專利名稱：包封順鉑的高分子微膠粒及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有聚(乙二醇)片段(以下有時(shí)簡(jiǎn)稱為PEG)和聚(α-谷氨酸)片段(以下有時(shí)簡(jiǎn)稱為P(Glu))的共聚物(有時(shí)簡(jiǎn)稱為PEG-P(Glu))和順鉑的絡(luò)合物以及以該絡(luò)合物為有效成分的藥物。
背景技術(shù)：
順鉑(順式-二氯二胺鉑(II)，cis-diamminedichloroplatinum，以下有時(shí)簡(jiǎn)稱為CDDP)在臨床中是非常有效的抗癌劑，但已知腎毒性等副作用非常強(qiáng)。而且，CDDP一旦在血中給藥，通過腎小球過濾迅速向體外排泄，因而其血液中半衰期非常短。因此，迄今為止，許多研究者開發(fā)了延長(zhǎng)該CDDP的血液中半衰期，并減輕腎毒性的多種制劑，但是還沒有成功的例子。
因此，鑒于現(xiàn)實(shí)的情況，一般在給與CDDP制劑前，施用適當(dāng)?shù)妮斠海又鴮DDP混合在大量的生理鹽水或葡萄糖-鹽水中，經(jīng)數(shù)小時(shí)進(jìn)行點(diǎn)滴靜注。
因而，強(qiáng)烈希望開發(fā)出代替煩雜且花費(fèi)時(shí)間的點(diǎn)滴靜注的新型給藥方式，例如能夠進(jìn)行快速濃注的制劑。
為了適應(yīng)該要求，本發(fā)明人提出了通過在水性介質(zhì)中，聚(乙二醇)-聚(α，β-天冬氨酸)(以下簡(jiǎn)稱為PEG-P(Asp))和CDDP形成絡(luò)合物得到的高分子金屬絡(luò)合物微膠粒(例如，Yokoyama；Kataoka等人，J.Controlled Release 39(1996)351-356；Nishiyama；Kataoka等人，Langmuir 1999，15，377-383)。該高分子金屬絡(luò)合物微膠粒在純水中長(zhǎng)期維持穩(wěn)定的微膠粒結(jié)構(gòu)，在37℃的生理鹽水(0.15M NaCl溶液)中緩緩釋放Pt(II)絡(luò)合物，能夠維持高分子微膠粒結(jié)構(gòu)約10小時(shí)。即，該金屬絡(luò)合物微膠粒在生理環(huán)境下，例如在血液循環(huán)中可以存在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間，在這方面值得關(guān)注。而且，暗示了進(jìn)行靜脈給藥時(shí)，該金屬絡(luò)合物微膠粒和CDDP單體相比，可以得到優(yōu)良的抗癌效果和腎毒性降低效果(例如，片岡，PHARM TECH JAPAN Vol.16，No.8(2000)1209-1219)。
但是，如果可能，仍然需要開發(fā)在生理環(huán)境下可以更長(zhǎng)期維持高分子微膠粒形態(tài)的制劑。因而，本發(fā)明的目的在于提供一種高分子金屬絡(luò)合物，與上述PEG-P(Asp)和CDDP的高分子金屬絡(luò)合物微膠粒相比，在生理環(huán)境下能夠更長(zhǎng)時(shí)間地維持高分子微膠粒形態(tài)。
發(fā)明公開一般需要使金屬絡(luò)合物的穩(wěn)定時(shí)，往往變得不能從形成的絡(luò)合物釋放金屬，或者不能有效或以適當(dāng)?shù)乃俣柔尫沤饘?。例如，如果用蛋白質(zhì)中的半胱氨酸、蛋氨酸、組氨酸等的側(cè)鏈殘基(這些和羧基陰離子相比，具有非常強(qiáng)的親核性)交換CDDP的氯離子配體，就會(huì)形成極其穩(wěn)定的絡(luò)合物，即使在生理鹽水中，也不會(huì)再交換成氯粒子配體，CDDP有時(shí)甚至在生物體內(nèi)不顯示活性。因而，為了開發(fā)具有可以適當(dāng)與CDDP的氯離子配體進(jìn)行交換的配體的載體，本發(fā)明人一直在進(jìn)行研究。結(jié)果，出乎意料得發(fā)現(xiàn)盡管作為可以與CDDP的氯離子交換的配體，在側(cè)鏈具有與PEG-P(Asp)共同的羧基陰離子(-COO-)，但含有聚(乙二醇)片段和聚(α-谷氨酸)片段的嵌段共聚物與CDDP的絡(luò)合物具有合乎本發(fā)明目的的特性。
因而，按照本發(fā)明，提供一種絡(luò)合物，該絡(luò)合物是源于下述式I或II表示的嵌段共聚物與順鉑的絡(luò)合物，順鉑的Pt和該共聚物的羧基陰離子的當(dāng)量比(Pt/COO-)為0.3以上，優(yōu)選0.5以上。 在上述式I和II中，R1獨(dú)立地表示氫原子或可以被官能團(tuán)取代的烷基，A獨(dú)立地表示NH、CO、R5(CH2)pR6，其中R5為O、OCO、OCONH、NHCO、NHCOO、NHCONH、CONH或COO，R6為NH或CO，p為1～6的整數(shù)；R2獨(dú)立地表示氫原子或烷基或芳烷基，R3獨(dú)立地表示氫原子或者疏水性殘基，m獨(dú)立地為50～5000，優(yōu)選100～1000的整數(shù)，n獨(dú)立地為5～1000，優(yōu)選10～500的整數(shù)。
作為本發(fā)明的另一種方式，還提供以上述絡(luò)合物為有效成分的藥物，特別是抗癌劑。


圖1是表示測(cè)定實(shí)施例1制備的本發(fā)明的各種包封CDDP的PEG-P(Glu)的動(dòng)態(tài)光散射(DLS)得到的分散度的圖。
圖2是表明從本發(fā)明的包封CDDP的PEG-P(Glu)高分子微膠粒以及作為比較的包封CDDP的PEG-P(Asp)高分子微膠粒向生理鹽水中釋放CDDP(Pt)的行為的圖。圖中，△PEG-P(Asp)5-40；□PEG-P(Asp)5-80；●PEG-P(Glu)5-35；▲PEG-P(Glu)12-35；■PEG-P(Glu)12-70。
圖3是表示用于評(píng)價(jià)本發(fā)明的包封CDDP的PEG-P(Glu)高分子微膠粒以及作為比較的包封CDDP的PEG-P(Asp)高分子微膠粒在生理鹽水中穩(wěn)定性的經(jīng)時(shí)靜態(tài)光散射(SLS)的相對(duì)散射光強(qiáng)度變化的圖。圖中的符號(hào)與圖2相同。
圖4是分別表示按照實(shí)施例4將游離CDDP和包封CDDP的微膠粒從尾靜脈給藥時(shí)，評(píng)價(jià)血漿中鉑濃度變化(4(A))以及鉑向主要臟器蓄積的時(shí)間變化(4(B)～(E))的結(jié)果的圖。圖中，●游離的CDDP；△PEG-P(Asp)5-40；▲PEG-P(Glu)12-35；■PEG-P(Glu)12-70。
圖5是分別表示按照實(shí)施例5將游離CDDP或者由PEG-P(Glu)12-35形成的包封CDDP的微膠粒從尾靜脈給藥一次時(shí)，評(píng)價(jià)相對(duì)于CDDP換算給藥量的小鼠抗腫瘤效果(5(A))、體重變化(5(B))和相對(duì)BUN值變化(5(C))的結(jié)果的圖(▲游離的CDDP；■由PEG-P(Glu)12-35形成的微膠粒)。
發(fā)明的最佳實(shí)施方式本發(fā)明所述的絡(luò)合物是指CDDP分子內(nèi)的2個(gè)氯離子之一或者兩者被該嵌段共聚物的羧基陰離子交換得到的所謂配位化合物，但不一定限于全部CDDP分子和該嵌段共聚物形成配位鍵。換言之，CDDP分子的一部分可以通過配位鍵以外的任何物理鍵擔(dān)載在該嵌段共聚物上。但是，優(yōu)選擔(dān)載的全部CDDP分子，通過CDDP分子內(nèi)的2個(gè)氯離子之一或者兩者，與該嵌段共聚物的羧基形成配位鍵。
在本說明書中，提到“源于...和順鉑(或CDDP)的”、“包封順鉑(或CDDP)的”、“包封的順鉑(或CDDP)”的場(chǎng)合，“順鉑(或CDDP)”這一用語在本說明書中，不一定是指具有下述結(jié)構(gòu)式的物質(zhì)，而是采用下述含義，即也包含處于從該結(jié)構(gòu)脫離1個(gè)或者2個(gè)氯離子(Cl-)的狀態(tài)時(shí)的物質(zhì)。 在本說明書中，提到“高分子微膠?！钡膱?chǎng)合，具有一般在該技術(shù)領(lǐng)域中使用的含義，更具體地說，是指由上述嵌段共聚物中的PEG片段構(gòu)成的殼(外殼)與由P(Asp)或P(Glu)片段構(gòu)成的核(內(nèi)核)構(gòu)成的核-殼型結(jié)構(gòu)體。按照本發(fā)明，對(duì)高分子微膠粒沒有限制，但典型地是指在水性介質(zhì)中，在CDDP的共存下，嵌段共聚物自動(dòng)多分子締合而形成的物質(zhì)。
對(duì)于本發(fā)明中使用的嵌段共聚物，用上述式I或II表示，只要是遵循本發(fā)明的目的，任何共聚物都可以。這些共聚物例如可以按照下述方法進(jìn)行制備，由專利第2777530號(hào)公報(bào)(或者美國(guó)專利第5449513號(hào))記載的含有聚(乙二醇)片段和聚(α-谷氨酸-γ-苯甲酯)片段的嵌段共聚物，進(jìn)行苯甲基的部分水解或酯交換后的部分水解，或者進(jìn)行實(shí)質(zhì)上完全的水解，相反根據(jù)需要，將羧基部分酯化。
另外，式I和式II中R1為可以被官能團(tuán)取代的烷基時(shí)的官能團(tuán)，可以例舉通常能夠被1個(gè)適當(dāng)保護(hù)基保護(hù)的羥基，如可以醛縮醇或者酮縮醇化的醛基、氨基、巰基、糖殘基等。作為可以具有這種官能團(tuán)的烷基，可以列舉碳原子數(shù)1～20個(gè)的烷基，優(yōu)選1～6個(gè)的甲基、乙基、丙基、丁基、己基、異丙基、叔丁基等直鏈或支鏈的低級(jí)烷基。為了制造具有這種R1基的式I或II的嵌段共聚物，例如可以按照WO96/33233、WO97/06202、WO96/32434等記載的方法，通過制成相應(yīng)的PEG片段后，例如將其ω末端改變?yōu)榘被?，將其作為引發(fā)劑，聚合γ-谷氨酸苯甲酯N-羧酸酐而得到。得到的嵌段共聚物的γ-苯甲基(相當(dāng)于R2)如上所述，可以通過部分水解和/或酯交換，或者實(shí)質(zhì)上完全的水解脫離后，根據(jù)情況，部分引入上述烷基或芳烷基(苯甲基、苯乙基等)。另外，所謂“實(shí)質(zhì)上完全水解”是指包括至少95％，優(yōu)選99％的酯基脫離的情況，但在本發(fā)明的目的上，特別優(yōu)選100％酯基脫離。另外，部分水解或者完全水解后，引入烷基或芳烷基時(shí)(R2基為氫原子以外的基團(tuán))，酯基可以存在多達(dá)70％，優(yōu)選多達(dá)50％，更優(yōu)選多達(dá)30％。
此時(shí)，對(duì)應(yīng)于式I中A表示NH的式I-a表示的共聚物。 (式中，R1、R2、R3、m和n與對(duì)于式I定義的相同)。
另外，式I或II中的A如上所述可以按照PEG片段的ω末端的改變方法或者連接PEG片段和P(Glu)片段的方法而改變，除式I-a所示的上述NH之外，還可以表示CO、R5(CH2)pR6(其中，R5為O、OCO、OCONH、NHCO、NHCOO、NHCONH、CONH或COO，而且R6為NH或CO，p為1～6的整數(shù))。
式I或II中的R3是氫原子或者疏水性殘基。所謂疏水性殘基，在式I和式II的情況下，可以分別列舉C8-16烷基羰基和C8-16烷基、苯基乙酰基和苯甲基、二苯基乙酰基和二苯甲基、芘磺?；蛙呕⒔饎偼榛?、膽甾醇基等，但不限于此。這些殘基可以通過酰氯法或者其它活性酯化法引入。這種疏水性殘基，根據(jù)情況，能夠發(fā)揮提高本發(fā)明絡(luò)合物在水性介質(zhì)中的自締合能力的作用。
式I或II中的m為50～5000的整數(shù)，優(yōu)選100～1000的整數(shù)，n為5～1000的整數(shù)，優(yōu)選10～500的整數(shù)。這些m和n的數(shù)可以根據(jù)作為式I或II中的R2基或R3基是否存在氫原子以外的基團(tuán)或者其存在比例而改變，但是使本發(fā)明的絡(luò)合物可溶于水的場(chǎng)合，優(yōu)選可以形成包封源于順鉑的分子或部分(或者包封順鉑)的高分子微膠粒的數(shù)。例如，R2基是苯甲基，在這種疏水性側(cè)鏈的場(chǎng)合，如果使殘存的羧酸酯和CDDP鍵合，可以形成微膠粒，因此可以采用任意的引入率。
而且，本發(fā)明的絡(luò)合物優(yōu)選上述高分子微膠粒在37℃的純水中穩(wěn)定存在，且通過靜態(tài)光散射的測(cè)定確認(rèn)，在生理鹽水(0.15M NaCl溶液)中維持微膠粒形態(tài)至少約15小時(shí)。所謂在純水中穩(wěn)定存在是指在純水中分散或溶解高分子微膠粒時(shí)，至少2天實(shí)質(zhì)上包封的CDDP不會(huì)從高分子微膠粒向水中釋放。關(guān)于下述實(shí)施例中記載的絡(luò)合物，確認(rèn)即使超過80小時(shí)，CDDP也沒有向水中釋放。另外，還確認(rèn)連續(xù)數(shù)個(gè)月以上是穩(wěn)定的。另一方面，已知一般情況下靜態(tài)光散射(SLS)的散射光強(qiáng)度反映高分子的表觀重均分子量，因此所謂通過靜態(tài)光散射的測(cè)定確認(rèn)在生理鹽水中維持微膠粒形態(tài)是以能夠通過SLS散射光強(qiáng)度變化來評(píng)價(jià)高分子微膠粒的表觀分子量變化為基礎(chǔ)的。例如，推測(cè)包封一定CDDP的PEG-P(Asp)微膠粒在37℃的生理鹽水中，維持其表觀分子量約10小時(shí)后，緩慢解離，但是本發(fā)明的PEG-P(Glu)微膠?？梢跃S持高分子微膠粒的表觀分子量(即維持微膠粒形態(tài))至少約15小時(shí)。而且，本發(fā)明的高分子微膠粒優(yōu)選維持高分子微膠粒的表觀分子量約20小時(shí)。
而且，本發(fā)明的高分子微膠粒通過在水性介質(zhì)中測(cè)定動(dòng)態(tài)光散射(DLS)得到的累計(jì)粒徑約15～約500nm，優(yōu)選約20～約200nm，可以是粒度分布窄的單分散微膠粒。
對(duì)于這種高分子微膠粒中包封的CDDP，CDDP中的Pt和共聚物中的羧基陰離子(COO-)的當(dāng)量比(Pt/COO-)為0.3以上，優(yōu)選0.5以上。該值小于0.3時(shí)，一般在水中不能形成穩(wěn)定的高分子微膠粒。只要高分子微膠粒穩(wěn)定，該值越高越好，但一般為2以下。另外，一般高分子微膠粒具有臨界締合濃度(c.a.c)，但本發(fā)明的包封CDDP的微膠粒對(duì)于稀釋也非常穩(wěn)定。
另一方面，不應(yīng)被理論所束縛，該包封CDDP的微膠粒在近似于生理?xiàng)l件的37℃的生理鹽水中，伴隨著Pt(II)絡(luò)合物的配體交換(-COO-→Cl-)，緩慢釋放出CDDP，如上所述，經(jīng)過約15小時(shí)后，微膠粒形態(tài)崩解。另外，對(duì)于這種包封CDDP的微膠粒，推測(cè)殼(外殼)具有下述結(jié)構(gòu)，即，柔性的且親水性的PEG片段密集數(shù)十個(gè)至數(shù)百個(gè)，從與核(內(nèi)核)的界面形成刷狀。而且，推測(cè)由于主要是中視鏡(メゾスコピツク)的尺寸范圍(約20～100nm)，所以可以避免肝臟的Kupffer細(xì)胞所代表的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)引起的非特異性吞噬，此外還可以避免腎小球體的過濾，該包封CDDP的微膠粒能夠以微膠粒形態(tài)在血流中循環(huán)超過約15小時(shí)。之后，可以在腫瘤部位短時(shí)間釋放出游離或?qū)嵸|(zhì)上游離的CDDP。而且，這種包封CDDP的微膠粒和上述片岡，PHARM TECH JAPAN Vol.16，No.8(2000)1209～1219中記載的包封CDDP的PEG-P(Asp)同樣，腎毒性等毒性低。
因而，本發(fā)明的絡(luò)合物，更具體地說是包封CDDP的PEG-P(Glu)微膠粒能夠以新的給藥方式發(fā)揮CDDP單體本來具有的抗腫瘤活性。這樣，按照本發(fā)明，可以提供以上述本發(fā)明的絡(luò)合物為有效成分的抗癌劑。這種抗癌劑根據(jù)情況，可以將該包封CDDP的PEG-P(Glu)微膠粒本身，或者根據(jù)需要，與賦性劑，如葡萄糖、甘露糖、低聚或者聚乙二醇等穩(wěn)定劑一起以冷凍干燥形態(tài)保存的微膠粒，制成例如藥物的初期濃度為0.1～10mg/ml的稀釋劑如滅菌等滲水溶液，通常進(jìn)行快速濃注達(dá)到0.5～50mg/kg體重。
另外，本發(fā)明的包封CDDP的PEG-P(Glu)微膠粒可以與上述Nishiyama等人記載的PEG-P(Asp)微膠粒同樣進(jìn)行制備。
以下，進(jìn)一步列舉具體實(shí)例來說明本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些具體實(shí)例的限定。
實(shí)施例1在本實(shí)施例中，與上述Nishiyama等人記載的PEG-P(Asp)一起，說明本發(fā)明的PEG-P(Glu)包封CDDP的高分子微膠粒的制造例。本發(fā)明中使用的嵌段共聚物例如用如下結(jié)構(gòu)式表示。 將順鉑(CDDP)溶解于水中(5mmol/L)。在該溶液中溶解聚乙二醇-聚天冬氨酸嵌段共聚物(PEG-P(Asp))和聚乙二醇-聚谷氨酸嵌段共聚物(PEG-P(Glu))(下面，在實(shí)施例中，嵌段共聚物的符號(hào)定為(PEG的分子量×10-3)-(聚氨基酸的聚合度)；例如，PEG-P(Glu)5-35是指PEG的分子量約5000，且P(Glu)的聚合度約35)([CDDP]/[Asp或者Glu]＝1.0)，在37℃反應(yīng)72小時(shí)。通過對(duì)所得溶液反復(fù)進(jìn)行超濾(分級(jí)分子量100000)進(jìn)行精制。
通過動(dòng)態(tài)光散射(DLS)測(cè)定，粒徑測(cè)定(進(jìn)行累計(jì)解析)的結(jié)果如表1所示。確認(rèn)由PEG-P(Asp)5-40和5-79分別形成了粒徑為22.1nm和22.5nm的單分散粒子，并確認(rèn)由PEG-P(Glu)5-35、5-70和12-70分別形成了粒徑為114nm、29.7nm和35.2nm的單分散粒子(參照?qǐng)D1)。與此相對(duì)，確認(rèn)PEG-P(Asp)12-29完全沒有形成粒子。也就是說，通過使構(gòu)成高分子微膠粒內(nèi)核的聚氨基酸結(jié)構(gòu)從天冬氨酸(Asp)轉(zhuǎn)變?yōu)槭杷缘墓劝彼?Glu)，可以增大高分子微膠粒的粒徑，而且可以制備由Asp難以制備的含有分子量為12000的PEG的共聚物構(gòu)成的高分子微膠粒。
表1通過DLS的粒徑測(cè)定(累計(jì)解析)微膠粒粒徑[nm] 多分散度(μ2/)5-40 22.1 0.146PEG-P(Asp)5-79 22.5 0.0735-35 126.70.077PEG-P(Glu) 12-3526.5 0.18512-7035.2 0.078實(shí)施例2通過透析法(透析膜的分級(jí)分子量1000)評(píng)價(jià)在37℃的生理鹽水中由實(shí)施例1得到的包封CDDP的高分子微膠粒釋放CDDP的行為。采用分級(jí)分子量為1000的透析膜，對(duì)50倍的生理鹽水進(jìn)行透析，在規(guī)定時(shí)間后，通過無焰原子吸光對(duì)外液中含有的鉑(Pt)量進(jìn)行定量。確認(rèn)通過使構(gòu)成微膠粒的氨基酸結(jié)構(gòu)從Asp轉(zhuǎn)變?yōu)镚lu，CDDP由高分子微膠粒的釋放速度受到較大抑制(參照?qǐng)D2)。另外，確認(rèn)在水中，CDDP沒有從微膠粒釋放。
實(shí)施例3通過靜態(tài)光散射(SLS)的相對(duì)散射光強(qiáng)度變化，評(píng)價(jià)實(shí)施例1得到的高分子微膠粒在37℃的生理鹽水中作為粒子的穩(wěn)定性。一般已知SLS的散射光強(qiáng)度反映粒子的表觀重均分子量。確認(rèn)在37℃的生理鹽水中，微膠粒顯示出非線性的解離行為，在維持其表觀分子量某一定時(shí)間后，緩慢解離。另外，確認(rèn)通過微膠粒內(nèi)核的氨基酸結(jié)構(gòu)從Asp變?yōu)镚lu，作為微膠粒維持其表觀分子量的時(shí)間從約10小時(shí)大幅度延長(zhǎng)為約30小時(shí)(參照?qǐng)D3)。
實(shí)施例4對(duì)于在下腹部皮下移植了路易士肺癌的C57BL6/N小鼠(n＝4，雄性，6周齡)，評(píng)價(jià)將游離CDDP和包封CDDP的微膠粒通過尾靜脈給藥時(shí)的血漿中鉑濃度和鉑向主要臟器聚集的時(shí)間變化，結(jié)果如圖4所示。圖中，●游離的CDDP；△PEG-P(Asp)5-40；▲PEG-P(Glu)12-35；■PEG-P(Glu)12-70。
在血漿中鉑濃度的時(shí)間變化(圖4(A))中，確認(rèn)包封CDDP的微膠粒與游離的CDDP相比，具有大幅度延長(zhǎng)的血中滯留性。在由PEG-P(Asp)5-40形成的包封CDDP的微膠粒給藥組中，血漿中鉑濃度維持高值(45％給藥量/mL)直至給藥后4小時(shí)，之后迅速減少，24小時(shí)后達(dá)到1.5％給藥量/mL。與此相對(duì)，由PEG-P(Glu)12-35和PEG-P(Glu)12-70形成的包封CDDP的微膠粒給藥組，血漿中鉑濃度維持高值(分別為57和34％給藥量/mL)直至給藥后8小時(shí)，之后緩慢減少，24小時(shí)后的值分別為11和5.1％給藥量/mL。認(rèn)為這些結(jié)果對(duì)于在37℃的生理鹽水中觀察到的通過微膠粒內(nèi)核的氨基酸結(jié)構(gòu)從Asp變?yōu)镚lu顯著延緩的時(shí)間，與非線性的微膠粒崩解行為(圖3)并不矛盾。因而，通過微膠粒內(nèi)核的氨基酸結(jié)構(gòu)從Asp變?yōu)镚lu，包封CDDP的微膠粒在血漿中滯留的時(shí)間大幅度延長(zhǎng)。
在鉑向腫瘤的聚集(圖4(B))中，確認(rèn)包封CDDP的微膠粒與游離的CDDP相比，有效地聚集在腫瘤。在由PEG-P(Asp)5-40形成的包封CDDP的微膠粒給藥組中，腫瘤中鉑濃度有效增大直至確認(rèn)血漿中鉑濃度高的給藥4小時(shí)后，之后達(dá)到最大限度，給藥24小時(shí)后的值是游離CDDP的值的4.8倍。與此相對(duì)，由PEG-P(Glu)12-35和PEG-P(Glu)12-70形成的包封CDDP的微膠粒給藥組，血漿中鉑濃度有效增大直至給藥后8小時(shí)，給藥24小時(shí)后的值分別是游離CDDP的值的20和15倍。由此，通過微膠粒內(nèi)核的氨基酸結(jié)構(gòu)從Asp變?yōu)镚lu，包封CDDP的微膠粒的腫瘤聚集性大幅度提高。
在鉑向腎臟的聚集(圖4(C))中，包封CDDP的微膠粒有效地抑制了關(guān)于游離CDDP所確認(rèn)的給藥后(～15min)立即出現(xiàn)的高度聚集。據(jù)報(bào)導(dǎo)，在文獻(xiàn)中的閾值以上的CDDP聚集會(huì)引起腎毒性，包封CDDP的微膠粒通過避免給藥后立即向腎臟高度聚集，可以期待有效地抑制腎毒性。確認(rèn)由PEG-P(Glu)形成的包封CDDP的微膠粒與由PEG-P(Asp)形成的微膠粒相比，盡管顯示出延長(zhǎng)的血中滯留性和高腫瘤聚集性(圖4(A)和(B))，但對(duì)于CDDP的副作用臟器---腎臟，只具有相同程度的聚集性。
在鉑向肝臟和脾臟的聚集(圖4(D)和(E))中，確認(rèn)由PEG-P(Asp)5-40形成的包封CDDP的微膠粒在給藥8小時(shí)后，血漿中鉑濃度急劇減少，同時(shí)對(duì)于肝臟和脾臟顯示出急劇高度聚集，但是由PEG-P(Glu)形成的微膠粒對(duì)于肝臟和脾臟沒有顯示出那樣急劇的聚集，特別是由PEG-P(Glu)12-35形成的微膠粒，確認(rèn)有效地抑制了鉑向肝臟的聚集。
從圖4的游離CDDP和包封CDDP的微膠粒的組織中鉑濃度-時(shí)間曲線計(jì)算出曲線下面積(AUC)，求出各臟器對(duì)腫瘤的AUC的比，結(jié)果如表2所示。游離CDDP在腎臟AUC/腫瘤AUC和肝臟AUC/腫瘤AUC中顯示出1以上的值，認(rèn)為對(duì)于腎臟和肝臟，具有比腫瘤高的特異性。另一方面，由PEG-P(Asp)5-40形成的包封CDDP的微膠粒在肝臟AUC/腫瘤AUC和脾臟AUC/腫瘤AUC中顯示出1以上的值，認(rèn)為對(duì)于肝臟和脾臟，具有比腫瘤高的特異性。與此相對(duì)，由PEG-P(Glu)12-35形成的微膠粒在全部組織AUC/腫瘤AUC中顯示出1以下的值，認(rèn)為對(duì)腫瘤具有高度特異性。
表2各組織AUC對(duì)腫瘤AUC的比(0-24小時(shí))

實(shí)施例5對(duì)于在下腹部皮下移植了路易士肺癌的C57BL6/N小鼠(n＝4，雄性，6周齡)，評(píng)價(jià)將游離CDDP或由PEG-P(Glu)12-35形成的包封CDDP的微膠粒通過尾靜脈給藥一次時(shí)，相對(duì)于CDDP換算給藥量的小鼠抗腫瘤效果和體重變化，結(jié)果分別如圖5(A)和(B)所示(▲游離CDDP；■由PEG-P(Glu)12-35形成的微膠粒)。在圖5中，計(jì)算出相對(duì)于第0天的腫瘤體積變化和體重變化的相對(duì)值的經(jīng)過天數(shù)積分(從藥物處理至17天)，該值的藥物處理組相對(duì)于未處理組的比分別作為抗腫瘤效果和體重變化表示。另外，對(duì)于正常C57BL6/N小鼠(n＝4，雌性，6周齡)，由尾靜脈給藥一次，評(píng)價(jià)6天后血漿中的尿素氮(BUN)。一般已知BUN值的上升是腎毒性的指標(biāo)。關(guān)于該BUN值，也計(jì)算出藥物處理組相對(duì)于未處理組的比，相對(duì)于CDDP換算給藥量的相對(duì)BUN值如圖5(C)所示。其結(jié)果，相對(duì)于在游離CDDP中確認(rèn)的依賴于給藥量的抗腫瘤效果增大、體重減少和BUN值上升(按12mg/kg處理的小鼠3只中有1只毒性死亡)，關(guān)于包封CDDP的微膠粒，確認(rèn)了可以得到較高抗腫瘤效果，而沒有大幅度體重減少和BUN值上升的給藥量范圍(11～25mg/kg)。認(rèn)為通過這種高分子微膠?；瘮U(kuò)大CDDP的有效治療范圍是由于實(shí)施例4所示的微膠?；鸬腃DDP向腫瘤選擇性聚集。
工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明的包封CDDP的微膠粒是顯示出時(shí)間受到控制的崩解行為的新型CDDP制劑，對(duì)實(shí)體瘤有效聚集，顯示出非常高的抗癌效果，另一方面，顯著減輕了在CDDP給藥時(shí)的最大問題，即腎毒性。而且，通過高分子微膠?；y溶性的CDDP對(duì)水的溶解性飛躍性提高，在CDDP給藥時(shí)，不進(jìn)行在患者的QOL方面認(rèn)為不優(yōu)選的水合，可以簡(jiǎn)便地給藥。因而，認(rèn)為包封CDDP的微膠粒在臨床上具有許多優(yōu)點(diǎn)。因此，可以在醫(yī)療業(yè)和藥物制造業(yè)中利用。
權(quán)利要求
1.一種絡(luò)合物，是源于式I或II表示的嵌段共聚物和順鉑的絡(luò)合物，順鉑的Pt和該共聚物的羧基陰離子的當(dāng)量比(Pt/COO-)為0.3以上， (上述式I和II中，R1獨(dú)立地表示氫原子或可以被官能團(tuán)取代的烷基，A獨(dú)立地表示NH、CO、R5(CH2)pR6，其中，R5為O、OCO、OCONH、NHCO、NHCOO、NHCONH、CONH或COO，R6為NH或CO，且p為1～6的整數(shù)；R2獨(dú)立地表示氫原子或烷基或芳烷基，R3獨(dú)立地表示氫原子或者疏水性殘基，m獨(dú)立地表示50～5000的整數(shù)，n獨(dú)立地表示5～500的整數(shù))。
2.如權(quán)利要求1所述的絡(luò)合物，R1是氫原子、C1-20烷基或者被選自酮縮醇或醛縮醇、羥基、醛基、氨基、巰基和糖殘基中的1個(gè)或2個(gè)取代基取代的C1-20烷基，R2是氫原子或苯甲基，其中氫原子是全部R2基的95％以上，而且，R3是氫原子，或者在式I的情況下，R3是C8-16烷基羰基、苯基乙?；⒍交阴；蜍呕酋；?，另一方面，在式II的情況下，R3是C8-16烷基、苯甲基、二苯甲基、金剛烷基或膽甾醇基。
3.如權(quán)利要求1所述的絡(luò)合物，該共聚物是式I-a表示的嵌段共聚物， (式中，R1、R2、R3、m和n與對(duì)于式I定義的相同)。
4.如權(quán)利要求3所述的絡(luò)合物，R1是氫原子、C1-6烷基、被選自酮縮醇或醛縮醇、羥基、氨基和巰基中的1個(gè)取代基取代的C1-6烷基，R2是氫原子或苯甲基，其中氫原子是全部R2基的95％以上，而且，R3是氫原子。
5.如權(quán)利要求1所述的絡(luò)合物，在使之溶解于水的情況下，可以形成包封源于順鉑的分子或部分的高分子微膠粒。
6.如權(quán)利要求2所述的絡(luò)合物，通過靜態(tài)光散射測(cè)定，確認(rèn)該高分子微膠粒在37℃的純水中穩(wěn)定存在，而且在生理鹽水(0.15M NaCl溶液)中維持微膠粒形態(tài)至少約15小時(shí)。
7.一種藥物制劑，含有藥物有效量的下述絡(luò)合物以及賦性劑或稀釋劑，所述絡(luò)合物是源于式I或II表示的嵌段共聚物和順鉑的絡(luò)合物，順鉑的Pt和該共聚物的羧基陰離子的當(dāng)量比(Pt/COO-)為0.3以上， (上述式I和II中，R1獨(dú)立地表示氫原子或可以被官能團(tuán)取代的烷基，A獨(dú)立地表示NH、CO、R5(CH2)pR6，其中，R5為O、OCO、OCONH、NHCO、NHCOO、NHCONH、CONH或COO，R6為NH或CO，且p為1～6的整數(shù)；R2獨(dú)立地表示氫原子或烷基或芳烷基，R3獨(dú)立地表示氫原子或者疏水性殘基，m獨(dú)立地表示50～5000的整數(shù)，n獨(dú)立地表示5～500的整數(shù))。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物制劑，是抗癌劑。
9.如權(quán)利要求7所述的藥物制劑，是用于快速濃注的形態(tài)。
10.一種癌的治療方法，包括將權(quán)利要求7所述的藥物制劑給予需要治療癌的患者。
11.如權(quán)利要求10所述的治療方法，通過快速濃注給予藥物制劑。
12.權(quán)利要求1所述的絡(luò)合物在制備抗癌劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供以順鉑的氯離子與由聚(乙二醇)－聚(谷氨酸)構(gòu)成的嵌段共聚物的羧基陰離子交換配體的形態(tài)包封順鉑的絡(luò)合物。該絡(luò)合物可以成為能夠以減輕毒性的新型給藥方式適用的藥物制劑。
文檔編號(hào)C08G69/40GK1476330SQ01819468
公開日2004年2月18日 申請(qǐng)日期2001年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2000年9月26日
發(fā)明者片岡一則, 西山伸宏, 橫山昌幸, 岡野光夫, 夫, 宏, 幸 申請(qǐng)人:株式會(huì)社先端科學(xué)技術(shù)孵化中心