專利名稱：包含Tyrphostin化合物的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一類可用于對(duì)抗有害藥物試劑引起損害的組合物，這種有害藥物試劑特別包括用于癌癥治療的抗腫瘤藥物如細(xì)胞毒性藥物。本發(fā)明中損害意指對(duì)細(xì)胞，組織或者是器官的有害作用。本發(fā)明還涉及對(duì)抗這種損害的治療方法。并且，本發(fā)明還提供了幾種用于這種組合物和治療方法的新型化合物。
背景技術(shù)：
絕大多數(shù)常用的抗腫瘤治療，包括化療和放療，都顯示對(duì)分裂的細(xì)胞和某些器官功能的有有害的毒性作用。特別易受這種治療影響的細(xì)胞是骨髓細(xì)胞，皮膚細(xì)胞和胃腸道上皮細(xì)胞。此外，這種治療還經(jīng)常引起特定的器官損傷，如腎臟和肝臟。由于這種毒性作用，從而限制了這種治療的治療指數(shù)(therapeutic index)。
長(zhǎng)時(shí)間以來(lái)醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)愿望是，試驗(yàn)和開(kāi)發(fā)既不影響藥物治療活性，又能降低有害毒副作用的治療方式和方法，從而提高這種藥物的治療指數(shù)。
程序性(apoptosis)或漸進(jìn)性細(xì)胞死亡，是在胚胎發(fā)育和機(jī)體正常體內(nèi)平衡過(guò)程中細(xì)胞死亡的基本生理學(xué)調(diào)節(jié)機(jī)制。最近的研究資料指出，許多化學(xué)治療劑的抗腫瘤作用，都與它們能夠誘發(fā)程序性細(xì)胞死亡有關(guān)。這些藥物試劑的毒性也可能與它們誘導(dǎo)正常細(xì)胞程序性細(xì)胞死亡有關(guān)。
已有初步報(bào)告論述，多種藥物試劑可用于防止使用抗癌藥引起的腎毒性(Skinner.R.,Current Opinion in Oncology,7:310-315,1995)。嘗試對(duì)抗因使用細(xì)胞毒性藥物順鉑引起的嚴(yán)重慢性近曲小管毒性。在對(duì)大鼠進(jìn)行的體內(nèi)試驗(yàn)中，對(duì)-氨基苯甲酸(PABA)與順鉑一起共同給藥，導(dǎo)致順鉑的腎毒性降低，而不降低其抗腫瘤活性。其它一些藥物試劑如mitimazole，氯丙嗪和L-精氨酸，也用于在各種與順鉑毒性有關(guān)的體內(nèi)試驗(yàn)中對(duì)動(dòng)物給藥，僅得到了一些初步的不明確的結(jié)果。
被脫磷酸產(chǎn)生硫羥部分的藥物氨磷汀也被用于降低抗腫瘤藥物的毒性作用(Cancer Res.55:4069,1995)。
本發(fā)明概述首先，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，用于對(duì)抗，即降低或者防止對(duì)細(xì)胞或組織的損害，此組合物含有作為活性劑的有效量的通式Ⅰ的化合物以及可藥用載體
其中-Ar是下式基團(tuán)，
或
-n是0，或者當(dāng)Ar是上面結(jié)構(gòu)式(ⅰ)時(shí)，則n也可以是1，R是CN,-C(S)NH2,-C(O)NHR3，或者當(dāng)R1是4-NO2，以及R2是H或3-OH時(shí)，R也可以是下式基團(tuán)，
或
在此R3是H，苯基，苯基(低級(jí)烷基)或吡啶甲基；-R1和R2各自獨(dú)立是H,OH,NO2，或者R是CN時(shí)，也可以是CH3,F，或CF3，條件是R1和R2不要同時(shí)是H。
該活性劑和藥物組合物，可以在各種疾病中給藥，或者使之與細(xì)胞或組織接觸，以便降低或防止對(duì)細(xì)胞，組織或器官的有害損傷。例如，這種疾病可能是導(dǎo)致細(xì)胞程序性死亡的疾病。防止這種有害的程序性死亡是本發(fā)明的特定實(shí)施方案。這種疾病還可能是使細(xì)胞，組織或器官暴露于有害因子，這類因子可能是外源性或內(nèi)源性因子，以及其它一些可能導(dǎo)致?lián)p害的生理性疾病，例如溫度改變，血流減少，暴露于電離輻射等。有待預(yù)防的損害還可能是一種天然的生理學(xué)衰退過(guò)程的結(jié)果，例如那些在體外保存，生長(zhǎng)或培養(yǎng)的細(xì)胞、組織或器官中發(fā)生的衰退過(guò)程。
本發(fā)明還提供了一種用于治療病人，對(duì)抗細(xì)胞，組織，器官損害的方法，包括對(duì)病人給予有效量的通式(Ⅰ)化合物。
名詞“有效量”應(yīng)該被理解為意指對(duì)抗損害有效的活性化合物的量，而這種損害表現(xiàn)為對(duì)正常(無(wú)病的)細(xì)胞的破壞或者對(duì)組織或器官的損傷。
有害因子可能是外源性因素例如具有細(xì)胞毒性作用的治療藥物(如抗腫瘤藥)，放射作用，有毒的化學(xué)藥品等。此外，有害的因子也可能是內(nèi)源性的，如在多種代謝過(guò)程中或其它紊亂中升高水平的自由基，自身抗體，細(xì)胞因子等。
本發(fā)明的藥物組合物還可用于如下范圍治療多種疾病，紊亂或病癥，如AIDS，導(dǎo)致肝中毒的病癥，輻射損傷，減少或抑制由于移植排斥作用對(duì)移植細(xì)胞或組織的損傷，用于治療中毒如撲熱息痛中毒，對(duì)抗治療藥物中有毒溶劑和載體的有害作用，對(duì)抗酒精引起的損害等。并且，該組合物還可以用于對(duì)抗不需要的免疫中介反應(yīng)或炎癥反應(yīng)，如膿毒性休克，減少自身免疫反應(yīng)引起的損傷，等等。最后，本發(fā)明的藥物組合物還可以用于在體外保存將用作移植的細(xì)胞或組織，減少或防止在移植之前的體外保存過(guò)程中將發(fā)生的細(xì)胞或組織的衰退或死亡等。
本發(fā)明的藥物組合物在對(duì)抗細(xì)胞毒性藥物或抗代謝藥物的，特別是例如用于癌癥治療藥物的毒性作用中是非常有用的。有時(shí)，本發(fā)明的藥物組合物將和此細(xì)胞毒性藥物一起共同給藥。據(jù)此實(shí)施方案的藥物組合物可能含有這種藥物和上述結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物。
結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物屬于Tyrphostin化合物(Levitzki,A.，和Gazit,A.,Science,267:1782,1995)。在下面的敘述中，結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物將被稱為“Tyrphostin”，而含有這種化合物的組合物常常被稱為“Tyrphostin組合物”。
在來(lái)自結(jié)構(gòu)式Ⅰ的Tyrphostin化合物中，有一些是已知的，但它們具有不同于本發(fā)明所提供的用途，而另一些是新穎的。這些新穎的Tyrphostin化合物構(gòu)成了本發(fā)明的另一獨(dú)立方面，它們是如下的結(jié)構(gòu)式Ⅰ化合物，其中Ar,R1,R2和R3定義同上，但條件是a)R不能是
b)當(dāng)R是CN，并且n是0時(shí)，那末(ba)如果R1和R2中的一個(gè)是H或OH，則另一個(gè)不能是NO2，(bb)如果R1和R2中的一個(gè)是H或F，則另一個(gè)不能是H或F，以及c)當(dāng)R1是4-NO2,R2是H，和n是0時(shí)，則R不能是-C(O)NH2，或-C(S)NH2。
用于該組合物的優(yōu)選的式Ⅰ化合物，是那些其中R是CN,-C(S)NH2,-C(O)NHCH2C6H5或如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)
并且n是0,R1是4-NO2,R2是H。
tyrphostin化合物實(shí)例被列舉在化合物表1中。列舉在化合物表1中的一些tyrphostin化合物是新穎的，這些新穎的tyrphostin化合物也被列舉在化合物表Ⅱ中。
化合物表Ⅰ
1該號(hào)碼指下文所附的參考文獻(xiàn)號(hào)化合物表Ⅰ(續(xù))
化合物表Ⅱ(新化合物)
本發(fā)明所使用的某些已知化合物的參考文獻(xiàn)列表1．Mowry,D.T.,J.Am.Chem.Soc.,67:1050,1945.
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本發(fā)明特別優(yōu)選的tyrphostin化合物，是在上面“化合物表Ⅰ”中被指定為AG1714,AG1744,AG1801和AG1843的化合物。這四個(gè)化合物中，后二個(gè)是新的。
式Ⅰ的tyrphostin化合物可以同另一種治療劑結(jié)合對(duì)病人給藥，例如同細(xì)胞毒性藥物或放療劑結(jié)合。在這種協(xié)同治療中，tyrphostin化合物可以同其它治療同時(shí)進(jìn)行，或者不同時(shí)間進(jìn)行，以便產(chǎn)生最大的效果。一個(gè)特別的例子是在給予其它治療之前給予tyrphostin化合物，例如在放療或給予細(xì)胞毒性藥物之前幾小時(shí)給藥。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，當(dāng)把結(jié)構(gòu)式Ⅰ的tyrphostin化合物同另一種治療劑一起給藥時(shí)，它們不會(huì)降低另一種活性劑的治療活性，而是有助于降低對(duì)正常細(xì)胞或組織不希望有的毒副作用。這意味著，以相同劑量的治療劑，仍然可達(dá)到所希望的相同治療效果。例如，在使用化療藥物的情況下，以一定的給藥劑量給予tyrphostin化合物，對(duì)藥物降低腫瘤重量或者阻止腫瘤生長(zhǎng)或復(fù)發(fā)的作用沒(méi)有影響，或者可能只有極小的影響。但是，在某些情況下，給予tyrphostin化合物甚至?xí)鰪?qiáng)這種治療作用。因此在這種組合治療中，tyrphostin化合物的總體作用是增加另一種治療的治療指數(shù)，也就是說(shuō)，增加其治療作用與其有害毒副作用之間的比率。治療指數(shù)增加有時(shí)可能對(duì)增加治療劑的劑量是有利的，例如，增加細(xì)胞毒性劑或放療劑的劑量，而不會(huì)同時(shí)增加有害的毒副作用。
本發(fā)明的tyrphostin可以是一次給藥，或者在一段時(shí)間內(nèi)，例如，在以細(xì)胞毒性劑治療或放療之前，之中和之后重復(fù)給藥。
tyrphostin對(duì)人的優(yōu)選給藥方式是靜脈內(nèi)給藥，盡管如此通過(guò)適當(dāng)?shù)嘏渲?，也可以按其它方式給藥，例如肌肉注射，腹膜內(nèi)注射或口服給藥。
雖然tyrphostin組合物一般都包含一個(gè)tyrphostin化合物，但有時(shí)也可能以組合物和/或共同給藥的形式，包含2個(gè)或幾個(gè)tyrphostin化合物，它們以協(xié)同或補(bǔ)充的方式共同發(fā)揮作用來(lái)對(duì)抗由例如治療過(guò)程引起的損傷。
附圖簡(jiǎn)述

圖1A圖解顯示用阿霉素處理的小鼠死亡率，與在用阿霉素處理之前二小時(shí)接受一次AG1714注射給藥的小鼠死亡率相比較。
圖1B圖解顯示用順鉑處理的小鼠死亡率，與在用順鉑處理之前二小時(shí)接受一次AG1714注射給藥的小鼠死亡率相比較；圖2圖解顯示21天內(nèi)接受10次腹膜內(nèi)注射阿霉素(5mg/kg，累積劑量50mg/kg)的小鼠死亡率，與同樣處理，并且在每次阿霉素注射之前二小時(shí)接受一次AG1714腹膜內(nèi)注射(5mg/kg)的小鼠死亡率相比較；圖3圖解顯示僅用順鉑處理的，或者在順鉑給藥后的10天時(shí)間內(nèi)以順鉑和AG1801處理的小鼠死亡率；圖4圖解顯示僅用阿霉素處理的，或者在阿霉素給藥后10天的時(shí)間內(nèi)以tyrphostin化合物和阿霉素處理的小鼠死亡率；圖5圖解顯示多種tyrphostin化合物對(duì)順鉑處理小鼠腎毒作用的影響。這種毒性作用是通過(guò)檢測(cè)被處理小鼠血清中肌酸酐的水平來(lái)測(cè)定的，高水平肌酸酐表明腎臟受損傷(腎毒性)；圖6圖解顯示對(duì)小鼠僅給予順鉑或AG1714，或者合并給予順鉑和AG1714后，血清中的肌酸酐(圖6A)和血脲氮(BUN)(圖6B)水平(它們表明腎毒性)。此肌酸酐和BUN水平與只給予賦形劑的對(duì)照小鼠血清中相同物質(zhì)的水平相比較；圖7的照片顯示對(duì)僅給予順鉑的小鼠，或在給予順鉑之前先給予tyrphostin AG1714的小鼠所進(jìn)行的腎臟(圖7A-C)和小腸(圖7D-F)的組織病理學(xué)分析。最后的放大倍數(shù)為×400；圖7A-未處理的正常小鼠腎組織；圖7B-僅給予順鉑的小鼠腎組織，顯示近曲小管內(nèi)有蛋白質(zhì)大斑塊；圖7C-在給予順鉑之前先給予AG1714的小鼠腎組織，顯示正常的腎組織結(jié)構(gòu)；圖7D-未處理的小鼠小腸組織；圖7E-僅給予順鉑的小鼠小腸組織，顯示嚴(yán)重的壞死和損傷；圖7F-在給予順鉑之前先給予AG1714的小鼠小腸組織，顯示正常的小腸組織結(jié)構(gòu)；圖8圖解顯示僅給予抗-FAS抗體注射液的小鼠，或者合并給予tyrphostin AG1801的小鼠血清中二種轉(zhuǎn)氨酶，天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的水平。轉(zhuǎn)氨酶的高水平表明抗-FAS抗體誘發(fā)了對(duì)肝臟的損傷(肝毒性)，圖9圖解顯示，僅給予抗-FAS抗體注射液的小鼠，或者合并給予tyrphostin AG1714的小鼠血清中二種轉(zhuǎn)氨酶AST和ALT的水平，轉(zhuǎn)氨酶的高水平表明抗-FAS抗體誘發(fā)了對(duì)肝臟的損傷(肝毒性)；圖10圖解顯示，僅用ConA處理的小鼠，或者合并給予AG1714的小鼠血清中AST和ALT水平；圖11圖解顯示用TNF/GalN處理的小鼠，或者合并給予tyrphostinAG1714的小鼠血清中AST和ALT水平；圖12圖解顯示，僅以阿霉素處理的，僅以AG1714處理的，或者以它們合并處理的小鼠股骨骨髓中，具核骨髓細(xì)胞的數(shù)量(圖12A)，或集落形成單位(CFU)(圖12B)的數(shù)量；圖13圖解顯示，僅以阿霉素處理的，或者以AG1714和阿霉素處理的小鼠骨髓中具核細(xì)胞的數(shù)量；圖13A顯示給予不同劑量阿霉素的小鼠骨髓中具核細(xì)胞的數(shù)量；圖13B顯示用阿霉素處理后，在不同時(shí)間被處理小鼠的骨髓中具核細(xì)胞的數(shù)量；圖14圖解顯示，僅以阿霉素處理的，或者在阿霉素給藥之前先以AG1714處理的小鼠脾重量(圖14A)和胸腺重量(圖14B)；圖15圖解顯示僅以5FU處理的，或者以5FU和AG1714處理的小鼠股骨中具核骨髓細(xì)胞的數(shù)量；圖16圖解顯示僅以絲裂霉素-C處理的，或者以絲裂霉素-C和AG1714處理的小鼠股骨中具核骨髓細(xì)胞的數(shù)量；圖17圖解顯示僅以阿霉素處理的，或者在阿霉素給藥之前不同時(shí)間以AG1801處理的小鼠骨髓中具核細(xì)胞的數(shù)量；圖18圖解顯示放射性照射的小鼠(300R)和照射之前先以tyrphostin AG1714處理的小鼠骨髓中具核細(xì)胞的數(shù)量；圖19圖解顯示放射性照射的小鼠(450R)和照射之前先以tyrphostin AG1714處理的小鼠骨髓中細(xì)胞的數(shù)量；圖20圖解顯示以致死劑量照射(800R)后小鼠的死亡率，同在照射之前用tyrphostin AG1714處理的小鼠死亡率相比較，顯示照射后23天內(nèi)的死亡率；圖21圖解顯示以MCA-105肌纖維瘤細(xì)胞(圖21A)，路易士肺癌細(xì)胞(圖21B)，或B-16黑素瘤細(xì)胞(圖21C)接種的，并且用順鉑或AG1714單獨(dú)治療，或者用順鉑和AG1714合并治療的小鼠肺重量；圖22圖解顯示負(fù)有SK-28人黑素瘤細(xì)胞腫瘤的，并且用阿霉素，AG1714或用它們合并治療的裸鼠肺重量；圖23圖解顯示在用順鉑或AG1714單獨(dú)治療，或者用它們合并治療的小鼠中，人卵巢癌腫瘤(OVCAR-3)的體積；圖24圖解顯示，在上面圖23中所述的，反復(fù)接受給藥治療的小鼠中，OVCAR-3腫瘤的體積；
圖25圖解顯示，在用順鉑或AG1801單獨(dú)治療，或用此二者合并治療的(圖25A)，或者用阿霉素，或AG1801單獨(dú)治療，或用它們合并治療的(圖25B)負(fù)有MCA-105肌纖維瘤的小鼠中肺的重量；圖26圖解顯示用順鉑或AG1801單獨(dú)治療的，或者用此二者合并治療的小鼠肺重量；圖27圖解顯示，在含有或不含有各種濃度AG1714下生長(zhǎng)的骨髓細(xì)胞培養(yǎng)物中，集落形成單位(CFU)的數(shù)量；圖28圖解顯示，存在或不存在AG1714下生長(zhǎng)的胸腺細(xì)胞，在對(duì)細(xì)胞加入AG1714后不同時(shí)間的生存能力；圖29圖解顯示，作為細(xì)胞生存能力指示的，存在或不存在AG1714下生長(zhǎng)的培養(yǎng)心肌細(xì)胞每分鐘的搏動(dòng)次數(shù)；圖30圖解顯示，存在或不存在AG1714時(shí)，以鼠腹膜滲出物胞毒淋巴細(xì)胞(PEL)胞溶EL-4靶細(xì)胞而導(dǎo)致其特異性51Cr釋放的百分?jǐn)?shù)來(lái)測(cè)定的細(xì)胞溶解百分?jǐn)?shù)。
制備實(shí)施例在下面的制備實(shí)施例中，示范性地制備了幾個(gè)上述的新穎化合物。在下面所有的實(shí)施例中，這種新穎化合物是通過(guò)醛與丙二腈或其取代的酰胺，進(jìn)行knoevenagel縮合反應(yīng)來(lái)合成的。實(shí)施例1-AG1801將0.45g,3mM對(duì)-硝基苯甲醛，0.61g,3.5mMN-(氰基乙酰)芐酰胺(參考文獻(xiàn)9)和50mgβ-丙氨酸在20ml乙醇中回流加熱5小時(shí)。冷卻，過(guò)濾后得到0.67g淡黃色固體物，產(chǎn)率73％,mp-164°。NMR(CDCl3)δ8.44(1H,S，乙烯基)，8.35,8.07(4H,AB,JAB=8.8Hz),7.35(5H,m),6.6(1H,br.t,NH),4.63(2H,d,J=5.8Hz)。
MS-m/e307(M+,50％),290(M-HCN,63),260(M-H-NO2,91),201(M-NHCH2C6H5,15),173(M-CONHCH2C6H5,13),155(22),127(21),105(100)。實(shí)施例2-AG1798將0.4g2.65mM對(duì)-硝基苯甲醛，0.57g,2.8mMN(氰基乙酰)3-丙苯酰胺(參考文獻(xiàn)9)和40mgβ-丙氨酸在30ml乙醇中回流加熱4小時(shí)。然后通過(guò)蒸發(fā)使此溶液濃縮，冷卻，過(guò)濾后得到0.38g淡黃色固體物，產(chǎn)率43％,mp-98°。
NMR(CDCl3)δ8.38(1H,S.乙烯基)，8.35,8.06(4H,ABq,JAB=8.6Hz),7.3(5H,m),3.50(2H,J=8.0Hz),2.74(2H,t,J=8.0Hz),2.0(2H，五重峰，J=8.0Hz)。實(shí)施例3-AG1719將146mg,0.87mM3-羥基4-硝基苯甲醛，48mg,0.89mM丙二腈二聚物和20mgβ丙氨酸，在10ml乙醇中回流加熱1小時(shí)。蒸發(fā)后以CH2Cl2-己烷研磨，過(guò)濾得到190mg黃色固體物，產(chǎn)率78％，mp-105°。NMR(丙酮d6)δ8.32(1H,d,J=8.6Hz),8.20(1H,S，乙烯基)，7.77(1H,d,J=2.2Hz),7.65(1H,dd,J=8.6,2.2Hz)。實(shí)施例4-AG1762將170mg,1mM 3-氟4-硝基苯甲醛，80mg,1.2mM丙二腈和15mgβ-丙氨酸回流加熱1小時(shí)，蒸發(fā)后以已烷研磨，過(guò)濾得到202mg，粉紅色固體，產(chǎn)率93％mp-120°。NMR(CDCl3)δ8.22(1H,m)，7.83(3H,m)。
MS-m/e217(M+,100),187(M-NO,78),171(M-NO2,19),159(M-NO-HCN-H,80),151(M-NO2-HF,33),144(M-NO2-HCN,71),132(75),124(M-NO2-HCN-HF,81)。實(shí)施例5-AG1799將0.4g2.65mM4-硝基苯甲醛，0.51g,2.8mM苯磺酰乙腈和40mgβ-丙氨酸，在30ml乙醇中回流加熱4小時(shí)。冷卻后過(guò)濾，并用乙醇洗，得到0.68g淡黃色固體，產(chǎn)率82％,mp-158°。NMR(CDCl3)δ8.36(2H,d,J=8.6Hz),8.31(1H,S，乙烯基)，8.07(4H,m),7.70(3H,m)。生物活性和治療活性實(shí)施例在下面的非限制性實(shí)施例中，將必要時(shí)參照附圖，對(duì)可用于本發(fā)明組合物的某些化合物的生物活性和治療作用，作例證性說(shuō)明。Ⅰ．用tyrphostin化合物降低由阿霉素或順鉑引起的小鼠死亡率實(shí)施例6將6周齡的雌性CD1小鼠如下分組?。鼓?nèi)注射(i.p)阿霉素(20mg/kg)的小鼠，ⅱ腹膜內(nèi)注射順鉑(14mg/kg)的小鼠，ⅲ．在給予阿霉素之前2小時(shí)，一次腹膜注射AG1714(20mg/kg)的小鼠，ⅳ．在給予順鉑之前2小時(shí)，一次腹膜注射AG1714(20mg/kg)的小鼠。
如圖1中可見(jiàn)，與僅給予阿霉素的小鼠死亡率(P≤0.001)(圖1A)，或僅給予順鉑的小鼠死亡率(P≤0.005)(圖1B)相比較，以AG1714處理的小鼠，顯著地降低了小鼠的死亡率。實(shí)施例7將6周齡的雌性CD1小鼠分為如下二組?。?1天內(nèi)，以每次注射5mg/kg的劑量，進(jìn)行10次腹膜內(nèi)阿霉素注射(累積劑量為50mg/kg)的小鼠，ⅱ．在21天內(nèi)，以5mg/kg的劑量進(jìn)行10次腹膜內(nèi)阿霉素注射，并在每次阿霉素注射之前2小時(shí)，補(bǔ)充一次腹膜內(nèi)注射AG1714(5mg/kg)的小鼠。
每組由10只小鼠組成，并如上面所述，對(duì)每組小鼠的死亡百分率進(jìn)行檢驗(yàn)。
如圖2中可見(jiàn)，與僅用阿霉素處理的小鼠的高死亡率相比較，在每次阿霉素給藥之前給予AG1714注射液的小鼠的死亡率顯著降低了。實(shí)施例8對(duì)二組CD1小鼠如上所述注射順鉑14mg/kg。其中一組在給予順鉑注射液之前2小時(shí)，以1mg/kg的低劑量腹膜內(nèi)給予一次AG1801注射液。如在圖2中可見(jiàn)，僅給予順鉑組中的所有小鼠，在注射后10天內(nèi)全死亡。與此對(duì)比，在順鉑注射之前給予一次低劑量AG1801注射液的小鼠組中，死亡率僅為20％。實(shí)施例9將CD1小鼠分成如下5組?。鼓?nèi)一次注射阿霉素20mg/kg的小鼠，ⅱ．腹膜內(nèi)一次注射AG1714 20mg/kg的小鼠，并在2小時(shí)后腹膜內(nèi)注射阿霉素20mg/kg，ⅲ．腹膜內(nèi)一次注射AG1782 20mg/kg，并在2小時(shí)后腹膜內(nèi)注射阿霉素20mg/kg的小鼠，ⅳ．腹膜內(nèi)一次注射AG126 20mg/kg，并在2小時(shí)后腹膜內(nèi)注射阿霉素20mg/kg的小鼠。
通過(guò)每天記錄死亡小鼠的數(shù)目，直到注射后10天，來(lái)確定上面各組小鼠的百分死亡率。
如圖10所示，在僅給予阿霉素的小鼠組(ⅰ)中，在注射后的1周內(nèi)，90％的小鼠死亡了。在阿霉素給藥之前給予tyrphostin化合物的其它小鼠組中，死亡率降低到50％(ⅲ)-10％(ⅱ)。Ⅱ．用tyrphostin化合物降低多種有害藥物試劑對(duì)受處理小鼠器官(腎，肝，腸，心)的毒性作用實(shí)施例10對(duì)每組包括3只小鼠的多組CD1小鼠，以14mg/kg的劑量腹膜內(nèi)注射順鉑。在注射順鉑之前2小時(shí)，對(duì)除1組以外的各級(jí)小鼠以10mg/kg的劑量腹膜內(nèi)注射了一次tyrphostin化合物。為了測(cè)定順鉑對(duì)受處理小鼠腎的毒性作用(腎毒性)，順鉑給藥后4天，用Sigma生產(chǎn)的商品試劑盒，檢測(cè)了每只小鼠血清中肌酸酐的水平。
如在圖5中可見(jiàn)，在僅給予順鉑的小鼠血清中檢測(cè)的肌酸酐水平是大約2mg/dl，表明這些小鼠的腎功能降低了大約50％。與僅給予順鉑的小鼠血清中肌酸酐水平相比較，在順鉑注射給藥之前給予tyrphostin化合物注射液的許多小鼠血清中，測(cè)定到較低水平的肌酸酐。這表明，在順鉑注射給藥之前注射tyrphostin化合物，可降低順鉑對(duì)腎功能的毒性作用。不同的tyrphostin化合物對(duì)降低順鉑腎毒性的作用各不相同。例如，AG1824,AG1744,AG1751,AG1714,AG1823,AG1782,AG1801明顯地降低了順鉑的腎毒性，使血清中肌酸酐的水平接近對(duì)照小鼠的水平。實(shí)施例11對(duì)雌性CD1小鼠單獨(dú)注射順鉑，或者在注射順鉑之前2小時(shí)注射一次tyrphostin AG1843或AG1714，然后如上所述，測(cè)定它們血清中肌酸酐的水平。
如從下面表1中可見(jiàn)，與上面實(shí)施例10的結(jié)果一致，從它們的高血清肌酸酐水平(1.53)表明，單獨(dú)給予順鉑對(duì)小鼠具有腎毒性作用。通過(guò)在注射順鉑前2小時(shí)注射tyrphostin化合物，順鉑的這種毒性作用被顯著降低了(為0.45-0.70)。在此實(shí)施例中，tyrphostin AG1843的作用，以低劑量(5mg/kg)給藥比以高劑量(20mg/kg)更有效。
表1
實(shí)施例12如上面所述，給CD1小鼠(腹膜內(nèi))注射順鉑(14m/kg)，或者先注射AG1714(10mg/kg),2小時(shí)后注射順鉑，對(duì)照組小鼠僅注射賦形劑(以生理鹽水稀釋的乙醇chemaphore(50∶50)貯備液)。給予順鉑4天之后，測(cè)定了每只小鼠順鉑給藥后4天的血清中幾個(gè)指示腎毒性和肝損傷的參數(shù)。指示順鉑腎毒性的參數(shù)是肌酸酐和血脲氮(BUN)，指示肝損傷的參數(shù)是以標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定的肝臟轉(zhuǎn)氨酶，丙氨酸-轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)。每組由3只小鼠組成，結(jié)果以測(cè)定參數(shù)的平均值±SD表示。
如圖6所示，僅給予小鼠順鉑導(dǎo)致肌酸酐(圖6A)和BUN(圖6B)水平升高。下面表2顯示了這些小鼠的ALT和AST水平也升高了。這些結(jié)果表明，由于給予小鼠順鉑，既產(chǎn)生了腎毒性，又導(dǎo)致了肝損傷。如圖6和表2所示，在注射順鉑之前2小時(shí)給予AG1714，導(dǎo)致所有4個(gè)檢測(cè)參數(shù)降低至對(duì)照小鼠所測(cè)定的正常水平。
表2AG1714對(duì)順鉑誘發(fā)的腎和肝損傷的預(yù)防作用
實(shí)施例13對(duì)CD1小鼠以14mg/kg順鉑注射給藥，或者先腹膜內(nèi)注射一次tyrphostin AG1714,2小時(shí)后注射14mg/kg順鉑。用甲醛固定的組織切片，以蘇木精伊紅染色，對(duì)未經(jīng)處理和經(jīng)處理小鼠的腎和小腸進(jìn)行了組織病理學(xué)分析。
如圖7中所示，在僅給予順鉑的小鼠腎臟，近曲小管中顯示有大的蛋白質(zhì)斑塊(7B)，以及在柱狀上皮中顯示有顆粒狀物質(zhì)。與此相對(duì)照，在給予順鉑之前注射AG1714的小鼠腎臟(7C)沒(méi)有顯示出損傷，它們的結(jié)構(gòu)與對(duì)照小鼠的(7A)相似。
也如圖7中所示，僅給予順鉑的小鼠小腸(7E)顯示有小腸柱狀上皮細(xì)胞嚴(yán)重壞死和瓦解，相比之下，在順鉑給藥之前給予AG1714的小鼠小腸(7F)，顯示出類似于在未受處理的小鼠小腸(7D)中所見(jiàn)到的正常結(jié)構(gòu)。實(shí)施例14為了測(cè)定AG1714對(duì)阿霉素誘發(fā)的心臟毒性的預(yù)防作用，按照標(biāo)準(zhǔn)化程序(在如下文獻(xiàn)中所述毒物學(xué)體外試驗(yàn)，模型系統(tǒng)和方法，McQueen.Telford Press New Jersey出版，1990,163頁(yè)，新生大鼠心肌細(xì)胞的初級(jí)培養(yǎng)物；和Kessler-Icekson,G.,J.Mol Cell Cardiol.20:649-755,1988)制備了7天的初級(jí)大鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)物。
將此心肌細(xì)胞培養(yǎng)物分成如下4組?。畠H給予賦形劑的細(xì)胞(對(duì)照)，ⅱ．以20μM最后濃度給予AG1714的細(xì)胞，ⅲ．以10μM的濃度給予阿霉素的細(xì)胞，和ⅳ．以20μM最后濃度給予AG1714后1小時(shí)再加入阿霉素(10μM)的細(xì)胞。
開(kāi)始溫育后24小時(shí)測(cè)定心肌細(xì)胞叢(“微小的心臟”)的搏動(dòng)速度。
如表3中所示，在僅以阿霉素溫育的細(xì)胞培養(yǎng)物中，每分鐘搏動(dòng)次數(shù)顯著地降低至僅以賦形劑溫育的對(duì)照培養(yǎng)物搏動(dòng)次數(shù)的大約20％。相比之下，在以阿霉素和AG1714一起溫育的培養(yǎng)物中，每分鐘搏動(dòng)的次數(shù)類似于在對(duì)照培養(yǎng)物中每分鐘搏動(dòng)的次數(shù)。在溫育后16小時(shí)和40小時(shí)，在上面的心肌細(xì)胞培養(yǎng)物中也看到了類似的結(jié)果(未報(bào)告)。因此，在加入阿霉素之前1小時(shí)以AG1714溫育此培養(yǎng)物，可預(yù)防阿霉素對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物的心臟毒性作用。
表3AG1714對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的心臟毒性的預(yù)防作用，體外試驗(yàn)<
實(shí)施例15FAS抗原是一種細(xì)胞表面蛋白，屬于雙因子/神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體家族，已顯示具有介導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡的作用(Itoh,N，等人，Cell.66:233-243(1991))。對(duì)小鼠腹膜內(nèi)給予抗-FAS抗體，導(dǎo)致嚴(yán)重的細(xì)胞程序性死亡的肝損傷。
為了測(cè)定tyrphostin AG1801和AG1714對(duì)于抗-FAS抗體誘發(fā)肝毒性的作用，給Balb/C小鼠腹膜內(nèi)注射AG1801(5mg/kg)或AG1714(5mg/kg)。2小時(shí)后以5μg/只小鼠的劑量腹膜內(nèi)注射抗-FAS抗體。另一組小鼠僅給予抗-FAS抗體注射液，預(yù)先未接受tyrphostin處理。注射抗-FAS抗體后5小時(shí)將動(dòng)物處死，測(cè)定處死小鼠血清中二種轉(zhuǎn)氨酶AST和ALT的水平這一種轉(zhuǎn)氨酶的高水平可指示肝毒性(Ogasaware,J.等人，Nature,364:806-809,1993)。
如圖8和9中所示，僅以抗-FAS抗體處理的小鼠血清中AST和ALT的水平非常高，表明FSA抗體誘發(fā)了肝毒性。
對(duì)比之下，在注射抗-FAS之前以AG1801(圖8)或AG1714(圖9)處理的小鼠血清中，二種轉(zhuǎn)氨酶AST和ALT的水平顯著降低。因此，對(duì)小鼠給予tyrphostin化合物，可使之產(chǎn)生對(duì)抗由抗-FAS抗體誘發(fā)的肝毒性的作用。實(shí)施例16T-細(xì)胞介導(dǎo)的肝毒性是多種紊亂的疾病如乙型肝炎病毒感染的并發(fā)癥。這種肝毒性可通過(guò)注射伴刀豆球蛋白A(Con A)來(lái)誘發(fā)。按如下方法(見(jiàn)Tiegs.G.等人，J.Clin.Invest.90:196-203,1992)測(cè)定了AG1714對(duì)Con A誘發(fā)的小鼠肝毒性的作用。
將CD1小鼠分成如下各組?。∈髢H給予賦形劑注射液(對(duì)照組)；ⅱ．小鼠腹膜內(nèi)注射AG1714(10mg/kg)；ⅲ．小鼠靜脈內(nèi)注射Con A(35mg/只)；和ⅳ．小鼠腹膜內(nèi)注射AG1714(10mg/kg),2小時(shí)后靜脈內(nèi)注射Con A(35mg/只)。
小鼠注射Con A之后6小時(shí)，如上所述測(cè)定經(jīng)處理小鼠血清中肝臟酶AST和ALT的水平。這二種酶血清中含量增加反映出肝損傷。
如圖10中所示，單獨(dú)給予AG1714對(duì)小鼠沒(méi)有影響，而注射Con A對(duì)小鼠引起了顯著的肝毒性。Con A給藥之前給予AG1714，顯著地降低了Con A對(duì)這些小鼠誘發(fā)的肝毒性。實(shí)施例17現(xiàn)在已知道，多種免疫機(jī)制如細(xì)胞因子，以及多種已知引發(fā)細(xì)胞程序性死亡作用的其它藥物(如酒精或撲熱息痛)都可能誘發(fā)肝損傷。已建立了一種由細(xì)胞程序性死亡而誘發(fā)的這種肝損傷的模型，其中是通過(guò)體內(nèi)注射半乳糖胺和TNF-α誘發(fā)肝損傷(見(jiàn)Leist,M.等人，J.Immunol.153:1778-1788,1994)。
按如下方法測(cè)定了AG1714對(duì)TNF誘發(fā)的小鼠肝損傷的作用將小鼠分成如下4組?。畠H給予賦形劑注射液的小鼠；ⅱ．腹膜內(nèi)注射1次AG1714(10mg/kg)的小鼠；ⅲ．靜脈內(nèi)注射人TNF-α(0.25μg/只)并同時(shí)腹膜內(nèi)注射半乳糖胺(Gal N)(18ml/只)的小鼠；和ⅳ．接受如上述第ⅲ組處理的小鼠，在注射TNF/Gal N之前2小時(shí)，腹膜內(nèi)注射1次AG1714(10mg/kg)。
注射TNF/Gal N之后7小時(shí)，如上所述測(cè)定各處理組小鼠血清中肝臟酶AST和ALT的水平。
如圖11中可見(jiàn)，在對(duì)小鼠給予TNF/Gal N之前注射AG1714，顯著地降低了由于TNF/Gal N給藥誘發(fā)的肝毒性。因此，tyrphostin化合物可用于減少由變種免疫機(jī)制誘發(fā)的肝損傷。Ⅲ．用tyrphostin化合物可降低多種有害藥物活性劑對(duì)具核骨髓細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的毒性作用(骨髓毒性和淋巴毒性)實(shí)施例18將CD1小鼠分成如下各組ⅰ．小鼠僅腹膜內(nèi)注射阿霉素(10mg/kg)，ⅱ．小鼠先腹膜內(nèi)注射AG1714(20mg/kg),2小時(shí)后腹膜內(nèi)注射阿霉素(10mg/kg)，和ⅲ．小鼠先注射一次賦形劑，2小時(shí)后腹膜內(nèi)注射阿霉素(10mg/kg)。
三天后測(cè)定受處理小鼠股骨中具核骨髓細(xì)胞和集落形成單位(CFU)的數(shù)量(Nikerich,D.A.等人J.Immunopharmacol.8:299-313,1986)。每組包括3只小鼠，結(jié)果以平均值±SD表示。
如圖12中所示，對(duì)小鼠注射阿霉素，3天后引起了骨髓毒性，表現(xiàn)為具核細(xì)胞數(shù)量減少了47％(圖12A),CFU減少了55％(圖12B)。在注射阿霉素之前2小時(shí)以AG1714預(yù)處理的小鼠，完全防止了這種骨髓毒性作用。實(shí)施例19還研究了AG1714對(duì)由不同劑量阿霉素誘發(fā)的骨髓毒性的作用。按實(shí)施例18中所述方法處理小鼠。在阿霉素給藥后3天(圖13A)和不同的時(shí)間(圖13B)，測(cè)定受處理的小鼠中股骨具核骨髓細(xì)胞的數(shù)量。
如圖13A中所示，以10mg/kg和15mg/kg的劑量對(duì)小鼠給予阿霉素，在受處理小鼠中誘發(fā)了骨髓毒性。以AG1714預(yù)處理，顯著地降低了阿霉素誘發(fā)的骨髓毒性。
如圖13B中所示，以AG1714預(yù)處理的阿霉素給藥小鼠，也可導(dǎo)致阿霉素給藥后骨髓細(xì)胞迅速恢復(fù)正常。單獨(dú)用阿霉素(15mg/kg)處理時(shí)，5天后受處理小鼠股骨中骨髓細(xì)胞的數(shù)量仍然相當(dāng)?shù)?。在阿霉素給藥之前以AG1714預(yù)處理小鼠，在此時(shí)，它們的骨髓細(xì)胞已完全再生了。實(shí)施例20CD1小鼠受腹膜內(nèi)注射1次阿霉素(10mg/kg)，或者先腹膜內(nèi)注射1次AG1714(20mg/kg),2小時(shí)后腹膜內(nèi)注射阿霉素(10mg/kg)。阿霉素給藥后72小時(shí)處死小鼠，測(cè)量小鼠的脾重量和胸腺重量，作為淋巴毒性的參數(shù)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組由3只小鼠組成，結(jié)果以細(xì)胞平均數(shù)±SD表示。以僅接受賦形劑注射，而不接受阿霉素注射的小鼠作為對(duì)照。
如下面圖14中所示，單獨(dú)給予阿霉素，導(dǎo)致小鼠的脾重量(圖14A)和胸腺重量(圖14B)顯著減少。通過(guò)在給予阿霉素之前2小時(shí)給予小鼠AG1714，顯著地降低了阿霉素的這種骨髓毒性和淋巴毒性作用。實(shí)施例21對(duì)CD1小鼠以50mg/kg的劑量腹膜內(nèi)注射1次環(huán)磷酰胺，并分成如下幾組?。∈笤诮o予環(huán)磷酰胺之前2小時(shí)，僅接受1次賦形劑腹膜內(nèi)注射，ⅱ．小鼠在給予環(huán)磷酰胺之前2小時(shí)，接受1次AG1714(20mg/kg)腹膜內(nèi)注射，ⅲ．小鼠在給予環(huán)磷酰胺之前2小時(shí)，接受1次AG1801(2.5mg/kg)腹膜內(nèi)注射。
環(huán)磷酰胺給藥后72小時(shí)處死小鼠，對(duì)小鼠骨髓中的具核細(xì)胞數(shù)量，脾和胸腺的重量進(jìn)行測(cè)定。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組由3只小鼠組成，結(jié)果以各組細(xì)胞平均數(shù)±SD表示。
如表4A和4B中可見(jiàn)，給予環(huán)磷酰胺導(dǎo)致骨髓、脾和胸腺中具核細(xì)胞數(shù)量顯著減少，指示環(huán)磷酰胺的骨髓毒性和淋巴毒性作用。在給予環(huán)磷酰胺之前給予tyrphostin AG1714或AG1801，導(dǎo)致環(huán)磷酰胺在上述3個(gè)器官中的骨髓毒性和淋巴毒性作用降低。雖然以tyrphostin化合物處理的小鼠骨髓，脾和胸腺中具核細(xì)胞的數(shù)量尚未達(dá)到對(duì)照鼠的水平，與僅接受環(huán)磷酰胺的小鼠相比較，這些小鼠器官中具核細(xì)胞的數(shù)量較高。
表4a和4bAG1714和AG1801防止環(huán)磷酰胺誘發(fā)的骨髓毒性和淋巴毒性
實(shí)施例22將CD1雌性小鼠分成如下各組ⅰ．對(duì)照組僅1次腹膜內(nèi)注射賦形劑(助溶劑丙烯碳酸酯-Cremophor-生理鹽水)，ⅱ．小鼠以80mg/kg的劑量接受1次腹膜內(nèi)注射5-氟尿嘧啶(5FU)。
ⅲ．小鼠以20mg/kg的劑量接受1次腹膜內(nèi)注射AG1714，ⅳ．小鼠以2.5mg/kg的劑量接受1次腹膜內(nèi)注射AG1801，ⅴ．小鼠以5mg/kg的劑量接受1次腹膜內(nèi)注射AG1843，ⅵ．小鼠先接受1次腹膜內(nèi)AG1714(20mg/kg)注射，2小時(shí)后腹膜內(nèi)注射1次5FU(80mg/kg)，ⅶ．小鼠先接受1次腹膜內(nèi)AG1801(2.5mg/kg)注射，2小時(shí)后腹膜內(nèi)注射1次5FU(80mg/kg)，ⅷ．小鼠先接受1次腹膜內(nèi)AG1843(5mg/kg)注射，2小時(shí)后腹膜內(nèi)注射1次5FU(80mg/kg)。
對(duì)小鼠5FU給藥后5天，將小鼠處死，測(cè)定一根股骨的骨髓中具核細(xì)胞的數(shù)量。每組由2只或3只小鼠組成，結(jié)果以細(xì)胞平均數(shù)±SD表示。
如圖15中所示，給予5FU導(dǎo)致這些小鼠骨髓中具核細(xì)胞數(shù)量減少。在給予5FU之前先給予AG1714，導(dǎo)致顯著較低小鼠的骨髓中細(xì)胞數(shù)量減少。因此，AG17141降低了5FU對(duì)這些小鼠的骨髓毒性作用。實(shí)施例23將CD1雌性小鼠分成如下各組?。畬?duì)照組僅接受1次腹膜內(nèi)注射賦形劑(助溶劑丙烯碳酸酯-Cremophor-生理鹽水)，ⅱ．小鼠以2mg/kg的劑量接受1次腹膜內(nèi)注射絲裂霉素-C，ⅲ．小鼠以20mg/kg的劑量接受1次腹膜內(nèi)注射AG1714，ⅳ．小鼠先接受1次腹膜內(nèi)AG1714注射(20mg/kg)，2小時(shí)后腹膜內(nèi)注射1次絲裂霉素-C(2mg/kg)。
如上面實(shí)施例22中所述，給予小鼠絲裂霉素-C5天后將小鼠處死，測(cè)定1根股骨的骨髓中具核細(xì)胞的數(shù)量。每組由2只或3只小鼠組成，結(jié)果以所計(jì)數(shù)的細(xì)胞平均數(shù)±SD表示。
如圖16中所示，僅給予絲裂霉素-C的小鼠顯示出非常低的骨髓中具核細(xì)胞計(jì)數(shù)。雖然單獨(dú)給予AG1714對(duì)小鼠沒(méi)有作用，但是，在給予絲裂霉素-C之前先給予AG1714，導(dǎo)致降低了絲裂霉素-C對(duì)這些小鼠的骨髓毒性作用，幾乎提供了對(duì)絲裂霉素-C有害毒性的完全預(yù)防作用，使這些小鼠骨髓中具核細(xì)胞的計(jì)數(shù)達(dá)到僅給予助溶劑的對(duì)照小鼠的水平。實(shí)施例24測(cè)定了不同劑量的AG1801對(duì)抗阿霉素誘發(fā)小鼠骨髓毒性的作用。將CD1小鼠分成如下5組ⅰ．小鼠僅接受賦形劑，ⅱ．小鼠僅接受阿霉素(10mg/kg)，ⅲ．小鼠在給予阿霉素之前2小時(shí)，先接受腹膜內(nèi)注射AG1801(0.5mg/kg)，ⅳ．小鼠在給予阿霉素之前2小時(shí)，先接受腹膜內(nèi)注射AG1801(1mg/kg)，ⅴ．小鼠在給予阿霉素之前2小時(shí)，先接受腹膜內(nèi)注射AG1801(2mg/kg)。
阿霉素給藥三天之后將小鼠處死，如上所述測(cè)定骨髓中具核細(xì)胞的數(shù)量。
如圖17中所示，給予小鼠AG1801，具有劑量相關(guān)的對(duì)抗阿霉素誘發(fā)骨髓毒性的預(yù)防作用。Ⅳ．用tyrphostin化合物可降低放射作用誘發(fā)的毒性實(shí)施例25為了測(cè)定tyrphostin AG1714對(duì)受放射處理小鼠的防御活性，將用鈷源以300R放射性劑量照射的CD1小鼠分成如下二組ⅱ．小鼠未接受其它處理，和ⅱ小鼠在受照射之前2小時(shí)接受1次20mg/kg劑量的tyrphostinAG1714腹膜內(nèi)注射。
第3組小鼠僅接受1次AG1714(20mg/kg)注射，第4組小鼠未作處理，作為正常對(duì)照小鼠。
在照射后不同的時(shí)間處死小鼠，測(cè)定1根股骨的骨髓中細(xì)胞的數(shù)量。
如圖18中所示，與未受處理的小鼠，或僅以AG1714處理的小鼠相比較，用300R照射小鼠，引起這些小鼠骨髓中細(xì)胞數(shù)量減少了。大約放射處理后5天，受照射小鼠骨髓中開(kāi)始細(xì)胞再生。以AG1714預(yù)處理受照射的小鼠，可防止受照射小鼠骨髓中細(xì)胞數(shù)量減少，并引起了小鼠骨髓中細(xì)胞數(shù)量非常顯著地增加。因此，tyrphostin AG1714對(duì)放射處理引起的骨髓毒性具有預(yù)防作用。實(shí)施例26如上面實(shí)施例25中所述方法，測(cè)定了tyrphostin AG1714對(duì)大劑量照射(450R)引起的骨髓毒性的預(yù)防作用，不同的是照射劑量是450R而不是300R。
如圖19中所示，以450R照射的小鼠，照射后5天骨髓中的細(xì)胞數(shù)量顯著減少了，表明這種照射對(duì)小鼠具有嚴(yán)重的骨髓毒性作用。照射后5天骨髓中的細(xì)胞數(shù)量開(kāi)始再生，但是，照射后18天受照射小鼠骨髓中的細(xì)胞數(shù)量仍然顯著低于未受處理的小鼠或僅給予AG1714的小鼠骨髓中的細(xì)胞數(shù)量。對(duì)于照射之前給予AG1714的小鼠骨髓，直到照射后5天骨髓毒性作用仍然可見(jiàn)。但是5天后，可見(jiàn)這些小鼠骨髓中的細(xì)胞數(shù)量顯著地恢復(fù)，到照射后18天，給予AG1714的受照射小鼠骨髓中的細(xì)胞數(shù)量已高于對(duì)照小鼠的細(xì)胞數(shù)量。因此，給予AG1714可促進(jìn)受大劑量照射的小鼠骨髓中細(xì)胞數(shù)量的再生。實(shí)施例27用鈷源以致死劑量800R照射CD1小鼠，小鼠被分成2組?。∈髢H接受照射處理；和ⅱ．小鼠在受照射之前1小時(shí)，接受1次20mg/kg劑量的AG1714腹膜內(nèi)注射。
每組由10只小鼠組成，通過(guò)記錄照射后每天死亡小鼠的數(shù)目，測(cè)定每組的死亡率。
如圖20所示，接受800R照射的小鼠組，照射后10天小鼠開(kāi)始死亡，照射后23天這組小鼠的死亡率達(dá)到80％。相比之下，在照射之前接受AG1714的小鼠組，照射之后20天其死亡率顯著地降低為20％。
這二組的死亡率直到照射之后50天未進(jìn)一步改變。V．tyrphostin化合物對(duì)化學(xué)治療劑抗腫瘤活性的影響實(shí)施例28應(yīng)用多種小鼠腫瘤實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜏y(cè)定了AG1714對(duì)化學(xué)治療劑抗腫瘤作用的影響。
分別在C57BL小鼠尾靜脈注射MCA-105肌纖維瘤細(xì)胞或Lewis肺瘤細(xì)胞2×105/只，以及B-16黑素瘤細(xì)胞5×104/只。
腫瘤細(xì)胞接種后4天腹膜內(nèi)注射順鉑(4mg/kg)。給予順鉑之前2小時(shí)腹膜內(nèi)注射AG1714(20mg/kg)或賦形劑。腫瘤細(xì)胞接種后24天處死小鼠，測(cè)定肺的重量和轉(zhuǎn)移病灶數(shù)量。每組包括5只小鼠，結(jié)果以平均肺重量±SE表示。
從圖21A可見(jiàn)，順鉑明顯地抑制了MCA-105肌纖維瘤的生長(zhǎng)。AG1714本身也具有輕微的抗腫瘤作用。以AG1714和順鉑合并治療，象單獨(dú)給予順鉑一樣，有效地抑制了已形成的MCA-105肺轉(zhuǎn)移病灶的生長(zhǎng)。順鉑和AG1714本身都對(duì)Lewis肺癌具有部分抗腫瘤作用。以AG1714和順鉑合并治療也比順鉑能更有效地抑制已形成的這種腫瘤肺轉(zhuǎn)移病灶的生長(zhǎng)(圖21B)。
順鉑(4mg/kg)或AG1714(20mg/kg)單獨(dú)對(duì)已形成的B-16黑素瘤肺轉(zhuǎn)移都沒(méi)有效果(圖21C)。以這二種藥物合并治療，比以每一種藥物單獨(dú)治療都更有效。實(shí)施例29按如下方法測(cè)定阿霉素和AG1714對(duì)裸鼠體內(nèi)SK-28人黑素瘤細(xì)胞異種移植瘤的作用以SK-28人黑素瘤細(xì)胞4×105/只，靜脈注射接種無(wú)胸腺CD1 小鼠(nu/nu)。腫瘤接種后4天腹膜內(nèi)注射阿霉素(4mg/kg)。在給予阿霉素之前2小時(shí)注射AG1714(20mg/kg)或賦形劑。腫瘤接種后24天，測(cè)定經(jīng)治療小鼠的肺重量和肺內(nèi)轉(zhuǎn)移病灶數(shù)量。每組包括5只小鼠，結(jié)果以平均值±SE表示。
從圖22中可見(jiàn)，阿霉素明顯地抑制了SK-28腫瘤的生長(zhǎng)，而AG1714本身也具有輕微的抗腫瘤作用。以AG1714預(yù)處理不會(huì)削弱阿霉素單獨(dú)抑制這種腫瘤生長(zhǎng)的作用。實(shí)施例30以人卵巢癌(OVCAR-3)細(xì)胞皮下注射接種無(wú)胸腺小鼠(3×106個(gè)細(xì)胞/部位)。腫瘤接種后4天注射順鉑(4mg/kg)。在給予順鉑之前2小時(shí)腹膜內(nèi)注射AG1714(20mg/kg)或賦形劑。在腫瘤接種后20天，測(cè)定腫瘤的短徑(S)和長(zhǎng)徑(L)，并按公式V=[S2&times;L]2]]>計(jì)算腫瘤的體積(V)。每組包括5只小鼠，結(jié)果以平均值±SE表示。
如圖23中所示，順鉑對(duì)負(fù)有OVCAR-3腫瘤的小鼠其有明顯的抗腫瘤作用，而AG1714本身效果較小。給予AG1714不會(huì)削弱順鉑的化學(xué)治療作用。
從圖24中可見(jiàn)，與僅反復(fù)注射順鉑或僅反復(fù)注射AG1714的小鼠腫瘤體積相比較，反復(fù)注射順鉑和AG1714的小鼠腫瘤體積較小。實(shí)施例31通過(guò)測(cè)定負(fù)有B-16黑素瘤小鼠的死亡率和它們肺中轉(zhuǎn)移病灶的數(shù)量或肺重量，檢測(cè)了AG1714對(duì)大劑量阿霉素效果的影響。
對(duì)小鼠靜脈內(nèi)注射2×105B-16黑素瘤細(xì)胞，腫瘤接種后4天，對(duì)每只小鼠腹膜內(nèi)注射1次阿霉素(4mg/kg或8mg/kg)。在注射阿霉素之前2小時(shí)，對(duì)每只小鼠以20mg/kg的劑量腹膜內(nèi)注射AG1714。
如表5A和5B所示，二組如上所述完成的實(shí)驗(yàn)中，給予小劑量阿霉素，引起較低的死亡率和顯著的治療作用。給予大劑量阿霉素產(chǎn)生了顯著高得多的治療效果，但對(duì)治療小鼠引起了高死亡率。AG1714單獨(dú)給藥也顯示它本身有一些治療作用。以大劑量阿霉素同AG1714一起合并給藥，產(chǎn)生了大劑量阿霉素的高治療效果，但是，小鼠的死亡率顯著降低了。
表5AG1714對(duì)大劑量阿霉素效力和對(duì)負(fù)有B-16黑素瘤小鼠死亡率的影響A
B
<p>因此，AG1714與阿霉素一起合并給藥，可導(dǎo)致增強(qiáng)阿霉素的化學(xué)治療作用。與AG1714合并給藥，大劑量阿霉素的顯著治療作用可以達(dá)到，而大劑量阿霉素引起的高死亡率，通過(guò)合并給藥被中和了。
這種增強(qiáng)作用也可以在以如下方式治療的，負(fù)有MCA-105肌纖維瘤的小鼠中看見(jiàn)僅以阿霉素治療(表6A)或僅以順鉑治療(表6B)，或者以上而每種藥物與AG1714合并治療。
表6AG1714對(duì)大劑量阿霉素效力和對(duì)負(fù)有MCA-105肌纖維瘤小鼠死亡率的影響A
B．
實(shí)施例32按如下方法測(cè)定了AG1801對(duì)順鉑對(duì)于負(fù)有MCA-105肌纖維瘤的小鼠已形成的肺轉(zhuǎn)移病灶，抗轉(zhuǎn)移活性的作用將C57BL小鼠分成如下幾組ⅰ．小鼠在6周齡時(shí)靜脈內(nèi)注射2×105肌纖維瘤MCA105細(xì)胞，4天后接受1次僅含有賦形劑的注射，ⅱ．小鼠在6周齡時(shí)靜脈內(nèi)注射2×105肌纖維瘤MCA105細(xì)胞，4天后注射10mg/kg順鉑，ⅲ．小鼠在6周齡時(shí)靜脈內(nèi)注射2×105肌纖維瘤MCA105細(xì)胞，4天后注射10mg/kg阿霉素，ⅳ．小鼠在6周齡時(shí)靜脈內(nèi)注射2×105肌纖維瘤MCA105細(xì)胞，4天后注射5mg/kg AG1801，ⅴ．小鼠在6周齡時(shí)靜脈內(nèi)注射2×105肌纖維瘤MCA105細(xì)胞，4天后先注射5mg/kg AG1801,2小時(shí)后注射10mg/kg順鉑，ⅵ．小鼠在6周齡時(shí)靜脈內(nèi)注射2×105肌纖維瘤MCA105細(xì)胞，4天后先注射5mg/kgAG1801,2小時(shí)后注射10mg/kg阿霉素，ⅶ．未處理的C57BL小鼠。
如圖25A和25B中所示，負(fù)有腫瘤的小鼠肺的重量顯著地大于對(duì)照小鼠。雖然單獨(dú)注射AG1801對(duì)肺重量沒(méi)有影響，但注射順鉑(圖25A)或阿霉素(圖25B)，可使小鼠肺的重量減少至接近于未負(fù)有腫瘤的對(duì)照小鼠的肺重量。合并注射順鉑和AG1801(圖25A)和合并注射阿霉素和AG1801(圖25B)，導(dǎo)致小鼠肺中腫瘤負(fù)荷減少，類似于僅給予順鉑的小鼠腫瘤負(fù)荷減少。
上述4個(gè)實(shí)施例的結(jié)果清楚地表明，對(duì)負(fù)有腫瘤的小鼠，以tyrphostin化合物和順鉑一起給藥，不會(huì)影響順鉑的抗腫瘤作用，并且在某些情況下甚至可增加這種作用。實(shí)施例33如上面實(shí)施例29所述方法，測(cè)定了順鉑和AG1801對(duì)裸鼠體內(nèi)SK-28人黑素瘤異種移植腫瘤的作用。
如圖26所示，單獨(dú)給予順鉑在一定程度上減少了負(fù)有腫瘤小鼠肺的重量，而給予AG1801，它本身沒(méi)有治療作用。AG1801同順鉑合并給藥則顯著地減少了受治療小鼠肺的重量，因此，在給予順鉑之前給予AG1801，可增強(qiáng)它的治療作用。
上述實(shí)施例清楚地表明，對(duì)負(fù)有腫瘤的小鼠，同順鉑或阿霉素一起給予tyrphostin化合物，不會(huì)削弱這些治療劑的抗腫瘤作用，并且有時(shí)甚至可增強(qiáng)這種作用。因此，tyrphostin化合物可用于提高和增強(qiáng)這些藥物的化學(xué)治療作用和效力。Ⅵ．按如下方法測(cè)定了AG1714對(duì)各種細(xì)胞在體外生存能力的作用實(shí)施例34通過(guò)在histopaque上作梯度離心，制備鼠骨髓具核細(xì)胞。然后將細(xì)胞分為二組?。?xì)胞僅在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中溫育1小時(shí)(對(duì)照)，ⅱ細(xì)胞在加有不同濃度(5μM,10μM或20μM)tyrphostinAG1714的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中溫育1小時(shí)。
然后將細(xì)胞在半固體瓊脂板上作平板培養(yǎng)，溫育14天之后，測(cè)定集落形成單位(CFU)的數(shù)量(參見(jiàn)Nikerich等人，同上，1986)。
如圖27所示，與僅在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培育的細(xì)胞相比較，加入AG1714的培養(yǎng)物平板培養(yǎng)效力(以每105具核細(xì)胞的CFU數(shù)量表示)顯著地提高了。因此，tyrphostin AG1714能較長(zhǎng)時(shí)間保存骨髓細(xì)胞培養(yǎng)物。實(shí)施例35在含有5％FCS的RPNI 1640生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，從CD1幼小鼠的胸腺，制備濃度為3×106個(gè)細(xì)胞/ml的胸腺細(xì)胞。將此細(xì)胞如下分成二組?。?xì)胞僅在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)；和ⅱ．細(xì)胞在加有AG1714的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。
應(yīng)用胰蛋白酶蘭色排除試驗(yàn)，在對(duì)細(xì)胞加入AG1714之后不同時(shí)間，測(cè)定上面每組培養(yǎng)物中胸腺細(xì)胞的細(xì)胞生存能力。
如圖28所示，對(duì)培養(yǎng)的胸腺細(xì)胞加入AG1714，顯著地增強(qiáng)了它們的生存能力。實(shí)施例36如在Kessler-Iceksan G.,J.Mol,Cell.Cardiol.20:649-755,1988中所述，從大鼠制備了初級(jí)大鼠肌細(xì)胞培養(yǎng)物。將心肌細(xì)胞在培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)7天，然后將此培養(yǎng)物分成二組?。囵B(yǎng)物僅在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，ⅱ．培養(yǎng)物在加有20μM tyrphostin AG1714的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
在對(duì)細(xì)胞加入tyrphostin化合物之后16小時(shí)和40小時(shí)，測(cè)定每組培養(yǎng)物中肌細(xì)胞叢每分鐘的搏動(dòng)次數(shù)。
如圖29所示，與僅在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)的心肌細(xì)胞培養(yǎng)物中每分鐘的搏動(dòng)次數(shù)相比較，加入tyrphostin AG1714的心肌細(xì)胞培養(yǎng)物中每分鐘的搏動(dòng)次數(shù)顯著地較多。AG1714增強(qiáng)了培養(yǎng)的心肌細(xì)胞的生存活力。Ⅶ．對(duì)tyrphostin化合物的毒性研究實(shí)施例37為了研究tyrphostin AG1714和AG1801的毒性作用，將此tyrphostin化合物給ICR小鼠每周注射3次，持續(xù)5周。每次注射包含20mltyrphostin化合物，它們是在以生理鹽水/碳酸氫鹽1∶20稀釋的賦形劑丙烯碳酸酯cremophore(40/60)中制備的。
為了測(cè)定tyrphostin化合物累積性給藥的毒性作用，對(duì)被注射小鼠的多種參數(shù)進(jìn)行測(cè)定，包括它們的體重，內(nèi)部器官(胸腺，脾，腎)的重量，全血化學(xué)，骨髓細(xì)胞數(shù)量等。
如下面表7中所示，與僅注射生理鹽水或賦形劑的對(duì)照小鼠的相同參數(shù)相比較，注射tyrphostin AG1714和AG1801未引起對(duì)被注射小鼠所測(cè)定的這些參數(shù)發(fā)生顯著的改變。因此，在對(duì)小鼠累積性給藥之后，這些tyrphostin化合物未顯示出任何毒性作用。此外，注射tyrphostin化合物未引起小鼠死亡。
表7亞慢性腹膜內(nèi)注射給予AG1714和AG1801(ICR雌性小鼠，每周注射3次共5周
<p>表7(續(xù))
賦形劑生理鹽水和碳酸氫鹽按1∶20稀釋的丙烯碳酸酯Cremophore(40/60)。Ⅷ．對(duì)特異性免疫活性的抑制作用實(shí)施例38如在Lavy,R，等人J.Immunol 154:5039-5048,1955，中所述方法制備能夠特異性溶解FL-4細(xì)胞的鼠腹膜滲出細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞(PEL)，并進(jìn)行測(cè)定。將EL-4細(xì)胞分為如下各組僅同PEL共同溫育的細(xì)胞，先同AG1714(20μM)共同溫育，然后同PEL共同溫育的細(xì)胞，以及先同AG1714(50μM)共同溫育，然后同PEL共同溫育的細(xì)胞。應(yīng)用特異性51Cr釋放檢測(cè)法，測(cè)定對(duì)靶細(xì)胞EL-4的細(xì)胞溶解作用。
如圖30所示，加入AG1714降低了PEL對(duì)靶細(xì)胞EL-4的特異性細(xì)胞毒活性。AG1714的這種抑制作用是劑量依賴性的。
上述結(jié)果表明，tyrphostin化合物對(duì)降低免疫介導(dǎo)的移植排異作用可能是有用的，還可能用于自身免疫性疾病以及同細(xì)胞特異性免疫活性有關(guān)的病癥(例如在AIDS情況下的抗-CD4細(xì)胞)。Ⅸ．tyrphostin化合物的抗炎癥作用個(gè)體炎癥反應(yīng)的主要并發(fā)癥之一是導(dǎo)致敗血性休克，它起因于由細(xì)胞因子如TNF和IL-1介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的過(guò)度作用。如下測(cè)定了tyrphostin化合物對(duì)TNF和IL-1相關(guān)的免疫反應(yīng)的影響。實(shí)施例39A．小鼠成纖維細(xì)胞與TNF-α共同溫育將導(dǎo)致這些細(xì)胞程序性死亡。為了測(cè)定tyrphostin化合物對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞程序性死亡的作用，將A9小鼠成纖維細(xì)胞與放線菌酮(50μg/ml)共溫育2小時(shí)，然后以20μM的最終濃度加入各種tyrphostin化合物，只有AG1801是以5μM的最終濃度加入。與tyrphostin化合物共溫育1小時(shí)之后，以0.2ng/ml的濃度對(duì)細(xì)胞加入TNF-α，并將此細(xì)胞再溫育10小時(shí)。在10小時(shí)之末，用propidium碘化物，通過(guò)FACS對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行分析，并且測(cè)定每組培養(yǎng)細(xì)胞程序性死亡的程度(觀察DNA片段)(參見(jiàn)Novogrodsky A.等人Science,264:1319-1322,1994)。
如下表8中所示，對(duì)與TNF共溫育的小鼠成纖維細(xì)胞加入各種tyrphostin化合物，顯著地減弱了TNF使細(xì)胞程序性死亡的作用。不同的tyrphostin化合物減弱TNF使細(xì)胞程序性死亡的作用的程度稍微不同。
表8tyrphostin化合物對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的小鼠成纖維細(xì)胞(A-9)程序性死亡的預(yù)防作用
B．如表9所示，對(duì)上述培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞周期分析表明，以TNF-α處理細(xì)胞，誘發(fā)了G1期停滯。tyrphostin化合物減弱由TNF引起的程序性死亡作用與它們能夠防止培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生G1期停滯有直接關(guān)系。
表9AG1714對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的小鼠成纖維細(xì)胞(A-9)G0/G1期停滯和程序性死亡的預(yù)防作用
實(shí)施例40如上面實(shí)施例39所述，用A-9細(xì)胞以體外試驗(yàn)測(cè)定了tyrphostin化合物對(duì)TNF誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性的作用。此外，還以LPS(它誘導(dǎo)體內(nèi)TNF毒性)注射小鼠，測(cè)定了tyrphostin化合物對(duì)TNF介導(dǎo)的體內(nèi)細(xì)胞毒性的作用，對(duì)CD1小鼠以1.3mg/只的劑量腹膜內(nèi)注射大腸桿菌LPS。除了對(duì)照小鼠僅以賦形劑注射之外，其余的小鼠在注射LPS之前2小時(shí)，分別腹膜內(nèi)注射各種tyrphostin化合物(20mg/kg)。如表10A所示，與上面實(shí)施例39中顯示的結(jié)果相一致，對(duì)同TNF共溫育的細(xì)胞加入tyrphostin化合物，顯著地減弱了TNF的毒性作用。如表10B所示，絕大多數(shù)tyrphostin化合物顯示出對(duì)LPS誘導(dǎo)的體內(nèi)毒性有顯著的預(yù)防作用，同它們的體外活性相關(guān)聯(lián)。
表10tyrphostin化合物對(duì)TNF誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性的作用(體外試驗(yàn))，以及對(duì)LPS誘導(dǎo)的致死性毒性的作用(體內(nèi)試驗(yàn))A
B
實(shí)施例41IL-1是體內(nèi)敗血性休克的主要介導(dǎo)劑之一。為了測(cè)定AG1714對(duì)于從與LPS共同溫育的細(xì)胞產(chǎn)生IL-1的抑制活性，將人外周血單核細(xì)胞(PBM)以2×106個(gè)細(xì)胞/ml的濃度分為如下幾組
?。?xì)胞僅在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，ⅱ．細(xì)胞在加入AG1714(20μM)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，ⅲ．細(xì)胞在加入LPS(10mg/ml)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，ⅳ．細(xì)胞在加有LPS(10mg/ml)和AG1714(20μM)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將這些細(xì)胞溫育24小時(shí)，用Genzyme ELISA試劑盒測(cè)定IL-1β的量。
如表Ⅱ所示，它顯示了如上所述進(jìn)行的2組實(shí)驗(yàn)，對(duì)與LPS共同溫育的細(xì)胞加入AG1714，顯著地減少了細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β的量。
表11AG1714抑制人外周血單核細(xì)胞中LPS誘導(dǎo)的IL-1β產(chǎn)生
上面的結(jié)果表明，tyrphostin化合物可用于減少在敗血性休克中IL-1介導(dǎo)的不希望有的作用。
上面3個(gè)實(shí)施例的結(jié)果表明，tyrphostin化合物可用于減少或防止在炎癥反應(yīng)的過(guò)程中形成敗血性休克。tyrphostin化合物還可以用作抗炎癥藥物，以及用于對(duì)抗如在自身免疫反應(yīng)中發(fā)生的，由各種細(xì)胞因子(例如TNF和IL-1)介導(dǎo)的致病作用。
權(quán)利要求
1．用于對(duì)抗對(duì)細(xì)胞或組織損害的藥物組合物，它含有效量的如下通式Ⅰ的化合物，以及可藥用載體，
其中-Ar是如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)，
或
-n是0，或者當(dāng)Ar是上面結(jié)構(gòu)式(ⅰ)時(shí)，則n也可以是1，R是CN,-C(S)NH2,-C(O)NHR3，或者當(dāng)R1是4-NO2，以及R2是H或3-OH時(shí)，則R也可以是如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)，
或
在此R3是H，苯基，苯基(低級(jí)烷基)或吡啶甲基；-R1和R2各自獨(dú)立地是H,OH,NO2，或者R是CN時(shí)，也可以是CH3,F，或CF3，條件是R1和R2不同時(shí)為H。
2．權(quán)利要求1的藥物組合物，包含結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物，其中R是CN,-C(S)NH2,-C(O)NHCH2C6H5，或如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)，
并且n是0,R1是4-NO2,R2是H。
3．權(quán)利要求1或2的藥物組合物，是用于對(duì)抗由細(xì)胞毒性藥物引起的損害。
4．權(quán)利要求3的藥物組合物，是用于對(duì)抗由抗腫瘤藥物引起的損害。
5．權(quán)利要求3或4的藥物組合物，包含與細(xì)胞毒性藥物組合的有效量的權(quán)利要求1中的結(jié)構(gòu)式Ⅰ化合物。
6．權(quán)利要求3-5的任一藥物組合物，其中的藥物選自順鉑，阿霉素，環(huán)磷酰胺，絲裂霉素-C和5-氟尿嘧啶。
7．權(quán)利要求1-6的任一藥物組合物，是用于對(duì)抗骨髓毒性和淋巴毒性。
8．上述權(quán)利要求的任一藥物組合物，是適合于靜脈內(nèi)給藥的劑型。
9．上述權(quán)利要求的任一藥物組合物，是適合于口服給藥的劑型。
10．權(quán)利要求1或2的藥物組合物，可用于體外保存細(xì)胞，組織或器官。
11．權(quán)利要求1或2的藥物組合物，可用于對(duì)抗由免疫介導(dǎo)或炎癥反應(yīng)引起的損傷。
12．權(quán)利要求1-10的任一藥物組合物，是用于對(duì)抗有害的程序性死亡。
13．一種用于治療個(gè)體，對(duì)抗對(duì)細(xì)胞，組織或器官損害的方法，該方法包括給予此個(gè)體有效量的如下通式1的化合物，以及可藥用載體，
其中-Ar是如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)，
或
-n是0，或者當(dāng)Ar是上面結(jié)構(gòu)式(ⅰ)時(shí)，則n也可以是1，R是CN,-C(S)NH2,-C(O)NHR3，或者當(dāng)R1是4-NO2，以及R2是H或3-OH時(shí)，則R也可以是如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)，
或
在此R3是H，苯基，苯基(低級(jí)烷基)或吡啶甲基；-R1和R2各自獨(dú)立地是H,OH,NO2，或者R是CN時(shí)，也可以是CH3,F，或CF3，條件是R1和R2不同時(shí)是H。
14．權(quán)利要求13的方法，其中結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物中，R是CN,-C(S)NH2,-C(O)NHCH2C6H5，或如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)，
并且n是0,R1是4-NO2,R2是H。
15．權(quán)利要求13或14的方法，其中有害的藥物是細(xì)胞毒性藥物。
16．權(quán)利要求15的方法，其中的細(xì)胞毒性藥物是抗腫瘤藥物。
17．權(quán)利要求16的方法，其中的細(xì)胞毒性藥物選自順鉑，阿霉素，環(huán)磷酰胺，絲裂霉素-C和5-氟尿嘧啶。
18．權(quán)利要求13-17的任一方法，是用于對(duì)抗骨髓毒性和淋巴毒性。
19．權(quán)利要求18的方法，可用于對(duì)抗放射治療中不希望的有害作用。
20．權(quán)利要求13-19的任一方法，其中結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物是與細(xì)胞毒性藥物或放射治療組合給藥。
21．權(quán)利要求1-20的任一方法，其中是在給予細(xì)胞毒性藥物或放射治療之前給予結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物。
22．權(quán)利要求13-21的任一方法，其中結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物是靜脈內(nèi)給藥。
23．權(quán)利要求13-21的任一方法，其中結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物是口服給藥。
24．權(quán)利要求13或14的方法，可用于對(duì)抗由免疫介導(dǎo)或炎癥反應(yīng)引起的損傷。
25．一種用于在體外保存器官，組織或細(xì)胞的方法，包括使在體外的器官、組織或細(xì)胞，與通式Ⅰ的化合物以及可藥用載體接觸，
其中-Ar是如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)，
或
-n是0，或者當(dāng)Ar是上面結(jié)構(gòu)式(ⅰ)時(shí)，則n也可以是1，R是CN,-C(S)NH2,-C(O)NHR3，或者當(dāng)R1是4-NO2，以及R2是H或3-OH時(shí)，則R也可以是如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)，
或
在此R3是H，苯基，苯基(低級(jí)烷基)或吡啶甲基；-R1和R2各自獨(dú)立地是H,OH,NO2，或者R是CN時(shí)，也可以是CH3,F，或CF3，只要R1和R2不同時(shí)是H。
26．通式Ⅰ′的化合物，
其中-Ar是如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)，
或
-n是0，或者當(dāng)Ar是上面結(jié)構(gòu)式(ⅰ)時(shí)，則n也可以是1，-R是CN,-C(S)NH2,-C(O)NHR3，或者當(dāng)R1是4-NO2,R2是H時(shí)，則R也可以是如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)，
或
R1和R2各自獨(dú)立地是H,OH,NO2，或者當(dāng)R是CN時(shí)，也可以是CH3,F或CF3，并且R3是H，苯基，苯基(低級(jí)烷基)或吡啶甲基；但條件是a)當(dāng)R是CN和n是0時(shí)，則(aa)如果R1和R2之一是H或OH，則另一個(gè)不能是NO2，(ab)如果R1和R2之一是H或F，則另一個(gè)不能是H或F，并且b)當(dāng)R1是4-NO2,R2是H，以及n是0時(shí)，則R不能是-C(O)NH2，或-C(S)NH2。
27．權(quán)利要求26的化合物，其中R是CN,-C(S)NH2,-C(O)NHCH2C6H5或如下結(jié)構(gòu)式的基團(tuán)，
并且n是0,R1是4-NO2,R2是H和n是0。
全文摘要
用于對(duì)抗不希望有的細(xì)胞,組織或器官毒性作用的化合物,具有式(Ⅰ)的結(jié)構(gòu),其中:Ar是結(jié)構(gòu)式(i)或(ii)的基團(tuán),n是0,或者當(dāng)Ar是上面結(jié)構(gòu)式(i),則n也可以是1,R是CN,－C(S)NH
文檔編號(hào)C07D231/16GK1232392SQ97198596
公開(kāi)日1999年10月20日 申請(qǐng)日期1997年8月14日 優(yōu)先權(quán)日1996年8月14日
發(fā)明者A·諾沃格洛德斯凱, A·勒維茨基, A·加茲特 申請(qǐng)人:摩爾研究應(yīng)用有限公司, 耶路撒冷希伯來(lái)大學(xué)伊森姆研究發(fā)展公司