專利名稱：精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物，以及精制和制備方該聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物的方法。特別的，本發(fā)明涉及八單元聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物，該共聚物含有限制量的低分子量低聚物雜質(zhì)，在動物消化道中具有降低的吸附性能；以及本發(fā)明涉及在制備時限制低分子量低聚物雜質(zhì)的含量精制和制備聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物背景技術(shù)改善喂養(yǎng)動物如菜牛、家禽和豬等的飼料的生產(chǎn)效率和生長性能是動物飼料行業(yè)一直的目標(biāo)。為了實現(xiàn)該目標(biāo)，喂養(yǎng)動物的農(nóng)場主們在動物飼料中加入了營養(yǎng)輔劑和低含量的抗生素。喂食少量的抗生素如四環(huán)素、青霉素、磺胺甲嘧啶發(fā)現(xiàn)能夠極大的增加菜牛、豬和家禽的生長性能。這是因為動物消化效率取決于其消化道內(nèi)自然生成的微生物。這些微生物中的一些能夠改善消化，而另一些會有相反的效果。在豬、家禽和牛的飼料中加入低含量的抗生素可以抑制動物消化道中微生物的副作用。抗生素幫助腸道吸收更多的營養(yǎng)和水，從而幫助動物更好的利用食物生長。在動物飼料中加入抗生素也降低了動物之間的傳染病傳播。因此，作為人類消費(fèi)的大部分菜牛、豬和家禽在其日常進(jìn)食中都含有抗生素。
盡管在動物飼料中使用抗生素有助于提高生長性能和飼養(yǎng)效率，但是大范圍的使用抗生素會促使耐抗生素的病原體出現(xiàn)。此外，動物飼料中使用抗生素也會造成外界環(huán)境中的細(xì)菌暴露于抗生素。這種內(nèi)部的和外部的細(xì)菌經(jīng)常暴露于抗生素，容易導(dǎo)致動物體內(nèi)的細(xì)菌有不易控制的風(fēng)險。動物的土壤和水環(huán)境也會受到動物廢料中殘留抗生素的污染。如果耐藥的細(xì)菌在動物或享用動物的人類中引起傳染病，這種傳染病通過常規(guī)的抗生素就不能治療。而且，嚴(yán)重的傳染病將使得尋找適合治療疾病的抗生素的時間大大減少。另外，通過肉類進(jìn)入人體的耐抗生素的細(xì)菌引起的疾病經(jīng)常需要同時用抗生素進(jìn)行治療。當(dāng)人類用抗生素治療有害細(xì)菌引起的傳染病時，人體內(nèi)許多有益和正常的細(xì)菌也被抑制了。這種正常細(xì)菌的抑制將允許耐抗生素的細(xì)菌快速繁殖，從而引起比正在治療的傳染病更加嚴(yán)重的傳染病。肉中耐抗生素的病原體繁殖和人類不加選擇的使用抗生素治療疾病所產(chǎn)生的耐抗生素的個體引起的病原體繁殖正在使現(xiàn)在的抗生素失去作用。
因此，食品和藥物管理局獸醫(yī)中心聯(lián)合美國農(nóng)業(yè)部疾病控制中心(NARMS)于1996年建立了國家耐抗菌劑監(jiān)測系統(tǒng)，從而監(jiān)控人類和動物腸內(nèi)細(xì)菌對幾種抗生素的易受性。NARMS的項目在2001年和2002年擴(kuò)展為包括測試銷售的肉類和動物飼料的成分。在一項研究中，疾病預(yù)防控制中心的研究人員從喬治亞州、馬里蘭州、明尼蘇達(dá)州和俄勒崗州的四個州中選取了26個超市的407個雞肉的樣品。研究人員發(fā)現(xiàn)237個雞肉樣品受到了乳酸腸球菌的污染，該乳酸腸球菌對抗生素的組合具有耐受性。在另一項研究中，來自美國食品和藥物管理局的調(diào)查人員發(fā)現(xiàn)在美國華盛頓三個超市購買的200個火雞、雞肉、牛肉和豬肉樣品被沙門氏菌污染。此外，84％的這些細(xì)菌至少對一種抗生素具有耐受性，53％的細(xì)菌至少對三種抗生素具有耐受性。美國每年將近有140萬例沙門氏菌感染牛肉、豬肉、家禽、蛋類和奶類食品的案子。這在年齡較大的人和免疫功能失常的人群中風(fēng)險最高。因此FDA在考慮禁止使用某些抗生素。現(xiàn)在世界上有很多禁止非治療性抗生素使用的法規(guī)，從而防止對人類健康的威脅。相應(yīng)的，動物飼料行業(yè)發(fā)展提高產(chǎn)量和生長性能的非抗生素化合物飼料很有必要。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物在喂食動物或人類時具有生物活性。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物能夠抑制微生物如細(xì)菌、酵母菌和病毒的生長。這些商業(yè)上可以得到的共聚物的生物活性在美國專利5114708和5234683中有詳細(xì)公開，喂食后對動物的免疫和生長都有作用。這些化合物由親水聚氧乙烯(POE)和憎水聚氧丙烯(POP)塊組成。一般商業(yè)上可得到的八單元共聚物有8個片段或塊-POP和POE各四個。這些共聚物的通式如下(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2商業(yè)上可得到的八單元共聚物的平均總分子量約為1500-40000道爾頓。“a”為聚氧乙烯(C2H4O)a塊的重量百分比，范圍約為化合物總分子量的10％-40％，分子量約為176-1100道爾頓?！癰”為聚氧丙烯塊的重量百分比，范圍約為化合物總分子量的60％-90％，分子量約為232-9900道爾頓。由于這些化合物沒有顯示出抗生素或激素的活性，而且它們在喂食動物或給動物注射時確實具有提高生長性能和免疫刺激的性能。
確信的是，合成八單元共聚化合物能夠在胃腸內(nèi)(GI)提高目標(biāo)動物的生長性能。不受下述理論限制，也可以確信的是，由于八單元共聚化合物具有憎水和親水的部位，它們可以作為表面活性劑，以及調(diào)整腸胃通道中和壁上排列的上皮細(xì)胞中的濃度的分配系數(shù)。通過調(diào)整這種相互作用，單元共聚物可以增加吸收性能差的營養(yǎng)成分的吸收，以及限制粘附和隨后低含量腸內(nèi)病原體的移殖。
由于確信合成八單元共聚化合物的生物作用發(fā)生在GI管道內(nèi)，這些共聚物的全方位吸收既不必要也不需要。吸收到循環(huán)中后在體內(nèi)分布共聚物，在目標(biāo)動物中能夠產(chǎn)生不需要的負(fù)面效應(yīng)。而且，目標(biāo)動物體內(nèi)分散的化合物提高了動物的健康安全，這是因為任何動物組織吸收的殘留物的量最終將被人類消費(fèi)。正由于此，通過GI管道降低吸收的合成八單元共聚化合物和接著喂食動物的消化將是需要的。
這些合成的聚合物的分子鏈分布通常很寬，可以用平均分子量進(jìn)行描述。商業(yè)上可得到的聚氧丙烯/聚氧乙烯八單元共聚物的平均分子量約為1500-40000道爾頓。由于它們相對高的平均分子量，通常認(rèn)為這些促進(jìn)生長的聚合物在動物口服時不會被大量吸收。
不過，由于商業(yè)上可得到的八單元共聚物通常含有大量的分子量小于4000道爾頓的聚合物鏈，有一個驚人的發(fā)現(xiàn)，即商業(yè)上可得到的八單元共聚物的小的生物活性位可以在動物體內(nèi)吸收，從而使人類使用該動物時遇到麻煩。因此，本技術(shù)需要一種能夠在促進(jìn)生長的同時具有降低的可吸收組分的商業(yè)上可得到的八單元共聚物，從而降低動物口服時吸收的風(fēng)險。相應(yīng)的，本技術(shù)也需要簡單和便宜的方法選擇性的除去八單元共聚物中存在的可吸收組分，同時仍然保持共聚物的促生長效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明包括聚氧丙烯/聚氧乙烯八單元共聚物新的制備方法，商業(yè)制備的共聚物具有生長促進(jìn)和免疫提高的活性，但是現(xiàn)有技術(shù)制備的共聚物具有很多副作用。和現(xiàn)有技術(shù)制備相比，由于構(gòu)成本發(fā)明的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物分子量分別窄，低分子量的物質(zhì)較少，因此該共聚物的生物活性范圍更好控制。而且，由于本發(fā)明的共聚物在動物消化組織中很少吸收，因此本發(fā)明的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物極大的降低了人類食用動物時對人類健康造成的風(fēng)險。
本發(fā)明包括下式所述的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該共聚物的平均分子量約為4000-10000道爾頓；“a”代表的是POE占化合物總重的5％-20％，“b”代表的是POP占化合物總重的80％-95％。優(yōu)選共聚物優(yōu)選含有少于4wt％的低分子量組分，其分子量小于4000道爾頓。
聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物的一第二實施例具有下述通式(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的分子量約為4000-10000道爾頓；“a”代表的是POE占化合物總重的5％-20％，“b”代表的是POP占化合物總重的80％-95％，少于50wt％的組合物通過動物胃腸通道吸收。
和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明也涉及制備聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物的方法，該組合物具有窄的分子量分布和較少的低分子量物質(zhì)。制備精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物組合物的第一種方法包括溶劑萃取技術(shù)，其中聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物具有下述化學(xué)式(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該共聚物組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓；“a”代表的是POE占組合物總重的5％-20％，“b”代表的是POP占組合物總重的80％-95％；超過4wt％的組成共聚物組合物的分子量小于4000道爾頓。共聚物組合物和水、低沸點(diǎn)無毒溶劑混合。然后混合物進(jìn)行分離，從而至少形成兩層，其中至少一層含有精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物的分子量小于4000道爾頓，比例小于4wt％。然后萃取出精制的組合物。
在第二種方法中，精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物首先通過提供下式所述的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物進(jìn)行制備(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓；“a”代表的是POE占組合物總重的5％-20％，“b”代表的是POP占組合物總重的80％-95％；超過4wt％的共聚物組合物的分子量小于4000道爾頓。共聚物組合物和低沸點(diǎn)無毒溶劑混合。然后分離得到的混合物，從而至少形成兩層，其中至少一層含有精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物的分子量小于4000道爾頓，比例小于4wt％。然后萃取出精制的組合物以供使用。
在第三種方法中，精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物首先通過提供下式所述的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物進(jìn)行制備(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓；“a”代表的是POE占組合物總重的5％-20％，“b”代表的是POP占組合物總重的80％-95％；超過4wt％的共聚物組合物的分子量小于4000道爾頓。在組合物中加入一些高壓二氧化碳，然后在該壓力下進(jìn)行攪拌。分離得到的混合物，從而至少形成兩相，其中第一相中含有該組合物，第二相中含有精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物的分子量小于4000道爾頓，比例小于4wt％。然后萃取第一相，從而留下精制的共聚物組合物。
在第四種方法中，精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物首先通過分別混合堿性催化劑和低分子量氮化合物進(jìn)行重新合成，其中低分子量氮化合物是水溶性的。然后混合物在真空中加熱。降低溫度后，在混合物中加入一些乙撐氧，接著加入一些氧化丙烯。接下來的步驟包括分別加入一些硅酸鎂、硅藻土和水除去催化劑。然后冷卻混合物，用壓力濾器過濾，得到具有下式所述的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓；“a”代表的是POE占組合物總重的5％-20％，“b”代表的是POP占組合物總重的80％-95％；超過4wt％組合物的分子量小于4000道爾頓。


圖1是商業(yè)上得到的POP/POE共聚物的凝膠滲透色譜圖；圖2是實例3的萃取順序流程圖；圖3是實例4的萃取順序流程圖；圖4是實例4己烷層的凝膠滲透色譜圖；圖5是實例4水層的凝膠滲透色譜圖；圖6是實例5己烷上層的凝膠滲透色譜圖；圖7是實例5己烷底層的凝膠滲透色譜圖；圖8是實例5庚烷上層的凝膠滲透色譜圖；圖9是實例5庚烷底層的凝膠滲透色譜圖；圖10是實例5戊烷上層的凝膠滲透色譜圖；以及圖11是實例5戊烷底層的凝膠滲透色譜圖。
具體實施例方式
如下述實例5-7所示，申請人發(fā)現(xiàn)八單元共聚物分子的相對尺寸是決定其吸收可能性的重要因素。八單元共聚物較低分子量的組分在胃腸通道中更容易吸收。這些低分子量組分的分子量為小于4000、小于3500、小于3000、小于2500、小于2000、小于1750、小于1500、小于1250和小于1000道爾頓。
因此，本發(fā)明直接精制八單元共聚物，降低可能被動物組織吸收的低分子量組分。本發(fā)明的八單元共聚物可以通過除去商業(yè)上可得到的八單元共聚物中存在的不合需要的分子得到，或者通過八單元共聚物與較少的可吸收的組分(和商業(yè)上可得到的八單元共聚物中出現(xiàn)的組分相比)一起重新合成得到。
本發(fā)明優(yōu)選組分包括表面活性的共聚物。該表面活性共聚物可以是下式所述的乙撐氧-氧化丙烯濃縮物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，優(yōu)選為6000-9000道爾頓，特別優(yōu)選為7000-8000道爾頓?！癮”代表的是POE占化合物總重的5％-20％，優(yōu)選為7-17％，特別優(yōu)選為9-15％；“b”代表的是POP占化合物總重的80％-95％，優(yōu)選為83-92％，特別優(yōu)選為85-91％。優(yōu)選的共聚物優(yōu)選含有少于4wt％的低聚物雜質(zhì)，更加優(yōu)選為小于2％，特別優(yōu)選為小于1％，雜質(zhì)的分子量小于4000道爾頓，優(yōu)選小于3000道爾頓，特別優(yōu)選小于2000道爾頓。在共聚物另一優(yōu)選的實施例中，小于50wt％的組分被動物的胃腸通道吸收，優(yōu)選為小于40％，特別優(yōu)選為小于30％，更加優(yōu)選為小于20％，最有效為小于10％。
根據(jù)本發(fā)明的方法，本發(fā)明精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物能夠用溶解萃取技術(shù)進(jìn)行制備，其中低分子量的低聚物基本從商業(yè)上購得的八單元共聚物除去，如BASF公司生產(chǎn)的CRL-8761。如圖1所示的凝膠滲透色譜圖，商業(yè)級別的CRL-8761中分子量寬范圍分布的峰出現(xiàn)在9000-9500道爾頓。圖1也顯示了在主峰旁邊的一些低分子量的次峰。該峰表明在CRL-8761樣品中含有低分子量的分子。低分子量分子的分子量范圍約為1250-1350道爾頓。確信的是，現(xiàn)有技術(shù)飼料中含有的這些低分子量的低聚物更容易被目標(biāo)動物的組織吸收。使用本發(fā)明的方法，大部分這些低分子量的物質(zhì)從聚合物中除去，從而在組合物中主要留下高分子量的物質(zhì)，這些高分子量的物質(zhì)直接通過目標(biāo)動物的腸胃系統(tǒng)，很難進(jìn)入到動物的消化組織。
本發(fā)明的第一種方法包括用溶劑萃取技術(shù)制備聚氧丙烯/聚乙烯八單元共聚物，然后在溶劑混合物中加入水?？梢允褂靡环N或多種溶劑。優(yōu)選的溶劑是無毒低沸點(diǎn)的，包括但不限于高壓或液體二氧化碳、丙酮、包括甲醇和乙醇的醇類，以及包括丙烷、丁烷、戊烷、己烷的烴類溶劑，庚烷和己烷的混合是最有效的。在本發(fā)明的應(yīng)用中，共聚物/溶劑/水的混合物至少分離成三層上層溶劑層，中層水層和底層水層。根據(jù)本發(fā)明，上層溶劑層通常含有少量的共聚物主要為低分子量的物質(zhì)。中間和底層的水層中的共聚物的低分子量物質(zhì)含量很少。含有低分子量物質(zhì)的溶劑層和含有精制共聚物的水層都可以進(jìn)行幾次清洗和萃取，從而進(jìn)一步從原材料中除去低分子量物質(zhì)。
在第二種方法中，共聚物不和水混合，但是至少和一種溶劑直接混合。然后分離混合物，從而得到至少兩層，其中低分子量物質(zhì)的共聚物在上層溶劑層中，然后精制的共聚物從底層中萃取出來。如有需要，底層可以清洗和萃取幾次，從而進(jìn)一步從原材料中除去低分子量物質(zhì)。
在第三種方法中，用高壓二氧化碳或液體二氧化碳的溶劑清洗用于精制商業(yè)可得到的八單元共聚物樣品。在該方法中，共聚物裝入設(shè)有攪拌器的高壓不銹鋼容器中。共聚物可以單獨(dú)使用，或和吸附性物質(zhì)如硅藻土一起使用。當(dāng)在反應(yīng)器中攪拌時，壓縮的液體CO2經(jīng)過一段時間后泵入反應(yīng)器。然后共聚物中溶解或萃取出的組分通過降低CO2壓力發(fā)生相分離，進(jìn)而從溶劑中分離出來。低分子量物質(zhì)占有相當(dāng)大比例的分離的共聚物分離并除去。回收的CO2輸送到溶劑循環(huán)中。然后，在反應(yīng)器中CO2的壓力持續(xù)增加的情況下繼續(xù)萃取。然后低分子量物質(zhì)占有相當(dāng)大比例的分離的共聚物再次分離并除去。萃取再次在相同的條件下進(jìn)行，然后低分子量物質(zhì)占有相當(dāng)大比例的其它共聚物分離并除去。萃取完成后，從容器中除去低分子量組分小于4％的基本純的共聚物。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，高壓或液體CO2也可以和助熔劑入甲醇混合，這種混合的溶劑溶于上述的萃取方法中。
在第四種方法中，通過在低分子量水溶性氮化合物如乙二胺中加入堿性催化劑如氫氧化鉀或氫氧化銫對聚氧丙烯/聚氧乙烯重新進(jìn)行合成?；旌衔镌谡婵障录訜幔缓罄鋮s。接下來的步驟包括順序加入乙撐氧、氧化丙烯，然后加入硅酸鎂、硅藻土和水。然后冷卻全部的混合物，并用壓力濾器進(jìn)行過濾，由此得到本發(fā)明的精制八單元共聚物。如果需要從精制八單元共聚物進(jìn)一步除去低分子量物質(zhì)，上述公開的溶劑萃取技術(shù)也可以用于共聚物最終產(chǎn)品的合成方法。
可以理解的是，本發(fā)明下述實施例中的分子量優(yōu)選用凝膠分離色譜(GPC)測試。GPC單元用公知分子量、并與所測試混合物性能相近的聚合物進(jìn)行校對。在本發(fā)明中，聚氧乙烯(100％，PEO)標(biāo)準(zhǔn)用于校對GPC單元，分子量用PEO標(biāo)準(zhǔn)計算，該標(biāo)準(zhǔn)和聚乙二醇(100％，PEG)一樣。根據(jù)本發(fā)明，分子量用下述設(shè)備進(jìn)行測試HPLC設(shè)備、沃特斯510泵、717Plus自動取樣器、HR3沃特斯Styragel柱和沃特斯410RI探測器，流動相THF每分鐘為1.0ml，溫度為35℃。樣品的制備準(zhǔn)備含有0.2wt％共聚物的THF溶液，然后注入到GPC系統(tǒng)中。高分子量的主峰和低分子量的峰用PEG標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計算。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解，如果用絕對方法如光散射或MDLDI質(zhì)譜進(jìn)行測試，用PEO或PEG標(biāo)準(zhǔn)計算的分子量和實際的分子量會有一些差異。本領(lǐng)域的技術(shù)人員也可以理解，為了提高精度，從測試一段時間的幾批共聚物中獲得數(shù)據(jù)很重要。最后，可以理解的是，相同測試條件下分子量的變化將會發(fā)生變化，這種變化在分析測試時會根據(jù)生產(chǎn)的批次和時間而發(fā)生。
本發(fā)明進(jìn)一步通過下述實例進(jìn)行說明，這些實例僅是對本發(fā)明進(jìn)行解釋，而不是對本發(fā)明的范圍進(jìn)行限制。相反，任何對本發(fā)明實施例進(jìn)行的顯而易見的修改或等同替換，都是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實例1BASF公司銷售的品牌為CRL-8761的八單元共聚物的化學(xué)性能通過首先在鋼鼓集裝箱(steel drum shipping container)中混和共聚物進(jìn)行測定。這通過在開煉機(jī)上以30rpm的速度水平滾動鼓兩個小時實現(xiàn)。然后虹吸一小部分的同質(zhì)共聚物，并輸送到玻璃瓶中。從瓶中取出兩個樣品，樣品用下述高性能液體色譜(HPLC)設(shè)備進(jìn)行測試沃特斯510、717Plus自動取樣器、500A和1000A的Styragel柱和410RI探測器。流動相THF每分鐘為1.0ml。每種樣品分別注射兩次，每個樣品在接下來的一天重復(fù)注射。兩個樣品的高分子量的主峰和低分子量的峰用PEG標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計算。兩個樣品的主峰的平均峰分子量為9283道爾頓。兩個樣品的低分子量的平均峰分子量為1323道爾頓。因此，低分子量物質(zhì)占商業(yè)上得到的CRL-8761化合物的重量百分比為5.13％。
在圖1所示的CRL-8761的典型凝膠分散色譜圖中，主峰的保留時間約為6.5-7.5分鐘之間，更加小的次峰的保留時間約為8.5-9.5分鐘之間。此外，還有一些低聚物的保留時間為10-10.5分鐘之間，不過，在圖1中很難分辨。主峰對應(yīng)保留時間的平均分子量約為9000道爾頓，次峰約為1500道爾頓。
實例2用上述商業(yè)上可得到的CRL-8761進(jìn)行研究，對共聚物中低分子量組分和高分子量組分的相對滲透性或吸水性。在該研究中，細(xì)胞培養(yǎng)試驗用Caco2細(xì)胞系進(jìn)行，該細(xì)胞系常用于研究被動藥物吸收。具體來說，Caco2細(xì)胞系用于鑒別CRL-8761是如何和以多大速率穿過腸內(nèi)上皮細(xì)胞。經(jīng)過一個起始平衡周期后，每個孔板中6-7×104的Caco2細(xì)胞系播種在聚酯膜細(xì)胞培養(yǎng)插入物上，即聚碳酯膜(Costar Transwell-Clear)3470的孔的尺寸為0.4um，生長面積為0.33cm2。插入物的內(nèi)腔和外腔分別用0.4ml和0.5ml的細(xì)胞培養(yǎng)基(Vitacell Minimum Essential Medium alpha-SigmaCorporation-M0894-3H172)和10％的胎牛血清及1％的抗生素溶液填充。然后將附有插入物的孔板在37℃、95％空氣和5％二氧化碳的氛圍中培養(yǎng)。橫跨上皮細(xì)胞的電阻(TEER)定期進(jìn)行測試，進(jìn)而用MILLICELL-ERS監(jiān)視單層生長。約21天后，將孔板用于滲透性研究。
實例3用攪拌器將CRL-8761直接溶于細(xì)胞培養(yǎng)基，濃度約為10wt％。在將CRL-8761浸漬的培養(yǎng)基加入到上述孔板的細(xì)胞層之前進(jìn)行TEER測試。CRL-8761浸漬的培養(yǎng)基放置在內(nèi)腔里面，一些純凈的細(xì)胞培養(yǎng)基加入到外腔中。然后培育細(xì)胞。經(jīng)過預(yù)設(shè)的時間間隔后，收集內(nèi)嵌和外腔的樣品，放置單獨(dú)的試管中，然后真空干燥。
實例4制備GPC分析樣品，在含有干燥的內(nèi)腔和外腔樣品的試管中加入0.3ml-1.0ml的THF。然后將試管在室溫下至少旋轉(zhuǎn)1分鐘。然后混合物通過Gelman Acrodi sc 0.2微米的尼龍過濾器進(jìn)行過濾。每150ul的樣品用自動取樣器注射到GPC中。GPC分析的結(jié)果如表1所示。
表1內(nèi)腔和外腔樣品的GPC分子量特性

實例5在第二項研究中，在三個點(diǎn)上不是使用相同的插入物，每個時間點(diǎn)上使用插入物的全部成分。例如，在第8小時，除去插入物內(nèi)側(cè)的全部成分，將其干燥后提供一個GPC分析的樣品。其它的插入物在第24小時和48小時進(jìn)行，樣品分別從這些時間點(diǎn)采取。注射150ul的樣品，并用GPC分析。測定對應(yīng)于主要分子量組分的峰和對應(yīng)低分子量組分的峰，比較采取的不同樣品。GPC分析結(jié)果如表2所示。
表2全部插入物樣品的GPC分子量特性


如上所示，樣品外腔中的低分子量組分對應(yīng)的次峰的曲線面積總是高于內(nèi)腔中的低分子量組分對應(yīng)的次峰的曲線面積。幾乎所有外腔樣品的GPC曲線只有低分子量組分的峰，這表明和主要的高分子量組分相比，低分子量組分更多的穿過Caco2細(xì)胞層。
實例6和實例5的條件一樣。第三序列的樣品用GPC分析。結(jié)果如表3所示。
表3全部插入物樣品的GPC分子量特性


如上所述，實例5中的趨勢也在實例6中出現(xiàn)。樣品外腔中的低分子量組分泊洛沙姆(poloxamer)對應(yīng)的次峰的曲線面積總是高于內(nèi)腔中的低分子量組分對應(yīng)的次峰的曲線面積。幾乎所有外腔樣品的GPC曲線只有低分子量組分的峰，這表明和主要的高分子量組分相比，低分子量組分更多的穿過Caco2細(xì)胞層。
實例7實例5和6中觀察到的不規(guī)則數(shù)據(jù)可以解釋為生物試驗誤差，為了鑒別某些保留有大量高分子量組分的內(nèi)腔中可能的因素，進(jìn)行了試驗。在該試驗中，發(fā)現(xiàn)一些插入物在滲透性研究中在單層上形成了孔，從而表明單層在取樣間隔時可能不是活的。因此，為了研究但測的成活性和完整性，進(jìn)行了TEER測試。對不含CRL-8761共聚物培養(yǎng)基的對照插入物的TEER值進(jìn)行了測試。樣品插入物的TEER值在CRL-8761共聚物/培養(yǎng)基混合物(試驗期間)或培養(yǎng)基(除去樣品插入物中的物質(zhì)，如8小時時的樣品插入物的24小時時的TEER值)中進(jìn)行了測試。TEER測試如下表4所示。
表4TEER測試結(jié)果


該項研究的結(jié)果表明TEER值沒有和對照樣品一樣發(fā)生變化。此外，在24小時和48小時的研究后，從研究后8小時的插入物中除去CRL-8761共聚物/培養(yǎng)基混合物對TEER值沒有影響。因此，在正常的細(xì)胞生長條件下，將細(xì)胞和共聚物一起放置超過8小時后，TEER測試表明細(xì)胞單層的完整性受到影響。因而，在解釋滲透性結(jié)果時，應(yīng)該考慮8-小時的樣品。這是因為標(biāo)準(zhǔn)滲透性研究進(jìn)行了8小時。
實例8和實例5相同條件下，用GPC分析了第四序列的樣品，以證實前述實例觀察到的趨勢。結(jié)果如下表5所示。
表5全部插入物樣品的GPC分子量特性


如上所述，前述實例觀察到的滲透性趨勢在本實例中進(jìn)行了重現(xiàn)，特別時8小時時的樣品。和內(nèi)腔樣品相比，對應(yīng)CRL-8761中低分子量組分的次峰和外腔樣品中非常一致。這證實和高分子量組分相比，低分子量組分穿過Caco2細(xì)胞層。
實例9為了精制上述討論的共聚物，在約5克的己烷中加入1克商業(yè)級的CRL-8761，混和形成清液。然后在共聚物/己烷的混合物中加入1克的蒸餾水，充分混和。得到的新的混合物離心分離40分鐘，得到三層上層的清液，渾濁的中間層和底層。對上層(385-52-1)和中間層(385-52-2)進(jìn)行取樣、干燥，并用GPC進(jìn)行分析。結(jié)果如表6所示。
表6CRL-8761用己烷清洗后的GPC分子量特性

分析結(jié)果表明CRL-8761水溶液的萃取液集中了己烷層中的低分子量組分，而精制的共聚物留在了水層。
實例107.2克的CRL-8761和7.6克的水、22.0克的己烷進(jìn)行混和。混合物進(jìn)行離心，得到四層上層己烷層的清液、中間的清液層、中間的渾濁層和粘稠的白色底層。對底部的三層進(jìn)行取樣、干燥，并檢測每層的固體含量。
上層的己烷再次用2.4克的水進(jìn)行萃取，然后進(jìn)行離心，得到兩層。將上層和底層進(jìn)行取樣、干燥，并檢測每層的固體含量。
第二次萃取清洗得到的上層己烷層再次用2克的水進(jìn)行萃取、離心。再次得到兩層，對每層進(jìn)行取樣、干燥，并檢測每層的固體含量。這個萃取序列的流程圖如圖2所示。己烷萃取的結(jié)果如表7所示。
表7第一階段己烷萃取液的CRL-8761的分配

*由于操作誤差和試驗誤差，這些組分中的固體含量百分比不等于100％實例117.3305克的CRL-8761溶于22.1克的己烷中，形成一清液。然后在己烷溶液中加入7.0克的水進(jìn)行充分混和?；旌衔镞M(jìn)行離心，得到三層層上層己烷層的清液、中間的清液層和粘稠的白色底層。對底部的二層進(jìn)行取樣、干燥，并檢測每層的固體含量。
上層的己烷再次用2.0克的水進(jìn)行萃取，然后進(jìn)行離心，得到兩層。將底層進(jìn)行取樣、干燥，并檢測每層的固體含量。
前次清洗得到的上層己烷層再次用2.3克的水進(jìn)行萃取、離心。再次得到兩層，對每層進(jìn)行取樣、干燥，并檢測每層的固體含量。這個萃取序列的流程圖如圖3所示。己烷萃取的結(jié)果如表8所示。典型己烷層(含有大量的CRL-8761雜質(zhì))和水層(精制的CRL-8761)的色譜圖如圖4和圖5所示。
表8第一階段己烷萃取液的CRL-8761的分配

*由于操作誤差和試驗誤差，這些組分中的固體含量百分比不等于100％實例12用于精制CRL-8761樣品的簡易溶劑清洗使用了三種不同烴類溶劑。在第一次清洗中，1克的CRL-8761放在5ml的試管中，然后和2克的己烷進(jìn)行混和。在第二次清洗中，1克的CRL-8761放在5ml的試管中，然后和2克的庚烷進(jìn)行混和。在第三次清洗中，1克的CRL-8761放在5ml的試管中，然后和2克的戊烷進(jìn)行混和。蝸旋混和后，離心共聚物/混合物。在每個試管中都得到了兩層。對每層進(jìn)行取樣、干燥，并用GPC進(jìn)行分析。每次清洗的兩個CRL-8761樣品也進(jìn)行了對照分析。得到的結(jié)果如表9所示。
表9簡易溶劑清洗的結(jié)果

如圖6所示，上層的己烷層含有10％的CRL-8761，并顯示一個分子量為7082道爾頓的峰，其中含有43％的層含有低分子量組分。如圖7所示，底層有個分子量為7572道爾頓的峰，并且僅含有5wt％的低分子量組分。如圖8所示，上層的庚烷層含有6％的CRL-8761。樣品的分子量峰為6831道爾頓，含有63％的低分子量組分。如圖9所示，底層顯示的分子量峰為7347道爾頓，含有5.7％的低分子量組分。如圖10所示，上層的戊烷層含有10％的CRL-8761。樣品的分子量峰為6797道爾頓，含有50％的低分子量組分。底層顯示的分子量峰為7326道爾頓，含有6.2％的低分子量組分，如圖11所示。
為了進(jìn)一步降低每個樣品中低分子量組分的含量，萃取從底層己烷、庚烷和戊烷層得到的精制的共聚物，并再次分別用己烷、庚烷和戊烷進(jìn)行清洗。分離后，干燥樣品，用GPC分析以確定樣品中的低分子量組分是否降低到低于4％，優(yōu)選為3％，特別有效為2％。精制的共聚物重復(fù)進(jìn)行萃取和清洗，直至每個樣品中的低分子量組分含量到達(dá)理想值。
實例13在本實例中，使用液化丙烷氣的溶劑清洗用于精制CRL-8761樣品。約200克的CRL-8761裝入到設(shè)有攪拌器的1L高壓不銹鋼容器中。在攪拌反應(yīng)物中的物質(zhì)時，壓縮的丙烷泵入到反應(yīng)器中。丙烷流體和萃取容器的溫度保持在35℃。開始時，丙烷的壓力保持在1000psia，約100Kg的SCF CO2泵送12小時。溶解/萃取組分通過將丙烷壓力降至約400psia產(chǎn)生相分離從溶劑蒸汽中分離出來?；厥盏谋榉答伒饺軇┭h(huán)流程中。裝入到反應(yīng)器中約2.2％的CRL-8761通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質(zhì)中含有約75％低分子量組分。接下來在1000psia下進(jìn)行萃取，溶劑壓力升至1500psia，萃取持續(xù)10多個小時，100Kg的SCF CO2流體用15小時泵送至反應(yīng)器。約5.5％的CRL-8761進(jìn)料通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質(zhì)含有約60％的低分子量組分。萃取完成后，萃取容器卸壓，剩在容器中精制的CRL-8761用GPC分析。該CRL-8761含有約1.6％的低分子量組分。精制CRL-8761的產(chǎn)率約為82wt％。
實例14在本實例中，使用高壓二氧化碳流體的溶劑清洗用于精制CRL-8761樣品。約200克的CRL-8761裝入到設(shè)有攪拌器的1L高壓不銹鋼容器中。在攪拌反應(yīng)物中的物質(zhì)時，壓縮的CO2泵入到反應(yīng)器中。CO2流體和萃取容器的溫度保持在35℃。開始時，CO2的壓力保持在2500psia，約100Kg的SCF CO2泵送15小時。溶解/萃取組分通過將CO2壓力降至約800psia產(chǎn)生相分離從溶劑蒸汽中分離出來?；厥盏腃O2反饋到溶劑循環(huán)流程中。裝入到反應(yīng)器中約2.4％的CRL-8761通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質(zhì)中含有約85％低分子量組分。接下來在2500psia下進(jìn)行萃取，溶劑壓力升至3500psia，萃取持續(xù)15多個小時，100Kg的CO2流體用15小時泵送至反應(yīng)器。約4.5％的CRL-8761進(jìn)料通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質(zhì)含有約25％的低分子量組分。萃取完成后，萃取容器卸壓，剩在容器中精制的CRL-8761用GPC分析。該CRL-8761含有約2.4％的低分子量組分。精制CRL-8761的產(chǎn)率約為78wt％。
實例15在另一實例中，用高壓二氧化碳流體作為萃取溶劑，約150克的CRL-8761和120克的Hydromatrix硅藻土(Varian，Inc.，PaloAlto，California)混和，然后裝入到500ml的萃取容器中。容器連接到設(shè)有溶劑回收裝置的高壓萃取系統(tǒng)中。約100Kg的壓縮CO2流體用15小時泵送到反應(yīng)器中。CO2萃取流體和萃取容器的溫度保持在35℃。開始時，CO2的壓力保持在2500psia。溶解/萃取組分通過將CO2壓力降至約800psia產(chǎn)生相分離從溶劑蒸汽中分離出來?；厥盏腃O2反饋到溶劑循環(huán)流程中。裝入到反應(yīng)器中約2.1％的CRL-8761通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質(zhì)中含有約88％低分子量組分。接下來在2500psia下進(jìn)行萃取，溶劑壓力升至3500psia，100Kg的CO2流體用15小時泵送至反應(yīng)器時，萃取持續(xù)15多個小時。約4.1％的初始進(jìn)料通過萃取的方法除去。通過GPC測試，萃取物質(zhì)含有約62％的低分子量組分。通過額外向容器中泵入100Kg的CO2，萃取進(jìn)一步在4500psia下持續(xù)15個小時。反應(yīng)器中約12％的初始進(jìn)料通過該方法除去。通過GPC測試，萃取物質(zhì)含有約34％的低分子量組分。萃取完成后，萃取容器卸壓，Hydromatrix/CRL-8761混合物用約1升的乙醇清洗。精制的CRL-8761通過蒸發(fā)乙醇從乙醇溶液中分離。精制的CRL-8761用GPC分析。該CRL-8761含有約2.9％的低分子量組分。精制CRL-8761的產(chǎn)率約為71wt％。
實例16在本實例中，約200克的CRL-8761裝入到設(shè)有攪拌器的1L高壓不銹鋼容器中。在攪拌反應(yīng)物中的物質(zhì)時，壓縮的流體CO2泵入到反應(yīng)器中。CO2流體和萃取容器的溫度保持在35℃。和5-10wt％的甲醇混和的壓縮CO2用作萃取溶劑。開始時，CO2的壓力保持在2500psia，約60Kg的壓縮CO2/甲醇萃取流體混合物泵送10小時。甲醇通過分離泵泵送，在進(jìn)入萃取容器前和壓縮CO2混和。調(diào)整甲醇的流率，從而在CO2/甲醇萃取流體混合物中生成約5wt％的甲醇。溶解/萃取組分通過將CO2壓力降至約800psia產(chǎn)生相分離從溶劑蒸汽中分離出來。回收的CO2反饋到溶劑循環(huán)流程中。裝入到反應(yīng)器中約4％的CRL-8761通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質(zhì)中含有約76％的低分子量組分。接下來在2500psia下進(jìn)行萃取，溶劑壓力保持在3500psia，萃取持續(xù)10多個小時，萃取流體中甲醇的濃度為7％；其中，60Kg的CO2/甲醇流體泵送至反應(yīng)器。約7wt％充入的CRL-8761在這種條件下通過萃取除去。通過GPC測試，萃取物質(zhì)含有約45％的低分子量組分。通過額外向容器中泵入含有9wt％的60Kg的甲醇，萃取進(jìn)一步持續(xù)10個小時。反應(yīng)器中約13％的CRL-8761在該條件下除去。通過GPC測試，萃取物質(zhì)含有約24％的低分子量組分。
萃取完成后，萃取容器卸壓。蒸發(fā)混合物中的甲醇，分離精制的CRL-8761并用GPC分析。該CRL-8761含有約2.2％的低分子量組分。精制CRL-8761的產(chǎn)率約為68wt％。
實例17精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯八單元共聚物通過在設(shè)于PARR反應(yīng)器中的玻璃管中混和約25克的Quadrol(BASF Corporation，MountOlive，New Jersey)(末端用4mol乙撐氧封閉的乙二胺)和1.25克的氫氧化鉀重新進(jìn)行合成?；旌衔镌谡婵?、125℃下加熱約3小時，然后反應(yīng)器溫度降至約90-100℃，用24小時慢慢加入105克的乙撐氧。完成乙撐氧的加入后，用計量泵加入約600克的氧化丙烯。反應(yīng)器內(nèi)部的壓力保持在20-30psia之間。反應(yīng)完成后，約12.5克的Magnesol(Dallas Group，White Hall，New Jersey)、3.5克的Celite(World Minerals，Inc.，Santa Barbara，California)和0.6克的水在6小時內(nèi)分三個不同的批次加入到反應(yīng)產(chǎn)物中。最終的產(chǎn)品冷卻到40-50℃，并用壓力過濾器過濾。最終產(chǎn)品產(chǎn)量約為600克，估計含有約15wt％的乙撐氧。最終產(chǎn)品的峰分子量約7100道爾頓，低分子量組分的重量百分比約為1.23％。
實例18在本發(fā)明重新合成精制組合物的另一實例中，25克的Quadrol和3.75克的氫氧化銫一水化物在設(shè)于PARR反應(yīng)器中的玻璃管中混和混合物在真空、125℃下加熱約6小時，然后反應(yīng)器溫度降至約90-100℃，用24小時慢慢加入105克的乙撐氧。完成乙撐氧的加入后，用計量泵加入約600克的氧化丙烯。反應(yīng)器內(nèi)部的壓力保持在20-30psia之間。反應(yīng)完成后，約25克的Magnesol、7克的Celite和1克的水在6小時內(nèi)分三個不同的批次加入到反應(yīng)產(chǎn)物中。最終的產(chǎn)品冷卻到40-50℃，并用壓力過濾器過濾。最終產(chǎn)品產(chǎn)量約為600克，估計含有約15wt％的乙撐氧。最終產(chǎn)品的峰分子量約7500道爾頓，產(chǎn)品中低分子量組分的重量百分比約為1.13％。
實例19在商業(yè)飼料場中進(jìn)行研究，該研究利用平均初始體重為361kg的438只混種一歲家牛。牛作為一個單組。通過體重(BW)分成兩組，并分別放在兩個欄里飼養(yǎng)。在每個欄里，牛接受(1)飼料中含有足夠量本發(fā)明精制共聚物，從而具有抑制微生物生長和/或?qū)е律L性能的改善；或(2)飼料中含有推薦劑量的常見抗生素和/或生長促進(jìn)劑。每個欄里的牛分別用不同的飼料未央；其中每個欄里的第一個牛式隨機(jī)分配的。研究的第一天分別對牛的體重進(jìn)行了單獨(dú)的稱重。研究開始后，在125天(兩個大欄)或141天(兩個較小的欄)進(jìn)行了屠宰。取出內(nèi)臟后立即收集熱胴體重量(HCW)。用下述方程式對單個動物的平均每日收益(ADG)進(jìn)行計算ADG＝((HCW/0.635)-初始體重)/天飼料。在這個方程式中，0.635表示的是所有研究動物的平均屠宰率。20個可食組織樣品從兩組牛中分別隨意選取，并測試存在的本發(fā)明共聚物或抗生素和/或生長促進(jìn)劑。測試結(jié)果顯示，和用含有常規(guī)抗生素和/或生長促進(jìn)劑相比，喂食本發(fā)明共聚物的牛具有相對好的生長性能和食物效率，并且少于50％的共聚物在測試的可食組織樣品中發(fā)現(xiàn)。
權(quán)利要求
1.一種精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯八單元共聚物組合物，該組合物具有下式(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該共聚物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，“a”代表的是聚氧乙烯占組合物總重的5％-20％，“b”代表的是聚氧丙烯占化合物總重的80％-95％；以及共聚物含有少于4wt％的低分子量組分，該低分子量組分的分子量小于4000道爾頓。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的7-17％。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的83-93％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的9-15％。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的85-91％。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中少于2wt％的組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中少于1wt％的組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于3000道爾頓。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于2000道爾頓。
12.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
13.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
14.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
15.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
16.一種制備精制聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物的方法，該方法包括如下步驟提供一種具有下述化學(xué)式的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，“a”代表的是聚氧乙烯占化合物總重的5％-20％，“b”代表的是聚氧丙烯占化合物總重的80％-95％；超過4wt％的組合物的共聚物分子量小于4000道爾頓；混合組合物、水和低沸點(diǎn)無毒溶劑；分離混合物，從而至少形成兩層，其中至少一層含有精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物中少于4％的共聚物的分子量小于4000道爾頓；以及萃取出精制的組合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的7-17％。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的83-93％。
21.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的9-15％。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的85-91％。
23.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中少于2wt％的組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
24.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中少于1wt％的組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
25.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于3000道爾頓。
26.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于2000道爾頓。
27.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
28.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
29.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
30.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
31.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中溶劑選自高壓或液體二氧化碳、丙酮、醇類、烴類溶劑及其混合物。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中烴類溶劑選自甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、戊烷、己烷、庚烷及其混合物。
33.一種制備精制聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物的方法，該方法包括如下步驟提供一種具有下述化學(xué)式的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，“a”代表的是聚氧乙烯占化合物總重的5％-20％，“b”代表的是聚氧丙烯占化合物總重的80％-95％；超過4wt％的組合物的共聚物分子量小于4000道爾頓；混合組合物和低沸點(diǎn)無毒溶劑；分離混合物，從而至少形成兩層，其中至少一層含有精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物中少于4％的共聚物的分子量小于4000道爾頓；以及萃取出精制的組合物。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
35.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
36.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的7-17％。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的83-93％。
38.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的9-15％。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的85-91％。
40.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中少于2wt％的組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
41.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中少于1wt％的組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
42.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于3000道爾頓。
43.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于2000道爾頓。
44.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
45.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
46.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
47.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
48.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中溶劑選自高壓或液體二氧化碳、丙酮、醇類、烴類溶劑及其混合物。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中烴類溶劑選自甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、戊烷、己烷、庚烷及其混合物。
50.一種制備精制聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物的方法，該方法包括如下步驟提供一種具有下述化學(xué)式的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，“a”代表的是聚氧乙烯占化合物總重的5％-20％，“b”代表的是聚氧丙烯占化合物總重的80％-95％；超過4wt％的組合物的共聚物分子量小于4000道爾頓；向所述組合物中加入一定量的高壓二氧化碳；在壓力下攪拌該混合物；分離該混合物，從而至少形成兩相，其中第一相中含有該組合物，第二相中含有精制的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物，該組合物中分子量小于4000道爾頓的共聚物的比例小于4wt％；以及萃取所述的第一相。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
52.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
53.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的7-17％。
54.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的83-93％。
55.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的9-15％。
56.根據(jù)權(quán)利要求56所述的方法，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的85-91％。
57.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中少于2wt％的組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
58.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中少于1wt％的組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
59.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于3000道爾頓。
60.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于2000道爾頓。
61.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
62.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
63.根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
64.根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
65.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中溶劑選自高壓或液體二氧化碳、丙酮、醇類、烴類溶劑及其混合物。
66.根據(jù)權(quán)利要求65所述的方法，其中烴類溶劑選自甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、戊烷、己烷、庚烷及其混合物。
67.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中該方法進(jìn)一步包括將共聚物和一定量的硅藻土混和的步驟。
68.一種制備精制聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物的方法，該方法包括如下步驟分別混合堿性催化劑和低分子量氮化合物；加入一定量的乙撐氧；加入一定量的氧化丙烯；分別加入一定量的吸收物質(zhì)吸收催化劑、硅藻土和水；加熱混合物；以及用壓力濾器過濾，得到具有下述化學(xué)式的聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物組合物(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，“a”代表的是聚氧乙烯占化合物總重的5％-20％，“b”代表的是聚氧丙烯占化合物總重的80％-95％；超過4wt％的組合物的共聚物分子量小于4000道爾頓。
69.根據(jù)權(quán)利要求68所述的方法，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
70.根據(jù)權(quán)利要求68所述的方法，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
71.根據(jù)權(quán)利要求68所述的方法，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的7-17％。
72.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的83-92％。
73.根據(jù)權(quán)利要求68所述的方法，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的9-15％。
74.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的85-91％。
75.根據(jù)權(quán)利要求68所述的方法，其中少于2wt％的精制組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
76.根據(jù)權(quán)利要求68所述的方法，其中少于1wt％的精制組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
77.根據(jù)權(quán)利要求68所述的方法，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于3000道爾頓。
78.根據(jù)權(quán)利要求68所述的方法，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于2000道爾頓。
79.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
80.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
81.根據(jù)權(quán)利要求76所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
82.根據(jù)權(quán)利要求76所述的方法，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
83.根據(jù)權(quán)利要求68所述的方法，其中的氮化合物為烷氧基胺。
84.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中的烷氧基胺為乙二胺。
85.一種喂食動物的精制聚氧丙烯/聚氧乙烯單元共聚物的組合物，該組合物如下式所述(H(C3H6O)b(C2H4O)a)2NC2H4N((C2H4O)a(C3H6O)bH)2其中該組合物的平均分子量約為4000-10000道爾頓，“a”代表的是聚氧乙烯占化合物總重的5％-20％，“b”代表的是聚氧丙烯占化合物總重的80％-95％；少于50wt％的組合物被動物的腸胃通道吸收。
86.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中組合物的分子量約為6000-9000道爾頓。
87.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中組合物的分子量約為7000-8000道爾頓。
88.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的7-17％。
89.根據(jù)權(quán)利要求88所述的組合物，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的83-93％。
90.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中聚氧乙烯部分約占組合物重量的9-15％。
91.根據(jù)權(quán)利要求90所述的組合物，其中聚氧丙烯部分約占組合物重量的85-91％。
92.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
93.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中少于2wt％的組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
94.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中少于1wt％的組合物中的共聚物的分子量小于4000道爾頓。
95.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于3000道爾頓。
96.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中少于4wt％的組合物中的共聚物的分子量小于2000道爾頓。
97.根據(jù)權(quán)利要求93所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
98.根據(jù)權(quán)利要求93所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
99.根據(jù)權(quán)利要求94所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小于3000道爾頓。
100.根據(jù)權(quán)利要求94所述的組合物，其中所述共聚物的分子量小于2000道爾頓。
101.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中少于40wt％的組合物被動物的腸胃通道吸收。
102.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中少于30wt％的組合物被動物的腸胃通道吸收。
103.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中少于20wt％的組合物被動物的腸胃通道吸收。
104.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中少于10wt％的組合物被動物的腸胃通道吸收。
全文摘要
本發(fā)明包括聚氧丙烯/聚氧乙烯八單元共聚物的新型制備方法，該共聚物保留了商業(yè)制備所具有的生長促進(jìn)性和免疫活性，同時避免了一些現(xiàn)有技術(shù)無法避免的副作用。和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明中的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物具有更少的低分子量組分，共聚物的生物活性好于預(yù)期。而且，本發(fā)明的聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物由于不易被消化器官吸收，大大降低了人類使用動物所帶來的健康風(fēng)險。本發(fā)明也提供了聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物的制備方法。
文檔編號C08G59/14GK1929850SQ200480032798
公開日2007年3月14日 申請日期2004年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月5日
發(fā)明者R·馬丁·伊曼紐爾, 馬拉爾薩米·巴拉蘇布若門尼 申請人:艾維動物健康公司, 馬拉爾薩米·巴拉蘇布若門尼