或成骨細胞繁殖的方法和通式Ⅲ藥理活性化合物
通式Ⅲ其中，R1選自芳基、萘基、雜芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、氮雜環(huán)烷基、氧雜環(huán)烷基、氮雜環(huán)烯基、氧雜環(huán)烯基、酮基取代的環(huán)烷基和酮基取代的環(huán)烯基，上述各取代基又互不相干地被一個或多個以下基團取代C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、芐氧基、羥基、C1-C2鹵代烷基、鹵素、氰基、羧基、氫原子、(C1-C4)烷氧基羰基、-N(C1-C4烷基)2、(C1-C4)烷基羰基氧基、芳基、(C1-C4)烷基羰基氨基、(C1-C4)烷基羰基、(C1-C4)烷基-芳基和-NH2；R2選自H、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、C1-C4烷氧基、和-NH2；R3和R6選自H、羥基、鹵素、(C1-C5)烷基羰基氧基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烯基和C1-C4烷氧基；R4和R5選自H、鹵素、羥基、(C1-C4)烷基羰基氧基、氰基、C1-C2鹵代烷基、C1-C4烷氧基、苯甲?；?、(C1-C4)烷基-芳基、(C1-C6)烷基氨基羰基氧基、苯基氨基羰基氧基、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、(C1-C4)烯基-芳基、(C1-C4)炔基-芳基、(C1-C4)烷基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)烯基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)炔基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)烷基-(C6-C10)環(huán)烯基、(C1-C4)烯基-(C6-C10)環(huán)烯基、(C1-C4)炔基-(C6-C10)環(huán)烯基、羧基和(C1-C4)烷氧基羰基。
所述方法主要包括給予包含成骨細胞或成骨細胞前體細胞在內(nèi)的細胞有效量的通式Ⅲ化合物。
刺激BMP-2啟動子活性或成骨細胞繁殖的更具體的方法實施方案使用如下的上述化合物其中R3和R4共同連接成一個5至7元的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與該兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)被一個或多個以下基團取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素、羧基、氫原子和芳基。
在另一方法實施方案中，藥理活性化合物定義為R4和R5共同連接成一個5至7元的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與該兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)被一個或多個以下基團取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素、羧基、氫原子和芳基。
在另一方法實施方案中，藥理活性化合物定義為R5和R6共同連接成一個5至7元的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與該兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)被一個或多個以下基團取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素、羧基、氫原子和芳基。
本發(fā)明另一方面的內(nèi)容是具有成骨細胞繁殖活性的藥理活性組合物。在部分實施方案中，組合物根據(jù)一確定的具體過程來定義，該過程包括利用加熱或CrO3/H2O/AcOH用足夠的時間氧化通式Ⅵ化合物，形成藥理活性組合物。
通式Ⅵ可以進一步純化該制劑并選取最有效的部分。上述過程所得、據(jù)實施例1所述方法測定的ED50約1至約50微克/毫升的組合物應(yīng)該具有成骨細胞繁殖活性和刺激BMP-2啟動子活性的能力。
在本發(fā)明范圍內(nèi)，本發(fā)明認為，上述過程包括能將通式Ⅵ化合物轉(zhuǎn)化為具有所述藥理活性的所需組合物的其它類似或相當步驟。這類方法也屬于本發(fā)明范圍之內(nèi)。
在本發(fā)明范圍內(nèi)，本發(fā)明還認為，由此制備的藥理活性組合物可用于治療或預(yù)防與腫瘤細胞繁殖相關(guān)的疾病或失調(diào)、關(guān)節(jié)炎、炎癥、骨吸收、皮膚病和可以用受體-引導(dǎo)療法治療的疾病。
根據(jù)以下說明、數(shù)據(jù)和權(quán)利要求，本發(fā)明的其它特征、優(yōu)點和實施方式對本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來說將是顯而易見的。
附圖簡述以下附圖是說明書的一部分，是用來進一步闡明本發(fā)明某些方面內(nèi)容的。參照一幅或多幅附圖，結(jié)合本文中具體實施方案的詳細說明，將能夠更好地理解本發(fā)明。


圖1．顯示視黃酸置換試驗的結(jié)果曲線圖。
圖2．通式Ⅱ化合物實例之一空間填充模型的俯視圖。
圖3．通式Ⅱ化合物實例之一空間填充模型的側(cè)視圖。
本發(fā)明的詳細說明藥理活性化合物的選擇方法。
本

發(fā)明內(nèi)容
之一涉及從一組化合物中選擇一種或多種藥理活性化合物的方法。選定的化合物應(yīng)具有在此定義的空間化學(xué)結(jié)構(gòu)，并具有可觀察到的在培養(yǎng)物中刺激成骨細胞繁殖或維持成骨細胞生長的能力。
所選化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)可用以下結(jié)構(gòu)和立體參數(shù)來定義。立體參數(shù)可以通過測定所選化合物的三維結(jié)構(gòu)來獲得。適用于三維結(jié)構(gòu)測定的方法包括單晶X光衍射或例如CONCORD或分子力學(xué)(MM2)的二維至三維轉(zhuǎn)化算法。所選的化合物應(yīng)具有兩個疏水基團(例如芳香基或碳環(huán)或雜環(huán)基團)。兩個疏水基團都可以一個質(zhì)心來描述，質(zhì)心的位置即疏水基團內(nèi)所有原子的平均位置。對具有所需活性的化合物而言，兩質(zhì)心的距離介于約7或7.9至約8或約8.5埃。除了上述兩疏水基團外，表現(xiàn)出所需活性的化合物還應(yīng)具有一個能夠形成氫鍵或起Lewis堿作用的化學(xué)基團或取代基。人們可將分子外的一個供氫鍵或Lewis酸基團在形式上與分子內(nèi)的這個氫鍵受體或Lewis堿位點締合。該外部供氫鍵基團或Lewis酸基團應(yīng)當相對該分子這樣取向，以便實現(xiàn)與分子上互補性位點的化學(xué)接觸。如此，則外部位點應(yīng)與分子上的互補位點相距2至4埃，并由此形成氫鍵結(jié)合或Lewis酸/堿締合。在兩疏水基團和外部供氫鍵/Lewis酸位點之間必需維持一定的幾何關(guān)系。這種幾何關(guān)系可以用距離和角度來描述。外部位點的位置相對兩疏水基團應(yīng)該是不對稱的，使得疏水基團之一(遠端疏水基團)比另一疏水基團(近端疏水基團)離外部位點更遠些。對具有所需活性的化合物而言，外部供氫鍵/Lewis酸基團和描述遠端疏水基團的質(zhì)心應(yīng)相距約6或約6.7至約7或7.7埃，相距約6或約6.8至約7或7.7埃更好。對具有所需活性的化合物而言，外部供氫鍵/Lewis酸基團和描述近端疏水基團的質(zhì)心應(yīng)相距約4或約4.6至約6或約6.3埃，相距約4或約4.9至約6.0埃更好。除了上述基團之外，具有所需活性的化合物還具有能夠起氫鍵供體或Lewis堿作用的第二基團。
可以用一個角度來描述該第二受氫鍵/Lewis堿位點在分子內(nèi)的相對取向。該角度是遠端疏水基團質(zhì)心，該第二受氫鍵基團和外部供氫鍵/Lewis酸基團之間形成的。對具有所需活性的化合物而言，該角度應(yīng)在74至112度之間，85至89度之間則更好。
參見圖2和圖3能夠更好地理解通式Ⅱ化合物某些實例的空間定義，兩圖代表了通式Ⅱ化合物的W和Y和L基團內(nèi)核心環(huán)的空間填充模型。注意白區(qū)表示W(wǎng)、L和Y各自的位置和所充滿的空間。暗區(qū)表示L內(nèi)或其鄰近的氫鍵接受區(qū)。為簡化起見，沒有顯示可能從W和Y內(nèi)核心環(huán)上伸出的取代基。所示的三維結(jié)構(gòu)是具有在此所述藥理活性的化合物必需具有的。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明范圍涉及和涵蓋的化合物可以具有能夠產(chǎn)生藥理活性的其它構(gòu)象。這類其它構(gòu)象包括鍵的扭轉(zhuǎn)，鍵角扭轉(zhuǎn)，空間大小的改變，基團空間取向的改變等，這些都屬于本發(fā)明范圍之內(nèi)。
在實施方案之一中，所選化合物應(yīng)具有在體外刺激成骨細胞繁殖的活性和/或能夠維持或加強成骨細胞的生長。所述活性可以利用熟練技術(shù)人員已知的多種方法中的任一種來測定，例如實施例1所述的熒光素酶啟動子試驗。在該試驗中，具有刺激成骨細胞繁殖或生長能力的化合物將激發(fā)熒光素酶的活性。由于BMP-2熒光素酶啟動子結(jié)構(gòu)體被轉(zhuǎn)染到無限繁殖的鼠成骨細胞(2T3細胞)內(nèi)，正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知道的那樣，對熒光素酶活性的激發(fā)作用與成骨細胞繁殖刺激活性具有相當?shù)南嚓P(guān)性。
本發(fā)明方法中的化合物具有至少近似于參照化合物2-(4-甲氧基苯甲酰基氨基)-1,3-苯并噻唑的成骨細胞繁殖激發(fā)活性?！爸辽俳朴凇北硎靖鶕?jù)啟動子試驗中ED50測定，活性不低于參照化合物的100分之一，較好的是，活性等于或高于參照化合物。在實施例1的試驗條件下，參照化合物的ED50約0.1微摩爾濃度；所以，該方法所選化合物的ED50應(yīng)不高于10微摩爾濃度。
刺激骨生長的方法本發(fā)明內(nèi)容之一提供了一種利用通式Ⅱ和Ⅲ化合物來刺激成骨細胞繁殖的方法。本發(fā)明希望所述化合物具有刺激成骨細胞繁殖由此刺激骨生長的能力。
所述方法可以在體內(nèi)或體外實施。體內(nèi)實施時，本發(fā)明認為，在用通式Ⅱ或Ⅲ化合物治療后，所有的脊椎動物均可能，尤其是患有骨質(zhì)疏松的那些將表現(xiàn)出至少部分對成骨細胞繁殖的刺激作用。
當體外實施時，本發(fā)明認為，任何本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所知的測定成骨細胞繁殖刺激活性的技術(shù)均可用來測試通式Ⅱ或Ⅲ化合物。此類技術(shù)之一為實施例1中的成骨細胞繁殖試驗。
雖無意拘泥于機制，但據(jù)信，通式Ⅱ和Ⅲ化合物通過刺激成骨細胞的繁殖來發(fā)揮其骨生長刺激活性，這是化合物能夠通過結(jié)合一種或多種NHR來介調(diào)細胞轉(zhuǎn)錄的結(jié)果。
有關(guān)通式Ⅱ和Ⅲ化合物具有結(jié)合NHR的能力的證據(jù)可以利用實施例6所述的試驗來獲得。在該試驗中，對化合物從類視色素受體上置換氚化順視黃酸(RA)的能力進行了測試。被置換的RA用閃爍法來定量。圖1顯示了化合物置換RA的結(jié)果。能夠從視黃酸受體上置換RA的化合物可以用來治療或預(yù)防與這些受體有關(guān)的失調(diào)或疾病。這些疾病或失調(diào)包括，例如，骨質(zhì)疏松、關(guān)節(jié)炎、粉刺、癌癥、糖尿病、白血病、心臟肥大、炎癥、淋巴瘤、惡性腫瘤、其它癌性疾病、宮頸發(fā)育不良、黑素瘤、牛皮癬、毛發(fā)紅糠疹、pustulosis palmoplantaris、非生殖器濕疣、硬化癥、舌苔平坦、作色性干皮病、免疫抑制和紅斑狼瘡。
具有藥理活性的組合物的制備-氧化產(chǎn)物本發(fā)明部分實施方案涉及由4-異丙氧基苯甲酸或任何其它提供異丙氧基蒽酮的中間體化合物制備藥理活性組合物的方法，所述組合物具有用于抑制骨損失或刺激骨生長的組合物所應(yīng)有的活性。
方案1所示和實施例4所述的是一種將4-異丙氧基苯甲酸轉(zhuǎn)化為具有所需的成骨細胞刺激劑活性的組合物的多步驟合成方法。但是，可以從方案1中任一中間體開始，根據(jù)在此所述的以下合適的合成步驟，仍然能夠制得所需的組合物。所以，本發(fā)明認為，該藥理活性組合物是單步驟至多步驟合成方法的產(chǎn)物，其中的關(guān)鍵步驟是利用加熱或CrO3/H2O/AcOH處理將氧蒽酮氧化成所需的組合物。應(yīng)該理解的是，除此之外的其它類似或相當?shù)姆磻?yīng)條件和/或反應(yīng)試劑也可以用來氧化得到具有抗繁殖活性的組合物。所以，這類其它反應(yīng)條件和/或反應(yīng)試劑也被認為屬于本發(fā)明范圍之內(nèi)。
方案1

通過氧化步驟后的分餾產(chǎn)物具有實施例1中試驗所述的成骨細胞繁殖刺激活性。在該試驗中，可以觀察到與對照相比的熒光素酶作用的加強，這表示候選組合物對基因表達的促進作用。該試驗中，本發(fā)明組合物，即由以上方法得到的藥理活性組合物，其ED50約為10微克/毫升。ED50約在1至約50微克/毫升，或在5至約40微克/毫升，或更具體地在約10至約40微克/毫升范圍內(nèi)的制劑構(gòu)成了本發(fā)明所述的制劑。
防止和/或治療惡性細胞性失調(diào)的方法該方法是用來治療和/或預(yù)防惡性細胞相關(guān)性失調(diào)和疾病的，它包括給予惡性細胞生長抑制量的上述通式Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅵ藥理活性化合物中任一或多種。
據(jù)信，這些化合物能夠結(jié)合NHR，并由此用于抑制或防止惡性細胞的繁殖。用于惡性細胞失調(diào)的藥理活性化合物將如實施例3所述來選擇，其中，可以分辨出能夠抑制或防止惡性細胞生長或繁殖的、具有確定空間結(jié)構(gòu)的分子。該試驗中的活性化合物能夠抑制或防止黑素瘤細胞的生長或繁殖。惡性細胞抑制量即與對照細胞相比，能夠抑制腫瘤細胞生長50％的量。
概要與本發(fā)明化合物有關(guān)的藥理活性可以描述成加強或刺激成骨細胞的繁殖，延遲或抑制腫瘤或惡性細胞的繁殖，或者緩解皮膚病(例如粉刺)。在本發(fā)明的其它方面內(nèi)容中，這些化合物的藥理活性可能是具有抗關(guān)節(jié)炎、抗老化和/或抗皺活性。
“激素核受體”(NHR)在此表示位于細胞核內(nèi)的細胞受體，它們參與調(diào)節(jié)由激素介導(dǎo)的生理應(yīng)答。這類受體的實例包括，例如但不限于甾體類激素受體例如雌激素、雄性激素、孕酮、糖皮質(zhì)素和鹽皮質(zhì)素受體；視黃酸受體例如類視色素A和類視色素X受體族和亞型；甲狀腺素受體例如維生素D受體；和孤單受體例如ROR和RZR。
“烷基”在此包括具有一定數(shù)量碳原子的，支鏈、環(huán)狀和直鏈飽和脂肪族烴基；“鹵代烷基”包括具有一定數(shù)量碳原子的，被一個或多個鹵原子取代的支鏈、環(huán)狀和直鏈飽和脂肪族烴基(例如，-CvFw,v=1至3,w=1至(2v+1)；“烷氧基”表示通過氧橋連接的具有一定數(shù)量碳原子的烷基；“烷硫基”表示通過硫橋連接的具有一定數(shù)量碳原子的烷基；“環(huán)烷基”包括飽和的環(huán)基團，其中包括單環(huán)、雙環(huán)和多環(huán)環(huán)系統(tǒng)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、金剛烷基(adamantyl)和環(huán)辛基?！跋┗卑ㄔ阪湹娜我夥€(wěn)定位置有一個或多個不飽和碳-碳鍵的，構(gòu)型為直鏈、支鏈或環(huán)狀的烴鏈，例如乙烯基、丙烯基等；“環(huán)烯基”包括部分不飽和環(huán)基團；“炔基”包括在鏈的任意穩(wěn)定位置具有一個或多個碳-碳三鍵的直鏈、環(huán)狀或支鏈構(gòu)型的烴基，例如乙炔基、丙炔基等。
“烷基羰基”包括在一定位置通過羰基與化合物的其余部分連接的具有一定數(shù)量碳原子的烷基；“烷氧基羰基”包括在一定位置通過羰基與化合物的其余部分連接的具有一定數(shù)量碳原子的烷氧基?！巴榛驶被卑ㄍㄟ^羰基與一氨基橋連接的具有一定數(shù)量碳原子的烷基，所述氨基橋又在一定的位置與化合物的其余部分連接；“烷基羰基氧基”包括與羰基連接的具有一定數(shù)量碳原子的烷基，所述羰基又通過氧原子在一定位置與化合物的其余部分連接；“烷氧基羰基氨基”表示與羰基連接的具有一定數(shù)量碳原子的烷氧基，所述羰基又通過一氨基在一定位置與化合物的其余部分連接；“烷基氨基”表示與氨基連接的具有一定數(shù)量碳原子的烷基，所述氨基又在一定位置與化合物的其余部分連接。
“鹵素”或“鹵原子”在此指氟、氯、溴和碘；“反離子”在此表示小型、帶負電荷的離子，例如氯根、溴根、氫氧根、乙酸根、硫酸根等。
“芳香族基團”在此表示芳基或雜芳基；“芳基”包括苯基或苯環(huán)上被取代的苯基；“芳基烷基”表示通過烷基橋連接的芳基。例如，“C7-C10芳基烷基”指通過一C1-C4烷基橋與化合物的其余部分連接的芳基；“(C1-C3烷基)芳基”指通過一芳基環(huán)與化合物其余部分連接的C1-C3烷基；“芳基(C1-C3烷基)”指通過一C1-C3烷基與化合物其余部分連接的芳基。
“碳環(huán)”或“碳環(huán)的”包括各種穩(wěn)定的3至7元單環(huán)或雙環(huán)，或7至14元雙環(huán)或三環(huán)，或多至26元的多環(huán)碳環(huán)，它們都可以是飽和的(環(huán)烷基)、部分不飽和的(環(huán)烯基)或芳香族的。這類碳環(huán)例如但不限于環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、苯基、聯(lián)苯基、萘基、2,3-二氫化茚基、金剛烷基或四氫萘基(3,4-四氫萘)。
“氮雜環(huán)烷基”在此表示至少環(huán)內(nèi)碳原子之一被一個氮原子取代的環(huán)烷基；“氧雜環(huán)烷基”表示至少環(huán)內(nèi)碳原子之一被一個氧原子取代的環(huán)烷基；“氮雜環(huán)烯基”表示至少環(huán)內(nèi)碳原子之一被一個氮原子取代的環(huán)烯基；“氧雜環(huán)烯基”表示至少環(huán)內(nèi)碳原子之一被一個氧原子取代的環(huán)烯基。
在此所述的化合物可能具有不對稱質(zhì)心。所有的手性、非對映和外消旋形式都屬于本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明化合物還可以具有烯的、C=N雙鍵等的多種幾何異構(gòu)體，如果不對立體化學(xué)或異構(gòu)形式進行特別的說明，則所有這些穩(wěn)定的異構(gòu)體都屬于本發(fā)明?？梢岳斫獾氖?，本發(fā)明的某些化合物可能具有一個不對稱取代的碳原子，而且可能分離成光學(xué)活性或外消旋的形式。如何制備光學(xué)活性的形式是本領(lǐng)域眾所周知的，例如拆分外消旋混合物或由光學(xué)活性起始物來合成。此外，本發(fā)明將說明本發(fā)明化合物的順式和反式幾何異構(gòu)體，以及可分離成異構(gòu)體的混合物或各個異構(gòu)體。
只有當取代基和/或變化的組合產(chǎn)生的是穩(wěn)定的化合物，這樣的組合才是允許的?！胺€(wěn)定的化合物”或“穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)”表示，化合物足夠牢固可以經(jīng)受由反應(yīng)混合物經(jīng)分離達到可用級的純度，并被配制成有效的治療藥物。
“取代的”在此表示特定原子或基團上的任一或多個氫原子被規(guī)定基團組中的選定基團所取代，條件是不超過特定原子的正常效價，而且取代產(chǎn)生的是穩(wěn)定的化合物。
“雜芳基”表示一完全不飽和雜環(huán)；“雜環(huán)”表示一個穩(wěn)定的5至7元單環(huán)或雙環(huán)，或7至10元雙環(huán)雜環(huán)，所述環(huán)是飽和的或不飽和的，由碳原子和1至4個雜原子構(gòu)成，雜原子各自獨立地選自N,O和S，其中的氮和硫雜原子可以是氧化形式的，而且，氮原子可以是季銨化的，而且還包括雙環(huán)基團，其中任一上述雜環(huán)與一苯環(huán)稠合。雜環(huán)可以在任意雜原子或碳原子位置與其側(cè)基連接，形成一穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。如果所得的化合物是穩(wěn)定的，則所述的雜環(huán)可以在碳原子或氮原子上被取代。這樣的雜環(huán)的實例包括但不限于1H-吲唑、2-吡咯烷酮基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、2H-吡咯基、3H-吲哚基。4-哌啶酮基、4aH-咔唑、4H-喹嗪基、6H-1,5,2-噻二嗪基、吖啶基、吖辛因基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、咔唑、苯并二氫呋喃基、苯并呋喃基、肉啉基、十氫喹啉基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、二氫吲哚基、吲嗪基(indolizinyl)、吲哚基、異苯并呋喃基、異苯并二氫呋喃基、異二氫吲哚基、異吲哚基、異喹啉基(苯并咪唑基)、異噻唑基、異噁唑基、嗎啉基、1,5-二氮雜萘基、八氫異喹啉基、噁唑烷基、噁唑基、菲啶基、菲咯啉基、吩吡嗪基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噻噁基、吩噁嗪基、2,3-二氮雜萘基、哌嗪基、哌啶基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、喹唑啉基、醌基、喹喔啉基、奎寧環(huán)基、咔啉基、四氫呋喃基、四氫異醌基、四氫醌基、四唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、苯硫基、三嗪基、砧噸基。還包括含有上述雜環(huán)的稠環(huán)和螺環(huán)化合物。
本文中的縮寫定義如下RXR類視色素X受體RAR類視色素A受體NHR激素核受體BMP骨形蛋白ROR類視色素相關(guān)性孤兒受體RZR類視色素Z相關(guān)性受體PR孕酮受體ER雌激素受體AR雄性激素受體GR糖皮質(zhì)素受體MR鹽皮質(zhì)素受體TR甲狀腺素受體VDR維生素D受體1,25(OH)2D:1,25-二羥基維生素DIL-2白介素2TNF腫瘤壞死因子藥物制劑“藥理活性化合物”在此指具有所需的有益藥理或治療活性的通式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ或Ⅵ化合物，所述活性例如刺激或維持成骨細胞繁殖的藥理活性。
本發(fā)明范圍內(nèi)的藥理活性化合物的形式可以是其游離酸、游離堿或藥學(xué)上可接受的鹽。它們可以是給定化合物的衍生物或前藥。
各藥理游離活性化合物加入藥物制劑中可以通過各種眾所周知的技術(shù)來完成，例如Remington’s Pharmaceutical Science，第17版，Mack Publishing Company，Easton,PA,1985，本文引用并參考了其中的內(nèi)容。
將藥理活性化合物加入制劑中可能根據(jù)化合物的藥理活性、接受治療的病癥、既定治療方案、預(yù)定給藥方法、最終制劑的完整性或穩(wěn)定性，或其它因素而不同。
本發(fā)明的藥物制劑可以通過多種方法給藥。例如但不限于腹膜內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、動脈內(nèi)、心內(nèi)、腔內(nèi)、軟骨內(nèi)、真皮內(nèi)、鞘內(nèi)、眼內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜腔內(nèi)、胸廓內(nèi)、氣管內(nèi)、子宮內(nèi)、硬外膜的、經(jīng)皮的、血管內(nèi)、靜脈內(nèi)、冠內(nèi)(intracoronary)、肌內(nèi)或皮下注射；吸入或口服、經(jīng)鼻、口腔、直腸、眼內(nèi)、耳內(nèi)、經(jīng)尿道、陰道、或舌下給藥。上述以及本發(fā)明范圍內(nèi)的其它給藥方法對熟練技術(shù)人員來說是眾所周知的。
本發(fā)明藥物制劑可以多種方式提供。本發(fā)明制劑所用任何成份在給藥前都不得令藥理活性化合物大量降解或分解。
就注射而言，藥物制劑可以是適合用合適的溶液再生的粉劑，例如但不限于冷凍干燥、旋轉(zhuǎn)干燥或噴霧干燥的粉末；非晶體粉末；或丸粒，沉淀物或顆粒。就注射而言，藥物制劑也可以是合適溶劑中的懸浮液，例如但不限于水、水溶液、非質(zhì)子性溶劑、質(zhì)子性溶劑、親水溶劑、疏水溶劑、極性溶劑、非極性溶劑和/或它們的混合物，其中任選地含有穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、生物利用度改進劑和/或它們的混合物。
藥物制劑可以緩釋輸注或植入體制劑的形式給藥，由此長期地釋放出藥理活性化合物。制劑可以壓制成片劑或小的圓柱體，并將其植入皮下或肌內(nèi)，作為緩釋輸注或植入體。植入體可能用到惰性材料，例如可生物降解的聚合物或合成硅樹脂，例如Dow-Corning Corporation制造的硅橡膠，Silastic。
就鼻用而言，藥物制劑可以是噴霧劑或氣溶膠，其中含有合適的溶劑(例如水、水性、非水性、極性、非極性、親水性、疏水性和/或以上的組合)，以及任選的其它化合物(例如穩(wěn)定劑、抗微生物劑、抗氧化劑、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑和/或生物利用度改進劑)。在氣溶膠中要用到壓縮空氣、氮氣、二氧化碳或基于烴的低沸點溶劑(例如丁烷、丙烷或其它)的推進劑。此外，也可以使用含有本發(fā)明膠束的糊劑、油膏或霜劑。本發(fā)明認為，為了制備適合鼻用的制劑，可能需要有助于藥理活性化合物由藥物制劑滲透到鼻粘膜中的生物利用度加強劑，例如醇或其它化合物。
就口服、口腔和舌下給藥而言，藥物制劑的形式可以是gelcap、caplet、片劑、膠囊、懸浮液或粉劑。就直腸給藥而言，藥物制劑的形式可以是栓劑、油膏、灌腸劑、片劑和用于在腸道、乙狀結(jié)腸和/或直腸內(nèi)釋放化合物的霜劑。
呈單位固體劑型時，本發(fā)明化合物可以與常規(guī)載體混合，例如，粘合劑，例如阿拉伯樹膠、玉米淀粉和明膠；崩解劑，例如玉米淀粉、瓜爾樹膠、馬鈴薯淀粉或藻酸；潤滑劑，例如硬脂酸或硬脂酸鎂；和惰性填料，例如乳糖、蔗糖或玉米淀粉。
“單位劑型”在此表示單一或復(fù)合劑量形式，其中含有一定量的含藥理活性化合物制劑，所述的量是通常為一次治療性給藥所需的、預(yù)定的一個或多個單位。如果是多劑型，例如懸浮液或有劃痕的片劑，所述的預(yù)定劑量可能是部分(例如5ml(一茶勺))懸浮液，或有劃痕片劑的一半或四分之一。
本發(fā)明藥物制劑還可以作為液體懸浮液或溶液用于口服或腸胃外給藥，所述制劑使用合適的無菌液體，例如油、水和醇，或以上的混合物，加有或不加藥學(xué)上合適的表面活性劑、懸浮劑或乳化劑。
就懸浮劑而言，藥物制劑中可以包含油，例如，固定油，如花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油和橄欖油；脂肪酸，例如油酸、硬脂酸和異硬脂酸；和脂肪酸酯，如油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、脂肪酸甘油酯和乙?；舅岣视王?；加入醇，如乙醇、異丙醇、十六烷醇、甘油和丙二醇；加入甘油縮酮，如2,2-二甲基-1,3-二氧環(huán)戊烷-4-甲醇；加入醚，例如聚(乙二醇)450，加入石油烴，例如礦物油和凡士林；加入水，或加入以上所述的混合物；加或不加藥學(xué)上合適的表面活性劑、懸浮劑或乳化劑。
油還可能用于制備軟性明膠和栓劑制劑。在制備懸浮劑時可能用到水、鹽水、葡萄糖水溶液和相關(guān)的糖溶液，和甘油，所述懸浮劑還宜含有懸浮劑(如果膠、carbomer、甲基纖維素、羥丙基纖維素或羧甲基纖維素)以及緩沖液和防腐劑。肥皂和合成除垢劑可以用作除垢組合物的表面活性劑和載體。合適的肥皂包括脂肪酸的堿金屬、銨和三乙醇胺鹽。合適的除垢劑包括陽離子除垢劑，如二甲基二烷基鹵化銨、烷基鹵化吡啶鎓和乙酸烷基胺；陰離子除垢劑，例如磺酸的烷基、芳基和烯基酯、烷基、烯基、醚、和單硫酸甘油酯、和磺基琥珀酸酯；非離子除垢劑，如脂肪胺氧化物、脂肪酸鏈烷醇酰胺、和聚氧乙烯-嵌段-聚氧乙烯共聚物；和兩性除垢劑，例如β-氨基丙酸烷基酯和2-烷基咪唑啉季銨鹽；和以上所述的混合物。
一種或多種組合的速效或短效，快速釋放，長效，緩釋、控釋和緩慢釋放劑型可以用于本發(fā)明。本發(fā)明制劑的給藥過程和時間以及所需劑量取決于患者、所用的化合物、所用的制劑、給藥方式、所治療病癥的嚴重程度和類型、合用的其它藥物，以及其它因素。
藥理活性化合物可以其藥學(xué)上可接受的鹽的形式配制在其制劑中?！八帉W(xué)上可接受的鹽”在此指通過形成其酸性或堿性鹽對活性親本藥理活性化合物進行了改造的本發(fā)明所述化合物的衍生物。藥學(xué)上可接受的鹽例如但不限于，堿性殘基例如胺的無機或有機酸鹽；酸性殘基例如羧酸的堿金屬或有機鹽；等。藥學(xué)上可接受的鹽包括所得親本化合物的常規(guī)的無毒鹽或季銨鹽，例如由無毒的無機酸或有機酸制得。例如，這類常規(guī)無毒鹽包括由鹽酸、氫溴酸、硫酸、磺酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等無機酸制得的；和由氨基酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙二酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酯、雙羥萘酸(pamoic acid)、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、對氨基苯磺酸、2-乙酸基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羥乙磺酸等。
本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可以利用常規(guī)化學(xué)方法由具有堿性或酸性基團的親本藥理活性化合物來制備。簡而言之，所述的鹽可以在水或在有機溶劑或在兩者的混合物中，通過化合物的游離酸或游離堿形式與預(yù)定量的合適的堿或酸反應(yīng)制得。通常，以非水性介質(zhì)為佳。合適的鹽系列可參見Remington’sPharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company,Easton,PA,1985,p.1481，本文引用并參考了其中的內(nèi)容。
“藥學(xué)上可接受的”在此指這樣的化合物、材料、組合物和/或劑型，它們經(jīng)嚴格的醫(yī)學(xué)裁定，適合與人體或其它動物組織接觸而沒有過度的毒性、刺激、過敏反應(yīng)或其它問題和并發(fā)癥，即具有合理的效果/風(fēng)險比。
優(yōu)選實施方案沿襲長期以來的專利法常規(guī)，本說明書中所用的“一個”表示“一或多個(種)。
刺激BMP-2活性；成骨細胞繁殖的方法本發(fā)明提供了一種刺激BMP-2啟動子活性及由此的成骨細胞繁殖的方法。在部分實施方案中，所述方法包括令含成骨細胞或成骨細胞前體細胞的細胞與通式Ⅰ藥理活性化合物接觸X-L-Z通式Ⅰ其中X選自

L選自

Z選自

R1選自H、OH、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、鹵素和(C1-C12)烷基-羰基氧基；
R2選自H,OH，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烯基，C1-C6烷氧基和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R3選自H,OH，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烯基和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R4是H；R5選自H，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-OC(=O)Me，鄰苯二甲酰亞胺和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R6選自H,OH,-NH2,C1-C4烷基和C1-C4烷氧基；R7選自H,C1-C4烷基，C1-C4烷基-羰基和(C7-C10)芳基烷基；R8選自H,OH，鹵素，-CF3,C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me和-N(C1-C4烷基)2；R9選自H,OH，鹵素，-CN,-NO2,C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me；R10選自H,OH,鹵素，-CN,-NO2,C1-C4鹵代烷基，-CO2H,C1-C12烷基，C1-C12烷氧基，苯基，C1-C12烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，-NHC(=O)Me,(C1-C4)烷基羰基，(C1-C12)烷基-羰基氧基和雜芳基；R11選自H,OH,鹵素，C1-C4鹵代烷基，-CF3,C1-C4烷基，-NH2,C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基，(C1-C4)烷基-羰基氧基；R12選自H,OH,-NH2,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和(C1-C4)烷基羰基；R13選自H,OH，鹵素，-NH2,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和-N(C1-C4烷基)2；在本方法有些實施例中，通式Ⅰ藥理活性化合物還可以如下定義R10和R11連接在一起形成一個5-7的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與R10和R11所連接的環(huán)稠合，其中該碳環(huán)和氧雜碳環(huán)為選自下列基團的一個或多個基團所取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、OH、鹵素、羧基、H和芳基；條件是1)當X選自

時，L是

且，Z是

2)如果X是

則L選自

和一單鍵3)如果X是

且Z是

則L是

4)如果X是

且Z是

則L是

5)如果X是

則Z是

且L是

6)如果X是

則Z是

且L是

以上方法可以包括第二步即刺激BMP-2啟動子活性來刺激成骨細胞的繁殖和骨的生長。估計骨吸收也會被降低或抑制。
藥效基團模型本發(fā)明另一方面提供了一種選擇藥理活性化合物的方法。在部分實施例中，該方法包括選擇具有確定空間三維結(jié)構(gòu)如通式Ⅱ所定義的候選化合物，W-L-Y通式Ⅱ提供具有確定空間結(jié)構(gòu)的化合物，其中W含有一個具有以字母“A”表示的質(zhì)心的芳香基；Y含有一個具有以字母“B”表示的質(zhì)心的碳環(huán)基團；L含連接X和Z的基團；W內(nèi)的芳香基原子形成一個“P”平面；質(zhì)心“B”位于“P”平面以上或以下約0.7埃；質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”相距約6或約6.6至約8或約8.5埃；和選擇具有藥理活性的空間結(jié)構(gòu)確定的化合物。
在有些實施例中，空間結(jié)構(gòu)確定的候選化合物的三維結(jié)構(gòu)可以進一步定義為
據(jù)重原子距離測定，L占據(jù)著一個外限小于或等于約3?；蚣s3.1埃的空間，沿平面“P”的法相測定，位于平面“P”之上或之下并與之正交。
在另一實施方案中，據(jù)重原子距離測定，L占據(jù)著一個外限約4埃或約4.7至6.0埃的空間，與質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”的連線垂直并位于平面“P”內(nèi)。
在本方法其它實施方案中，通式Ⅱ化合物定義為具有至少兩個受氫鍵基團，位于L內(nèi)或其附近，受氫鍵基團被進一步定義為1)受氫鍵基團相距約2或約2.3至約5或約5.4埃；2)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約4或約4.5埃至約7或約7.7埃，而距質(zhì)心“B”約2或約2.7埃至約3或約3.8埃；而且3)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約2或約2.6至約3埃或約3.8埃，而距質(zhì)心“B”約4或約4.6至約7或約6.9埃。
在有些實施方案中，所述方法進一步定義為，其中的通式Ⅱ化合物被定義為1)不是通式Ⅹ化合物

通式Ⅹ其中的R1是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基、或(C1-C17)烷基羰基；R2是-(CH2)(1-6)-CH2-雜環(huán)；R3是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基、或(C1-C17)烷基羰基；而且2)不是通式Ⅺ化合物

通式Ⅺ本發(fā)明還提供了使用通式Ⅱ定義的空間確定的分子來刺激BMP-2啟動子活性、成骨細胞繁殖、腫瘤抑制、皮膚病或關(guān)節(jié)炎的方法。滿足上述立構(gòu)特征的候選物將利用本文所述試驗，根據(jù)其具體所需的藥理活性進行選擇。
具有“A”質(zhì)心的芳香環(huán)可以互不相干地被以下基團之一或多個取代H、鹵素、羥基、氨基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C1-C2鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、-OC(=O)-(C1-C6烷基)和-NHC(=O)-(C1-C6烷基)。
此外，在具有單取代或多取代“A”質(zhì)心的上述制劑的其它實施例中，具有“B”質(zhì)心的碳環(huán)可以互不相干地被以下基團之一或多個取代H、鹵素、羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、三氟甲基、C1-C6烷基、C1-C2鹵代烷基、C1-C6烷氧基、硝基、三氟甲基、C1-C6烯基、芳基、雜芳基、-OC(=O)-(C1-C6烷基)和-NHC(=O)-(C1-C6烷基)。
苯并噻唑-成骨細胞繁殖的方法本發(fā)明的另一方面包括用通式Ⅲ藥理活性化合物刺激成骨細胞繁殖或BMP-2啟動子活性的方法

通式Ⅲ其中，R1選自芳基、萘基、雜芳基和環(huán)烷基；上述各R1取代基被一個或多個以下基團取代C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、-NO2、-CF3、芳基、芐氧基、羥基、C1-C2鹵代烷基、鹵素、氰基、羧基、氫原子、芳基、(C1-C4)烷基羰基氨基、(C1-C4)烷基羰基、(C1-C4)烷基-芳基和-NH2；R2選自H、C1-C4烷氧基、氨基或C1-C4烷基；R3和R6互不相干地選自H、羥基、(C1-C5)烷基羰基氧基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烯基和C1-C4烷氧基；R4和R5互不相干地選自H、鹵素、羥基、(C1-C4)烷基-羰基氧基、氰基、C1-C2鹵代烷基、C1-C4烷氧基、苯甲?；1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、(C1-C4)烷基-芳基、(C1-C4)烯基-芳基、(C1-C4)炔基-芳基、(C1-C4)烷基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)烯基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)炔基-(C6-C10)環(huán)烷基、羧基和(C1-C4)烷氧基羰基。
在本方法有些實施例中，通式Ⅲ的藥理活性化合物進一步定義為R4和R5共同連接成一個5至6元的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與該兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)被一個或多個以下基團取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素、羧基、氫原子和芳基。
本發(fā)明方法包括給含成骨細胞的細胞使用有效量的通式Ⅲ化合物。
在一具體實施方案中，本發(fā)明方法包括刺激BMP-2啟動子活性，即給予2(2-甲氧基苯甲酰胺基)-1,3-苯并噻唑。本發(fā)明還具體說明了使用以上命名的化合物來刺激成骨細胞繁殖的方法。
苯并噻唑及其相關(guān)化合物本發(fā)明的另一方面涉及作為藥理活性制劑的通式Ⅲ苯并噻唑及其相關(guān)化合物。這些藥理活性制劑可望用于刺激成骨細胞的繁殖，刺激BMP-2啟動子活性，抑制或降低骨吸收和用于抑制腫瘤細胞。通式Ⅲ化合物如下

通式Ⅲ其中，R1選自芳基、萘基、雜芳基和環(huán)烷基；上述各取代基被一個或多個以下基團取代C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、-CF3、-NO2、芐氧基、羥基、C1-C2鹵代烷基、鹵素、氰基、羧基、氫原子、芳基、(C1-C4)烷基羰基氨基、(C1-C4)烷基羰基、(C1-C4)烷基-芳基和-NH2；R2選自H、C1-C4烷氧基、氨基或C1-C4烷基；R3和R6互不相干地選自H、羥基、(C1-C2)烷基羰基氧基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烯基和C1-C4烷氧基；R4和R5互不相干地選自H、鹵素、羥基、(C1-C4)烷基-羰基氧基、氰基、C1-C2鹵代烷基、C1-C4烷氧基、苯甲?；?、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、(C1-C4)烷基-芳基、(C1-C4)烯基-芳基、(C1-C4)炔基-芳基、(C1-C4)烷基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)烯基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)炔基-(C6-C10)環(huán)烷基、羧基和(C1-C4)烷氧基羰基。
在本發(fā)明其它實施方案中，上述化合物被進一步定義為R4和R5共同連接成一個5至6元的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與該兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)被一個或多個以下基團取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素、羧基、氫原子和芳基；
條件是1)當R2、R3、R4、R5、R6都是H時，R1不能是苯基、萘基、取代方式如以下之一的單取代苯基2-疊氮基、2-硝基、2-氯、2-溴、2-氟、2-羥基、2-羧基、2-(2-羧基-5-氯苯基)、2-(4’-乙?；交撬峄?、2-(4’(氰基乙?；?-苯磺酸基、2-(4’-乙氧基苯基)氨基、2-二(4’-羥基苯基)甲基、2-二(4’-乙酸基苯基)甲基、2-(2,3-羧基丙烯酰基)氨基、3-溴、3-氯、3-甲氧基、4-氯、4-溴、4-氟、4-甲基、4-硝基、4-甲氧基、4-乙氧基、4-正丙氧基、4-異丙氧基、4-正丁氧基、4-異丁氧基、4-正戊氧基、4-芐氧基、4-烯丙基氧基、4-乙酸基、4-(2’-二乙基氨基)乙氧基、4-氨基、4-二甲基氨基、4-胍基、4-硫代甲基、4-(4’-甲基苯磺?；?氨基、4-(二乙基膦?；?甲基、4-(二異丙基膦酰基)甲基、4-






n=5,6,8,10,14,

R是H或Me，

其中R’是芐基、2-苯基乙基、α萘基甲基、4-甲氧基芐基、3,4-二氯芐基或2-(3’,4’-二氯苯基)乙基，

R”是H或Me，

R”’是2-氯苯基、2-氟苯基或3-氯苯基，

R””是苯基或2-吡啶基，

R””’選自4-磺基苯基、3,6-二磺基苯基、4-甲氧基-3-磺基苯基、6-氯-3-磺基苯基或2,5-二氯-4-磺基苯基，

R7是芐基或氫原子，

其中的R9是羥基，R10是且R3選自



其中R11、R12、R13和R14都是H，或者R12和R14都是H且R11和R13都是H、甲基、甲氧基或氯，或者R11和R13都是H而R12和R14都是氯，R11是甲基而R12、R13和R14都是H，

其中R15是一化學(xué)鍵且R16是氫或氯，或者R15是4-偶氮苯基而R16是氯；R9是氫，R10是

且R8是

R11和而R13都是氯，且R12和R14都是氫；或者，R9是羥基，R10是羥基，且R8是

R12和R14都是羥基，R11和而R13都是甲基、甲氧基或氯，或者R11和而R13都是氫而R12和R14都是氯，或者R12、R13和R14都是氫而R11是甲基，或者R11、R12和R14都是氫而R13是甲基；

R17選自

R18是苯基或3-噻吩基，

或

R19是一化學(xué)鍵或-CH=CH-；2)當R3、R4、R5和R6都是H，且R2是苯基時，則R1不能是苯基；
3)當R3、R4、R5和R6都是H，且R2是甲基時，則R1不能是苯基；4)當R3、R4、R5和R6都是H，且R2是氨基時，則R1不能是4-甲氧基苯基；5)如果R3、R4、R5和R6都是H，且R2是

則R1不能是3-氯苯基；6)如果R3、R4、R5和R6都是H，且R2是

則R1不能是氯丙基；7)當R3、R4、R5和R6都是H，且R2是2-(二甲基氨基)乙基或3-(二甲基氨基)丙基時，則R1不能是苯基；8)當R3、R4、R5和R6都是H，且R2是N,N’-二苯基脒基時，則R1不能是苯基；9)如果R3、R4、R5和R6都是H，且R2是

則R1不能是2-呋喃基、2-噻唑基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲基苯基、3,4-二甲氧基苯基；10)當R3、R4、R5和R6都是H，且R2是苯基時，則R1不能是

R20是H、苯甲?；蛳趸?


11)如果R3、R4、R5和R6都是H，且R2是

則R1不能是2-呋喃基或3-呋喃基；12)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是甲氧基時，則R1不能是苯基、2-羧基苯基、4-胍基苯基、4-硝基苯基、3,5-二硝基苯基、4-(二苯基膦?；谆?苯基、4-(2’-二乙基膦?；已趸?苯基、4-(3’-二乙基膦?；趸?苯基、4-(乙基膦?；谆?苯基、4-(乙基，甲基膦?；谆?苯基、4-(芐基，乙基膦?；谆?苯基、4-(乙基，異丙基膦酰基甲基)苯基、4-(二乙基膦?；谆?苯基、4-(二甲基膦酰基甲基)苯基、4-(二正丁基膦?；谆?苯基、

13)當R4、R5和R6都是H,R2是芐基或甲基，且R3是甲氧基時，R1不能是4-(二乙基膦?；谆?苯基；14)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是乙氧基時，R1不能是苯基、4-正丁氧基苯基、4-異丙氧基苯基、4-甲氧基苯基或4-乙氧基苯基；15)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是正丙氧基時，R1不能是4-乙氧基苯基；16)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是甲基時，R1不能是苯基、4-胍基苯基、4-(二乙基膦?；谆?苯基、或

17)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是三氟甲基時，R1不能是4-胍基苯基或2,6-二氟苯基；18)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是硝基時，R1不能是苯基或4-胍基苯基；19)當R4、R5和R6都是H,R2是乙基，且R3是氯時，R1不能是苯基；20)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是氯時，R1不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、苯基、3,5-二溴-2-羥基苯基或

21)當R2、R4、R5和R6都是H，且R3是三氟甲氧基時，R1不能是4-(二乙基膦?；谆?苯基；22)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是磺基時，R1不能是

23)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是羧基時，R1不能是

24)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是氨基甲?；鶗r，R1不能是4-胍基苯基；25)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是氟時，R1不能是4-(胍基甲基)苯基或

26)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是氯時，R1不能是苯基、4-氯苯基、

27)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是硝基時，R1不能是苯基；28)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是三氟甲基時，R1不能是2,6-二氟苯基；29)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是甲基時，R1不能是苯基；30)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是苯基時，R1不能是

31)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是4-(三氟甲基)苯甲?；鶗r，R1不能是2,6-二氟苯基或2-氯-6-氟苯基；32)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是甲氧基時，R1不能是苯基；33)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是

R1不能是

34)當R2、R3、R5和R6都是H，且R4是乙氧基時，R1不能是

35)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是氟時，R1不能是苯基、2-氨基苯基、4-硝基苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、或

36)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是氯時，R1不能是苯基、2-氨基苯基、4-氨基苯基、2-氟苯基、2,6-二氟苯基、4-硝基苯基、3,5-二硝基苯基、4-胍基苯基、4-(胍基甲基)苯基、

37)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是溴時，R1不能是苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-正丁氧基苯基、4-異丁氧基苯基、4-正丙氧基苯基、4-異丙氧基苯基、4-硝基苯基、4-胍基苯基、4-(二乙基膦?；谆?苯基、或

38)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是碘時，R1不能是苯基或4-硝基苯基；39)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是氨基時，R1不能是4-胍基苯基；40)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是乙酰氨基時，R1不能是苯基；41)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是二乙基氨基時，R1不能是苯基；42)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是硝基時，R1不能是苯基、4-硝基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-正丁氧基苯基、4-胍基苯基、4-(胍基甲基)苯基、3-(胍基甲基)苯基、4-(二乙基膦?；谆?苯基、3,5-二硝基苯基、

43)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是羧基時，R1不能是苯基；44)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是氨基甲酰基時，R1不能是4-胍基苯基、4-(二乙基膦?；谆?苯基、或4-(胍基甲基)苯基；45)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是氰基時，R1不能是4-胍基苯基或

46)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是乙酯基甲氧基時，R1不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；47)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是乙酯基時，R1不能是4-(二乙基膦?；谆?苯基；48)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是2-羥基乙基時，R1不能是4-胍基苯基；49)當R2、R3、R5和R6都是H，且R5是甲基時，R1不能是苯基、4-氯苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-胍基苯基、4-(二乙基膦?；谆?苯基、4-羥基3-碘-5-硝基苯基、

50)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是正丁基時，R1不能是4-胍基苯基；51)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是硫代甲基時，R1不能是4-胍基苯基或4-(二乙基膦?；谆?苯基；52)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是甲基亞硫?；鶗r，R1不能是4-胍基苯基；53)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是甲基磺?；鶗r，R1不能是4-胍基苯基；54)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是氨磺?；鶗r，R1不能是苯基、4-胍基苯基或3,5-二硝基苯基；55)當R3、R4和R6都是H,R2是苯基，且R5是磺基時，R1不能是

56)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是SCH2CF3時，R1不能是2,6-二氟苯基；57)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是SOCF3時，R1不能是2,6-二氟苯基；58)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是SCF3時，R1不能是2,6-二氟苯基或2-氯苯基；59)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是異丙基時，R1不能是4-胍基苯基；60)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是三氟甲基時，R1不能是4-胍基苯基、4-(二乙基膦?；谆?苯基、4-(胍基甲基)苯基、2-氟苯基、2-甲基苯基、2-氯-6-氟苯基、2-氯苯基或2,6-二氟苯基；61)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是三氟甲氧基時，R1不能是2-三氟甲基苯基、2-甲氧基苯基、2-溴苯基、2-氯苯基、2-甲基苯基、2-氯-6-氟苯基、2,4-二氯苯基、2,6-二氟苯基或3,5-二氯苯基；62)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是OCHF2時，R1不能是2,6-二氟苯基；
63)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是OCF2CHF2時，R1不能是2,6-二氟苯基；64)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是OCF2CHFCF3時，R1不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；65)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是2-氯-4-(三氟甲氧基)苯氧基時，R1不能是2-氯苯基、2,6-二氟苯基或2-氯-6-氟苯基；66)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是2,3,4,5-四溴-6-氰基苯甲酰氨基時，R1不能是2,3,4,5-四溴-6-氰基苯基；67)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是甲氧基時，R1不能是苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-正丙氧基苯基、4-異丙氧基苯基、4-正丁氧基苯基、4-異丁氧基苯基、4-正戊氧基苯基、4-(3-甲基丁氧基)苯基、4-甲基苯基、4-氯苯基、3,4-二氨基苯基、4-氨基-3-硝基苯基、4-乙酰氨基-3-硝基苯基、2-氟苯基、4-(二乙基膦?；谆?-苯基、

68)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是正丙氧基時，R1不能是苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-正丙氧基苯基、4-異丙氧基苯基、4-正丁氧基苯基；69)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是乙氧基時，R1不能是苯基、4-羥基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-正丙氧基苯基、4-異丙氧基苯基、4-正丁氧基苯基、4-異丁氧基苯基、2-氟苯基、4-胍基苯基、4-(二乙基膦酰基甲基)苯基、2-(二-(4′-羥基苯基)甲基)苯基、



70)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是異丙氧基時，R1不能是苯基、4-甲氧基苯基或4-乙氧基苯基；71)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是正丁氧基時，R1不能是苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基或4-正丁氧基苯基；72)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是異丁氧基時，R1不能是4-甲氧基苯基；73)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是芐氧基時，R1不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；74)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是苯基時，R1不能是3-(胍基甲基)苯基、4-(胍基甲基)苯基、2,6-二氟苯基、

R是氫原子、甲基、乙基、正丙基或異丙基；75)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是4-氟苯基時，R1不能是

76)當R2、R3、R4和R6都是H，且R5是苯偶氮基時，R1不能是苯基；77)當R2、R3、R4和R5都是H，且R6是硝基時，R1不能是苯基；78)當R2、R3、R4和R5都是H，且R6是苯基時，R1不能是

79)當R2、R3和R4都是H,R5是2-氯-4-(三氟甲基)苯氧基，且R6是甲基或氫原子時，R1不能是2-氯苯基、2-氯-6-氟苯基、或2,6-二氟苯基；80)當R2、R4和R5都是H，且R3是甲基且R5是SCH2CO2Et時，R1不能是4-氰基苯基；81)當R2、R3和R6都是H，且R4和R5都是Me時，R1不能是4-胍基苯基、2-羥基苯基、4-(二乙氧基膦酰基甲基)苯基、

其中，R是Cl或Me,R’是H或OH；82)當R2、R5和R6都是H，且R3和R4都是-CH=CH-CH=CH-時，R1不能是苯基、4-(3’-(二乙基膦?；?丙氧基)苯基、4-(二乙基膦?；谆?苯基、4-甲基苯基、4-硝基苯基、4-氯苯基、

83)當R2、R3和R6都是H，且R4和R5都是甲酯基時，R1不能是

84)當R2、R4和R6都是H,R3是甲氧基，且R5是苯基時，R1不能是

85)當R2、R3和R6都是H，且R4和R5都是甲氧基時，R1不能是

86)當R2、R3和R6都是H,R4是氯，且R5是硝基時，R1不能是

87)當R2、R4和R6都是H,R3是苯甲?；襌5是氯時，R1不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；88)當R2、R4和R6都是H,R3是苯基，R5是溴時，R1不能是4-(二乙基膦?；谆?苯基；89)當R2、R3和R4都是H，且R5和R6都是-CH=CH-CH=CH-時，R1不能是2-羥基苯基、




90)當R2、R3和R4都是H，且R5和R6都是-CO-CH=C(Ph)-O-時，R1不能是苯基、4-甲基苯基、4-氯苯基或4-甲氧基苯基；91)當R2、R3和R4都是H，且R5和R6都是-S-C(NHCOPh)=N-時，R1不能是苯基；92)當R2、R3和R5都是H，且R4和R5都是-CH=CH-CH=CH-時，R1不能是苯基；93)當R2、R3和R5都是H，且R4和R5都是-OCF2CF2O-時，R1不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；94)當R2、R3和R4都是H，且R5和R6都是-OCF2CF2O-時，R1不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；95)當R2、R4和R6都是H，且R3和R5都是氯時，R1不能是苯基或4-硝基苯基；96)當R2、R4和R6都是H，且R3和R5都是溴時，R1不能是苯基或4-硝基苯基；97)當R2、R4和R6都是H，且R3和R5都是甲氧基時，R1不能是4-(二乙基膦?；谆?苯基；98)當R2、R4和R6都是H,R3是甲氧基，且R5是硝基時，R1不能是4-胍基苯基、4-(胍基甲基)苯基；99)當R2、R4和R6都是H，R3是COCH3，且R5是溴時，R1不能是4-(二乙基膦?；谆?苯基；100)當R2、R4和R5都是H,R3是甲氧基，且R6是氯時，R1不能是4-胍基苯基；101)當R2、R3和R6都是H,R4是氟，且R5是硫代氰基時，R1不能是苯基或4-硝基苯基；102)當R2、R3和R6都是H,R4是氯，且R5是甲氧基時，R1不能是4-(二乙基膦?；谆?苯基；103)當R2和R3都是H，且R4、R5和R6都是溴時，R1不能是苯基或4-硝基苯基；104)當R2和R3都是H，且R4、R5和R6都是甲氧基時，R1不能是苯基；105)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是苯氧基時，R1不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；106)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是4-(三氟甲基)苯氧基時，R1不能是2,6-二氟苯基；107)如果R2和R4都是H,R4和R6都是氯，且R5是

R1不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；108)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是4-(三氟甲基硫)苯氧基時，R1不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；109)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是4-(氯)苯氧基時，R1不能是2-氯苯基、2-甲基苯基、2-氯-6-氟苯基、2-氯-3-吡啶基或2,6-二氟苯基；110)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是(2-氯-4-三氟甲基)苯氧基時，R1不能是2,6-二氟苯基；111)如果R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是

R1不能是2,6-二氟苯基；112)當R2和R3都是H，R4和R6都是氯，且R5是2,4-二氯苯氧基時，R1不能是2-氯苯基、或2,6-二氟苯基；
113)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是4-三氟甲基苯氧基時，R1不能是2-氯苯基、或2,6-二氟苯基；114)如果R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是

R1不能是2-氯苯基；115)如果R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是

R1不能是2,6-二氟苯基；116)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是氟時，R1不能是2,6-二氟苯基；117)當R2和R3都是H,R4、R3和R6都是氯時，R1不能是4-硝基苯基或苯基；118)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是OCF2CF2H時，R1不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；119)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是甲氧基時，R1不能是氨磺酰基苯基；120)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是乙氧基時，R1不能是2,6-二氟苯基；121)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是二甲基氨基時，R1不能是2-氯苯基或2,6-二氟苯基；122)當R2和R3都是H,R4和R6都是氯，且R5是SCH2CF3時，R2不能是2,6-二氟苯基；123)當R2和R6都是H,R3和R4都是-CH=CH-CH=CH-，且R5是硝基時，R1不能是苯基或4-氯苯基；124)當R2和R4都是H,R3是COCH3，且R5和R6都是甲氧基時，R1不能是4-(二乙基膦酰基甲基)苯基；125)當R2是H,R3、R4和R6都是甲基，且R5是羥基時，R1不能是苯基、4-羧基苯基或4-氨磺?；交?；126)當R2是H,R3、R4和R6都是甲基，且R5是甲氧基時，R1不能是4-氨磺?；交怀橇碜髡f明，全部化學(xué)試劑均購自Aldrich Chemical(Milwaukee,WI)；實施例1刺激骨生長的化合物的鑒定技術(shù)該技術(shù)可參見科技文獻(Ghosh-Choudhury,N.；Windle,J；J.；Koop,B.A.；Harris,M.A.；Guerrero,D.L.；Wozney,J.M.；Mundy,G.R.；Harris,S.E.；“來自表達BMP-2-T-抗原的轉(zhuǎn)基因小鼠的無限繁殖成骨細胞”(“Immortalized MurineOsteoblasts Derived from BMP-2-T-Antigen Expressing Transgeic Mice”)Endocrinology(1996)137,331-339)。本文具體參考了這些技術(shù)。該方法可以單獨用于鑒定或選擇一具有藥理活性的候選化合物庫，所述藥理活性即促進、刺激或維持成骨細胞的生長，或者與用來選擇空間結(jié)構(gòu)確定的分子和候選物質(zhì)的技術(shù)合用，所述分子和候選物質(zhì)具有成骨細胞繁殖活性。
從轉(zhuǎn)基因小鼠的顱骨分離得含有骨成形蛋白2(BMP-2)啟動子片段的無限繁殖小鼠成骨細胞(2T3細胞)并克隆。這些細胞可以再克隆，并可以被BMP-2啟動子熒光素酶結(jié)構(gòu)體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。然后，BMP-2啟動子活性可以被重組人BMP-2(rhBMP-2)或刺激成骨細胞繁殖的化合物所激活。以此BMP-2啟動子試驗作為附加篩選技術(shù)，可以進一步評價刺激熒光素酶活性的化合物的ED50，并通過推斷，可評價成骨細胞繁殖的ED50。本領(lǐng)域眾所周知的其它體外評價篩選出的候選化合物活性的細胞試驗可以取代上述啟動子試驗，和進一步測定化合物刺激成骨細胞繁殖的藥理活性。例如，可以使用成骨細胞的培養(yǎng)物。
在10厘米的塑料組織培養(yǎng)皿中，用10微克含受-2736/114bp的BMP-2啟動子驅(qū)動的熒光素酶報道基因的質(zhì)粒和1微克用于G418-抗性克隆選擇的pSV2neo質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染2T3細胞。轉(zhuǎn)染通過磷酸鈣沉淀技術(shù)來進行。用含7％FCS和200微克/毫升G418的MEM產(chǎn)生穩(wěn)定的克隆細胞系?？稍?5個不同的克隆細胞系內(nèi)測量熒光素酶活性。在此選用細胞系(2T3-BMP-2-LUC)，因為已證明，用它進行試驗，傳代20次以上仍幾乎沒有變異。作為對照細胞系，如上所述建立一穩(wěn)定細胞系(2T3-basicLUC)，但用沒有啟動子的熒光素酶載體即pGL2basic(PromegaCorp.,Madison,WI)取代BMP-2啟動子熒光素酶質(zhì)粒。兩細胞系在35毫米的組織培養(yǎng)皿上鋪平板培養(yǎng)，并用含0、2、5、10和20納克/毫升rhBMP-2在含2％FCS的MEM中處理48小時。每一濃度的rhBMP-2進行三份試驗，每次試驗重復(fù)3次。用購自Promega試劑盒和發(fā)光計來測定熒光素酶活性。
實施例2多克2-(2-甲氧基苯甲?；被?苯并噻唑的生產(chǎn)本實施例提供了獲得苯并噻唑的一種方法。但是，在實施本發(fā)明時也可以使用其它方法。在冰浴中冷卻4.5g 2-氨基苯并噻唑在40ml二氯甲烷和10ml吡啶中所成的溶液。在此低溫溶液中緩慢加入2-甲氧基苯甲酰氯的10ml二氯甲烷溶液。所得的混合物攪拌3小時，同時冰浴緩慢升溫至室溫。反應(yīng)混合物用200ml乙酸乙酯稀釋并用1N HCl(2×50ml)，飽和NaHCO3(1×40ml)，和飽和NaCl(1×50ml)洗滌。在用Na2SO4干燥后，過濾含粗產(chǎn)物的溶液并蒸發(fā)至干。所得的8.0g白色固體在乙酸乙酯中重結(jié)晶得4.0g 2-(2-甲氧基苯甲?；被?苯并噻唑白色晶體，mp.196-197℃，此為首批產(chǎn)物。
可以使用其它本領(lǐng)域眾所周知的合成技術(shù)，例如Kamala等(Indian J.Chem.(1983),22B,1194-96)和參考文獻表中所述的那些，本文引用和參考了其全部內(nèi)容。
實施例3藥理活性化合物的一般評價方法-抗腫瘤活性細胞培養(yǎng)鼠B16黑素瘤細胞系培養(yǎng)在補充了10％熱滅活胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、50單位/ml青霉素、50μg/ml鏈霉素、25μg/ml艮他霉素、0.75％碳酸氫鈉、10mM HEPES緩沖液(pH7.4)和0.06mg/ml抗PPLOD的RPMI 1640培養(yǎng)基中。將鼠P388白血病細胞系和人HT-29結(jié)腸腺癌細胞系維持在補充了10％熱滅活胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中。P388/CPT(抗喜樹堿細胞系)維持在補充了20％熱滅活胎牛血清、10μM β-巰基乙醇、10MM L-谷氨酰胺、100IU/ml青霉素、100IU/ml鏈霉素、50μg/ml艮他霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中。MCF-7M人乳腺癌細胞維持在補充了5％未熱滅活胎牛血清和1nM胰島素的IMEM培養(yǎng)基中。
體外生長抑制活性在首日將0.1ml培養(yǎng)基中的指數(shù)期生長細胞(1-2×103細胞，除非另作說明)接種到96格微滴板上。在第一天，在兩格中同樣加入含標定濃度待測類似物的培養(yǎng)基。在37℃于潮濕的培養(yǎng)箱內(nèi)孵育3天(P388,P388/CPT,B16)或6天(HT-29,MCF-7M)后，微滴板略作離心并去除100μl生長培養(yǎng)基。細胞培養(yǎng)物與50μl 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-四唑鎓溴(MTT,1mg/ml的Dulbecco磷酸鹽緩沖液溶液(PBS))在37℃孵育4小時。所得的紫色甲沉淀重溶在200μl的0.04N HCl異丙醇溶液中。在BioRad3550型微滴板讀數(shù)儀中，在570nm的測試波長和630nm的參照波長測定吸光度。將吸光度輸入PC486計算機。由計算機程序(EZ-ED50)確定IC50值，該程序?qū)⑺袛?shù)據(jù)歸入以下四參數(shù)邏輯方程Y=Amax-Amin[1+(X/IC50)]2+Amin]]>其中Amax是對照細胞的吸光度，Amin是化合物濃度最高時細胞的吸光度，Y是測得的吸光度，X是化合物的濃度，IC50是與對照細胞相比抑制細胞生長50％的化合物濃度(根據(jù)吸光度)，n是曲線的斜率。
實施例4由蒽酮合成藥理活性化合物本實施例說明了一種由蒽酮合成藥理活性化合物的方法，經(jīng)BMP-2啟動子活性試驗測定，該化合物具有降低的藥理活性。圓底燒瓶與回流冷凝器(與裝有氯化鈣的干燥管固接)連接，其中含6.9克4-異丙氧基苯甲酸(購自Aldrich)，向其中加入20ml亞硫酰氯。所得的混合物加熱回流30分鐘，減壓去除過量的亞硫酰氯。所剩的液體與20ml剛蒸餾得的苯混合，并滴加2.79ml二乙胺。再加入20ml苯，所得的混合物加熱回流1小時。冷卻至室溫后，用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，用1％HCl(2×50ml),5％NaOH(3×50ml),1％HCl(2×50ml),5％NaOH(1×50ml)，和鹽水(1×50ml)洗滌。所得的有機溶液用MgSO4干燥，過濾，蒸發(fā)得到6.22g無色油狀的N,N-二乙基-4-異丙氧基苯甲酰胺。在氬氣氛下，將該物質(zhì)和TMEDA(4.8ml)的THF溶液在圓底燒瓶中冷卻至-78℃，并緩慢加入s-BuLi的己烷溶液(30.5ml,1.3M)。反應(yīng)混合物在-78℃再攪拌1小時，然后加入剛蒸餾的苯甲醛(3.58g)的THF低溫(-78℃)溶液。任反應(yīng)混合物用12小時緩慢升溫至室溫。用飽和NH4Cl(50ml)和1％HCl(20ml)處理反應(yīng)混合物，并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。合并后的有機層用由等體積的飽和NH4Cl和1％HCl制得的溶液(1×50ml)和鹽水(3×50ml)洗滌。有機層用NaSO4干燥，過濾和蒸發(fā)。殘留物溶解在200ml甲苯中，并加入1g TsOH。反應(yīng)混合物加熱回流20小時。冷卻至室溫后，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋，用5％K2CO3(3×50ml),1％HCl(2×50ml)，飽和NH4Cl(1×50ml)和鹽水(2×50ml)洗滌。有機層用MgSO4干燥，過濾和蒸發(fā)。殘留物經(jīng)乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶得5.0g無色針狀內(nèi)酯1H NMR(CDCl3)δ1.27(d,J=7.8Hz,6H),4.56(hept,J=7.8Hz,1H),6.26(s,1H),6.67(s,1H),6.95(d,J=10.8Hz,1H),7.25(m,5H),7.79(d,J=10.8Hz,1H)。將該物質(zhì)溶解在乙酸中，并用500mg碳上的10％Pd在氫氣下反應(yīng)。反應(yīng)混合物加熱至85℃維持2小時。冷卻至室溫后，過濾去除催化劑，并蒸發(fā)去除溶劑。將殘留物溶解在甲苯(50ml)中，然后蒸發(fā)去除溶劑。將殘留物溶解在氯仿(25ml)中，并與三氟乙酸酐(2.5ml)在室溫下反應(yīng)過夜。去除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)乙酸乙酯重結(jié)晶得2.27g 3-異丙氧基蒽酮白色晶體，mp.123-124℃。1H NMR(CDCl3)δ1.29(d,J=7.8Hz,6H),4.42(s,2H),4.53(hept,J=7.8Hz,1H),6.63(d,J=3.4Hz),6.73(dd,J=3.4,10.8Hz,1H),7.20(m,4H),8.04(d,J=10.8Hz,1H),13C NMR(CDCl3)δ21.86,39.93,69.90,112.50,118.72,119.93,125.93,128.30,128.41,129.08,134.36,140.64,161.66,172.45,193.78；HRMS(CI)MH+(C17H17O2)測得值253.1208,計算值。氧蒽酮可用三種不同的方法轉(zhuǎn)化成藥理活性更高的物質(zhì)方法1將該晶體物質(zhì)放在小玻璃瓶中，將小瓶放在250℃的熱板上加熱1至10分鐘。
方法2將3-異丙氧基蒽酮溶解在甲苯中，在密封試管中于310℃油浴加熱14小時。蒸發(fā)去除溶劑后得到活性物質(zhì)。
方法3159mg 3-異丙氧基蒽酮的乙酸(25ml)溶液與三氧化鉻(180mg)在室溫下反應(yīng)。20小時后，減壓去除乙酸，殘留物用乙酸乙酯萃取。有機溶液用5％Na2CO3(2×30ml)和鹽水(2×30ml)洗滌，然后用MgSO4干燥。經(jīng)過濾和蒸發(fā)得到的殘留物經(jīng)層析(SiO2,8∶1的己烷/乙酸乙酯)以獲得經(jīng)薄層層析(SiO2,3∶1的己烷/乙酸乙酯Rf～0.6)鑒定主要含一個斑點的流份。
實施例5細胞分化試驗本方法用來選擇用于刺激成骨細胞繁殖和富集成骨細胞群的具有確定空間結(jié)構(gòu)的候選化合物。Eckhardt,S.G.；Dai,A；Davidson,K.K.；Fpresth,B.J.；’Wahl,G.M.；Von Hoff,D.D.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(1994),91,6674-6678，本文參考了此文有關(guān)繁殖試驗的細節(jié)。
HL60前髓白血病細胞培養(yǎng)在含10％胎牛血清和2mM谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)基中。在首日，在各份培養(yǎng)物中加入所示濃度的各種候選化合物，并在每次細胞傳代后更換。將全部細胞傳代，以維持＜2×106細胞/ml的密度。利用成熟髓細胞的功能試驗評價分化作用。為了進行氮藍四唑還原反應(yīng)，將300,000細胞懸浮在0.2ml補充了10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，并與等體積的氮藍四唑(Sigma)和50ng剛稀釋的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13乙酸酯(Sigma)在37℃孵育20分鐘。制備cytospin玻片，計數(shù)至少500個細胞，并就活性進行校正，由此計算含有胞內(nèi)還原藍-黑甲沉淀的細胞的百分比。
實施例6視黃酸置換試驗該方法與Eyrolles,L.；Kagechika,H.；Kawachi,E.；Fukasawa,H.；Iijima,T.；Matsushima,Y.Hashimoto,Y.；Shudo,K.在J.Med.Chem.(1994),37,1508-1517中所述的相同，本文引用并參考了所述文獻。用于本試驗的細胞可以與用于實施例1的相同，或者是其它合適的細胞系。該方法可以用作選擇本發(fā)明具有確定化學(xué)結(jié)構(gòu)的分子或本發(fā)明具有確定空間結(jié)構(gòu)的分子時的附加篩選步驟，所述分子具有結(jié)合生物受體(例如激素核內(nèi)受體)的藥理活性。
將沉淀并溶解的COS-1細胞用緩沖液(0.3M KCl,20mM Tris-HCl,pH8.0,1.5mM EDTA,1mM PMSF,1μg/ml胃酶抑素，0.1mg/ml桿菌肽，0.1mM亮抑酶肽和0.1mg/ml抑蛋白酶肽)稀釋，調(diào)節(jié)至約1-2mg/ml。上清液用Teflon-玻璃勻漿儀均質(zhì)化，并于4℃以100000g離心。將上清液用于置換試驗。上清液在6nM[3H]-順視黃酸(Amersham)和各種濃度配體存在下，在4℃避光孵育16小時。將孵育混合物吸附到硝基纖維素薄膜上。該薄膜用洗滌緩沖液(20mM Tris-HCl,pH8.0,0.15M NaCl)洗滌3次，然后用25％的乙醇蒸餾水溶液洗滌。用液體閃爍計數(shù)法測定留在薄膜上的放射性。
實施例7骨生長的測定該方法用來選擇可望用于促進骨生長的具有確定空間和/或化學(xué)結(jié)構(gòu)的分子。
礦化/骨生長試驗用含7％FCS的1.0ml MEM將2T3細胞以10,000細胞/格的密度平板培養(yǎng)在一24格組織培養(yǎng)板(直徑1.5cm/格)上。任其生長至鋪滿培養(yǎng)板(首日)，然后將培養(yǎng)基換成分化培養(yǎng)基(MEM含7％FCS,100mg/ml抗壞血酸和5mM β甘油磷酸酯)。加入不同濃度的重組人BMP-2(rhBMP-2)和/或1,25-二羥基維生素D3(1,25-(OH)2D3)，每一濃度加3格。每2至3天更換一次培養(yǎng)基。在不同時刻(第4、9、12、16等日)用10％福爾馬林固定培養(yǎng)板20分鐘，先用蒸餾水洗滌再用乙醇洗滌，然后自然吹干。培養(yǎng)板然后用Van Giesen染劑(基質(zhì)-膠原)和Von Kossa染劑(礦物質(zhì))染色。然后用JAVA造影分析軟件(Jandel Scientific,Corte Madera,CA)，定量礦化的骨結(jié)(bone nodule)，以測定平均礦化骨結(jié)面積，每平方厘米礦化骨結(jié)總數(shù)和每平方厘米礦化骨結(jié)總面積。
2T3骨細胞分化期間多層生長的定量如上所述制作一式兩份24格培養(yǎng)板。如前所述，在不同時刻測定相同三格內(nèi)的細胞數(shù)。用PBS洗滌細胞層，細胞然后用0.1-0.5ml 0.05％胰蛋白酶-25mMEDTA(GIBCO,Gaithershburg,MD)在37℃培養(yǎng)10至40分鐘(直至可目測到格中細胞的集攏)。然后加入等體積的FCS，用一1.0ml自動吸液器經(jīng)25次上下振蕩將細胞分散成單細胞懸液。然后用血細胞計數(shù)器測定細胞數(shù)量。
實施例83-苯甲酰氨基喹啉化合物的制備該方法用來制備多種通式Ⅳ化合物，如表1所示。簡而言之，在堿催化劑或酸凈化劑(如吡啶)存在下，在合適的有機溶劑中，3-氨基喹啉與特定的苯甲酸衍生物或類似物的活化體反應(yīng)。根據(jù)反應(yīng)條件，使用合適的分離程序。
例如，3-氨基喹啉(40mg,0.28mmol)的二氯甲烷(1.0ml)溶液與吡啶(25μl)充分混合。然后，加入略微過量的苯甲酰氯，在25℃攪拌反應(yīng)30分鐘，以可接受的得率形成縮合產(chǎn)物3-苯甲酰氨基喹啉。
表1概括了根據(jù)該實施例制備的部分通式Ⅳ化合物。反應(yīng)得率根據(jù)0.56mmol的3-氨基喹啉計算。這些化合物是本發(fā)明化合物和合成方法的示例，不應(yīng)由此限定本發(fā)明的范圍。
表1

通式Ⅳ
就表1所列的化合物而言，R1、R2、R3、R4、R5和R6都是H。其它取代基如下所示。同時列出各化合物的得率。

<p>實施例92-苯甲酰氨基-1,3-苯并噻唑化合物的制備以下通用方法可用來制備通式Ⅴ的2-苯甲酰氨基-1,3-苯并噻唑化合物，如表2所示。簡而言之，在堿催化劑或諸如吡啶的酸凈化劑存在下，2-氨基-1,3-苯并噻唑與特定的碳環(huán)酸氯反應(yīng)。分離得到的2-苯甲酰氨基-1,3-苯并噻唑目標化合物可以是游離堿或酰氨基氮原子的堿金屬鹽。
方法A2-氨基-1,3-苯并噻唑(700mg,4.7mmol)在二氯甲烷(20ml)和吡啶(800μl)中所成的溶液與2,4-二甲氧基苯甲酰氯在25℃攪拌反應(yīng)30分鐘。此后，用HCl(10ml5重量％)處理，過濾收集生成的沉淀。固體經(jīng)甲醇重結(jié)晶得無色針狀的2-(2,4-二甲氧基苯甲酰氨基)-1,3-苯并噻唑。(1.185mg，得率80％)。
方法B堿金屬鹽形式2-氨基-1,3-苯并噻唑(40mg,0.27mmol)在二氯甲烷(1ml)和吡啶(100μl)中所成的溶液與4-正丁基苯甲酰氯在25℃攪拌反應(yīng)30分鐘。此后，用NaOH(0.5ml,5.0M)處理，所成的混合物攪拌通宵。過濾收集所成的沉淀，在水中重結(jié)晶得淺黃色針狀的2-(4-正丁基苯甲酰氨基)-1,3-苯并噻唑。(47mg,53％)。
表2概括了根據(jù)該實施例制備的部分通式Ⅴ化合物。反應(yīng)得率根據(jù)0.53mmol的2-氨基-1,3-苯并噻唑計算。這些化合物是本發(fā)明化合物和合成方法的示例，不應(yīng)由此限定本發(fā)明的范圍。
表2

通式Ⅴ
就表2所列的化合物而言，R1、R2、R3、R4、和R6都是H。其它取代基如下所示。同時列出各化合物的得率。

實施例102-(環(huán)己基酰氨基)-1,3-苯并噻唑的制備根據(jù)實施例9中的方法B來制備該化合物。該化合物由通式Ⅲ表示W(wǎng)-L-Y通式Ⅲ其中Y是一個碳環(huán)，以環(huán)己基為佳。在本具體實施例中，目標化合物分離后的得率為66％。
以上具體說明了本發(fā)明的特定實施方案。可以看出，在本發(fā)明范圍內(nèi)，實施方案可以與所述的有所不同，而且，對于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員而言，其改進是顯而易見的，這些都應(yīng)包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明的范圍由后文的權(quán)利要求及其相當?shù)暮x限定。所以，不應(yīng)將說明書和權(quán)利要求過度理解成限窄了本發(fā)明要求保護的完整范圍。根據(jù)本發(fā)明所揭示的內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，在本發(fā)明的宗旨和范圍內(nèi)，在具體實施方案中可以進行許多改動，而仍獲得相同或相似的結(jié)果。根據(jù)本發(fā)明內(nèi)容，無需過多的實驗即可獲得和實施在此所述和要求保護的化合物和方法。顯而易見的是，某些生理和化學(xué)相關(guān)性化合物可能代替在此所述的藥理活性化合物而獲得相同或相似的結(jié)果。
參考文獻本發(fā)明具體引用了以下文獻，由此為本發(fā)明所述的內(nèi)容補充了范例性方法或其它細節(jié)。
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權(quán)利要求
1．一種刺激成骨細胞繁殖的方法，它包括選擇通式Ⅰ所示物質(zhì)X-L-Z通式Ⅰ其中X選自
L選自
Z選自
其中，R1選自H,OH,C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，C1-C4烷硫基，鹵素和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R2選自H,OH，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烯基，C1-C6烷氧基和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R3選自H,OH，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烯基和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R4選自H,OH，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R5選自H，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，-OC(=O)Me，鄰苯二甲酰亞胺和(C1-C12)烷基-羰基氧基；R6選自H,OH,-NH2,C1-C4烷基和C1-C4烷氧基；R7選自H,C1-C4烷基，C1-C4烷基-羰基和(C7-C10)芳基烷基；R8選自H,OH，鹵素，-CF3,C1-C4鹵代烷基，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me和-N(C1-C4烷基)2；R9選自H,OH,鹵素，-CN,-NO2,C1-C4鹵代烷基，C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me；R10選自H,OH，鹵素，-CN,-NO2,C1-C4鹵代烷基，-CO2H,C1-C12烷基，C1-C12烷氧基，苯基，C1-C12烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，-NHC(=O)Me,(C1-C4)烷基羰基，(C1-C12)烷基-羰基氧基和雜芳基；R11選自H,OH,鹵素，C1-C4鹵代烷基，-CF3,C1-C4烷基，-NH2,C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基，(C1-C4)烷基-羰基氧基；R12選自H,OH,-NH2,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和(C1-C4)烷基羰基；R13選自H,OH，鹵素，-NH2,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和-N(C1-C4烷基)2；和令包含成骨細胞的細胞與有效量的藥理活性化合物接觸。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中R10和R11可以相互結(jié)合成一個5至7元碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)和氧雜碳環(huán)互不相干地被一個或多個以下基團所取代(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，OH，鹵素，羧基、H和芳基，由此形成藥理活性化合物。
3．根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中R10和R11可以相互結(jié)合成一個5至7元碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)和氧雜碳環(huán)互不相干地被一個或多個以下基團所取代(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，OH，鹵素，羧基、H和芳基；條件是1)當X選自
時，L是
且Z是
2)當X是
則L選自
和一單鍵3)當X是
且Z是
則，L是
4)當X是
且Z是
則L是
5)當X是
則Z是
且L是
6)當X是
則，Z是
且L是
4．根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中R4是H；且R9選自H,OH，鹵素，-CN,-NO2,C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me。
5．根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中X是
L是
且Z是
6．根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中R1、R2、R3、R4、R5和R6都是H；R8選自H,OH，鹵素，-CF3,C1-C4鹵代烷基，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me和-N(C1-C4烷基)2；R9選自H,OH，鹵素，-CN,-NO2,C1-C4鹵代烷基，C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me；R10選自H,OH，鹵素，-CN,-NO2,C1-C4鹵代烷基，-CO2H,C1-C12烷基，C1-C12烷氧基，苯基，C1-C12烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，-NHC(=O)Me,(C1-C4)烷基羰基，(C1-C12)烷基-羰基氧基和雜芳基；R11選自H,OH，鹵素，C1-C4鹵代烷基，-CF3,C1-C4烷基，-NH2,C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基，(C1-C4)烷基-羰基氧基；R12選自H,OH,-NH2,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和(C1-C4)烷基羰基。
7．根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中R8選自H、甲氧基、氟和三氟甲基；R9選自H、甲基、甲氧基、三氟甲基、氯甲基、硝基、氰基、氯和氟；R10選自H、苯基、正丁基、叔丁基、氯、氯甲基、乙基、正丙基、硝基、苯基、甲氧基、氰基和氟；R11選自H、三氟甲基、甲氧基和氟；R12是H。
8．一種選擇藥理活性化合物或藥理活性候選化合物的方法，其中的藥理活性指刺激BMP-2啟動子活性的能力，該方法包括選擇具有通式Ⅱ確定空間三維結(jié)構(gòu)的候選化合物W-L-Y通式Ⅱ其中，W含有一個具有以字母“A”表示的質(zhì)心的芳香基團；Y含有一個具有有以字母“B”表示的質(zhì)心的碳環(huán)基團；L是連接X和Z的基團；W內(nèi)的芳香基原子形成一個“P”平面；質(zhì)心“B”位于“P”平面以上或以下約1或約0.7埃；質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”相距約6至約8埃；由此形成具有確定空間結(jié)構(gòu)的分子；和選擇能夠刺激BMP-2啟動子活性的具有確定空間結(jié)構(gòu)的分子。
9．根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”相距約6.6至約8.5埃。
10．根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中具有確定空間結(jié)構(gòu)的分子被進一步定義為具有至少兩個受氫鍵基團，位于L內(nèi)或其附近，該受氫鍵基團被進一步定義為1)受氫鍵基團相距約2至約5埃；2)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約4至約7埃，而距質(zhì)心“B”約2至約3埃；而且3)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約2至約3埃，而距質(zhì)心“B”約4至約7埃。
11．根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中該受氫鍵基團被進一步定義為1)受氫鍵基團相距約2.3至約5.4埃；2)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約4.5至約7.7埃，而距質(zhì)心“B”約2.7至約3.8埃；而且3)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約2.6至約3.8埃，而距質(zhì)心“B”約4.6至約6.9埃。
12．根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中L進一步定義為據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限小于或等于約3埃的空間，沿平面“P”的法相測定，位于平面“P”之上或之下并與之正交。
13．根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中L進一步定義為據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限小于或等于約3.1埃的空間，沿平面“P”的法相測定，位于平面“P”之上或之下并與之正交。
14．根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中L被進一步定義為據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限為約4埃至約6.0埃的空間，與質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”的連線垂直并位于平面“P”內(nèi)。
15．根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中L被進一步定義為據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限為約4.7至約6.0埃的空間，與質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”的連線垂直并位于平面“P”內(nèi)。
16．根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中通式Ⅱ候選化合物進一步定義為1)不是通式Ⅹ化合物
通式Ⅹ其中的R1是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基、或(C1-C17)烷基羰基；R2是-(CH2)(1-6)-CH2-雜環(huán)；R3是H、OH、C1-C17烷氧基、(C1-C17)烷基羰基氧基、(C1-C17)烷基羰基氨基、或(C1-C17)烷基羰基；而且2)不是通式Ⅺ化合物
通式Ⅺ
17．根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中具有“A”質(zhì)心的芳香環(huán)可以互不相干地被以下基團之一或多個取代H、鹵素、羥基、氨基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C1-C2鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、-OC(=O)-(C1-C6烷基)和-NHC(=O)-(C1-C6烷基)。
18．根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中具有“B”質(zhì)心的碳環(huán)可以互不相干地被以下基團之一或多個取代H、鹵素、羥基、氨基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C1-C2鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、芳基、雜芳基、-OC(=O)-(C1-C6烷基)和-NHC(=O)-(C1-C6烷基)。
19．一種治療或防止惡性細胞繁殖的方法，它包括給包含惡性細胞的細胞群使用惡性細胞繁殖抑制量的、確定空間結(jié)構(gòu)如通式Ⅱ:W-L-Y所述的藥理活性化合物；和抑制惡性細胞，其中的藥理活性化合物據(jù)其三維結(jié)構(gòu)進一步定義為W含有具有以字母“A”表示的質(zhì)心的芳香基團；Y含有具有以字母“B”表示的質(zhì)心的碳環(huán)基團；L是連接X和Z的基團；W內(nèi)的芳香基原子形成一個平面“P”；質(zhì)心“B”位于“P”平面以上或以下約1埃；質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”相距約6至約8埃。
20．根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中質(zhì)心“B”位于“P”平面以上或以下約0.7埃；質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”相距約6.6至約8.5埃。
21．根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中藥理活性分子進一步定義為具有確定的空間結(jié)構(gòu)，其中具有至少兩個受氫鍵基團，位于L內(nèi)或其鄰近，該受氫鍵基團被進一步定義為1)受氫鍵基團相距約2至約5埃；2)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約4至約7埃，而距質(zhì)心“B”約2至約3埃；而且3)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約2至約3埃，而距質(zhì)心“B”約4至約6埃。
22．根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中藥理活性分子進一步定義為具有確定的空間結(jié)構(gòu)，其中具有至少兩個受氫鍵基團，位于L內(nèi)或其鄰近，該受氫鍵基團被進一步定義為1)受氫鍵基團相距約2.3至約5.4埃；2)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約4.5至約7.7埃，而距質(zhì)心“B”約2.7至約3.8埃；而且3)受氫鍵基團之一距質(zhì)心“A”約2.6至約3.8埃，而距質(zhì)心“B”約4.6至約6.9埃。
23．根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中L進一步定義為據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限小于或等于約2.5埃的空間，沿平面“P”的法相測定，位于平面“P”之上或之下并與之正交。
24．根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中L進一步定義為據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限小于或等于約3.1埃的空間，沿平面“P”的法相測定，位于平面“P”之上或之下并與之正交。
25．根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中L據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限為約4埃至約約5埃的空間，與質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”的連線垂直并位于平面“P”內(nèi)。
26．根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中L據(jù)重原子距離測定占據(jù)著一個外限為約4.7至約6埃的空間，與質(zhì)心“A”和質(zhì)心“B”的連線垂直并位于平面“P”內(nèi)。
27．一種在成骨細胞或成骨細胞前體細胞內(nèi)刺激BMP-2啟動子活性或成骨細胞繁殖的方法，它包括給予成骨細胞或成骨細胞前體細胞有效量的通式Ⅲ化合物
通式Ⅲ其中，R1選自芳基、萘基、雜芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、氮雜環(huán)烷基、氧雜環(huán)烷基、氮雜環(huán)烯基、氧雜環(huán)烯基、酮基取代的環(huán)烷基和酮基取代的環(huán)烯基，上述各取代基互不相干地被一個或多個以下基團取代C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、芐氧基、羥基、C1-C2鹵代烷基、鹵素、氰基、-NO2,CF3，羧基、氫原子、(C1-C4)烷氧基羰基、-N(C1-C4烷基)2、(C1-C4)烷基羰基氧基、芳基、(C1-C4)烷基羰基氨基、(C1-C4)烷基羰基、(C1-C4)烷基-芳基和-NH2；R2選自H、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、C1-C4烷氧基、和-NH2；R3和R4選自H、羥基、鹵素、(C1-C5)烷基羰基氧基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烯基和C1-C4烷氧基；R4和R5選自H、鹵素、羥基、(C1-C4)烷基羰基氧基、氰基、C1-C2鹵代烷基、C1-C4烷氧基、苯甲?；?、(C1-C4)烷基-芳基、(C1-C6)烷基氨基羰基氧基、苯基氨基羰基氧基、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、(C1-C4)烯基-芳基、(C1-C4)炔基-芳基、(C1-C4)烷基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)烯基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)炔基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)烷基-(C6-C10)環(huán)烯基、(C1-C4)烯基-(C6-C10)環(huán)烯基、(C1-C4)炔基-(C6-C10)環(huán)烯基、羧基和(C1-C4)烷氧基羰基。
28．根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中R3和R4共同連接成一個5至7元的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與該兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)被一個或多個以下基團互不相干地取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素、羧基、氫原子和芳基。
29．根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中R4和R5共同連接成一個5至7元的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與該兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)被一個或多個以下基團互不相干地取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素、羧基、氫原子和芳基。
30．根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中R5和R6共同連接成一個5至7元的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與該兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)被一個或多個以下基團互不相干地取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素、羧基、氫原子和芳基。
31．根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中R1選自芳基、萘基、雜芳基、環(huán)烷基，其中各R1取代基互不相干地被一個或多個以下基團取代C1-C7烷基、C1-C7烷氧基、-NO2、-CF3、芳基、芐氧基、羥基、C1-C2鹵代烷基、鹵素、氰基、羧基、氫原子、芳基、(C1-C4)烷基羰基氨基、(C1-C4)烷基羰基、(C1-C4)烷基-芳基和-NH2；R2選自H、C1-C4烷氧基、氨基或C1-C4烷基；R3和R6互不相干地選自H、羥基、(C1-C5)烷基羰基氧基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烯基和C1-C4烷氧基；R4和R5互不相干地選自H、鹵素、羥基、(C1-C4)烷基羰基氧基、氰基、C1-C2鹵代烷基、C1-C4烷氧基、苯甲?；1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、(C1-C4)烷基-芳基、(C1-C4)烯基-芳基、(C1-C4)炔基-芳基、(C1-C4)烷基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)烯基-(C6-C10)環(huán)烷基、(C1-C4)炔基-(C6-C10)環(huán)烷基、羧基和(C1-C4)烷氧基羰基。
32．根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中R4和R5共同連接成一個5至6元的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)，該環(huán)與該兩基團所連接的環(huán)稠合，其中的碳環(huán)或氧雜碳環(huán)互不相干地被一個或多個以下基團取代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基、鹵素、羧基、氫原子和芳基。
33．根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中的通式Ⅱ化合物是2-(2-甲氧基苯甲酰氨基)-1,3-苯并噻唑或其藥學(xué)上可接受的鹽。
34．一種具有成骨細胞繁殖活性的藥理活性組合物，其中的組合物是通過包含以下步驟的方法制備的
35．一種包含通式Ⅳ化合物的藥理活性組合物
通式Ⅳ其中R1、R2、R3、R4、R5和R6都是H；R8選自H,OH，鹵素，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me和-N(C1-C4烷基)2；R9選自H,OH，鹵素，C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me；R10選自H,OH，鹵素，C1-C4鹵代烷基，-CO2H,C1-C12烷基，C1-C12烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基，和(C1-C4)烷基-羰基氧基；R11選自H,OH，鹵素，C1-C4鹵代烷基，C1-C4烷基，-NH2,C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基和(C1-C4)烷基-羰基氧基；R12選自H,OH,-NH2,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和-N(C1-C4烷基)2；條件是1)當R9、R10、R11和R12都是氫時，R8不能是-OH；2)當R8、R10、R11和R12都是氫時，R9不能是-NH2或
或者，3)當R8、R9、R11和R12都是氫時，R10不能是H、氯、胍基、CH2P(=O)(OEt)2、CH2P(=O)OiPr2、CH2P(O=)(OEt)Ph、
36．一種包含通式Ⅴ化合物的藥理活性組合物
通式Ⅴ其中R1、R2、R3、R4、和R6都是H；R8選自H,OH，鹵素，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me和-N(C1-C4烷基)2；R9選自H,OH，鹵素，C1-C8烷基，C1-C8烷氧基，-NHC(=O)Me和-OC(=O)Me；R10選自H,OH，鹵素，C1-C4鹵代烷基，-CO2H,C1-C12烷基，C1-C12烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基，和(C1-C4)烷基-羰基氧基；R11選自H,OH，鹵素，C1-C4鹵代烷基，C1-C4烷基，-NH2,C1-C4烷氧基，-NHC(=O)Me,C1-C4烯基，(C1-C4)烷氧基羰基，(C1-C4)烷基羰基和(C1-C4)烷基-羰基氧基；R12選自H,OH,-NH2,(C1-C4)烷基，C1-C4烷氧基，和-N(C1-C4烷基)2；條件是1)當R9、R10、R11和R12都是氫時，R8不能是疊氮基、硝基、氯、溴、氟、羥基、羧基、2-羧基-5-氯苯基、4’-(乙?；?苯磺酸基、4’-(氰基乙?；?苯磺酸基、N-(4’-乙氧基苯基)氨基、二(4’-羥基苯基)甲基、4’-(乙酸基)苯基甲基或N-(Z-,3-羧基丙烯?；?氨基；2)當R8、R10、R11和R12都是氫時，R9不能是溴、氯或甲氧基；3)當R8、R9、R11和R12都是氫時，R10不能是氯、溴、氟、甲基、硝基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、正戊氧基、芐氧基、烯丙基氧基、乙酸基、2’-(二乙基氨基)乙氧基、氨基、二甲基氨基、胍基、硫代甲基、4’-(甲基)苯磺?；被?、二-(乙基膦?；?甲基、二-(異丙基膦酰基)甲基、
4)當R8和R10都是氫，R9和R11都是溴時，R12不能是-OH；5)當R8、R10和R11都是氫，R12是-OH時，R9不能是(C6-C15)烷基羰基。
全文摘要
本發(fā)明涉及能夠結(jié)合激素核內(nèi)受體并用于刺激成骨細胞繁殖和骨生長的藥理活性化合物。本發(fā)明還涉及這類化合物的用途,即用于治療或預(yù)防與激素核內(nèi)受體族相關(guān)的疾病和/或失調(diào)。
文檔編號C07D215/38GK1226245SQ97196755
公開日1999年8月18日 申請日期1997年6月20日 優(yōu)先權(quán)日1996年6月20日
發(fā)明者S·克爾溫, L·H·赫爾利, M·R·德魯卡, B·M·摩爾, G·芒迪 申請人:德克薩斯州大學(xué)系統(tǒng)董事會