專利名稱：溫敏殼聚糖－接枝－NIPAAm/VL共聚物轉(zhuǎn)基因載體的制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種溫度敏感的殼聚糖-接枝-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)/月桂酸乙烯酯(VL)共聚物非病毒轉(zhuǎn)基因載體的制備方法，屬于基因治療領(lǐng)域新型高效非病毒載體的制備方法和技術(shù)。
背景技術(shù)：
轉(zhuǎn)基因技術(shù)在生物、醫(yī)藥、環(huán)保等領(lǐng)域發(fā)揮著越來越重要的作用，一批批轉(zhuǎn)基因動物和植物相繼產(chǎn)生，已成為科學(xué)研究中新的亮點。對于成功的基因治療來說，其中一個重要的因素就是需要高效的載體，能夠運載攜帶遺傳信息的DNA進(jìn)入細(xì)胞核，轉(zhuǎn)錄和翻譯成目的蛋白質(zhì)以達(dá)到療效。目前，在研發(fā)天然及合成的非病毒轉(zhuǎn)基因載體方面已經(jīng)進(jìn)行了很多有益的嘗試，但是仍然面臨著巨大的挑戰(zhàn)，將外源DNA帶入細(xì)胞核內(nèi)還存在許多障礙。
目前基因轉(zhuǎn)染主要采用顯微注射、病毒載體、非病毒載體轉(zhuǎn)化等方法，它們都存在容易造成DNA損傷、轉(zhuǎn)染效率低、設(shè)備昂貴、需要高超的操作技能等缺點，制約著該技術(shù)的更廣泛的應(yīng)用。為了提高基因的轉(zhuǎn)染率，研究人員嘗試?yán)貌《竞头遣《据d體將基因“輸送”至宿主細(xì)胞。盡管病毒載體可獲得很高的轉(zhuǎn)染率，但其缺點是易引起免疫反應(yīng)和腫瘤化趨勢。鑒于此，對非病毒載體的研發(fā)日益引起了廣泛的關(guān)注，如脂質(zhì)體、聚賴氨酸、二乙基氨基葡聚糖、樹狀高分子、殼聚糖等，這些非病毒載體通過靜電相互作用同DNA形成聚電解質(zhì)復(fù)合物，復(fù)合方法簡便易行，并使包覆的DNA得到保護。聚乙烯亞胺(PEI)是一種被廣泛研究的非病毒載體，但是由于其相當(dāng)高的正電荷密度，PEI表現(xiàn)出較強的膜破壞性和細(xì)胞毒性，并且同病毒載體相比，其轉(zhuǎn)染效率也不高，這也可能與其高電荷密度有關(guān)，因為可能在某些情況下，PEI/DNA形成的復(fù)合物過于穩(wěn)定，以至于在細(xì)胞核內(nèi)限制了DNA的解離，影響了基因的表達(dá)。
近來，研究人員開始關(guān)注那些既能在運載DNA進(jìn)入細(xì)胞核過程中與基因保持較高的結(jié)合力，又能在細(xì)胞核內(nèi)降低與基因的結(jié)合力以釋放DNA的新型載體。一條潛在的路線就是通過使用能夠在不同pH值或溫度條件下發(fā)生構(gòu)象變化或相變的刺激響應(yīng)(智能)聚合物來調(diào)控其與DNA的結(jié)合。對于溫度響應(yīng)聚合物來說，聚異丙基丙烯酰胺(PNIPAm)在其低臨界溶解溫度(LCST在32-34℃)以下溶于水，高分子鏈段呈無規(guī)線團狀。溫度高于LCST，PNIPAm從水中析出，鏈段呈密實的小球。PNIPAm的這種特性被廣泛地應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，包括溫敏性藥物釋放、調(diào)控細(xì)胞吸附和溫敏性分離膜等。Hennink等研究發(fā)現(xiàn)，聚異丙基丙烯酰胺與N，N’-(二甲基胺乙基)甲基丙烯酸酯的共聚物(PNIPAm-co-DMAEMA)可作為溫度和pH值響應(yīng)的基因治療載體，但是其轉(zhuǎn)染后的基因表達(dá)效率低于PEI；Yokoyama等將疏水共聚單元引入PNIPAm-co-DMAEMA體系來調(diào)節(jié)相變溫度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可以提高與DNA的結(jié)合力，通過溫度的變化可調(diào)控基因的釋放與表達(dá)；Okano等也將異丙基丙烯酰胺引入陽離子聚合物體系，研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染過程中通過適當(dāng)?shù)亟档图?xì)胞的溫度使PNIPAm鏈段呈松散的線團狀，DNA得以從載體中解離或暴露，有利于基因的表達(dá)，由此提高基因的轉(zhuǎn)染效率。
殼聚糖是一種生物相容性良好、可降解、無細(xì)胞毒的天然堿性多糖，幾十年來研究人員對殼聚糖物化和生物性質(zhì)的認(rèn)識不斷深入。Mumper等首次將殼聚糖用作轉(zhuǎn)基因非病毒載體，通過改變其分子量可得到尺寸100-600nm的DNA/殼聚糖復(fù)合物微粒；MacLaughlin等將殼聚糖和其低聚物與質(zhì)粒DNA形成復(fù)合物，考察了對COS-1細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況。實驗發(fā)現(xiàn)分子量小于105的殼聚糖可與DNA形成粒徑100-200nm的納米微粒，且復(fù)合物在10％的血清中穩(wěn)定性好，能得到滿意的轉(zhuǎn)染率。Roy等利用口服途徑將DNA/殼聚糖復(fù)合物釋放到小鼠腸道上皮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染基因成功表達(dá)Arab2蛋白，減緩對免疫系統(tǒng)過敏性反應(yīng)。
但是，目前所研究的殼聚糖/DNA復(fù)合物均通過自身的質(zhì)子化氨基與DNA通過靜電相互作用而形成。強烈的靜電相互作用一方面有助于復(fù)合物的形成，但另一方面對復(fù)合物解離起到阻礙作用，進(jìn)而降低了轉(zhuǎn)染率。Kuhn等以理論計算研究了DNA與陽離子兩親性分子形成復(fù)合物時電荷的變化，結(jié)果表明，疏水性足夠強的兩親性分子可在很低的濃度下使復(fù)合物呈電中性或發(fā)生電荷反轉(zhuǎn)，即呈正電性。從轉(zhuǎn)基因的安全角度而言，減小載體的用量可降低毒副作用，且借助親疏水性的調(diào)節(jié)可調(diào)控載體的相轉(zhuǎn)變溫度及與細(xì)胞的親和性，進(jìn)而提高轉(zhuǎn)染效率。
與本發(fā)明有關(guān)的參考文獻(xiàn)如下[1]M.Yokoyama，Gene delivery using temperature-responsive polymeric carriers，Drugdiscov.Today 7(2002)426-432. M.Kurisawa，M.Yokoyama，T.Okano，Transfection efficiency increases by incorporationhydrophobic monomer units into polymeric gene carriers，J.Control.Release 68(2000)1-8. M.Kurisawa，M.Yokoyama，T.Okano，Gene expression control by temperature withthermo-responsive polymeric gene carriers，J.Control.Release 69(2000)127-137. R.J.Mumper，J.Wang，J.M.Claspell，A.P.Rolland，Novel polymeric condensing carriersfor gene delivery，Proc.Int.Symp.Controlled Release Bioact.Mater.22(1995)178-179.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供親疏水性可調(diào)，相轉(zhuǎn)變溫度可控的溫度敏感殼聚糖-接枝-異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物非病毒轉(zhuǎn)基因載體的制備方法。所構(gòu)建的溫敏性共聚物載體親疏水性可調(diào)，無細(xì)胞毒性，在體溫下，由于處于LCST以上，高分子鏈段形成緊密的疏水網(wǎng)絡(luò)，在較低的電荷比下可與質(zhì)粒DNA形成粒徑小于120nm的復(fù)合物微粒，能防止DNA被核酸酶的降解，且有助于胞吞；基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞后，降低培養(yǎng)介質(zhì)溫度低于LCST，共聚物大分子鏈段水合，呈松散的線團狀，基因解離和外露，有利于基因的表達(dá)。通過調(diào)節(jié)溫度可實現(xiàn)對基因表達(dá)的控制。
為達(dá)到上述目的，實施以下技術(shù)方案，也即本發(fā)明申請保護的關(guān)鍵技術(shù)。(1)溫度敏感殼聚糖-接枝-異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物非病毒轉(zhuǎn)基因載體的制備。取異丙基丙烯酰胺溶解于四氫呋喃中配制成溶液，然后按異丙基丙烯酰胺與月桂酸乙烯酯摩爾比1∶1-16∶1加入月桂酸乙烯酯，磁力攪拌20分鐘后，按異丙基丙烯酰胺質(zhì)量的0.5-2％加入偶氮二異丁腈引發(fā)劑，和按異丙基丙烯酰胺質(zhì)量的1.0-5％加入巰基乙酸鏈轉(zhuǎn)移劑，在氮氣保護條件下于45-60℃反應(yīng)5-8小時，產(chǎn)物以乙醚沉淀洗滌產(chǎn)物三次，真空烘箱中干燥得到異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚樣品。
(2)將上述異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物分別溶于去離子水中，按與共聚物摩爾比1∶1加入分子量為1000-7000、脫乙酰度為80-95％的殼聚糖水溶液，再按與共聚物摩爾比0.5-2加入碳二亞胺偶聯(lián)劑，以鹽酸/N，N，N′，N′四甲基乙二胺調(diào)節(jié)pH值至4.5-5.5，在5℃-20℃下磁力攪拌反應(yīng)6-10小時，形成溫度敏感殼聚糖-接枝-異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物，將產(chǎn)物于去離子水中透析5天，冷凍干燥得最終溫度敏感性載體。
(3)將上述精制過的溫度敏感殼聚糖-接枝-異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物載體，溶于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中配制成0.2mg/ml-10mg/ml的溶液，再按照共聚物與DNA電荷比1∶6-10∶1加入含有β半乳糖苷酶報告基因的質(zhì)粒DNA，漩渦振蕩靜置，可得粒徑為50-120nm的復(fù)合物粒子。
本發(fā)明的優(yōu)點，為保證復(fù)合物的穩(wěn)定和達(dá)到溫度調(diào)控基因表達(dá)的目的，本發(fā)明選用殼聚糖的分子量為1000-7000，脫乙酰度80-95％。所合成的溫度敏感低分子量殼聚糖-接枝-異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物親疏水性可調(diào)，通過在體溫環(huán)境下形成塌陷的網(wǎng)絡(luò)并借助疏水相互作用，在較低的電荷比下可與質(zhì)粒DNA緊密復(fù)合，不僅有利于胞吞，且能有效地防止DNA受核酸酶的降解；降低溫度至LCST以下，高分子網(wǎng)絡(luò)水合，形成松散的結(jié)構(gòu)，有利于基因的表達(dá)。此外，疏水性月桂酸酯基的引入可有效調(diào)控載體的相轉(zhuǎn)變溫度，提高細(xì)胞的親和性和跨膜能力，在相同的條件下轉(zhuǎn)染率高于殼聚糖，且借助溫度的變化可控制基因的表達(dá)進(jìn)而提高基因的轉(zhuǎn)染率。而常用的殼聚糖載體一般與DNA的電荷比大于1∶1復(fù)合才能獲得穩(wěn)定的聚電解質(zhì)復(fù)合物，且單純殼聚糖載體不具溫度敏感性，因而不具備基因表達(dá)的可控性。
具體實施例方式
實施例一取2克異丙基丙烯酰胺溶解于25毫升四氫呋喃中，加入0.25克月桂酸乙烯酯，磁力攪拌20分鐘后，加入0.01克偶氮二異丁腈和20μl巰基乙酸，在氮氣保護條件下45℃反應(yīng)5小時，以乙醚沉淀洗滌產(chǎn)物三次，真空烘箱中干燥樣品。
取2.0克上步反應(yīng)所得樣品溶解于20ml去離子水中，取3.5克分子量1000，脫乙?；葹?5％的殼聚糖溶解于20ml去離子水中，加入0.15克碳二亞胺，以鹽酸/N，N，N′，N′四甲基乙二胺調(diào)節(jié)pH值至4.5，5℃下磁力攪拌反應(yīng)6小時，將產(chǎn)物于去離子水中透析5天，冷凍干燥得最終載體。
將透析過的5mg溫敏性載體溶于0.02M醋酸/0.02醋酸鈉溶液中，濃度0.2mg/ml，含有β-galactosidase報告基因的質(zhì)粒DNA溶于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中，濃度0.2mg/ml，靜置1小時后濾菌，取20μl載體溶液與10μl質(zhì)粒DNA溶液混合，漩渦振蕩，靜置40分鐘。將所得載體/DNA復(fù)合物粒子加入到已培養(yǎng)至指數(shù)生長期的C2C12成肌細(xì)胞含血清的培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)染3小時后采取如下溫度控制條件37℃(21小時)→20℃(1小時)→37℃(24小時)后，裂解細(xì)胞，測定細(xì)胞裂解液中β-galactosidase的含量及蛋白含量以確定基因轉(zhuǎn)染效率，β-galactosidase的活性為16.42 Unit/mg protein.
實施例二取2克異丙基丙烯酰胺溶解于25毫升四氫呋喃中，加入0.98克月桂酸乙烯酯，磁力攪拌20分鐘后，加入0.02克偶氮二異丁腈和50μl巰基乙酸，在氮氣保護條件下60℃反應(yīng)6小時，以乙醚沉淀洗滌產(chǎn)物三次，真空烘箱中干燥樣品。
取2.0克上步反應(yīng)所得樣品溶解于20ml去離子水中，取3.5克分子量2000，脫乙酰化度為90％的殼聚糖溶解于20ml去離子水中，加入0.35克碳二亞胺，以鹽酸/N，N，N′，N′四甲基乙二胺調(diào)節(jié)pH值至5.0，10℃下磁力攪拌反應(yīng)8小時，將產(chǎn)物于去離子水中透析5天，冷凍干燥得最終載體。
將透析過的5mg溫敏性載體溶于0.02M醋酸/0.02醋酸鈉溶液中，濃度0.5mg/ml，含有β-galactosidase報告基因的質(zhì)粒DNA溶于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中，濃度0.2mg/ml，靜置1小時后濾菌，取20μl載體溶液與10μl質(zhì)粒DNA溶液混合，漩渦振蕩，靜置40分鐘。將所得載體/DNA復(fù)合物粒子加入到已培養(yǎng)至指數(shù)生長期的C2C12成肌細(xì)胞含血清的培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)染3小時后采取如下溫度控制條件37℃(21小時)→20℃(3小時)→37℃(24小時)后，裂解細(xì)胞，測定細(xì)胞裂解液中β-galactosidase的含量及蛋白含量以確定基因轉(zhuǎn)染效率，β-galactosidase的活性為25.73 Unit/mg protein.
實施例三取2克異丙基丙烯酰胺溶解于25毫升四氫呋喃中，加入1.96克月桂酸乙烯酯，磁力攪拌20分鐘后，加入0.03克偶氮二異丁腈和70μl巰基乙酸，在氮氣保護條件下60℃反應(yīng)7小時，以乙醚沉淀洗滌產(chǎn)物三次，真空烘箱中干燥樣品。
取2.0克上步反應(yīng)所得樣品溶解于20ml去離子水中，取3.5克分子量5000，脫乙酰化度為80％的殼聚糖溶解于20ml去離子水中，加入0.50克碳二亞胺，以鹽酸/N，N，N′，N′四甲基乙二胺調(diào)節(jié)pH值至5.0，15℃下磁力攪拌反應(yīng)8小時，將產(chǎn)物于去離子水中透析5天，冷凍干燥得最終載體。
將透析過的10mg溫敏殼聚糖溶于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中，含有β-galactosidase報告基因的質(zhì)粒DNA溶于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中，濃度1mg/ml，靜置1小時后濾菌，取20μl溫敏載體溶液與20μl質(zhì)粒DNA溶液混合，漩渦振蕩，靜置40分鐘。將所得載體/DNA復(fù)合物粒子加入到已培養(yǎng)至指數(shù)生長期的C2C12成肌細(xì)胞含血清的培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)染3小時后采取如下溫度控制條件37℃(21小時)→20℃(2小時)→37℃(26小時)后，裂解細(xì)胞，測定細(xì)胞裂解液中β-galactosidase的含量及蛋白含量以確定基因轉(zhuǎn)染效率，β-galactosidase的活性為20.61 Unit/mg protein。
實施例四取2克異丙基丙烯酰胺溶解于25毫升四氫呋喃中，加入3.92克月桂酸乙烯酯，磁力攪拌20分鐘后，加入0.04克偶氮二異丁腈和100μl巰基乙酸，在氮氣保護條件下60℃反應(yīng)8小時，以乙醚沉淀洗滌產(chǎn)物三次，真空烘箱中干燥樣品。
取2.0克上步反應(yīng)所得樣品溶解于20ml去離子水中，取3.5克分子量7000，脫乙酰化度為90％的殼聚糖溶解于20ml去離子水中，加入0.70克碳二亞胺，以鹽酸/N，N，N′，N′四甲基乙二胺節(jié)pH值至5.5，20℃下磁力攪拌反應(yīng)10小時，將產(chǎn)物于去離子水中透析5天，冷凍干燥得最終載體。
將透析過的10mg溫敏殼聚糖溶于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中，濃度10mg/ml，含有β-galactosidase報告基因的質(zhì)粒DNA溶于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中，濃度1mg/ml，靜置1小時后濾菌，取20μl溫敏性載體溶液與20μl質(zhì)粒DNA溶液混合，漩渦振蕩，靜置40分鐘。將所得載體/DNA復(fù)合物粒子加入到已培養(yǎng)至指數(shù)生長期的C2C12成肌細(xì)胞含血清的培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)染3小時后采取如下溫度控制條件37℃(21小時)→20℃(1小時)→37℃(26小時)后，裂解細(xì)胞，測定細(xì)胞裂解液中β-galactosidase的含量及蛋白含量以確定基因轉(zhuǎn)染效率，β-galactosidase的活性為22.74 Unit/mg protein。
對比例一取2克異丙基丙烯酰胺溶解于25毫升四氫呋喃中，加入0.98克月桂酸乙烯酯，磁力攪拌20分鐘后，加入0.02克偶氮二異丁腈和50ml巰基乙酸，在氮氣保護條件下60℃反應(yīng)6小時，以乙醚沉淀洗滌產(chǎn)物三次，真空烘箱中干燥樣品。
取2.0克上步反應(yīng)所得樣品溶解于20ml去離子水中，取3.5克分子量5000，脫乙酰化度為80％的殼聚糖溶解于20ml去離子水中，加入0.35克碳二亞胺，以鹽酸/N，N，N′，N′四甲基乙二胺節(jié)pH值至5.0，10℃下磁力攪拌反應(yīng)8小時，將產(chǎn)物于去離子水中透析5天，冷凍干燥得最終載體。
將透析過的10mg溫敏殼聚糖溶于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中，含有β-galactosidase報告基因的質(zhì)粒DNA溶于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中，濃度10mg/ml，靜置1小時后濾菌，取20μl溫敏載體溶液與20μl質(zhì)粒DNA溶液混合，漩渦振蕩，靜置40分鐘。將所得載體/DNA復(fù)合物粒子加入到已培養(yǎng)至指數(shù)生長期的C2C12成肌細(xì)胞含血清的培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)染48小時后裂解細(xì)胞，測定細(xì)胞裂解液中β-galactosidase的含量及蛋白含量以確定基因轉(zhuǎn)染效率，β-galactosidase的活性為18.93Unit/mg protein。
對比例二取精制過的分子量5000脫乙?；葹?0％的殼聚糖5mg，溶解于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中，濃度1mg/ml。含有β-galactosidase報告基因的質(zhì)粒DNA溶于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中，濃度0.2mg/ml，靜置1小時后濾菌，取20μl殼聚糖溶液與10μl質(zhì)粒DNA溶液混合，漩渦振蕩，靜置40分鐘。將所得殼聚糖/DNA復(fù)合物粒子加入到已培養(yǎng)至指數(shù)生長期的C2C12成肌細(xì)胞含血清的培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)染48小時后裂解細(xì)胞，測定細(xì)胞裂解液中β-galactosidase的含量及蛋白含量以確定基因轉(zhuǎn)染效率，β-galactosidase的活性為18.32 Unit/mg protein。
權(quán)利要求
1.一種溫敏殼聚糖-接枝-NIPAAm/VL共聚物轉(zhuǎn)基因載體的制備方法，其特征包括以下步驟(1)取異丙基丙烯酰胺溶解于四氫呋喃中配制成溶液，然后按異丙基丙烯酰胺與月桂酸乙烯酯摩爾比1∶1-16∶1加入月桂酸乙烯酯，磁力攪拌20分鐘后，按異丙基丙烯酰胺質(zhì)量的0.5-2％加入偶氮二異丁腈引發(fā)劑，和按異丙基丙烯酰胺質(zhì)量的1.0-5％加入巰基乙酸鏈轉(zhuǎn)移劑，在氮氣保護條件下于45-60℃反應(yīng)5-8小時，產(chǎn)物以乙醚沉淀洗滌產(chǎn)物三次，真空烘箱中干燥得到異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚樣品；(2)將上述異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物分別溶于去離子水中，按與共聚物摩爾比1∶1加入分子量為1000-7000、脫乙酰度為80-95％的殼聚糖水溶液，再按與共聚物摩爾比0.5-2加入碳二亞胺偶聯(lián)劑，以鹽酸/N，N，N′，N′四甲基乙二胺調(diào)節(jié)pH值至4.5-5.5，在5℃-20℃下磁力攪拌反應(yīng)6-10小時，形成溫度敏感殼聚糖-接枝-異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物，將產(chǎn)物于去離子水中透析5天，冷凍干燥得最終溫度敏感性載體；(3)將上述精制過的溫度敏感殼聚糖-接枝-異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物載體，溶于0.02M醋酸鈉/0.02M醋酸溶液中配制成0.2mg/ml-10mg/ml的溶液，再按照共聚物與DNA電荷比1∶6-10∶1加入含有β半乳糖苷酶報告基因的質(zhì)粒DNA，漩渦振蕩靜置，可得粒徑為50-120nm的復(fù)合物粒子。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種溫敏殼聚糖－接枝－異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物轉(zhuǎn)基因載體的制備方法。該方法過程以異丙基丙烯酰胺與月桂酸乙烯酯共聚合成溫敏性共聚物，將分子量1000－7000，脫乙酰度80－95％的殼聚糖與共聚物偶聯(lián)，形成殼聚糖－接枝－異丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物，精制后得到載體；該載體及含有β半乳糖苷酶報告基因的質(zhì)粒DNA分別溶于醋酸/醋酸鈉的溶液中，靜置后，再把溶液按載體與DNA不同電荷比形成粒徑50－120nm的復(fù)合物微粒。本發(fā)明采用的載體親疏水性可調(diào)，相轉(zhuǎn)變溫度低于37℃，無細(xì)胞毒性，在較低的電荷比下能與質(zhì)粒DNA復(fù)合，并能抗核酸酶對DNA的降解，在相同的條件下轉(zhuǎn)染率高于殼聚糖，且借助溫度的變化可控制基因的表達(dá)。
文檔編號C08F299/00GK1629203SQ20041007235
公開日2005年6月22日 申請日期2004年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月21日
發(fā)明者劉文廣, 孫書軍, 程男, 姚康德, 梁東春, 左愛軍, 郭剛, 張鏡宇 申請人:天津大學(xué)