專利名稱：：茚并[1,2－c]－、萘并[1,2－c]－和苯并[6,7]芳庚并[1,2－c]吡唑類衍生物的制作方法
背景技術(shù)：
：蛋白酪氨酸激酶(PTK)包括了大量且種類繁多的具有酶促活性的蛋白類物質(zhì)。PTK類物質(zhì)在控制細胞生長和分化中發(fā)揮重要作用(參見Schlessinger&Ullrich，1992，《神經(jīng)元》9383—391)。譬如，受體酪氨酸激酶介導的信號轉(zhuǎn)導是通過與特異性生長因子(配體)的胞外相互作用所引發(fā)，隨后受體通常二聚化，瞬時刺激內(nèi)在蛋白酪氨酸激酶的活性和磷酸化。由此成為胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導分子的結(jié)合位點并誘發(fā)與一系列胞質(zhì)信號傳輸分子形成復合物，從而便于適當?shù)募毎磻?例如細胞分裂、代謝作用、對胞外微環(huán)境產(chǎn)生反應)(參見Schlessinger&Ullrich，1992，《神經(jīng)元》91—20)。對于受體酪氨酸激酶，迄今已證實了酪氨酸的磷酸化位點具有作為信號轉(zhuǎn)導分子SH2(src同源)域的高親和性結(jié)合位點的功能(Fantl等人，1992，《細胞學》69413—423；Songyang等人，1994，《分子細胞學和生物學》142777—2785；Songyang等人，《細胞》72767—778；和Koch等人，1991，《科學》252668—678)?，F(xiàn)已鑒定出數(shù)種與受體酪氨酸激酶(PTK類)有關(guān)的胞內(nèi)底物蛋白質(zhì)。它們主要分為兩類(1)具有催化結(jié)構(gòu)域的底物；和(2)沒有催化結(jié)構(gòu)域，但可以作為接合體同時與催化活性分子有關(guān)的底物(Songyang等人，1993，《細胞學》72767—778)。受體或蛋白與其底物SH2結(jié)構(gòu)域之間相互作用的特異性決定于緊緊包圍在磷酸化酪氨酸殘基周圍的氨基酸殘基。SH2結(jié)構(gòu)域和緊密包圍在磷酸酪氨酸殘基周圍的氨基酸序列對特定受體的結(jié)合親和性之間的差別正與所發(fā)現(xiàn)的在其底物磷酸化的性能的差別相吻合(Songyang等人，1993，《細胞學》72767—778)。這些觀察結(jié)果提示，各種受體酪氨酸激酶的功能不但取決于其表達的模式和配體的有效性，而且取決于由特定受體激活的下游信號轉(zhuǎn)導途徑的陣列。所以，磷酸化作用是重要的調(diào)控步驟，它決定了通過特異性生長因子受體以及分化因子受體復原的信號轉(zhuǎn)導途徑的選擇性。已證明在PTK中，異常的刺激、表達或突變可誘導細胞增殖失控(例如惡性腫瘤生長)或缺失關(guān)鍵發(fā)育或修復過程。所以，生物醫(yī)學界將大量財力投入到用于發(fā)現(xiàn)PTK家族成員的特定生物學作用、其在分化進程中的功能、其在腫瘤生成和其他疾病中的參與行為、其在由配體刺激所激活的信號轉(zhuǎn)導途徑中的生物化學機理以及新藥的開發(fā)中。酪氨酸激酶可以是受體型(具有胞外，跨膜和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域)或非受體型(全部位于胞內(nèi))。受體型酪氨酸激酶(RTK)RTK包括一大家族的具有不同生物活性的跨膜受體。受體型酪氨酸激酶(RTK)家族包括對多種細胞的生長和分化來說極其重要的受體(Yarden&Ullrich，《生物化學年鑒》57433—478；Ullrich&Schlessinger，《細胞學》61243—254，1990)。RTK的內(nèi)在功能是通過配體結(jié)合激活，由此誘發(fā)受體和許多細胞底物被磷酸化，隨后引發(fā)多種細胞反應(Ullrich&Schlessinger，《細胞學》1990，61203—212)?，F(xiàn)在，業(yè)已鑒定出至少19種特殊的RTK亞族。據(jù)信一個RTK亞族，也稱作HER亞族由EGFR、HER2、HER3和HER4組成。HER亞族受體的配體包括表皮生長因子(EGF)、TGF—α、雙調(diào)蛋白、HB—EGF、β—動物纖維素和heregulin。據(jù)信對HER2／erbB2激酶活性的異常調(diào)節(jié)促進了轉(zhuǎn)化型致瘤表型，特別是在乳腺癌中。其他兩種RTK亞族被稱作胰島素受體亞族和“PDGFR”亞族，所述胰島素受體亞族包括INS—R、IGF—1R和IR—R，所述“PDGFR”亞族包括PDGFα和β—受體、CSF—1R和c—試劑盒。若干受體型酪氨酸激酶及其所結(jié)合的生長因子在血管發(fā)生中起一定作用，盡管它們之中的一些間接促進血管發(fā)生(Mustonen&Alitalo，《細胞生物學雜志》129895—898，1995)。此類受體型酪氨酸激酶中的一種，也稱作胎兒肝臟激酶1(flk—1)，是Ⅲ類亞型RTK中的一員。人體flk—1的一種可替換的名稱是含有內(nèi)插結(jié)構(gòu)域的激酶受體(KDR)(Teran等人，《致癌基因》61677—83，1991)。flk—1／KDR另一種可替換的名稱是“血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2”(VEGFR—2)。鼠型flk—1／VEGFR—2也稱作NYK(Oelrichs等人，《致癌基因》8(1)11—15，1993)。迄今為止已分離出編碼小鼠、大鼠和人體flk—1的DNA以及報告了核苷酸所和所編碼的氨基酸序列(Matthews等人，《美國國家科學院院報》889026—30，1991；Terman等人，1991，文獻如上；Terman等人，《生物化學和生物物理血研究通訊》1871579—86，1992；Sarzani等人，文獻如上；和Millauer等人，《細胞》72835—846，1993)。稱作fms樣酪氨酸激酶1(flt—1)的Ⅲ型亞類RTK與flk—1／KDR有關(guān)(DeVires等人，《科學》255989—991，1992；Shibuya等人，《致癌基因》5519—524，1990)。flt—1的一種可替換的名稱是“血管內(nèi)皮細胞生長因子受體1”(VEGFR—1)。至今為止，已發(fā)現(xiàn)flk—1／KDR／VEGFR—1和flt—1／VEGFR—1亞族的成員主要表達在內(nèi)皮細胞上。血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)族的配體的成員對這些亞類成員產(chǎn)生特異性地刺激(Klagsbum&D’Amore，《細胞因子和生長因子評論》7259—270，1996)。在血管發(fā)育期間，F(xiàn)lt—1被認為是內(nèi)皮組織所必需的。flt—1的表達與小鼠胚胎中早期血管發(fā)育有關(guān)，并且在創(chuàng)傷愈合期間與新血管發(fā)育有關(guān)(Mustonen&Alitalo，文獻如上)。flt—1在成年人器官中的表達提示了與細胞生長無關(guān)的此受體的附加功能(Mustonen&Alitalo，文獻如上)。另一種與flt—1和flk—1／KDR有關(guān)的RTK是flt—4(Galland等人，《致癌基因》81233—40，1993；Pajusola等人，《致癌基因》82931—37，1993)。這三種受體共同的特征是其胞外區(qū)內(nèi)具有7種免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。flt—4的氨基酸序列與flt—1和flk—1／KDR的氨基酸序列，尤其是在酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域中具有明顯的同源性(Galland等人，文獻如上)。但是，和flt—1和flk—1不同的是，前體形式的flt—4在翻譯過程后期斷裂，形成兩個二硫連接多肽(Pajusola等人，文獻如上)。對發(fā)育期間flt—4表達的研究支持了淋巴管起源于靜脈的理論(Kaipainen等人，《美國國家科學院院報》923566—70，4，1995)。在發(fā)現(xiàn)了內(nèi)皮細胞在血管發(fā)生中的決定性作用后，生長因子對內(nèi)皮細胞的作用成為研究血管形成調(diào)節(jié)的重點。其中一種因子是血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)，它對flk—1／KDR和flt—都具有較高的結(jié)合親和性，并且促使有絲裂為血管內(nèi)皮細胞(Termand人，1992，文獻如上，Mustonen等人，文獻如上；DeVries等人，文獻如上)。VEGF與flt—4不結(jié)合(Pajusola等人，文獻如上)。Millauer等人在上述文獻中報導，VEGF和flk—1／KDR／VEGFR—2是一個配體—受體對，它們在血管的形成和萌發(fā)(分別稱作血管形成和血管發(fā)生)中起重要作用。有報導稱可變剪接的mRNA可以生成不同形式的VEGF，其中包括Ferrara等人所述的四種(《細胞學和生物化學雜志》47211—218，1991)。Ferrare等人鑒定出分泌型VRGF和主要與細胞相關(guān)的VEGF，而且已知這種蛋白以二硫連接二聚體的形式存在。人們還了解到多種在個體中成為水腫基礎(chǔ)和形成水腫狀態(tài)的生理和生物化學機制。在一個或多個這樣的機制中，一種重要的介體是“血管內(nèi)皮細胞生長因子”(VEGF)。這種介體也被稱作“血管透性因子”(VPF)。該因子對血管內(nèi)皮細胞中的轉(zhuǎn)運進行增量調(diào)節(jié)，并且導致許多血管床的透性增高，所述血管床包括皮膚、皮下組織、腹壁、腸系膜、隔膜、氣管、支氣管、十二指腸和子宮。嚴重的血細胞滲出、跨內(nèi)皮層交換的改變、大分子在上述位置外滲并沉積以及長時間血壓過低都可能伴發(fā)有滲透化作用增高。這些過程被認為是促使新血管形成的前奏。在炎癥處，VEGF由炎癥T細胞、巨噬細胞、嗜中性白細胞和嗜酸性細胞等表達。氧不足、某些血管加壓激素、生長因子、生殖激素和多種炎癥細胞因子增量調(diào)節(jié)該因子。VEGF介導的血管透性參與如腫瘤腹水、子宮內(nèi)膜異位、灼傷和創(chuàng)傷所致水腫、糖尿病中的內(nèi)皮機能障礙、卵巢過度興奮綜合征的并發(fā)癥以及眼水腫等疾病。因此，顯然對VEGF的生產(chǎn)或活性的抑制將有積極作用，尤其可以阻斷上述疾病的表征。特別是，有能力阻斷VEGF介導的高透性、水腫和有關(guān)綜合征的藥物將有效地減輕上述疾病。胎盤生長因子(P1GF)具有與VEGF序列明顯同源性的氨基酸序列(Park等人，《生物化學雜志》26825646—54，1994；Maglione等人，《致癌基因》8925—31，1993)。對于VEGF，不同種類的PlGF是由可變剪接的mRNA生成，并且蛋白質(zhì)以二聚體形式存在(Park等人，文獻如上)。P1GF以高親和性與flt—1結(jié)合，但不和flk—1／KDR結(jié)合(Park等人，文獻如上)。當VEGF以低濃度存在時，PlGF可增強VEGF對內(nèi)皮細胞的促細胞分裂作用，但當VEGF以較高濃度存在時還未測試出這種作用(Park等人，文獻如上)。其他兩種RTK亞族被稱作FGF受體族(FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4)和Met亞族(c—met和Ron)。由于PDGF和FLK亞族之間存在著相似性，所以這兩種亞族經(jīng)常被同時考慮。已知的RTK亞族是由Plowman等人在1994，DN&P7(6):334—339中鑒定，該文獻在此引入作為參考。在某些臨床情況中希望能夠抑制血管發(fā)生(例如，抑制實體瘤的生長和轉(zhuǎn)移，或治療類風濕性關(guān)節(jié)炎)，而促進血管形成有利于其他疾病(例如損傷愈合)的治療。所以，通過上述受體轉(zhuǎn)導信號促進血管發(fā)生的分子以及能夠抑制這種信號轉(zhuǎn)導的分子都受到關(guān)注。非受體型酪氨酸激酶非受體型酪氨酸激酶代表一系列無胞外和跨膜序列的細胞酶?，F(xiàn)在，已鑒定出超過24種非受體型酪氨酸激酶，包括11個亞族(Src、Frk、Btk、Csk、Abl、Zap70、Fes／Fps、Fak、Jak、Ack和LIMK)。迄今為止，Src亞族的非受體型酪氨酸激酶在PTK中所占的數(shù)量最大，其中包括Src、Yes、Fyn、Lyn、Blk、Hck、Fgr和Yrk。Src亞族的酶與腫瘤發(fā)生有關(guān)。Bolen在《致癌基因》82025—2031，1993中更詳細討論了非受體型酪氨酸激，該文獻在此引入作為參考?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，許多酪氨酸激酶，RTK或非受體型酪氨酸激酶，參與多種致病狀態(tài)中的細胞信號途徑，其中包括癌癥、牛皮癬和其他過度增生性疾病和過度免疫反應。對用于PTK的化合物的開發(fā)鑒于PTK在控制、調(diào)節(jié)和調(diào)制細胞增殖、細胞異常增殖相關(guān)性疾病或機能障礙中的推知的重要作用，人們試圖通過多種途徑來鑒定受體和非受體型酪氨酸激酶“抑制劑”，其中包括利用突變配體(美國專利申請4966849)、可溶性受體和抗體(WO94／10202；Kendall&Thomas，1994，《美國國家科學院院報》9010705—09；Kim等人，1993，《自然》362841—844)、RNA配體(Jellinek等人，《生物化學》3310450—56；Takano等人，1993《分子生物學和細胞學》4358A；Kinsella等人，1992，《實驗細胞學研究》19956—62；Wright等人，1992，《細胞物理學雜志》152448—57)和酪氨酸激酶抑制劑(WO94／03427；WO92／21660；WO91／15495；WO94／14808；US530992；Mariani等人，1994，《美國癌癥研究學會會志》352268)。最近，人們試圖鑒定出可以作為酪氨酸激酶抑制劑的小分子。例如，現(xiàn)已普遍認為雙單環(huán)、二環(huán)或雜環(huán)芳基化合物(PCTWO92／20642)和亞乙烯基氮雜吲哚類衍生物(PCTWO94／14808)可以作為酪氨酸激酶抑制劑。苯乙烯類化合物(美國專利5217999)、苯乙烯基取代吡啶類化合物(美國專利5302606)、某些喹唑啉衍生物(EP申請0566266A1)、硒基吲哚類和硒化物(PCTWO94／03427)、三環(huán)多羥基類化合物(PCTWO92／21660)和芐基膦酸類化合物(PCTWO91／15495)也被描述是用作用于治療癌癥的酪氨酸激酶抑制劑的化合物。因此，人們希望鑒別出有效的小型化合物，它們能夠特異性地抑制由受體型和非受體型酪氨酸激酶活性所調(diào)控的酪氨酸信號的轉(zhuǎn)導，從而調(diào)節(jié)和調(diào)制異常或不適當?shù)募毎鲋?。發(fā)明概述本發(fā)明涉及式Ⅰ所示的化合物其中環(huán)A表示以下結(jié)構(gòu)n是1、2或3；Ar是和R1、R2和R4和R5各自獨立地表示氫、原子量約為19—36的鹵素、具有1—4個碳原子的低級烷基、低級烷氧基、三氟甲基或R1、R2和R4、R5共同獨立地表示與相鄰碳原子連接的亞甲二氧基；R3是氫、COR6或SO2R6R6是—CH3或其中Y是氫、氯或—CH2。這些化合物的對映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體及其混合物都包括在本發(fā)明中。本發(fā)明還包括這些化合物的藥物可接受酸加成鹽。本發(fā)明的化合物是酪氨酸激酶活性的有效抑制劑。特別是，本發(fā)明化合物是在血管發(fā)生進程中起重要作用的酪氨酸激酶的有效抑制劑。這些化合物還是在血管透性過高進程中起重要作用的酪氨酸激酶的有用抑制劑。由于這些化合物能夠抗血管發(fā)生并抑制血管透性過高，所以它們是抑制其中血管發(fā)生和血管透性過高是重要的組成部分的疾病狀態(tài)的進程的重要物質(zhì)。本發(fā)明優(yōu)選的化合物如下式所示本發(fā)明還涉及這些化合物在藥物組合物中的應用，所述藥物組合物含有藥用有效量的上述化合物和藥物可接受載體或賦形劑。這些藥物組合物可以施用給個體以緩解或阻止血管發(fā)生—協(xié)助性疾病中的血管發(fā)生進程或與該進程有關(guān)疾病中的血管透性過高。發(fā)明詳述本發(fā)明的化合物具有抗血管發(fā)生特性。因此，這些化合物可以用作對抗如下病癥的活性藥物，所述病癥例如關(guān)節(jié)炎、動脈粥樣硬化、牛皮癬、血管瘤、心肌血管發(fā)生、冠狀和腦并生(coronaryandcerebralcolaterals)、缺血性四肢血管發(fā)生、創(chuàng)傷愈合、消化性潰瘍螺桿菌相關(guān)性疾病、骨折、貓抓熱、潮紅、新血管性青光眼和視網(wǎng)膜病，如糖尿病視網(wǎng)膜病有關(guān)的或與衰老有關(guān)的黃斑變性。此外，一些此類化合物可以用作對抗實體瘤和過度增殖性疾病的活性藥物，因為這些疾病的生長和轉(zhuǎn)移需要血管細胞增殖。本發(fā)明的化合物對酪氨酸激酶具有抑制活性。即，這些化合物通過酪氨酸激酶調(diào)節(jié)信號轉(zhuǎn)導。特別是，這些化合物選擇性地抑制KDR／FLK—1／VEGF—2酪氨酸激酶的活性。本發(fā)明的某些化合物也抑制其他酪氨酸激酶的活性，例如抑制Flt—1／VEGFR—1、Src亞族激酶(如Lck、Src、fyn、yes)等的活性。本發(fā)明化合物的抗特定的酪氨酸激酶的抑制作用的產(chǎn)生和效能取決于這些化合物上的取代基(即R1、R2、R3、R4、R5和R6)性質(zhì)、數(shù)量和排列。當向需要此類化合物的個體給藥時，本發(fā)明的化合物也可以抑制這些個體中的血管透性過高和水腫形成。據(jù)信此類化合物是通過抑制由VEGF受體所介導的參與血管透性過高和水腫形成進程的活性來發(fā)揮其作用。VEGF的獨特性在于它是已知的唯一直接起作用于血管透性過高和水腫形成的血管發(fā)生生長因子。事實上，與許多其他生長因子的表達或施用有關(guān)的血管透性過高和水腫似乎是由VEGF生產(chǎn)介導的。血細胞滲出還經(jīng)常伴發(fā)有血管透性過高。同樣，過度的血管透性過高將破壞關(guān)鍵組織和器官(例如肺和腎)中的正常分子的跨內(nèi)皮交換，由此擾亂機能并引起大分子外滲和沉積。通過抑制VEGF受體的激酶活性，透性過高以及有關(guān)的外滲、隨后的水腫或腹水形成和基質(zhì)沉積將得到抑制，并且被減小到最低限度。另外，還可以將本發(fā)明化合物的N—?；?R3=—COR6)形式或N—磺?；?R3=—SO2R6)類似物用作前藥，該前藥是經(jīng)代謝激活的抗血管發(fā)生藥物。設(shè)想上述疾病很大程度上是由蛋白酪氨酸激酶活性(包括KDR／VEGFR—2和／或Flt—1／VEGFR—1酪氨酸激酶)介導的。通過抑制這些酪氨酸激酶的活性，上述疾病的進程得到抑制，這歸因于疾病狀態(tài)中的血管發(fā)生部分受到嚴重削弱。利用對特異性酪氨酸激酶的選擇性，本發(fā)明化合物的作用結(jié)果是最大程度地減少了在采用低選擇性酪氨酸激酶抑制劑時出現(xiàn)的副作用。本發(fā)明一般化合物的效能和特異性常常是通過取代基變化和構(gòu)象限制來加以改變并最佳化。在本發(fā)明中，可用下列定義“藥物可接受酸加成鹽”是指那些保留了游離堿的生物有效性和性質(zhì)且通過與無機酸或有機酸反應得到的鹽，所述無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸，所述有機酸例如是磺酸、羧酸、有機磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對—甲苯磺酸、水楊酸、乳酸、酒石酸等?！巴榛笔侵革柡椭鍩N，其中包括含有1—4個碳原子的直鏈和支鏈基團。“烷氧基”是指“O—烷基”，其中“烷基”定義如上。藥物制劑和給藥途徑用本發(fā)明的化合物本身或其藥物組合物以治療或緩解多種疾病的劑量對病人給藥，所述藥物組合物是將本發(fā)明化合物與適當?shù)妮d體或賦形劑混合。治療有效量進一步是指足以達到癥狀緩解所需的化合物用量。在《Remington氏藥物科學》(MarkPublishingCo．，Easton，PA，最新版)中可見本申請化合物制劑和給藥的技術(shù)。給藥途徑適當?shù)慕o藥途徑包括，例如口服、滴眼、直腸、經(jīng)粘膜、局部涂敷或腸內(nèi)給藥；非腸道給藥，包括肌肉內(nèi)、皮下、髓內(nèi)注射，以及鞘內(nèi)、直接心室內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)或眼內(nèi)注射?？商鎿Q地，化合物可以以局部方式而不是全身方式給藥，例如將化合物直接注射到實體瘤中，并常常采用儲庫型或緩釋制劑。此外，可以將所述藥物置于靶向給藥體系中給藥，例如，置于具有腫瘤特異性抗體包被的脂質(zhì)體內(nèi)。這種脂質(zhì)體將以腫瘤為靶向并選擇性地被腫瘤攝取。組合物／制劑本發(fā)明的藥物組合物可以按照已知方式來制造，例如采用常規(guī)的混合、溶解、制粒、制糖衣、研碎、乳化、包囊、俘獲或冷凍干燥的方式。因此，本發(fā)明所采用的藥物組合物可以以常規(guī)方式利用一種或多種易于將活性化合物加工成可藥用制劑的生理可接受載體(包括賦形劑和輔料)來配制。所選的給藥途徑?jīng)Q定了相匹配的制劑。為了注射，可以將本發(fā)明的藥物配制為水溶液，優(yōu)選在生理相容性緩沖液中配制，例如Hanks氏溶液、林格氏溶液或生理鹽水緩沖液。為了經(jīng)粘膜給藥，制劑中可以采用適合于待透過的屏障的滲透劑。所述滲透劑一般為所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員熟知。為了口服給藥，易于通過將活性化合物與該領(lǐng)域所熟知的藥物可接受載體相混合來配制所述化合物。所述載體能夠使本發(fā)明的化合物被制成片劑、丸劑、糖衣劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿劑、淤漿、混懸劑等，便于被治療患者口服攝取?？诜幬镏苿┑墨@得可以通過將活性化合物與固體賦形劑混合，任選地將所得化合物研磨，如果需要，在加入輔料后加工顆粒狀混合物，得到片劑或糖衣芯。特別適當?shù)馁x形劑是填充劑如糖類，其中包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纖維素類制劑，例如玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、土豆淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和／或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解劑，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、藻酸或其鹽如藻酸鈉。糖衣片芯具有適當?shù)陌?。為了達到該目的，可以采用濃糖液，該溶液任選地含有阿拉伯樹膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普爾膠、聚乙二醇、和／或二氧化鈦；漆溶液和適當?shù)挠袡C溶劑或溶劑混合物。片劑或糖衣劑涂層中還可以加入染料或顏料類物質(zhì)，用來區(qū)分或特征化活性化合物劑量不同的組合?？捎糜诳诜乃幬镏苿┌▔喝胙b配的明膠膠囊、用明膠和增塑劑(如甘油或山梨糖醇)封閉的軟膠囊。壓入裝配膠囊所含活性成分可以與填充劑如乳糖、粘合劑如淀粉和／或潤滑劑如滑石或硬脂酸鎂以及任選的穩(wěn)定劑相混合。在軟膠囊中，可以將活性化合物溶解或懸浮在適當?shù)囊后w中，如脂油、液體石蠟或液體聚乙二醇。此外，可以加入穩(wěn)定劑。所有用于口服給藥的制劑應具有適合如此給藥的劑量。對于經(jīng)頰給藥，所述組合物可以采取常規(guī)方式制備的片劑或錠劑形式。對于吸入給藥，本發(fā)明的化合物一般是以氣溶膠噴霧劑的形式給藥，該噴霧劑是由加壓包裝或噴霧器來提供，同時采用適當?shù)膾伾鋭?，例如二氯二氟甲烷、三氯一氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適當氣體。在這種加壓氣溶膠的情況中，劑量單位取決于提供釋放的計量量的閥門。例如，適用于吸入器或吹入器的明膠膠囊和藥筒可以含有所述化合物和適當?shù)姆勰┗|(zhì)，如乳糖或淀粉的粉末混合物?？梢詫⑺龌衔锱渲茷樽⑸鋭┯糜诜悄c道給藥，例如用于快速濃注和連續(xù)輸注。注射劑可以以單位劑型存在，例如存在于安瓿或多劑量容器中，并且加入防腐劑。所述組合物可以采取如存在于油性或含水載體中的懸浮液、溶液或乳化體的形式，并且可以含有配制劑，如助懸劑、穩(wěn)定劑和／或分散劑。用于非腸道給藥的藥物制劑包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，可以將活性化合物的懸浮液制備為適當?shù)挠托宰⑸鋺腋∫?。適當?shù)挠H脂性溶劑或載體包括脂油，如芝麻油；或合成脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯；或脂質(zhì)體。含水注射懸浮液可以含有用于提高混懸液粘度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或葡聚糖。所述混懸液還可以任選地含有適當?shù)姆€(wěn)定劑或用于提高化合物溶解度的試劑，以便制備高濃縮溶液。此外，活性組分可以采取粉末形式，在粉末在使用前與適當載體如無菌無熱原水一起配制。所述化合物還可以配制為直腸用組合物，例如栓劑和貯留灌腸劑，例如含有常規(guī)栓劑基質(zhì)，如可可油或其他甘油酯。除了上述制劑，所述化合物還可以配制為儲庫型制劑。這種長效制劑可以通過植入給藥(例如植入皮下或肌肉內(nèi)或肌肉內(nèi)注射)。所以，例如，所述化合物可以用適當?shù)母叻肿踊蚴杷圆牧?例如作為存在于可接受油內(nèi)的乳液)或離子交換樹脂來配制，或作為略溶性衍生物如略溶性鹽。適用于本發(fā)明疏水性化合物的藥用載體是共溶劑體系，其中含有芐醇、非極性表面活性劑、水可溶混的有機聚合物和水相。該共溶劑體系可以是VPD共溶劑體系。VPD含有3％(w／v)芐醇、8％(w／v)非極性表面活性劑聚山梨醇酯80和65％聚乙二醇300，且用無水乙醇調(diào)至預定體積的溶液。VPD共溶劑體系(VPD5W)由用含有5％葡萄糖水溶液1∶1稀釋的VPD組成。該共溶劑體系較易將疏水性化合物溶解，并且其本身對于全身性給藥毒性較低。顯然，可以相當大地改變共溶劑體系的配比，而不破壞其溶解度和毒性特征。此外，可以將共溶劑體系中組分進行改變例如用其他低毒非極性表面活性劑代替聚山梨醇酯80；可以改變聚乙二醇的級分大??；用其他生物相容性聚合物代替聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮；和用其他糖類物質(zhì)或多糖代取代葡萄糖。可替換地，疏水性藥物化合物也可以采用其他給藥體系。脂質(zhì)體和乳化體是人們所熟知的用于疏水性藥物給藥的賦形劑或載體的例子。還可以采用某些有機溶劑如二甲基亞砜，但其代價通常是毒性較高。此外，所述化合物可以用緩釋體系給藥，例如含有治療藥物的固體疏水性聚合物的半透基質(zhì)?，F(xiàn)已建立了多種緩釋材料并且為該領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。緩釋膠囊根據(jù)其化學特性在數(shù)周至超過100天內(nèi)釋放化合物。根據(jù)治療藥物的化學特性和生物穩(wěn)定性，還可以采用其他方法來穩(wěn)定蛋白。藥物組合物還可以含有適當?shù)墓腆w或凝膠相載體或賦形劑。所述載體或賦形劑的例子包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、多種糖類、淀粉類、纖維素類衍生物、明膠和聚合物如聚乙二醇。本發(fā)明的許多PTK調(diào)節(jié)化合物可以以和藥物相容性抗衡離子形成的鹽來提供?？梢耘c多種酸形成藥物相容性鹽，其中包括但不限于鹽酸、硫酸、醋酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、琥珀酸等。鹽趨于比其相應的游離堿型較易溶于含水溶劑或其他質(zhì)子溶劑中。有效劑量適用于本發(fā)明的藥物組合物包括其中活性組分的量是其能夠達到預期目標的有效量的組合物。具體而言，治療有效量是指能夠有效防止被治療對象所患癥狀的惡化的或減輕該癥狀的用量。對有效量的判斷是所屬領(lǐng)域技術(shù)人員力所能及的，尤其是根據(jù)在此提供的詳細內(nèi)容。對于任何本發(fā)明方法中采用的化合物，其治療有效劑量最初是根據(jù)細胞實驗來判斷的。例如，在動物模型中配制給藥劑量，以便獲取循環(huán)濃度范圍，該范圍包括在細胞實驗中測定的IC50(即被測化合物對PTK活性的抑制作用達到最大值的50％時的濃度)。利用此類信息可以更精確地計算出人體中的有效劑量。治療有效劑量是指所述化合物可以緩解患者的癥狀或延長患者存活期的用量。通過在細胞培養(yǎng)或試驗動物中進行的標準藥學方法可以測定出所述化合物的毒性和治療功效，例如測定LD50(半數(shù)致死量)和ED50(半數(shù)治療有效量)。毒性和治療作用的劑量比率為治療指數(shù)并且表示為LD50與ED50的比例。具有高治療指數(shù)的化合物是優(yōu)選化合物。利用由細胞培養(yǎng)試驗和動物研究實驗獲得的數(shù)據(jù)可確定用于人體給藥的劑量范圍。此類化合物的劑量優(yōu)選地介于包括ED50在內(nèi)的毒性較低或無毒性的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。在此范圍內(nèi)，給藥劑量可取決于所用的劑型和給藥途徑而變化。鑒于患者的狀況，可以由個體主治醫(yī)師來決定準確的制劑、給藥途徑和劑量。(參見，例如，F(xiàn)ingl等人，1975，《治療學的藥理學基礎(chǔ)》第1章，第1部分)。對給藥劑量和給藥間隔可以進行個別調(diào)整以使活性組分的血漿水平足以維持激酶調(diào)節(jié)作用，或最低有效濃度(MEC)。根據(jù)各個化合物不同，MEC有所變化，但可以根據(jù)體外實驗數(shù)據(jù)推定；例如，利用此處公開的實驗來測定激酶抑制達到50—90％時的必要濃度。達到MEC所必需的劑量將取決于個體性質(zhì)和給藥途徑。但是，可以采用HPLC法和生物鑒定法來測定血漿濃度。利用MEC值也可以確定給藥間隔?；衔飸捎靡欢ǖ慕o藥方案給藥，使其血藥濃度在此期間的10—90％，優(yōu)選30—90％，首選50—90％高于MEC。在局部給藥和有選擇攝取藥物的情況中，藥物的局部有效濃度與血漿濃度無關(guān)。當然，組合物的給藥量取決于被治療對象，如患者體重、患病的嚴重程度、給藥方式和主治醫(yī)師的判斷。包裝如果需要，組合物可以存在于包裝和分配裝置內(nèi)，其中可以含有一個或多個含有活性組分的單位劑型。例如，所述包裝包括金屬或塑料箔，例如凸泡包裝。包裝或分配裝置配有給藥說明書。也可以制備在相容藥物載體中配制的含有本發(fā)明化合物的組合物，置于適當?shù)娜萜鲀?nèi)并標明可治療的適應癥。適宜在標簽上標明的疾病包括對細胞過度增殖性疾病的治療、對血管發(fā)生的抑制、對纖維變性。糖尿病、水腫、腹水等的治療。實施例Ⅰ．合成早在美國專利3843665和美國專利3843666中已公開了兩種合成茚并—、萘并和芳庚并[1，2—c]吡唑環(huán)系的通用方法，并且這些化合物由式Ⅰ表示。在美國專利3843665中，在惰性溶劑中和催化量酸的存在下將結(jié)構(gòu)如Ⅱ的化合物與芳香磺酰肼加熱使吡唑環(huán)化。該反應是在75—100℃下進行5—30小時。下列合成路線是該轉(zhuǎn)化作用的代表例。其中p是0、1、2；和W是低級烷基。式Ⅱ的化合物是通過將適當官能化的1—二氫茚酮、α—四氫萘酮或1—苯并環(huán)庚酮在酸性或堿性催化劑的存在下用芳基醛處理來制備(Braum，R．A．；Mosher，W．A．《美國化學協(xié)會會志》1958，80，第二種制備茚并—、萘并和苯并[6，7]芳庚并[1，2—c]吡唑的方法公開在美國專利3843666中，其中將通式Ⅵ的化合物與催化量的有機羧酸或有機磺酸在惰性溶劑如芳香烴中加熱到75℃—175℃下6—24小時。其中Ar、R1和R2定義如上。通式Ⅵ的化合物是通過將通式Ⅶ的化合物在惰性溶劑中用肼處理來制備。該反應在15℃—20℃下進行達24小時。通式Ⅶ的化合物可以通過將Ⅱ在室溫下并在適當?shù)挠袡C助溶劑混合物(例如CH2CL2／MeOH)中用堿性過氧化氫處理來制備?；蛘撸趬A性條件下式Ⅷ與芳基醛反應生成Ⅶ。該反應在惰性溶劑中、于5℃—10℃下進行3—6小時。其中Y是任何常規(guī)的離去基團，例如氯、溴、碘、甲苯磺?；蚣谆酋；?。Ⅵ的環(huán)化也可以在無機酸如鹽酸、硫酸或磷酸的作用下完成。該反應是在低級鏈烷醇中、于15℃—20℃的溫度下進行12—48小時。該反應的產(chǎn)物，Ⅸ隨后通過與有機羧酸或有機磺酸在直鏈醚或環(huán)醚中加熱到50℃—150℃8—30小時而被芳香化成Ⅰ?；衔铫ㄟ^在惰性溶劑(如芳香烴)中、于35℃—200℃的溫度下用乙酸酐處理5—8小時而被二乙?；?。此后，化合物Ⅺ可以通過與無機酸或有機酸在惰性溶劑中加熱到35℃—200℃4—8小時而被芳構(gòu)化為化合物Ⅻ。最終，將化合物Ⅻ在惰性溶劑如水或低級醇中、于堿金屬或堿金屬的氫氧化物的存在下加熱到50℃—150℃8—30小時而被轉(zhuǎn)化為化合物Ⅰ。通式ⅩⅢ的化合物可以通過將Ⅶ在惰性溶劑(例如低級鏈烷醇、直鏈醚或環(huán)狀醚)的存在下、于15℃—20℃下用式ⅩⅣ的化合物處理24小時來制得。通式ⅩⅢ的化合物可以通過用催化量的有機羧酸或有機磺酸在惰性溶劑如芳香烴中加熱到75℃—175℃6—24小時來環(huán)化為ⅩⅤ。通式ⅩⅤ的化合物(R3≠H)可以通過在惰性溶劑(如水或低級醇)中、在堿金屬或堿金屬氫氧化物的存在下加熱到50—150℃8—30小時而被轉(zhuǎn)化為Ⅰ。上述轉(zhuǎn)化反應的具體例子可以參見美國專利3843665和3843666。實施例本發(fā)明進一步通過下列實施例來舉例說明，這些實施例只是例舉。各實施例的終產(chǎn)物通過下列一種或多種方法來定性高效液相色譜；元素分析、核磁共振光譜、紅外光譜和高分辨質(zhì)譜THF=四氫呋喃；DMF=二甲基甲酰胺；IMS=工業(yè)含甲基化酒精；和LCMS=液相色譜／質(zhì)譜。實施例1—3按照美國專利3932430(Sandoz，1976)的方法制備。實施例13—(3—吡啶基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑，m．p．223—224℃；實施例23—(4—吡啶基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑，m．p．264—266℃(分解)；實施例33—(2—噻吩基)—4，5—二氫—1H—苯并[g]吲唑，m．p．206—208℃。實施例4將2—亞芐基—二氫茚—1—酮(3．99g)、對—甲苯磺酰肼(4．0g)、對—甲苯磺酸水合物(0．7g)和乙醇(60ml)的混合物在回流下沸騰1．5小時，隨后在室溫下靜置18小時。令混合物再在回流下沸騰74小時，此后在室溫下放置74小時。減壓下除去溶劑，令殘余物在二氯甲烷(100ml)和2M氫氧化鈉溶液(50ml)之間分配。分離有機層，用硫酸鎂干燥且過濾。用乙酸乙酯洗滌硫酸鎂并過濾，將乙酸乙酯濾液蒸發(fā)至干得到固體，將其自乙醇中重結(jié)晶，得到3—苯基—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑，mp234—236℃。實施例5a)將二氫茚—1—酮(10．0g)、乙醇(35ml)、水合肼(10．0ml)和冰醋酸(2．0ml)的混合物在回流和氮氣氛下沸騰1小時。將混合物冷卻至20℃且將混合物在減壓下濃縮，所得固體經(jīng)過濾收集，得到二氫茚—1—酮腙，mp84—86℃。b)將a)制得的腙(3．55g)溶解在四氫呋喃(80ml)中并在氮氣氛下冷卻至0℃，同時加入正丁基鋰(28．8ml的2．5M己烷溶液)溶液。將該混合物在0℃下攪拌30分鐘，隨后加入3—甲氧基苯甲酸乙酯(2．16g)，將該混合物在0℃下攪拌20分鐘。加入3M鹽酸(80ml)且在回流下令混合物沸騰1小時。分離有機層，用碳酸氫鈉中和水層，用乙醚提取，得到油狀物，將其通過閃式柱色譜用含有30—40％乙酸乙酯的石油醚(沸點60—80℃)作為流動相提純，得到3—(3—甲氧基苯基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑，m．p．172—174℃。實施例6將2—(4—甲氧基苯甲酰基)二氫茚—1，3—二酮(1．4g，根據(jù)《雜環(huán)化學雜志》8855—859(1971)所述方法的改進方法制備)和水合肼(15ml)在回流下沸騰24小時。冷卻該混合物，傾入冰水中，通過過濾收集沉淀出的固體，用無水乙醇洗滌，干燥，得到3—(4—甲氧基苯基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑，m．p．247℃。實施例7將2—(4—加堿苯甲酰基)二氫茚—1，3—二酮(1．32g，按照與實施例6起始原料的相同方式來制備)和水合肼(15ml)的混合物在回流下沸騰24小時。冷卻該混合物，傾入冰水中，過濾收集固體，用無水乙醇洗滌，干燥，得到3—(對—甲苯基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑，m．p．267—269℃。實施例8a)將5—甲氧基二氫茚—1—酮(5．46g)和肼基甲酸叔丁酯(4．45g)在乙醇(100ml)和冰醋酸(1滴)中的溶液攪拌且在回流下沸騰2小時。減壓下令體積減少至一半，過濾收集結(jié)晶出的固體，得到5—甲氧基二氫茚—1—酮叔丁氧基羰基腙。b)在—78℃和氮氣下，將二異丙基氨化鋰(11．3ml的2．0M庚烷／THF／乙苯溶液)滴加到攪拌的5—甲氧基二氫茚—1—酮叔丁氧基羰基腙(2．5g)的四氫呋喃(100ml)溶液中。在此溫度下攪拌該混合物1．5小時，隨后滴加噻吩—2—甲酸乙酯(1．69g)的四氫呋喃(10ml)溶液。加料完畢后，將混合物在—78℃下攪拌30分鐘，隨后升至室溫。再在室溫下攪拌20分鐘，加入飽和氯化銨溶液(100ml)且將混合物劇烈攪拌10分鐘。分離各層，水層用乙醚(3×75ml)提取。合并的有機物依次用1M鹽酸、鹽水洗滌，干燥，過濾并蒸發(fā)，得到黃色膠狀物，將其懸浮在二氯甲烷(25ml)中，加入五甲基苯(1．34g)。將混合物冷卻至0℃，加入三氟乙酸(0．2ml)。將該混合物攪拌64小時且減壓下濃縮，得到油狀物，將其溶解在乙醚(200ml)中，用飽和碳酸氫鈉溶液(100ml)洗滌，隨后用鹽水洗滌，干燥，過濾并蒸發(fā)，得到膠狀物，該膠狀物通過柱色譜法、用石油醚(沸點60—80℃)／乙酸乙酯(4∶1)作為流動相純化，得到6—甲氧基—2—叔丁氧基羰基—3—(2—噻吩基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑，m．p．163—165℃。c)在室溫下，將3M鹽酸(10ml)加入到b)產(chǎn)物(100mg)在乙酸乙酯(10ml)中的攪拌溶液內(nèi)。將混合物在室溫下攪拌1小時且加熱回流。令混合物在回流下沸騰30分鐘，隨后冷卻。將混合物傾入水(50ml)中，分離有機層，用水洗滌。合并的水層和洗滌液用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)至堿性，用二氯甲烷提取。合并的二氯甲烷洗滌液和提取液用鹽水洗滌，干燥，過濾且蒸發(fā)，得到6—甲氧基—3—(2—噻吩基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑，m．p．212—214℃。實施例9a)將二氫茚—1—酮(5．0g)和肼基甲酸叔丁酯(5．0g)在甲醇(20ml)中的含有冰醋酸(1滴)的溶液沸騰并在回流下攪拌1．5小時。將混合物冷卻并減壓下蒸發(fā)。殘余物自乙醇中重結(jié)晶，得到二氫茚—1—酮叔丁氧基羰基腙。b)按照與前面實施例相同的方式，將a)的產(chǎn)物(500mg)與二異丙基氨化鋰(2．23ml的2．0M庚烷／THF／乙苯溶液)反應，隨后與2—糠酸乙酯(299mg)反應，所得混合物用三氟乙酸(5ml)處理，得到3—(2—呋喃基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑，m．p．195—197℃。實施例10按照與上述兩個實施例相同的方式，由5—氟二氫茚—1—酮開始并采用噻吩—2—甲酸乙酯來制備6—氟—3—(2—噻吩基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑，m．p．222—224℃。實施例11—28(通用方法)a)將二氯甲烷甲醇(1∶1v／v)的混合物經(jīng)Gilson215液體加樣器(handler)加入到裝在隔膜封試管內(nèi)的起始原料烯酮(enone)(約50mg，參見表Ⅰ)中，隨后加入2M氫氧化鈉水溶液(1摩爾當量，參見表1)，再加入100體積的過氧化氫水溶液(1．8摩爾當量)。將所得溶液／懸浮液在室溫下振搖20小時，經(jīng)LCMS分析后，再用塑料滴管手工向各反應管內(nèi)加入100個體積的過氧化氫水溶液(1．8摩爾當量)。向那些含有大量不溶性物質(zhì)的反應管中進一步加入1∶1(體積比)二氯甲烷∶甲醇(1ml)。隨后繼續(xù)振搖24小時。所有反應均通過薄層層析分析，向那些認為反應不完全的反應管內(nèi)用塑料滴管加入100個體積的過氧化物水溶液(1．8摩爾當量)(參見表Ⅰx3所示的反應)。將這些反應混合物在室溫下攪拌3天。表Ⅰ<tablesid="table1"num="001"><table>實施例起始的烯酮(mg)2N的NaOH水溶液(μl)100個體積H2O2水溶液(μl)l12—(2—吡啶基亞甲基)—1—四氫萘酮(51．2mg)108．844．5×2122—(3—吡啶基亞甲基)—1—四氫萘酮(49．3mg)104．842．9×2132—(4—氟代亞芐基)—1—二氫茚酮(50．1mg)105．143．0×2142—亞芐基—1—苯并環(huán)庚酮(50．3mg)101．341．4×2152—(2—噻吩基亞甲基)—1—苯并環(huán)庚酮(51．9ng)102．041．7×2162—(4—甲氧基亞芐基)—1—四氫萘酮(50．2mg)95．038．8×2172—(2—氯代亞芐基)—1—四氫萘酮(50．4mg)93．838．4×2182—(3—氯代亞芐基)—1—四氫萘酮(49．6mg)92．337．8×2192—(4—氯代亞芐基)—1—四氫萘酮(51．7mg)96．239．4×2202—(4—異丙基亞芐基)—1—四氫萘酮(50．4mg)91．237．3×3212—亞胡椒基—1—四氫萘酮(50．5mg)90．737．1×3226—甲氧基—2—(4—甲基亞芐基)—1—四氫萘酮(51．8mg)93．038．1×3232—(4—三氟甲基亞芐基)—1—二氫茚酮(49．3mg)85．535．0×2242—(2，4—二氯亞芐基)—1—二氫茚酮(51．9mg)89．736．7×2252—(2，3—二甲氧基亞芐基)—1—四氫萘酮(49．6mg)84．334．5×3266—甲氧基—2—(4—甲氧基亞芐基)—1—四氫萘酮(50．6mg)86．035．2×3272—(3，5—二甲氧基亞芐基)—1—四氫萘酮(48．8mg)82．933．9×3285，6—二甲氧基—2—(4—甲氧基亞芐基)—1—二氫茚酮(51．5mg)83．033．93×3</table></tables>令反應溶液／懸浮液在二氯甲烷(約5ml)和水(約2ml)之間達到平衡，經(jīng)Empore濾筒將有機相濾除并用二氯甲烷洗滌(約2ml)。將二氯甲烷相蒸發(fā)，將殘余物真空干燥。在成為相應2，3—環(huán)氧酮類化合物的基礎(chǔ)上，a)的產(chǎn)物進行b)步反應。b)經(jīng)Gilson215液體加樣器向裝在隔膜封管內(nèi)的步驟1的產(chǎn)物中加入正丁醇(2ml)，隨后加入10％(體積)水合肼(2摩爾當量，基于步驟1中所用的起始原料烯酮的用量)的正丁醇水溶液(參見表Ⅱ)。最后用注射器手工向各管內(nèi)加入冰醋酸(2滴)。在振搖的同時，將反應在100℃下加熱一段如表Ⅱ所述的時間，基于通過薄層層析監(jiān)測。將反應化合物蒸發(fā)至干，殘余物用硅膠色譜法以乙酸乙酯作為洗脫劑來提純，如果必要可以用石油醚(沸點40—60℃)稀釋乙酸乙酯。將適當?shù)酿s分至干且在真空下蒸發(fā)，給出最終的吡唑類化合物。利用LCMS且按照下列條件鑒定產(chǎn)物的特性。LC層析柱5μHYPERSILBDSC18(100×2．1mm)流動相0．1％甲酸MeCN(梯度—如下所示)條件在8分鐘內(nèi)10—100％MeCN，(梯度)100％MeCN1分鐘，2分鐘內(nèi)100—10％MeCN，(總的分析運轉(zhuǎn)時間11分鐘)流速1ml／min波長范圍206—320nm注射體積10μlMS電離API+ve／—ve質(zhì)量范圍150—500m／z錐形電壓20實施例11—28化合物的反應細節(jié)和收率如表Ⅱ所示表Ⅱ反應細節(jié)<tablesid="table2"num="002"><table>實施例10％NH2NH2．H2O的體積μl在100℃下加熱的時間11212．038h12204．138h13204．86h14197．338h15198．722h16185．038h17182．738h18179．838h19187．438h20177．622h21176．738h22181．338h23166．66h24174．838h25164．138h26167．422h27161．538h28161．66h</table></tables>表Ⅱ(續(xù))收率／LCMS<tablesid="table3"num="003"><table>實施例MFMW實測MH+保留時間(分鐘)終質(zhì)量11C16H13N3247是4．2615．9mg12C16H13N3247是3．7410．4mg13C16H11FN2250是4．6024．9mg14C18H16N2260是5．1015．8mg15C16H14N2S266是5．0724．1mg16C18H16N2O276是4．7523．6mg17C17H13ClN2280．5是5．034．2mg18C17H13ClN2280．5是5．3816．7mg19C17H13ClN2280．5是5．4015．7mg20C20H20N2288是5．8715．0mg21C18H14N2O2290是4．7011．9mg22C19H18N2O290是5．067．6mg23C17H11F3N2300是5．323．9mg24C16H10Cl2N2301是5．455．1mg25C19H18N2O2306是4．7710．4mg26C19H18N2O2306是4．649．8mg27C19H18N2O2306是4．9111．7mg28C19H18N2O3322是3．9329．1mg</table></tables>實施例11—28制備的化合物是實施例113—(2—吡啶基)—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?23—(3—吡啶基)—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?33—(4—氟代苯基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑?qū)嵤├?43—苯基—2，4，5，6—四氫苯并[6，7]芳庚并[1，2—c]吡唑?qū)嵤├?53—(2—噻吩基)—2，4，5，6—四氫苯并[6，7]芳庚并[1，2—c]吡唑?qū)嵤├?63—(4—甲氧基苯基)—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?73—(2—氯代苯基)—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?83—(3—氯代苯基)—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?93—(4—氯代苯基)—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?03—(4—異丙基苯基)—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?13—胡椒基—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?27—甲氧基—3—(4—甲苯基)—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?33—(4—三氟甲基苯基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑?qū)嵤├?43—(2，4—二氯苯基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑?qū)嵤├?53—(2，3—二甲氧基苯基)—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?67—甲氧基—3—(4—甲氧基苯基)—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?73—(3，5—二甲氧基苯基)—4，5—二氫—2H—苯并[g]吲唑?qū)嵤├?86，7—二甲氧基—3—(4—甲氧基苯基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑?qū)嵤├?9a)將二氫茚—1—酮(3．30g)、噻吩—3—甲醛(2．60ml)、乙酸(0．47ml)和哌啶(0．57ml)一起在蒸汽浴上加熱16小時。將混合物冷卻，得到固體物，將其與IMS(120ml)沸騰并熱過濾除去不溶性原料。在冰中冷卻濾液，沉淀出褐色固體，過濾收集，干燥，得到2—(3—噻吩基)亞甲基二氫茚—1—酮，m．p．137—1382。b)將a)的產(chǎn)物(2．03g)、對—甲苯磺酸肼(2．00g)、對—甲苯磺酸(0．35g)和乙醇(30ml)的混合物在回流下沸騰44小時。減壓下除去溶劑，將殘余物溶解在二氯甲烷(100ml)中。用2M氫氧化鈉水溶液(25ml)洗滌該溶液。將有機相干燥，經(jīng)硅膠墊過濾，用乙酸乙酯洗滌，蒸發(fā)，得到油狀物，將其通過閃式硅膠柱色譜用石油醚(沸點60—80℃)／乙酸乙酯(2∶1)洗脫，再用(沸點60—80℃)／乙酸乙酯(1∶1)洗脫提純。將適當?shù)酿s分合并，蒸發(fā)，得到固體，將其在乙醚中研制，過濾，得到3—(3—噻吩基)—1，4—二氫茚并[1，2—c]吡唑，m．p．219—220℃。在這些實施例中制備的化合物的化學結(jié)構(gòu)如表Ⅲ所示表Ⅲ<tablesid="table4"num="004"><table>實施例nArR1R2R4R5R6113—吡啶基HHHHHH214—吡啶基HHHHHH322—噻吩基HHHHHH41苯基HHHHHH51苯基(取代)HHH3—OCH3HH61苯基(取代)HHH4—OCH3HH71苯基(取代)HHH4—CH3HH812—噻吩基6—OCH3HHHHH912—呋喃基HHHHHH1012—噻吩基HHHHHH1122—吡啶基HHHHHH1223—吡啶基HHHHHH131苯基(取代)HHHHHH143苯基HHHHHH1532—噻吩基HHHHHH162苯基(取代)HHH4—OCH3HH172苯基(取代)HHH2—ClHH182苯基(取代)HHH3—ClHH192苯基(取代)HHH4—ClHH202苯基(取代)HHH4—isoPrHH212苯基(取代)HHH3．4—OCH2O—H222苯基(取代)7—OCH3HH4—CH3HH232苯基(取代)HHH4—CF3HH241苯基(取代)HHH2—Cl4—ClH252苯基(取代)HHH2—OCH33—OCH3H262苯基(取代)7—OCH3HH4—OCH3HH272苯基(取代)HHH3—OCH35—OCH3H281苯基(取代)6—OCH37—OCH3H4—OCH3HH2913—噻吩基HHHHHH</table></tables>Ⅱ．體外PTK實驗下列體外實驗用于測試本發(fā)明不同的化合物對于一種或多種PTK的活性水平和作用。按照相同的思路利用所屬領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)可以為其他酪氨酸激酶設(shè)計出類似的實驗。A．桿狀病毒體系的KDR蛋白生產(chǎn)用從HUVEC細胞中分離出了cDNA通過PCR技術(shù)來生產(chǎn)KDR胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(aa789—1354)的編碼序列。在該蛋白的N末端引入聚His6序列。該片段被克隆到轉(zhuǎn)染載體pVL1393的Xba1和Not1位點。用BaculoGold轉(zhuǎn)染試劑(PharMingen)通過共轉(zhuǎn)染來生成重組桿狀病毒(BV)。將重組BV噬斑純化并利用蛋白質(zhì)印跡法(Westernanalysis)檢驗。為了生成蛋白質(zhì)，令SF—9細胞在SF—900—Ⅱ培養(yǎng)基中以2×106／ml生長，并且以0．5個噬斑形成單位／細胞(MOI)感染。在感染48小時后收獲細胞。B．KDR的純化向由1L細胞培養(yǎng)物中得到的細胞團內(nèi)加入50mlTritonX—100溶胞緩沖液(20mMTris，pH8．0，137mMNaCl，10％甘油，1％TritonX—100，1mMPMSF，10μg／ml抑酶肽，1μg／ml亮抑酶肽)使表達(His)6KDR(aa789—1354)的SF—9細胞裂解。將裂解產(chǎn)物在4℃的SorvalSS—34轉(zhuǎn)子內(nèi)以19000rpm離心30分鐘。將該細胞裂解產(chǎn)物加入到5mlNiCl2螯合瓊脂糖柱中，該柱用50mMHEPES，pH7．5，0．3MNacl平衡。用含有0．25M咪唑的相同緩沖液洗脫KDR。利用SDS—PAGE分析法和ELISA法(如下所述)分析柱的餾分，ELISA可以測定激酶活性。將純化KDR交換至25mMHEPES，pH7．5，25mMNacl，5mMDTT緩沖液中并儲藏在—80℃。C．人體Tie—2激酶的生產(chǎn)和純化用從人體胎盤中分離出的cDNA通過PCR技術(shù)來生產(chǎn)人體Tie—2胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(aa775—1124)的編碼序列。在該蛋白的N末端引入聚His6序列并將此結(jié)構(gòu)克隆到轉(zhuǎn)染載體pVL1393的Xba1和Not1位點。用BaculoGold轉(zhuǎn)染試劑(PharMingen)通過共轉(zhuǎn)染來生成重組桿狀病毒(BV)。將重組BV噬斑純化并利用蛋白質(zhì)印跡法(Westernanalysis)檢驗。為了生產(chǎn)蛋白質(zhì)，令SF—9昆蟲細胞在SF—900—Ⅱ培養(yǎng)基中以2×106／ml生長，并且感染達到MOI為0．5。按照與KDR類似的方法純化篩選中所用的His標記激酶。D．人體Flt—1酪氨酸激酶的生產(chǎn)和純化采用桿狀病毒表達載體pVL1393(PharMingen，LosAngeles，CA)。用從HUVEC細胞中分離出的cDNA庫通過PCR技術(shù)來生產(chǎn)編碼激酶結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列。將編碼聚—His6的核苷酸序列引入到編碼的人體Flt—1整個胞內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域(氨基酸786—1338)的核苷酸區(qū)5’端。按照類似于KDR(B部分)和ZAP70(F部分)的方式將組氨酸殘基親和純化，將SF—9昆蟲細胞以0．5感染復數(shù)感染并在感染48小時后收獲。E．Lck和EGFR酪氨酸激酶的來源從市場上購得Lck或截短形式的Lck(lirUpstteBiotechnologyInc，SaranacLake，NY或SantaCruzBiotechnology，Inc．，SantaCruz，CA)，或用常規(guī)方法由天然或重組原料純化得到。EGFR購自Sigma(Cat#E—3641；500單位／50μl)，從OncogeneResearchProducts／Calbiochem(Cat#PF011—100)獲得EGF配體。F．ZAP70酪氨酸激酶的生產(chǎn)采用桿狀病毒表達載體pVL1393(PharMingen，LosAngeles，CA)。將編碼聚—His6的核苷酸序列引入到編碼整個ZAP70(氨基酸1—619)的核苷酸區(qū)5’端。用從Jurkat無限增殖T細胞分離出的cDNA庫通過PCR技術(shù)來生產(chǎn)編碼ZAP70編碼區(qū)的核苷酸序列。組氨酸殘基確保蛋白的親和純化。LBPRGS橋構(gòu)成了可被凝血酶蛋白酶解斷裂的識別序列，由此從酶上除去親和標記。將SF—9昆蟲細胞以0．5復數(shù)感染并在感染48小時后收獲。G．ZAP70的純化將SF—9細胞在含有20mMTris，pH8．0，137mMNaCl，10％甘油，1％TritonX—100，1mMPMSF，1μg／ml亮抑酶肽，10μg／ml抑酶肽和1mM原礬酸鈉的緩沖液中裂解。將可溶的裂解產(chǎn)物加入到螯合瓊脂糖HiTrap柱(Pharmacia)上，該柱被50mMHEPES，pH7．5，0．3MNaCl平衡過。融合蛋白質(zhì)用250mM咪唑洗脫。將回收的酶儲備在含有50mMHEPES，pH7．5，50mMNaCl和5mMDTT的緩沖液中。H．酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)是用于檢測且測量是否存在酪氨酸激酶活性。ELISA可以按照已公開的方案來進行，例如Voller等人，1980，“酶聯(lián)免疫吸附測定法”，《臨床免疫學手冊》第2版，Rose&amp;Friedman，第359—371，美國微生物學協(xié)會，華盛頓，D．C．。所公開的方案適用于測定特異性RTK的活性。例如，下文提供了利用ELISA實驗測試KDR的優(yōu)選方案。對這些方案進行改進以便于測定針對RTK族其他成員以及非受體型酪氨酸激酶的化合物的活性也是所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
技術(shù)人員能力所及的。為了測定抑制劑的選擇性，采用通用的PTK底物(例如聚(Glu4Tyr)20000—50000MW的無規(guī)共聚物)以及ATP(通常為5μM)，ATP在試驗中的濃度約為表觀Km的兩倍。KDR體外ELISA下列方法用于測試本發(fā)明化合物對KDR酪氨酸激酶活性的抑制作用緩沖液和溶液1．PGT聚(Glu，Tyr)4∶1在—20℃下儲存粉末。將粉末溶解在磷酸緩沖鹽水(PBS)成為50mg／ml的溶液。將1ml等份的溶液儲存在—20℃下。當制備平板時，將其在GibcoPBS中稀釋為250μg／ml。2．反應緩沖液100mMHepes，20mMMgCl2，4mMMnCl2，5mMDTT，0．02％BSA，200μMNaVO4，pH7．103．ATP100mM等份的溶液儲存在—20℃下。用水稀釋至20μM。4．洗滌緩沖液含有0．1％吐溫20的PBS。5．抗體稀釋緩沖液0．1％牛血清白蛋白(BSA)的PBS溶液。6．TMB底物在使用前將TMB底物和過氧化物溶液以9∶1混合，或采用Neogen的K—Blue底物。7．終止液1M磷酸方法1．平板的制備用PBS稀釋PGT儲備液(50mg／ml，冷藏)至250μg／ml。在Corning改進的平底高親和ELISA平板(Corning#25805—96)的各孔內(nèi)加入125μl。向空白孔內(nèi)加入125μlPBS。用密封帶覆蓋并在37℃下保溫過夜。用1×250μl洗滌緩沖液洗滌并在37℃的干燥保溫箱內(nèi)干燥約2小時。將密封在袋中的覆蓋平板儲存在4℃下直至使用為止。2．酪氨酸激酶的反應—制備在含有20％DMSO的水溶液中達到4X濃度的抑制劑溶液?！苽浞磻彌_液—制備在50μl中含有預定單位酶的酶溶液，例如制備1ng／μl的KDR溶液使反應中各孔內(nèi)的總量為50ng。儲存在冰上?！?00mM在水中的儲備液制備20μM的4XATP溶液。儲存在冰上?！骺變?nèi)加入50μl酶溶液?！尤?5μl的4×抑制劑—加入25μl的4×ATP溶液用于測定抑制劑?！谑覝叵卤?0分鐘—在各孔內(nèi)加入50μl0．05NHCl終止反應—洗滌平板**反應的終濃度ATP5μM5％DMSO3．抗體的結(jié)合—用含有0．1％BSA的PBS經(jīng)兩步(100x，隨后200x)將1mg／ml等份的PY20—HRP(Pierce)抗體稀釋至50ng／ml?！骺變?nèi)加入100μl抗體。在室溫下保溫1小時。在4℃下保溫1小時。—將平板洗滌4次。4．著色反應—制備TMB底物并各孔內(nèi)加入100μl—在650nm下監(jiān)測OD直至達到0．6為止—用1M磷酸終止。在平板讀取器上振搖。酶制劑的最佳保溫時間和酶反應條件會略有變動而針對每批次，可根據(jù)經(jīng)驗確定。對于Flt—1、Tie—2、EGFR和ZAP70采用類似的試驗條件。對于Lck，在類似試驗條件下所用的反應緩沖液是100mMMOPSO，pH6．5，4mMMnCl2，20mMMgCl2，5mMDTT，0．2％BSA，200μMNaVO4。PKC激酶的來源可以購得PKC的催化亞基(Calbiochem)。PKC激酶試驗按照下列已公開的方法進行放射性激酶試驗(Yasuda，I．，Kirshimoto，A．，Tanaka，S．，Tominaga，M．，Sakurai，A．，Nishizuka，Y．《生物化學和生物物理研究通訊》3166，1220—1227(1990))。簡單而言，所有反應均是在由50mMTris—HClpH7．5，10mMMgCl2，2mMDTT，1mMEGTA，100μMATP，8μM肽，5％DMSO和33PATP(8Ci／mM)組成的激酶緩沖液中進行?；衔锖兔冈诜磻鲀?nèi)混合并加入ATP和底物混合物來引發(fā)反應。隨后加入10μL終止緩沖液(5mMATP在75mM磷酸中的溶液)，將一部分混合物點滴到磷酸纖維素濾膜上。室溫下用75mM磷酸將斑點洗滌3次5—15分鐘。利用液體閃爍計數(shù)法定量測定摻混的放射性標記。雌激素受體結(jié)合試驗采用Shein等人在《癌癥研究》454192(1985)(在此引入作為參考)中公開的反應條件，在4℃小保溫20小時后，測定1nM放射標記的17β雌二醇對MCF—7乳腺癌細胞胞質(zhì)溶膠中的人體雌激素受體的結(jié)合作用。保溫后，將胞質(zhì)溶膠部分與4℃的葡聚糖涂層木炭的懸浮液中混合10分鐘，離心，收集上清液。通過閃爍計數(shù)器(LS6000，Beckman)用液體閃爍混合物(Formula989Packard)測定炭上清液中殘留的束縛放射性。同時以雙份在8種不同的濃度下對化合物進行測定獲得用于定量抑制活性的競爭曲線。特異性放射性配體對雌激素受體的結(jié)合作用被定義為在過量未標記17雌二醇(6μM)的存在下測定的總結(jié)合結(jié)果與非特異性結(jié)合結(jié)果之差。結(jié)果獲得的具有下列結(jié)構(gòu)式的代表性化合物(實施例4)的以下抑制濃度為<tablesid="table5"num="005"><table>試驗化合物的IC50KDR0．20μMflt—1＞50．0μMLck＞50．0μMTIE2＞50．0μMZAP70＞50．0μMEGFR＞50．0μMPKC≥20μM雌激素受體＞10．0μM(＜10％inh@，10μM)</table></tables>此外，另一代表化合物所得的以下抑制濃度為上述結(jié)果證明，本發(fā)明和在此例舉的化合物對于KDR酪氨酸激酶的具有顯著的抑制活性，并且特別適合選擇作為KDR酪氨酸激酶抑制劑。Ⅲ．細胞RTK實驗下列細胞實驗用于測試本發(fā)明不同的化合物對于一種或多種RTK的活性和作用的水平。按照相同的思路利用所屬領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)可以為其他酪氨酸激酶設(shè)計出類似的實驗。A．利用蛋白質(zhì)印跡法測定人體臍靜脈細胞(HUVEC)中的VEGF誘發(fā)型KDR磷酸化1．由Clonetics(SanDiego，CA)購得HUVEC細胞(自混合供體)且按照生產(chǎn)說明書進行培養(yǎng)。本實驗只選用早期傳代(3—8)。用完全EBM培養(yǎng)基(Clonetics)使細胞在100mm平皿(用于組織培養(yǎng)的Falcon，BectonDickinson；Plymouth，英國)中培養(yǎng)。2．為了評價化合物的抑制作用，將細胞用胰蛋白酶消化，在6孔的成組平板(Costar；Cambridge，MA)的各孔內(nèi)接種0．5—1．0x105細胞／孔。3．接種3—4天后，平板是90—100％鋪滿的。除去所有孔內(nèi)的培養(yǎng)基，用5—10mlPBS漂洗細胞并用不含有任何補充物的5mlEBM基礎(chǔ)培養(yǎng)基(即缺乏血清)保溫18—24小時。4．將存在于1mlEBM培養(yǎng)基中的抑制劑的連續(xù)稀釋液(終濃度為25μM、50μM或1uM)加入細胞中且在37℃下保溫1小時。隨后向所有孔加入在2mlEBM培養(yǎng)基中的人體重組VEGF(165)(R&amp;D體系)使終濃度為50ng／ml且在37℃下保溫10分鐘。利用未經(jīng)處理或只用VEGF處理的對照細胞來評估本底磷酸化和VEGF誘導的磷酸化。5．此后，用5—10ml含有1mM原礬酸鈉(Sigma)的冷PBS漂洗所有孔并將細胞在200μl的含有蛋白酶抑制劑(PMSF1mM，抑蛋白酶肽1μg／ml，抑胃酶肽1μg／ml，亮抑酶肽1μg／ml，原礬酸鈉1mM，氟化鈉1mM)和1μg／ml脫氧核糖核酸酶(均購自SigmaChemicalCompany，St．Louis，MO)的RIPA緩沖液(50mMTris—HClpH7，150mMNaCl，1％NP—40，0．25％脫氧膽酸鈉，1mMEDTA)中裂解，刮擦。將裂解產(chǎn)物14000rpm下離心30分鐘以除去核。6．此后，通過加入冷(—20℃)的乙醇(2體積)在1小時—過夜的時間內(nèi)沉淀出等量蛋白質(zhì)。將沉淀團再次溶解在含有5％β—巰乙醇(BioRad；Hercules，CA)的Laemli樣本緩沖液中并沸騰5分鐘。通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(6％，1．5mmNovex，SanDeig，CA)將蛋白質(zhì)分離且用Novex系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到硝基纖維素膜上。用牛血清白蛋白(3％)封閉后，在4℃下用抗KDR多克隆抗體(C20，SantaCruzBiote—chnologyAantaCruz，CA)或用抗磷酸酪氨酸單克隆抗體(4G10，UpstateBiotechnology，LakePlacid，NY)探測蛋白質(zhì)過夜。洗滌后，用山羊抗兔或山羊抗小鼠IgG的HRP綴合F(ab)2保溫1小時，利用發(fā)射化學發(fā)光(ECL)系統(tǒng)(AmershamLifesciences，ArlingtonHeight，IL)顯示各帶。結(jié)果由下列代表性化合物所得的以下抑制濃度是此外，另一個具有下列結(jié)構(gòu)式的代表性化合物所得的以下抑制濃度為此化合物還被證實為對酪氨酸激酶具有選擇性。上述結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物對內(nèi)皮細胞中KDR酪氨酸激酶的VEGF誘發(fā)型酪氨酸磷酸化具有顯著的抑制活性。B．HUVEC細胞分裂檢測在EGM完全培養(yǎng)基(如每個供應商說明書所述的補加有10％FBS、氫化可的松、表皮生長因子和牛腦提取物的內(nèi)皮生長培養(yǎng)基)中培養(yǎng)人體臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)。細胞、培養(yǎng)基和補加物購自Clonetics(SanDiego，CA)。利用HUVEC細胞分裂試驗測試對VEGF、FGF或完全培養(yǎng)基誘發(fā)的細胞分裂的抑制作用。通過胰蛋白酶消化來收獲細胞，洗滌1次并吸附在完全培養(yǎng)基(CM)中，濃度為5000個細胞／0．15ml。將細胞接種在96孔平板中且達到5000個細胞／孔，在37℃下保溫24小時。細胞用無血清培養(yǎng)基(SFM)洗滌1次且在無血清條件下保溫24小時。在此期間，非血清缺乏的對照孔內(nèi)用CM進行培養(yǎng)。將試驗化合物制備為溶于DMSO中的10mM儲備液，用SFM稀釋，向孔中加入一定濃度范圍(0．005—50μM終濃度)內(nèi)的化合物溶液。將細胞保溫1小時，隨后加入50ng／mlVEGF或FGF(R&amp;D體系，Minneapolis，MN)。向由完全培養(yǎng)基刺激的孔中加入試驗化合物且同時刺激。保溫5小時后，加入0．5Ci／孔的氚代胸苷(Amersham)且將細胞保溫過夜。將平板在—20℃下冷凍24小時終止試驗。用Tomtec收集器將平板收獲至過濾墊上并用β平板液體閃爍計數(shù)器(Wallac)計數(shù)。結(jié)果該代表性化合物所得抑制濃度為<tablesid="table8"num="008"><table>式Ⅰ的化合物，其中VEGF刺激的細胞分裂IC50R1是氫，R2是氫，R3是氫，n=1和Ar是2—噻吩基2．0μM</table></tables>上述結(jié)果證明，本發(fā)明的化合物對VRGF刺激的細胞分裂具有顯著的抑制作用。盡管本發(fā)明參照其優(yōu)選實施方案作了具體的公開和描述，但所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應理解，在不背離本發(fā)明權(quán)利要求書定義的本發(fā)明實質(zhì)和范圍下可以在形式和細節(jié)上進行多種變更。本領(lǐng)域技術(shù)人員僅用常規(guī)試驗就可以發(fā)現(xiàn)或確定許多等同于本文所述的本發(fā)明具體實施方案的技術(shù)方案。這些等同方案屬于本發(fā)明的范圍。權(quán)利要求1．一種抑制酪氨酸激酶活性的方法，該方法包括對所述酪氨酸激酶施用足夠濃度的下式所示化合物以抑制該酪氨酸激酶的酶活性其中環(huán)A代表互變異構(gòu)結(jié)構(gòu)n是1、2或3；Ar是和R1、R2、R4和R5分別獨立地代表氫、原子量約為19—36的鹵素、含有1—4個碳原子的低級烷基、低級烷氧基、三氟甲基或R1、R2和R4、R5共同獨立地表示與相鄰碳原子連接的亞甲二氧基；R3是氫、—COR6或—SO2R6，和R6是—CH3或其中Y是氫、氯或—CH3。2．如權(quán)利要求1所述的方法，其中該化合物為對映異構(gòu)體形式，與一種或多種其它此類化合物形成的混合物形式，或同時為對映異構(gòu)體和與一種或多種其它的此類化合物形成的混合物形式。3．如權(quán)利要求1所述的方法，其中所示酪氨酸激酶是受體型酪氨酸激酶或非受體型酪氨酸激酶。4．如權(quán)利要求3所述的方法，其中該酪氨酸激酶選自KDR、flt—1、TIE—2、Lck、Src、fyn和yes。5．如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述酪氨酸激酶的活性影響血管發(fā)生。6．如權(quán)利要求5所述的方法，其中對所述酪氨酸激酶的抑制作用是抗血管發(fā)生。7．如權(quán)利要求6所述的方法，其中對所述酪氨酸激酶的抑制作用阻礙了一種疾病狀態(tài)的進程，所述疾病狀態(tài)選自過度增殖性疾病、關(guān)節(jié)炎、動脈粥樣硬化、牛皮癬、血管瘤、心肌血管發(fā)生、冠狀和腦并生、缺血性肢血管發(fā)生、角膜疾病、潮紅、新血管性青光眼、黃斑變性、創(chuàng)傷愈合、消化性潰瘍螺桿菌相關(guān)性疾病、骨折、糖尿病視網(wǎng)膜病和貓抓熱。8．如權(quán)利要求1所述的方法，所述酪氨酸激酶的活性影響血管透性過高。9．如權(quán)利要求1所述的方法，其中n是1；R3是氫、R1選自氫、甲氧基和氟；和Ar選自2—噻吩基、3—噻吩基和2—呋喃基。10．如權(quán)利要求1所述的方法，其中該化合物是全文摘要茚并[1,2－c]、萘并[1,2－c]和苯并[6,7]芳庚并[1,2－c]吡唑衍生物類的化合物是酪氨酸激酶活性的抑制劑。其活性受到此類化合物抑制的若干種酪氨酸激酶參與過度增殖、血管發(fā)生或血管透性過高的進程。所以,這些化合物可以緩解其中腫瘤形成、轉(zhuǎn)移、血管發(fā)生、血管透性過高或內(nèi)皮細胞增殖是因素之一的疾病狀態(tài)。文檔編號C07D409/04GK1278725SQ98811122公開日2001年1月3日申請日期1998年10月6日優(yōu)先權(quán)日1997年10月6日發(fā)明者L·D·阿諾爾德,徐亞軍,T·巴爾洛薩里申請人:巴斯福股份公司