專利名稱：K-卡拉膠寡糖單體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種K-卡拉膠寡糖，具體地說(shuō)是涉及一種聚合度為7-25的K-卡拉膠寡糖單體及其制備方法。
背景技術(shù)：
卡拉膠是某些紅藻類(lèi)的細(xì)胞壁多糖，是由半乳糖及半乳糖衍生物構(gòu)成的半乳聚糖硫酸酯，其中K-卡拉膠是由1，3-連接的4-硫酸基-β-D-半乳糖與1，4-連接的3，6-內(nèi)醚-α-D-半乳糖交替連接而成的聚合物?？ɡz由于是一種天然聚陰離子硫酸多糖，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)和日用化工等領(lǐng)域。近些年來(lái)，卡拉膠寡糖及其衍生物的許多重要生物學(xué)功能和生理活性逐漸被人們所認(rèn)識(shí)，在抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗凝血和抗?jié)兊确矫娑硷@示出良好的應(yīng)用前景。如日本專利JP3-170406A公開(kāi)了一種以K-卡拉膠酸水解產(chǎn)物為有效成分的抗菌劑。但目前有關(guān)卡拉膠寡糖的降解制備技術(shù)和專利中，得到的是寡糖的混合物，不利于進(jìn)一步開(kāi)展寡糖結(jié)構(gòu)與活性即構(gòu)效關(guān)系的深入研究，不利于從分子水平來(lái)研究K-卡拉膠寡糖及其衍生物與疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及其作用機(jī)理，從而指導(dǎo)新藥的研究與開(kāi)發(fā)，因此有關(guān)K-卡拉膠寡糖單體的制備是十分必要的。但如果采用化學(xué)合成的方法來(lái)制備K-卡拉膠寡糖單體，特別是聚合度(Dp)＞10以上的寡糖單體合成，因涉及活性基團(tuán)的保護(hù)、糖單位的連接方式和立體構(gòu)型等一系列問(wèn)題，其技術(shù)難度和合成成本都是令人難以接受的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種K-卡拉膠寡糖單體及其制備方法，用它制備的寡糖單體能滿足現(xiàn)有技術(shù)的上述需求。
一種K-卡拉膠寡糖單體，其特征是聚合度Dp＝7-25的K-卡拉膠寡糖，它們的分子式分別為C18+12nH28+17nO21+12nS2+nNa2+n，式中n＝2-11，結(jié)構(gòu)式如下所示
式中n＝2-11一種K-卡拉膠寡糖單體的制備方法，包括將K-卡拉膠用酸降解，用堿中和，濃縮，醇沉，洗滌，再經(jīng)柱層析分離，按洗脫峰合并收集，濃縮，干燥，其特征是柱層析分離采用示差檢測(cè)器檢測(cè)，以碳酸氫銨溶液為流動(dòng)相，用Superdex 30柱進(jìn)行分離。
本發(fā)明采用Superdex 30柱進(jìn)行分離，一次即可得到聚合度為7-25的所有奇數(shù)K-卡拉膠寡糖，無(wú)需再用離子交換色譜法進(jìn)一步分離，大大簡(jiǎn)化了工藝操作和提高了寡糖的制備效率。本發(fā)明采用碳酸氫銨作為流動(dòng)相，因其容易揮發(fā)，經(jīng)反復(fù)濃縮可基本除去，大大克服了寡糖單體樣品制備中除鹽的困難，提高了產(chǎn)品的品質(zhì)。同時(shí)，本發(fā)明克服了現(xiàn)有合成技術(shù)難以制備大量寡糖的困難，為進(jìn)一步開(kāi)展寡糖及其衍生物的構(gòu)效關(guān)系和作用機(jī)理研究以及在指導(dǎo)新藥的研究與開(kāi)發(fā)方面，都具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本發(fā)明獲得的K-卡拉膠寡糖單體還可用于制備寡糖標(biāo)準(zhǔn)試劑和作為寡糖中間體進(jìn)一步制備成糖類(lèi)藥物。


及
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例來(lái)對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。
附圖1為本發(fā)明制備K-卡拉膠寡糖的洗脫曲線圖。
附圖2為本發(fā)明制備K-卡拉膠7-21糖的紅外光譜圖。
附圖3為本發(fā)明制備K-卡拉膠九糖的ESI/MS質(zhì)譜圖。
附圖4為本發(fā)明制備K-卡拉膠九糖的核磁共振圖實(shí)施例將K-卡拉膠用0.05-1.0M的酸在60-100℃降解20-180min后，用堿中和，旋轉(zhuǎn)濃縮后，用醇沉淀，洗滌，再用示差檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，以0.05-0.5M的碳酸氫銨為流動(dòng)相，用Superdex 30柱進(jìn)行分離，按洗脫峰合并收集，濃縮，然后冷凍干燥即得。共10種卡拉膠單體寡糖，它們的分子量依次為1506，1914，2322，2730，3138，3546，3954，4362，4770和5178。
其中所述的酸為鹽酸、硫酸、硝酸和草酸；堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀。
從圖1可以看出，聚合度為7-25的所有奇數(shù)K-卡拉膠寡糖都得到了良好的分離。從圖2中可以看出，各寡糖在1253cm-1和848cm-1處都有強(qiáng)吸收峰，分別為4-硫酸基-β-D-半乳糖中S＝O伸縮振動(dòng)和C-O-S的特征吸收，在924cm-1處的吸收峰為α-D-3，6內(nèi)醚半乳糖的特征吸收，表明本發(fā)明制備的為K-卡拉膠系列寡糖。圖3中1891為[M-Na+]-峰，推算其分子量為1914，與K-卡拉膠九糖的分子量相符對(duì)其碎片離子進(jìn)行進(jìn)一步分析表明其含有五個(gè)G4S和四個(gè)AnGal糖殘基，為K-卡拉膠九糖。圖4中K-卡拉膠九糖各碳的信號(hào)歸屬如表1。
表1K-卡拉膠九糖的核磁共振圖碳信號(hào)歸屬.
Residue C1 C2C3C4C5C6αG4Sre86.2 69.2 76.5 76.2 - 60.9βG4Sre94.2 69.0 78.3 74.5 - 61.0G4Sint102.3 68.9 75.5 - 76.2 -α-G4Snre102.5 - 73.3 77.9 71.6 61 .3AnGal 89.3 - - - - -adjacent to α reAnGal 89.9 - - - - -adjacent to β reAnGal 89.9 68.9 78.8 78.3 77.7 68.9
權(quán)利要求
1 一種K-卡拉膠寡糖單體，其特征是聚合度Dp＝7-25的K-卡拉膠寡糖，它們的分子式分別為C18+12nH28+17nO21+12nS2+nNa2+n，式中n＝2-11，結(jié)構(gòu)式如下所示 式中n＝2-11
2 一種K-卡拉膠寡糖單體的制備方法，包括將K-卡拉膠用酸降解，用堿中和，濃縮，醇沉，洗滌，再經(jīng)柱層析分離，按洗脫峰合并收集，濃縮，干燥，其特征是柱層析分離采用示差檢測(cè)器檢測(cè)，以碳酸氫銨溶液為流動(dòng)相，用Superdex 30柱進(jìn)行分離。
3 如權(quán)利要求2中所述的方法，其特征是所述的酸為鹽酸、硫酸、硝酸和草酸；堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀。
全文摘要
一種K－卡拉膠寡糖單體，其特征是聚合度Dp＝7－25的K－卡拉膠寡糖，它們的分子式分別為C
文檔編號(hào)C08B37/00GK1513880SQ03138968
公開(kāi)日2004年7月21日 申請(qǐng)日期2003年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月4日
發(fā)明者于廣利, 趙峽, 王長(zhǎng)云, 管華詩(shī) 申請(qǐng)人:中國(guó)海洋大學(xué)