專(zhuān)利名稱(chēng)：：高分子巰基化改性衍生物及其交聯(lián)材料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及化合物，尤其涉及高分子巰基化改性衍生物；此外，本發(fā)明還涉及該高分子巰基化改性衍生物相應(yīng)的二硫鍵交聯(lián)材料和巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑交聯(lián)材料。高分子巰基化改性衍生物具有許多重要的生物醫(yī)學(xué)用途，如用于各種小分子藥物和多肽蛋白藥物的化學(xué)活性修飾、制備各種交聯(lián)高分子材料等等。這些新型材料可以作為細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)、創(chuàng)傷修復(fù)再生基質(zhì)、藥物緩釋載體、傷口敷料，原位包埋細(xì)胞基質(zhì)等等，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有重要用途。然而到目前為止，這類(lèi)巰基化改性高分子衍生物的種類(lèi)很少，只有Shu等人在Biomacromolecules，3，1304，2002中公開(kāi)的高分子巰基化改性衍生物具有較好的應(yīng)用前景。這類(lèi)高分子巰基化改性衍生物具有下述結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中P是高分子化合物殘基。然而這兩種結(jié)構(gòu)的高分子巰基化改性衍生物側(cè)鏈結(jié)構(gòu)和性能單一，并不能有效地滿足各種生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用。同時(shí)這兩種結(jié)構(gòu)的高分子巰基化改性衍生物的側(cè)鏈較短，制約了巰基在進(jìn)一步化學(xué)修飾和交聯(lián)時(shí)與其它化學(xué)官能團(tuán)的碰撞幾率，化學(xué)反應(yīng)性能不佳。因此，制備具有可調(diào)節(jié)的側(cè)鏈分子結(jié)構(gòu)和化學(xué)性能的高分子巰基化類(lèi)衍生物具有重要的意義。本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題之一在于提供一類(lèi)新的具有重要生物醫(yī)學(xué)用途的高分子巰基化改性衍生物，該類(lèi)衍生物具有可調(diào)節(jié)的側(cè)鏈分子結(jié)構(gòu)和化學(xué)性能。本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題之二是提供一類(lèi)二硫鍵交聯(lián)的高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料。本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題之三是提供一類(lèi)巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑交聯(lián)的高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料。本發(fā)明以側(cè)鏈含羧基的高分子化合物為原料，采用化學(xué)制備方法合成了新穎的巰
背景技術(shù)：
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發(fā)明內(nèi)容基化改性高分子衍生物。該類(lèi)衍生物具有可調(diào)節(jié)的側(cè)鏈分子結(jié)構(gòu)和化學(xué)性能，在生物醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要的用途。本發(fā)明的高分子巰基化改性衍生物用下述通式(I)或(II)表示其中R,和R2是亞烷基、取代亞烷基、芳香基、聚醚基等；K和R2可以具有相同或不相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)，所述高分子巰基化改性衍生物的分子量為1000到500萬(wàn)。上述p是指?jìng)?cè)鏈含有羧基的高分子化合物殘基，其中至少一個(gè)高分子化合物側(cè)鏈羧基被改性為巰基。側(cè)鏈含有羧基的高分子化合物包括多糖、蛋白質(zhì)以及合成高分子等。其中多糖包括硫酸軟骨素、皮膚素、肝素、類(lèi)肝素、海藻酸、透明質(zhì)酸、硫酸皮膚素、果膠、羧甲基纖維素、羧甲基殼聚糖等以及它們的鹽形式；合成高分子包括聚丙烯酸、聚天冬氨酸、聚酒石酸、聚谷氨酸、聚富馬酸等以及它們的鹽形式；蛋白質(zhì)包括膠原蛋白、堿性明膠蛋白、酸性明膠蛋白、堿性基因重組明膠蛋白、酸性基因重組明膠蛋白、彈性蛋白、核心蛋白多糖層粘連蛋白纖維結(jié)合蛋白等。側(cè)鏈含有羧基的高分子化合物優(yōu)選硫酸軟骨素、肝素、類(lèi)肝素、海藻酸、透明質(zhì)酸、聚天冬氨酸、聚谷氨酸以及它們的鹽形式(如鈉鹽，鉀鹽等)，和堿性明膠蛋白、酸性明膠蛋白、堿性基因重組明膠蛋白、酸性基因重組明膠蛋白。特別優(yōu)選硫酸軟骨素、肝素、透明質(zhì)酸以及它們的鹽形式(如鈉鹽，鉀鹽等)，和堿性明膠蛋白、酸性明膠蛋白。上述亞烷基是指-(CH丄-(n是l15的整數(shù))。優(yōu)選n是l8的整數(shù)。上述取代亞垸基是指至少一個(gè)氫原子被低級(jí)垸基、羥基、氨基、烷氧基、苯基、酯基等基團(tuán)取代的亞烷基。上述芳香基是指芳香族的苯基、萘基等。優(yōu)選苯基。上述聚醚基是指-[(C服hOL-，其中R是低級(jí)烷基，n是1~10的整數(shù)，m是1~500的整數(shù)。優(yōu)選R為氫原子，n分別等于2、3和4。上述低級(jí)烷基是指具有18個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基。例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等。優(yōu)選具有1~4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，特別優(yōu)選甲基、乙基和丙基。上述烷氧基是指具有16個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基。例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、新戊氧基、己氧基等。優(yōu)選具有14個(gè)碳原子的支鏈或直鏈的烷氧基，特別優(yōu)選甲氧基和乙氧基。上述酯基是指-C(0)0R，其中R是上述低級(jí)烷基。優(yōu)選甲酯基、乙酯基、丙酯基和丁酯基。優(yōu)選的本發(fā)明化合物是其中1^和R2代表亞烷基。最優(yōu)選的是仏和R2是碳原子數(shù)為1~8的亞垸基。以透明質(zhì)酸為例，本發(fā)明的高分子巰基化改性衍生物具有下列化學(xué)結(jié)構(gòu)特征<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>或<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>其中R,和R2的定義同前述；i是大于0的整數(shù)，j是大于或等于0的整數(shù)。本發(fā)明通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物的制備一般采用酰肼/碳二亞胺偶合化學(xué)方法。其基本原理是高分子化合物的側(cè)鏈羧基在碳二亞胺的活化下生成活性中間體，然后二硫代二酰肼的氨基親核進(jìn)攻活性中間體生成加成物，最后加成物的二硫鍵被還原成自由巰基，純化即可得到產(chǎn)物。為了制備本發(fā)明通式(I)或(II)的高分子巰基化改性衍生物，首先按照本申請(qǐng)人已申請(qǐng)的發(fā)明專(zhuān)利(申請(qǐng)?zhí)?00610118715.2，發(fā)明名稱(chēng)二酰肼化合物及其制6備方法和用途)合成以下兩類(lèi)新型的二硫代二酰肼-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中R,和R2的定義同前述。這兩類(lèi)新型二硫代二酰肼的特征是含有一個(gè)二硫鍵、兩個(gè)酰胺鍵和兩個(gè)酰肼官能團(tuán)，可由相應(yīng)的二硫代二酸和二硫代二氨制備。以下是可用于合成本發(fā)明通式(I)和(II)的高分子巰基化改性衍生物的部分二硫代二酰肼化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(12)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(13)其中，(1)是二硫代二丙酸雙酰甘氨酸二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DGDTPDH);(2)是二硫代二丙酸雙酰丙氨酸二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DADTPDH);(3)是二硫代二丙酸雙酰(羥基)氨基乙酸二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DHADTPDH);(4)是二硫代二丙酸雙酰氨基丙酸二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DPDTPDH);(5)是二硫代二丙酸雙酰氨基丁酸二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DBDTPDH);(6)是二硫代二丁酸雙酰甘氨酸二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DGDTBDH);(7)是二硫代二丁酸雙酰氨基丙酸二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DPDTBDH);(8)是雙丙二酸雙酰胱胺二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DPCDH);(9)是雙琥珀酸雙酰胱胺二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DSCDH);(10)是雙(甲基)丁二酸雙酰胱胺二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DMPCDH);(11)是雙戊二酸雙酰胱胺二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DGCDH);(12)是雙己二酸雙酰胱胺二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DACDH);(13)是雙庚二酸雙酰胱胺二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DHCDH)。本發(fā)明通式(I)和(II)高分子巰基化改性衍生物的一種制備方法為高分子化合物的側(cè)鏈羧基在1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽的活化下與二硫代二酰肼的一個(gè)或兩個(gè)酰肼官能團(tuán)生成加成物；最后加成物的二硫鍵被羥基硫醇、二硫蘇糖醇或硼氫化鈉等還原劑還原成自由巰基透析純化除去雜質(zhì)即可得到本發(fā)明通式(I)或(II)的高分子巰基化改性衍生物。以下是其化學(xué)合成路徑及化學(xué)結(jié)構(gòu)式，其中，Rj服2是亞烷基、取代亞垸基、芳香基、聚醚基等。本發(fā)明通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物，當(dāng)R冴服2都為亞垸基，即為本發(fā)明的優(yōu)選化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下所示-SH其中，(1)代表Ri和R2都為亞烷基的本發(fā)明通式(I)高分子巰基化衍生物結(jié)構(gòu)通式；(2)代表R,和R2都為亞烷基的本發(fā)明通式(II)高分子巰基化衍生物結(jié)構(gòu)通式(i、j、m、n都是大于l的整數(shù))。本發(fā)明最優(yōu)選的通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物，其中R2是碳原子數(shù)為2和3的亞垸基，R分別是碳原子數(shù)為l5的亞烷基，P為硫酸軟骨素、肝素、透明質(zhì)酸和它們的鹽形式(如鈉鹽，鉀鹽等)、堿性明膠蛋白、酸性明膠蛋白等的殘基，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中，(1)是二硫代二丙酸雙酰甘氨酸二酰肼改性高分子巰基化衍生物(P-DGDTPDH);(2)是二硫代二丙酸雙酰丙氨酸二酰肼改性高分子巰基化衍生物(P-DADTPDH);(3)是二硫代二丁酸雙酰甘氯酸二酰肼改性高分子巰基化衍生物(P-DGDTBDH);(4)是二硫代二丁酸雙酰丙氨酸二酰肼改性高分子巰基化衍生物(P-DADTBDH);(5)是雙琥珀酸雙酰胱胺二酰肼改性高分子巰基化衍生物(P-DSCDH);(6)是雙戊二酸雙酰胱胺二酰肼改性高分子巰基化衍生物(P-DGCDH);(7)是雙己二酸雙酰胱胺二酰肼改性高分子巰基化衍生物(P-MCDH);(8)是雙庚二酸雙酰胱胺二酰肼改性高分子巰基化衍生物(P-DHCDH)。巰基化改性制備過(guò)程不會(huì)顯著改變分子量及其分布，通常本發(fā)明通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物的分子量及其分布與起始原料(側(cè)鏈含羧基高分子化合物)的分子量及其分布基本相同。不同起始原料(側(cè)鏈含羧基高分子化合物)的分子量差別較大，通常在1000到500萬(wàn)之間；其分子量分布也差別較大，如明膠的分子量分布通常較寬。起始原料(側(cè)鏈含羧基高分子化合物)的分子量及其分布并不會(huì)影響巰基化改性過(guò)程，不會(huì)影響本發(fā)明通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物的制備。本發(fā)明通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物具有很多有益效果。本發(fā)明采用酰肼鍵的化學(xué)結(jié)合方式進(jìn)行巰基化改性，具有制備條件溫和、產(chǎn)率高、改性程度高且可控等許多顯著優(yōu)點(diǎn)。與Shu等人在Biomacromolecules，3，1304，2002和WO2004/03716所公開(kāi)的高分子巰基化改性衍生物相比，雖然都采用酰肼鍵的化學(xué)結(jié)合方式進(jìn)行巰基化改性，但本發(fā)明通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物創(chuàng)新性地引入了一個(gè)酰氨鍵，側(cè)鏈化學(xué)結(jié)構(gòu)靈活多變、性能可調(diào)。研究表明本發(fā)明的通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物具有以下兩大有益效果(1)通過(guò)引入酰氨鍵的方式，可以靈活調(diào)節(jié)側(cè)鏈的長(zhǎng)度和結(jié)構(gòu)。側(cè)鏈的長(zhǎng)度將在很大程度上影響巰基的反應(yīng)性能(Shu等，Biomaterials24,3825，2003)。側(cè)鏈越長(zhǎng)，端巰基和其他反應(yīng)官能團(tuán)的碰撞幾率越高，因而進(jìn)一步使反應(yīng)改性的性能得到了很大的提高。(2)酰氨鍵為強(qiáng)吸電子基團(tuán)，本發(fā)明化合物側(cè)鏈酰氨鍵的引入，在很大程度上影響了端巰基的電離常數(shù)(PKa)，然而這與酰氨鍵的連接方式有關(guān)。本發(fā)明通式(I)高分子巰基化改性衍生物的側(cè)鏈酰氨鍵中的羰基與端巰基相近，強(qiáng)化了端巰基的電離(plC降低)；與此相反，本發(fā)明通式(II)高分子巰基化改性衍生物的側(cè)鏈酰氨鍵的氮原子與端巰基相近，弱化了端巰基的電離(pl升高)。一般說(shuō)來(lái)，與Shu等人在Biomacromolecules，3，1304，2002和W02004/03716所公開(kāi)的側(cè)鏈連接片斷為亞烷基(碳數(shù)為2和3)的高分子巰基化改性衍生物相比，本發(fā)明通式(I)高分子巰基化改性衍生物的巰基電離常數(shù)(沐a)降低約0.1~0.4，而本發(fā)明通式(II)高分子巰基化改性衍生物的巰基電離常數(shù)(沐a)則升高約0.2~0.7。因而本發(fā)明通式(I)高分子巰基化改性衍生物的端巰基更活潑，而本發(fā)明通式(II)高分子巰基化改性衍生物的端巰基則更穩(wěn)定。本發(fā)明通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物與已公開(kāi)的高分子巰基化改性衍生物相比，具有許多獨(dú)特的性能，可以根據(jù)實(shí)際應(yīng)用的需要，選擇合適的化學(xué)結(jié)構(gòu)。以透明質(zhì)酸(HA)的下述具體高分子巰基化衍生物為例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物的有益效果:上述化合物在端巰基側(cè)具有相同的結(jié)構(gòu)，其中(a)是Shu等人在Biomacromolecules，3，1304，2002和W02004/03716所公開(kāi)的高分子巰基化改性衍生物；(b)是本發(fā)明通式(I)高分子巰基化改性衍生物；(c)是本發(fā)明通式(II)高分子巰基化改性衍生物。高分子巰基化改性衍生物(b)的巰基反應(yīng)活性比(a)高很多，其形成雙硫鍵交聯(lián)凝膠的能力提高了約50%;而高分子巰基化改性衍生物(c)的巰基反應(yīng)活性比(a)低很多，其巰基穩(wěn)定性能提高了一倍以上。本發(fā)明通式(I)或(II)的高分子巰基化改性衍生物，具有至少一個(gè)側(cè)鏈自由巰基，可以在合適的條件下重新氧化形成二硫鍵。氧氣、低濃度過(guò)氧化氫、碘、鐵三價(jià)離子等中強(qiáng)度氧化劑均可使自由巰基形成二硫鍵，從而制備出高分子交聯(lián)材料。二硫鍵的形成通常受溶液pH值的影響在堿性條件下，巰基電離成硫負(fù)離子，反映活性很高，即使空氣中的氧氣也能快速促進(jìn)二硫鍵的形成；而在酸性條件下，巰基的電離受到抑制，反應(yīng)活性降低，巰基相對(duì)穩(wěn)定。本發(fā)明通式(I)的高分子巰基化改性衍生物的巰基較活潑，即使在中性的條件和弱氧化劑的作用下也可生成二硫鍵交聯(lián)材料；而本發(fā)明通式(II)的高分子巰基化改性衍生物的巰基較穩(wěn)定，需要在弱堿性或較強(qiáng)氧化劑的作用下才能快速生成二硫鍵交聯(lián)材料。本發(fā)明的二硫鍵交聯(lián)的高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料的制備方法簡(jiǎn)單可靠，產(chǎn)物靈活多變。常用的制備方法是將一種或多種本發(fā)明通式(I)或(II)的高分子巰基化改性衍生物制成水溶液或混合水溶液，在中性或弱堿性條件下用室溫空氣氧化制備二硫鍵交聯(lián)材料；或者在弱酸性或酸性條件下，用低濃度過(guò)氧化氫、鐵三價(jià)離子等更強(qiáng)的氧化劑氧化制備二硫鍵交聯(lián)材料。本發(fā)明單組份和雙組份的二硫鍵交聯(lián)的高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料用下述通式(III)、(IV)或(V)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中P,和P2都是側(cè)鏈含羧基的高分子化合物殘基，其定義同前述。!^和R2的定義同前述；Ri和R4的定義與R,和R2相同；R,、R2、R3、&可以具有相同或不相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)。當(dāng)Pt和P2相同時(shí)，即為單組份交聯(lián)材料，當(dāng)P,和P2不相同時(shí)，即為雙組份交聯(lián)材料。本發(fā)明的三組份或三組分以上的二硫鍵交聯(lián)的高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料可由三種或三種以上通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物制備，其結(jié)構(gòu)特征是包含三種或三種以上高分子化合物通過(guò)二硫鍵結(jié)合形成交聯(lián)材料。本發(fā)明的有益效果是可以方便地制備各種二硫鍵交聯(lián)高分子材料如一種多糖的二硫鍵交聯(lián)材料、一種蛋白質(zhì)的二硫鍵交聯(lián)材料、或者兩種多糖的復(fù)合二硫鍵交聯(lián)材料、兩種蛋白質(zhì)的復(fù)合交聯(lián)材料、一種多糖和一種蛋白質(zhì)的復(fù)合二硫鍵交聯(lián)材料等等。這些二硫鍵交聯(lián)高分子材料可以制成薄膜、海綿、凝膠等各種形態(tài)，可以用于抑制細(xì)胞的粘附，用作細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)等等。本發(fā)明的巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑交聯(lián)的高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料由一種或多種通式(I)或(II)的新穎高分子巰基化改性衍生物和巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑制備。本發(fā)明采用的巰基反應(yīng)活性官能團(tuán)包括馬來(lái)酰亞胺、乙烯砜、a，e不飽和丙烯酸酯、a，e不飽和甲基丙烯酸酯、鹵代丙酸酯、鹵代丙酰胺、二硫代吡啶、N-羥基丁二酰亞胺活化酯等等。其中馬來(lái)酰亞胺、乙烯砜、碘代丙酸酯、碘代丙酰胺、二硫代吡啶等官能團(tuán)具有很高巰基反應(yīng)活性。以本發(fā)明通式(I)高分子巰基化改性衍生物為例，以下給出了巰基和這些官能團(tuán)的化學(xué)反應(yīng)式，其中，K和R2是亞烷基、取代亞烷基、芳香基、聚醚基等這些反應(yīng)可以分為三類(lèi)(1)巰基和活化不飽和雙鍵的加成反應(yīng)，屬于這類(lèi)反應(yīng)的官能團(tuán)包括馬來(lái)酰亞胺、乙烯砜、a，e不飽和丙烯酸酯、a，e不飽和甲基丙烯酸酯等；(2)巰基和活化鹵代烷的取代反應(yīng)，屬于這類(lèi)反應(yīng)的官能團(tuán)包括碘代丙酸酯、溴代丙酸酯、氯代丙酸酯、碘代丙酰胺、溴代丙酰胺、氯代丙酰胺、二硫代吡啶等；(3)最后一類(lèi)是硫酯化反應(yīng)，這類(lèi)反應(yīng)得官能團(tuán)包括各種羧酸的活化酯，如N-羥基丁二酰亞胺活化酯等等。本發(fā)明采用的巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑至少含有兩個(gè)上述反應(yīng)官能團(tuán)的聚乙二醇(簡(jiǎn)稱(chēng)PEG)的衍生物，如雙臂、三臂、四臂、八臂或更多臂的聚乙二醇衍生物，它們具有如下的典型化學(xué)結(jié)構(gòu)Gt<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中G。G2、G3、G4、G5、G6、&和G8為上述巰基反應(yīng)活性官能團(tuán)如馬來(lái)酰亞胺、乙烯砜、a，e不飽和丙烯酸酯、a，e不飽和甲基丙烯酸酯、鹵代丙酸酯、鹵代丙酰胺、二硫代吡啶或N-羥基丁二酰亞胺等等，它們可以具有全部相同、部分相同或全部不相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)；PEG是指分子量為100到1000000的具有CH2CH20重復(fù)單元的鏈段。以雙臂的聚乙二醇為例，以下是本發(fā)明采用的常見(jiàn)交聯(lián)劑——雙臂聚乙二醇巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>聚乙二醇二馬來(lái)酰亞胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>本發(fā)明的巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑交聯(lián)的高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料的通常制備方法包括將一種或多種通式(I)或(II)的新穎高分子巰基化改性衍生物制成水溶液或混合水溶液，調(diào)節(jié)溶液的pH值為中性，然后加入上述巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑的水溶液，混合均勻后室溫靜置片刻即形成凝膠，得到交聯(lián)材料。本發(fā)明通式(I)的高分子巰基化改性衍生物的巰基較活潑，與交聯(lián)劑的反應(yīng)較快；而本發(fā)明通式(II)的高分子巰基化改性衍生物的巰基較穩(wěn)定，與交聯(lián)劑的反應(yīng)則相對(duì)較慢。以通式(I)高分子巰基化改性衍生物和上述雙臂聚乙二醇巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑為例，本發(fā)明的單組份和雙組份的巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑交聯(lián)的高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料具有如下所示的結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>R=H或CH3聚乙二醇二(甲基)丙烯酸酯交聯(lián)o<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>!{=11或013聚乙二醇二(甲基)丙沐酰胺交聯(lián)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>聚乙二醇二卣代丙酸酯交聯(lián)oH聚乙二醇二面代丙酰胺交聯(lián)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>o聚乙二醇二二硫代吡啶交聯(lián)o<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>聚乙二醇二N-羥基丁二酰亞胺交聯(lián)其中P,和P2都是側(cè)鏈含羧基的高分子化合物殘基，其定義同前述；lR2、&和R4的定義同前述；K、R2、R3、R4可以具有相同或不相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)。當(dāng)P,和R相同時(shí)，即為單組份交聯(lián)材料，當(dāng)P,和P2不相同時(shí)，即為雙組份交聯(lián)材料。也可以采用兩種或兩種以上的上述雙臂聚乙二醇巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑共同交聯(lián)制備高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料。另外也可以采用一種或多種多臂聚乙二醇衍生物交聯(lián)劑(如三臂聚乙二醇衍生物交聯(lián)劑、四臂聚乙二醇衍生物交聯(lián)劑、八臂聚乙二醇衍生物交聯(lián)劑等等)來(lái)制備高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料。巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑交聯(lián)的通式(II)高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料和通式(I)高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料具有類(lèi)似的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的三組份或三組分以上的巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑交聯(lián)的高分子巰基化改性衍生物交聯(lián)材料可由三種或三種以上通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物制備。通常的制備途徑是首先制備出三種或三種以上通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物的混合溶液，然后調(diào)節(jié)溶液的pH值為中性，加入一種或多種上述聚乙二醇巰基反應(yīng)活性衍生物交聯(lián)劑，從而制備出多組份交聯(lián)材料。通常說(shuō)來(lái)，巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑和本發(fā)明通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物的交聯(lián)作用非?？焖?，其交聯(lián)凝膠化速度比二硫鍵的交聯(lián)速度提高5倍以上，具有重要的生物醫(yī)學(xué)用途，如細(xì)胞的原位包埋等等。本發(fā)明可以方便地制備出各種巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑交聯(lián)高分子材料如一種多糖的交聯(lián)材料、一種蛋白質(zhì)的交聯(lián)材料、或者兩種多糖的復(fù)合交聯(lián)材料、兩種蛋白質(zhì)的復(fù)合交聯(lián)材料、一種多糖和一種蛋白質(zhì)的復(fù)合交聯(lián)材料等等。這些巰基反應(yīng)活性交聯(lián)高分子材料可以制成薄膜、海綿、凝膠等各種形態(tài)，可以用于抑制細(xì)胞的粘附，用作細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)等等。圖1是本發(fā)明實(shí)施例4中低取代衍生物的氫原子核磁共振譜圖和重要化學(xué)位移峰的歸屬(020為溶劑)；圖2是本發(fā)明實(shí)施例4中高取代衍生物的氫原子核磁共振譜圖和重要化學(xué)位移峰的歸屬(D20為溶劑);圖3是本發(fā)明實(shí)施例20中細(xì)胞在空白細(xì)胞培養(yǎng)板表面的形貌示意圖4是本發(fā)明實(shí)施例20中細(xì)胞在聚乙二醇二丙烯酸酯交聯(lián)透明質(zhì)酸-明膠雙組分水凝膠表面的形貌示意圖。具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例可以使本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例l.合成二硫代二丙酸雙酰甘氨酸二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DGDTPDH)在1000毫升燒杯中加入10克二硫代二丙酸(Aldrich，美國(guó))，50毫升無(wú)水二甲基甲酰胺。室溫?cái)嚢枞芙夂螅尤?7.0克羰二咪唑(Aldrich，美國(guó))。此時(shí)溶液產(chǎn)生大量二氧化碳?xì)馀莺桶咨恋?。室溫減壓反應(yīng)3小時(shí)。然后加入14.7克甘氨酸乙酯鹽酸鹽(Aldrich，美國(guó))，攪拌反應(yīng)l小時(shí)。然后在加入500毫升乙醚，靜止l小時(shí)。小心倒去上層有機(jī)相，然后加入100毫升乙醇和10毫升水合肼。室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，過(guò)濾收集沉淀產(chǎn)物。沉淀用200毫升無(wú)水乙醇淋洗兩次，然后真空減壓干燥得到略帶黃色固體產(chǎn)物DGDTPDH約8.5克，產(chǎn)率約50%。實(shí)施例2.低取代DGDTPDH改性透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DGDTPDH)的合成透明質(zhì)酸鈉(分子量62~115萬(wàn)，NovaMatrixFMCBIOPOLYMER，美國(guó))1克溶解于200毫升蒸餾水中，得到澄清透明溶液。在上述溶液中加入1.32克實(shí)施例1制備的DGDTPDH，攪拌溶解。然后溶液的pH值用0.1摩爾/升鹽酸調(diào)節(jié)至4.75，加入.0.36克1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(Aldrich，美國(guó))，電磁攪拌。在上述溶液中不斷加入適量0.1摩爾/升鹽酸，使溶液的pH值保持在4.75。溶液黏度不斷增加，并在15分鐘左右形成凝膠。凝膠形成后，室溫靜置反應(yīng)2小時(shí)。然后加入10克二硫蘇糖醇(DiagnosticChemicalLimited,美國(guó))和少量O.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液，攪拌。凝膠逐漸溶解，同時(shí)不斷加入O.l摩爾/升的氫氧化鈉溶液使溶液的pH值保持在8.5。待凝膠全部溶解后，室溫電磁攪拌反應(yīng)24小時(shí)。此后，在上述溶液中加入6摩爾/升的鹽酸直至約pH3.0。上述溶液裝入透析管(截除分子量3500，Sigma，美國(guó))，用10升0.001摩爾/升的鹽酸和0.3摩爾/升的氯化鈉溶液透析5天，每8小時(shí)換一次透析液；然后再用10升0.001摩爾/升的鹽酸溶液透析3天，每8小時(shí)換透析液。最后收集透析管內(nèi)的溶液，冷凍干燥得到白色絮狀固體約0.7克。實(shí)施例3.高取代DGDTPDH改性透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DGDTPDH)的合成透明質(zhì)酸鈉(分子量62-115萬(wàn)，NovaMatrixFMCBIOPOLYMER，美國(guó))1克溶解于200毫升蒸餾水中，得到澄清透明溶液。在上述溶液中加入2.64克實(shí)施例1制備的DGDTPDH，攪拌溶解。然后溶液的pH值用0.1摩爾/升鹽酸調(diào)節(jié)至4.75，加入0.96克1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(Aldrich，美國(guó))，電磁攪拌。在上述溶液中不斷加入適量0.1摩爾/升鹽酸，使溶液的pH值保持在4.75。溶液黏度不斷增力口，并在10分鐘左右形成凝膠。凝膠形成后，室溫靜置反應(yīng)2小時(shí)。然后加入20克二硫蘇糖醇(DiagnosticChemicalLimited,美國(guó))和少量O.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液，攪拌。凝膠逐漸溶解，同時(shí)不斷加入O.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液使溶液的pH值保持在8.5。待凝膠全部溶解后，室溫電磁攪拌反應(yīng)24小時(shí)。此后，在上述溶液中加入6摩爾/升的鹽酸直至約pH3.0。上述溶液裝入透析管(截除分子量3500，Sigma，美國(guó))，用10升0.001摩爾/升的鹽酸和0.3摩爾/升的氯化鈉溶液透析5天，每8小時(shí)換一次透析液；然后再用10升0.001摩爾/升的鹽酸溶液透析3天，每8小時(shí)換透析液。最后收集透析管內(nèi)的溶液，冷凍干燥得到白色絮狀固體約0.7克。實(shí)施例4.DGDTPDH改性透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DGDTPDH)的表征HA-DGDTPDH的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下對(duì)實(shí)施例2和實(shí)施例3制備的HA-DGDTPDH進(jìn)行表征1、凝膠液相色譜(GPC)檢測(cè)(純水為流動(dòng)相，紫外210納米吸收檢測(cè))均未發(fā)現(xiàn)小分子雜質(zhì)流出峰，表明實(shí)施例2和實(shí)施例3制備的低取代和高取代HA-DGDTPDH為高度純化，雜質(zhì)低于儀器檢測(cè)水平。2、氫譜核磁共振檢測(cè)('H-畫(huà)R)(D20為溶劑)，譜圖和化學(xué)位移峰的歸屬如圖1和圖2所示，HA-DGDTPDH在S3.96、2.70、2.56ppm出現(xiàn)了三個(gè)新的吸收峰，分別對(duì)應(yīng)于C〃^NHC(0)CH2CH2SH、CH2NHC(0)<^/;H2SH禾BCH2NHC(0)CH2G7^SH三個(gè)側(cè)鏈亞甲基的氫原子吸收。化學(xué)位移為S2.8ppm左右的小吸收峰為少量副反應(yīng)產(chǎn)物的吸收峰。以透明質(zhì)酸的乙?；奶卣骷谆辗鍨閮?nèi)標(biāo)，根據(jù)吸收峰的面積計(jì)算出實(shí)施例2制備的低取代HA-DGDTPDH的側(cè)鏈取代度為27%，實(shí)施例3制備的高取代HA-DGDTPDH的側(cè)鏈取代度為59%。3、分子量及其分布測(cè)定(GPC測(cè)定，以單分散透明質(zhì)酸校正標(biāo)準(zhǔn)曲線)實(shí)施例2制備的低取代HA-DGDTPDH重均分子量(M,)102萬(wàn)，數(shù)均分子量(Mn)53萬(wàn)，分子量分布1.92;實(shí)施例3制備的高取代HA-DGDTPDH重均分子量(M)123萬(wàn)，數(shù)均分子量(M)58萬(wàn)，分子量分布2.12。4、采用Shu等人在Biomacromolecules，3，1304，2002中報(bào)道的改進(jìn)Ellman方法檢測(cè)實(shí)施例2和實(shí)施例3制備的HA-DGDTPDH的活性巰基含量。實(shí)施例2制備的低取代HA-DGDTPDH的側(cè)鏈活性巰基含量25.4個(gè)巰基/100個(gè)透明質(zhì)酸二糖重復(fù)單元，實(shí)施例3制備的高取代HA-DGDTPDH的側(cè)鏈活性巰基含量為55.1個(gè)巰基/100個(gè)透明質(zhì)酸二糖重復(fù)單元。基本與氫譜核磁共振檢測(cè)結(jié)果相符。實(shí)施例5.合成二硫代二丙酸雙酰氨基丙酸二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DADTPDH)在IOOO毫升燒杯中加入IO克二硫代二丙酸(Aldrich，美國(guó))，50毫升無(wú)水二甲基甲酰胺。室溫?cái)嚢枞芙夂?，加?7.0克羰二咪唑(Aldrich，美國(guó))。此時(shí)溶液產(chǎn)生大量二氧化碳?xì)馀莺桶咨恋?。室溫減壓反應(yīng)3小時(shí)。然后加入14.7克氨基丙酸乙酯鹽酸鹽(Aldrich，美國(guó))，攪拌反應(yīng)l小時(shí)。然后再加入500毫升乙醚，靜止1小時(shí)。小心倒去上層有機(jī)相，然后加入IOO毫升乙醇和IO毫升水合肼。室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，過(guò)濾收集沉淀產(chǎn)物。沉淀用200毫升無(wú)水乙醇淋洗兩次，然后真空減壓干燥得到略帶黃色固體產(chǎn)物DADTPDH約7.3克，產(chǎn)率約40%。實(shí)施例6.DADTPDH改性透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DADTPDH)的合成和表征透明質(zhì)酸鈉(分子量62115萬(wàn)，NovaMatrixFMCBIOPOLYMER,美國(guó))1克溶解于200毫升蒸餾水中，得到澄清透明溶液。在上述溶液中加入1.43克實(shí)施例5制備的DADTPDH，攪拌溶解。然后溶液的pH值用0.1摩爾/升鹽酸調(diào)節(jié)至4.75，加入0.48克l-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(Aldrich，美國(guó))，電磁攪拌。在上述溶液中不斷加入適量0.1摩爾/升鹽酸，使溶液的pH值保持在4.75。溶液黏度不斷增加，并在10分鐘左右形成凝膠。凝膠形成后，室溫靜置反應(yīng)2小時(shí)。然后加入12克二硫蘇糖醇(DiagnosticChemicalLimited,美國(guó))和少量O.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液，攪拌。凝膠逐漸溶解，同時(shí)不斷加入0.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液使溶液的pH值保持在8.5。待凝膠全部溶解后，室溫電磁攪拌反應(yīng)24小時(shí)。此后，在上述溶液中加入6摩爾/升的鹽酸直至約pH3.0。上述溶液裝入透析管(截除分子量3500，Sigma，美國(guó))，用10升0.001摩爾/升的鹽酸和0.3摩爾/升的氯化鈉溶液透析5天，每8小時(shí)換一次透析液；然后再用10升0.001摩爾/升的鹽酸溶液透析3天，每8小時(shí)換透析液。最后收集透析管內(nèi)的溶液，冷凍千燥得到白色絮狀固體約0.7克。GPC檢測(cè)(純水為流動(dòng)相，紫外210納米吸收檢測(cè))均未發(fā)現(xiàn)小分子雜質(zhì)流出峰，表明合成的HA-DADTPDH為高度純化，雜質(zhì)低于儀器檢測(cè)水平。氫譜核磁共振檢測(cè)('H-麗R)(020為溶劑)。HA-DADTPDH在S3.4、2.66ppm出現(xiàn)了兩個(gè)新吸收峰分別對(duì)應(yīng)于CH2C%NHC(0)CH2CH2SH和CH2CH2NHC(0)CH2C#》H兩個(gè)側(cè)鏈亞甲基的氫原子吸收；<^CH2NHC(0)CH2CH2SH和CH2CH2NHC(0)<^CH2SH兩個(gè)側(cè)鏈亞甲基的氫原子吸收峰在S2.5ppm左右相互重疊?；瘜W(xué)位移為S2.8ppm左右的小吸收峰為少量副反應(yīng)產(chǎn)物的吸收峰。以透明質(zhì)酸的乙?；奶卣骷谆辗鍨閮?nèi)標(biāo)，根據(jù)吸收峰的面積計(jì)算出合成的HA-DGDTPDH的側(cè)鏈取代度為61%。用GPC測(cè)定分子量及其分布測(cè)定(以單分散透明質(zhì)酸校正標(biāo)準(zhǔn)曲線)重均分子量(M)122萬(wàn)，數(shù)均分子量(Mn)67萬(wàn)，分子量分布1.82。采用Shu等人在Biomacromolecules，3，1304，2002中報(bào)道的改進(jìn)Ellman方法檢測(cè)HA-DADTPDH的活性巰基含量53.6個(gè)巰基/100個(gè)透明質(zhì)酸二糖重復(fù)單元，稍低于氫譜核磁共振檢測(cè)結(jié)果。實(shí)施例7.合成雙琥珀酸雙酰胱胺二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DSCDH)胱胺二鹽酸鹽(Aldrich，美國(guó))100克溶解于1500毫升蒸餾水，得到澄清透明溶液。在上述溶液中加入4摩爾/升的氫氧化鈉直至溶液pH值為10。然后在電磁攪拌下加入133克琥珀酸酐(Aldrich,美國(guó))，同時(shí)不斷加入4摩爾/升的氫氧化鈉使溶液的pH值保持在710。室溫反應(yīng)2小時(shí)后，在溶液中加入6摩爾/升的鹽酸。。過(guò)濾收集白色沉淀產(chǎn)物，用2000毫升蒸餾水洗兩次。然后真空減壓干燥，得到白色產(chǎn)物固體產(chǎn)物合成雙琥珀酸雙酰胱胺酸(簡(jiǎn)稱(chēng)DSC)約150克，產(chǎn)率大于90%。在250毫升三頸圓底燒瓶中加入100克DSC，1200毫升無(wú)水乙醇和100滴濃硫酸。氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流2小時(shí)，然后減壓濃縮至小于200毫升。剩余溶液轉(zhuǎn)移到2500毫升分液漏斗，然后加入600毫升乙酸乙酯。有機(jī)相用500毫升水洗三次，棄去水相，有機(jī)相減壓蒸餾得到白色臘狀固體產(chǎn)物雙琥珀酸雙酰胱胺酸二乙酯(簡(jiǎn)稱(chēng)DSCDE)約93克，產(chǎn)率大于80%。在150毫升燒杯中加入10克DSCDE，80毫升乙醇。室溫?cái)嚢枞芙夂笤偌尤?0毫升水合肼(Aldrich，美國(guó))，反應(yīng)過(guò)夜。過(guò)濾收集白色沉淀產(chǎn)物，然后用40毫升乙醇淋洗四次。室溫通風(fēng)廚中揮發(fā)有機(jī)溶劑后，真空減壓干燥，得到白色產(chǎn)物固體產(chǎn)物DSCDH約8克，產(chǎn)率大于75%。實(shí)施例8.DSCDH改性透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DSCDH)的合成和表征透明質(zhì)酸鈉(分子量62-115萬(wàn)，NovaMatrixFMCBIOPOLYMER，美國(guó))1克溶解于200毫升蒸餾水中，得到澄清透明溶液。在上述溶液中加入0.95克實(shí)施例7制備的DSCDH，攪拌溶解。然后溶液的pH值用0.1摩爾/升鹽酸調(diào)節(jié)至4.75，加入0.288克l-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(Aldrich，美國(guó))，電磁攪拌。在上述溶液中不斷加入適量0.1摩爾/升鹽酸，使溶液的pH值保持在4.75。溶液黏度不斷增加，并在10分鐘左右形成凝膠。凝膠形成后，室溫靜置反應(yīng)2小時(shí)。然后加入10克二硫蘇糖醇(DiagnosticChemicalLimited,美國(guó))和少量O.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液，攪拌。凝膠逐漸溶解，同時(shí)不斷加入O.l摩爾/升的氫氧化鈉溶液使溶液的pH值保持在8.5。待凝膠全部溶解后，室溫電磁攪拌反應(yīng)24小時(shí)。此后，在上述溶液中加入6摩爾/升的鹽酸直至約pH3.0。上述溶液裝入透析管(截除分子量3500，Sigma，美國(guó))，用10升0.001摩爾/升的鹽酸和0.3摩爾/升的氯化鈉溶液透析5天，每8小時(shí)換一次透析液；然后再用10升0.001摩爾/升的鹽酸溶液透析3天，每8小時(shí)換透析液。最后收集透析管內(nèi)的溶液，冷凍干燥得到白色絮狀固體約0.7克。gpc檢測(cè)(純水為流動(dòng)相，紫外210納米吸收檢測(cè))均未發(fā)現(xiàn)小分子雜質(zhì)流出峰，表明合成的HA-DSCDH為高度純化，雜質(zhì)低于儀器檢測(cè)水平。氫譜核磁共振檢測(cè)(丄H-麗R)(020為溶劑)。HA-DSCDH在S3.26、2.5pprn出現(xiàn)了兩個(gè)新吸收峰。其中S3.26卯m的新吸收峰對(duì)應(yīng)于CH2CH2C(0)NHfi7/:H2SH—個(gè)側(cè)鏈亞甲基氫原子吸收；A7/:h2c(o)nhch2ch2sh、ch2<:#/;(o)nhch2ch2sh和CH2CH2C(0)NHCH2C^SH的三個(gè)側(cè)鏈亞甲基的氫原子吸收則重疊在S2.5ppm。以透明質(zhì)酸的乙?；奶卣骷谆辗鍨閮?nèi)標(biāo)，根據(jù)吸收峰的面積計(jì)算出合成的ha-dgdtpdh的側(cè)鏈取代度為38%。采用Shu等人在Biomacromolecules,3，1304，2002中報(bào)道的改進(jìn)Ellman方法檢測(cè)HA-DSCDH的活性巰基含量39.1個(gè)巰基/100個(gè)透明質(zhì)酸二糖重復(fù)單元，基本與氫譜核磁共振檢測(cè)結(jié)果相符。實(shí)施例9.DSCDH改性硫酸軟骨素巰基化衍生物(CS-DSCDH)的合成和表征硫酸軟骨素(c型，來(lái)自鯊魚(yú)軟骨，Sigma,美國(guó))l克溶解于IOO毫升蒸餾水中，得到澄清透明溶液。在上述溶液中加入0.704克實(shí)施例7制備的DSCDH，攪拌溶解。然后溶液的pH值用0.1摩爾/升鹽酸調(diào)節(jié)至4.75，加入0.192克1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(Aldrich，美國(guó))，電磁攪拌。在上述溶液中不斷加入適量0.1摩爾/升鹽酸，使溶液的pH值保持在4.75,室溫電磁攪拌反應(yīng)2小時(shí)。然后加入IO克二硫蘇糖醇(DiagnosticChemicalLimited,美國(guó))和少量0.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液，攪拌。凝膠逐漸溶解，同時(shí)不斷加入0.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液使溶液的pH值保持在8.5。待凝膠全部溶解后，室溫電磁攪拌反應(yīng)24小時(shí)。此后，在上述溶液中加入6摩爾/升的鹽酸直至約pH3.0。上述溶液裝入透析管(截除分子量3500，Sigma，美國(guó))，用10升0.001摩爾/升的鹽酸和0.3摩爾/升的氯化鈉溶液透析5天，每8小時(shí)換一次透析液；然后再用10升0.001摩爾/升的鹽酸溶液透析3天，每8小時(shí)換透析液。最后收集透析管內(nèi)的溶液，冷凍干燥得到白色絮狀固體約0.6克。GPC檢測(cè)(純水為流動(dòng)相，紫外210納米吸收檢測(cè))均未發(fā)現(xiàn)小分子雜質(zhì)流出峰，表明合成的CS-DSCDH為高度純化，雜質(zhì)低于儀器檢測(cè)水平。氫譜核磁共振檢測(cè)('H-NMR)(020為溶劑)。CS-DSCDH在S3.27、2.54ppm出現(xiàn)了兩個(gè)新吸收峰。其中S3.27ppm的新吸收峰對(duì)應(yīng)于CH2CH2C(0)NHfiy/:H2SH側(cè)鏈亞甲基氫原子吸收；fi￥iCH2C(0)NHCH2CH2SH、CH,〃iC(0)NHCH2CH2SH和CH2CH2C(0)NHCH2C股H的三個(gè)側(cè)鏈亞甲基的氫原子吸收則重疊在S2.54ppm。以硫酸軟骨素的乙酰基的特征甲基吸收峰為內(nèi)標(biāo)，根據(jù)吸收峰的面積計(jì)算出合成的CS-DGDTPDH的側(cè)鏈取代度為47%。用GPC測(cè)定分子量及其分布測(cè)定(以單分散透明質(zhì)酸校正標(biāo)準(zhǔn)曲線)重均分子量(MJ3.8萬(wàn)，數(shù)均分子量(Mn)1.7萬(wàn)，分子量分布2.23。采用Shu等人在Biomacromolecules，3，1304，2002中報(bào)道的改進(jìn)Ellman方法檢測(cè)CS-DSCDH的活性巰基含量44.2個(gè)巰基/100個(gè)硫酸軟骨素二糖重復(fù)單元，稍低于氫譜核磁共振檢測(cè)結(jié)果。實(shí)施例IO.DSCDH改性明膠巰基化衍生物(GEL-DSCDH)的合成和表征明膠(B型，來(lái)自豬皮，Sigma，美國(guó))1克溶解于100毫升蒸餾水中，得到澄清透明溶液。在上述溶液中加入0.75克實(shí)施例7制備的DSCDH，攪拌溶解。然后溶液的pH值用0.1摩爾/升鹽酸調(diào)節(jié)至4.75，加入1克l-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(Aldrich，美國(guó))，電磁攪拌。在上述溶液中不斷加入適量O.l摩爾/升鹽酸，使溶液的pH值保持在4.75。溶液黏度不斷增加，并在10分鐘左右形成凝膠。凝膠形成后，室溫靜置反應(yīng)2小時(shí)。然后加入10克二硫蘇糖醇(DiagnosticChemicalLimited,美國(guó))和少量O.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液，攪拌。凝膠逐漸溶解，同時(shí)不斷加入0.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液使溶液的pH值保持在8.5。待凝膠全部溶解后，室溫電磁攪拌反應(yīng)24小時(shí)。此后，在上述溶液中加入6摩爾/升的鹽酸直至約pH3.0。上述溶液裝入透析管(截除分子量3500，Sigma，美國(guó))，用10升0.001摩爾/升的鹽酸和0.3摩爾/升的氯化鈉溶液透析5天，每8小時(shí)換一次透析液;然后再用10升0.001摩爾/升的鹽酸溶液透析3天，每8小時(shí)換透析液。最后收集透析管內(nèi)的溶液，冷凍干燥得到白色絮狀固體約0.6克。GPC檢測(cè)(純水為流動(dòng)相，紫外210納米吸收檢測(cè))均未發(fā)現(xiàn)小分子雜質(zhì)流出峰，表明合成的GEL-DSCDH為高度純化，雜質(zhì)低于儀器檢測(cè)水平。氫譜核磁共振檢測(cè)('H-醒R)(D20為溶劑)。GEL-DSCDH在53.27、2.54ppm出現(xiàn)了兩個(gè)新的強(qiáng)吸收峰。其中53.28ppm的新吸收峰對(duì)應(yīng)于CH2CH2C(0)NH<^￡H2SH側(cè)鏈亞甲基氫原子吸收；C%CH2C(0)NHCH2CH2SH、CH2C^:(0)NHCH2CH2SH禾口CH2CH2C(0)NHCH2C^SH的三個(gè)側(cè)鏈亞甲基的氫原子吸收則重疊在S2.53ppm。用GPC測(cè)定分子量及其分布測(cè)定(以標(biāo)準(zhǔn)分子量聚乙二醇校正標(biāo)準(zhǔn)曲線)重均分子量(M.)5.6萬(wàn)，數(shù)均分子量(Mn)2.l萬(wàn)，分子量分布2.67。采用Shu等人在Biomacromolecules，3，1304，2002中報(bào)道的改進(jìn)Ellman方法檢測(cè)GEL-DSCDH的活性巰基含量0.57毫摩爾巰基/克GEL-DSCDH。實(shí)施例ll.合成雙戊二酸雙酰胱胺酸二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DGCDH)胱胺二鹽酸鹽(Aldrich，美國(guó))100克溶解于1500毫升蒸餾水，得到澄清透明溶液。在上述溶液中加入4摩爾/升的氫氧化鈉直至溶液pH值為10。然后在電磁攪拌下加入152克戊二酸酐(Aldrich，美國(guó))，同時(shí)不斷加入4摩爾/升的氫氧化鈉使溶液的pH值保持在710。室溫反應(yīng)2小時(shí)后，在溶液中加入6摩爾/升的鹽酸。過(guò)濾收集白色沉淀產(chǎn)物，用2000毫升蒸餾水洗兩次。然后真空減壓干燥，得到白色產(chǎn)物固體產(chǎn)物雙戊二酸雙酰胱胺酸(簡(jiǎn)稱(chēng)DGC)約155克，產(chǎn)率大于90%。在2500毫升三頸圓底燒瓶中加入100克DGC，1200毫升無(wú)水乙醇和100滴濃硫酸。氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流2小時(shí)，然后減壓濃縮至小于200毫升。剩余溶液轉(zhuǎn)移到2500毫升分液漏斗，然后加入600毫升乙酸乙酯。有機(jī)相用500毫升水洗三次，然后減壓蒸餾得到白色臘狀固體產(chǎn)物雙戊二酸雙酰胱胺酸二乙酯(簡(jiǎn)稱(chēng)DGCDE)約94克，產(chǎn)率大于80%。在150毫升燒杯中加入10克DGCDE，80毫升乙醇。室溫?cái)嚢枞芙夂笤偌尤?0毫升水合肼，反應(yīng)過(guò)夜。過(guò)濾收集白色沉淀產(chǎn)物，然后用40毫升乙醇淋洗四次。室溫通風(fēng)廚中揮發(fā)有機(jī)溶劑后，真空減壓干燥，得到白色產(chǎn)物固體產(chǎn)物雙戊二酸雙酰胱胺酸二酰肼(簡(jiǎn)稱(chēng)DGCDH)約7.1克，產(chǎn)率大于75%。實(shí)施例12.DGCDH改性透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DGCDH)的合成和表征透明質(zhì)酸鈉(分子量62115萬(wàn)，NovaMatrixFMCBIOPOLYMER,美國(guó))1克溶解于200毫升蒸餾水中，得到澄清透明溶液。在上述溶液中加入1.53克實(shí)施例11制備的DGCDH，攪拌溶解。然后溶液的pH值用0.1摩爾/升鹽酸調(diào)節(jié)至4.75，加入0.48克l-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(Aldrich，美國(guó))，電磁攪拌。在上述溶液中不斷加入適量0.1摩爾/升鹽酸，使溶液的pH值保持在4.75。溶液黏度不斷增加，并在10分鐘左右形成凝膠。凝膠形成后，室溫靜置反應(yīng)2小時(shí)。然后加入10克二硫蘇糖醇(DiagnosticChemicalLimited,美國(guó))和少量0.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液，攪拌。凝膠逐漸溶解，同時(shí)不斷加入0.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液使溶液的pH值保持在8.5。待凝膠全部溶解后，室溫電磁攪拌反應(yīng)24小時(shí)。此后，在上述溶液中加入6摩爾/升的鹽酸直至約pH3.0。上述溶液裝入透析管(截除分子量3500，Sigma，美國(guó))，用10升0.001摩爾/升的鹽酸和0.3摩爾/升的氯化鈉溶液透析5天，每8小時(shí)換一次透析液；然后再用10升0.001摩爾/升的鹽酸溶液透析3天，每8小時(shí)換透析液。最后收集透析管內(nèi)的溶液，冷凍干燥得到白色絮狀固體約0.7克。GPC檢測(cè)(純水為流動(dòng)相，紫外210納米吸收檢測(cè))均未發(fā)現(xiàn)小分子雜質(zhì)流出峰，表明合成的HA-DGCDH為高度純化，雜質(zhì)低于儀器檢測(cè)水平。氫譜核磁共振檢測(cè)('H-麗R)(020為溶劑)。HA-DGCDH在S3.23、2.56、2.3卯m出現(xiàn)了三個(gè)新吸收峰。其中S3.23、2.56ppm的新吸收峰分別對(duì)應(yīng)于CH2CH2CH2C(0)NH(^CH2SH禾BCH2CH2CH2C(0)NHCH2(^SH兩個(gè)側(cè)鏈亞甲基氫原子吸收；G^H2CH2C(0)NHCH2CH2SH禾BCH2CH2C《C(0)NHCH2CH2SH兩個(gè)側(cè)鏈亞甲基的氫原子吸收峰則重疊在S2.3ppm左右；CH26ECH2C(0)NHCH2CH2SH鏈亞甲基的氫原子吸收峰則和透明質(zhì)酸的乙?；奶卣骷谆辗逶?3.23ppm附近重疊。以透明質(zhì)酸的乙?；奶卣骷谆辗鍨閮?nèi)標(biāo)，根據(jù)吸收峰的面積計(jì)算出合成的HA-DGDTPDH的側(cè)鏈取代度為52%。采用Shu等人在Biomacromolecules，3，1304，2002中報(bào)道的改進(jìn)Ellman方法檢測(cè)HA-DSCDH的活性巰基含量49.4個(gè)巰基/100個(gè)透明質(zhì)酸二糖重復(fù)單元，基本與氫譜核磁共振檢測(cè)結(jié)果相符。實(shí)施例13.單組分二硫鍵交聯(lián)水凝膠的制備1、二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的制備實(shí)施例3制備的本發(fā)明透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DGDTPDH)0.1克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量O.l摩爾/升的氨氧化鈉直至pH7.4。然后上述溶液倒入25毫升玻璃燒杯，室溫靜置12小時(shí)，溶液黏度逐漸增加并形成凝膠。2、二硫鍵交聯(lián)明膠水凝膠的制備實(shí)施例10制備的本發(fā)明明膠巰基化衍生物(GEL-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量O.l摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。然后上述溶液倒入25毫升玻璃燒杯，室溫靜置12小時(shí)，溶液黏度逐漸增加并形成凝膠。實(shí)施例14.多組分二硫鍵交聯(lián)水凝膠的制備1、二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸-明膠雙組分水凝膠的制備實(shí)施例3制備的本發(fā)明透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DGDTPDH)0.1克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。實(shí)施例10制備的本發(fā)明明膠巰基化衍生物(GEL-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。然后上述兩種溶液同時(shí)倒入50毫升玻璃燒杯，電磁攪拌10分鐘。此后室溫靜置12小時(shí)，溶液黏度逐漸增加并形成凝膠。2、二硫鍵交聯(lián)硫酸軟骨素-明膠雙組分水凝膠的制備實(shí)施例9制備的本發(fā)明硫酸軟骨素巰基化衍生物(CS-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.l摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。實(shí)施例10制備的本發(fā)明明膠巰基化衍生物(GEL-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。然后上述兩種溶液同時(shí)倒入50毫升玻璃燒杯，電磁攪拌10分鐘。此后室溫靜置12小時(shí)，溶液黏度逐漸增加并形成凝膠。3、二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸-硫酸軟骨素-明膠三組分水凝膠的制備實(shí)施例3制備的本發(fā)明透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DGDTPDH)0.1克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。實(shí)施例9制備的本發(fā)明硫酸軟骨素巰基化衍生物(CS-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。實(shí)施例10制備的本發(fā)明明膠巰基化衍生物(GEL-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.O)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。然后上述三種溶液同時(shí)倒入50毫升玻璃燒杯，電磁攪拌10分鐘。此后室溫靜置12小時(shí)，溶液黏度逐漸增加并形成凝膠。實(shí)施例15.單組分聚乙二醇二乙烯砜交聯(lián)水凝膠的制備1、聚乙二醇二乙烯砜交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠的制備實(shí)施例3制備的本發(fā)明透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DGDTPDH)0.1克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。聚乙二醇二乙烯砜(分子量3400，NektarTherapeutics,美國(guó))().1克溶解于2.5毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液。然后上述2.5毫升聚乙二醇二乙烯砜溶液加入到10毫升HA-DGDTPDH溶液,立即電磁攪拌30秒，室溫靜置30分鐘。溶液黏度逐漸增加并形成凝膠。2、聚乙二醇二乙烯砜交聯(lián)硫酸軟骨素水凝膠的制備實(shí)施例9制備的本發(fā)明硫酸軟骨素巰基化衍生物(CS-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。聚乙二醇二乙烯砜(分子量3400，NektarTherapeutics,美國(guó))0.1克溶解于2.5毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液。然后上述2.5毫升聚乙二醇二乙烯砜溶液加入到10毫升CS-DSCDH溶液，立即電磁攪拌30秒，室溫靜置30分鐘。溶液黏度逐漸增加并形成凝膠。3、聚乙二醇二乙烯砜交聯(lián)明膠水凝膠的制備實(shí)施例IO制備的本發(fā)明明膠巰基化衍生物(GEL-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。聚乙二醇二乙烯砜(分子量3400，NektarTherapeutics,美國(guó))0.1克溶解于2.5毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液。然后上述2.5毫升聚乙二醇二乙烯砜溶液加入到10毫升CS-DSCDH溶液，立即電磁攪拌30秒，室溫靜置30分鐘。溶液黏度逐漸增加并形成凝膠。實(shí)施例16.多組分聚乙二醇二丙烯酸酯交聯(lián)水凝膠的制備1、聚乙二醇二丙烯酸酯交聯(lián)透明質(zhì)酸-明膠雙組分水凝膠的制備實(shí)施例3制備的本發(fā)明透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DGDTPDH)0.1克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。實(shí)施例IO制備的本發(fā)明明膠巰基化衍生物(GEL-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。聚乙二醇二丙烯酸酯(分子量3400，NektarTherapeutics,美國(guó))0.2克溶解于5毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液。然后上述10毫升HA-DGDTPDH溶液、10毫升GEL-DSCDH溶液、5毫升聚乙二醇二丙烯酸酯溶液同時(shí)倒入50毫升玻璃燒杯，立即電磁攪拌30秒。室溫靜置30分鐘。溶液黏度逐漸增加并形成凝膠。2、聚乙二醇二丙烯酸酯交聯(lián)硫酸軟骨素-明膠雙組分水凝膠的制備實(shí)施例9制備的本發(fā)明硫酸軟骨素巰基化衍生物(CS-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。實(shí)施例10制備的本發(fā)明明膠巰基化衍生物(GEL-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量O.l摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。聚乙二醇二丙烯酸酯(分子量3400，NektarTherapeutics,美國(guó))0.2克溶解于5毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液。然后上述10毫升CS-DSCDH溶液、10毫升GEL-DSCDH溶液、5毫升聚乙二醇二丙烯酸酯溶液同時(shí)倒入50毫升玻璃燒杯，立即電磁攪拌30秒。室溫靜置30分鐘。溶液黏度逐漸增加并形成凝膠。3、聚乙二醇二丙烯酸酯交聯(lián)透明質(zhì)酸-硫酸軟骨素-明膠三組分水凝膠的制備實(shí)施例3制備的本發(fā)明透明質(zhì)酸巰基化衍生物(HA-DGDTPDH)0.1克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。實(shí)施例9制備的本發(fā)明硫酸軟骨素巰基化衍生物(CS-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。實(shí)施例10制備的本發(fā)明明膠巰基化衍生物(GEL-DSCDH)0.3克溶解于10毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液，在上述溶液中加入適量0.1摩爾/升的氫氧化鈉直至pH7.4。聚乙二醇二丙烯酸酯(分子量3400，NektarTherapeutics,美國(guó))0.3克溶解于7.5毫升0.1摩爾/升的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)得到澄清透明溶液。然后上述10毫升HA-DGDTPDH溶液、10毫升CS-DSCDH溶液、10毫升GEL-DSCDH溶液、7.5毫升聚乙二醇二丙烯酸酯溶液同時(shí)倒入50毫升玻璃燒杯，立即電磁攪拌30秒。室溫靜置30分鐘，溶液黏度逐漸增加并形成凝膠。實(shí)施例17.二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠用于抑制細(xì)胞的粘附按照實(shí)施例13在24孔標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)制備二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠，每孔為1毫升。12小時(shí)后整塊細(xì)胞培養(yǎng)板浸泡在75%的酒精溶液消毒2小時(shí)。此后細(xì)胞培養(yǎng)板用無(wú)菌生理鹽水浸洗三次。每孔加入1毫升細(xì)胞培養(yǎng)液(DMEM，10%牛血清)和2力'個(gè)NIH3T3成纖細(xì)胞。37攝氏度、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)絕大部分成纖細(xì)胞懸浮在二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠表面，不能黏附鋪展；而在空白細(xì)胞培養(yǎng)板孔內(nèi)，成纖細(xì)胞黏附在底部，呈紡綞形。這個(gè)結(jié)果表明二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠可以抑制細(xì)胞的黏附，可用于外科手術(shù)后粘連的預(yù)防和治療。實(shí)施例18.二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸-明膠二組份水凝膠作為細(xì)胞粘附生長(zhǎng)的基質(zhì)按照實(shí)施例14在24孔標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)制備二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸-明膠二組份水凝膠，每孔為1毫升。12小時(shí)后整塊細(xì)胞培養(yǎng)板浸泡在75%的酒精溶液消毒2小時(shí)。此后細(xì)胞培養(yǎng)板用無(wú)菌生理鹽水浸洗三次。每孔加入1毫升細(xì)胞培養(yǎng)液(DMEM，10%牛血清)和2萬(wàn)個(gè)NIH3T3成纖細(xì)胞。37攝氏度、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸-明膠二組份水凝膠表面的黏附鋪展與空白細(xì)胞培養(yǎng)板相似，細(xì)胞呈紡錘形。這個(gè)結(jié)果表明二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸-明膠二組份水凝膠是細(xì)胞粘附生長(zhǎng)的良好基質(zhì)。實(shí)施例19.聚乙二醇二乙烯砜交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠用于抑制細(xì)胞的粘附按照實(shí)施例15在24孔標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)制備聚乙二醇二乙烯砜交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠，每孔為l毫升。12小時(shí)后整塊細(xì)胞培養(yǎng)板浸泡在75%的酒精溶液消毒2小時(shí)。此后細(xì)胞培養(yǎng)板用無(wú)菌生理鹽水浸洗三次。每孔加入1毫升細(xì)胞培養(yǎng)液(DMEM，10%牛血清)和2萬(wàn)個(gè)NIH3T3成纖細(xì)胞。37攝氏度、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)絕大部分成纖細(xì)胞懸浮在聚乙二醇二乙烯砜交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠，不能黏附鋪展；而在空白細(xì)胞培養(yǎng)板孔內(nèi)，成纖細(xì)胞黏附在底部，呈紡錘形。這個(gè)結(jié)果表明聚乙二醇二乙烯砜交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠可以抑制細(xì)胞的黏附。實(shí)施例20.聚乙二醇二丙烯酸酯交聯(lián)透明質(zhì)酸-明膠雙組分水凝膠作為細(xì)胞粘附生長(zhǎng)的基質(zhì)按照實(shí)施例16在24孔標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)制備聚乙二醇二丙烯酸酯交聯(lián)透明質(zhì)酸-明膠雙組分水凝膠，每孔為l毫升。12小時(shí)后整塊細(xì)胞培養(yǎng)板浸泡在75%的酒精溶液消毒2小時(shí)。此后細(xì)胞培養(yǎng)板用無(wú)菌生理鹽水浸洗三次。每孔加入l毫升細(xì)胞培養(yǎng)液(DMEM，10%牛血清)和2萬(wàn)個(gè)NIH3T3成纖細(xì)胞。37攝氏度、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在聚乙二醇二丙烯酸酯交聯(lián)透明質(zhì)酸-明膠雙組分水凝膠表面的黏附鋪展與空白細(xì)胞培養(yǎng)板相似，細(xì)胞呈紡錘形(如圖3和圖4所示)。這個(gè)結(jié)果表明二硫鍵交聯(lián)透明質(zhì)酸-明膠二組份水凝膠是細(xì)胞粘附生長(zhǎng)的良好基質(zhì)。權(quán)利要求1、下述通式(I)或(II)的高分子巰基化改性衍生物id="icf0001"file="A2006101194140002C1.gif"wi="132"he="26"top="37"left="33"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中R1和R2是亞烷基、取代亞烷基、芳香基或聚醚基；P是側(cè)鏈含有羧基的高分子化合物殘基，所述高分子巰基化改性衍生物的分子量為1000到500萬(wàn)。2、按照權(quán)利要求l所述的通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物，其特征在于，所述的側(cè)鏈含有羧基的高分子化合物包括多糖、蛋白質(zhì)以及合成高分子。3、按照權(quán)利要求2所述的通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物，其特征在于，所述的多糖包括硫酸軟骨素、皮膚素、肝素、類(lèi)肝素、海藻酸、透明質(zhì)酸、硫酸皮膚素、果膠、羧甲基纖維素、羧甲基殼聚糖及其鹽。4、按照權(quán)利要求2所述的通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物，其特征在于，所述的合成高分子包括聚丙烯酸、聚天冬氨酸、聚酒石酸、聚谷氨酸、聚富馬酸及其鹽。5、按照權(quán)利要求2所述的通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物，其特征在于，所述的蛋白質(zhì)包括膠原蛋白、堿性明膠蛋白、酸性明膠蛋白、堿性基因重組明膠蛋白、酸性基因重組明膠蛋白、彈性蛋白、核心蛋白多糖層粘連蛋白纖維結(jié)合蛋白。6、按照權(quán)利要求l所述的通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物，其中R,和K是亞烷基。7、按照權(quán)利要求6所述的通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物，其中R'和R2都是碳原子數(shù)1到8的亞垸基。8、一種或一種以上如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的高分子巰基化改性衍生物通過(guò)二硫鍵交聯(lián)生成的高分子交聯(lián)材料。9、一種或一種以上如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的高分子巰基化改性衍生物通過(guò)與至少含有兩個(gè)相同或不相同巰基反應(yīng)活性官能團(tuán)交聯(lián)劑交聯(lián)生成的高分子交聯(lián)材料。10、按照權(quán)利要求9所述的高分子交聯(lián)材料，其特征在于，所述的巰基反應(yīng)活性官能團(tuán)交聯(lián)劑包括巰基反應(yīng)活性官能團(tuán)的雙臂、三臂或更多臂的聚乙二醇衍生物，所述的聚乙二醇衍生物的分子量為100到1000000。11、按照權(quán)利要求10所述的高分子交聯(lián)材料，其特征在于，所述的巰基反應(yīng)活性官能團(tuán)包括馬來(lái)酰亞胺、乙烯砜、a，{3不飽和丙烯酸酯、a,e不飽和甲基丙烯酸酯、碘代丙酸酯、溴代丙酸酯、碘代丙酰胺、溴代丙酰胺、二硫代吡咬、N-羥基丁二酰亞胺活化酯。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了通式(I)或(II)的高分子巰基化改性衍生物及其相應(yīng)的二硫鍵交聯(lián)材料和巰基反應(yīng)活性交聯(lián)劑交聯(lián)材料，其中R₁和R₂是亞烷基、取代亞烷基、芳香基、聚醚基等，R₁和R₂可以具有相同或不相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)；P是指?jìng)?cè)鏈含有羧基的高分子化合物殘基，所述高分子巰基化改性衍生物的分子量為1000到500萬(wàn)。本發(fā)明通式(I)或(II)高分子巰基化改性衍生物的側(cè)鏈化學(xué)結(jié)構(gòu)靈活多變、性能可調(diào)，具有制備條件溫和、產(chǎn)率高、改性程度高且可控等許多顯著優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的高分子巰基化改性衍生物的交聯(lián)材料可以用于抑制細(xì)胞的粘附，用作細(xì)胞粘附生長(zhǎng)的基質(zhì)。文檔編號(hào)C08H99/00GK101200504SQ20061011941公開(kāi)日2008年6月18日申請(qǐng)日期2006年12月11日優(yōu)先權(quán)日2006年12月11日發(fā)明者嬋宋,舒曉正申請(qǐng)人:上海百瑞吉生物醫(yī)藥有限公司