專(zhuān)利名稱(chēng)：pH值和溫度敏感性水凝膠的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種pH值和溫度敏感性嵌段共聚物、包含該嵌段共聚物的水凝膠組合物以及由該組合物制備的水凝膠。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種通過(guò)下面的組分互相連接而形成的嵌段共聚物(a)基于聚乙二醇的化合物和生物降解性聚合物的共聚物；和(b)基于磺酰胺的低聚物；本發(fā)明還涉及一種包含該嵌段共聚物的水凝膠組合物以及由該組合物制備的水凝膠。
背景技術(shù)：
具有疏水性和親水性的兩親型聚合物已引起人們的關(guān)注。具體地說(shuō)，在藥物傳遞系統(tǒng)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，目前對(duì)表現(xiàn)出溫度敏感性的溶膠-凝膠性能的兩親型聚合物進(jìn)行了深入研究，還對(duì)其用途進(jìn)行了積極的研究。具體而言，由聚環(huán)氧乙烷和聚環(huán)氧丙烷組成的共聚物在市場(chǎng)上可以商品名Pluronic和Poloxamer購(gòu)買(mǎi)到，并且可用于不同的用途。
但是，在用于醫(yī)學(xué)用途時(shí)，基于Pluronic和Poloxamer的聚合物由于無(wú)生物降解性而存在問(wèn)題。為此，已研究并使用了由生物降解性聚丙交酯(PLA)(或聚乙醇酸交酯(PGA)、聚己酸內(nèi)酯(PCL)及其共聚物)和聚乙二醇(PEG)組成的共聚物。
美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,882,168和4,716,203披露了親水性聚烷撐二醇和聚乙醇酸、亞丙基碳酸酯(trimethylene carbonate)等的共聚物。
此外，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,942,035披露了一種包含聚乙二醇(PEG)和聚丙交酯(PLA)、聚乙醇酸交酯(PGA)、聚己酸內(nèi)酯(PCL)、疏水性多肽或聚縮醛的嵌段共聚物的藥物組合物。
另外，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,476,909披露了一種生物降解性三嵌段(A-B-A)共聚物，其由包含聚丙交酯(PLA)、聚乙醇酸交酯(PGA)或其衍生物的疏水性嵌段(A)和包含聚乙二醇(PEG)或其衍生物的親水性嵌段(B)組成。
而且，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,548,035披露了一種具有熱塑性的生物降解性多嵌段共聚物，其包含選自聚丙交酯、聚乙醇酸及其共聚物和聚己酸內(nèi)酯的疏水性嵌段。
同時(shí)，韓國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)2000-0012970(2000年3月6日)披露了一種包含磺酰胺基的pH值敏感性聚合物及其制備方法。該專(zhuān)利主要涉及通過(guò)磺酰胺單體和DMAAm或NiPAAm的無(wú)規(guī)共聚反應(yīng)而形成的線性聚合物的溶解性的變化，或其交聯(lián)聚合物的溶脹指數(shù)。
上述現(xiàn)有技術(shù)是這樣設(shè)計(jì)的，通過(guò)使用疏水性的生物降解性聚合物和親水性聚合物的嵌段共聚物而表現(xiàn)出溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變現(xiàn)象。該嵌段共聚物以水溶液形式即溶膠狀態(tài)注入體內(nèi)時(shí)變?yōu)槟z狀態(tài)。因此，該嵌段共聚物用作在體內(nèi)運(yùn)載并緩慢釋放藥物的持續(xù)釋放藥物的傳遞系統(tǒng)。
然而，表現(xiàn)出溫度敏感性的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變現(xiàn)象的嵌段共聚物產(chǎn)生了一定問(wèn)題，如由于體內(nèi)溫度和注射針的溫度通過(guò)熱平衡調(diào)整到相同的溫度，而在體內(nèi)注射前的注射過(guò)程中發(fā)生的注射針堵塞現(xiàn)象。另外，據(jù)報(bào)道，由PLA、PLGA或PCL組成的疏水性部分表現(xiàn)出pH值敏感性。但是，這樣的部分不是那樣敏感而使其不能應(yīng)用于體內(nèi)pH值，因此其不適于藥物傳遞領(lǐng)域的實(shí)際應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種新型pH值和溫度敏感性嵌段共聚物，其表現(xiàn)出不僅對(duì)溫度而且對(duì)pH值敏感的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能，從而在與體內(nèi)pH值相似的pH值約為7～7.4變?yōu)槟z，而在比該pH值范圍高的pH值下變?yōu)槿苣z，因此當(dāng)在較高pH值下溶解該嵌段共聚物并將其注入體內(nèi)時(shí)，其在體內(nèi)表現(xiàn)為凝膠狀態(tài)。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種通過(guò)下面的組分互相連接而形成的嵌段共聚物(a)基于聚乙二醇的化合物和生物降解性聚合物的共聚物；和(b)基于磺酰胺的低聚物；還提供了包含該嵌段共聚物的水凝膠以及由該組分形成的水凝膠。
下文，將對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的描述。
本發(fā)明的特征在于隨著pH值的變化而表現(xiàn)出電離度變化(pH值敏感性)的基于磺酰胺的低聚物與親水性基于PEG的化合物和生物降解性聚合物的共聚物連接，從而形成了可用于實(shí)際藥物傳遞中的新型嵌段共聚物。
由于上述特征，本發(fā)明的嵌段共聚物表現(xiàn)出不僅對(duì)溫度而且對(duì)pH值敏感的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能。
也就是說(shuō)，現(xiàn)有的由疏水性、生物降解性聚合物和親水性聚合物組成的嵌段共聚物，表現(xiàn)出通過(guò)各疏水性嵌段和親水性嵌段隨著溫度的變化的物理性質(zhì)的變化而引起的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能。然而，由于通過(guò)傳遞介質(zhì)的熱平衡引起的嵌段共聚物在體內(nèi)的不相容性，難于將該嵌段共聚物應(yīng)用于實(shí)際藥物傳遞中。
但是，根據(jù)本發(fā)明，隨著pH值的變化而表現(xiàn)出電離度變化的基于磺酰胺的低聚物與由疏水性、生物降解性聚合物和親水性聚合物組成的共聚物連接，從而除賦予該共聚物溫度敏感性之外還賦予其pH值敏感性。這可以解決有關(guān)溫度敏感性水凝膠的上述問(wèn)題。而且，根據(jù)本發(fā)明的溫度和pH值敏感性嵌段共聚物形成了更穩(wěn)定的水凝膠，并且其在體內(nèi)較穩(wěn)定，因此，其可應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和藥物傳遞領(lǐng)域，特別是運(yùn)載并釋放藥物的持續(xù)釋放藥物傳遞系統(tǒng)。
根據(jù)本發(fā)明的溫度和pH值敏感性嵌段共聚物的一個(gè)組分為基于PEG的化合物和生物降解性聚合物的共聚物(a)。該共聚物(a)不僅具有基于PEG的化合物的親水性而且具有生物降解性聚合物的疏水性，因此該共聚物(a)可根據(jù)溫度的變化表現(xiàn)出溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變。
本領(lǐng)域中已知的任何常規(guī)的基于PEG的化合物都可用作包含在共聚物(a)中的基于PEG的化合物。具體地說(shuō)，優(yōu)選由下面的化學(xué)式1表示的基于PEG的化合物，如PEG或甲氧基PEG 其中，R表示氫原子或含1～5個(gè)碳原子的烷基，以及n為11～45的自然數(shù)。
基于聚乙二醇的化合物的分子量?jī)?yōu)選為500～2,000。具體而言，在化學(xué)式1中R表示氫的情況下，聚乙二醇(PEG)的分子量?jī)?yōu)選為1,000～2,000，以及在R表示甲基的情況下，甲氧基聚乙二醇的分子量?jī)?yōu)選為500～2,000。如果該分子量小于500或大于2,000，將會(huì)存在以下問(wèn)題凝膠形成不能很好地進(jìn)行，或者，即使形成凝膠，在體內(nèi)的條件(37℃)下也不發(fā)生凝膠形成。
本領(lǐng)域中已知的任何常規(guī)的生物降解性聚合物都可用作包含在共聚物(a)中的生物降解性聚合物，其例子包括但不限于己內(nèi)酯(CL)、乙交酯(GA)、丙交酯(LA)及其共聚物。
通過(guò)基于聚乙二醇的化合物和生物降解性聚合物的聚合反應(yīng)形成的共聚物(a)的例子包括但不限于聚丙交酯(PLA)、聚乙醇酸交酯(PGA)、聚己酸內(nèi)酯(PCL)、聚(己內(nèi)酯-丙交酯)無(wú)規(guī)共聚物(PCLA)、聚(己內(nèi)酯-乙交酯)無(wú)規(guī)共聚物(PCGA)或聚(丙交酯-乙交酯)無(wú)規(guī)共聚物(PLGA)。
共聚物(a)中的基于PEG的化合物與生物降解性聚合物的分子量之比不限于任何特定的范圍，但優(yōu)選在1∶1～3的范圍內(nèi)。如果該分子量之比大于1∶1，則該嵌段共聚物將不形成凝膠，而如果其小于1∶3，則該嵌段共聚物的疏水性的大小將增加，從而使該嵌段共聚物不能溶解。
此外，在所述共聚物中的生物降解性聚合物為PCLA、PCGA或PLGA的情況下，可適當(dāng)調(diào)整其摩爾比，從而提高所述嵌段共聚物的溫度和pH值敏感性的效果。
隨著pH值的變化而表現(xiàn)出電離度變化的化合物可用作根據(jù)本發(fā)明的溫度和pH值敏感性嵌段共聚物的另一個(gè)組分。具體而言，優(yōu)選使用由基于磺酰胺的化合物形成的低聚物(b)。該基于磺酰胺的低聚物優(yōu)選包含如羥基(-OH)、羧基(-COOH)或氨基(-NH2)的官能團(tuán)。這使得易于通過(guò)聚合反應(yīng)制備本發(fā)明的嵌段共聚物。
用于形成低聚物(b)的基于磺酰胺的化合物的例子包括但不限于磺胺甲基硫代二嗪(sulfamethisole)、磺胺二甲基嘧啶、乙?；前?sulfasetamide)、磺胺索嘧啶、sulfafenasole、sulfamethoxasole、磺胺嘧啶、磺胺甲氧二嗪、磺胺甲氧噠嗪、磺胺多辛、磺胺吡啶、苯?；前贰⒘虼悋f唑(sulfisoxazole)或其衍生物。
由基于磺酰胺的化合物形成的低聚物的分子量沒(méi)有特別的限制，但優(yōu)選為500～2,000。如果該分子量小于500，則該嵌段共聚物將不表現(xiàn)出由pH值的變化引起的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能，而如果其大于2,000，則該嵌段共聚物將難于同樣地表現(xiàn)出溫度敏感性。
通過(guò)上述組分(即基于PEG的化合物和生物降解性聚合物的共聚物(a)與基于磺酰胺的低聚物(b))互相連接而形成的本發(fā)明的共聚物優(yōu)選為三嵌段或更高的多嵌段共聚物的形式，具體為三嵌段或五嵌段共聚物。三嵌段或五嵌段共聚物的具體例子包括由下面的化學(xué)式2表示的化合物(OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM)、由下面的化學(xué)式3表示的化合物(MPEG-PCLA-OSM)和由下面的化學(xué)式4表示的化合物(OSM-PCGA-PEG-PCGA-OSM)[化學(xué)式2] [化學(xué)式3] [化學(xué)式4]
因?yàn)閮H在基于PEG的化合物和生物降解性聚合物的共聚物(MPEG-PCLA)的一端存在羥基，所以由化學(xué)式3表示的嵌段共聚物具有僅在其一側(cè)連接磺胺二甲基嘧啶低聚物的嵌段結(jié)構(gòu)。
除了上述組分之外，根據(jù)本發(fā)明的溫度和pH值敏感性嵌段共聚物還可包含本領(lǐng)域中常用的其它組分或添加劑。
為了由基于PEG的化合物和生物降解性聚合物的共聚物(a)與基于磺酰胺的低聚物(b)制備溫度和pH值敏感性嵌段共聚物，可以使用本領(lǐng)域中已知的任何聚合方法，如自由基聚合、正離子聚合、負(fù)離子聚合、縮聚等。
制備根據(jù)本發(fā)明的溫度和pH值敏感性嵌段共聚物的方法的一個(gè)實(shí)施方式包括以下步驟a)使基于PEG的化合物與生物降解性聚合物聚合，以制備共聚物；b)由基于磺酰胺的化合物制備基于磺酰胺的低聚物；以及c)步驟a)的共聚物與步驟b)的低聚物連接。
首先，a)使基于PEG的化合物與生物降解性聚合物聚合，以制備共聚物。該聚合反應(yīng)可通過(guò)例如下面的反應(yīng)圖解1闡明 優(yōu)選使用開(kāi)環(huán)聚合，在該情況下，聚合溫度和時(shí)間沒(méi)有特別的限制，但是分別為130～150℃、12～48小時(shí)。此外，催化劑也可用于該聚合反應(yīng)中，其例子包括辛酸亞錫、氯化亞錫、金屬氧化物(GeO2、Sb3O2、SnO2等)、三異丙醇鋁(aluminum triisopropoxide)、CaH2、Zn、氯化鋰、三(2，6-二叔丁基苯酚鹽)(tris(2，6-di-tert-butylphenolate))等。而且，為了使疏水性的幅度寬廣，可以適當(dāng)?shù)卣{(diào)整上述生物降解性聚合物的分子量或種類(lèi)。
2)由基于磺酰胺的化合物制備所述低聚物。該反應(yīng)可通過(guò)例如下面的反應(yīng)圖解2闡明[反應(yīng)圖解2]
可用于基于磺酰胺的低聚物的制備過(guò)程中的鏈轉(zhuǎn)移劑(CTA)的例子包括C8～C18的烷基硫醇、有機(jī)鹵素化合物、α-甲基苯乙烯二聚物、萜品油烯、α-萜品烯等?？筛鶕?jù)用途選擇鏈轉(zhuǎn)移劑。具體而言，因?yàn)榱虼季哂休^高的鏈轉(zhuǎn)移常數(shù)和鏈轉(zhuǎn)移效率，所以其是優(yōu)選的。
本領(lǐng)域中已知的任何引發(fā)劑都可以使用，其例子包括但不限于2，2’-偶氮二異丁腈(AIBN)、2，2’-偶氮二(2，4-二甲基戊腈)、2，2’-偶氮二(4-甲氧基-2，4-二甲基戊腈)、過(guò)氧化苯甲酰、過(guò)氧化月桂酰、過(guò)氧新戊酸叔丁酯、1，1’-二-(二-叔丁基過(guò)氧基)環(huán)己烷(1，1’-bis-(bis-t-butylperoxy)cyclohexane)等。
為了與基于PEG的化合物和生物降解性聚合物的共聚物連接，基于磺酰胺的低聚物優(yōu)選在分子中包含親水性官能團(tuán)，例如羥基、羧基或氨基。
3)通過(guò)基于PEG的化合物和生物降解性聚合物的共聚物(a)與基于磺酰胺的低聚物(b)之間連接，可制得根據(jù)本發(fā)明的溫度和pH值敏感性嵌段共聚物。該連接反應(yīng)可通過(guò)下面的反應(yīng)圖解3闡明 步驟3)中的反應(yīng)溫度和時(shí)間沒(méi)有特別的限制，所述連接反應(yīng)可通過(guò)本領(lǐng)域中已知的任何方法進(jìn)行。
如上所述，因?yàn)橥ㄟ^(guò)上述方法制備的嵌段共聚物處于親水性嵌段、疏水性嵌段和隨著pH值的變化而表現(xiàn)出電離度變化的基于磺酰胺的低聚物互相連接的形態(tài)，所以該嵌段共聚物不僅對(duì)溫度而且對(duì)pH值表現(xiàn)出敏感性。事實(shí)上，在通過(guò)上述方法制備的磺胺二甲基嘧啶-聚己酸內(nèi)酯/丙交酯-聚乙二醇-聚己酸內(nèi)酯/丙交酯-磺胺二甲基嘧啶(OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM)嵌段共聚物中，可以通過(guò)FT-IR和1H-NMR確認(rèn)官能團(tuán)的引入和端基的反應(yīng)。并且，可以通過(guò)凝膠滲透色譜法(GPC)確認(rèn)該嵌段共聚物的分子量被提高了，這說(shuō)明基于PEG的化合物和生物降解性聚合物的共聚物和基于磺酰胺的化合物互相連接。
并且，為了確定所述嵌段共聚物是否具有pH值敏感性，在隨著溫度改變pH值時(shí)，測(cè)量了溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能的變化，其測(cè)量結(jié)果證明本發(fā)明的嵌段共聚物具有pH值敏感性特性。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種包含本發(fā)明嵌段共聚物的水凝膠組合物。該組合物可另外包含其它本領(lǐng)域中已知的添加劑和溶劑。
另外，本發(fā)明還提供了一種通過(guò)改變溫度和pH值由所述水凝膠組合物形成的新型水凝膠。該水凝膠可應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和藥物傳遞領(lǐng)域中的不同用途中。


圖1為示出實(shí)施例1中制備的嵌段共聚物(OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM)的凝膠滲透色譜法(GPC)結(jié)果的曲線圖。
圖2為示出實(shí)施例1中制備的嵌段共聚物(PCLA-PEG-PCLA)的1H-NMR分析結(jié)果的圖譜。
圖3為示出實(shí)施例1和2中制備的嵌段共聚物(OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM)由溫度和pH值的變化產(chǎn)生的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能圖。
圖4為示出實(shí)施例1和2中制備的嵌段共聚物(OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM)的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變機(jī)理示意圖。
圖5為示出了將實(shí)施例1制備的嵌段共聚物(OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM)以溶膠狀態(tài)分別注入緩沖溶液1(pH值＝7.4，37℃)和緩沖溶液2(37℃，pH值＝8.0)之后在緩沖溶液1中形成凝膠而溶解于緩沖溶液2的照片。
圖6為示出由實(shí)施例1中制備的嵌段共聚物(OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM)形成的水凝膠的穩(wěn)定性的照片。
圖7為示出實(shí)施例1、3和4中制備的嵌段共聚物(OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM)的溶膠-凝膠相圖隨著該嵌段共聚物的分子量的變化而變化的曲線圖。
圖8為示出實(shí)施例1和5中制備的嵌段共聚物(OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM)的溶膠-凝膠相圖隨著基于磺酰胺的低聚物的分子量的變化而變化的曲線圖。
圖9為示出實(shí)施例6和7中制備的嵌段共聚物(MPEG-PCLA-OSM)由溫度和pH值的變化產(chǎn)生的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能圖。
圖10為示出實(shí)施例8和9中制備的嵌段共聚物(OSM-PCGA-PEG-PCGA-OSM)由溫度和pH值的變化產(chǎn)生的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能圖。
具體實(shí)施例方式
下文，為了更好地理解本發(fā)明，將給出下列實(shí)施例。然而，應(yīng)該理解，給出這些實(shí)施例僅用于例證性目的，而不應(yīng)解釋為限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1～9溫度和pH值敏感性嵌段共聚物的制備實(shí)施例1OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM五嵌段共聚物(1)1-1PCLA-PEG-PCLA共聚物(1)將10g PEG(Mn＝1500)和0.2g催化劑辛酸亞錫放入反應(yīng)器中，并在110℃、真空下對(duì)其進(jìn)行干燥4小時(shí)從而除去水分。在氮保護(hù)氣氛下冷卻該干燥物質(zhì)，向其加入13.68gε-己內(nèi)酯和4.32gD，L-丙交酯。在氮保護(hù)氣氛下緩慢地加熱該反應(yīng)混合物至135℃，接著進(jìn)行聚合反應(yīng)24小時(shí)。該反應(yīng)完成之后，冷卻該反應(yīng)混合物至環(huán)境溫度，并通過(guò)加入少量二氯甲烷使其溶解。在過(guò)量的二乙醚中使溶解的反應(yīng)混合物沉淀，從而除去未反應(yīng)物質(zhì)，并在40℃下對(duì)該產(chǎn)物進(jìn)行真空干燥48小時(shí)。該產(chǎn)物的收率為85％。
由PEG已知的分子量和在1H-NMR分析結(jié)果(參見(jiàn)，圖2)中各嵌段中H的特征峰的積分值計(jì)算出合成的PCLA-PEG-PCLA的分子量。1H-NMR分析結(jié)果如下該嵌段聚合物中的PEG/PCLA的分子量之比＝1/1.85；以及PCLA嵌段中的己內(nèi)酯(CL)與丙交酯(LA)的摩爾比＝2.44/1。
l-2磺胺二甲基嘧啶低聚物(OSM)將27.83g(0.1mol)磺胺二甲基嘧啶溶解在含有4g(0.1mol)氫氧化鈉溶于其中的100ml丙酮/水的共溶劑體系中。向該溶液中緩慢地逐滴加入12.54g(0.12mol)甲基丙烯酰氯，從而獲得34.5g(85％收率)具有雙鍵的磺胺二甲基嘧啶單體。在冰浴中進(jìn)行形成該單體的反應(yīng)3小時(shí)。然后過(guò)濾出在反應(yīng)溶劑中已沉淀的合成的磺胺二甲基嘧啶單體，并在環(huán)境溫度下對(duì)其進(jìn)行真空干燥48小時(shí)。在氮保護(hù)氣氛、85℃下，在DMF溶劑中使用引發(fā)劑AIBN使制得的磺胺二甲基嘧啶單體與3-巰基丙酸反應(yīng)48小時(shí)。此時(shí)，磺胺二甲基嘧啶單體∶3-巰基丙酸∶引發(fā)劑的摩爾當(dāng)量比為1∶0.1∶0.1。該反應(yīng)完成之后，通過(guò)蒸發(fā)器除去DMF溶劑，在此之后將該反應(yīng)混合物再次溶于THF。在過(guò)量的二乙醚中使該溶解的反應(yīng)混合物沉淀，從而獲得收率大于90％的具有終端羧基的磺胺二甲基嘧啶低聚物。GPC分析結(jié)果顯示該低聚物的分子量(Mn)為1144。
l-3OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM嵌段共聚物(1)將實(shí)施例1-1制備的PCLA-PEG-PCLA嵌段共聚物放入反應(yīng)器中，并在85℃下對(duì)其進(jìn)行真空干燥從而除去水分。接著，將該反應(yīng)物質(zhì)冷卻至環(huán)境溫度，然后在氮保護(hù)氣氛下向其加入實(shí)施例1-2中制備的磺胺二甲基嘧啶低聚物。然后，向其加入偶合劑DCC和催化劑DMAP溶于其中的無(wú)水二氯甲烷。此時(shí)，PCLA-PEG-PCLA∶磺胺二甲基嘧啶低聚物∶DCC∶DMAP的摩爾當(dāng)量比為l∶2.4∶2.8∶0.28。使該反應(yīng)混合物在氮保護(hù)氣氛、環(huán)境溫度下反應(yīng)48小時(shí)。該反應(yīng)為多相反應(yīng)，其中磺胺二甲基嘧啶低聚物不溶于二氯甲烷。該反應(yīng)完成之后，通過(guò)過(guò)濾可除去未反應(yīng)的磺胺二甲基嘧啶低聚物。在過(guò)量的二乙醚中使經(jīng)過(guò)濾的反應(yīng)混合物沉淀，然后在40℃對(duì)其進(jìn)行真空干燥48小時(shí)，從而獲得收率大于60％的最終產(chǎn)物。通過(guò)GPC分析確認(rèn)該產(chǎn)物的分子量的增加(參見(jiàn)，圖1)。
實(shí)施例2OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM五嵌段共聚物(2)除了PEG/PCLA的分子量之比以及CL/LA的摩爾比分別從1/1.85和2.44/1變?yōu)?/2.08和2.59/1之外，按照與實(shí)施例1相同的方法制備嵌段共聚物。
實(shí)施例3OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM五嵌段共聚物(3)除了使用PEG(Mn＝1750)代替PEG(Mn＝1500)之外，按照與實(shí)施例1相同的方法制備嵌段共聚物。
實(shí)施例4OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM五嵌段共聚物(4)除了使用PEG(Mn＝2000)代替PEG(Mn＝1500)之外，按照與實(shí)施例1相同的方法制備嵌段共聚物。
實(shí)施例5OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM五嵌段共聚物(5)除了使用磺胺二甲基嘧啶低聚物(Mn＝937)代替磺胺二甲基嘧啶(Mn＝1144)之外，按照與實(shí)施例1相同的方法制備嵌段共聚物。
實(shí)施例6MPEG-PCLA-OSM嵌段共聚物(1)除了使用使用甲氧基聚乙二醇制備的MPEG-PCLA代替PEG(Mn＝1500)，MPEG-PCLA∶磺胺二甲基嘧啶低聚物∶DCC∶DMAP的摩爾當(dāng)量比＝1∶1.2∶1.4∶0.14之外，按照與實(shí)施例1相同的方法制備MPEG-PCLA-OSM三嵌段共聚物。在該實(shí)施例中制備的嵌段共聚物中，MPEG/PCLA的分子量之比為1/1.86，以及PCLA嵌段中的己內(nèi)酯(CL)與丙交酯(LA)的摩爾比為2.67/1。
實(shí)施例7MPEG-PCLA-OSM嵌段共聚物(2)除了MPEG/PCLA的分子量之比以及PCLA嵌段中的己內(nèi)酯(CL)與丙交酯(LA)的摩爾比分別從1/1.86和2.67/1變?yōu)?/2.04和2.70/1之外，按照與實(shí)施例6相同的方法制備MPEG-PCLA-OSM三嵌段共聚物。
實(shí)施例8OSM-PCGA-PEG-PCGA-OSM嵌段共聚物(1)除了使用用乙交酯制備的PCGA-PEG-PCGA(PEG＝1500)代替D，L-丙交酯之外，按照與實(shí)施例1相同的方法制備五嵌段共聚物。在該實(shí)施例中制備的嵌段共聚物中，PEG/PCGA的分子量之比為1/2.02，以及PCGA嵌段中的CL/GA的摩爾比為2.38/1。
實(shí)施例9OSM-PCGA-PEG-PCGA-OSM嵌段共聚物(2)除了PEG/PCGA的分子量之比以及PCGA嵌段中的CL/GA的摩爾比分別從1/2.02和2.38/1變?yōu)?/2.23和2.39/1之外，按照與實(shí)施例8相同的方法制備五嵌段共聚物。
試驗(yàn)例1由pH值變化引起的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能的評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)根據(jù)本發(fā)明制備的嵌段共聚物由pH值變化引起的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能。
將實(shí)施例1和2中制備的五嵌段共聚物(OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM，OSM＝1144)各以15wt％加入并溶于緩沖溶液中，用HCl溶液進(jìn)行滴定，從而調(diào)整所述嵌段共聚物溶液的pH值分別至8.2、8.0、7.8、7.6、7.4和7.2。使每個(gè)具有各自pH值的五嵌段共聚物溶液在恒溫下平衡10分鐘，同時(shí)每次以2℃提高所述溶液的溫度，然后傾斜以測(cè)量溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能。參見(jiàn)圖3和4，將對(duì)由溫度和pH值的變化引起的嵌段共聚物的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能進(jìn)行描述。
圖3和4中所示的“A”、“B”、“C”和“D”表示在特定的溫度和pH值條件下存在的嵌段共聚物。具體地說(shuō)，“A”表示與體內(nèi)同樣高的溫度(37℃)和低pH值(pH值7.4)的條件，“B”表示與體內(nèi)同樣高的溫度(37℃)和高pH值(pH值8.0)的條件，“C”表示低溫(15℃)和低pH值(pH值7.4)的條件，以及“D”表示低溫(15℃)和高pH值(pH值8.0)的條件在D條件(15℃和pH值8.0)下存在的嵌段共聚物由于由低溫引起的PCLA嵌段的疏水性較低以及由高pH值引起的OSM的電離而呈現(xiàn)具有較低粘度的溶膠狀態(tài)(參見(jiàn)，圖3和4)。將D條件的溫度逐漸提高到與體內(nèi)溫度相同的B條件(37℃和pH值8.0)的溫度時(shí)，然后提高了PCLA嵌段的疏水性，導(dǎo)致了粘度的輕微增加，但是OSM起到離子化親水性嵌段的作用，這樣就不會(huì)形成凝膠(參見(jiàn)，圖3和4)。此外，將D條件的pH值降到7.4，同時(shí)溫度保持在15℃，從而到達(dá)C條件(15℃和pH值7.4)，然后OSM的電離度逐漸降低，從而提高OSM的疏水性，這樣導(dǎo)致粘度的增加，但由于低溫下PCLA嵌段的疏水性較低，所述嵌段共聚物保持在溶膠狀態(tài)而不形成凝膠(參見(jiàn)，圖3和4)。然而，在與體內(nèi)相同的溫度和低pH值的A條件下，實(shí)施例1和2的嵌段共聚物都呈現(xiàn)凝膠狀態(tài)。這說(shuō)明溫度的提高導(dǎo)致了PCLA嵌段的疏水性的提高，在低pH值下沒(méi)有被電離的OSM也起到疏水性嵌段的作用，這樣根據(jù)本發(fā)明的嵌段共聚物溶液由于PCLA與OSM嵌段之間強(qiáng)的疏水鍵而形成凝膠。
如上所述，可以發(fā)現(xiàn)，不僅由于共聚物中的基于磺酰胺的低聚物的電離度隨著pH值的變化而變化，而且由于生物降解性共聚物的疏水性隨著溫度的變化而變化，本發(fā)明的嵌段共聚物表現(xiàn)出可逆的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能。這表明本發(fā)明的嵌段共聚物表現(xiàn)出不僅由溫度而且由pH值的變化引起的可逆的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能。
試驗(yàn)例2穩(wěn)定性的評(píng)價(jià)為了評(píng)價(jià)由本發(fā)明的嵌段共聚物形成的水凝膠的穩(wěn)定性，進(jìn)行了下面的試驗(yàn)。
調(diào)節(jié)實(shí)施例1中制備的五嵌段共聚物(OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM，OSM Mn＝1144)至15℃和pH值8.0，從而制備溶膠溶液。然后，將該溶膠溶液注入緩沖溶液1(37℃和pH值7.4)和緩沖溶液2(37℃和pH值8.0)中，然后觀察其狀態(tài)的變化。而且，所述五嵌段共聚物溶液在pH值7.4和37℃的條件下形成凝膠，向形成的凝膠中加入過(guò)量的緩沖溶液(pH值7.4和37℃)，并將加了緩沖溶液的凝膠長(zhǎng)時(shí)間放在水浴(37℃)中。
在通過(guò)將由所述嵌段共聚物形成的溶膠溶液(15℃和pH值8.0)分別注入具有與體內(nèi)(37℃)相同的溫度和不同的pH值的緩沖溶液1和2中獲得的結(jié)果中，所述溶膠溶液在緩沖溶液1(37℃和pH值7.4)中凝為膠體，而其溶于緩沖溶液2(37℃和pH值8.0)(參見(jiàn)，圖5)。這表明高溫和低pH值會(huì)引起嵌段共聚物中的生物降解性聚合物和基于磺酰胺的低聚物的疏水性的提高，從而導(dǎo)致該嵌段共聚物的凝膠化。
此外，在高溫和低pH值(37℃和pH值7.4)的條件下由所述嵌段共聚物水凝膠形成的凝膠即使在加入過(guò)量緩沖溶液(37℃和pH值7.4)后的至少兩周也不會(huì)被破壞(參見(jiàn)，圖6)。這表明形成的凝膠是穩(wěn)定的。
試驗(yàn)例3嵌段共聚物的溶膠-凝膠相圖的變化的評(píng)價(jià)按照下面的方法通過(guò)不同的參數(shù)分析由所述嵌段共聚物形成的水凝膠的溶膠-凝膠相圖的變化。所述參數(shù)包括嵌段共聚物中的親水性嵌段與疏水性嵌段的比率、嵌段共聚物的分子量和pH值敏感性嵌段的長(zhǎng)度等。
使用實(shí)施例1、3、4和5中制備的OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM五嵌段共聚物，其中實(shí)施例1、3和4的嵌段共聚物中的PEG的分子量分別為1,500、1,750和2,000，以及實(shí)施例1和5的嵌段共聚物中的OSM的分子量分別為1,144和937。
圖7示出了由PEG的分子量的增加和嵌段共聚物處于親水性聚合物PEG與疏水性聚合物PCLA的分子量之比固定為1/2.1 的情況下產(chǎn)生的相圖。
可以發(fā)現(xiàn)，所述嵌段共聚物的溶膠-凝膠相圖隨著該嵌段共聚物的分子量的增加向更高溫度移動(dòng)，但是該嵌段共聚物形成凝膠的溫度范圍只有很小或沒(méi)有變化(參見(jiàn)，圖7)。這說(shuō)明，當(dāng)增加該嵌段共聚物的長(zhǎng)度而保持親水性嵌段與疏水性嵌段之比為恒定比例時(shí)，為了通過(guò)由疏水性嵌段之間的引力引起的物理交聯(lián)而形成凝膠，可通過(guò)一些更強(qiáng)的疏水條件，例如在高溫下強(qiáng)的疏水引力，使該嵌段共聚物的凝膠化變?yōu)榭赡?。還可以發(fā)現(xiàn)，形成凝膠的溫度范圍主要受到親水性嵌段與疏水性嵌段的比率影響。
同時(shí)，可以表明，在低pH值范圍內(nèi)，隨著所述嵌段共聚物的分子量的增加，形成凝膠的溫度范圍減小(參見(jiàn)，圖7)。這是因?yàn)镺SM在低pH值下以非電離狀態(tài)存在，并因此起到疏水性嵌段的作用，從而親水性嵌段PEG與疏水性嵌段PCLA-OSM的比率隨著PEG分子量的增加而減小。因此，可以發(fā)現(xiàn)，在低pH值下，形成凝膠的溫度范圍隨著該嵌段共聚物的總分子量的增加而略微減小。
圖8圖示了由OSM的分子量的變化引起的OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM五嵌段共聚物水凝膠的溶膠-凝膠相圖。
可以發(fā)現(xiàn)，在高pH值范圍內(nèi)，主要以電離狀態(tài)存在的OSM無(wú)論其分子量都以溶膠狀態(tài)存在。然而，由此可見(jiàn)，隨著pH值的減小，OSM以非電離狀態(tài)存在，并因此起到疏水性嵌段的作用，特別在低pH值范圍內(nèi)，所述嵌段共聚物的疏水性隨著OSM分子量的增加而增加，從而導(dǎo)致形成凝膠的范圍擴(kuò)大(參見(jiàn)，圖8)。
因此，可以證實(shí)，根據(jù)所述嵌段共聚物的分子量和組成比例，可調(diào)整發(fā)生溶膠-凝膠轉(zhuǎn)化的溫度和pH值的范圍。
試驗(yàn)例4由溫度和pH值變化引起的嵌段共聚物的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變的評(píng)價(jià)按照下面的方法對(duì)由溫度和pH值變化引起的根據(jù)本發(fā)明制備的嵌段共聚物的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。
實(shí)施例6和7制備的三嵌段共聚物(MPEG-PCLA-OSM，MPEG＝750，OSM＝1144)以及實(shí)施例8和9制備的五嵌段共聚物(OSM-PCGA-PEG-PCGA-OSM，PEG＝1500，OSM＝1144)以三嵌段共聚物25wt％、五嵌段共聚物15wt％分別加入并溶于緩沖溶液，用HCl溶液進(jìn)行滴定，從而調(diào)整所述溶液的pH值至8.2、8.0、7.8、7.6、7.4和7.2。使每個(gè)具有各自pH值的嵌段共聚物溶液在恒溫下平衡10分鐘，同時(shí)每次以2℃提高所述溶液的溫度，然后保持傾斜狀態(tài)1分鐘。此時(shí)，通過(guò)測(cè)定該溶液為溶膠的流動(dòng)和該溶液為凝膠的不流動(dòng)，而測(cè)定各溶液的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能。
在試驗(yàn)結(jié)果中，實(shí)施例6～9中制備的三嵌段和五嵌段共聚物都表現(xiàn)出與試驗(yàn)例1的結(jié)果相同的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能(參見(jiàn)，圖9和10)。
可以看出，實(shí)施例6和7中制備的三嵌段共聚物(MPEG-PCLA-OSM)在比OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM五嵌段共聚物更高的濃度下凝為膠體(參見(jiàn)，圖9)。這可歸因于所述嵌段共聚物之間不同的凝膠形成機(jī)理。在其兩端具有疏水性嵌段的OSM-PCLA-PEG-PCLA-OSM嵌段共聚物通過(guò)由該嵌段共聚物形成的膠粒(micelle)之間的互相連接而凝為膠體，而MPEG-PCLA-OSM嵌段共聚物通過(guò)由該嵌段共聚物形成的膠粒的填充而凝為膠體。這說(shuō)明，由于凝膠形成中所需的膠粒的濃度較高，所以在高濃度下也形成水凝膠。
另外，可見(jiàn)，實(shí)施例8和9中制備的嵌段共聚物(OSM-PCGA-PEG-PCGA-OSM)在比實(shí)施例1中制備的嵌段共聚物的疏水性嵌段與親水性嵌段的組成比率更高的情況下凝為膠體(參見(jiàn)，圖10)。這可以認(rèn)為是歸因于乙交酯(GA)的疏水性的大小，其疏水性比丙交酯(LA)的弱。
工業(yè)實(shí)用性如上所述，根據(jù)本發(fā)明的嵌段共聚物表現(xiàn)出不僅對(duì)溫度而且對(duì)pH值的變化敏感的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變性能。因此，本發(fā)明的嵌段共聚物克服了溫度敏感性共聚物的缺點(diǎn)，在適當(dāng)?shù)臏囟群蚿H值下形成了更穩(wěn)定的水凝膠，并且還解決了現(xiàn)有嵌段共聚物的體內(nèi)穩(wěn)定性的問(wèn)題。因此，本發(fā)明的嵌段共聚物可用于醫(yī)藥和藥物傳遞領(lǐng)域中的不同用途中。
權(quán)利要求
1.一種通過(guò)下面的組分互相連接而形成的嵌段共聚物(a)基于聚乙二醇(PEG)的化合物和生物降解性聚合物的共聚物；和(b)基于磺酰胺的低聚物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其中，所述基于聚乙二醇的化合物由下面的化學(xué)式1所表示[化學(xué)式1] 其中，R表示氫或含1～5個(gè)碳原子的烷基，以及n為11～45的自然數(shù)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其中，所述基于聚乙二醇的化合物的分子量為500～2,000。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其中，所述生物降解性聚合物為選自包括己內(nèi)酯、乙交酯和丙交酯的組的至少一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其中，所述基于聚乙二醇的化合物和生物降解性聚合物的共聚物為選自包括聚丙交酯、聚乙醇酸交酯、聚己酸內(nèi)酯、聚(己內(nèi)酯-丙交酯)無(wú)規(guī)共聚物(PCLA)、聚(己內(nèi)酯-乙交酯)無(wú)規(guī)共聚物(PCGA)和聚(丙交酯-乙交酯)無(wú)規(guī)共聚物(PLGA)的組的至少一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其中，所述基于聚乙二醇的化合物與生物降解性聚合物的分子量之比為1∶1～3。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其中，所述基于磺酰胺的低聚物在其終端含有選自包括羥基、羧基和氨基的組的親水性官能團(tuán)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其中，所述基于磺酰胺的低聚物由選自包括磺胺甲基硫代二嗪、磺胺二甲基嘧啶、乙酰磺胺、磺胺索嘧啶、sulfafenasole、sulfamethoxasole、磺胺嘧啶、磺胺甲氧二嗪、磺胺甲氧噠嗪、磺胺多辛、磺胺吡啶、苯酰磺胺和硫代異噁唑的組的至少一種基于磺酰胺的化合物形成。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其中，所述基于磺酰胺的低聚物的分子量為500～2,000。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其為三嵌段或更高的多嵌段共聚物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的嵌段共聚物，其為三嵌段或五嵌段共聚物。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其由下面的化學(xué)式2所表示[化學(xué)式2]
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其由下面的化學(xué)式3所表示[化學(xué)式3]
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌段共聚物，其由下面的化學(xué)式4所表示[化學(xué)式4]
15.一種水凝膠組合物，其包含如權(quán)利要求1～14任一項(xiàng)所述的嵌段共聚物。
16.一種由如權(quán)利要求15所述的水凝膠組合物形成的水凝膠。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種通過(guò)下面的組分互相連接而形成的嵌段共聚物(a)基于聚乙二醇(PEG)的化合物和生物降解性聚合物的共聚物，和(b)基于磺酰胺的低聚物；還涉及一種包含該嵌段共聚物的水凝膠組合物以及由該組合物形成的水凝膠。本發(fā)明的嵌段共聚物表現(xiàn)出不僅對(duì)溫度而且對(duì)pH值的變化敏感的溶膠－凝膠轉(zhuǎn)變性能。因此，本發(fā)明的嵌段共聚物克服了溫度敏感性共聚物的缺點(diǎn)，形成了更強(qiáng)、更穩(wěn)定的水凝膠，并在體內(nèi)穩(wěn)定。因此本發(fā)明的嵌段共聚物可用于醫(yī)學(xué)和藥物傳遞領(lǐng)域中的不同用途中。
文檔編號(hào)C08G63/688GK1957021SQ200580010601
公開(kāi)日2007年5月2日 申請(qǐng)日期2005年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月29日
發(fā)明者李斗成, 沈愚先, 裴有韓, 柳濟(jì)善, 金旻相, 玄大候 申請(qǐng)人:成均館大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)