專利名稱：口蹄疫病毒的免疫原性肽的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及具有至少8個氨基酸的免疫原性肽，它位于口蹄疫病毒(FMDV)的非結構區(qū)。
口蹄疫(FMD)是一種急性傳染病，它發(fā)生于最重要的產牛奶和肉的動物中-牛、豬、山羊和綿羊。
該病的病原是細小RNA病毒，口蹄疫病毒(FMDV)。它是RNA病毒，具有為正鏈極性的長8.5kb的單鏈RNA，可以各種具有大量亞型的血清型存在。從一種血清型的感染中康復的動物仍舊對另一血清型的感染非常易感。
通過呼吸道感染后，病毒的初級復制是在咽部。然后感染鄰近的淋巴結并且FMDV進入血流。通過血流，病毒擴散到各種器官和組織中。感染后2-14天出現(xiàn)臨床癥狀，這依賴于病毒量，病毒株和感染途徑。在不太嚴重的病例中，14天后感染被消除。在較年長動物中的FMDV感染很少有致死的結局，但是對它們的生殖力，生長和健康有很大的影響。再者，雖然有高的抗體滴度，但是有可能健康動物能分泌FMDV并因此感染其它動物。暴露于感染病毒的接種動物也是可疑的，這些動物也可以持久保持被感染的狀態(tài)，但不表現(xiàn)出臨床癥狀。這些動物，盡管攜帶FMDV但被承認為健康的動物，被稱為“攜帶者”并在FMDV的進一步傳播中是嚴重的危險者。直到感染后1個月從豬中分離病毒才是可能的(Van Bekkum；1973)，而在牛中甚至數(shù)年之后才是可能的(Hedger,1970)。
病毒顆粒的囊膜包括每種60拷貝的包繞單鏈RNA的4種結構蛋白1A-1D(Rueckert,1990)。衣殼未被包被(coated)并具有二十面體的外形。蛋白質1B-1D部分位于表面，而蛋白質1A(P1A)則位于衣殼內部。
由基因組N末端編碼的蛋白質1A-1D是結構蛋白并形成二十面體衣殼。非結構蛋白質2A-2C和3A是C末端編碼的并且負責病毒復制。
由于病毒易于傳播，具有感染許多種動物的能力以及多種抗原形式使得難以控制FMD。
一直到1992年在德國用抗亞型O,A和C的三價滅活疫苗來進行抗FMD的疫苗接種。這些疫苗包括滅活的病毒，然而它們是熱不穩(wěn)定的并且不能保證任何長期的免疫力(Terpstra等，1989)。來自疫苗的危險首先在于滅活疫苗中存在未被滅活的病毒以及病毒從每個疫苗接種部位釋放出來(Beck等，1987)。
在歐洲聯(lián)盟(European Union)(EU)中，貿易管制適用于能檢測出抗FMDV抗體的動物。它適用于可能幸存于感染的動物，以及用常規(guī)滅活疫苗免疫的動物。
為此，從那時起進行了更多的努力以開發(fā)抗FMDV的更好疫苗。獲得具有更長半衰期，更高活性和更大安全性的疫苗是所期望的。另一優(yōu)勢將是那些使區(qū)分疫苗接種的和感染的動物成為可能的疫苗和方法。
在具有特異表位的疫苗的開發(fā)中，有三件事尤其必須納入考慮1．病原蛋白的多形性尤其發(fā)生于參與免疫反應的蛋白質部分。RNA病毒(“準種”)尤其包含具有極高度序列可變性的區(qū)域。
2．尤其在T細胞免疫反應的情況下，宿主的每個個體之間存在高度可變性。因此，T輔助細胞只有與特異的MHC-Ⅱ分子才能識別特異的抗原肽(Schwartz,1985)。每個個體表達它自己的一套MHC分子，這些分子由具有高度等位基因變異(MHC多形性)的基因編碼。因此T細胞對肽的反應可具有個體差異。
3．T細胞展現(xiàn)出高度異質性的效應細胞機制，然而從總體上又都與MHC限制有關(Mosmann等，1989)。對于牛FMDV來說，迄今為止只有可能證實MHC-Ⅱ限制的T輔助細胞功能(Glass等，1989,Glass等，1990；Glass等，1992；Collen等，1991)。
為了制備肽疫苗，必須首先知道病原體的免疫原區(qū)，即病原體中被自然宿主的免疫系統(tǒng)，即牛和豬的B或T淋巴細胞，識別的部位。對此迄今為止仍不了解。
現(xiàn)在已經發(fā)現(xiàn)根據(jù)具有至少8個氨基酸的序列的肽可以制備FMDV疫苗，該序列對應于FMDV非結構蛋白區(qū)的部分序列，它是通過用FMDV特異性抗體的免疫反應性或用FMDV特異性T淋巴細胞的免疫反應性而篩選出來的。
優(yōu)選這樣的肽包括8-35個氨基酸，尤其優(yōu)選8-25個氨基酸，特別特別優(yōu)選8-15個氨基酸。
為了制備豬的FMDV疫苗，這樣的肽必須對應于FMDV基因組中編碼蛋白質L/L′,1A,1B,1C,2B,2C,3A,3B,3C和3D的區(qū)域部分。
為了制備牛的FMDV疫苗，這樣的肽必須對應于FMDV基因組中編碼1D,2B,2C,3A和3B的區(qū)域部分。
因此尤其優(yōu)選對應于FMDV基因組中編碼2A,2B,2C,3A,3B,3C和3D的區(qū)域部分的肽。
序列表中提及的肽可在此專門提及。
尤其強調序列表中提及的具有以下ID號的肽6,8,10,12,15,16,17,18,19,20,21,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,34,35,36,37,38,39,43,44,45,48。
另外尤其強調具有ID號12,13,14,22,33,37,40,41,42,45,46,47的肽。
特別特別強調具有ID號12,37,40,42,45,47,48的肽。
包含這些肽的制品可用于抗口蹄疫病毒的保護性免疫接種，也可用于檢測FMDV的感染，即用于診斷。
正如以上所述，根據(jù)本發(fā)明的肽在亞區(qū)(subregions)上對應于FMDV的非結構蛋白。這些區(qū)域的測定包括用FMD特異性抗體的免疫反應性或用FMDV特異性T淋巴細胞的免疫反應性的方法。
在該上下文中免疫反應性被理解為與FMDV特異性抗體的反應性。在這種情況下反應的檢測方法包括通過包括顏色反應的酶免疫試驗來測定FMDV特異性抗體與固相結合的肽之間的相互作用。測定反應性的進一步可能性在于測定所述肽競爭FMDV特異性抗體與重組病毒蛋白的結合。
免疫反應性也理解為肽與取自FMDV感染的/疫苗接種的動物的淋巴細胞的反應性。與所述肽共育之后，這些淋巴細胞能夠展現(xiàn)出特異性反應a)增強肽濃度依賴的生長(肽抗原特異性增殖)；b)肽特異性地增加特定物質(細胞因子，如白細胞介素2)的產量；c)也能分化成病毒特異性細胞毒性T淋巴細胞，它能與主要組織相容性復合體(MHC)編碼的分子聯(lián)合識別所述的肽，并能溶解細胞表面攜帶所述肽的細胞。
FMD特異性抗體是動物疫苗接種后或用FMDV感染后在動物體內形成的、而且能識別FMDV某些結構并能與這些結構結合的抗體。在病毒特異性酶免疫試驗的幫助下可離體和在體外證實這些抗體。在這種情況下FMDV特異性抗體可以識別整個病毒，某些病毒蛋白質或者病毒特異序列所編碼的肽形式的蛋白質片斷。
FMD特異性T淋巴細胞可通過分離FMDV感染或疫苗接種的動物血中的單核細胞來獲得。
以下，描述了獲取根據(jù)本發(fā)明的肽的可能方法的一般研究。這些方法僅僅是為了舉例說明本發(fā)明，但絕不是限制本發(fā)明。
為了從豬血中獲取單核細胞(外周血單核細胞，PBMC)，肝素化的血(每ml血0.1mg肝素)用PBS 1∶2稀釋。室溫下將每30ml稀釋血加到15ml Ficoll-Hypaque之上(在50ml管中以1.077g/ml加入)。于1,100g離心25分鐘后，可從血清和Ficoll之間的中間相仔細吸出單核淋巴細胞。用PBS沖洗以該方法分離的細胞并離心沉淀1次(每次10分鐘750g)，然后每次用20ml淋巴細胞培養(yǎng)基/10％FCS在50ml管中沖洗并離心沉淀兩次。
通過尼龍毛柱濃縮T淋巴細胞該T淋巴細胞的濃縮方法是根據(jù)B淋巴細胞和一些單核細胞對尼龍毛的物理吸附。為此，尼龍毛在蒸餾水中煮沸3次，疏松地填塞進10ml的注射器中至5 ml刻度處并高壓消毒(120℃，20分鐘)。使用前，柱子用20ml PBS沖洗2次。為調節(jié)流速，裝上直徑0.8mm的注射針。在隨后用10ml淋巴細胞培養(yǎng)基進行沖洗時，洗液流到柱的起始端，然后用橡皮塞密封注射針。每個柱子至多加入每ml培養(yǎng)基1×108PBMC；為此，暫時拔下橡皮塞以使含細胞的液體流入。然后小心裝上注射器塞以防止柱子流干并且避免隨后在孵箱中孵育45分鐘的過程中發(fā)生污染(37℃,5％CO2)。在裝著注射針的情況下通過用20ml淋巴細胞培養(yǎng)基沖洗柱子來洗脫T淋巴細胞或NW-PBMC(尼龍毛純化的PBMC)。
根據(jù)以下參考文獻中所述的方法以已知的方式來進行免疫反應性的測定SAALMULLER,A.,JONJIC,S.,BUHRING,H.-J.,REDDEHASE M.J. & KOSZINOWSKI,U.H.(1987).《與豬淋巴細胞反應的單克隆抗體。Ⅱ.測定靜止T細胞激活后被下調的抗原》(Monoclonal antibodiesreactive with swine lymphocytes.Ⅱ.Detection of an antigen on resting Tcells down-regulated after activation.)J.Immunol.138,1852-1857。
SAALMULLER,A.,& MAURER,S.(1994)《表達主要組織相容性Ⅱ類抗原的豬T淋巴細胞在混合淋巴細胞培養(yǎng)中是強抗原遞呈細胞》(Major histocompatibility antigen class Ⅱ expressing porcine Tlymphocytes are potent antigen-presenting cells in mixed leucocyte culture.)Immunobiol.,190,23-34。
SAALMULLER,A.,HIRT,W.,MAURER,S.& WEILAND,E.(1994).《根據(jù)CD5抗原的表達區(qū)分豬CD8+T淋巴細胞兩亞類》(Discrimination between two subsets of porcine CD8+cytolytic Tlymphocytes by the expression of CD5 antigen.)Immunology,81.,578-583。
PAULY,T.,ELBERS,K.,KONIG,M.,LENGSFELD,T.,SAALMULLER,A.&THIEL,H.-J.(1995)《典型豬熱病毒特異的細胞毒性T淋巴細胞和T細胞表位的鑒定》(Classical Swine Fever Virus-specific cytolytic T lymphocytes and identification of a T cell epitope.)J.Gen.Virol.,76,3039-3049。
SUMMERFIELD,A.,RZIHA,H.-J.& SAALMULLER,A.(1996).《豬CD4+CD8+胸腺外T淋巴細胞的功能特征》(Functional characterizationof porcine CD4+CD8+extrathymic T lymphocytes.Cell)Immunol.,168,291-296。
PAULY,T.,WEILAND,E.,HIRT,W.,DREYER-BUX,C.,MAURER,S,SUMMERFIELD,A.& SAALMULLER,A.(1996).《MHC限制性和非MHC限制性豬T淋巴細胞之間的差異》(Differentiation between MHC-restricted and non-MHC-restricted porcine cytolytic T lymphocytes).Immunology,88,238-246。
例如，為了達到該目的以下描述了病毒抗原特異性增殖的測定(增殖試驗)以每孔(200μl/孔)1×105個細胞的量將PBMC或從中分離的細胞群接種至圓底微量培養(yǎng)板中，在MEMα培養(yǎng)基中達1×106/ml的細胞濃度。通過加入病毒或來源于口蹄疫病毒(FMDV)基因組編碼區(qū)的肽來進行刺激(特異性激活)。加入的病毒量從MOI(感染復數(shù))表示，其量與感染性顆粒的數(shù)目相對應。然后將細胞培養(yǎng)于孵箱中。5天后，每孔加入37kBq(1μCi)3H-胸苷，它溶于20μl培養(yǎng)基中，然后細胞再培養(yǎng)18小時。其后冰凍整個微量培養(yǎng)板來終止3H-胸苷的攝取并將細胞裂解。在細胞收集器的幫助下，將微量培養(yǎng)板中的液體吸到濾紙墊上。在微波爐中將其干燥(160W，大約5分鐘)。然后在微波爐中將固體閃爍片融化到濾紙墊上(160W，大約2分鐘)。冷卻閃爍物后，濾紙墊密封入透明樣品袋中并按每分鐘的衰變在閃爍計數(shù)儀上測定每孔培養(yǎng)物的放射活性(每分鐘計數(shù)，cpm)。
測定病毒抗原特異性激活的T淋巴細胞培養(yǎng)上清中的IL-2含量(IL-2試驗)為了半定量測定豬淋巴細胞培養(yǎng)物中的白細胞介素2(IL-2)含量，采用IL-2依賴的鼠源HT-2細胞系。該細胞系僅在有IL-2的情況下才能生長，IL-2可為鼠源，人源或豬源的。因此HT-2細胞系的增殖是細胞培養(yǎng)上清中IL-2含量的指標，而IL-2含量與每個細胞群的IL-2分泌有關。
當PBMC或從中分離的細胞群激活5天后，從微量培養(yǎng)板的每孔中取出100μl無細胞的上清。將三個相同樣品混合并在圓底微量培養(yǎng)板中以log2步驟進行滴度測定(上清1∶1,1∶2,1∶4和1∶8稀釋于培養(yǎng)基中；每種情況下100μl/孔)。最后每孔加入100μl含4×103HT-2細胞的細胞懸液以使最終體積是200μl/孔。為測定HT-2細胞的增殖，每種情況均進行三復孔培養(yǎng)。作為參照物，另采用具有已知國際單位(IU)數(shù)的人重組IL-2并經歷幾個步驟進行滴度測定。HT-2細胞的生長通過測定DNA的合成來定量。為此，孵育24小時后加入3H-胸苷(37kBq/微孔)并在孵箱中將細胞再孵育18小時。該方法的其它步驟與測定淋巴細胞增殖的方法相同。
測定病毒抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞的細胞毒活性已感染動物的PBMC或從中分離的細胞群(2×105個細胞/孔)與FMDV感染的(1-10 MOI)自體腎上皮細胞共培養(yǎng)至少1周來制備病毒抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞。所制備的細胞毒T淋巴細胞(CTL)的病毒抗原特異性活性通過51鉻釋放試驗來測定。在該試驗中，CTL與51鉻標記的FMDV感染的自體腎上皮細胞或載肽的腎上皮細胞共育4-8小時，然后在每種細胞培養(yǎng)物上清中測定由CTL活性所釋放的鉻。另外包括非感染的腎上皮細胞作為該實驗的對照。CTL的特異活性通過下列公式進行計算％特異釋放量=X-自發(fā)釋放量/總攝入量-自發(fā)釋放量。為進一步分析CTL表位，也采用重組牛痘FMD病毒，攜帶FMDV亞序列并在感染時進行表達的牛痘病毒。
肽以已知的方法進行制備。例如，多肽合成在改良Tecan機器上進行。
在該方法中，稱重每份ADPV樹脂30mg(負載0.4mmol/g)并裝入反應管中以制備6肽。為了微量合成其它的肽，采用Rink酰胺MBHA樹脂每份5mg(0.47mmol/g)。
然后將要制備的肽序列輸入合成儀的控制計算機中并稱重必須的Fmoc氨基酸裝入貯備管中。氨基酸溶解于DMF中的0.5M HOBt中以達0.5M的濃度。難溶的氨基酸在超聲浴中處理5-10分鐘直至清亮溶液出現(xiàn)。為激活所必需的2M DIC溶液用DCM/DMF(8∶2)進行制備。為除去Fmoc保護基團，哌啶在DMF中稀釋至40％并在合成儀中用DIC溶液供給。肽的合成通過簡單的偶聯(lián)來進行并根據(jù)以下合成方案來操作1．100μl 40％哌啶清除Fmoc保護基團15分鐘。
2．六次沖洗循環(huán)，每次150μl DMF 0.3分鐘。
3．30ml偶聯(lián)劑(DMF中的2M DIC)加入到反應管中。
4．加入60μl激活的Fmoc-氨基酸(溶于0.5M HOBt/DMF的Fmoc-AA)。
5．允許該溶液放置60分鐘以偶聯(lián)氨基酸。
6．三次沖洗循環(huán)，每次150ml DMF,0.6分鐘。
合成結束后，樹脂用乙醚200μl沖洗2次并干燥。
為了除去微量合成中所制備的肽，采用修飾劑K(0.75g結晶酚，0.25ml二硫醇，0.5ml苯硫基甲烷。用TFA中的1苯硫基甲烷/甲苯硫酚(1∶1)已經移去所有的其它肽。在這種情況下，從合成塊上取下合成末端并用液體石蠟密封出口孔。該情況下濃縮的TFA緩慢溶解出口孔中的石蠟并且在肽已從樹脂上移去時將裂解液滴入放在合成末端下面的pp管中。在pp管中可進一步除去側鏈保護基團。每末端加入150μl清除劑/TFA溶液并將混合物室溫下孵育3小時。然后大約1ml乙醚/庚烷(1∶1)用具有8刻度(channel)的注射器加入到pp管中并將溫度調節(jié)到-20℃孵育2小時。所形成的沉淀物離心沉淀(2,000rpm,5分鐘)，傾析去乙醚并利用超聲用二乙醚(1-2ml)重新懸浮沉淀兩次并再次離心。最后，沉淀溶于1-1.5ml特丁醇/水(4∶1)中并凍干。
分離血清并測定特異抗體的含量獲得牛和豬血清未稀釋的血室溫下孵育直至它凝固并且纖維蛋白已與血細胞沉積在一起。上清中的血清分裝并貯存在-20℃。標準肽ELISA按如下敘述進標準肽ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)以測定感染的或疫苗接種的動物血清中的病毒特異性抗體。
ELISA板(Nunc-Immuno Plate Maxisorb)每孔用0.5,1和3μg濃度的肽包被。肽首先以10mg/ml的濃度溶于DMSO中。蒸餾水中1mg/ml的貯備液由此進行制備。稀釋于蒸餾水中的100μl肽貯備液于37℃過夜干燥。此后，培養(yǎng)板于37℃用PBS中的3％牛血清白蛋白(BSA)預孵育2小時以防止以下孵育步驟中的非特異性結合。每步孵育后用PBS-Tween沖洗培養(yǎng)板3次，并在加入底物之前沖洗5次。所用的血清和結合物均稀釋于PBS的0.5％BSA中。
感染的或疫苗接種的?；蜇i的血清以1∶100的濃度進行使用。每孔用每份稀釋血清80μl并于37℃孵育1小時。沖洗后，羊抗牛(稀釋1∶2,500)或羊抗豬(稀釋1∶5,000)抗血清加入到相應的辣根過氧化物酶偶聯(lián)的結合物中。然后于37℃再孵育1小時。沖洗幾次后，每孔加入60μl底物以檢測陽性樣品。所用的底物是溶于檸檬酸鹽緩沖液中的鄰苯二胺(OPD)。辣根過氧化物酶與底物的顏色反應于室溫下暗處進行。大約20分鐘后如果所用的陽性對照的顯色足夠明顯則用2M硫酸終止反應。在ELISA測定儀上于492nm處測定顏色深度。生物素-鏈親和素ELISA因為豬血清表現(xiàn)出特別高的非特異性反應，所以試圖用改良ELISA來增加測定系統(tǒng)的敏感性。為此。使用生物素化的肽。
這些生物素化的肽以相同濃度被用作標準肽ELISA中的肽。然而，它們不是用蒸餾水，而是用PBS/0.5％BSA稀釋。該液每孔100μl加入到鏈親和素包被的微量培養(yǎng)板中，并且加入相應于標準肽ELISA的濃度的50μl血清。
室溫孵育1小時后，用沖洗緩沖液沖洗3次并每孔加入150μl辣根過氧化物酶標記的羊抗?；蜓蚩关i抗血清(稀釋見標準肽ELISA)，培養(yǎng)板室溫孵育1小時。再沖洗3次并且每孔加入150μl連氮-雙-3-乙基-苯并噻唑啉磺酸(ABTS)底物。在每一種情況下15分鐘和1小時后在ELISA測定儀上在405nm處測定消光情況(光密度，OD)。競爭ELISA一直進行ELISAs直至現(xiàn)在標準肽和生物素-鏈親和素ELISA被用作標尺來檢測線性B細胞表位。然而，所涉及的免疫球蛋白分子通常不能識別任何線性表位，但能識別構象表位。這種表位在某些條件下能用競爭ELISA進行檢測。為此，ELISA板(Nunc-Immuno PlateMaxisotb)首先用100μl適當濃度的蛋白質溶液過夜包被，在標準肽ELISA中它仍表現(xiàn)出陽性反應。然后根據(jù)標準肽ELISA將培養(yǎng)板與PBS/3％BSA預孵育2小時。在加入血清之前(濃度1∶1,000)，該板與100μg/ml要研究的肽于微量培養(yǎng)板中預孵育至少1小時。按照與標準肽ELISA相應的步驟進行。結果鑒定線性B細胞表位為了鑒定牛和豬中FMDV的線性B細胞表位，于是研究14聚體和15聚體肽，它們是根據(jù)FMDV基因組的開放閱讀框架來合成的，以觀察它們是否能被感染的或疫苗接種的動物血清中的抗體識別。研究合成的FMDV肽以鑒定豬的線性B細胞表位具有序列表中ID號6,8,10,12,15,16,17,18,19,20,21,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,34,35,36,37,38,39,43,44,45的肽被鑒定為豬的B細胞表位。鑒定牛FMDV的線性B細胞表位具有序列表中ID號12,13,14,22,33,37,40,41,42,45,46,47,48的肽被鑒定為牛的線性B細胞表位。
從FMDV的3D蛋白中鑒定B細胞構象表位用重組3D蛋白進行競爭ELISA時，鑒定了8條能使FMDV特異抗體結合到血清來源的3D蛋白上的肽。它們是具有序列表中ID號1,2,3,4,5,7,9,11的肽。
線性B細胞表位用于區(qū)分FMDV感染的和疫苗接種的動物在該試驗中，研究了用各種FMDV血清型感染的和疫苗接種的動物血清。所用的對照是未感染動物的血清和牛白血病病毒(BLV)感染的動物血清。
可見來自FMDV 2B區(qū)的ID號37的肽和來自FMDV 3B區(qū)的ID號48的肽能與許多FMDV感染的或疫苗接種的動物血清發(fā)生陽性反應。而它與BLV感染的動物血清或陰性血清未表現(xiàn)出反應。
更有可能確定FMDV株O1K感染的動物血清與其它試驗組相比，能與最多的肽發(fā)生反應。O型感染的和疫苗接種的動物之間的區(qū)別也是可檢測的。與尤其與ID號37,48的肽和對照肽G1-32發(fā)生反應的疫苗接種的動物相比較，感染動物的血清另表現(xiàn)出與ID號12,13,40,42,45,47,48的肽有獨特的反應性。參考文獻Beck E. and strohmaier K.(1987)根據(jù)核苷酸序列所測定的歐洲口蹄疫病毒株的亞型(Subtyping of European foot-and-mouth disease virusstrains by nucleotide sequence determination)J.Virol.61:1621-1629。
Collen T.,DiMarchi R. and Doel T.R.(1991)口蹄疫病毒中VP1的T細胞表位對接種的牛來說是免疫顯性的(A T cell epitope in VP1 offoot-and-mouth disease virus is immunodominant for vaccinated cattle)J.Immunol 146:749-755。
Galss E. J.,and Spooner R.L.(1989)在抗原特異的牛T細胞反應中需要MHC Ⅱ類分子陽性的輔助細胞(Requirement for MHC class Ⅱpositive accessory cells in an antigen specific bovine T cell response)。Res. Vet.Sci.46:196-201。
Glass E.J.,Oliver R.A.and Spooner R.L.(1990)在牛中T細胞對卵白蛋白反應的變異Ir基因調控的證據(jù)(Variation in T cell responsesto ovalbumin in cattle:evidence for Ir gene control)Animal Genetics 21:15-28。
Glass E.J.,Oliver R.A.,Collen T.,Doel T.R.,DiMarchi R.,andSpooner R.L.(1992)MHC Ⅱ類分子限制牛T細胞對FMDV肽的識別(MHC class Ⅱ restricted recognition of FMDV peptides by bovine Tcells)Immunology 74:594-9。
Hedger R.S.(1970)在口蹄疫爆發(fā)時對攜帶者狀態(tài)和有關的抗體滴度的觀察(Observations on the carrier state and related antibody titresduring an outbreak of foot-and-mouth disease)。Journal of Hygiene 68:53-60。
Rueckert R.R.(1990)細小RNA病毒科和其復制(Picornaviridaeand their replication)In:Virology Sec.Ed.507-548。(Fields B.N.等)Raven Perss,New York。
Schwartz R.H.(1985)與主要組織相容性復合物的基因產物有關的抗原的T淋巴細胞識別(T-lymphocyte recognition of antigen inassociation with gene products of the major histocompatibility complex)。Annu.Rev Immunol 3:237-61。
Terpstra C.and van Maanen C.(1989)連續(xù)3年疫苗接種后1-3年用同源和異源FMD病毒株進行鼻腔內免疫攻擊后荷蘭牛的保護和病毒傳播(Protection and virus transmission of Dutch cattle followingintranasal challenge with homologous and heterologous FMD virus strains1-3 years after three consecutive annual vaccinations.Report of the 11thInternational Symposium of the world association of VeterinaryMicrobiologists,Immunologists and Specialists in Infectious Diseases,Perugia-Mantova,Italy,2-6 October,p.154.Esculapio,Bologna.
van Bekkum J.G.(1973)口蹄疫中的攜帶者狀態(tài)(The carrier statein foot-and-mouth disease)In:Pollard M.,ed. Proceedings of the 11thInternational Conference on FMD. New York:Gustav Stern Foundation Inc.,1973:37-44。
序列表(1)一般信息(ⅰ)申請人(A)名稱BAYERAG(B)街道BAYERWERK(C)城市LEVERKUSEN(D)國家德國(F)郵政編碼D-51368(G)電話0214/30 61285(H)傳真0214/30 3482(ⅱ)發(fā)明名稱口蹄疫病毒的免疫原性肽(ⅲ)序列數(shù)目48(ⅳ)計算機可讀形式(A)介質類型軟盤(B)計算機IBM PC兼容(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件Patentln Release#1.0,Version#1.30(EPO)(2)SEQ ID NO:1信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:1:
Glu Arg Val His Val Met Arg Lys Thr Lys Leu Ala Pro Thr Val1 5 10 15(2)SEQ ID NO:2信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:2:Met Arg Lys Thr Lys Leu Ala Pro Thr Val Ala His Gly Val Phe1 5 10 15(2)SEQ ID NO:3信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:3:Leu Ala Pro Thr Val Ala His Gly Val Phe Asn Pro Glu Phe Gly1 5 10 15(2)SEQ ID NO:4信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸
(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:4:
Arg Cys Ala Ala Asp Tyr Ala Ser Arg Leu His Ser Val Leu Gly1 5 10 l5(2)SEQ ID NO:5信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:5:Asn Gly Thr Val Gly Pro Glu Val Glu Ala Ala Leu Lys Leu Met1 5 10 15(2)SEQ ID NO:6信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非
(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:6:
Glu Lys Arg Glu Tyr Lys Phe Val Cys Gln Thr Phe Leu Lys Asp1 5 10 15(2)SEQ ID NO:7信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:7:
Ala Gln Met His Ser Asn Asn Gly Pro Gln Ile Gly Ser Ala Val1 5 10 15(2)SEQ ID NO:8信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:8:
Ile Gly Ser Ala Val Gly Cys Asn Pro Asp Val Asp Trp Gln Arg15 10 15(2)SEQ ID NO:9信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:9:
Val Trp Asp Val Asp Tyr Ser Ala Phe Asp Ala Asn His Cys Ser1 5 10 15(2)SEQ ID NO:10信息(ⅰ)序列特征(A)長度1 5氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:10:
Glu Asn Lys Arg Ile Thr Val Gly Gly Gly Met Pro Ser Gly Cys1 5 10 15(2)SEQ ID NO:11信息(ⅰ)序列特征
(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:11:
His Phe Lys Ser Leu Gly Gln Thr Ile Thr Pro Ala Asp Lys Ser1 5 10 15(2)SEQ ID NO:l2信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:12:
Leu Lys Ala Arg Asp Ile Asn Asp Ile Phe Ala Ile Leu Lys Asn1 5 10 15(2)SEQ ID NO:13信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性
(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:13:
Ser Glu Glu Lys Phe Val Thr Met Thr Asp Leu Val Pro Gly Ile1 5 10 15(2)SEQ ID NO:14信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:14:
Val Thr Met Thr Asp Leu Val Pro Gly Ile Leu Glu Lys Gln Arg1 5 10 15(2)SEQ ID NO:15信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:15:
Thr Gly Phe Ile Pro Pro Met Ala Ser Leu Glu Asp Lys Gly Lys1 5 10 15(2)SEQ ID NO:16信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:16:
Pro Asn Thr Ser Gly Leu Glu Thr Arg Val Val Gln Ala Glu Arg1 5 10 15(2)SEQ ID NO:17信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:17:
Glu Leu Tyr Gln Leu Thr Leu Phe Pro His Gln Phe Ile Asn Pro1 5 10 15(2)SEQ ID NO:18信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:18:
Val Met Val Val Ala Pro Leu Thr Val Asn Thr Glu Gly Ala Pro1 5 10 15(2)SEQ ID NO:19信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:19:
Leu Ala Gly Leu Ala Gln Tyr Tyr Thr Gln Tyr Ser Gly Thr Ile1 5 10 15(2)SEQ ID NO:20信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸
(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:20:
Glu Thr Thr Asn Val Gln Gly Trp Val Cys Leu Phe Gln Ile Thr1 5 10 15(2)SEQ ID NO:21信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:21:
Gln Gly Trp Val Cys Leu Phe Gln Ile Thr His Gly Lys Ala Asp1 5 10 15(2)SEQ ID NO:22信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非
(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:22:
Tyr Asn Arg Asn Ala Val Pro Asn Leu Arg Gly Asp Leu Gln Val1 5 10 15(2)SEQ ID NO:23信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:23:
Glu Ile Lys Ala Leu Phe Leu Ser Arg Thr Thr Gly Lys Mer Glu15 10 15(2)SEQ ID NO:24信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:24:
Cys Trp Leu Asn Ala Ile Leu Gln Leu Phe Arg Tyr Val Glu Glu1 5 10 15(2)SEQ ID NO:25信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:25:
Arg Tyr Val Glu Glu Pro Phe Phe Asp Trp Val Tyr Ser Ser Pro1 5 10 15(2)SEQ ID NO:26信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:26:
Glu Ala Ile Lys Gln Leu Glu Asp Leu Thr Gly Leu Glu Leu His15 10 15(2)SEQ ID NO:27信息(ⅰ)序列特征
(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:27:
Asn Ile Lys His Leu Leu His Thr Gly Ile Gly Thr Ala Ser Arg15 10 15(2)SEQ ID NO:28信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:28:
Ala Ile Asp Asp Glu Asp Phe Tyr Pro Trp Thr Pro Asp Pro Ser15 10 15(2)SEQ ID NO:29信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性
(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:29:
Thr Pro Asp Pro Ser Asp Val Leu Val Phe Val Pro Tyr Asp Gln1 5 10 15(2)SEQ ID NO:30信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:30:
Thr Asp Leu Gln Lys Met Val Met Gly Asn Thr Lys Pro Val Glu1 5 10 15(2)SEQ ID NO:31信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:31:
Met Leu Ser Asp Ala Ala Leu Met Val Leu His Arg Gly Asn Arg1 5 10 15(2)SEQ ID NO:32信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:32:
Leu Leu Lys Met Lys Ala His Ile Asp Pro Glu Pro His His Glu1 5 10 15(2)SEQ ID NO:33信息(ⅰ)序列特征(A)長度15氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:33:
Pro Phe Phe Phe Ser Asp Val Arg Ser Asn Phe Ser Lys Leu Val15 10 15(2)SEQ ID NO:34信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:34:
Ala Pro Val Leu Leu Ala Gly Leu Val Lys Val Ala Ser Ser1 5 10(2)SEQ ID NO:35信息:
(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:35:
Ala Gly Leu Val Lys Val Ala Ser Ser Phe Phe Arg Ser Thr1 5 10(2)SEQ ID NO:36信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸
(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:36:
Val Ala Ser Ser Phe Phe Arg Ser Thr Pro Glu Asp Leu Glu1 5 10(2)SEQ ID NO:37信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:37:
Phe Phe Arg Ser Thr Pro Glu Asp Leu Glu Arg Ala Glu Lys1 5 10(2)SEQ ID NO:38信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非
(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:38:
Ile Ser Ile Pro Ser Gln Lys Ser Val Leu Tyr Phe Leu Ile1 5 10(2)SEQ ID NO:39信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:39:
Lys Arg Gln Lys Met Val Asp Asp Ala Val Asn Glu Tyr Ile1 5 10(2)SEQ ID NO:40信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:40:
Asn Glu Tyr Ile Glu Lys Ala Asn Ile Thr Thr Asp Asp Lys1 5 10(2)SEQ ID NO:41信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:41:
Thr Asp Asp Lys Thr Leu Asp Glu Ala Glu Lys Ser Pro Leu1 5 10(2)SEQ ID NO:42信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:42:
Thr Val Gly Phe Arg Glu Arg Thr Leu Pro Gly Gln Lys Ala1 5 10(2)SEQ ID NO:43信息(ⅰ)序列特征
(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:43:
Asp Asp Val Asn Ser Glu Pro Ala Gln Pro Val Glu Glu Gln1 5 10(2)SEQ ID NO:44信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:44:
Asn Thr Gly Ser Ile Ile Asn Asn Tyr Tyr Met Gln Gln Tyr1 5 10(2)SEQ ID NO:45信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性
(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:45:
Gly Pro Tyr Ala Gly Pro Leu Glu Arg Gln Lys Pro Leu Lys1 5 10(2)SEQ ID NO:46信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:46:
Pro Leu Glu Arg Gln Lys Pro Leu Lys Val Arg Ala Lys Leu1 5 10(2)SEQ ID NO:47信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:47:
Gly Pro Tyr Ala Gly Pro Met Glu Arg Gln Lys Pro Leu Lys1(2)SEQ ID NO:48信息(ⅰ)序列特征(A)長度14氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ⅱ)分子類型肽(ⅲ)假定非(ⅳ)反義是(ⅴ)片斷類型內部片斷(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:48:
Pro Met Glu Arg Gln Lys Pro Leu Lys Val Lys Ala Lys Ala1 5 10
權利要求
1．基于具有至少8個氨基酸的序列的肽的FMDV疫苗，所述肽與FMDV非結構蛋白區(qū)的部分序列相對應，它是通過與FMDV特異性抗體的反應性或與FMDV特異性T淋巴細胞的反應性而篩選出來的。
2．根據(jù)權利要求1的肽，由8-35個氨基酸組成。
3．根據(jù)權利要求1的肽，由8-15個氨基酸組成。
4．豬的FMDV疫苗，其中根據(jù)權利要求1的肽相應于FMDV基因組中編碼蛋白質L/L′,1A,1B,1C,2B,2C,3A,3B,3C和3D的部分區(qū)域。
5．牛的FMDV疫苗，其中根據(jù)權利要求1的肽相應于FMDV基因組中編碼蛋白質1D,2B,2C,3A和3B的部分區(qū)域。
6．根據(jù)權利要求1的肽，它通過與載體蛋白或滅活病毒偶聯(lián)而被修飾。
7．根據(jù)權利要求1的肽，它通過在重組系統(tǒng)中表達DNA序列而制備。
8．編碼根據(jù)權利要求1的肽并包含于重組系統(tǒng)中的DNA序列。
9．根據(jù)權利要求1的肽在用于檢測FMDV感染的動物、用于區(qū)分疫苗接種的和感染的動物或用于對動物進行免疫接種的檢測系統(tǒng)中的應用。
10．根據(jù)權利要求1的肽在制備用于檢測FMDV感染的動物，用于區(qū)分疫苗接種的和感染的動物的檢測系統(tǒng)中或者在制備用于對動物進行抗FMDV感染的免疫接種的疫苗中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及基于具有至少8個氨基酸的序列的肽的FMDV疫苗以及它們的制備和應用，該序列相應于FMDV非結構蛋白區(qū)的部分序列，它是通過與FMDV特異性抗體的免疫反應性或通過與FMDV特異性T淋巴細胞的免疫反應性而篩選出來的。
文檔編號C07K14/09GK1238011SQ97199735
公開日1999年12月8日 申請日期1997年9月8日 優(yōu)先權日1996年9月18日
發(fā)明者R·科爾雷, H·R·赫南, E·普法夫, A·薩爾米勒, T·保利, B·赫里希, B·格拉塔爾－薩爾米勒, K·H·維斯米勒 申請人:拜爾公司