專利名稱：含有特異于膠原ⅱ的t細胞表位的肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了起源于膠原CII的新肽，他們的制備方法和他們在醫(yī)學(xué)治療，特別是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和相關(guān)的自身免疫病的治療中的用途。
膠原分子是結(jié)締組織的一些主要的結(jié)構(gòu)蛋白。他們包括形成具有獨特的X-Y-Gly重復(fù)氨基酸序列的延伸的三股螺旋結(jié)構(gòu)的三個多肽鏈。軟骨的細胞外基質(zhì)獨特地主要含有II型膠原，但也含有IX和XI型膠原。最近從小鼠已經(jīng)克隆了CII，并且它的1419個氨基酸的全部序列已經(jīng)確定(Metsarantadm等人，1991，生物化學(xué)雜志，26616862-9)。
認為II型膠原“躲避”了免疫系統(tǒng)的細胞，因為它只有在無血管組織如軟骨和眼睛的玻璃體中發(fā)現(xiàn)。所以，免疫系統(tǒng)不完全是耐受它自身的II型膠原的，作為隔離的蛋白質(zhì)，CII具有當(dāng)在Freund完全佐藥中注射時，誘導(dǎo)組織特異的自身免疫病的能力。它誘導(dǎo)的疾病命名為膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)。CIA通常是注射外源CII誘導(dǎo)的，它引起能夠識別對應(yīng)的自我蛋白質(zhì)的T細胞和抗體的產(chǎn)生。
CIA在小鼠中的敏感性局限于I-Aq和I-Ar型MHC。這些分子的結(jié)合基序相似于人DR4和DR1的那些。所以，相信CII是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)中的自身抗原。
對于RA目前沒有原因治療(causal therapy)?，F(xiàn)存的治療方法例如施用皮質(zhì)類固醇是非特異的，正如他們一般抑制免疫應(yīng)答。目前的研究提出在RA的發(fā)病機理中自身反應(yīng)T細胞的重要作用，這導(dǎo)致了一個概念，鼻/口腔給藥免疫原性肽導(dǎo)致這些致病原T細胞的耐受性可能具有治療潛力的。
Miyahara，H.等人(免疫學(xué)1995，86110-115)敘述了在小鼠中的關(guān)節(jié)炎的抑制中II型膠原的片斷的用途。但是，利用的片斷(CII607-621)不含有人的RA的HLA-DR的任何分子的結(jié)合基序，并且所以在人RA治療中用作耐受原將沒有效果。
WO96/20950的目的是敘述能夠結(jié)合人HLA DRB1MHC蛋白質(zhì)的II型膠原肽，這表明將可用于RA治療中。但是，這些存在于膠原CII蛋白質(zhì)的273-404區(qū)的肽表明在推斷的RA的耐受原的有關(guān)測試中只有微弱的活性。本發(fā)明的肽的治療效力明顯更大。
本發(fā)明提供了已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在誘導(dǎo)起源于T細胞表位的膠原CII的免疫耐受性中特別有效的肽。這些肽可以用于自身免疫癥狀如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療中。
所以，根據(jù)本發(fā)明提供了分離的肽，具有或包含通式(I)A1-Xaa-Gly-A4-A5-Gly-A7-Xaa-Gly(I)的氨基酸序列其中A1代表具有芳香或脂肪族側(cè)鏈的氨基酸殘基，A4代表天冬酰胺或精氨酸殘基，或具有芳香或脂肪族側(cè)鏈的氨基酸殘基，A5代表任何天然存在的氨基酸，A7代表具有帶負電的殘基的氨基酸，Xaa代表任何氨基酸殘基，和Gly代表甘氨酸殘基。
本發(fā)明的肽優(yōu)選地是9，10，11，12，13，14或15個氨基酸肽；和更優(yōu)選地是9個氨基酸的肽。
在本發(fā)明的肽中，下面獨立地優(yōu)選用-A1是F，I，L，A或P并且最優(yōu)選地是F-A4是F，I，L，A，R，N或P并且最優(yōu)選地是F-A5是K或R-A7是E，D，Q，P或N并且最優(yōu)選地是Q。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的肽包括那些包括或具有下面序列的一個的這些ESG SPG ENG，PPG ADG QPG，ARG NDG QPG，QPG AKG DQG，APG AKG EAG，PTG VTG PKG，AQG SRG EPG，RVG PPG ANG，PAG ASG NPG，ANG NPG PAG，TDG IPG AKG，DPG LQG PAG，SAG APG IAG，APG EKG EPG，IAG APG FPG，PQGLAG QRG，F(xiàn)PG PRG PPG，PKG ANG DPG，APG ASG DRG，LPG ARG LTG，DAGPQG KVG，ALG APG APG，PAG ANG EKG，KQG DRG EAG，or ARG APG EPG(分別是SEQ ID No1至25)更優(yōu)選是 RVG PPG ANG(SEQ ID No8)或ANG NPG PAG(SEQ ID No10)。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的例子也包括那些含有或具有下面的氨基酸序列的一個VKG ESG SPG ENG SPG；FAG PPG ADG QPG AKG；AAG ARG NDG QPG PAG；ADG QPG AKG DQG EAG；APG AKG EAG PTG ARG；PQG PTG VTG PKG ARG；PEG AQG SRG EPG NPG；AAG RVG PPG ANG NPG；PAG ASG NPG TDG IPG；PPGANG NPG PAG PPG；NPG TDG IPG AKG SAG；RAG DPG LQG PAG APG；AKGSAG APG IAG APG；PAG APG EKG EPG DDG；APG IAG APG FPG PRG；PPG PQGLAG QRG IVG；APG FPG PRG PPG PQG；LAG PKG ANG DPG RPG；KQG APG ASGDRG PPG；EPG LPG ARG LTG RPG；RPG DAG PQG KVG PSG；ETG ALG APG APGPPG；PPG PAG ANG EKG EVG；PTG KQG DRG EAG AQG；or STG ARG APG EPGETG(分別是SEQ ID No26至52)更優(yōu)選 AAG RVG PPG ANG NPG(SEQ ID No33)，最優(yōu)選PPG ANG NPG PAG PPG(SEQ ID No35)。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的肽含有不中斷地存在于膠原II的701-721區(qū)的9到15個氨基酸序列。
本發(fā)明同時涉及含有特異于膠原II的T細胞表位的肽，該肽至少含有9個氨基酸，這9個氨基酸具有相似于和連續(xù)地選自膠原II的110-239，338-379和587-895部分的序列的序列，其中功能等同氨基酸非強制性地替代每個氨基酸，其中肽是如上確定的通式I。
根據(jù)本發(fā)明，進一步提供了藥物組合物，包括結(jié)合可藥用載體或稀釋劑的本發(fā)明的肽。該組合物優(yōu)選地用于提供抗自我免疫癥狀，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和復(fù)發(fā)性多發(fā)性軟骨炎的耐受性。
本發(fā)明進一步提供利用本發(fā)明的肽或本發(fā)明的組合物制造用于治療自身免疫病的藥劑。
根據(jù)本發(fā)明，同時提供了治療患有自身免疫病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和復(fù)發(fā)性多發(fā)性軟骨炎的人或動物的方法，該方法包括給予人或動物治療有效量的肽或組合物。
利用熟練技術(shù)人員已知的方法可以制備本發(fā)明的肽。例如通過利用標準的固相的順序偶聯(lián)技術(shù)，利用了自動肽合成儀(參見例如，Jones，J.肽的化學(xué)合成，132-156，第一版，牛津大學(xué)出版社，1991和R.Epton，固相肽合成的革新和前景，SPCC(UK)公司，1990)。制備從可以獲得的C末端氨基酸移植到甲基二苯甲基胺樹脂或氯甲基化樹脂或適當(dāng)?shù)墓腆w支持物開始。在已經(jīng)保護了側(cè)鏈后，其它氨基酸一步一步移植。在這一偶聯(lián)方法中，利用F-moc或t-Boc方法保護氨基酸的α-氨基基團。氨基酸的側(cè)鏈保護基團是本領(lǐng)域已知的。整個保護肽是從氯化甲基化樹脂通過溶銨基釋放以便獲得保護的酰胺，或從甲基二苯甲基胺樹脂或二苯甲基胺樹脂通過酸溶解釋放。
利用溶液方法，通過逐步法或片斷縮合(參見例如，Jones J.肽的化學(xué)合成，115-131，第一版，牛津大學(xué)出版社，1991)也可以制備本發(fā)明的肽。將適當(dāng)?shù)摩?氨基保護氨基酸與適當(dāng)?shù)摩?羧基保護氨基酸(這樣的保護可能不是根據(jù)選擇的偶聯(lián)方法需要的)利用二亞胺，對稱或非對稱酸酐，或其它偶聯(lián)試劑或本領(lǐng)域已知的技術(shù)偶聯(lián)。這些技術(shù)可以是化學(xué)的或酶的。除去的α-氨基酸和/或α-羧基保護基團，并且偶聯(lián)下一個適當(dāng)?shù)谋Ｗo氨基酸或氨基酸嵌段以便擴展增長的肽。在每個合成中可以利用保護基團和化學(xué)和/或酶技術(shù)和組裝的方案的各種聯(lián)合。
確定了本發(fā)明的肽含有T細胞表位。用另一句話說，他們能夠活化T細胞。存在幾個已知技術(shù)確定結(jié)合長度。優(yōu)選地，本發(fā)明的肽可以活化在IFN-γ釋放測試中至少具有2的結(jié)合長度和/或具有刺激指標至少3的T細胞。利用本領(lǐng)域已知的方法或利用本文的實施例中敘述的方法可以進行IFN-γ釋放測試。同樣地，利用已知的增殖測試，例如在“在小鼠中的II型膠原反應(yīng)T細胞的分析”Andersson和Holmdahl，當(dāng)前免疫學(xué)雜志，201061-1066，1990中敘述的確定刺激指標，優(yōu)選地，利用本文實施例中利用的方法進行測試。
本發(fā)明的肽沒有修飾地用于治療中，可替代地，肽可以修飾，例如他們可以偶聯(lián)，例如共價結(jié)合遞送系統(tǒng)，例如結(jié)合到粘膜結(jié)合結(jié)構(gòu)，這些結(jié)構(gòu)中包括輔助腸吸收的霍亂β毒素。
本發(fā)明的肽可以用于治療，預(yù)防或診斷自身免疫病，并且術(shù)語“治療”如本文所用也應(yīng)該包括預(yù)防和診斷。
本發(fā)明的肽可以是分離的肽，其中本發(fā)明的肽不包括生物體中存在的肽。本發(fā)明的肽可以是從天然或重組產(chǎn)生的肽或蛋白質(zhì)分離的或者可以如本文所用化學(xué)地合成。
化合物可以每天劑量10微克到10毫克，每天單個劑量或分開2到4次劑量給藥。所以，單位劑量含有本發(fā)明的組合物2.5微克到10毫克?；衔锟梢匀芤海瑧腋∫?，HFA氣霧劑和干燥粉末配方例如，Turbuhaler配方形式鼻內(nèi)給藥，或系統(tǒng)地例如通過口服，以片劑，丸劑，膠囊，糖漿，粉末或顆粒形式給藥，或通過腸胃外以無菌腸胃外溶液，或懸浮液形式給藥，或通過直腸以栓劑形式給藥。
本發(fā)明的化合物可以以其自身給藥，或作為含有本發(fā)明的化合物結(jié)合藥物可接受稀釋劑，佐藥或載體的藥物組合物給藥。特別優(yōu)選的是沒有含有能夠引起不利的，例如變應(yīng)性反應(yīng)的物質(zhì)的組合物。
通過鼻吸入可以給藥干燥粉末配方和本發(fā)明的化合物的壓力化HFA氣霧劑。為了吸入，化合物如愿地精細分裂。精細分裂的化合物優(yōu)選地具有質(zhì)量中等直徑為小于10微米，并且可以懸浮于具有分散抗性的推進劑混合物，如C8-C20脂肪酸或其鹽(例如，油酸)，膽汁鹽，磷脂，烷基多糖，全氟化或多聚乙氧基化表面活性劑，或其它藥物可接受分散劑。
通過干燥粉末吸入劑也可以給藥本發(fā)明的化合物。吸入劑可以是單個或多個劑量吸入劑，并且可以是呼吸驅(qū)動的干燥粉末吸入劑。
一種可能性是將精細分裂的化合物與載體物質(zhì)，例如，單，二聚或多聚糖，糖醇或另一個多元醇混合。適當(dāng)?shù)妮d體是糖，例如乳糖，葡萄糖，棉子糖，松三糖，lactitol，maltitol，海藻糖，蔗糖，甘露醇；和淀粉?？商娲?，精細分裂的化合物可以通過另一個物質(zhì)包衣。粉末混合物也可以分散進入硬的明膠膠囊，每個含有活性化合物的需要的劑量。
含有本發(fā)明的化合物的藥物組合物可以是常規(guī)的片劑，丸劑，膠囊，糖漿，粉末或顆粒用于口服給藥；無菌腸胃外溶液或懸浮液用于腸胃外給藥或栓劑用于直腸給藥。
對于口服給藥，活性化合物可以與佐藥或載體例如，乳糖，多糖，山梨醇，甘露醇，淀粉如土豆淀粉，玉米淀粉或支鏈淀粉，纖維素衍生物，結(jié)合劑如明膠或聚乙烯吡咯烷酮，和潤滑劑如硬脂酸鎂，硬脂酸鈣，聚乙二醇，蠟，石蠟，和諸如此類混合，然后，壓縮成片劑。如果需要包衣片劑，如上所述制備的核心可以利用濃縮的蔗糖溶液包衣，蔗糖溶液可以含有例如阿拉伯樹膠，明膠，滑石粉，二氧化鈦，和諸如此類?？商娲兀梢岳萌芙庥谌菀讚]發(fā)的有機溶劑的適當(dāng)多聚物包衣片劑。
對于制備軟明膠膠囊，可以利用例如植物油或聚乙二醇混合化合物。硬的明膠膠囊可能含有利用上面提到的片劑賦形劑例如，乳糖，多糖，山梨醇，甘露醇，淀粉，纖維素衍生物或明膠的化合物的膠囊。同樣，可以將藥物的液體或半固體配方填充進入硬的明膠膠囊。
用于口服應(yīng)用的液體制劑可以是糖漿或懸浮液形式，例如含有化合物的溶液的形式，平衡劑是糖和乙醇，水，甘油，丙二醇的混合物。非強制性地，這樣的液體制劑可以含有色劑，調(diào)味劑，糖精和作為增稠劑的羧甲基纖維素或本領(lǐng)域已知的其它賦形劑。
現(xiàn)在通過下面的實施例解釋本發(fā)明，這些實施例不應(yīng)該解釋為本發(fā)明的限制。
實施例1利用SMPS350自動合成儀(Zinsser，F(xiàn)rankfurt/Main，德國)，利用已知的Fmoc化學(xué)合成每個含有15個氨基酸的表1列出的CII肽鏈(參見Atherton和Sheppard，固相肽合成-一個實驗途徑，IRL出版社，牛津)。然后，在N末端乙?；驮贑末端酰胺化每個肽。通過HPLC和證實預(yù)期的分子量的肽的樣品的質(zhì)譜學(xué)評估肽的質(zhì)量。
表1
發(fā)現(xiàn)黑體表示的氨基酸部分是核心序列，即比較結(jié)構(gòu)關(guān)系最近的肽的結(jié)合強度結(jié)合最強的氨基酸部分。
實施例2利用已知的技術(shù)通過胃蛋白酶消化從劍突提取小鼠CII，然后進一步通過鹽沉淀純化。利用已知技術(shù)再次從Swarm軟骨肉瘤純化小鼠CII。在0.1摩爾/升的乙酸中溶解膠原。通過在56℃溫育30分鐘變性在再刺激致敏的淋巴結(jié)細胞中利用的膠原。
實施例3為了測試在引流的淋巴結(jié)細胞中的增殖應(yīng)答和細胞因子的釋放，利用在CFA(含有H37Ra，Difco，底特律，MI)中乳化的50微克小鼠CII或合成肽在每個后腳墊免疫7-10星期大的雄性(B10.QX DBA/1)F1小鼠。當(dāng)它們是7-10星期大時，通過利用如實施例2制備的100微克小鼠CII乳化CFA在尾巴的基部免疫小鼠，誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎。
在5星期后，利用50微克在1∶1重量比例利用IFA(DIFCO，底特律，MI)乳化CII加強免疫的小鼠。然后除去來自這些小鼠的嚴重關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)引流的淋巴結(jié)細胞，并且合并以便在下面的方法中的增殖測試中實施例1中制備的小鼠CII肽的小組中測試反應(yīng)性。
利用IFN-γ和IL-4小試劑盒(Endogen，劍橋，MA)，測試根據(jù)實施例1制備的CII肽的小組體外再刺激的從50微升小鼠CII致敏淋巴結(jié)細胞的原代培養(yǎng)物的上清液釋放的細胞因子。
表2顯示了結(jié)果。
表2
實施例4如制造商推薦，除了PBS/BSA緩沖液替代含有2％FCS，5毫摩爾/升EDTA，50微摩爾/升2-ME和10毫摩爾/升的PBS，利用與單克隆小鼠抗小鼠L3T4(CD4)抗體或小鼠抗小鼠B220(CD45R)(兩者來自Miltenyi BiotecGmbH，Bergisch Gladbach，德國)偶聯(lián)的超順磁微珠，通過磁性活化細胞分揀器(MACS)耗盡來自利用小鼠CII致敏的小鼠的淋巴結(jié)細胞的T細胞或B細胞。對于染色的T細胞利用FITC共軛抗小鼠CD3-ε和對于B細胞利用FITC共軛抗小鼠κ輕鏈(Pharmigen，圣迭戈，CA)，在FACScan流動細胞計(BectonDickinson)上分析這些組分。在分離后利用沒有血清的DMEM培養(yǎng)基洗滌細胞3次，然后，利用實施例3所述的方法放入增殖測試。以1∶2的重量比例將富集的CD4+T細胞與作為抗原存在細胞的來自同源的小鼠的脾的脾細胞混合。以來自0.84％NH4Cl在pH7.4處理的脾的單個細胞懸浮液的形式利用AP細胞以便溶解紅血細胞。
表3
<p>序列表SEQUENCE ID No.1ESG SPG ENGSEQUENCE ID No.2PPG ADG QPGSEQUENCE ID No.3ARG NDG QPGSEQUENCE ID No.4QPG AKG DQGSEQUENCE ID No.5APG AKG EAGSEQUENCE ID No.6PTG VTG PKGSEQUENCE ID No.7AQG SRG EPGSEQUENCE ID No.8RVG PPG ANGSEQUENCE ID No.9PAG ASG NPGSEQUENCE ID No.10ANG NPG PAGSEQUENCE ID No.11TDG IPG AKGSEQUENCE ID No.12DPG LQG PAGSEQUENCE ID No.13SAG APG IAGSEQUENCE ID No.14APG EKG EPGSEQUENCE ID No.15IAG APG FPGSEQUENCE ID No.16PQG LAG QRGSEQUENCE ID No.17FPG PRG PPGSEQUENCE ID No.18PKG ANG DPGSEQUENCE ID No.19APG ASG DRGSEQUENCE ID No.20LPG ARG LTGSEQUENCE ID No.21DAG PQG KVGSEQUENCE ID No.22ALG APG APGSEQUENCE ID No.23PAG ANG EKGSEQUENCE ID No.24KQG DRG EAGSEQUENCE ID No.25ARG APG EPGSEQUENCE ID No.26VKG ESG SPG ENG SPGSEQUENCE ID No.27FAG PPG ADG QPG AKGSEQUENCE ID No.28AAG ARG NDG QPG PAGSEQUENCE ID No.29ADG QPG AKG DQG EAGSEQUENCE ID No.30APG AKG EAG PTG ARGSEQUENCE ID No.31PQG PTG VTG PKG ARGSEQUENCE ID No.32PEG AQG SRG EPG NPGSEQUENCE ID No.33AAG RVG PPG ANG NPGSEQUENCE ID No.34PAG ASG NPG TDG IPGSEQUENCE ID No.35PPG ANG NPG PAG PPGSEQUENCE ID No.36NPG TDG IPG AKG SAGSEQUENCE ID No.37RAG DPG LQG PAG APGSEQUENCE ID No.38AKG SAG APG LAG APGSEQUENCE ID No.39PAG APG EKG EPG DDGSEQUENCE ID No.40APG IAG APG FPG PRGSEQUENCE ID No.41PPG PQG LAG QRG IVGSEQUENCE ID No.42APG FPG PRG PPG PQGSEQUENCE ID No.43LAG PKG ANG DPG RPGSEQUENCE ID No.44KQG APG ASG DRG PPGSEQUENCE ID No.45EPG LPG ARG LTG RPGSEQUENCE ID No.46RPG DAG PQG KVG PSGSEQUENCE ID No.47EXG ALG APG APG PPGSEQUENCE ID No.48PPG PAG ANG EKG EVGSEQUENCE ID No.49PTG KQG DRG EAG AQGSEQUENCE ID No.50STG ARG APG EPG ETGSEQUENCE ID No.51AAG RVG PPG ANG NPGSEQUENCE ID No.52PPG ANG NPG PAG PPG
權(quán)利要求
1.具有通式(I)的氨基酸序列的分離的肽A1-Xaa-Gly-A4-A5-Gly-A7-Xaa-Gly(I)其中；A1代表具有芳香或脂肪側(cè)鏈的氨基酸殘基，A4代表天冬酰胺或精氨酸殘基或具有芳香或脂肪側(cè)鏈的氨基酸殘基，A5代表任何天然存在的氨基酸，A7代表具有帶負電的殘基的氨基酸，Xaa代表任何氨基酸殘基，和Gly代表甘氨酸殘基。
2.含有權(quán)利要求1中要求保護的任何肽的氨基酸序列的分離的肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2中的肽，含有10和15個氨基酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的肽，其中A5代表賴氨酸或精氨酸殘基并且A7代表谷氨酸殘基。
5.具有下面的序列的任何一個的分離的肽ESG SPG ENG，PPG ADG QPG，ARG NDG QPG，QPG AKG DQG，APG AKG EAG，PTG VTG PKG，AQG SRG EPG，RVG PPG ANG，PAG ASG NPG，ANG NPG PAG，TDG IPG AKG，DPG LQG PAG，SAG APG IAG，APG EKG EPG，IAG APG FPG，PQG LAG QRG，F(xiàn)PG PRG PPG，PKG ANG DPG，APG ASG DRG，LPG ARG LTG，DAG PQG KVG，ALG APG APG，PAG ANG EKG，KQG DRG EAG，或ARG APG EPG(分別是SEQ ID No1至25)
6.含有權(quán)利要求3中的任何一個肽的氨基酸序列的分離的肽。
7.具有下面的序列的任何一個的分離的肽。VKG ESG SPG ENG SPG；FAG PPG ADG QPG AKG；AAG ARG NDG QPG PAG；ADG QPG AKG DQG EAG；APG AKG EAG PTG ARG；PQG PTG VTG PKG ARG；PEG AQG SRG EPG NPG；AAG RVG PPG ANG NPG；PAG ASG NPG TDG IPG；PPG ANG NPG PAG PPG；NPG TDG IPG AKG SAG；RAG DPG LQG PAG APG；AKG SAG APG IAG APG；PAG APG EKG EPG DDG；APG IAG APG FPG PRG；PPG PQG LAG QRG IVG；APG FPG PRG PPG PQG；LAG PKG ANG DPG RPG；KQG APG ASG DRG PPG；EPG LPG ARG LTG RPG；RPG DAG PQG KVG PSG；ETG ALG APG APG PPG；PPG PAG ANG EKG EVG；PTG KQG DRG EAG AQG；或STG ARG APG EPG ETG(分別是SEQ ID No26至52)
8.權(quán)利要求7中要求保護的任何一個肽的10到14個氨基酸片斷的分離的肽。
9.根據(jù)前面的權(quán)利要求的任何一個所述的肽，其結(jié)合到在IFN-γ釋放測試中至少具有2的結(jié)合長度的T細胞上。
10.根據(jù)前面權(quán)利要求的任何一個的肽，其結(jié)合到具有刺激指標至少3的T細胞上。
11.根據(jù)前面的權(quán)利要求所述的任何一個的肽，其中肽的序列存在于位置110-239，338-379或587-895之間的膠原II的序列中。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的肽，其中肽序列存在于膠原II的701-721區(qū)。
13.根據(jù)前面的權(quán)利要求的任何一個所述的分離的肽，用于醫(yī)療。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的肽，其中醫(yī)學(xué)治療包括耐受性的誘導(dǎo)。
15.根據(jù)前面的權(quán)利要求的任何一個所述的分離的肽在制造可用于自身免疫病的治療中的藥劑的用途。
16.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中自身免疫病是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。
17.含有根據(jù)權(quán)利要求1到12的任何一個所述的肽的藥物組合物，其結(jié)合有藥物可接受載體或稀釋劑。
18.治療患有或有傾向患有自身免疫病的人或動物的方法，該方法包括給人或動物施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1到12的任何一個的肽或根據(jù)權(quán)利要求17的組合物。
19.包括特異于膠原II的T-細胞表位的肽，該肽至少包括相似于和連續(xù)性地選自膠原序列的110-239，338-379或587-895部分的序列的9個氨基酸，其中每個氨基酸非強制性地利用功能等價的氨基酸替代，并且其中肽的通式為A1-Xaa-Gly-A4-A5-Gly-A7-Xaa-Gly (I)其中；A1代表具有芳香或脂肪側(cè)鏈的氨基酸殘基，A4代表天冬酰胺或精氨酸殘基或具有芳香或脂肪側(cè)鏈的氨基酸殘基，A5代表任何天然存在的氨基酸，A7代表具有帶負電的殘基的氨基酸，Xaa代表任何氨基酸殘基，和Gly代表甘氨酸殘基。
全文摘要
本發(fā)明提供含有氨基酸序列通式(Ⅰ):A
文檔編號C07K7/06GK1246125SQ9880214
公開日2000年3月1日 申請日期1998年1月29日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月31日
發(fā)明者S·貝拉克, R·霍姆達爾, A·米奇森 申請人:阿斯特拉公司