專利名稱：一種海藻多糖制品及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從海洋植物藻類提取的海藻多糖制品及其制備方法和用途。
毛孢藻屬(Chnoospora)的常見海藻(Chnoospora spp.)廣泛分布在我國(guó)的沿海海域，資源豐富，有關(guān)以該海藻為原料分離、提取的多糖類物質(zhì)的藥理及化學(xué)方面的研究目前尚未見報(bào)道。因而探索從該海藻原料中提取其藥用有效成分及適于工業(yè)應(yīng)用的制備方法，以便對(duì)該海藻資源進(jìn)行綜合利用，具有重要價(jià)值。
本發(fā)明的目的是提出一種從海藻原料中所分離提取的海藻多糖的新制品及其制備方法，并提出該物質(zhì)作為抗心律失常藥物的新用途。
本發(fā)明所制取的海藻多糖制品為從海洋植物中的褐藻門(Phaeophyta)，網(wǎng)管藻目(Dictgosiphonales)，萱藻科(Scytosiphonaceae)，毛孢藻屬(Chnoospora)的常見海藻(Chnoospora spp.)中分離提取所得，其分子量為5000-20000道爾頓之間，固態(tài)呈棕色或棕黑色，用色譜法分析，其單糖組成主要為90-95％的鼠李糖和巖藻糖，10-5％的阿拉伯糖和葡萄糖。
該制品的制備工藝步驟如下(1)將干海藻除去脂溶性物質(zhì)后用水煎煮提取或?qū)⒏珊Ｔ逯苯蛹铀逯筇崛。?2)將上步煎煮物過(guò)濾取濾液；(3)將取得的濾液通過(guò)離子交換柱或離子滲析方法脫鹽；(4)再先后經(jīng)陰離子交換樹脂和陽(yáng)離子交換樹脂截取得分子量為5000-20000道爾頓的多糖；(5)將上述所得物濃縮后，烘干，粉碎，或直接將濃縮物噴霧干燥，即得所述的海藻多糖制品。
所說(shuō)的將干海藻除去脂溶性物質(zhì)后提取的方法可采用包括以下步驟的工藝(1)將干海藻用非脂性溶劑的水溶液浸泡；(2)將浸泡物過(guò)濾分開渣和濾液；(3)將藻渣加水煎煮提取多次。
所說(shuō)的非脂溶性溶劑可為甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇或丙酮。
本發(fā)明所說(shuō)的陰離子交換樹脂可采用701或弱堿330。
本發(fā)明所說(shuō)的陽(yáng)離子交換樹脂可采用724或弱酸101。
根據(jù)藥理、藥效學(xué)研究的結(jié)果表明，本發(fā)明所制得的海藻多糖產(chǎn)品對(duì)心血管系統(tǒng)具有明顯的作用，尤其是可對(duì)抗多種藥物誘發(fā)的心律失常動(dòng)物模型，可開發(fā)成新型抗心律失常藥物。
本發(fā)明采用現(xiàn)代科學(xué)方法，對(duì)所述海藻原料中的藥用成分進(jìn)行分離、提純，所制得的這種海藻多糖產(chǎn)品安全無(wú)毒，其制備方法可靠易行，適宜大規(guī)模生產(chǎn)，不污染環(huán)境，成本低。
本發(fā)明良好的抗心律失常作用，已經(jīng)過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，以下是它的主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果藥效試驗(yàn)結(jié)果I. 樣品來(lái)源中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所提供的海藻多糖(簡(jiǎn)稱SCPG)產(chǎn)品。II.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NIH純系小白鼠和SD大鼠，由廣東省醫(yī)用動(dòng)物飼養(yǎng)場(chǎng)提供。豚鼠由廣州軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所提供。III.試驗(yàn)方法與結(jié)果(一)對(duì)氯仿誘發(fā)小鼠室顫的對(duì)抗作用NIH小鼠若干，體重為18-22g，雌雄各半，每組20只。給動(dòng)物ip或iv-定劑量的SPA多糖溶液，5min后投入500ml燒杯倒置的培養(yǎng)皿中(內(nèi)有含2ml氯仿的脫脂棉球，以后每換一個(gè)動(dòng)物加入0.5ml氯仿)，待動(dòng)物呼吸停止后，立即取出剖胸并肉眼觀察是否發(fā)生心室纖顫。空白對(duì)照組ip或iv等體積生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組采用5mg/kg劑量的維拉帕米和15mg/kg劑量的利多卡因。用“四格表的精確顯著性測(cè)驗(yàn)表”計(jì)算直接概率，判斷顯著性。試驗(yàn)結(jié)果見表1、表2。
表1.SCPG多糖(ip)對(duì)氯仿誘發(fā)小鼠室顫的對(duì)抗作用劑量 小鼠數(shù)室顫數(shù)室顫百分率mg/kg (只) (只)％生理鹽水組 -- 2018 90
SCPG組 17.05 2010 50*SCPG組 34.10 208 40*SCPG組 51.10 206 30*維拉帕米組 5.00 202 20**與空白對(duì)照組比較p＜0.01表2.SCPG多糖(iv)對(duì)氯仿誘發(fā)小鼠室顫的對(duì)抗作用劑量 小鼠數(shù)室顫數(shù)室顫百分率mg/kg (只) (只) ％生理鹽水組-- 2018 90SCPG組2.50208 40*SCPG組3.75206 30*SCPG組5.00204 20*利多卡因組15.00 206 30**與空白對(duì)照組比較p＜0.01試驗(yàn)結(jié)果表明，空白對(duì)照組室顫發(fā)生率均為90％，而兩種不同給藥途徑ip和iv的不同劑量組的室顫發(fā)生率與空白對(duì)照組比較，p＜0.01，說(shuō)明這兩種給藥途徑不同劑量的SCPG多糖對(duì)于氯仿誘發(fā)的小鼠室顫具有顯著的對(duì)抗作用。此外，SCPG多糖與陽(yáng)性對(duì)照組比較其結(jié)果也表明，SCPG多糖組比維拉帕米組作用弱，但比利多卡因組作用強(qiáng)。
(二)SCPG多糖對(duì)氯化鋇誘發(fā)小鼠室顫的對(duì)抗作用取小鼠若干，體重18-22g，雌雄各半，隨機(jī)分組，每組20只。尾靜脈注射2.50mg/kg、3.75mg/kg、5.00mg/kg劑量的SPA多糖溶液，對(duì)照組注射等體積的生理鹽水，2min后尾靜脈注射0.75mg/kg的BaCl2溶液，給藥后立即拉脊椎處死，剖胸肉眼觀察是否發(fā)生心室纖顫。用“四格表的精確顯著性測(cè)驗(yàn)表”計(jì)算直接機(jī)率，判斷其顯著性。結(jié)果見表3。
表3.SCPG多糖對(duì)BaCl2誘發(fā)小鼠室顫的對(duì)抗作用劑量小鼠數(shù)室顫數(shù)室顫百分率組別mg/kg (只)(只) ％生理鹽水組-- 20 20 100SCPG組2.5020 10 50*SCPG組3.7520 9 45*SCPG組5.0020 8 40*利多卡因組15.00 20 6 30** 與空白對(duì)照組比較p＜0.01試驗(yàn)結(jié)果表明，生理鹽水對(duì)照組室顫發(fā)生率為100％，而給藥組分別為50％；45％；40％，與空白對(duì)照組比較，其p值都小于0.01。說(shuō)明三個(gè)SCPG多糖用藥劑量對(duì)于BaCl2誘發(fā)的小鼠室顫有明顯的對(duì)抗作用。
(三)SCPG多糖對(duì)氯化鋇誘發(fā)大白鼠室性心律失常的對(duì)抗作用取體重200-300g SD大白鼠若干只，隨機(jī)分成四組，每組10只。用烏拉坦腹腔麻醉(1.2g/kg)后仰位固定，描記正常心電圖II導(dǎo)聯(lián)后，對(duì)照組由股靜脈注入6mg/kg的10％BaCl2溶液，觀察心電示波器，并記錄出現(xiàn)心律失常的時(shí)間和持續(xù)時(shí)間。用藥組在出現(xiàn)明顯心律失常后立即由股靜脈注入2.50mg/kg，3.75mg/kg或5.00mg/kg劑量的SCPG多糖對(duì)抗，并觀察能否恢復(fù)竇性心律及恢復(fù)時(shí)間，與對(duì)照組比較用t值法求出P值。結(jié)果見表4。
表4.SCPG多糖(iv)對(duì)BaCl2誘發(fā)大白鼠心律失常的作用(x±SD)劑量 動(dòng)物數(shù) 心律失常持續(xù)時(shí)(mg/kg) (只) 間(min)
空白對(duì)照組 --10 176±31SCPG組 2.50 10 123±32*SCPG組 3.75 10 76±37**SCPG組 5.00 10 58±33***利多卡因組 15.00 10 71±35**與空白對(duì)照組比較，*p＞0.2，**p＜0.05，***p＜0.02試驗(yàn)結(jié)果表明，海藻SCPG多糖的三個(gè)用藥劑量2.50mg/kg，3.75mg/kg、5.00mg/kg對(duì)心律失常的持續(xù)時(shí)間，與空白對(duì)照組比較，第一個(gè)劑量的p值大于0.05，說(shuō)明沒(méi)有顯著性差異。后兩組的p值小于0.05，提示用藥劑量為3.75mg/kg和5.00mg/kg對(duì)氯化鋇誘發(fā)大鼠室性心律失常有非常顯著的對(duì)抗作用。試驗(yàn)結(jié)果也顯示，SCPG多糖比利多卡因的作用強(qiáng)。
(四)SCPG多糖對(duì)哇巴因誘發(fā)豚鼠心律失常的對(duì)抗作用取350-400g健康豚鼠若干只，隨機(jī)分成三組，每組5只，以烏拉坦腹腔麻醉(1.2g/kg)，麻醉后仰位固定，切開右腿及頸部皮膚。右側(cè)股靜脈插管，連接盛有0.03％哇巴因的恒速注射器。描記實(shí)驗(yàn)前正常心電圖II導(dǎo)聯(lián)。給藥組由頸靜脈注入3.12mg/kg，6.25mg/kg或12.50mg/kg劑量的SCPG多糖，空白對(duì)照組注入等量的生理鹽水，然后以3μg/min速度滴注哇巴因，用心電示波器連續(xù)監(jiān)視，并分別記錄出現(xiàn)室性早搏(VP)、室性心動(dòng)過(guò)速(VT)、心室顫動(dòng)(VF)及心跳停止(CA)時(shí)的哇巴因劑量，與對(duì)照組比較用t值法求出P值。結(jié)果見表5和附

圖1。
表5.SCPG多糖對(duì)哇巴因誘發(fā)豚鼠心律失常的對(duì)抗作用(x±SD，n＝5)各類心律失常出現(xiàn)所需哇巴因劑量(μg/kg)室性早 室性過(guò) 心室顫 心跳停止搏(VP) 速(VT) 動(dòng)(VF) (CA)生理鹽 147±25180±24 221±22 272±26水對(duì)照組
12.50mg 225±12** 260±20*** 316±37*** 381±20***/kg劑量組6.25mg/ 183±33*224±33*292±39*** 348±26***kg劑量組3.12mg/ 157±24*206±16*266±26*332±23**kg劑量組與空白對(duì)照組比較，*p＜0.1，**p＜0.05，***p＜0.01.
試驗(yàn)結(jié)果表明，海藻SCPG多糖的2個(gè)用藥劑量為12.50mg/kg和6.25mg/kg的作用，與空白對(duì)照組比較，P值均小于0.05或0.01，說(shuō)明該劑量的SCPG多糖對(duì)哇巴因誘發(fā)的豚鼠心律失常均有顯著或非常顯著的對(duì)抗作用，尤其是哇巴因誘發(fā)豚鼠對(duì)心室纖顫和心跳停止有很明顯的對(duì)抗作用。其作用隨著劑量的增加而加強(qiáng)，呈現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系。
結(jié)論從試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，海藻SCPG多糖能對(duì)抗多種藥物誘發(fā)的心律失常，例如對(duì)氯仿、BaCl2誘發(fā)的小鼠室顫，對(duì)BaCl2誘發(fā)的大鼠室性心律失常及哇巴因誘發(fā)的豚鼠室性早搏(VP)，室性過(guò)速(VT)，心室顫動(dòng)(VF)和心跳停止(CA)均有顯著的對(duì)抗作用。根據(jù)上面的試驗(yàn)結(jié)果可以肯定它抗心律失常作用的藥效，提示海藻SCPG多糖具有很好的開發(fā)成抗心律失常新藥的前景。
圖1為不同劑量的SCPG多糖對(duì)抗哇巴因誘發(fā)豚鼠心律失常的作用關(guān)系。
實(shí)施例一取干海藻(褐藻門Phaeophyta，網(wǎng)管藻目Dictgosiphonales，萱藻科Scytosiphonaceae，毛孢藻屬Chnoospora的常見海藻Chnoospora spp.)2公斤，粉碎后或不粉碎，加入95％的乙醇2倍量，浸泡24小時(shí)，過(guò)濾后，藻渣加水煎煮，提取5次，過(guò)濾出濾液，濾液通過(guò)離子交換柱脫鹽，再用701陰離子交換樹脂及724陽(yáng)離子交換樹脂截取分子量為1000-20000道爾頓的多糖，最后用高壓液相色譜分離、提純得分子量為5000-20000道爾頓的多糖，然后在70℃以下烘干，粉碎烘干物，即得棕色海藻多糖。
實(shí)施例二將所述的干海藻原藻或粉碎后，稱2公斤，加95％甲醇約2倍量，浸泡24次，過(guò)濾后，濾渣加水煎煮，提取3次，過(guò)濾出濾液，濾液用離子滲析法脫鹽，再用701陰離子交換樹脂及724陽(yáng)離子交換樹脂截取分子量為1000-20000道爾頓的多糖，最后用高壓液相色譜分離、提純得分子量為2000-20000道爾頓的多糖，然后在70℃以下烘干，粉碎烘干物，即得棕色海藻多糖。
實(shí)施例三將所述的原干海藻稱2公斤，直接加水煎煮，提取5次，過(guò)濾出濾液，濾液通過(guò)離子交換柱脫鹽，再用弱堿330陰離子交換樹脂及弱酸101陽(yáng)離子交換樹脂截取分子量為1000-20000道爾頓的多糖，最后用高壓液相色譜分離、提純得分子量為5000-20000道爾頓的多糖，然后在70℃以下烘干，粉碎烘干物，即得棕色海藻多糖。
權(quán)利要求
1.一種海藻多糖制品，其特征在于從海洋植物中的褐藻門(Phaeophyta)，網(wǎng)管藻目(Dictgosiphonales)，萱藻科(Scytosiphonaceae)，毛孢藻屬(Chnoospora)的海藻(Chnoospora spp.)中分離提取所得，其分子量為5000-20000道爾頓之間，固態(tài)呈棕色或棕黑色，其單糖組成主要為90-95％的鼠李糖和巖藻糖，10-5％的阿拉伯糖和葡萄糖。
2.一種權(quán)利要求1所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于包括下述步驟(1)將干海藻除去脂溶性物質(zhì)后用水煎煮提取或?qū)⒏珊Ｔ逯苯蛹铀逯筇崛。?2)將上步煎煮物過(guò)濾取濾液；(3)將取得的濾液通過(guò)離子交換柱或離子滲析方法脫鹽；(4)再先后經(jīng)陰離子交換樹脂和陽(yáng)離子交換樹脂截取得分子量為5000-20000道爾頓的多糖；(5)將上述所得物濃縮后，烘干，粉碎，或直接將濃縮物噴霧干燥，即得所述的海藻多糖制品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于所說(shuō)的將干海藻除去脂溶性物質(zhì)后用水煎煮提取的步驟包括(1)將干海藻用非脂性溶劑的水溶液浸泡；(2)將浸泡物過(guò)濾分開渣和濾液；(3)將藻渣加水煎煮提取多次。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于所說(shuō)的非脂溶性溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇或丙酮。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于所說(shuō)的陰離子交換樹脂為701或弱堿330。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于所說(shuō)的陽(yáng)離子交換樹脂為724或弱酸101。
7.權(quán)利要求1所述的海藻多糖制品的用途為抗心律失常藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供一種海藻多糖制品及其制備方法,該制品為從海洋植物中的褐藻門,網(wǎng)管藻目,萱藻科,毛孢藻屬的常見海藻中分離提取所得,其分子量為5000－20000道爾頓之間,固態(tài)呈棕色或棕黑色,其單糖組成主要為:90－95%的鼠李糖和巖藻糖,10－5%的阿拉伯糖和葡萄糖。該制品可開發(fā)成新型抗心律失常藥物。其制備方法可靠易行,適宜大規(guī)模生產(chǎn),不污染環(huán)境,成本低。
文檔編號(hào)C08B37/04GK1377896SQ0111460
公開日2002年11月6日 申請(qǐng)日期2001年4月5日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月5日
發(fā)明者鐘紅茂, 趙迪, 劉錫金, 于嘉陵 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所