專利名稱：具有抗腫瘤活性的香菇多糖的七糖重復(fù)單元的合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于有生物活性的、特別是涉及可用作抗腫瘤藥的香菇多糖的七糖重復(fù)單元的合成。
香菇多糖是由食用菌香菇的子實體中提取出的多糖，具有抗腫瘤活性，臨床上與化療藥物并用，對肺癌、消化系統(tǒng)器官的癌癥很有效(宋炳生 楊玉龍，《中草藥》1998年29卷第7期492-495頁)，但由于香菇多糖分子量高(50萬-100多萬)結(jié)構(gòu)不均一，有時療效不夠明確，有時有副作用，我們認為，香菇多糖的關(guān)鍵活性部位就是它的重復(fù)單元-一個葡萄七糖，合成這個七糖不僅能夠研究結(jié)構(gòu)與活性的關(guān)系，而且能將這個七糖發(fā)展為新的、更好的抗癌藥物。這個七糖有如下的結(jié)構(gòu) 我們在前兩個專利中(99126224.7及00107835.6)中描述了兩種簡易的方法，它們都是采用先合成帶有支鏈的三糖的策略，本發(fā)明再揭示一種實用的方法，即先構(gòu)筑1-3連接的五糖主鏈，最后再加上兩個1-6連接的側(cè)鏈的方法。
本發(fā)明的合成方法在于2-O-苯甲?；?4，6-O-芐叉基-α-D-葡萄糖-烯丙基苷1首先在3位氯乙?；玫?，2脫掉4，6位的芐叉基得到2-O-苯甲酰基-3-O-氯乙?；?α-D-葡萄糖-烯丙基苷3，3乙?；蟮玫?，4脫掉3位氯乙?；玫絾翁鞘荏w5，如下圖所示 4脫掉1位烯丙基后得到1位為游離羥基的6，再活化得到單糖供體7，如下圖所示 單糖供體7與單糖受體1在路易斯酸催化下縮合得到雙糖8，將8脫掉烯丙基后得到1位為游離羥基的9，再活化后得到雙糖供體10，如下圖所示 雙糖供體10與另一單糖受體5在路易斯酸催化下縮合得到三糖11，11脫掉氯乙?；蟮玫饺鞘荏w12，如下圖所示 雙糖供體10與三糖受體12在路易斯酸催化下縮合得到五糖13，如下圖所示 13脫掉兩個芐叉基后，得到14，如下圖所示 14與苯甲?；钠咸烟枪w15在路易斯酸催化下縮合，得到七糖16，如下圖所示 16脫掉?；吹玫讲槐Ｗo的七糖烯丙基苷17，若先脫掉烯丙基再脫掉?；?，即得到不保護的七糖，如下圖所示 以上圖中Bz＝苯甲酰基 Ac＝乙酰基 CA＝氯乙?；?All＝烯丙基所述的路易斯酸為三甲基硅三氟甲磺酸酯(TMSOTf)或三氟化硼-乙醚絡(luò)和物(BF3.Et2O)。
以下結(jié)合實施例進行說明。
1.單糖2(Allyl 2-O-benzoyl-4，6-O-benzylidene-3-O-chloroacetyl-α-D-glucopyranoside)的制備化合物1的制備見文獻 Pelyvas，I，Lindhorst，T，Tiem，J.Liebigs.Ann.Chem.1990，8，761.將1(10克，24毫克分子)溶于60毫升二氯甲烷中，加入6毫升吡啶，在冰浴冷卻下，滴加氯代乙酰氯2.1毫升在20毫升二氯甲烷中的溶液，在0℃下，反應(yīng)40分鐘，將反應(yīng)液用二氯甲烷稀釋，倒入冰水中，有機相用1N鹽酸，飽和碳酸氫納溶液，水洗滌，干燥，濃縮，柱層析分離得到化合物2，11.3克，產(chǎn)率95％。[α]D20＋105°(c，1.7，CHCl3)；1H NMRδ8.04，7.60-7.33，5.87，5.92-5.71，5.54，5.32-5.08，4.38-3.74.
2·單糖3(Allyl 2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-α-D-glucopyranoside)的制備將2(11克，22毫克分子)溶于50毫升1，4-dioxane中，加入1M的硫酸10毫升，在80℃下反應(yīng)一小時后，濃縮，倒入冰水中，用30毫升二氯甲烷萃取，有機相先后用飽和碳酸氫鈉及水洗滌，干燥，濃縮，柱層析分離，得到化合物3 8.84克，產(chǎn)率98％；[α]D20＋137°(c，1.9，CHCl3)3·單糖4(Allyl 4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-α-D-glucopyranoside)的制備3(8.5克，21.2毫克分子)溶于60毫升二氯甲烷和5毫升吡啶中，在0℃下加入乙酸酐4.5毫升，在室溫反應(yīng)三小時后，薄層色譜分析表明反應(yīng)完成。將反應(yīng)液倒入冰水中，用二氯甲烷萃取，用1N鹽酸，飽和碳酸氫納溶液及水先后洗滌，棄去水相，有機相在真空下抽干，得到的粗產(chǎn)物用硅膠柱層析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/3)作為淋洗液淋洗，收集相應(yīng)組分，得到純的三糖410.1克，產(chǎn)率98％；[α]D20＋113°(c，1.5，CHCl3)；1H NMRδ8.01，7.60-7.43，5.81-5.76，5.78，5.30，5.30-5.13，5.19，5.13，4.34-4.02，3.96，3.93，2.10，2.06.
4·單糖5(Allyl 4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備將4(3克，6.19毫克分子)溶于50毫升二氯甲烷中，加入35毫升甲醇，再加入硫脲2.36克(31.1毫克分子)，加入2，4-lutidine 11毫升，回餾16小時后將反應(yīng)物濃縮，用二氯甲烷萃取，用1N鹽酸，飽和碳酸氫納溶液及水先后洗滌，棄去水相，有機相在真空下抽干，得到的粗產(chǎn)物用硅膠柱層析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/3)作為淋洗液淋洗，收集相應(yīng)組分，得到純的5 2.32克，產(chǎn)率92％；[α]D20＋133°(c，1.4，CHCl3)；5·單糖6(4，6-Di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-D-glucopyranose)的制備將4(6500毫克，13.4毫克分子)溶于100毫升甲醇中，加入300毫克PdCl2，室溫反應(yīng)八小時，過濾，濃縮，柱層析分離，得到化合物6，5130毫克，主要由α異構(gòu)體組成，產(chǎn)率86％。[α]D20＋86°(c，1.7，CHCl3)；熔點120-121℃；6·單糖供體7(4，6-Di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-D-glucopyranosyltrichloroacetimidate)的制備將6(4500毫克，10.5毫克分子)溶于100毫升二氯甲烷中，然后加三氯乙睛(3毫升，30毫克分子)，再加DBU 200微升，反應(yīng)混合物在攪拌下、室溫反應(yīng)二小時后，將反應(yīng)混合物在真空下抽干，用硅膠柱層析法精制，用乙酸乙酯/石油醚(1/2)作為淋洗液淋洗，收集相應(yīng)組分，得到單糖供體7，5120毫克，產(chǎn)率86％。[α]D20＋103°(c，1.5，CHCl3)；1H NMRδ8.65，7.97，7.59-7.41，6.73，5.84，5.40，5.34，4.35-4.17，3.96，3.94，2.10，2.09.
7.雙糖8(Allyl 4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4，6-O-benzylidene-α-D-glucopyranoside)的制備7(2克，3.4毫克分子)與1(1540毫克，3.74毫克分子)溶于20毫升干燥二氯甲烷中，加入1克4A分子篩，在-15℃攪拌下，加入TMSOTf(80微升)，繼續(xù)反應(yīng)1小時，加入三乙胺終止反應(yīng)，過濾反應(yīng)物，用飽和碳酸氫納水溶液及水洗滌，濃縮，柱層析分離得到82.4克，產(chǎn)率80％。[α]D20＋72°(c，1.6，CHCl3)；1H NMRδ7.79，7.60-7.14，5.76-5.69，5.61，5.32，5.27，5.16，5.12，5.21-5.06，5.00，4.95，4.43，4.26-3.65，3.83，3.76，2.01，2.00).
8.雙糖9(4，6-Di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4，6-O-benzylidene-D-glucopyranose)的制備8(4克，4.77毫克分子)溶于5毫升THF，加入10毫升75％醋酸及1.56克醋酸鈉(19.1毫克分子)，再加入1.7克PdCl2(9.54毫克分子)，室溫反應(yīng)過夜，過濾，用二氯甲烷萃取，飽和碳酸氫納水溶液及水洗滌，濃縮，柱層析分離得到9 2.57克，產(chǎn)率67％。[α]D20＋29°(c，1.7，CHCl3)9.雙糖供體10(4，6-Di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4，6-O-benzylidene-α-D-glucopyranosyltrichloroacetimidate)的制備9(2.2克，2.76毫克分子)溶于40毫升二氯甲烷，加入三氯乙睛826微升(8.26毫克分子)，DBU 70微升，室溫反應(yīng)二小時，濃縮，柱層析分離，得到10 1.04克，產(chǎn)率40％。[α]D20＋37°(c，1.4，CHCl3)；1H NMRδ8.51，7.71-7.18，6.52，5.64，5.33-5.14，4.97，4.47，4.35-3.68，3.81，3.76，2.03，2.0010.三糖11(Allyl 4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4，6-O-benzylidene-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備10(600毫克，636微克分子)及5(286毫克，700微克分子)溶于干燥二氯甲烷30毫升，加入分子篩500毫克，在-15℃，氮氣保護下，加入TMSOTf15微升，反應(yīng)1小時后加三乙胺終止，過濾，飽和碳酸氫納水溶液及水洗滌，濃縮，柱層析分離得到11649毫克，產(chǎn)率62％；[α]D20＋43°(c，1.7，CHCl3)；1H NMRδ7.82-6.96，5.76-5.62，5.57，5.18-4.68，4.93，4.69，4.43-3.36，2.10，2.03，2.02，1.9911.三糖受體12(Allyl 4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4，6-O-benzylidene-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備11(360毫克，303微克分子)溶于6毫升甲醇及4毫升二氯甲烷中，加入硫脲115毫克(1.51毫克分子)及2，4-lutidine 36微升，回餾過夜，濃縮，二氯甲烷萃取，先后用1N鹽酸，飽和碳酸氫納水溶液，水洗，干燥，濃縮，柱層析分離得到12 249毫克，產(chǎn)率74％；[α]D20＋43°(c，1.7，CHCl3)；1H NMRδ7.82-6.96，5.76-5.62，5.57，5.18-4.68，4.93，4.69，4.43-3.36，2.10，2.03，2.02，1.9912.五糖13(Allyl 4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4，6-O-benzylidene-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-4，6-O-benzylidene-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備12(180毫克，162微克分子)及10(168毫克，178微克分子)溶于30毫升干燥二氯甲烷中，加入300毫克4A分子篩，在-15℃，氮氣保護下，加入TMSOTf8微升，反應(yīng)1小時后加三乙胺終止，過濾，飽和碳酸氫納水溶液及水洗滌，濃縮，柱層析分離得到13 147毫克，產(chǎn)率48％；[α]D20＋86°(c，1.6，CHCl3)；1H NMRδ7.74-6.97，5.73-5.62，5.47，5.45，5.11-4.62，4.83，4.72，4.53，4.48，4.38-3.24，3.79，3.72，2.10，2.01，1.96，1.93，1.93，1.8413.五糖受體14(Allyl 4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4，6-di-O-acetyl--2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備13(100毫克，53微克分子)溶于二氯甲烷3毫升，加入乙酰氯的甲醇溶液(0.25M)3毫升，室溫下反應(yīng)2小時，三乙胺中和，濃縮，柱層析分離得到14 71毫克，產(chǎn)率78％；[α]D20＋40°(c，1.7，CHCl3)；1H NMRδ7.81-6.92，5.74-5.64，5.28-4.71，4.91，4.66，4.50，4.49，4.36-3.25，3.76，3.66，2.09，2.09，2.08，2.01，1.95，1.8214.七糖15(Allyl 4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-chloroacetyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-(2，3，4，6-tetra-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→6))-p-D-glucopyranosyl-(1→3)-4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-2-O-benzoyl-(2，3，4，6-tetra-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl-(1-6))-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-4，6-di-O-acetyl-2-O-benzoyl-α-D-glucopyranoside)的制備14(40毫克，23微克分子)與苯甲?；膯翁枪w15(40毫克，54微克分子)及100毫克4A分子篩，在-15℃，氮氣保護下，加入TMSOTf5微升，反應(yīng)2小時后加三乙胺終止，過濾，飽和碳酸氫納水溶液及水洗滌，濃縮，柱層析分離得到1627毫克，產(chǎn)率40％；[α]D20＋7.2°(c，0.3，CHCl3)；1H NMRδ8.02-6.90，5.91，5.90，5.73，5.69，5.69-5.58，5.51，5.49，5.18-4.49，4.40-3.22，3.74，3.61，2.06，2.06，2.05，2.00，1.98，1.8115.七糖苷17(Allyl β-D-glucopyranosyl-(1→3)-((β-D-glucopyranosyl-(1-6))-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-O-((β-D-glucopyranosyl-(1→6))-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-α-D-glucopyranoside)的制備飽和的甲醇氨溶液(5mL)與16(60毫克，20.7微克分子)的甲醇(4mL)溶液混合，室溫下反應(yīng)48小時，濃縮反應(yīng)物，用Sephadex LH-20精制得到17(23.8mg，96％).[α]D20＋10.0°(c，0.3，H2O)；1H NMRδ6.00-5.91，5.35，5.24，4.94，4.77，4.73，4.73，4.67，4.49，4.4716.游離七糖18(β-D-glucopyranosyl-(1→3)-((β-D-glucopyranosyl-(1→6))β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosyl(1→3)-((β-D-glucopyranosyl-(1→6))-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-D-glucopyranose)的制備按由8制備9的方法，使100毫克16先脫掉烯丙基，然后按由16制備17的方法，脫掉?；?，得到游離七糖31毫克，產(chǎn)率76％。[α]D20＋6.0°(c，0.5，H2O)；1H NMRδ5.24，4.75，4.72，4.69，4.63，4.50，4.4權(quán)利要求
1.一種可用作抗腫瘤藥的、香菇多糖的七糖重復(fù)單元的合成方法，其特征在于2-O-苯甲?；?4，6-O-芐叉基-α-D-葡萄糖-烯丙基苷1首先在3位氯乙?；玫?，2脫掉4，6位的芐叉基得到2-O-苯甲酰基-3-O-氯乙?；?α-D-葡萄糖-烯丙基苷3，3乙?；蟮玫?，4脫掉3位氯乙?；玫絾翁鞘荏w5，如下圖所示 4脫掉1位烯丙基后得到1位為游離羥基的6，再活化得到單糖供體7，如下圖所示 單糖供體7與單糖受體1在路易斯酸催化下縮合得到雙糖8，將8脫掉烯丙基后得到1位為游離羥基的9，再活化后得到雙糖供體10，如下圖所示 雙糖供體10與另一單糖受體5在路易斯酸催化下縮合得到三糖11，11脫掉氯乙?；蟮玫饺鞘荏w12，如下圖所示 雙糖供體10與三糖受體12在路易斯酸催化下縮合得到五糖13，如下圖所示 13脫掉兩個芐叉基后，得到14，如下圖所示 14與苯甲?；钠咸烟枪w15在路易斯酸催化下縮合，得到七糖16，如下圖所示 16脫掉?；吹玫讲槐Ｗo的七糖烯丙基苷17，若先脫掉烯丙基再脫掉?；吹玫讲槐Ｗo的七糖，如下圖所示 以上圖中Bz＝苯甲酰基 Ac＝乙?；?CA＝氯乙?；?All＝烯丙基
2.一種可用作抗腫瘤藥的、香菇多糖的七糖重復(fù)單元的合成方法，其特征在于所述的路易斯酸為三甲基硅三氟甲磺酸酯(TMSOTf)或三氟化硼-乙醚絡(luò)和物(BF3.Et2O)。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于有生物活性的、特別是涉及可用作抗腫瘤藥的香菇多糖的重復(fù)單元的合成。首先制備1－3連接的二糖和三糖,將二者連接得到1－3連接的五糖,將第二和第四糖單元的芐叉基脫掉,選擇性地在兩個6位與一個葡萄糖分子偶聯(lián),脫掉保護即得到香菇多糖的重復(fù)單元七糖。
文檔編號C08B37/00GK1336387SQ00120948
公開日2002年2月20日 申請日期2000年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月2日
發(fā)明者楊廣斌, 孔繁祚 申請人:中國科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心