專利名稱：一種用作生長激素促分泌素的取代二肽的酒石酸鹽的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及2-氨基-N-{1-(R)-(2,4-二-氟-卞氧甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-(R)-吡啶-2-基甲基-2-(2,2,2-三氟-乙基)-2,3,3a,4,6,7-六氫化-吡唑[4,3-c]吡啶-5-基]-乙基}-2-甲基-丙酰胺的(L)-(+)-酒石酸鹽，它是一種生長激素促分泌素。
生長激素(GH)是由腺垂體分泌的，它刺激機體各種可生長組織的生長。另外，已知生長激素對機體的新陳代謝有以下基本作用1、促進實際上機體所有細胞蛋白質(zhì)的合成；2、抑制機體細胞碳水化合物的利用；以及3、增加游離脂肪酸的動員和脂肪酸的利用而提供能力。
生長激素缺乏導(dǎo)致各種疾病。兒童可發(fā)生侏儒癥。在成人中獲得性GH缺乏可造成機體非脂肪物質(zhì)的顯著減少，并伴隨機體總脂肪的增加，特別是在軀干部分。骨骼肌和心肌質(zhì)量以及肌肉力量的減少導(dǎo)致運動能力的明顯下降。骨密度也下降。已經(jīng)觀察到外源性生長激素的應(yīng)用可逆轉(zhuǎn)許多代謝的改變。治療的其他益處包括LDL膽固醇的下降和心理健康的改善。
假如需要生長激素的水平提高，通常是通過提供外源性生長激素，或者是通過應(yīng)用可刺激生長激素生成和/或釋放的藥物來解決這個問題。在這兩種情況下，此化合物的肽基性質(zhì)決定它需要通過注射來給藥。開始生長激素來源于尸體腺垂體的提取。這種產(chǎn)品比較昂貴，而且還伴隨著一種危險，即與腺垂體來源相關(guān)的疾病有可能傳遞給生長激素的接受者(例如克羅伊茨費爾特-雅各布綜合征)。近來，已經(jīng)可以應(yīng)用重組生長激素，盡管這樣不再伴隨疾病傳播的危險，但這種產(chǎn)品仍然非常昂貴，而且它必須通過注射劑或鼻氣霧劑來給藥。
大多數(shù)GH缺乏是由于GH分泌的缺陷，而不主要是垂體GH合成的缺陷。因此，使血清GH正常的替代方法是刺激它從親軀體細胞的釋放。通過刺激或抑制大腦和下丘腦中的各種神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)可獲得GH分泌的增加。所以正在開發(fā)可刺激垂體GH分泌的合成生長激素釋放劑，而且它對于昂貴且不一致的GH取代療法具有多種優(yōu)勢。由于這是通過生理調(diào)節(jié)途徑來起作用，所以大多數(shù)合乎需要的藥物可刺激搏動的GH分泌，并且憑借完整的負反饋環(huán)可避免GH水平的過高，而GH水平過高與應(yīng)用外源性GH的副作用有關(guān)。
GH分泌的生理和藥理刺激素包括精氨酸、L-3,4-二羥苯丙氨酸(L-DOPA)、胰高血糖素、后葉加壓素，并且胰島素誘導(dǎo)的血糖過低癥，以及諸如睡眠和運動的活動可間接地引起生長激素從垂體的釋放，它是通過某種方式作用于下丘腦，以減少生長激素釋放抑制因子的分泌，或增加已知促分泌生長激素釋放因子(GHRF)或未知內(nèi)源性生長激素釋放激素，或者它們所有的分泌。
本發(fā)明還涉及一種治療胰島素抵抗狀態(tài)的方法，胰島素抵抗狀態(tài)例如為非胰島素依賴性糖尿病(NIDD)和與哺乳動物的肥胖和衰老相關(guān)的血糖下降調(diào)節(jié)。所需要的這種方法包括將有效量的式I化合物的L-(+)-酒石酸鹽應(yīng)用于所提到的哺乳動物。式I化合物如下所示。
已經(jīng)開發(fā)了其他刺激內(nèi)源性生長激素釋放的化合物，諸如與GRF相關(guān)的肽基類似化合物或美國專利4,411,890的肽。這些肽明顯小于生長激素，還對各種蛋白酶敏感。對于大多數(shù)肽來說，它們的口服生物利用度的潛能是比較低的。
WO 94/13696提到某種螺旋哌啶和同系物，它們可促進生長激素的釋放。優(yōu)選化合物的通用結(jié)構(gòu)如下
WO 94/11012提到可促進生長激素釋放的某種二肽。這些二肽的通用結(jié)構(gòu)如下 其中L為 據(jù)報道WO 94/11012和WO 94/13696的化合物與甲狀旁腺激素或一種雙膦酸鹽聯(lián)合應(yīng)用可治療骨質(zhì)疏松癥。
公開了本申請的式I化合物藥物可接受鹽的一般說明書，而且公開了本發(fā)明的式I化合物的游離堿，并對其進行了權(quán)利要求，以上內(nèi)容在同時待審的PCT申請No.PCT/IB 96/01353(國際申請日期為1996年12月4號，并轉(zhuǎn)讓給本發(fā)明的受讓人)中。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)下面式I化合物的L-(+)-酒石酸鹽可以結(jié)晶的形式進行分離，這種形式具有如下優(yōu)勢諸如容易制成一種制劑、有較高的溶解性和良好的穩(wěn)定性，并且它比非結(jié)晶形式更易于提純。
本發(fā)明的總結(jié)本發(fā)明提供式I化合物的L-(+)-酒石酸鹽。 其中“*”是指一個立體化學(xué)中心。式I化合物優(yōu)選為立體化學(xué)混合物或分離的異構(gòu)體，其異構(gòu)體的構(gòu)型為3a-(S)，1-(R)；3a-(S),1-(S)；3a-(R),1-(S)和/或3a-(R),1-(R)異構(gòu)體。
本發(fā)明還提供制備式(E)化合物(D)-酒石酸鹽或(L)-酒石酸鹽的方法， 此方法包括在0℃與室溫之間，在約8∶1至9∶1的丙酮∶水的混合物中將式(D)化合物與(D)-酒石酸或(L)-酒石酸反應(yīng)。

前面方法優(yōu)選為(D)-酒石酸與式(D)化合物反應(yīng)，式(E)化合物具有R-構(gòu)型；式(J)化合物的制備方法， 此方法包括在大約-78℃至-20℃的溫度下，在有機堿和肽偶合劑的存在下將式(E)化合物與式(X)化合物反應(yīng)， 其中Prt為一個胺保護基，X為OH、-O(C1-C4)烷基或鹵素。剛在前面所述的方法優(yōu)選是肽偶合劑為1-丙烷膦酸環(huán)酐，式(X)化合物具有R-構(gòu)型，并且式(E)化合物具有R-構(gòu)型。而且更優(yōu)選的是剛在前面所述的方法中的Prt為叔-丁氧基羰基；和制備式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽的方法， 此方法包括在大約-78℃至-20℃的溫度下，在有機堿和肽偶合劑的存在下將式(E)化合物與式(X)化合物反應(yīng)，以生成式(J)化合物， 其中Prt為一個胺保護基，X為OH、-O(C1-C4)烷基或鹵素， 在適宜的去保護條件下將式(J)化合物去保護而生成式(K)化合物， (K)在一種反應(yīng)惰性溶劑中將式(K)化合物與(L)-(+)-酒石酸反應(yīng)而產(chǎn)生式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。前面剛述的方法中Prt優(yōu)選為叔-丁氧基羰基，更優(yōu)選的是肽偶合劑為1-丙烷膦酸環(huán)酐，并且式I化合物具有3a-(R),1-(R)的絕對和相對構(gòu)型。
另一方面，本發(fā)明還提供式 化合物的R,S-對映體混合物、R-對映體或S-對映體，在此優(yōu)選(D)-酒石酸鹽或(L)-酒石酸鹽；式 化合物的3a-(R,S),1-(R)非對映體混合物、3a-(R),1-(R)非對映體或3a-(S),1-(R)非對映體，在此Prt為一種胺保護基，它選自t-BOC、FMOC和CBZ組成的組；和式 化合物的R,S-對映體混合物、R-對映體或S-對映體；式 化合物的R,S-對映體混合物、R-對映體或S-對映體，在此X為OH、-O(C1-C4)烷基或鹵素，Prt為一個胺保護基；并且優(yōu)選X為OH，Prt為BOC，立構(gòu)中心在R-構(gòu)型中。
在另一方面，本發(fā)明提供(其中的式(I)化合物如上所示)提高人或其他動物的內(nèi)源性生長激素水平的方法，它包括給予此人或動物有效量的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽；藥物組合物，它包括藥物可接受的載體和一定量的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽；用于增加人或其他動物生長激素內(nèi)源性生成或釋放的藥物組合物，它包括藥物可接受的載體、有效量的權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，以及生長激素促分泌素。其中生長激素促分泌素選自GHRP-6、Hexarelin、GHRP-1、生長激素釋放因子(GRF)、IGF-1、IGF-2和B-HT920或其類似物；治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的方法，它包括給予需要此治療或預(yù)防的人或其他動物一定量的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，此藥物可有效地治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥；治療或預(yù)防可由生長激素治療或預(yù)防的疾病或狀態(tài)的方法，它包括給予需要此治療或預(yù)防的人或其他動物一定量的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，此藥物可有效地促進內(nèi)源性生長激素的釋放；此方法中的疾病或狀態(tài)優(yōu)選為充血性心力衰竭、肥胖或與衰老有關(guān)的虛弱；此方法中的疾病或狀態(tài)也優(yōu)選為充血性心力衰竭；此方法中的疾病或狀態(tài)進一步優(yōu)選為與衰老有關(guān)的虛弱；促進骨折修復(fù)、減輕大手術(shù)后的蛋白分解反應(yīng)、減輕慢性疾病所致的惡病質(zhì)和蛋白丟失、促進傷口修復(fù)或促進燒傷患者或經(jīng)歷大手術(shù)的患者的康復(fù)的方法。此方法包括給予需要此治療的哺乳動物一定量的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，此藥物可有效地促進內(nèi)源性生長激素的釋放。此方法優(yōu)選用于促進經(jīng)歷大手術(shù)患者的康復(fù)；此方法也優(yōu)選用于促進骨折的修復(fù)；提高肌肉力量及可動性、皮膚厚度(thickness)的維持、代謝自身穩(wěn)定或腎自身穩(wěn)定維持的方法，此方法包括給予需要此治療的人或其他動物一定量的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，此藥物可有效地促進內(nèi)源性生長激素的釋放；治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的方法，它包括給予患有骨質(zhì)疏松癥的人或其他動物有效量的雙膦酸鹽和式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽；治療骨質(zhì)疏松癥的方法中優(yōu)選的雙膦酸鹽化合物為ibandronate；治療骨質(zhì)疏松癥的方法中優(yōu)選的雙膦酸鹽化合物為alendronate治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的方法，它包括給予患有骨質(zhì)疏松癥的人或其他動物有效量的雌激素或妊馬雌酮和式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，以及孕酮(可任意選擇)；治療骨質(zhì)疏松癥的方法，它包括給予患有骨質(zhì)疏松癥的人或其他動物有效量的降鈣素和式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽；提高缺乏IGF-1的人或其他動物IGF-1水平的方法，它包括給予缺乏IGH-1的人或其他動物有效量的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽；治療骨質(zhì)疏松癥的方法，它包括給予患有骨質(zhì)疏松癥的人或其他動物有效量的雌激素興奮劑或?qū)箘┖褪絀化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽；此方法中優(yōu)選的雌激素興奮劑或?qū)箘樗舴?、屈洛昔芬、雷洛昔芬或idoxfene；此方法中優(yōu)選的雌激素興奮劑或?qū)箘┮矠轫樖?6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；(-)-順式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；順式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；順式-1-[6’-吡咯烷子基(pyrrolodino)乙氧基-3’-吡啶基]-2-苯基-6-羥基-1,2,3,4-四氫-萘；1-[4’-吡咯烷子基(pyrrolidino)乙氧基苯基]-2-(4”-氟苯基)-6-羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉；順式-6-(4-羥苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇或1-(4’-吡咯烷子基(pyrrolidino)乙氧基苯基)-2-苯基-6-羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉；增加肌肉質(zhì)量的方法，此方法包括給予需要這種治療的人或其他動物有效量的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽；促進生長激素缺乏的兒童發(fā)育的方法，此方法包括給予生長激素缺乏的兒童有效量的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽；治療哺乳動物胰島素抵抗的方法，此方法包括給予所說哺乳動物有效量的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽；此方法中與胰島素抵抗相關(guān)的狀態(tài)優(yōu)選為Ⅰ型糖尿病、Ⅱ型糖尿病、高血糖、葡萄糖耐量下降或胰島素抵抗綜合征；此方法中與胰島素抵抗相關(guān)的狀態(tài)也優(yōu)選為肥胖或老年；提高內(nèi)源性生長激素水平的方法，此方法包括給予需要的人或其他動物有效量的功能性生長激素釋放抑制因子拮抗劑和式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽；此方法中功能性生長激素釋放抑制因子拮抗劑優(yōu)選為α-2腎上腺素能興奮劑；和治療或預(yù)防充血性心力衰竭、肥胖或與衰老相關(guān)的虛弱的方法，此方法包括給予需要的人或其他動物有效量的功能性生長激素釋放抑制因子拮抗劑和式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
這種式I的化合物促進生長激素的釋放、它在各種生理條件下是穩(wěn)定的，而且可通過胃腸外、經(jīng)鼻或口服給藥。
本發(fā)明的詳細說明可通過下面的方法制備式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，此方法包括化合物生產(chǎn)的化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域中已熟知的方法。生產(chǎn)式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽的某些方法可作為本發(fā)明進一步的特征，并且通過反應(yīng)圖解對其進行了說明，它們顯示如下。
下面所示是本發(fā)明化合物的絕對和相對構(gòu)型 它表示為3a-(R),1-(R)構(gòu)型?？赏ㄟ^下面所述的方法來制備它。
在闡明生長激素分泌是怎樣在垂體水平進行調(diào)節(jié)方面，釋放生長激素的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽可用作體外唯一的一種工具。這包括在評價影響生長激素分泌的許多已知或設(shè)想的因素中的應(yīng)用，這些因素諸如年齡、性別、營養(yǎng)因素、葡萄糖、氨基酸、脂肪酸，以及禁食和非禁食狀態(tài)。另外，式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽可用于評價其它激素是怎樣改變生長激素的分泌活動的。例如，已經(jīng)證實生長激素釋放抑制因子抑制生長激素釋放。
式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽可用于動物(包括人)，它在體內(nèi)引起生長激素的釋放。式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽可用于治療與GH缺乏有關(guān)的癥狀；可刺激提供肉產(chǎn)品的動物的生長，或提高喂養(yǎng)效率以改善生肉質(zhì)量；可提高牛奶廠的奶收率；可改善骨或傷口的痊愈；并且可改善重要器官的功能。式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽通過誘導(dǎo)內(nèi)源性GH分泌，可改變機體成分，并且可改變其它GH依賴的代謝、免疫或發(fā)育過程。例如，可將本發(fā)明的化合物用于家禽、火雞、飼養(yǎng)動物(諸如羊、豬、馬、牛等)、家養(yǎng)動物(例如狗)，或者可用于水產(chǎn)養(yǎng)殖以促進魚的生長并改善其蛋白/脂肪比。另外，可將式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽給予人，用作直接確定垂體是否能釋放生長激素的診斷工具。例如，可將式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽應(yīng)用于兒童?？蓽y定給藥前后血清樣本的生長激素。比較這些樣本的生長激素的量，它可作為直接測定患者垂體釋放生長激素能力的方法。
本發(fā)明在其范圍內(nèi)還相應(yīng)地包括藥物組合物，它含有與藥物可接受的載體聯(lián)合的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，其中此式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽為活性組分。除了式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽以外，此藥物組合物還可任選地含有一種合成代謝劑，或者具有不同活性的其它化合物，例如一種抗菌生長permittant或一種可治療骨質(zhì)疏松癥的藥物，或者與其它藥物活性原料合用，這種合用可提高療效并減小副作用。
生長促進和合成代謝劑在本領(lǐng)域是眾所周知的，它們包括TRH、PTH、己烯雌酚、雌激素、β-興奮劑、茶堿、促蛋白合成甾類、腦菲肽、E組前列腺素、美國專利3,239,345(此說明書在此作為參考)中公開的化合物(例如zeranol)、美國專利4,036,979(此說明書在此作為參考)中公開的化合物(例如氧苯噻脲)以及美國專利4,411,890(此說明書在此作為參考)公開的肽。
與其它生長激素促分泌素(諸如美國專利4,411,890(其說明書在此作為參考)、WO 89/07110、WO 89/07111說明書中所述的生長激素釋放肽GHRP-6和GHRP-1，和B-HT920以及hexarelin和WO 93/04081中所述的新發(fā)現(xiàn)的GHRP-2或生長激素釋放激素(GHRH，也表示為GRF)及其類似物)合用的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，或者生長激素及其類似物或包括IGF-1和IGF-2的促生長因子或腎上腺素能興奮劑，諸如可樂定、甲苯噻嗪、地托咪定和美托咪定(可樂定、甲苯噻嗪和美托咪定分別公開于美國專利3,202,660、3,235,550和4,544,664中，它們的說明書在此均作為參考。)或者諸如sumitriptan的5-羥色胺5HTID興奮劑，或諸如毒扁豆堿和吡啶斯的明的抑制生長激素釋放抑制因子或其釋放的藥劑可用于提高哺乳動物的內(nèi)源性GH水平。與GRF合用的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽可導(dǎo)致內(nèi)源性生長激素的協(xié)同性升高。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員已經(jīng)熟知，生長激素的已知或潛在的用途是多種多樣的[參見《人的生長激素》，Strobel和Thomas,藥理學(xué)綜述，46,1-34頁(1994)；T.Rosen等,Horm Res,1995；43:93-99頁；M.Degerblad等，《歐洲內(nèi)分泌學(xué)雜志》，1995,133:180-188頁；J.O.Jorgensen，《歐洲內(nèi)分泌學(xué)雜志》，1994,130:224-228頁；K.C.Copeland等，《臨床內(nèi)分泌與代謝雜志》，78卷，第5期，1040-1047頁；J.A.Aloi等，《臨床內(nèi)分泌與代謝雜志》，79卷，第4期，943-949頁；F.Cordido等，Metab.Clin.Exp.,(1995),44(6),745-748頁；K.M.Fairhall等,J.Endocrinal.,(1995),145(3),417-426頁；RM.Frieboes等，《神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)》，(1995),61(5),584-589頁和M.Liovera等，Int.J.Cancer,(1995),61(1),138-141頁]。因此式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽刺激內(nèi)源性生長激素釋放，它具有與生長激素相同的效果和作用。這些生長激素不同的作用可總結(jié)如下刺激老年人生長激素的釋放；治療成人生長激素缺乏癥；預(yù)防糖皮質(zhì)激素分解代謝的副作用；治療骨質(zhì)疏松癥；刺激免疫系統(tǒng)；促進傷口愈合；促進骨折修復(fù)；治療發(fā)育遲緩；根據(jù)PCT公布WO 95/28173和WO 95/28174所公開的治療充血性心力衰竭(R.Yang等在《循環(huán)》，92卷，第2期，262頁，1995中公開了一種測定生長激素促分泌素治療充血性心力衰竭的功效的方法的一種實例)；治療急性或慢性腎功衰竭或不全；治療生理性低矮，包括生長激素缺乏的兒童；治療與慢性疾病相關(guān)的低矮；治療肥胖；治療與Prader-Willi綜合征和特納綜合征相關(guān)的發(fā)育遲緩；加快燒傷患者或接受諸如消化道外科的大型外科手術(shù)患者的康復(fù)，并縮短其住院期；治療宮內(nèi)發(fā)育遲緩、骨骼發(fā)育不良、腎上腺皮質(zhì)功能亢進和庫欣綜合征；替換精神緊張患者的生長激素；治療骨軟骨發(fā)育不良、Noonans綜合征、睡眠紊亂、阿爾茨海默病、傷口延遲愈合和心理隔絕；治療肺功能不良和呼吸機依賴；減輕大手術(shù)后的蛋白分解反應(yīng)；治療吸收障礙綜合征；減輕如癌癥或AIDS等慢性疾病引起的惡病質(zhì)和蛋白低下；促進接受TPN(全胃腸外營養(yǎng))患者的體重增加和蛋白質(zhì)增加；治療包括胰島細胞增殖癥的高胰島素血癥；用于排卵誘導(dǎo)和胃與十二指腸潰瘍的預(yù)防和治療的輔助治療；刺激胸腺發(fā)育和預(yù)防年齡相關(guān)的胸腺功能下降；用于慢性血液透析患者的輔助治療；治療免疫抑制的患者，并增強疫苗注射后的抗體反應(yīng)；提高老年虛弱者肌肉力量、增加肌肉量和機動性、保持皮膚厚度、維持代謝平衡和腎功穩(wěn)定；刺激成骨細胞，骨重成型和軟骨生長；治療神經(jīng)疾病，諸如末梢神經(jīng)病和藥物誘導(dǎo)的神經(jīng)病、急性感染性多神經(jīng)炎、肌萎縮性側(cè)索硬化、多發(fā)性硬化、腦血管意外和脫髓鞘疾病；刺激家養(yǎng)動物的免疫系統(tǒng)，并治療家養(yǎng)動物衰老性疾??；加快牲口的生長；以及刺激羊毛的生長。
本領(lǐng)域技術(shù)人員已知現(xiàn)在有許多化合物用于治療上面所列舉疾病或治療適應(yīng)癥。這些治療藥劑(某些在上面已經(jīng)提到)與生長促進劑的聯(lián)合應(yīng)用具有這些不同治療藥劑的合成代謝的特性和所需的特性。在這些聯(lián)合應(yīng)用中，可在一種劑量水平的1/100至1倍的劑量范圍內(nèi)，將此治療藥劑和式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽進行獨立和連續(xù)給藥，或者進行聯(lián)合給藥，此一種劑量水平指這些化合物和促分泌素單獨應(yīng)用時有效的劑量。通過雙膦酸鹽與式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽聯(lián)合應(yīng)用可進行聯(lián)合治療，此聯(lián)合治療可抑制骨吸收、預(yù)防骨質(zhì)疏松癥、減少骨折、提高骨折的治愈、刺激骨形成、以及增加骨礦質(zhì)密度。參見PCT WO 95/11029的公布，它討論的是雙膦酸鹽與GH促分泌素的聯(lián)合治療。例如Hamdy,N.A.T.在《雙膦酸鹽在代謝性骨病中的作用》,Trend in Endocrinol.Metab.,1993,4,19-25頁中已經(jīng)對雙膦酸鹽在這些方面的應(yīng)用進行了綜述。具有這方面用途的雙膦酸鹽包括alendronate、tiludronat、二甲基-APD、risedronate、etidronate、YM-175、clodronate、pamidronate和BM-210995(ibandronate)，但并不僅限于這些。根據(jù)它們的藥效，給患者應(yīng)用每天口服劑量為0.1mg至5g的雙膦酸鹽和每天劑量為0.01mg/kg體重至20mg/kg體重的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，以取得對骨質(zhì)疏松癥有效的治療。
式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽可與哺乳動物的雌激素興奮劑/對抗劑聯(lián)合應(yīng)用。任意雌激素興奮劑/對抗劑都可用作本發(fā)明這方面的第二種化合物。術(shù)語雌激素興奮劑/對抗劑是指可與雌激素受體結(jié)合、抑制骨更新和預(yù)防骨丟失的化合物。特別是，雌激素興奮劑在此定義為可與哺乳動物組織中的雌激素受體結(jié)合，并模擬一個或多個組織中雌激素作用的化學(xué)化合物。雌激素對抗劑在此定義為可與哺乳動物組織中的雌激素受體結(jié)合，并阻斷一個或多個組織中雌激素作用的化學(xué)化合物。按照標準的測定方法本領(lǐng)域的技術(shù)人員可容易地測定這種活性。這些標準的測定方法包括雌激素受體結(jié)合測定法、標準骨組織形態(tài)測定法和密度測定法(參見Eriksen E.F.等，《骨組織形態(tài)測定法》，Raven出版社，紐約，1994,1-74頁；Grier S.J.等，《雙能X線吸收測定法在動物中的應(yīng)用》，Inv.Radiol.,1996,31(1):50-62；Wahner H.W.和Fogelman I.,《骨質(zhì)疏松癥的評價臨床中的雙能X線吸收測定法》,Martin Dunitz Ltd.，倫敦，1994,1-296頁)。下面對這些用作參考的各種各樣的化合物進行描述。但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)能熟知其它的雌激素興奮劑/對抗劑。一種優(yōu)選的雌激素興奮劑/對抗劑是屈洛昔芬(酚，3-[1-[4[2-(二甲氨基)乙氧基]-苯基]-2-苯基-1-丁烯基]-，(E)-)和相關(guān)的化合物，此化合物公開于美國專利5,047,43中，其說明書也在此作為參考。
另一個優(yōu)選的雌激素興奮劑/對抗劑為他莫昔芬(乙胺，2-[-4-(1,2-二苯基-1-丁烯基)苯氧基]-N,N-二甲基，(Z)-2-,2-羥基-1,2,3-丙三-羧酸酯(1∶1))和相關(guān)的化合物，這些化合物公開于美國專利4,536,516中，其說明書在此用作參考。另一個相關(guān)的化合物為4-羥基他莫昔芬，它公開于美國專利4,623,660中，其說明書在此用作參考。
另一個優(yōu)選的雌激素興奮劑/對抗劑為雷洛昔芬(甲酮，[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-，鹽酸化物)和相關(guān)的化合物，這些化合物公開于美國專利4,418,068中，其說明書在此用作參考。
另一個優(yōu)選的雌激素興奮劑/對抗劑為idoxifene吡咯烷，1-[-[4-[[1-(4-碘苯基)-2-苯基-1-丁烯基]苯氧基]乙基]和相關(guān)的化合物，這些化合物公開于美國專利4,839,155中，其說明書在此用作參考。
其它優(yōu)選的雌激素興奮劑/對抗劑包括通常指定的美國專利5,552,412中所述的化合物，其說明書在此用作參考。尤其優(yōu)選的本文描述的化合物為順式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；(-)-順式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；順式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；順式-1-[6’-吡咯烷子基(pyrrolodino)乙氧基-3’-吡啶基]-2-苯基-6-羥基-1,2,3,4-四氫萘；1-(4’-吡咯烷子基(pyrrolidino)乙氧基苯基)-2-(4”-氟苯基)-6-羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉；順式-6-(4-羥基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；和1-(4’-吡咯烷子基(pyrrolidino)乙氧基苯基)-2-苯基-6-羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉。
美國專利4,133,814中描述了其它的雌激素興奮劑/對抗劑(其說明書在此用作參考)。美國專利4,133,814公開了2-苯基-3-芳?；?苯并噻吩和2-苯基-3-芳?；讲⑧绶?1-氧化物的衍生物。
下面段落提供了不同抗吸收劑的優(yōu)選劑量范圍。
通過它作為一種骨丟失抑制劑的活性來確定所用抗吸收劑的量。應(yīng)用一種方案(諸如上面所參考的那些)，通過單個化合物的藥物動力學(xué)及其抑制骨丟失的最小最大有效劑量而測定這種活性。
通常對于雌激素興奮劑/對抗劑(當與本發(fā)明的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽聯(lián)合應(yīng)用時)，例如在骨質(zhì)疏松癥的治療中，本發(fā)明活性的有效劑量為0.01至200mg/kg/天，優(yōu)選為0.5至100mg/kg/天。
特別是屈洛昔芬的有效劑量為0.1至40mg/kg/天，優(yōu)選為0.1至5mg/kg/天。
特別是雷洛昔芬的有效劑量為0.1至100mg/kg/天，優(yōu)選為0.1至10mg/kg/天。
特別是他莫昔芬的有效劑量為0.1至100mg/kg/天，優(yōu)選為0.1至5mg/kg/天。
特別是順式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；(-)-順式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；順式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；順式-1-[6’-吡咯烷子基乙氧基-3’-吡啶基]-2-苯基-6-羥基-1,2,3,4-四氫萘；1-(4’-吡咯烷子基乙氧基苯基)-2-(4”-氟苯基)-6-羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉；順式-6-(4-羥基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；和1-(4’-吡咯烷子基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉的有效劑量為0.0001至100mg/kg/天，優(yōu)選為0.001至10mg/kg/天。
特別是4-羥基他莫昔芬的有效劑量為0.0001至100mg/kg/天，優(yōu)選為0.001至10mg/kg/天。
GH從大鼠垂體細胞釋放的刺激作用的測定應(yīng)用下面的方案來鑒定能夠刺激GH從培養(yǎng)的大鼠垂體細胞分泌的化合物。此試驗也用于與標準進行比較以確定劑量水平。從6周齡的雄性Wistar大鼠的垂體分離細胞。進行斷頭術(shù)后，將垂體前葉放入冷的不含鈣或鎂的無菌Hank平衡鹽溶液(HBSS)中。細細地將組織切碎，然后在HBSS中用10U/ml細菌蛋白酶(EC 3.4.24.4,Sigma P-6141，圣路易斯，密蘇里)給此組織進行兩輪機械輔助酶分散。在37℃左右的5％CO2環(huán)境下，以30rpm在旋轉(zhuǎn)燒瓶中將組織-酶混合物攪拌約30分鐘，大約15分鐘和30分鐘后用10mL吸移管進行手工研制。以200×g將此混合物離心約5分鐘。將馬血清(35％終濃度)加入上層清液以中和過剩的蛋白酶。在新鮮蛋白酶(10U/mL)中再懸浮此丸，在前面的條件下攪拌約30分鐘以上，最終通過23式針進行手工研制。再一次加入馬血清(35％終濃度)，然后聯(lián)合兩個水解液的細胞，制成小丸(200×g約15分鐘)，在培養(yǎng)介質(zhì)(添加了4.5g/L葡萄糖、10％馬血清、2.5％牛胎血清、1％非必需氨基酸、100U/mL制霉菌素和50mg/mL硫酸慶大霉素的Dulbecco改良Eagle介質(zhì)(D-MEM),Gibco,Grand Island，紐約)中再懸浮，并計數(shù)。以6.0-6.5×104/cm2細胞，將細胞置于48孔CostarTM(劍橋，馬塞諸塞)平皿中，并在培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)3-4天。
在進行GH分泌測定之前，用釋放介質(zhì)將培養(yǎng)池沖洗兩遍，然后在釋放介質(zhì)(在37℃用25mM Hepes緩沖的D-MEM，PH值為7.4，并且含有0.5％牛血清白蛋白)中平衡30分鐘。將實驗化合物溶解在DMSO中，然后在預(yù)熱的培養(yǎng)介質(zhì)中進行稀釋。實驗進行四次。實驗開始是將0.5ml釋放介質(zhì)(含賦形劑或?qū)嶒灮衔?加入每個培養(yǎng)池中。培養(yǎng)在大約37℃進行15分鐘，然后取出釋放介質(zhì)而終止培養(yǎng)，將此釋放介質(zhì)在2000×g離心約15分鐘以除去細胞物質(zhì)。通過下面描述的一種標準放射免疫測定方案來測定上清液中的大鼠生長激素的濃度。
大鼠生長激素的測定應(yīng)用從Dr.A.Parlow(Harbor-UCLA醫(yī)療中心，Torrence,CA)獲得的大鼠生長激素參考制劑(NIDDK-rGH-RP-2)和在猴中產(chǎn)生的大鼠生長激素抗血清(NIDDK-anti-rGH-S-5)，通過雙抗體放射免疫測定法測定大鼠生長激素的濃度。將另外的大鼠生長激素(1.5U/mg,#G2414,Scripps Labs,SanDiego,CA)進行碘化而使其具有約為30μCi/μg的特殊活性，通過氯胺T方法而用作示蹤物。加入抗猴IgG山羊抗血清(ICN/Cappel,Aurora,OH)加聚氧乙烯，分子量為10,000-20,000，至終濃度為4.3％而獲得免疫復(fù)合物。通過離心完成回收。此測定的工作范圍為在基礎(chǔ)水平上，每試管的大鼠生長激素為0.08-2.5μg。
實驗化合物靜脈內(nèi)給藥后大鼠的外源性刺激生長激素釋放的測定在進行化合物實驗前，使21天大的Sprague-Dawley雌性大鼠(CharlesRiver Laboratory,Wilmington,MA)適應(yīng)本地的飼養(yǎng)環(huán)境(24℃,12小時的日光、12小時的黑夜循環(huán))大約1周。讓所有大鼠任意進食水和市售丸狀食物(Agway Country Food,Syracuse NY)。按照實驗動物飼養(yǎng)和應(yīng)用的NIH指南指導(dǎo)此實驗。
在實驗的那天，將實驗化合物溶解在含1％乙醇、1mM乙酸和含0.1％牛血清白蛋白的鹽水的賦形劑中。每個實驗都在3個大鼠中進行。對大鼠稱重，并經(jīng)腹膜內(nèi)注射戊巴比妥鈉(Nembutol,50mg/kg體重)進行麻醉。在麻醉給藥14分鐘后，切斷大鼠尾尖，使血滴入一個微離心試管中而采集血樣(基線血樣，大約100μl)。麻醉給藥15分鐘后，將實驗化合物通過尾靜脈注射給大鼠，總注射量為1ml/kg體重。在應(yīng)用化合物后的5、10和15分鐘分別從尾部采集另外的血樣。將血樣放置在冰上，直到經(jīng)離心(在10℃用1430×g離心10分鐘)分離血清。在-80℃保存血清，直至用上述放射免疫測定法進行血清生長激素的測定。
口服給藥后狗的外源性刺激生長激素釋放的評定給藥的當天稱出適宜量的實驗化合物，將其溶解在水中。按0.5-3mL/kg的量通過管飼法給2-4條狗給藥，此狗可接受每種劑量制度。在給藥前和給藥后的0.17、0.33、0.5、0.75、1、2、4、6、8和24小時，應(yīng)用含肝素鋰的5ml空針通過直接靜脈穿刺，從頸靜脈采集血樣(5ml)。將此制備的血漿保存在-20℃，直至進行分析。
犬生長激素的測定應(yīng)用從Dr.A.Parlow(Harbor-UCLA醫(yī)療中心，Torrence,CA)獲得的犬生長激素(碘化的抗原，和參考制劑AFP-1983B)和在猴中產(chǎn)生的犬生長激素抗血清(AFP-21452578)，通過一種標準放射免疫測定法方案測定犬生長激素的濃度。通過犬生長激素的氯胺T-碘化作用而形成示蹤物，其特殊活性為20-40μCi/μg。加入抗猴IgG山羊抗血清(ICN/Cappel,Aurora,OH)加聚氧乙烯，分子量為10,000-20,000，至終濃度為4.3％而獲得免疫復(fù)合物。通過離心完成回收。此測定的工作范圍為每試管的犬生長激素為0.08-2.5μg。
長期口服給藥后狗的犬生長激素和胰島素樣生長因子-1水平的評定使狗每天接受實驗化合物7至14天。在每天的給藥中，稱出適宜劑量的實驗化合物，比將其溶解在水中。通過管飼法按0.5-3mL/kg的量，給接受每種劑量制度的狗給藥。在0、3、7、10和14天采集血樣。在第0、7和14天的給藥前、給藥后的0.17、0.33、0.5、0.754、1、2、3、6、8、12和24小時，應(yīng)用含肝素鋰的5ml空針通過直接頸靜脈穿刺采集血樣(5ml)。將此制備的血漿保存在-20℃，直至進行分析。
雌性大鼠研究此研究評價用GHRP類似物長期治療對雌激素缺乏和雌激素充實的雌性大鼠的體重、身體成分和葡萄糖、胰島素、乳酸和脂類的非禁食血漿濃度的影響。在給藥的最后一天評定血清GH水平對GH釋放劑的靜脈給藥的急性反應(yīng)性。在整個治療期間每周監(jiān)測體重；另外，在治療結(jié)束時測定身體成分和葡萄糖、胰島素、乳酸、膽固醇和甘油三酯的血漿水平。
從Charles River實驗室(Wilmington,MA)獲得未交配雌性Sprague-Dawley大鼠，并在其大約12周大時對其進行雙側(cè)卵巢切除術(shù)(Ovx)或假手術(shù)(Sham)。對于假手術(shù)者，將其卵巢外置，并放回至腹腔中。手術(shù)后讓大鼠分別單獨住在標準飼養(yǎng)環(huán)境下(約24℃，約12小時日光/12小時黑夜循環(huán))的20cm×32cm×20cm的籠中。讓所有大鼠任意進食水和市售丸狀食物(Agway Prolab 3000,Agway Country Food,Inc.,Syracuse,NY)。按照實驗動物飼養(yǎng)和應(yīng)用的NIH指南指導(dǎo)此實驗。
手術(shù)后的7個月左右，對Sham和Ovx大鼠稱重，并隨機分組。將1ml的賦形劑(含1％乙醇的蒸餾去離子水)，0.5mg/kg或者5mg/kg的生長激素釋放劑每天通過經(jīng)口管飼法向大鼠給藥90天。在整個研究中每周對大鼠稱重。在最后一次給藥的24小時后，按照下面的步驟測定血清生長激素(GH)對實驗劑的急性反應(yīng)。用戊巴比妥鈉50mg/kg麻醉大鼠。對麻醉大鼠稱重，從其尾靜脈采集基線血樣(～100μl)。然后通過尾靜脈將1ml實驗劑(生長激素釋放劑或賦形劑)進行靜脈內(nèi)給藥。注射后的10分鐘左右，從其尾部采集第2份100μl的血樣。允許血液在4℃左右凝塊，然后以2000×g離心10分鐘左右。在-70℃左右保存血清。按照上述放射免疫測定法測定血清生長激素的濃度。此步驟后，通過雙能X線吸收測定法(DEXA,Hologic QDR 1000/W,Waltham MA)對每個麻醉大鼠進行全身掃描。通過心臟穿刺將最后的血樣采集在肝素化的試管中。通過離心分離血漿，并將其按上述方法冷凍保存。
應(yīng)用Binax公司(Portland,Maine)的試劑盒通過放射免疫測定法測定血漿胰島素。其測定間的可變性系數(shù)≤10％。分別應(yīng)用Abbott VPTM和VPSuper System自動分析儀(Abbott實驗室，Irving,Texas)、A-GentTM甘油三酯、膽固醇和葡萄糖試劑系統(tǒng)以及Sigma的乳酸試劑盒測定甘油三酯、總膽固醇、葡萄糖和乳酸的血漿水平。通過與賦形劑治療組的統(tǒng)計學(xué)分析(不成對的T試驗)，測定生長激素釋放肽(GHRP)或GHRP類似物(諸如式I化合物)的血漿胰島素、甘油三酯、總膽固醇和乳酸的下降活性。
式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽可通過口服、胃腸外(例如肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮下注射，或者植入)、鼻、陰道、直腸、舌下或表面給藥途徑給藥，并且可與藥物可接受的載體一起制備，以提供適宜于每種給藥途徑的給藥形式。
用于口服給藥的固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。在每種固體給藥形式中，式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽與至少一種惰性藥物可接受的載體(諸如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。如通常所進行的那樣，除了這種惰性稀釋劑外，此給藥形式還可包含另外的物質(zhì)，例如潤滑劑(諸如硬脂酸鎂)。在膠囊、片劑和丸劑中，此給藥形式也可含有緩沖劑。片劑和丸劑可另外包括腸溶衣。
用于口服給藥的液體劑型包括藥物可接受的包含在本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑(諸如水)的乳劑、溶液、懸浮劑、糖漿、酏劑。除了這種惰性稀釋劑外，組合物還可包括輔劑，諸如浸潤劑、乳化劑和懸浮劑，以及香化劑、增香劑和加香劑。
本發(fā)明用于胃腸外給藥的制劑包括無菌含水或不含水的溶液、懸浮劑或乳劑。不含水的溶劑或賦形劑的實例為丙二醇、聚氧乙烯、植物油(諸如橄欖油和玉米油)、凝膠和可注射的有機酯(諸如油酸乙酯)。這種給藥形式還可包含輔助劑，諸如防腐劑、浸潤劑、乳化劑和分散劑?？赏ㄟ^例如經(jīng)一種阻菌濾器過濾、通過將殺菌劑混合入此組合物、通過用放射線照射此組合物、或者通過加熱此組合物而使它們無菌。它們還可以無菌固體組合物的形式進行制備，此組合物可在應(yīng)用前立即溶解在無菌水或一些其它無菌注射介質(zhì)中。
用于直腸或陰道給藥的組合物優(yōu)選為栓劑。除了活性物質(zhì)外，此栓劑還可包含諸如柯卡黃油或栓劑蠟的賦形劑。
用于鼻或舌下給藥的組合物也可用本領(lǐng)域熟知的標準賦形劑進行制備。
本發(fā)明此組合物中的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽的劑量是可變的，需要其量進行這種變化，這樣才可獲得適宜的給藥形式。根據(jù)需要的治療效果、給藥途徑和療程選擇其劑量。通常用于人和其它動物(例如哺乳動物)的劑量水平為每天0.0001至100mg/kg體重，以獲得生長激素有效的釋放。
優(yōu)選的劑量范圍為每天0.01至5.0mg/kg體重，它可一次給藥或者分為多次來給藥。
下面的圖解說明式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽的合成。符號“*”表示一個立體化學(xué)中心。在圖解中“Prt”指本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的任意適宜的胺保護基。
下面描述在前面圖解中說明的反應(yīng)步驟。在下面的描述中，用優(yōu)選的胺保護基BOC來舉例說明胺保護基Prt。
步驟a在約0℃至室溫，優(yōu)選為0℃，將鹽酸吡啶甲基氯化物、一種碳酸鹽(諸如Li2CO3、CsCO3或優(yōu)選為碳酸鉀)和碘化鉀或碘化四丁銨加入在一種反應(yīng)惰性極性非質(zhì)子傳遞溶劑中的化合物A的溶液中，此極性非質(zhì)子傳遞溶劑諸如為丙酮、丁酮或優(yōu)選為DMF(二甲基甲酰胺)。在-20℃至70℃左右，優(yōu)選為0℃，攪拌約2至16小時，優(yōu)選為2小時，然后移去冰浴，加入DABCO(1,4-二氮雜二環(huán)[2.2.2]辛烷)。將反應(yīng)混合物攪拌15至30分鐘左右，然后將其倒入水和一種非極性有機溶劑的混合物中，此有機溶劑諸如為甲苯、乙醚或優(yōu)選為IPE(異丙醚)。分離有機層，用本領(lǐng)域所熟知的標準方法進行處理而產(chǎn)生化合物B。
步驟b一種70％CF3CH2NHNH2的水溶液用作在乙醇、水或甲苯中的一種水溶液，優(yōu)選用甲苯提取此70％CF3CH2NHNH2的水溶液。先將含有無水2,2,2-三氟乙基肼的甲苯提取液加入在一種有機溶劑(諸如乙醇或優(yōu)選為甲苯)中的化合物B的溶液中，然后加入乙酸。在約60℃-110℃，優(yōu)選為70℃，將此反應(yīng)混合物加熱約30分鐘至12小時，優(yōu)選為2小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并用一種諸如NaHCO3的含水堿中和。分離有機層，用本領(lǐng)域所熟知的標準方法進行處理而生成化合物C。
步驟c將一種酸加入在一種反應(yīng)惰性有機溶劑(諸如EtOH、IPE或優(yōu)選為CH2Cl2)中的化合物C的溶液中，此酸諸如為在IPE或乙醇中的HCl、三氟甲磺酸或一種諸如甲磺酸的烷基磺酸。將此混合物攪拌約1-2小時后，冷卻至約0℃至室溫，優(yōu)選為0℃，然后將一種諸如三乙胺或NH4OH的胺堿加入此混合物中。使此混合物升溫至室溫，用另外的有機溶劑稀釋，然后用本領(lǐng)域所熟知的標準方法處理而生成化合物D。
步驟d在室溫左右將(D)-或(L)-酒石酸，優(yōu)選為(D)-酒石酸加入化合物D的丙酮/水(約8∶1至9∶1)中。在室溫攪拌此混合物約15分鐘至過夜，優(yōu)選為過夜，過濾固體，收集并用冷丙酮進行沖洗，這樣就產(chǎn)生了式E的化合物，優(yōu)選化合物E為一種單對映體的(D)-酒石酸鹽。
步驟e在約0℃，將n-BuLi或叔丁氧化鉀溶液加入N-BOC-絲氨酸，優(yōu)選為N-BOC-(D)-絲氨酸(化合物F)的THF/DMF(約1∶1至2∶1)溶液中。在0℃左右將此反應(yīng)混合物攪拌約10-30分鐘，優(yōu)選為20分鐘，然后加入2,4-二氟芐基溴。在升溫至室溫并攪拌6-24小時左右后，在真空中濃縮此反應(yīng)混合物以除去THF，并加入諸如1N HCl的含水酸，將其PH值調(diào)節(jié)至3左右。然后在水和一種有機溶劑(諸如CH2Cl2或IPE)之間分配此反應(yīng)混合物。用本領(lǐng)域所熟知的標準方法處理此有機溶液，以產(chǎn)生化合物G，優(yōu)選在立體中心為R-構(gòu)型，亦即所謂的(D)-對映體。
步驟f將諸如甲磺酸的烷基磺酸加入在一種有機溶劑中的化合物G的溶液，此有機溶劑諸如為THF、CH2Cl2、IPE或它們的一種混合物，優(yōu)選為CH2Cl2/IPE(約1∶1)。過濾固體，并用CH2Cl2/IPE混合物(1∶1)沖洗，以生成化合物H，優(yōu)選其在立體中心為R-構(gòu)型，亦即所謂的(D)-對映體。
步驟g將2-叔-丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酸-2,5-二氧代-吡咯烷-1-基酯和諸如三乙胺的烷基胺加入化合物H的THF/水(約4∶1)溶液中。在室溫下攪拌此反應(yīng)混合物1-24小時左右，并用諸如10％檸檬酸水溶液的含水酸將其驟冷。用諸如乙酸乙酯的一種有機溶劑分配此混合物，然后分離有機層，并用本領(lǐng)域所熟知的標準方法進行處理而生成化合物X，優(yōu)選其在立體中心為R-構(gòu)型，亦即所謂的(D)-對映體。化合物X可為一種酸、烷基酯或?；u(X為OH、-O(C1-C4)烷基或鹵)，優(yōu)選為酸。
步驟h(a)在約-35℃至0℃，優(yōu)選為-6℃，將化合物E，優(yōu)選為單對映體的(D)-酒石酸鹽，加入乙酸乙酯。將此溶液冷卻至-30℃至-50℃左右，然后加入諸如三乙胺的一種烷基胺。在約-78℃與-20℃之間，攪拌此反應(yīng)混合物約30-90分鐘，并進行過濾而獲得化合物E的游離堿溶液。
(b)當化合物X中的X為OH時，在-78℃至-20℃左右，優(yōu)選在-35℃，將化合物X，優(yōu)選在立體中心為R-構(gòu)型的化合物X，加入一種反應(yīng)惰性有機溶劑，此有機溶劑諸如為含有從步驟h(a)中所得的化合物E的游離堿、一種諸如三乙胺的烷基胺，以及PPAA(1-丙烷膦酸環(huán)酐)(在乙酸乙酯中的含量為50％)的乙酸乙酯溶液。將反應(yīng)混合物攪拌約1-24小時，用本領(lǐng)域所熟知的標準方法進行測定而生成化合物J，優(yōu)選它具有絕對和相對3a-(R),1-(R)構(gòu)型。
當化合物X中的X為Cl時，在-78℃左右，將化合物X加入一種反應(yīng)惰性溶劑，此溶劑諸如為含有化合物E的游離堿和一種諸如三乙胺的烷基胺的二氯甲烷溶液。在約0-30℃將反應(yīng)混合物攪拌約1-24小時，然后用本領(lǐng)域所熟知的標準方法進行測定而生成化合物J，優(yōu)選它具有絕對和相對3a-(R),1-(R)構(gòu)型。
當化合物X中的X為-O(C1-C4)烷基(在此優(yōu)選為甲基)時，將化合物X加入在一種反應(yīng)惰性溶劑中的化合物E的游離或共軛堿溶液[通過將游離胺堿與適宜的試劑(即M=Li，丁基鋰或LDA；M=Na,NaH或NaH(SiMe3)2或M=K,KH或KN(SiMe3)2，或者M=Mg，任意烷基格利雅試劑，優(yōu)選為二乙基溴化鎂，或M=Al，任意三烷基鋁試劑，優(yōu)選為三甲基鋁)反應(yīng)而制備化合物E(-NM，其中M=Li、Na、K、Mg或Al，優(yōu)選為鋁)的共軛堿]，優(yōu)選為鋁，然后在約-20℃至110℃將反應(yīng)混合物攪拌約1-24小時，并用本領(lǐng)域所熟知的標準方法進行測定而生成化合物J，優(yōu)選它具有絕對和相對3a-(R),1-(R)構(gòu)型。
步驟i在約0℃至室溫將一種酸加入含化合物J的CH2Cl2、IPE或THF中，此酸諸如為含HCl的EtOH、甲磺酸或含三氟甲磺酸的CH2Cl2。在室溫下將此混合物攪拌約40分鐘至4小時，然后加入諸如NaHCO3的一種飽和含水堿，直到溶液的PH值為中性。分離有機層，用本領(lǐng)域所熟知的標準方法進行測定而生成化合物K，優(yōu)選其具有絕對和相對3a-(R),1-(R)構(gòu)型。
步驟j將L-(+)酒石酸加入在一種醇中的化合物K的溶液中，此醇優(yōu)選為甲醇。將反應(yīng)混合物攪拌約1-12小時，過濾并濃縮。用一種諸如乙酸乙酯的有機溶劑稀釋粗制殘余物，加熱并慢慢地使其冷卻至室溫。過濾固體，然后干燥而獲得為白色結(jié)晶的式I化合物的L-(+)酒石酸鹽，優(yōu)選其具有絕對和相對3a-(R),1-(R)構(gòu)型。
下面的實施例是為了進一步說明本發(fā)明，而不是要對本發(fā)明進行限制。
應(yīng)用硅膠進行柱色譜法。在Buchi 510儀器上測定熔點，并未進行校正。在25℃，在Varian XL-300、Bruker AC-300、Varian Unity 400或BrukerAC-250上記錄質(zhì)子NMR譜。以百萬分之幾的三甲硅烷的低磁場表示化學(xué)位移。
實施例12-氨基-N-{1-(2,4-二氟-芐氧甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2,2,2-三氟-乙基)-2,3,3a,4,6,7-六氫-吡唑子基(pyrazolo)[4,3-c]吡啶-5-基]-乙基｝-2-甲基-丙酰胺L-(+)酒石酸鹽A．4-氧代-3-吡啶-2-基甲基-哌啶-1,3-二羧酸1-叔-丁基酯3-乙酯在約0℃，將鹽酸吡啶甲基氯化物(5.7g,34.7mmol)、碳酸鉀(14.4g,104.1mmol)和碘化鉀(5.76g,34.7mmol)加入含4-氧代-哌啶-1,3-二羧酸1-叔-丁基酯3-乙酯(10.34g,38.2mmol)的DMF(40ml)溶液中。在0℃左右，攪拌約2小時，然后移去冰浴，加入DABCO(973mg,8.68mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘左右，然后將其倒入水和IPE的混合物中。分離有機層，并用飽和含水NaHCO3和飽和含水NaCl沖洗，通過Na2SO4干燥并在真空中濃縮。由己烷將此粗制殘余物進行結(jié)晶而獲得一種白色固體(8.19g，收率為65％)。1H-NMR(CDCl3)δ1.17(t,3H),1.48(s,9H),1.55(s,2H),2.61(m,1H),2.71(m,1H),3.31-3.50(m,3H),4.11(d,2H),4.49(d,1H),7.06(brs,1H),7.17(d,1H),7.54(m,1H),8.40(s,1H)。
B．3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,3a,4,6,7-六氫-吡唑子基[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔-丁基酯用甲苯(3×1200ml)提取70％CF3CH2NHNH2的水溶液(325ml,1.986mol)(從Aldrich獲得)。先將含有無水2,2,2-三氟乙基肼的結(jié)合甲苯提取液加入含步驟A中的產(chǎn)物(600g,1.655mol)的甲苯(900ml)溶液中，然后加入乙酸(121.4g,1.986mol)。在約70℃，將此反應(yīng)混合物加熱約2小時，然后加入另一份含70％含水2,2,2-三氟乙基肼(50g)的甲苯提取液。在約80℃將此反應(yīng)混合物加熱約3.5小時，然后冷卻至室溫，并用飽和含水NaHCO3(2L)稀釋。分離甲苯層，用飽和含水NaCl沖洗，通過Na2SO4干燥并在真空中濃縮而獲得一種油(754.8g)。由甲醇/水進行結(jié)晶而獲得白色固體的所需產(chǎn)物(609.5g)。1H-NMR(CDCl3)δ1.50(s,9H),2.53(d,1H),2.70(brs,2H),2.88(brs,1H),3.31(m,2H),3.97(m,1H),4.19(m,1H),4.46(brs,1H),4.63(brs,1H),7.06(m,2H),7.51(m,1H),8.34(m,1H)。
C．3a-吡啶-2-基甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3a,4,5,6,7-六氫-吡唑子基[4,3-c]吡啶-3-酮將甲磺酸(11.6g,121mmol)在30分鐘以上的時間內(nèi)逐滴加入含步驟B所得產(chǎn)物(10g,24.2mmol)的CH2Cl2(100ml)溶液中。將此混合物攪拌約1小時后，冷卻至約0℃，然后通過一個添加漏斗將三乙胺(18.6ml,133.1mmol)加入此混合物中。在1小時以上使此混合物升溫至室溫，用另外的CH2Cl2進行稀釋，然后用飽和含水NaCl沖洗，通過Na2SO4干燥，過濾并在真空中濃縮而獲得一種白色固體(7.2g)。1H-NMR(CDCl3)δ2.51-2.72(m,4H),3.35(m,2H),3.49(m,2H),4.03(m,1H),4.25(m,1H),7.08(d,2H),7.51(t,1H),8.37(d,1H)。
D．3a-吡啶-2-基甲基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3a,4,5,6,7-六氫-吡唑子基[4,3-c]吡啶-3-酮(D)-酒石酸鹽在17℃左右，在一個裝有機械攪拌器的干燥并用氮氣清洗的5L圓底燒瓶中，將(D)-酒石酸(129g,0.86mol)加入含步驟C所得的化合物(243g,0.78mol)的丙酮/水(約9∶1,2430ml)中。在室溫攪拌此混合物過夜，過濾固體，收集并用冷丙酮進行沖洗，在真空下干燥。獲得為黃色固體的產(chǎn)物(284g,收率為78.8％)。
E．2-叔-丁氧基羰基氨基-3-(2,4-二氟-芐氧基)-丙酸在約0℃，將叔丁氧化鉀溶液(515.8g,4.5963mol)加入含N-BOC-(D)-絲氨酸(452g,2.2026mol)的THF(7L)和DMF(3L)的混合物的溶液中。在0℃左右將此反應(yīng)混合物攪拌約30分鐘，然后加入2,4-二氟芐基溴(456.5g,2.2051mol)。在升溫至室溫后，在真空中濃縮此反應(yīng)混合物以除去THF。然后在4.5L水和4.5LIPE之間分配此反應(yīng)混合物。分離各層，并用1N HCl將含水層的PH值調(diào)節(jié)至3左右。各用4L IPE提取此含水層兩遍。通過Na2SO4干燥此有機溶液，并在真空中濃縮而獲得一種黃色蠟狀固體(518.0g,收率為70.9％)。1H-NMR(CDCl3)δ1.44(s,9H),3.73(m,1H),3.94(d,1H),4.44(brs,1H)，4.54(s,2H),5.34(m,1H),6.78(m,1H),6.84(m,1H),7.30(m,1H)。
F．2-氨基-3-(2,4-二氟-芐氧基)-丙酸，甲磺酸鹽在約10分鐘以上的時間內(nèi)通過一個注射管，將甲磺酸(1.72g,17.95mmol)加入含步驟E所得產(chǎn)物(1.19g,3.59mmol)的CH2Cl2/IPE(1∶1,12ml)的溶液中。溶液中立即沉淀出一種固體。約1小時后，過濾此固體，并用CH2Cl2/IPE混合物(1∶1)沖洗而獲得939mg的產(chǎn)物(收率為80％)。
G．2-(2-叔-丁氧基羰基氨基-2-甲基-丙酰氨基)-3-(2,4-二氟-芐氧基)-丙酸將2-叔-丁氧羰基氨基-2-甲基-丙酸-2,5-二氧代-吡咯烷-1-基酯(438mg,1.46mmol)和三乙胺(369mg,3.65mmol)加入含步驟F中所得的產(chǎn)物(520mg,1.46mmol)的THF/水(4∶1,10ml)的溶液中。在室溫下攪拌此反應(yīng)混合物1小時左右，并用10％檸檬酸水溶液(10ml)將其驟冷。約15分鐘后，加入乙酸乙酯(50ml)，然后分離有機層，并用飽和含水NaCl沖洗，通過Na2SO4干燥，并在真空中濃縮而獲得一種泡沫體(534.1mg，收率為88％)。1H-NMR(CD3OD)δ1.38(brs,15H),3.77(d,1H),3.92(d,1H),4.52(m,3H),6.92(m,1H),7.41(m,1H),7.58(d,1H)。
H．(1-{1-(2,4-二氟-芐氧甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2,2,2-三氟-乙基)-2,3,3a,4,6,7-六氫-吡唑子基[4,3-c]吡啶-5-基]-乙基氨基甲酰基}-1-甲基-乙基)-氨基甲酸叔-丁基酯(1)在約-6℃，在一個裝有機械攪拌器的干燥并用氮氣清洗的12L圓底燒瓶中，將步驟D中所得的化合物(517g,1.12mol)加入乙酸乙酯(5170ml)中。將此溶液冷卻至-40℃左右，然后在約45分鐘以上加入三乙胺(398ml,2.86mol)。在約-50℃與-40℃之間，攪拌此反應(yīng)混合物約90分鐘，將其過濾至一個22L用氮氣清洗的圓底燒瓶中，并用乙酸乙酯(2068ml，預(yù)冷卻至-50℃)沖洗而獲得為一種白色固體的游離堿。
(2)在-30℃左右，將步驟G中所得的化合物(425g,1.02mol)加入含有從步驟H(1)中所得的化合物、三乙胺(654ml,4.69mol)和PPAA(1-丙烷膦酸環(huán)酐)(在乙酸乙酯中的含量為50％,916ml,1.53mol)的乙酸乙酯溶液中。將反應(yīng)混合物攪拌約1小時，用水和飽和含水NaCl沖洗，通過Na2SO4干燥，并在真空中濃縮而獲得為一種油的產(chǎn)物(636g，收率為87.8％)。
I．2-氨基-N-{1-(2,4-二氟-芐氧甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2,2,2-三氟-乙基)-2,3,3a,4,6,7-六氫-吡唑子基[4,3-c]吡啶-5-基]-乙基}-2-甲基-丙酰胺在約15℃，在約55分鐘以內(nèi)，在一個裝有機械攪拌器的干燥并用氮氣清洗的22L圓底燒瓶中將甲磺酸(258.3ml,3.98mol)逐滴加入含步驟H中所得的產(chǎn)物(566g,0.796mol)的CH2Cl2(11,320ml)中。在約20℃將此混合物攪拌約40分鐘，然后加入飽和含水NaHCO3(8,490ml)，直到溶液的PH值為7.8。分離有機層，用水和飽和含水NaCl沖洗，通過Na2SO4干燥，并在真空中濃縮而獲得一種油狀產(chǎn)物(388.8g，收率為80％)。
J．2-氨基-N-{1-(2,4-二氟-芐氧甲基)-2-氧代-2-[3-氧代-3a-吡啶-2-基甲基-2-(2,2,2-三氟-乙基)-2,3,3a,4,6,7-六氫-吡唑子基[4,3-c]吡啶-5-基]-乙基}-2-甲基-丙酰胺L-(+)酒石酸鹽在一個裝有機械攪拌器的12L圓底燒瓶中，將L-(+)酒石酸(90g,0.6mol)加入含步驟Ⅰ中所得的產(chǎn)物(370g,0.6mol)的甲醇(4,070ml)溶液中。在22℃左右，將反應(yīng)混合物攪拌約90分鐘，過濾并濃縮。用乙酸乙酯(4,560ml)稀釋此粗制殘余物，在約70℃加熱，并在17小時以上慢慢地使其冷卻至室溫。過濾固體，然后干燥而獲得白色結(jié)晶，熔點為188-189℃(348.46g，收率為76％)。1H-NMR(MeOH,d4)δ:8.28(d,1H),7.59(t,1H),7.41-7.39(m,1H)7.18-7.13(m,1H),6.92(t,1H),5.2(t,1H),4.56(bs,3H),4.36(s,2H),4.31-4.25(m,1H),4.13-4.06(m,1H),3.78(d,2H),3.21(t,1H),3.18-2.96(m,2H),2.65-2.55(m,2H),1.57(d,6H)。MS:MH+611。[a]589+22.03(c=11.9,MeOH)。
權(quán)利要求
1．式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，其中的立體化學(xué)構(gòu)型為3a-(S),1-(R)。
3．根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，其中的立體化學(xué)構(gòu)型為3a-(S),1-(S)。
4．根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，其中的立體化學(xué)構(gòu)型為3a-(R),1-(S)。
5．根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，其中的立體化學(xué)構(gòu)型為3a-(R),1-(R)。
6．一種制備式(E)化合物(D)-酒石酸鹽或(L)-酒石酸鹽的方法， 它包括在0℃至室溫之間，在約8∶1至9∶1的丙酮∶水的混合物中將式(D)化合物與(D)-酒石酸或(L)-酒石酸反應(yīng)。
7．一種根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中(D)-酒石酸與式(D)化合物反應(yīng)，式(E)化合物具有R-構(gòu)型。
8．一種制備式(J)化合物的方法， 它包括在大約-78℃至-20℃的溫度下，在有機堿和肽偶合劑的存在下將式(E)化合物與式(X)化合物反應(yīng)， 其中Prt為一個胺保護基，X為OH、-O(C1-C4)烷基或鹵素。
9．一種根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中的肽偶合劑為1-丙烷膦酸環(huán)酐，式(X)化合物具有R-構(gòu)型，式(E)化合物具有R-構(gòu)型。
10．一種根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中Prt為叔-丁氧基羰基。
11．一種制備式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽的方法， 它包括在大約-78℃至-20℃的溫度下，在有機堿和肽偶合劑的存在下將式(E)化合物與式(X)化合物反應(yīng)，以生成式(J)化合物， 其中Prt為一個胺保護基，X為OH、-O(C1-C4)烷基或鹵素， 在適宜的去保護條件下將式(J)化合物去保護以生成式(K)化合物， 在一種反應(yīng)惰性溶劑中將式(K)化合物與(L)-(+)-酒石酸反應(yīng)以產(chǎn)生式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
12．一種根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中Prt為叔-丁氧基羰基。
13．一種根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中肽偶合劑為1-丙烷膦酸環(huán)酐，式I化合物具有3a-(R),1-(R)的絕對和相對構(gòu)型。
14．一種提高人或其他動物的內(nèi)源性生長激素水平的方法，它包括給予此人或動物有效量的權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
15．一種藥物組合物，它包括一種藥物可接受的載體和一定量的權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
16．一種用于增加人或其他動物生長激素內(nèi)源性生成或釋放的藥物組合物，它包括一種藥物可接受的載體、一種有效量的權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，一種選自GHRP-6、Hexarelin、GHRP-1、生長激素釋放因子(GRF)、IGF-1、IGF-2和B-HT920的生長激素促分泌素或其類似物。
17．一種治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的方法，它包括給予需要此治療或預(yù)防的人或其他動物一定量的可有效治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的權(quán)利要求1的式I化合物(L)-(+)-酒石酸鹽。
18．一種治療或預(yù)防可通過生長激素治療或預(yù)防的疾病或狀態(tài)的方法，它包括給予需要此治療或預(yù)防的人或其他動物一定量的可有效地促進內(nèi)源性生長激素釋放的權(quán)利要求1的式I化合物(L)-(+)-酒石酸鹽。
19．一種根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中的疾病或狀態(tài)為充血性心力衰竭、肥胖或與衰老有關(guān)的虛弱。
20．一種根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中的疾病或狀態(tài)為充血性心力衰竭。
21．一種根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中的疾病或狀態(tài)為與衰老有關(guān)的虛弱。
22．一種促進骨折修復(fù)、減輕大手術(shù)后的蛋白分解反應(yīng)、減輕慢性疾病所致的惡病質(zhì)和蛋白丟失、促進傷口修復(fù)或促進燒傷患者或經(jīng)歷大手術(shù)的患者的康復(fù)的方法，它包括給予需要此治療的哺乳動物一定量的可有效促進內(nèi)源性生長激素釋放的權(quán)利要求1的式I化合物(L)-(+)-酒石酸鹽。
23．一種根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中的方法用于促進經(jīng)歷大手術(shù)患者的康復(fù)。
24．一種根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中的方法用于促進骨折的修復(fù)。
25．一種提高肌肉力量及可動性、維持皮膚厚度、維持代謝自身穩(wěn)定或腎自身穩(wěn)定的方法，它包括給予需要此治療的人或其他動物一定量的可有效促進內(nèi)源性生長激素釋放的權(quán)利要求1的式I化合物(L)-(+)-酒石酸鹽。
26．一種治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的方法，它包括給予患有骨質(zhì)疏松癥的人或其他動物有效量的雙膦酸鹽化合物和權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
27．一種根據(jù)權(quán)利要求26所述的治療骨質(zhì)疏松癥的方法，其中的雙膦酸鹽化合物為ibandronate。
28．一種根據(jù)權(quán)利要求26所述的治療骨質(zhì)疏松癥的方法，其中的雙膦酸鹽化合物為alendronate。
29．一種治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的方法，它包括給予患有骨質(zhì)疏松癥的人或其他動物有效量的雌激素或妊馬雌酮和權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽，以及可任意選擇的孕酮。
30．一種治療骨質(zhì)疏松癥的方法，它包括給予患有骨質(zhì)疏松癥的人或其他動物有效量的降鈣素和權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
31．一種提高缺乏IGF-1的人或其他動物IGF-1水平的方法，它包括給予缺乏IGH-1的人或其他動物有效量的權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
32．一種治療骨質(zhì)疏松癥的方法，它包括給予患有骨質(zhì)疏松癥的人或其他動物有效量的雌激素興奮劑或?qū)箘┖蜋?quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
33．一種根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中雌激素興奮劑或?qū)箘樗舴摇⑶逦舴?、雷洛昔芬或idoxfene。
34．一種根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中雌激素興奮劑或?qū)箘轫樖?6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；(-)-順式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；順式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇；順式-1-[6’-吡咯烷子基乙氧基-3’-吡啶基]-2-苯基-6-羥基-1,2,3,4-四氫-萘；1-[4’-吡咯烷子基乙氧基苯基]-2-(4”-氟苯基)-6-羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉；順式-6-(4-羥苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氫-萘-2-醇或1-(4’-吡咯烷子基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉。
35．一種增加肌肉質(zhì)量的方法，它包括給予需要這種治療的人或其他動物有效量的權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
36．一種促進生長激素缺乏兒童的發(fā)育的方法，此方法包括給予生長激素缺乏的兒童有效量的權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
37．一種治療哺乳動物胰島素抵抗的方法，此方法包括給予所說哺乳動物有效量的權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
38．一種根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中與胰島素抵抗相關(guān)的狀態(tài)為Ⅰ型糖尿病、Ⅱ型糖尿病、高血糖、葡萄糖耐量下降或胰島素抵抗綜合征。
39．一種根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中與胰島素抵抗相關(guān)的狀態(tài)與肥胖或老年有關(guān)。
40．一種提高內(nèi)源性生長激素水平的方法，它包括給予需要的人或其他動物有效量的功能性生長激素釋放抑制因子拮抗劑和權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
41．一種根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中功能性生長激素釋放抑制因子拮抗劑為α-2腎上腺素能興奮劑。
42．一種治療或預(yù)防充血性心力衰竭、肥胖或與衰老相關(guān)的虛弱的方法，它包括給予需要的人或其他動物有效量的功能性生長激素釋放抑制因子拮抗劑和權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
43．式 化合物的R,S-對映體混合物、R-對映體或S-對映體。
44．根據(jù)權(quán)利要求43所述的化合物的(D)-酒石酸鹽或(L)-酒石酸鹽。
45．式 化合物的3a-(R,S),1-(R)非對映體混合物、3a-(R),1-(R)非對映體或3a-(S),1-(R)非對映體，其中Prt為一種選自t-BOC、FMOC和CBZ組成的組的胺保護基。
46．式 化合物的R,S-對映體混合物、R-對映體或S-對映體。
47．式 化合物的R,S-對映體混合物、R-對映體或S-對映體，其中X為OH、-O(C1-C4)烷基或鹵素，Prt為一個胺保護基。
48．根據(jù)權(quán)利要求47所述的化合物，其中X為OH,Prt為BOC，立構(gòu)中心在R-構(gòu)型中。
49．一種治療患有睡眠紊亂的哺乳動物的睡眠紊亂的方法，它包括給予所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1的式I化合物的(L)-(+)-酒石酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及2－氨基－N－{1－(R)－(2,4－二氟－卞氧甲基)－2－氧代－2－[3－氧代－3a－(R)－吡啶－2－基甲基－2－(2,2,2－三氟－乙基)－2,3,3a,4,6,7－六氫化－吡唑子基[4,3－c]吡啶－5－基]－乙基}－2－甲基－丙酰胺的(L)－(+)－酒石酸鹽,它是一種生長激素促分泌素,并且可用于提高內(nèi)源性生長激素水平。另一方面,本發(fā)明提供可用于合成上述化合物的某些中間體。本發(fā)明化合物的(L)－酒石酸鹽可用于治療和/或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥、胰島素抵抗以及其他與生長激素缺乏有關(guān)的狀態(tài)或疾病。當本發(fā)明化合物的(L)－酒石酸鹽與一種雙膦酸鹽化合物;雌激素或妊馬雌酮和可任意選擇的孕酮;一種雌激素興奮劑或?qū)箘?或降鈣素聯(lián)合使用時,還可用于治療骨質(zhì)疏松癥。而且,本發(fā)明涉及藥物組合物。本發(fā)明還涉及包括給予人或其他動物一種α－2腎上腺素能興奮劑和本發(fā)明化合物的(L)－酒石酸鹽的方法。
文檔編號C07K5/02GK1314912SQ98806559
公開日2001年9月26日 申請日期1998年6月5日 優(yōu)先權(quán)日1997年6月25日
發(fā)明者菲利普·A·卡皮諾, 保羅·A·達西爾瓦－賈丁, 布魯斯·A·萊夫科, 杰里·A·默里 申請人:輝瑞產(chǎn)品公司