專利名稱：：免疫球蛋白制劑及其制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及免疫球蛋白制劑，特別是涉及具有優(yōu)良貯藏性的免疫球蛋白制劑。在作為血漿蛋白組分的γ-球蛋白中，一種包括IgG的免疫球蛋白制劑已被用于預防和處置各種傳染性疾病。溶液形式的免疫球蛋白是不穩(wěn)定的。已知作為免疫球蛋白聚集的結果，換句話說，作為在導致形成免疫球蛋白的多聚體和二聚體的分餾操作中免疫球蛋白變性的結果，在稱為抗補體作用的補體固定性上免疫球蛋白表現(xiàn)出顯著的提高，導致a)在從靜脈向人體給藥時降低血清補體濃度或b)導致嚴重的副作用例如過敏性休克。因此，免疫球蛋白不能制成液體制劑而是制成干制劑，特別是以冷凍干燥形式。但是，干制劑也存在問題，即不易給藥，因為在用于注射等時需將其溶解在蒸餾水中。另一方面，在用于注射等時，液體制劑不需任何溶解在蒸餾水中的操作，并與干制劑相比，可以容易地給藥。不過，如上所述，在免疫球蛋白的穩(wěn)定性上存在這些特別不利之處。因此，照例要努力開發(fā)一種用于靜脈注射的液體免疫球蛋白組分，該組分甚至以溶液形式也具有穩(wěn)定性。例如，JP-A-63-192724(此處術語″JP-A″意思是″未審查的公開日本專利申請″(US專利4,876,088，EP278422))披露了一種用于靜脈注射的液體球蛋白組分，該組分甚至以溶液形式也具有穩(wěn)定性，所述組分具有低的電導率和PH為5.5±0.2和含有山梨糖醇作為穩(wěn)定劑。此外，JP-A-58-43914(US專利4,396,608和4,499,073，EP73371)披露，為了得到基本排除免疫球蛋白聚集的并具有免疫血清球蛋白單體含量超過90％的免疫球蛋白組分，將免疫血清球蛋白溶液調整到具有離子強度低于0.001和pH為3.5-5.0。JP-A-63-8340(US專利4,762,714和4,948,877，EP240856)披露了一種基本沒有獲得性病毒的免疫血清球蛋白的制備方法，該免疫血清球蛋白包括取自于人體血漿，在pH為約5.4或較低，通過冷乙醇分餾法得到的免疫血清球蛋白和在pH約為4.25或較低貯存至少約3天或在pH約為6.8或較低和至少45℃的溫度下貯存，使得基本不含有傳染性反轉錄病毒(retrovirus)。不過，上述發(fā)明是針對反轉錄病毒的滅活作用。尚無報導，這樣得到的免疫球蛋白制劑在免疫球蛋白的聚集問題上表現(xiàn)出改進。JP-A-7-238036(EP702960)披露，為了改進穩(wěn)定性，通過用酸處理或在室溫貯存，免疫球蛋白的聚集，換句話說，不僅免疫球蛋白的聚合物而且免疫球蛋白的二聚物的增高都受到抑制。WO95-3826披露了含有0.1g/L或較少的用于保持溶液狀態(tài)作為穩(wěn)定劑的非離子表面活性劑的免疫球蛋白制劑，并基本不含白蛋白。如上所述，免疫球蛋白基本是不穩(wěn)定的蛋白質，所以其與液體組分制劑有關的穩(wěn)定性是最憂慮的問題之一。本發(fā)明的目的就是解決上述問題，并因此提供一種甚至以液體的形式也具有良好的貯存穩(wěn)定性的免疫球蛋白制劑?；谇懊娴目紤]，本發(fā)明進行了廣泛的研究。結果發(fā)現(xiàn)，通過把免疫球蛋白成分中作為污染物存在的血清白蛋白降低為痕量，可以改進免疫球蛋白的穩(wěn)定性，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明人建立了一個假設，即免疫球蛋白制劑中存在的微細顆粒是形成不溶外來物的核心。根據(jù)該假設，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過除去可能成為形成不溶外來物核心的微細顆粒，可以改進免疫球蛋白的穩(wěn)定性，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明的種種目的是由下列完成的1)含有免疫球蛋白的免疫球蛋白制劑(組分)，其中所述制劑含有作為污染物的血清白蛋白的量不多于10μg/50mg免疫球蛋白；2)含有免疫球蛋白的免疫球蛋白制劑(組分)，其中所述制劑不含有作為不溶外來物核心的微細顆粒；和3)制備上述免疫球蛋白制劑1)或2)的方法，該方法包括至少下述一個步驟用一陰離子交換器處理含免疫球蛋白的水溶液；用膠體二氧化硅處理含免疫球蛋白的水溶液；和用具有平均孔徑為1-100nm的多孔膜過濾含免疫球蛋白的水溶液。下面將對本發(fā)明作更具體的描述。對用于本發(fā)明免疫球蛋白制劑的免疫球蛋白的狀態(tài)不加特別的限制；不過，文獻中可得到的任何免疫球蛋白的狀態(tài)都可使用。更明確地說，實施例包括用作為起始物的含免疫球蛋白的成分，成分II+III，成分II可用Cohn’s乙醇分餾得到，和含有免疫球蛋白的相似成分的糊劑來制備。將此成分懸浮在含水溶劑中以萃取免疫球蛋白，這種方法可以用作免疫球蛋白的制備方法。這時，加入相當于所述成分的至少兩倍體積的，優(yōu)選至少5倍體積的一含水介質。此處有用的優(yōu)選含水介質例子包括水和含有氯化鈉，鹽酸，醋酸，磷酸，或其鹽類的水溶液。此外，優(yōu)選PH范圍為4-7，且離子強度范圍為0.001-0.1M。免疫球蛋白的例子包括無化學修飾的和完整分子的免疫球蛋白(例如，用聚乙二醇，PH約為4，或離子交換樹脂處理的免疫球蛋白)；化學修飾的免疫球蛋白(例如，烷基化或磺化免疫球蛋白)；和酶處理的免疫球蛋白(例如，用酶例如纖溶酶，胃蛋白酶，或胰蛋白酶處理的免疫球蛋白)。在這些免疫球蛋白中，無化學修飾的和完整分子的免疫球蛋白是優(yōu)選使用的。此處使用的術語″無化學修飾的和完整分子的免疫球蛋白″意思是具有下列各種性質的免疫球蛋白1)完整的(天然的)和未受到任何人工修飾或改變的免疫球蛋白，因此不含有免疫球蛋白碎片例如Fab，F(xiàn)(ab’)2和Fc；2)未產生抗體效價降低并抗體種類也沒有減少的免疫球蛋白；和3)具有抗補體作用(補體穩(wěn)固性)充分地低于20單位(CH50值)的免疫球蛋白，該值是日本生物學制劑標準中被認為安全的值。同樣地，由任何方法得到的無化學修飾的和完整分子的免疫球蛋白，只要它是完整的(天然的)和具有低的抗補體活性，都可以使用。無化學修飾的和完整分子的免疫球蛋白可以用任何方法制備。例子包括乙醇分餾，聚乙二醇分餾(JP-A-53-47515(美國專利4,093,606和4,124,576))，聯(lián)合使用聚乙二醇和羥乙基淀粉分餾(JP-A-51-91321)，酸處理(JP-A-57-32228(美國專利4,371,520，EP78331))，皂土處理(JP-A-57-77623)，陰離子交換處理[JP-W-59-501546(此處使用的術語″JP-W″意思是″公開而未實審的國際申請″)，JPA-60-42336]，熱處理和聚乙二醇分餾結合(JP-A-63-183539(美國專利5,132,406，EP246579))，和形成液體制劑(JP-A-58-43914(美國專利4,396,608和4,499,073，EP73371，JP-A-63-197274(美國專利4,876,088，EP278422))。優(yōu)選地，對由上述方法之一得到的免疫球蛋白進行加熱處理。以液體形式處理的方法的例子包括一種用高濃度糖或糖醇作為穩(wěn)定劑的方法(JP-A-61-191622(EP196761))和一種在低離子強度和酸性pH下，用高濃度山梨醇作為穩(wěn)定劑進行熱處理的方法(JP-A-63-146832(美國專利4,845,199，EP253313))。另外，以干燥形式熱處理的方法的例子包括一種用甘氨酸，聚乙二醇，氯化鈉，甘露醇或類似物作為穩(wěn)定劑的方法(JP-A-61-78730(US專利4,721,777，EP177836))和一種用雙糖或糖醇作為穩(wěn)定劑的方法(JP-A-62-228024，(JP-A-63-283933)。免疫球蛋白也可經(jīng)過病毒滅活處理，而不是加熱處理。其例子包括三烷基磷酸鹽和/或洗滌劑處理(美國專利4,540,573，EP131740)，膜過濾(WO96-9839)。本發(fā)明中使用的免疫球蛋白的來源沒有特別的限制。具體的例子包括人體和鼠體。其中優(yōu)選人體。免疫球蛋白的具體例子包括用聚乙二醇處理的人體免疫球蛋白。根據(jù)本發(fā)明的免疫球蛋白制劑包括一制劑，該制劑中作為污染物的血清白蛋白已經(jīng)在某種程度上被除去。除去血清白蛋白的方法的例子包括下面將要描述的用陰離子交換劑接觸處理方法和用膠體二氧化硅接觸處理方法。A)用陰離子交換劑處理這是用陰離子交換劑接觸處理來回收非吸附成分的方法。i)陰離子交換劑的制備陰離子交換劑是一種不溶性載體，該載體上連接有一陰離子交換基團。此處有用的陰離子交換基團的例子包括二乙氨基乙基(DEAE)基團和四價氨基乙基(QAE)基團。不溶性載體的例子包括瓊脂糖，纖維素，葡聚糖和聚丙烯酰胺。它們可用文獻中已知的方法結合到一起。ii)處理方法免疫球蛋白成分溶解在一適合的含水溶劑中。含水介質優(yōu)選具有pH為4-7(更優(yōu)選pH為5-6)，和低的離子強度(更優(yōu)選0.0001-0.1M)。這種含水介質例子包括氯化鈉水溶液，注射用蒸餾水和醋酸鹽緩沖劑。這樣制備的免疫球蛋白溶液具有蛋白質濃度為1-15W/V％(更優(yōu)選3-10W/V％)和pH為4-7(更優(yōu)選為5-6)。這樣制備的免疫球蛋白溶液然后可以用經(jīng)上述含水介質平衡的陰離子交換劑接觸處理。這種處理的例子包括批處理法或柱處理法。例如，在批處理法中，約10-100ml的免疫球蛋白溶液與約1ml陰離子交換劑混合，混合物在0-4℃攪拌約30分鐘-2小時，然后將反應混合物在6000-8000rpm離心10-30分鐘以收取上層清液。另一方面，在柱處理方法中，例如，約10-100ml的免疫球蛋白溶液同1ml的陰離子交換劑接觸以回收非吸附成分。B)用膠體二氧化硅處理這是用膠體二氧化硅接觸處理回收非吸附成分的方法。i)吸附劑用作吸附劑的膠體二氧化硅的例子包括硅膠，輕質硅酐，矽藻土，酸性粘土，膨潤土，高嶺土和硅鋁酸鎂。優(yōu)選使用輕質硅酐(商品名″aerosil″；NipponAerosilCo.Ltd.的產品和商品名為″Delipid″；ZetaInc.的產品)。ii)處理條件提純的免疫球蛋白溶解在適當?shù)暮軇┲?。含水介質優(yōu)選具有pH4-7(更優(yōu)選5-6)和低的離子強度(更優(yōu)選0.0001-0.1M)。含水介質的例子包括上述用陰離子交換劑處理的例子。這樣制備的免疫球蛋白溶液優(yōu)選具有蛋白質濃度為1-15W/V％(更優(yōu)選3-10W/V％)和pH為4-7(更優(yōu)選為pH5-6)。這樣制備的免疫球蛋白溶液可以包括藥學上可接受的添加劑(例如載體，賦形劑，稀釋劑)，穩(wěn)定劑和/或在不損害本發(fā)明目的的一定范圍內，通常用于制藥的藥學上的必需成分。穩(wěn)定劑的例子包括單糖(例如葡萄糖)，雙糖(例如蔗糖，麥芽糖)，糖醇(例如甘露醇，山梨醇)，中性鹽(例如氯化鈉)，氨基酸(例如甘氨酸)，和非離子表面活性劑(例如聚乙二醇，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(商品名″Pluronic″)，聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯(商品名″Tween″)。穩(wěn)定劑優(yōu)選加入量約1-10W/V％。然后，用上述吸附劑接觸處理免疫蛋白溶液。作為使用的接觸處理條件，當免疫球蛋白的濃度為1-100g/升(優(yōu)選10-100g/升)時，吸附劑用量為1-30g/升。這種處理可以用例如批處理或柱處理法進行。在這些方法中，間歇法是優(yōu)選的。在間歇法中，在例如5-25℃條件下，混合和攪拌進行5分鐘-1小時。然后，上澄清液(非吸附成分)可以用例如過濾或離心回收。除去血清白蛋白的免疫球蛋白制劑含有血清白蛋白污染物的量按每50mg免疫球蛋白不大于10μg，優(yōu)選不大于5μg。具體說，當免疫球蛋白制劑以含有5W/V％的免疫球蛋白溶液形式，它含有血清白蛋白污染物的量不大于10μg/ml，優(yōu)選不大于5μg/ml。具有這種性質的免疫球蛋白制劑顯示出比通常該品更優(yōu)良的儲存穩(wěn)定性。例如，在振蕩下25℃貯存至少30天，或在37℃貯存至少39天后，溶液形式的免疫球蛋白制劑也沒有不溶性外來物。即，能用肉眼觀察不到不溶性外來物。免疫球蛋白制劑中的血清白蛋白的分析，可以使用文獻中的已知方法。例子包括ELISA法，Mancini法和比濁法。C)用多孔膜處理根據(jù)本發(fā)明的免疫球蛋白制劑包括一種制劑，其中可以作為形成不溶性外來物核心的微細顆粒已經(jīng)被除去。除去方法的例子包括通過多孔膜過濾法(例如以空心紗或紙的形式)。本發(fā)明中有用的多孔膜材料不加特別的限制。優(yōu)選再生纖維素。膜形式的例子包括空心紗或紙，優(yōu)選空心紗。例如，優(yōu)選用微相分離法從銅纖維素的銨鹽溶液制備再生纖維素構成的多孔空心紗[AmericanChemicalSociety，9197-228(1985)]。多孔膜的平均孔徑為1-100nm，優(yōu)選10-75nm，更優(yōu)選10-50nm，和更優(yōu)選35±2nm。其厚度優(yōu)選35±3.5μm。膜優(yōu)選具有多層結構。當多孔膜以空心紗的形式，其內部直徑優(yōu)選為330±30μm。當多孔膜以空心紗的形式，優(yōu)選用模塊方式。模塊由具有優(yōu)選膜面積為0.001-1.0m2的多孔空心紗膜構成，將膜填滿一容器并用粘合劑使它們成為整體。通過多孔膜進行過濾處理，例如，如下將免疫球蛋白成分首先溶解在一適當?shù)暮軇┲小：橘|優(yōu)選具有pH為4-7(更優(yōu)選pH5-6)和低的離子強度(更優(yōu)選0.0001-0.1M)。含水介質的例子包括氯化鈉水溶液，注射用蒸餾水和醋酸緩沖劑。這樣制備的免疫球蛋白溶液優(yōu)選具有蛋白質濃度為1-15W/V％(更優(yōu)選為3-10W/V％)和pH為4-7(更優(yōu)選為5-6)。這樣制備的免疫球蛋白溶液可以含有藥學上可接受的添加劑(例如，載體，賦形劑，稀釋劑)，穩(wěn)定劑和/或在不損害本發(fā)明目的的一定范圍內，用于制藥的藥學上的必需成分。穩(wěn)定劑的例子包括單糖(例如葡萄糖)，雙糖(例如蔗糖，麥芽糖)，糖醇(例如甘露醇，山梨醇)，中性鹽(例如氯化鈉)，氨基酸(例如甘氨酸)，和非離子表面活性劑(例如聚乙二醇，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(商品名″Pluronic″)，聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯(商品名″Tween″)。穩(wěn)定劑優(yōu)選加入量約1-10W/V％。上述含免疫球蛋白溶液通過多孔膜過濾。此時過濾壓力或力為0.1-1kgf/cm2，優(yōu)選0.1-0.5kgf/cm2，更優(yōu)選0.1-0.3kgf/cm2。處理溫度優(yōu)選4-50℃。過濾處理的模式的例子包括橫向流動過濾法(環(huán)流型)，這種過濾方法是在一定過濾率下進行。和死端過濾法(非環(huán)流型)，它是在沒有給出過濾率時進行過濾的。用壓縮空氣的橫向流動過濾法是優(yōu)選被采用的。過濾處理可以進行多次。在上述過濾處理之前，含免疫球蛋白溶液可以經(jīng)過另一種過濾處理。這樣制備的免疫球蛋白制劑是一種這種的制劑，其中已經(jīng)除去了可以成為形成不溶性外來物的核心的具有平均粒徑不小于100nm，優(yōu)選不小于75nm，更優(yōu)選不小于35nm的不溶性顆粒和/或具有分子量大于免疫球蛋白的分子量(約150000)的可溶微細顆粒。所以，即使免疫球蛋白制劑以溶液的形式在振蕩下25℃貯存至少30天，或在37℃貯存至少39天，都不會造成免疫球蛋白的聚集，即不會產生不溶性外來物，和顯示良好的儲存穩(wěn)定性。這就是說，肉眼不能觀察到不溶性外來物。本發(fā)明中，上述用陰離子交換劑或膠體二氧化硅接觸處理和通過多孔膜過濾處理可以任何結合的或單獨的方式使用，且處理的順序也無限制。不過，優(yōu)選按這樣的順序用陰離子交換劑處理，用膠體二氧化硅處理和用多孔膜處理。D)最后制劑(特別是液體制劑)i)液體制劑的制備通過用上述方法制備根據(jù)本發(fā)明的用于靜脈注射劑的免疫球蛋白制劑，可以得到用于靜脈注射劑的免疫球蛋白制劑。在優(yōu)選的具體例中，可以靜脈內給藥的無化學改性和整體分子的免疫球蛋白液體組分(制劑)可以這樣得到，即用常用方法，通過將無化學修飾和完整的分子免疫球蛋白的含水溶液調整到濃度為1-10W/V％(更優(yōu)選3-7W/V％)，用已知方法調整所得溶液到含有穩(wěn)定劑，例如，山梨醇的量為1-20W/V％(更優(yōu)選2-10W/V％)，pH為5-6(更優(yōu)選pH5.5±0.2)和具有低的電導率(更優(yōu)選電導率不高于1mmho，更優(yōu)選電導率不高于0.6mmho，每個數(shù)據(jù)均按照8℃計算)，然后將所得溶液滅菌過濾，按普通的制劑工藝分批灌注等。由這樣形成的制劑，可以生產出含有無化學修飾的和完整的分子免疫球蛋白的，具有pH為5-6(更優(yōu)選pH5.5±0.2)和電導率不高于1mmho(更優(yōu)選電導率不高于0.6mmho，每個數(shù)據(jù)均按照8℃計算)，可以在室溫下貯存，具有抗補體值不大于20單位和具有免疫球蛋白二聚物含量不大于7％的用于靜脈注射的免疫球蛋白液體制劑。關于由無化學修飾的和完整的分子免疫球蛋白組成的用于靜脈注射的含免疫球蛋白制劑，考慮到免疫球蛋白二聚物含量的安全范圍，則免疫球蛋白二聚物含量設定在7％或較低，優(yōu)選6％或較低，和更優(yōu)選4％或較低。根據(jù)本發(fā)明的制劑具有基本不滅活的免疫球蛋白，既不含IgG多聚體，也不含污染物，具有良好溶解性和具有足夠低的抗補體作用和當病毒被例如熱處理滅活后，是一種可以通過生物學制劑標準的安全制劑。根據(jù)本發(fā)明的免疫球蛋白制劑在使用時，當其為一液體制劑時，可以用適當?shù)娜軇?例如，用于注射劑的蒸餾水，生理鹽水，葡萄糖溶液)稀釋。另一方面，當其為一干制劑時，上述免疫球蛋白溶液被冷凍干燥。使用時，將其溶解在一適當?shù)娜軇┲?例如，用于注射的蒸餾水)。根據(jù)本發(fā)明的免疫球蛋白制劑的給藥途徑一般為注射，優(yōu)選靜脈給藥。本發(fā)明的免疫球蛋白制劑優(yōu)選靜脈給藥量為每公斤體重50-1000mg/天，可以給藥一天或連續(xù)幾天。根據(jù)病人的癥狀，性別，體重或其它，可以提高或降低劑量。根據(jù)本發(fā)明的免疫球蛋白制劑是一種制劑，其中可能成為形成不溶外來物的核心的微細顆粒已被除去，所以它具有改進的貯存穩(wěn)定性。另外，由于作為污染物的血清蛋白量很少，與普通免疫球蛋白制劑相比，根據(jù)本發(fā)明的免疫球蛋白制劑甚至在溶液形式下也不形成不溶外來物，因此具有改進的貯存穩(wěn)定性。下面將用實施例和測試對本發(fā)明作更明確的描述。但應記住，本發(fā)明不受限于這些實施例。實施例1由Cohn′s冷乙醇分餾法得到的成分II+III糊劑(1kg)被溶解在10升0.6W/V％的氯化鈉中。所得溶液用1N鹽酸調整到pH3.8并在4℃下攪拌60分鐘，之后進行酸處理。將具有平均分子量為4000的聚乙二醇500g加入其中并溶解，再向其中加入1N的氫氧化鈉，逐漸提高其pH值到5.0。此后，立即用離心法除去沉淀物，得到上層清液。具有平均分子量為4000的聚乙二醇(700g)被加入到上層清液中。在輕輕攪拌下，用1N氫氧化鈉調整所得混合物pH為8.0。用離心法回收這樣沉淀的免疫球蛋白。這樣回收的免疫球蛋白被溶解在a)生理鹽水中，或b)含0.6W/V％氯化鈉和2W/V％甘露醇的0.02M的醋酸鹽緩沖劑中。將5W/V％的免疫球蛋白溶液通過載有無水二氧化硅過濾器(商品名″ZetaDelipid″；QunoCorp.生產)，以回收非吸附成分。非吸附成分經(jīng)過滅菌過濾和冷凍干燥以得到臨床用于靜脈給藥的免疫球蛋白制劑。用Mancini′s法化驗結果發(fā)現(xiàn)，在這樣得到的5W/V％免疫球蛋白溶液中，白蛋白含量為10μg/ml或較少。實施例2在Cohn′s冷乙醇法從人體血漿得到的1kg成分II+III中，加入10升水，跟著進行IgG萃取。每100ml的所得上層清液加入50g山梨醇后，將其pH調整到5.5，所得混合物在10小時內加熱60℃。然后，調整反應混合物pH為5.5和用冷注射用水稀釋三倍。向稀釋液中加入聚乙二醇(平均分子量4000)，得到最后濃度為8W/V％。所得混合物在2℃離心得到上層清液。向上層清液中加入1N氫氧化鈉，調整其pH為8.8，然后向其中加入聚乙二醇(平均分子量4000)，達到最后濃度為12W/V％。所得混合物在2℃離心得到IgG組分沉淀。這樣得到的IgG組分溶解在注射水中。向所得混合物中加入用注射水平衡的DEAE-交聯(lián)葡聚糖(每50ml溶液約2ml)。在0-4℃溫度下，所得混合物受到接觸處理約1小時。處理之后，用過濾回收濾液(IgG溶液)的方式除去DEAE-交聯(lián)葡聚糖。這樣回收的IgG溶液用注射水稀釋成5W/V％的溶液，且用醋酸鈉將其pH調整到約5.5。然后向其中加入山梨醇，得到最后濃度為5％。這樣得到的溶液(電導率約1mmho)通過與實施例1相似的載有無水二氧化硅的過濾器，回收非吸附成分。非吸附成分進一步用過濾滅菌以得到用于靜脈給藥的免疫球蛋白制劑。用Mancini′s法化驗結果發(fā)現(xiàn)，在所得5W/V％IgG溶液中混合的白蛋白量為5μg/ml。測試例1已經(jīng)用膠體二氧化硅處理過的和未處理過的本發(fā)明免疫球蛋白制劑(5W/V％溶液)，比較免疫球蛋白溶液中的血清白蛋白污染物的量以及在37℃貯存39天后的不溶外來物的形成度。根據(jù)用上面實施例中描述的方法進行膠體二氧化硅的處理。用Mancini′s法作血清白蛋白分析和肉眼觀察不溶外來物。結果列在表1。表1</tables>-未觀察到不溶外來物。+觀察到少許不溶外來物。++明確地觀察到不溶外來物。上述結果表明，用膠體二氧化硅處理過的免疫球蛋白制劑含有明顯少量的血清白蛋白和甚至在37℃下貯存達39天后不存在不溶性外來物。實施例3由Cohn′s冷乙醇分餾法得到的成分II+III糊劑(1kg)被溶解在10升0.6W/V％的氯化鈉中，且其pH值用1N鹽酸調整到3.8。在4℃下將所得溶液進行酸處理60分鐘。將具有平均分子量為4000的聚乙二醇500g加入其中并溶解，再向其中加入1N的氫氧化鈉，逐漸提高其pH值到5.0。此后，沉淀物被立即用離心法除去，得到上層清液。具有平均分子量為4000的聚乙二醇700g被加入到上層清液中。在輕輕攪拌下，用1N氫氧化鈉調整所得混合物pH為8.0。這樣沉淀的免疫球蛋白被離心和這樣回收的免疫球蛋白被溶解在a)生理鹽水中，或b)含0.6W/V％氯化鈉和2W/V％甘露醇的0.02M的醋酸鹽緩沖劑中。用作多孔膜的是由AsahiChemicalIndustries，Co.，Ltd生產的多孔空心紗BBM組件(商品名為″Planova″)[MembergMicroporousMembrane，以下將其縮寫為″BBM″]。組件中所用多孔空心紗具有至少為150層的多層結構，且其孔徑為35±2nm，膜面積為0.001-1.0m2，空心紗內徑為330±30μm和膜厚度為35±3.5μm，并由通過銅氨液處理得到的再生纖維素所構成。在由聚碳酸酯制的塑料容器中用聚氨基甲酸酯粘合劑將BMM組件做成整體，該塑料容器可用高壓蒸汽滅菌。用注射用蒸餾水充滿組件。組成″Planova″的各種材料的安全性已經(jīng)由JapanesePharmacopoeia建立的方法所確認(根據(jù)BMM注解)，該方法本文引用作參考。將5W/V％的含免疫球蛋白溶液調整到pH為6.4-7.2。滅菌過濾后(孔徑0.2μm，通過膜式過濾器過濾)，所得溶液在5℃和過濾壓力為0.2kgf/cm2經(jīng)膜式過濾處理(使用空氣的死端過濾法)1-5小時。冷卻后，再進行滅菌處理，接著分批灌注，制備出用于靜脈注射的人體免疫球蛋白制劑。實施例4向由1kgCohn′s冷乙醇分餾法得到的成分II+III中加入10升水。每100ml所得溶液中加入50g山梨醇后，其pH調整到5.5，并將所得混合物在60℃加熱10小時。然后，反應混合物被調整到pH為5.5，并用注射冷水稀釋三倍。在稀釋液中加入聚乙二醇(平均分子量4000)，得到最后濃度為6W/V％。所得混合物在2℃離心得到上層清液。將1N氫氧化鈉加入上層清液中，調整其pH為8.8，并向其中加入聚乙二醇(平均分子量4000)，達到最后濃度為12W/V％。所得混合物在2℃離心得到IgG成分沉淀。這樣沉淀的IgG成分被溶解在注射水中。在所得溶液中加入用注射水平衡的DEAE-交聯(lián)葡聚糖(每50ml溶液約2ml)。在0-4℃溫度下，所得混合物受到接觸處理約1小時。處理之后，用過濾回收濾液(IgG溶液)的方式除去DEAE-交聯(lián)葡聚糖。這樣回收的IgG溶液用注射水稀釋成5W/V％的溶液，且用醋酸鈉將其pH調整到約5.5。然后向其中加入山梨醇，達到最后濃度為5％。這樣得到的水溶液用與實施例3中相同的方法進行BMM處理。水溶液(電導率約1mmho)經(jīng)過濾滅菌以得到適于靜脈給藥的液體免疫球蛋白制劑。測試例2在25℃下進行振動穩(wěn)定性測試，以比較經(jīng)聚乙二醇處理的，化學修飾的游離和完整的用于靜脈給藥的并用BMM處理和未用BMM處理的分子免疫球蛋白。貯存期間，pH定為5.5。對不溶外來物的形成度用肉眼觀察作出評價。結果列在表2。表2-未觀察到不溶外來物。+/-在某些例子中觀察到不溶外來物。+觀察到一些不溶外來物。++明確地觀察到不溶外來物。上述結果表明，用BMM處理的免疫球蛋白制劑在25℃下甚至30天后也幾乎不形成不溶外來物，而未用BMM處理的免疫球蛋白制劑在25℃下貯存15天后明確地觀察到不溶外來物。實施例5實施例2中得到的IgG溶液用注射水稀釋成5W/V％IgG溶液，且其pH用醋酸鈉調整到約5.5。向其中加入山梨醇達到最后濃度為5％。然后，所得混合物用與實施例2中相同的方法用無水二氧化硅載體處理，并回收非吸附成分。然后，以實施例4中相同的方法，用BMM處理回收的非吸附成分以回收非吸附成分。所得水溶液(電導率約1mmho)經(jīng)滅菌過濾以得到用于靜脈注射的免疫球蛋白液體制劑。盡管本發(fā)明已經(jīng)詳細地并參考其特定具體例加以描述，但很明顯，對本領域熟知的人可以對其做出各種改變和改進而不偏離本發(fā)明的精髓和范圍。權利要求1.一種含免疫球蛋白的免疫球蛋白制劑，其中所述制劑包括，作為污染物的血清白蛋白，其含量每50mg免疫球蛋白不大于10μg；和/或其中所述制劑不含可能作為不溶外來物的核心的微細顆粒。2.根據(jù)權利要求1的免疫球蛋白制劑，其中所述制劑包括，作為污染物的血清白蛋白，其含量每50mg免疫球蛋白不大于10μg；和其中所述制劑不含可能作為不溶外來物的核心的微細顆粒。3.根據(jù)權利要求1的免疫球蛋白制劑，其中所述制劑即使在37℃以溶液形式貯存至少39天后也沒有不溶外來物。4.根據(jù)權利要求1的免疫球蛋白制劑，其中所述制劑即使在25℃振動下以溶液形式貯存至少30天后也沒有不溶外來物。5.根據(jù)權利要求1的免疫球蛋白制劑，其中所述制劑的pH為5-6，電導率不大于1mmho(按照8℃計算)，抗補體值不大于20單位，IgG二聚物含量不高于7％。6.根據(jù)權利要求1的免疫球蛋白制劑，其中所述制劑經(jīng)過病毒滅活處理。7.根據(jù)權利要求1的免疫球蛋白制劑，其中所述免疫球蛋白是無化學修飾和完整分子的免疫球蛋白。8.根據(jù)權利要求1的免疫球蛋白制劑，其中所述微細顆粒具有的平均顆粒大小不小于100nm。9.制備根據(jù)權利要求1的免疫球蛋白制劑的方法，該方法包括下述至少步驟之一用陰離子交換劑處理含免疫球蛋白的水溶液；用膠體二氧化硅處理含免疫球蛋白的水溶液；和通過平均孔徑為1-100nm的多孔膜過濾含免疫球蛋白的水溶液。10.根據(jù)權利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液用陰離子交換劑在pH4-7和離子強度為0.0001-0.1M條件下處理，以回收非吸附成分。11.根據(jù)權利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液用膠體二氧化硅在pH4-7和離子強度為0.0001-0.1M條件下處理，以回收非吸附成分。12.根據(jù)權利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液通過平均孔徑為1-100nm的多孔膜在pH4-7和離子強度為0.0001-0.1M條件下過濾，以回收非吸附成分。13.根據(jù)權利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液按此次序處理用陰離子交換劑處理，用膠體二氧化硅處理；并通過平均孔徑為1-100nm的多孔膜過濾。14.根據(jù)權利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液進一步經(jīng)過病毒滅活處理。15.根據(jù)權利要求9的方法，其中所述含免疫球蛋白的水溶液進一步經(jīng)過聚乙二醇分餾。全文摘要本發(fā)明描述了一種含免疫球蛋白的免疫球蛋白制劑,其中該制劑包括,作為污染物的血清白蛋白含量每50mg免疫球蛋白不大于10μg;和/或其中所述制劑不含可能作為不溶外來物的核心的微細顆粒,本發(fā)明還涉及制備免疫球蛋白制劑的方法。文檔編號C07K16/06GK1198951SQ98109788公開日1998年11月18日申請日期1998年3月19日優(yōu)先權日1997年3月19日發(fā)明者平尾豐,橋本元范,上村八尋,北村妙申請人:株式會社綠十字