專利名稱：用于合成1－(4－氟－苯基)－3－(r)－(3(s)－羥基－3－(4－氟苯基)－丙基))－4(s ...的制作方法
背景技術(shù)：
反-2-(烷氧羰基乙基)內(nèi)酰胺和反-2-(羧基-乙基)內(nèi)酰胺為合成1-(4-氟苯基)-3(R)-[3(S)-羥基-3-(4-氟苯基)-丙基)]-4(S)-(4-羥基苯基)-2-氮雜環(huán)丁酮的中間體，后一種化合物是一種膽甾醇減少劑，公開于US5,767,115中。
US5,618,707公開了通過立體選擇微生物還原反應(yīng)將酮基中間體(4-(4-氟-苯甲?；?丁酸或其苯基噁唑烷酮軛合物)還原成用于制備氮雜環(huán)丁酮的相應(yīng)羥基中間體。用于該方法的優(yōu)選的微生物為拜列氏接合糖酵母或八孢裂殖糖酵母。
拆分方法包括使用在培養(yǎng)基、培養(yǎng)基和緩沖液、培養(yǎng)基和溶劑或者培養(yǎng)基和-種緩沖液與溶劑的混合物中的微生物(由環(huán)境來源獲得和由培養(yǎng)物保藏獲得，例如，the American Type CultureCollection(ATCC))，或者使用緩沖液、溶劑或其混合物中的酶，向其中加入外消旋的反-2-(烷氧羰基乙基)內(nèi)酰胺，從而形成、積聚和分離具有所需立體化學(xué)的酯或酸基團(tuán)的化合物。拆分可直接進(jìn)行，或者消去進(jìn)行，這取決于所采用的微生物或酶。
選自下述屬的微生物可用于直接拆分曲霉屬、芽胞桿菌屬、假絲酵母屬、小克銀漢霉屬、德巴利氏酵母屬、分枝桿菌屬、擬青霉屬、青霉屬、紅色桿菌屬(Rhodobacter)、鏈霉菌屬和單端孢屬。優(yōu)選上述屬的下述種洋蔥曲霉、黑色曲霉、雪白曲霉和土曲霉；球形芽胞桿菌；近平滑假絲酵母和皺摺假絲酵母；同宗小克銀漢霉(Cunninghamella homothallica)；漢遜氏德巴利氏酵母；偶發(fā)分枝桿菌；馬昆德氏擬青霉；糾纏青霉；球形紅色桿菌(Rhodobactersphaeroides)；壯觀鏈霉菌和玫瑰單端孢。
選自下述屬的微生物已發(fā)現(xiàn)可用于消去拆分叢毛單胞菌屬(Comanonas)、彎孢霉屬、毛霉菌屬、諾卡氏菌屬和紅球菌屬。優(yōu)選上述屬的以下種睪丸酮叢毛單胞菌(Comamonas testosteroni)；短孢彎孢(Curvularia brachyspora)和膝曲彎孢；卷枝毛霉菌和總狀毛霉菌；珊瑚色諾卡氏菌和紅串紅球菌(Rhodococcuserythropolis)、玫瑰色紅球菌和種。
適用于本發(fā)明拆分方法的可商購酶包括Amano脂酶D(德列馬根霉)；Amano脂酶FAP-15(爪哇根霉)；Amano脂酶MAP-10(爪哇毛霉菌)；Amano脂酶N(雪白根霉)；Interspex BacterialEsterase/脂酶BE 1-Supported(曼陀林假單胞菌(Pseudomonasmandocino))；Nagase脂酶A-10(日本根霉)；Novo SP 525(南極洲型假絲酵母(Candida antarctica)，B型)；Toyobo Lipoprotein脂酶LPL-701和LPL-311，A型(假單胞菌種)；Seikagaki脂酶(德列馬根雷)；Kinzi&Payne脂酶WT(根雷屬)；Svedas脂酶(米根霉)；Sawa脂酶A-10(日本根霉)；Sawa LPL-701和LIP 301(假單胞菌種)；Boehringer-Mannheim ChirazymeTML2(南極洲假絲酵母脂酶，B型)；Boehringer-Mannheim ChirazymeTML4和L6(假單胞菌種)；Interspex脂酶/Esterase ICS-16-FLl Fungal(米根霉)；Fluka脂酶(黑色曲霉)；Toyobo LIP-300/301和LIP-321(假單胞菌種)；Toyobo脂蛋白脂酶LPL 311A型(假單胞菌種)；Novo Lipozyme IM-60(米赫毛霉)和Sigma脂酶XI型(無根根霉)。
優(yōu)選的酶是假單胞菌屬的水解酶(Toyobo LPL 311A型，ToyoboLIP-301/LIP 300，Toyobo LPL 701，BoehringerMannheimChirazymeTML6)。
具體而言，本發(fā)明涉及反-1-(4-氟苯基)-3-(烷氧羰基乙基)]-4(S)-(4-羥基苯基)-2-氮雜環(huán)丁酮的直接拆分方法，包括向所述化合物中加入在培養(yǎng)基、培養(yǎng)基和緩沖液、培養(yǎng)基和溶劑或者培養(yǎng)基和一種緩沖液與溶劑的混合物中的一種微生物，特別是，其中，所述微生物為土曲霉或洋蔥曲霉，近平滑假絲酵母培養(yǎng)形成的混合物，分離式IIa的化合物 其中，R1如前定義。
更具體地，本發(fā)明還涉及反-1-(4-氟苯基)-3-(烷氧羰基乙基)]-4(S)-(4-羥基苯基)-2-氮雜環(huán)丁酮的消去拆分方法，包括向所述化合物中加入在培養(yǎng)基、培養(yǎng)基和緩沖液、培養(yǎng)基和溶劑或者培養(yǎng)基和一種緩沖液與溶劑的混合物中的一種微生物，特別是，其中，所述微生物為玫瑰色紅球菌或紅球菌種，或者向所述化合物中加入在溶劑、緩沖液或其混合物中的酶，特別是，其中，所述酶為來自假單胞菌屬的水解酶，培養(yǎng)形成的混合物，分離式Ib的化合物 其中，R和R1如前定義。式Ib的化合物再進(jìn)行水解除去羧酸酯基團(tuán)R，得到式IIa的化合物。發(fā)明詳述本發(fā)明的水解拆分法可概括為下述反應(yīng)路線 該反應(yīng)路線顯示出采用微生物或酶進(jìn)行直接水解的方法，其中，外消旋的內(nèi)酰胺酯I被水解生成對映異構(gòu)體富集的酸(3R，4S)-IIa，其易于從未反應(yīng)的羧酸酯(3S，4R)-Ia中分離出。或者，外消旋內(nèi)酰胺酯I的消去拆分產(chǎn)生酸IIb和對映異構(gòu)體富集的羧酸酯(3R，4S)-Ib，其隨后進(jìn)行水解而產(chǎn)生(3R，4S)-IIa。對映異構(gòu)體富集的(3R，4S)-IIa隨后用于合成1-(4-氟-苯基)3(R)-[3(S)-羥基-3-(4-氟苯基)丙基)]-4(S)-(4-羥基苯基)-2-氮雜環(huán)丁酮，采用本領(lǐng)域中公知的方法，例如，將式IIa的酸轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的?；?，使?；仍倥c4-氟苯基衍生物反應(yīng)，并將酮還原成醇，如5,767,115所述的方法H。
水解拆分過程這樣進(jìn)行將外消旋的反2-(烷氧羰基乙基)內(nèi)酰胺I加至包含微生物的培養(yǎng)基、培養(yǎng)基和緩沖液、培養(yǎng)基和溶劑或者培養(yǎng)基和一種緩沖液與溶劑的混合物中，或者加至包含酶的溶劑、緩沖液或其混合物中。生物轉(zhuǎn)化過程可在約20至40℃進(jìn)行；微生物反應(yīng)優(yōu)選在室溫至30℃進(jìn)行，酶反應(yīng)優(yōu)選在室溫至37℃進(jìn)行。反應(yīng)的初始pH值被調(diào)節(jié)至約5.0至9.0，優(yōu)選7.0。
在微生物反應(yīng)中，處消旋反式內(nèi)酰胺酯I的初始濃度可為約0.5-5g/l，優(yōu)選0.5g/l。微生物水解的持續(xù)時間可為約18-96小時，優(yōu)選約48小時。
在酶介導(dǎo)的反應(yīng)中，反式內(nèi)酰胺酯I的初始濃度可為約5-200mg/l，優(yōu)選25mg/l。酶水解的持續(xù)時間可為約24-192小時。
適宜的發(fā)酵培養(yǎng)基、緩沖液和溶劑對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說是公知的。發(fā)酵培養(yǎng)基通常包含碳氮源或其混合物，采用酵母提取物、營養(yǎng)肉湯、葡萄糖(工業(yè)葡萄糖)、白馬鈴薯糊精(white potatodextrin)、大豆粉、蛋白胨和其它本領(lǐng)域中公知的成分。典型的緩沖液為磷酸鹽緩沖液(例如，0.1M，pH7)、MES(2-[N-嗎啉代]乙磺酸)、Bis-Tris(二[2-羥基乙基]亞氨基三[羥基甲基]甲烷)、PIPES(1，4-哌嗪-二乙磺酸)、HEPES(N-[2-羥基乙基]哌嗪-N’-[2-乙磺酸])、Tris(三(羥基甲基)氨基甲烷)和MOPS(3-[N-嗎啉代]丙磺酸)緩沖液(例如，0.1M，pH7)。典型的溶劑為乙腈、丙酮、乙醚、異丙醇、叔丁醇、異戊醇、對二噁烷、異丙醚、二甲亞砜、叔丁基甲基醚(TBME)、甲苯、四氫呋喃和二氯甲烷。優(yōu)選地，微生物拆分過程在發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行，酶拆分過程優(yōu)選在具有助溶劑的緩沖液中進(jìn)行；酶拆分過程優(yōu)選的助溶劑為TBME。
在水解末期，采用有機(jī)溶劑如乙酸乙酯、TBME、二氯甲烷等對旋光富集的酸或酯進(jìn)行萃取。本領(lǐng)域中公知的吸附樹脂、色譜法和其它物理方法均可用于分離旋光富集的酸或酯。
式Ib的羧酸酯可采用本領(lǐng)域中公知的方法水解成相應(yīng)的式IIa的酸，例如，通過用適宜的堿處理，如采用LiOH，如US5,767,115所述。
下述實(shí)施例說明了在本發(fā)明的水解過程中微生物和酶的評價，并說明了毫克量的式IIa和Ib化合物的制備。
實(shí)施例1以下描述用于確定用于生產(chǎn)酸IIa的外消旋的反式內(nèi)酰胺甲酯I的微生物水解的一般方法。
在125ml或300ml的燒瓶中生長酵母、絲狀真菌和細(xì)菌的種子培養(yǎng)物，所述燒瓶中分別包含25ml或50ml的YPD(1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖；pH5.5)，SIM6(3.5％大豆粉，5％白馬鈴薯糊精，0.5％工業(yè)葡萄糖，2mg/氯化鈷，0.5％碳酸鈣；pH6.0)和NYC(0.8％營養(yǎng)肉湯，2％酵母提取物，2％工業(yè)葡萄糖；pH7.0)培養(yǎng)基，在30℃及攪拌(175-250rpm)下生長72小時，此后對在30℃及攪拌(250rpm)下培養(yǎng)的燒瓶發(fā)酵液進(jìn)行接種(4％v/v)(25ml YPD/125ml燒瓶用于酵母和絲狀真菌或25ml NYC/125ml燒瓶用于細(xì)菌)。在所有發(fā)酵過程中，在接種前對培養(yǎng)基的pH值進(jìn)行調(diào)節(jié)，但在培養(yǎng)基繁殖和底物水解過程中不對pH值進(jìn)行控制。微生物拆分過程通過向培養(yǎng)物中加入溶解于乙醇(25mg/ml)中的0.5g/l的外消旋的反式內(nèi)酰胺甲酯I開始，隨后生長24小時。發(fā)酵肉湯樣品用TBME萃取，再將底物培養(yǎng)24-72小時，用反相HPLC進(jìn)行分析。下表1中列出了顯示出選擇性水解生成酸IIa的優(yōu)選培養(yǎng)物。
表1采用微生物直接拆分外消旋的反式內(nèi)酰胺甲酯
* Schering-Plough研究生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物保藏實(shí)施例2按照下述過程，由芐基保護(hù)的外消旋反式內(nèi)酰胺甲酯I微生物水解制備毫克量的酸IIa。
如實(shí)施例1所述，采用復(fù)合燒瓶發(fā)酵對甲酯I(0.5g/l)進(jìn)行微生物拆分以產(chǎn)生酸IIa，采用土曲霉菌株ATCC#24839。在培養(yǎng)48小時后，合并每種培養(yǎng)物的發(fā)酵肉湯，再對發(fā)酵肉湯離心以分離出細(xì)胞。采用研缽和研棒將細(xì)胞顆粒狀物在液氮中磨成粉狀，之后用TBME(1-2體積/濕重)進(jìn)行三次順序萃取。TBME萃取物包含(3R，4S)-酸和(3S，4R)-酯，每一種均大于99％對映體過量。將無水MgSO4加至TBME萃取物中以除去殘余的水，再將提取物過濾，通過蒸發(fā)將濾液濃縮。提取物濃縮液用制備薄層色譜純化，采用多個10-20GF硅膠板(20cm×20cm×1000μm)，并用乙酸乙酯∶己烷(50∶50)展開。從每一硅膠板中刮下帶有所需產(chǎn)物的材料(Material comigrating)，將其合并并用TBME從硅膠上洗脫。將洗脫物蒸發(fā)，得到(3R，4S)-酸IIa170mg，17％收率；86％對映體過量；[α]D25＝-13.0°(c＝0.123，乙醇)。
實(shí)施例3以下描述用于確定用于生產(chǎn)酯Ib的芐基保護(hù)的外消旋反式內(nèi)酰胺甲酯I的微生物拆分的一般方法。
在125ml或300ml的燒瓶中生長酵母、絲狀真菌和細(xì)菌的種子培養(yǎng)物，所述燒瓶中分別包含25ml或50ml的YPD(1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％糊精；pH5.5)，SIM6(3.5％大豆粉，5％白馬鈴薯糊精，0.5％工業(yè)葡萄糖，2mg/l氯化鈷，0.5％碳酸鈣；pH6.0)和NYC(0.8％營養(yǎng)肉湯，2％酵母提取物，2％工業(yè)葡萄糖；pH7.0)培養(yǎng)基，在30℃及攪拌(175-250rpm)下生長72小時，此后對在30℃及攪拌(250rpm)下培養(yǎng)的燒瓶發(fā)酵液進(jìn)行接種(4％v/v)(25ml YPD/125ml燒瓶用于酵母和絲狀真菌或25ml NYC/125ml燒瓶用于細(xì)菌)。在所有發(fā)酵過程中，在接種前對培養(yǎng)基的pH值進(jìn)行調(diào)節(jié)，但在培養(yǎng)基繁殖和底物水解過程中不對pH值進(jìn)行控制。微生物拆分過程通過向培養(yǎng)物中加入溶解于乙醇(25mg/ml)中的0.5g/l的外消旋的反式內(nèi)酰胺甲酯I開始，隨后生長24小時。發(fā)酵肉湯樣品用TBME萃取，再將底物培養(yǎng)24-72小時，用反相HPLC進(jìn)行分析。下表2中列出了產(chǎn)生旋光富集酯Ib的培養(yǎng)物。
表2采用微生物消除拆分外消旋的反式內(nèi)酰胺甲酯
實(shí)施例4如實(shí)施例3所述，采用復(fù)合燒瓶發(fā)酵由紅球菌屬種ATCC#19071，對芐基保護(hù)的外消旋反式內(nèi)酰胺甲酯I(0.5g/l)進(jìn)行微生物水解生產(chǎn)毫克量的甲酯Ib，在培養(yǎng)48小時后，合并每個燒瓶中的的發(fā)酵肉湯，再對發(fā)酵肉湯離心以分離出細(xì)胞。通過聲波破碎細(xì)胞顆粒狀物，之后用TBME(1-2體積/濕重)進(jìn)行三次順序萃取。發(fā)酵肉湯另用TBME萃取。將無水MgS04加至TBME萃取物中以除去殘余的水，再將萃取物過濾，通過蒸發(fā)將濾液濃縮。提取物濃縮液用制備薄層色譜純化，采用多個10-20GF硅膠板(20cm×20cm×1000μm)，并用乙酸乙酯∶己烷(50∶50)展開。從每一硅膠板中刮下帶有所需產(chǎn)物的材料(material comigrating)，將其合并并用TBME從硅膠上洗脫。將洗脫物蒸發(fā)，得到(3R，4S)-酯Ib360mg，36％收率；超過99％對映體過量；[α]D25＝-7.5°(c＝0.133，乙醇)。
實(shí)施例5以下描述用于確定用于生產(chǎn)旋光富集酸和酯的芐基保護(hù)的外消旋反式內(nèi)酰胺甲酯或三氟乙酯I的酶拆分的一般方法。
采用一種兩相體系進(jìn)行酶篩分反應(yīng)，所述體系包含0.6ml的TBME和1.0ml的0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.0)。所述酶通常為50-200mg或100-200μL，將其加至懸浮液中，再加入14.4mg的甲酯。將混合物在室溫下進(jìn)行攪拌(350rpm)。如表3所示，評價這些反應(yīng)條件的變化。通過離心對相進(jìn)行分離而回收物質(zhì)，產(chǎn)物和未反應(yīng)的原料用手性HPLC進(jìn)行分析。表3列出了顯示出能夠選擇性地水解外消旋反式內(nèi)酰胺甲酯I產(chǎn)生酸IIb和酯Ib的酶。
表3產(chǎn)生旋光富集酯Ib和酸IIb的芐基保護(hù)的外消旋反式內(nèi)酰胺甲酯I的酶拆分
條件酯(50mg)，酶(50mg)，TBME/磷酸鹽緩沖液(pH7)(1mL∶1mL)，300rpm，RT。#條件酯(19mg)，酶(1mg)，四氫呋喃/0.5M MOPS緩沖液pH7.0(0.2/1.0mL)采用芐基保護(hù)的外消旋反式內(nèi)酰胺三氟乙酯I進(jìn)行類似的操作。采用一種兩相體系進(jìn)行酶反應(yīng)，所述體系包含1.0ml的TBME和1.0ml的0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.0)。將大約為50mg的酶和50mg的酯加至懸浮液中，在室溫下攪拌(300rpm)186小時。通過離心對該相進(jìn)行分離而回收物質(zhì)，產(chǎn)物和未反應(yīng)的原料用手性HPLC進(jìn)行分析。表4列出了顯示出能夠選擇性地水解外消旋反式內(nèi)酰胺三氟乙酯I產(chǎn)生酸IIb和酯Ib的酶。
表4生產(chǎn)旋光富集酯Ib和酸IIb的芐基保護(hù)的外消旋反式內(nèi)酰胺三氟乙酯I的酶拆分
實(shí)施例6按照下述過程，由芐基保護(hù)的外消旋反式內(nèi)酰胺甲酯經(jīng)酶拆分制備毫克量的酯Ib。 在室溫下，將Toyobo LPL-311(A型)(假單胞菌種)(202mg)溶解于0.1M的磷酸鹽緩沖液(pH7)(8mL)中。加入外消旋的甲酯(199.5mg，0.46mmol)的TBME(8mL)溶液。將兩相混合物在37℃下以250rpm搖動187小時。再將反應(yīng)混合物用0.5M H2SO4(1mL)酸化，用水(15mL)稀釋，再放置于兩個離心管中。向每支管中加入乙酸乙酯(20mL)，將管搖動，然后在3000rpm下離心0.5小時。除去有機(jī)層，重復(fù)萃取/離心兩次。將合并后的有機(jī)萃取液蒸發(fā)，將粗產(chǎn)物放置在硅膠柱上(Selecto 32-63目；20g)，用30％(300mL)和50％(400mL)的乙酸乙酯/庚烷洗脫，收集餾分約20mL。合并餾分4-6，蒸發(fā)，得到(3R，4S)-甲酯89mg，44.6％；95.1％對映體過量；[α]D25＝-14.15°(c＝0.89，乙醇)。餾分11-19提供(3S，4R)-酸39mg，20.2％；84.5％對映體過量，[α]D25＝+14.87°(c＝0.39，乙醇)。
在室溫下，將Toyobo LPL-311(A型)(假單胞菌種)(365mg)溶解于0.1M的磷酸鹽緩沖液(pH7)(16mL)中。加入外消旋的三氟乙酯(428mg，0.85mmol)的TBME(16mL)溶液。將兩相混合物在37℃下以250rpm搖動7.75小時，冰箱過夜保存。再將反應(yīng)混合物用0.5MH2SO4(1mL)酸化，用水(50mL)稀釋，再放置于四個離心管中。向每支管中加入乙酸乙酯(15mL)，將管搖動，然后在3000rpm下離心0.5小時。除去有機(jī)層，重復(fù)萃取/離心兩次。將合并后的有機(jī)萃取液蒸發(fā)，將粗產(chǎn)物放置在硅膠柱上(Selecto 32-63目；35g)，用30％(450mL)和50％(600mL)的乙酸乙酯/庚烷洗脫，收集餾分約20mL。合并餾分5-7，蒸發(fā)，得到(3R，4S)-三氟乙酯191mg，44.6％；99.0％對映體過量；[α]D25＝-9.31°(c＝1.88，乙醇)。餾分18-36提供(3S，4R)-酸100mg，27.9％；88.3％對映體過量，[α]D25＝+15.96°(c＝0.99，乙醇)。步驟2 將(3R，4S)-三氟乙酯(181mg，0.36mmo))(99.0％ee)溶解于THF(4mL)中，并在冰浴中冷卻至0℃。加入LiOH(52.5mg，1.25mmol)溶液，再將混合物在0℃下攪拌3.25小時，此時，HPLC指示水解完全。將反應(yīng)混合物用0.5M H2SO4(12mL)酸化，再用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。將合并后的有機(jī)萃取液用飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，干燥(Na2SO4)，過濾，和蒸發(fā)146mg，96.4％；98.2％對映體過量。
將粗產(chǎn)物樣品用制備TLC純化(Analtech Uniplate Silica GelGF；20×20cm；1000μm)，用50％乙酸乙酯/庚烷洗脫[α]D25＝-16.52°(c＝0.66，乙醇)。
權(quán)利要求
1.一種式I的外消旋的反-2-(烷氧羰基乙基)-內(nèi)酰胺微生物或酶水解拆分方法， 其中，R為C1-C7烷基、2，2，2-三氟乙基或甲氧基乙氧基乙基和R1為氫或保護(hù)基團(tuán)，選自芐基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基和乙酰基，包括將外消旋內(nèi)酰胺I加入在培養(yǎng)基、培養(yǎng)基和緩沖液、培養(yǎng)基和溶劑或者培養(yǎng)基和一種緩沖液與溶劑的混合物中的微生物中，或者加入在緩沖液、溶劑或其混合物中的酶中，獲得一種旋光富集的式Ib或IIa化合物 其中，R和R1如前定義；和將式Ib的羧酸酯水解獲得式IIa的化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，采用用于拆分外消旋反式內(nèi)酰胺I的微生物獲得旋光富集酸IIa。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中，R為甲基。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中，微生物為選自下述屬的微生物曲霉屬、芽胞桿菌屬、假絲酵母屬、小克銀漢霉屬、德巴利氏酵母屬、分枝桿菌屬、擬青霉屬、青霉屬、紅色桿菌屬、鏈霉菌屬和單端孢屬。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中，微生物選自下述種洋蔥曲霉、黑色曲霉、雪白曲霉和土曲霉；球形芽胞桿菌；近平滑假絲酵母和皺摺假絲酵母；同宗小克銀漢霉屬；漢遜氏德巴利氏酵母；偶發(fā)分枝桿菌；馬昆德氏擬青霉；糾纏青霉；球形紅色桿菌；壯觀鏈霉菌和玫瑰單端孢。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，采用用于拆分外消旋反式內(nèi)酰胺I的微生物獲得旋光富集羧酸酯Ib，再進(jìn)行水解獲得旋光富集酸IIa。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中，R為甲基和R1為芐基。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中，微生物選自叢毛單胞菌屬、彎孢霉屬、毛霉菌屬、諾卡氏菌屬和紅球菌屬。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中，微生物選自睪丸酮叢毛單胞菌、短孢彎孢和膝曲彎孢；卷枝毛霉和總狀毛霉、珊瑚色諾卡氏菌和紅串紅球菌、玫瑰色紅球菌和種。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，采用用于拆分外消旋反式內(nèi)酰胺I的酶獲得旋光富集羧酸酯Ib，再進(jìn)行水解獲得旋光富集酸IIa。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中，R為甲基或三氟乙基和R1為芐基。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中，所述酶選自水解酶，來自德列馬根霉、爪哇根霉、爪哇毛霉菌、雪白根霉、曼陀林假單胞菌、日本根霉、南極洲型假絲酵母、假單胞菌屬(假單胞菌種)、根霉菌屬(Rhizopus sp.)、米根霉、黑色曲霉、米赫毛霉和無根根霉。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中，酶選自來自假單胞菌屬種的水解酶。
14.一種式I的外消旋的反-2-(烷氧羰基乙基)-內(nèi)酰胺水解拆分方法， 其中，R為C1-C7烷基、2，2，2-三氟乙基或甲氧基乙氧基乙基，R1為氫或保護(hù)基團(tuán)，選自芐基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基和乙?；▽⑼庀齼?nèi)酰胺I加入在培養(yǎng)基、培養(yǎng)基和緩沖液、培養(yǎng)基和溶劑或者培養(yǎng)基和一種緩沖液與溶劑的混合物中的選自曲霉屬、芽胞桿菌屬、假絲酵母屬、小克銀漢霉屬、德巴利氏酵母屬、分枝桿菌屬、擬青霉屬、青霉屬、紅色桿菌屬、鏈霉菌屬和單端孢屬的微生物中，獲得一種下式的旋光富集的化合物 其中，R1如前定義。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中，微生物為洋蔥曲霉或土酵母，或近平滑假絲酵母。
16.一種式I的外消旋的反-2-(烷氧羰基乙基)-內(nèi)酰胺水解拆分方法， 其中，R為C1-C7烷基、2，2，2-三氟乙基或甲氧基乙氧基乙基，R1為氫或或保護(hù)基團(tuán)，選自芐基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基和乙?；?，包括將外消旋內(nèi)酰胺I加入在培養(yǎng)基、培養(yǎng)基和緩沖液、培養(yǎng)基和溶劑或者培養(yǎng)基和一種緩沖液與溶劑的混合物中的選自叢毛單胞菌屬、彎孢霉屬、毛霉菌屬、諾卡氏菌屬和紅球菌屬的微生物中，獲得一種下式Ib的旋光富集的化合物 其中，R和R1如前定義；和將式Ib的羧酸酯水解，獲得式IIa的化合物 其中，R1如前定義。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中，微生物為玫瑰色紅球菌或種。
18.一種式I的外消旋的反-2-(烷氧羰基乙基)-內(nèi)酰胺水解拆分方法， 其中，R為C1-C7烷基、2，2，2-三氟乙基或甲氧基乙氧基乙基，R1為氫或或保護(hù)基團(tuán)，選自芐基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基和乙?；▽⑼庀齼?nèi)酰胺I加入選自在緩沖液、溶劑或其混合物中的假單胞菌屬種的水解酶中的酶中，獲得一種下式Ib的旋光富集的化合物 其中，R和R1如前定義；和將式Ib的羧酸酯水解，獲得式IIa的化合物 其中，R1如前定義。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種式(Ⅰ)的外消旋的反－2－(烷氧羰基乙基)－內(nèi)酰胺微生物或酶水解拆分方法,其中,R為C
文檔編號C07D205/08GK1330721SQ99813942
公開日2002年1月9日 申請日期1999年10月1日 優(yōu)先權(quán)日1998年10月2日
發(fā)明者M·J·霍曼, W·B·莫甘 申請人:先靈公司