專利名稱：芥菜多糖的提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從芥菜中提取芥菜多糖的方法。
背景技術(shù)：
芥菜為(Brassica juncea)蕓苔屬，十字花科植物。近年來的研究發(fā)現(xiàn)芥菜提取物具有抗氧化作用，對(duì)預(yù)防糖尿病有一定療效，芥菜還具有降血糖和降血脂的作用，這些可能與芥菜多糖有關(guān)。包心芥菜價(jià)廉易得，可用冬閑農(nóng)田(晚稻跡地)種植，高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)。該品種定植后75天左右收獲，每畝地約有3500公斤的產(chǎn)量。包心芥菜的這些特點(diǎn)對(duì)其多糖的開發(fā)極為有利。國外還沒有芥菜(Brassicajuncea)多糖的研究報(bào)道。國內(nèi)內(nèi)蒙古民族師院的哈森其木格對(duì)曾對(duì)芥菜多糖進(jìn)行過初步研究，但分離純化過程很粗糙，沒有得到芥菜多糖純品，對(duì)芥菜的品種沒有說明，也沒有后續(xù)報(bào)道，其提取純化方法如下1、提取稱取芥菜樣品100g用石油醚脫脂24h，脫脂后的樣品在沸水中提取4小時(shí)，過濾，殘?jiān)谜麴s水提取3次，合并三次提取液，過濾，在80℃水浴上濃縮至小體積，加5倍體積的無水乙醇，醇析24小時(shí)，將醇析物干燥，得棕色干品。
2、純化將步驟1所得的棕色干品用蒸餾水透析48小時(shí)，每隔2小時(shí)更換一次水，再用正丁醇-三氯甲烷(1∶5)混合液萃取，除去少量蛋白質(zhì)后，經(jīng)雙氧水緩慢脫色，經(jīng)減壓得白色芥菜多糖。
這種芥菜多糖提取純化方法的缺點(diǎn)如下1、使用大量的石油醚，成本高且污染環(huán)境；2、正丁醇-三氯甲烷有毒，而且會(huì)損失多糖，并可能導(dǎo)致芥菜多糖結(jié)構(gòu)的破壞；3、H2O2容易破壞芥菜多糖的結(jié)構(gòu)；4、使用大量的有毒溶劑，污染環(huán)境。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種芥菜多糖的提取純化方法，其成本較低、環(huán)保、且可完整保持芥菜多糖結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣的芥菜多糖的提取純化方法，由下列步驟實(shí)現(xiàn)(1)提取在芥菜干品中按1∶20～65(W/V)的料液比加入蒸餾水，于89.5～90.5℃下在恒溫?zé)崴薪?.8～2.2h，過濾，棄濾渣，得粗提液；(2)醇析將步驟(1)所得的粗提液在65～75℃下濃縮至原體積的1/10～1/8后加入乙醇溶液，使乙醇濃度達(dá)到55％，醇析2.5～3.5h，初步去除脂溶性小分子物質(zhì)和色素，并得到芥菜多糖沉淀物；(3)干燥將步驟(2)所得的芥菜多糖沉淀物用無水乙醇洗滌2～3次，再用揮發(fā)性溶劑洗滌2～3次，冷凍干燥得粗品；(4)透析步驟(3)所得的粗品在適量的蒸餾水中充分溶解，棄不溶物，得上清液，用透析袋將上清液在流水中透析45～51h，再用去離子水中透析22～26h，每7～9h換一次水，進(jìn)一步去除還原糖、寡糖、無機(jī)鹽、色素等小分子雜質(zhì)；(5)純化將經(jīng)步驟(4)透析后的液體濃縮，加入DEAE-葡聚糖凝膠A-50柱，用0～1.5mol/L的NaCl進(jìn)行梯度洗脫，分部收集，收集液用苯酚硫酸法檢測，合并多糖峰的收集液，濃縮，透析真空干燥，得層析純芥菜多糖。
上述步驟(1)中芥菜干品與蒸餾水的料液比為1∶40(W/V)。
上述步驟(1)中的恒溫水槽中熱水的溫度為90℃。
上述步驟(3)中的揮發(fā)性溶劑為丙酮。
上述步驟(3)中的揮發(fā)性溶劑為乙醚。
采用上述技術(shù)方案后，所得的芥菜多糖純品中水溶性總糖可達(dá)芥菜干品的15％左右，水溶性多糖可達(dá)芥菜干品的9％左右，而蛋白質(zhì)含量僅芥菜干品的0.2％，脂肪含量僅為芥菜干品的0.4×10-3％。本發(fā)明的芥菜多糖的提取純化方法，可以省下大量的有機(jī)溶劑，不僅生產(chǎn)成本較低、環(huán)保，而且芥菜多糖能夠保持比較完整的結(jié)構(gòu)。且工藝流程簡單，省時(shí)省力。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明芥菜多糖的提取純化方法，由下列步驟實(shí)現(xiàn)(1)提取稱取適量的包心芥菜干品，按1∶40(W/V)的料液比加入蒸餾水，于90℃下在恒溫水槽中熱水浸提2h，四層紗布過濾，棄濾渣，得粗提液。
(2)醇析將步驟(1)所得的粗提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在70℃下濃縮至原體積的1/10后加入無水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到55％，醇析3h，初步去除脂溶性小分子物質(zhì)和色素，并得到芥菜多糖沉淀物。
(3)干燥將步驟(2)所得的芥菜多糖沉淀物用無水乙醇洗滌2～3次，再用丙酮或乙醚洗滌2～3次，冷凍干燥得粗品。
(4)透析將步驟(3)所得的粗品按1∶15(W/V)的料液比加入蒸餾水中溶解，6000r.p.m離心15min，棄不溶物，得上清液，用截留分子量為1000的透析袋將上清液在流水中透析48h，再用去離子水中透析24h，每8h換一次水，進(jìn)一步去除還原糖、寡糖、無機(jī)鹽、色素等小分子雜質(zhì)。
(5)純化將經(jīng)步驟(4)透析后的液體濃縮到原體積的1/2～2/3，取2.5ml上DEAE-葡聚糖凝膠A-50柱，DEAE-葡聚糖凝膠A-50柱的規(guī)格為2.5×42cm，柱床高度為38cm，用0～1.5mol/L的NaCl進(jìn)行梯度洗脫，洗脫速度為0.75ml/min，分部收集，每管收集3ml，共收集100管，收集液用苯酚硫酸法檢測，合并多糖峰的收集液，濃縮，透析真空干燥，得層析純芥菜多糖。
權(quán)利要求
1.芥菜多糖的提取純化方法，其特征在于由下列步驟實(shí)現(xiàn)(1)提取在芥菜干品中按1∶20～65(W/V)的料液比加入蒸餾水，于89.5～90.5℃下在恒溫?zé)崴薪?.8～2.2h，過濾，棄濾渣，得粗提液；(2)醇析將步驟(1)所得的粗提液在65～75℃下濃縮至原體積的1/10～1/8后加入乙醇溶液，使乙醇濃度達(dá)到55％，醇析2.5～3.5h，初步去除脂溶性小分子物質(zhì)和色素，并得到芥菜多糖沉淀物；(3)干燥將步驟(2)所得的芥菜多糖沉淀物用無水乙醇洗滌2～3次，再用揮發(fā)性溶劑洗滌2～3次，冷凍干燥得粗品；(4)透析步驟(3)所得的粗品在適量的蒸餾水中充分溶解，棄不溶物，得上清液，用透析袋將上清液在流水中透析45～51h，再用去離子水中透析22～26h，每7～9h換一次水，進(jìn)一步去除還原糖、寡糖、無機(jī)鹽、色素等小分子雜質(zhì)；(5)純化將經(jīng)步驟(4)透析后的液體濃縮，上DEAE-葡聚糖凝膠A-50柱，用0～1.5mol/L的NaCl進(jìn)行梯度洗脫，分部收集，收集液用苯酚硫酸法檢測，合并多糖峰的收集液，濃縮，透析真空干燥，得層析純芥菜多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芥菜多糖的提取純化方法，其特征在于上述步驟(1)中芥菜干品與蒸餾水的料液比為1∶40(W/V)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芥菜多糖的提取純化方法，其特征在于上述步驟(1)中的恒溫水槽中熱水的溫度為90℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芥菜多糖的提取純化方法，其特征在于上述步驟(3)中的揮發(fā)性溶劑為丙酮。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芥菜多糖的提取純化方法，其特征在于上述步驟(3)中的揮發(fā)性溶劑為乙醚。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種芥菜多糖的提取純化方法，其以芥菜干品為原料，經(jīng)提取、醇析、干燥、透析和純化，得芥菜多糖純品，所得的芥菜多糖純品中水溶性總糖可達(dá)芥菜干品的15％左右，水溶性多糖可達(dá)芥菜干品的9％左右，而蛋白質(zhì)含量僅芥菜干品的0.2％，脂肪含量僅為芥菜干品的0.4×10
文檔編號(hào)C08B37/00GK1699426SQ20051004054
公開日2005年11月23日 申請(qǐng)日期2005年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月11日
發(fā)明者李夏蘭, 魏國棟, 王昭晶 申請(qǐng)人:華僑大學(xué)