專(zhuān)利名稱(chēng)：：羥烷基淀粉與活性物質(zhì)經(jīng)噻唑烷通過(guò)化學(xué)連接制備的偶聯(lián)物的制作方法羥烷基淀粉與活性物質(zhì)經(jīng)瘞唑烷通過(guò)化學(xué)連接制備的偶聯(lián)物本發(fā)明涉及一種制備活性物質(zhì)與羥烷基淀粉的偶聯(lián)物的方法，并涉及活性物質(zhì)與幾烷基淀粉、優(yōu)選羥乙基淀粉的偶聯(lián)物，其中偶聯(lián)物通過(guò)羥烷基淀粉與活性物質(zhì)經(jīng)由具有下式(i)、式(r)或式(r，)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接而制備(r)其中RpR2、R2,、R3、R3,和R4獨(dú)立地選自氬、任選地適宜:f又代的直鏈、環(huán)狀和/或支鏈烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳烷基,優(yōu)選氫。WO03/031581A2公開(kāi)了一種將聚合物衍生物與在N-末端具有半胱氨酸或組氨酸殘基的多肽偶聯(lián)的方法，其中所述方法包括提供一種在N-末端具有半胱氨酸或組氨酸殘基的多肽，提供一種硫酯-封端的聚合物，該聚合物包含一種水溶性且非肽的聚合物主鏈，優(yōu)選聚乙二醇聚合物，將該聚合物衍生物與多肽反應(yīng)。就聚合物而言，采用聚(亞烷基二醇)、乙二醇與丙二醇的共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚(a羥基酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉、聚(N-丙烯酰基嗎啡)、聚丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、多糖，以及其共聚物、三元聚合物和其混合物。所有明確公開(kāi)的聚合物都是聚乙二醇聚合物。盡管單官能的PEG分子的偶合方法和應(yīng)用取得了進(jìn)展，但是PEG化藥物的共同缺點(diǎn)是還不十分清楚PEG作為非天然聚合物的代謝途徑。此外，用于與肟、腙及噻唑烷鍵接形成肽的枝狀物的通常途徑可從J.AmChemSoc.1995，117,3893-3899獲知。其中披露了作為積木式單元的未保護(hù)肽以及醛與弱酸之間的選擇性連接。WO99/07719Al公開(kāi)了含硫羥基和硒羥基(seleonol)化合物的藥物前體和偶聯(lián)物及其應(yīng)用方法。除幾種其它化合物外，披露了由L-半胱氨酸乙酯與一種單糖一D-核糖的反應(yīng)制備的藥物前體，所述藥物前體包含噻唑烷環(huán)。關(guān)于該單糖的通式，披露了(CHOH)nCH2OH，n=l-5。與瘞唑烷環(huán)形成相關(guān)的內(nèi)容中甚至沒(méi)有披露二糖，更不用說(shuō)高分子聚合化合物了，如淀粉，特別是羥烷基淀粉。由此，本發(fā)明的目標(biāo)是提供一種通過(guò)共價(jià)鍵接形成的活性物質(zhì)與聚合物的新型偶聯(lián)物，其中不使用聚亞烷基二醇、特別是聚乙二醇作為聚合物。因而，本發(fā)明的另一目標(biāo)是提供制備這些偶聯(lián)物的方法。這些問(wèn)題的解決方案是一種用于制備活性物質(zhì)與羥烷基淀粉的偶聯(lián)物的方法，其中活性物質(zhì)與羥烷基淀粉經(jīng)由具有以下式(I)、式(r)或式(11，)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>其中R,、R2、R2,、R3、R3，和R4獨(dú)立地選自氫、任選地適宜取代的直鏈、環(huán)狀和/或支鏈烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳烷基，優(yōu)選氫，所述方法包4舌(A)使羥烷基淀粉或其包含醛基、酮基或半縮醛基的衍生物的醛基、酮基或半縮醛基團(tuán)與活性物質(zhì)或其包含如下a-SH-(3氨基基團(tuán)的衍生物的a-SH-P氨基基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式u)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；或者與活性物質(zhì)或其包含如下a-SH-(3氨基基團(tuán)的衍生物的a-SH-13氨基基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式(r)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；或者與活性物質(zhì)或其包含如下ot-SH-P氨基基團(tuán)的衍生物的a-SH-P氨基基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式(r，)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；其中R!、R2、R2,、R3、R3,和R4如上定義；或者(B)使活性物質(zhì)或其包含醛基、酮基或半縮醛基的衍生物的醛基、酮基或半縮醛基團(tuán)與包含下述a-SH-P氨基基團(tuán)的羥烷基淀粉衍生物的cc-SH-P氨基基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式(I)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；或者與包含下述a-SH-P氨基基團(tuán)的羥烷基淀粉衍生物的a-SH-P氨基基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式(r)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；或者與包含下述a-SH-(3氨基基團(tuán)的羥烷基淀粉衍生物的a-SH-(3氨基基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式(r，)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；其中R"R2、R2，、R3、113,和114如上定義。因而，本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"a-SH-p氨基基團(tuán)，，是指如下亞乙基，其中任選保護(hù)的SH基團(tuán)與一個(gè)碳原子鍵合，任選保護(hù)的伯或仲氨基基團(tuán)與相鄰碳原子鍵合。以上結(jié)構(gòu)式中一端未示出殘基的鍵是連接羥烷基淀粉或活性物質(zhì)的鍵。本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"烷基"優(yōu)選具有1-20、更優(yōu)選1-10、特別優(yōu)選l-4個(gè)碳原子的烷基，除非后文有不同定義。本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"芳基"優(yōu)選具有6-20、更優(yōu)選6-14、特別優(yōu)選6個(gè)碳原子的芳基，除非后文有不同定義。本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"雜芳基"優(yōu)選具有6-20、更優(yōu)選6-14、特別優(yōu)選6個(gè)碳原子且其中至少一個(gè)、優(yōu)選1-3個(gè)、特別優(yōu)選1個(gè)碳原子被雜原子如S、N和/或O替代的雜芳基，除非后文有不同定義。本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"芳烷基"優(yōu)選通過(guò)烷基基團(tuán)與化合物的其余部分鍵合的芳基，除非后文有不同定義。本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"烷芳基"優(yōu)選通過(guò)芳基基團(tuán)與化合物的其余部分鍵合的烷基，除非后文有不同定義。本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"雜芳烷基"優(yōu)選通過(guò)烷基基團(tuán)與化合物的其余部分鍵合的雜芳基，除非后文有不同定義。本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"任選地適宜取代"優(yōu)選指存在1-10個(gè)、更優(yōu)選l-4個(gè)、特別優(yōu)選l個(gè)取代基，除非后文有不同定義。本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"活性物質(zhì)"涉及一種可以影響生物體的任何生理或生物化學(xué)性質(zhì)的物質(zhì)，生物體包括但不限于病毒、細(xì)菌、真菌、植物、動(dòng)物和人。特別地，本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"活性物質(zhì)"涉及用于診斷、醫(yī)治、緩解、治療和預(yù)防人或動(dòng)物疾病的物質(zhì)，或者用于增強(qiáng)人或動(dòng)物的身體或精神舒適感的物質(zhì)。活性物質(zhì)的例子包括但不限于肽、蛋白質(zhì)、酶、小分子藥物、染料、脂類(lèi)、核苷、寡核普酸、多核苷酸、核酸、細(xì)胞、病毒、脂質(zhì)體、微粒和膠束。蛋白質(zhì)的例子包括但不限于紅細(xì)胞生成素(EPO)，如重組人EPO(rhEPO);集落刺激因子(CSF),如G-CSF,如重組人G-CSF(rhG-CSF);ot-干擾素(IFNa)，(3-干擾素(IFNP)或Y畫(huà)干擾素(IFNy)，如重組人IFNa或IFNP(rhIFNcc或rhIFN|3);白介素，例如IL-1至IL-8，如IL-2或IL-3,如重組人IL-2或IL-3(rhlL-2或rhlL-3);血清蛋白如凝結(jié)因子II-XIII,如因子VIII;a1-抗胰蛋白酶(A1AT);激活蛋白質(zhì)C(APC);纖溶酶原活化劑，如組織型纖溶酶原活化劑(tPA),如人組織纖溶酶原活化劑(hTPA);ATIII如重組人ATIII(rhATIII);肌紅蛋白質(zhì)；白蛋白，如牛血清白蛋白(BSA);生長(zhǎng)因子，如表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、血小板生長(zhǎng)因子(PDGF)、纖維原細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、腦衍生生長(zhǎng)因子(BDGF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、B-細(xì)胞生長(zhǎng)因子(BCGF)、腦衍生神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)因子(BDNF)、睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子如TGFcc或TGFP;BMP(骨形態(tài)形成性蛋白)；生長(zhǎng)激素，如人生長(zhǎng)激素；腫瘤壞死因子如TNFcc或TNFI3;生長(zhǎng)抑制素(月太)；生長(zhǎng)素(somatotropine);生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素(somatomedines);血紅蛋白；激素或前激素，如胰島素、促性腺激素、促黑色素細(xì)胞激素(a-MSH)、曲普瑞林、下丘腦激素如血管加壓素(ADH)和催產(chǎn)素以及釋放激素和釋放抑制激素、曱狀旁腺激素、曱狀腺激素如甲狀腺素、促曱狀腺素、促甲狀腺素釋放素、催乳素、降鈣素、胰高血糖素、胰高血糖素樣肽(GLP-1、GLP-2等)、exendine如exendin-4、來(lái)普汀、加壓素、胃泌素、胰泌素、整聯(lián)蛋白質(zhì)、糖蛋白質(zhì)激素(如LH、FSH等)、melanoside刺激激素、脂蛋白和載脂蛋白^口apo-B、apo國(guó)E、apo-La、免疫J求蛋白^口IgG、IgE、IgM、IgA、IgD及其片段、水蛭素、組織途徑抑制劑、植物蛋白如凝集素或蓖麻毒、蜂毒、蛇毒、抗毒素、E抗原、a-蛋白水解酶抑制劑、豚草變應(yīng)原、黑素、低聚賴(lài)氨酸(oligolysine)蛋白、RGD蛋白或者這些蛋白之一的任選的相應(yīng)受體；或者這些蛋白或受體中任一種的功能性衍生物或片段。在特別優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，活性物質(zhì)為EPO、特別是下述氧化的EPO。酶的例子包括但不限于碳水化合物特異性酶、蛋白水解酶、氧化酶、氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、裂合酶、異構(gòu)酶、激酶和連接酶。具體的非限定性例子為天冬酰胺酶、精氨酸酶、精氨酸脫氨基酶、腺苷脫氨基酶、谷氨酰胺酶、谷氨酰胺酶-天冬酰胺酶、苯丙氨酸、色氨酸酶、酪氨酸酶、超氧化歧化酶(SOD)、內(nèi)毒素酶(endotoxinase)、過(guò)氧化氫酶、過(guò)氧化物酶、血管舒緩素、胰蛋白酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、脂肪酶、尿酸酶、腺苷二磷酸酶、嘌呤核苷磷酸化酶、膽紅素氧化酶、葡萄糖氧化酶、glucodase、葡糖酸氧化酶、半乳糖苷酶、葡糖腦苷脂酶、葡糖趁酸糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、組織因子、鏈激酶、尿激酶、MAP-激酶、DNA酶、RNA酶、乳鐵蛋白，及其功能性衍生物或片段。根據(jù)本發(fā)明的一種可替代方案，活性物質(zhì)是小分子藥物、肽和/或蛋白質(zhì)。其中，可明確提及以下蛋白質(zhì)紅細(xì)胞生成素(EPO),如重組人EPO(rhEPO);集落刺激因子(CSF),如G-CSF，如重組人G-CSF(rhG-CSF);a-干擾素(IFNct)，(3-干擾素(IFNP)或Y-干擾素(IFNy)，如重組人IFNoc或IFNP(rhIFNa或rhIFNP);血清蛋白如凝結(jié)因子II-XIII,如因子VIII、因子VIII、因子IX;al-抗胰蛋白酶(A1AT);激活蛋白質(zhì)C(APC);纖溶酶原活化劑，如組織型纖溶酶原激活物(tPA),如人組織纖溶酶原激活物(hTPA);ATin如重組人ATIII(rhATIII)。肽的例子包括ACTH、腎上腺髓質(zhì)素、淀粉質(zhì)樣P-蛋白、血管緊張素I、血管緊張素II、心房鈉尿排泄肽(ANP)、抗體片段、緩激肽、大腦促尿鈉排泄肽P-型(BNP)、降釣素、促腎上腺皮質(zhì)素釋放因子(CRF)、內(nèi)啡肽、內(nèi)皮素、腦啡肽、胃泌素、胃泌素關(guān)聯(lián)肽、胃泌素抑制多肽(GIP)、胃泌素釋放肽(GRP)、胰高血糖素，類(lèi)胰高血糖素樣肽、生長(zhǎng)激素釋放因子(GRF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、胰島素、促性腺素釋放激素(LH-RH、GnRH)、神經(jīng)激肽、催產(chǎn)素、副甲狀旁腺激素、促生長(zhǎng)激素抑制素、物質(zhì)P、促曱狀腺激素釋放激素(TRH)、作用于血管活性腸肽(VIP)以及血管加壓素。活性物質(zhì)優(yōu)選自抗生素、抗抑郁藥、抗糖尿病藥、抗利尿藥、抗膽堿能藥、抗心率不齊藥、止吐藥、鎮(zhèn)咳藥、抗癲癇藥、抗組胺藥、抗真菌藥、抗交感神經(jīng)張力藥(antisympathotonics)、抗血4全藥、雄:激素、抗雄激素、雌激素、抗雌激素、抗骨質(zhì)疏松藥、抗腫瘤劑、血管擴(kuò)張劑、其它抗高血壓劑、退熱劑、止痛劑、抗炎劑、P-阻滯劑、細(xì)胞抑制劑、免疫抑制劑以及維生素?；钚晕镔|(zhì)的一些其它的非限制性的例子為沙丁胺醇、阿侖膦酸鹽、阿米卡星(amikazin)、氨比西林、阿莫西林、兩性霉素B、阿替洛爾、硫唑噪呤、頭孢克洛、頭孢羥胺節(jié)、頭孢唑?qū)ⅰ㈩^孢他啶、頭孢三溱、西司他丁、西米替丁、環(huán)丙沙星、可樂(lè)定、多粘菌素E、替可克肽、環(huán)絲氨酸、柔紅霉素、多柔比星、去氨加壓素、雙氫麥角胺、多巴酚丁胺、多巴胺、麻黃素、腎上腺素、s-氨基己酸、麥角新堿、艾司洛爾、法莫替丁、氟卡尼、葉酸、氟胞嘧啶、呋塞米、更昔洛韋、慶大霉素、高血糖素、肼屈嗪(hydrazaline)、亞胺培南、異丙腎上腺素、氯胺酮、碘塞羅寧、LHRH、美帕曲星(merpatricin)、間羥胺、甲基多巴、曱氧氯普胺、美托洛爾、美西律、絲裂霉素、新霉素(neomicin)、奈替米星、尼莫地平、制霉菌素、奧曲肽、縮宮素、帕米膦酸鹽、戊雙脒、芐胺唑啉、去氧腎上腺素、普魯卡因胺、普魯卡因、普萘洛爾、利托君、索他洛爾、替考拉寧、叔丁喘寧、維生素B1、替魯膦酸鹽、妥拉唑啉、曱氧芐啶、氨丁三醇、泰洛星、萬(wàn)古霉素、血管加壓素和長(zhǎng)春堿。根據(jù)一種替代方案，也可嘗試將利福霉素、四環(huán)素、spectomycine、鏈霉素或紅霉素用作活性物質(zhì)。寡核苷酸的例子為核酸適體、DNA、RNA、PNA或其衍生物。本發(fā)明文中，術(shù)語(yǔ)"羥烷基淀粉"(HAS)是指被至少一個(gè)羥烷基基團(tuán)取代的淀粉衍生物。本發(fā)明的優(yōu)選羥烷基淀粉具有式(II)的結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>其中R，、R"和R"，獨(dú)立地為氫、直鏈或支鏈羥烷基，或基團(tuán)—[(CR'R2)mO〗n[CR3R4]o—OH其中，R1、R2、113和114獨(dú)立地選自氫和烷基，優(yōu)選氫和甲基，m為2-4,其中m個(gè)基團(tuán)CR1112中的殘基R1和R"可以相同或不同；n為0-20，優(yōu)選0-4;o為0-20,優(yōu)選2-4，其中當(dāng)n-0時(shí)，o不為0,并且其中o個(gè)基團(tuán)CRR"中的殘基R和R"可以相同或不同，其中殘基HAS"結(jié)合末端葡萄糖片段構(gòu)成HAS分子，即式(II)表示一種HAS分子，其末端碳水化合物片段被明確示出，該淀粉分子的其余部分為HAS"。在式(II)中，淀粉分子的還原性末端以未氧化形式示出，HAS的終端糖單元以半縮醛基的形式示出，取決于例如溶劑，該半縮醛基的形式可能與醛的形式平衡。本發(fā)明文中所用縮寫(xiě)HAS"是指在不包括HAS分子還原性末端的終端糖單元的HAS分子。本發(fā)明中所用術(shù)語(yǔ)羥烷基不限于這類(lèi)化合物其中終端碳水化合物片段包含為簡(jiǎn)便起見(jiàn)而在式(II)中顯示的羥烷基R，、R"和/或R，"，還指這類(lèi)化合物其中終端碳水化合物片段和/或淀粉分子其余部分HAS，，中存在于任意位置的至少一個(gè)羥烷基基團(tuán)被羥烷基基團(tuán)R'、R，'或R"'取代。包含兩個(gè)或多個(gè)不同羥烷基基團(tuán)的羥烷基淀粉也是可以的。該包含在HAS中的至少一個(gè)羥烷基基團(tuán)可以包含一個(gè)或多個(gè)，特別是兩個(gè)或多個(gè)羥基。根據(jù)一種優(yōu)選的具體實(shí)施方式，該包含在HAS中的至少一個(gè)羥烷基基團(tuán)包含一個(gè)羥基。"羥烷基淀粉"還包括其中的烷基基團(tuán)被單取代或多取代的衍生物。本文中，優(yōu)選烷基被卣素、尤其是氟取代，或者被芳基取代。此外，羥烷基的幾基可以被酯化或醚化。另外，除了烷基，還可以采用直鏈或支鏈的取代或未取代的亞烷基。羥烷基淀粉是淀粉的醚衍生物。除了所述的醚衍生物，其它淀粉衍生物也可以用在本發(fā)明中。例如，包含酯化的羥基的衍生物也可用。這些衍生物可以是例如具有2-12個(gè)碳原子的未取代的一元或二元羧酸的衍生物或其取代衍生物。具有2-6個(gè)碳原子的未取代的一元羧酸的衍生物特別有用，特別是乙酸衍生物。本文中，優(yōu)選乙酰基淀粉、丁?；矸酆捅；矸?。此外，優(yōu)選具有2-6個(gè)碳原子的未取代二元羧酸的衍生物。在二元羧酸衍生物的情形中，有利的是二元羧酸的第二個(gè)羧基也被酯化。此外，二元羧酸的單烷基酯衍生物在本發(fā)明文中也是適宜的。對(duì)于取代的一元或二元羧酸，取代基優(yōu)選與上述對(duì)取代的烷基殘基所述的取代基相同。淀粉酯化的技術(shù)已為本領(lǐng)域所知(例如參見(jiàn)KlemmD.等人，《綜合纖維素化學(xué)》(ComprehensiveCelluloseChemistry)，第2巻,1998,Whiley-VCH,Weinheim，紐約，特別是第4.4章,纖維素的酯化(EsterificationofCellulose)(ISBN3-527-29489-9))。根據(jù)本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式，采用根據(jù)上述式(II)的羥烷基淀粉。包含在HAS，，中的其它糖環(huán)結(jié)構(gòu)可以與明確表述的糖環(huán)相同或不同，但它們?nèi)鄙龠€原性末端。關(guān)于式(II)中的殘基R，、R，，和R，"，沒(méi)有特殊限制。根據(jù)一種優(yōu)選的具體實(shí)施方式，R，、R，，和R，，，在各個(gè)烷基殘基中獨(dú)立地為氫或具有2-10個(gè)碳原子的羥烷基、羥芳烷基或羥烷芳基。優(yōu)選氫和具有2-10個(gè)碳原子氫的羥烷基。更為優(yōu)選地，羥烷基具有2-6個(gè)碳原子，更優(yōu)選2-4個(gè)碳原子，甚為優(yōu)選2-3個(gè)碳原子。在一種優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，羥烷基淀粉為羥乙基淀粉，其中R，、R"和R，"獨(dú)28立地為氫或基團(tuán)(CH2CH20)n-H,其中n為整數(shù)，優(yōu)選0、1、2、3、4、5或6。因而"羥烷基淀粉"優(yōu)選包含羥乙基淀粉、羥丙基淀粉和羥丁基淀粉，其中特別優(yōu)選羥乙基淀粉和羥丙基淀粉，最優(yōu)選羥乙基淀粉。烷基、芳烷基和/或烷芳基可以為直鏈或支鏈的，并可被適宜取代。因而，本發(fā)明還涉及上述的方法和偶聯(lián)物，其中R，、R"和R，"獨(dú)立地為氫或具有2-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈羥烷基。由此，R，、R，，和R，"優(yōu)選為H;羥己基；羥戊基；羥丁基；羥丙基，如2-羥丙基、3-羥丙基、2-羥基異丙基；羥乙基，如2-羥乙基；特別優(yōu)選氬和2-羥乙基基團(tuán)。因而，本發(fā)明還涉及上述的方法和偶聯(lián)物，其中R，、R，，和R"，獨(dú)立地為氬或2-羥乙基；特別優(yōu)選殘基R，、R"和R"，中至少一個(gè)為2-羥乙基基團(tuán)的具體實(shí)施方式。對(duì)于本發(fā)明的所有實(shí)施方案，羥乙基淀粉(HES)是最優(yōu)選的。因而，本發(fā)明還涉及上述的方法和偶聯(lián)物，其中聚合物為羥乙基淀粉且聚合物衍生物為羥乙基淀粉衍生物。羥乙基淀粉(HES)是天然存在的支鏈淀粉的衍生物，在體內(nèi)被a-淀粉酶水解。HES是碳水化合物聚合物支鏈淀粉被取代的衍生物，所述支鏈淀粉在玉米淀粉中的存在濃度高達(dá)95重量％。HES表現(xiàn)出有利的生物學(xué)性質(zhì)并且可被用作血容量替代劑，并且在臨床上可用于血液稀釋療法(Sommermeyer等人，1987,Krankenhauspharmazie，8(8),271-278;和Weidler等人，1991，Arzneim.-Forschung/DrugRes.,41，494-498)。支鏈淀粉由多個(gè)葡萄糖部分組成，其中在主鏈中存在a-1,4-糖苷鍵并且發(fā)現(xiàn)在其分支部位存在oc-l,6-糖苷鍵。這種分子的理化性質(zhì)主要是由糖苷鍵的類(lèi)型確定的。由于該有缺口的a-l,4-糖苷鍵，產(chǎn)生了每圏具有約6個(gè)葡萄糖-單體的螺旋結(jié)構(gòu)?？梢酝ㄟ^(guò)取代來(lái)改變所述聚合物的理化性質(zhì)以及生物化學(xué)性質(zhì)?？梢酝ㄟ^(guò)堿性羥乙基化來(lái)實(shí)現(xiàn)羥乙基的引入。通過(guò)調(diào)整反應(yīng)條件，能夠開(kāi)發(fā)未取代的葡萄糖單體中各個(gè)羥基基團(tuán)對(duì)應(yīng)羥乙基化反應(yīng)的不同反應(yīng)性。由于這種事實(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠在有限程度上影響取代模式。HES的主要通過(guò)分子量分布和取代度來(lái)表征。描述取代度時(shí)有兩種可能的方式1.取代度可以相對(duì)地描述成被取代的葡萄糖單體相對(duì)于所有葡萄糖部分的比例。2.取代度可以摩爾取代度來(lái)描述，其中描述每個(gè)葡萄糖部分中的羥乙基數(shù)。在本發(fā)明文中，表示為DS的取代度涉及上述摩爾取代度(還可參見(jiàn)以上引用的Sommermeyer等人，1987，Krankenhauspharmazie,8(8)，271-278;特別是第273頁(yè))。HES溶液以多分散的組合物形式存在，其中各分子在聚合度、分支位點(diǎn)的數(shù)目和模式以及取代模式方面彼此有差異。因此，HES是具有不同分子量的化合物的混合物。所以，借助于統(tǒng)計(jì)方法用平均分子量來(lái)對(duì)特定HES溶液進(jìn)行測(cè)定。在本文中，Mn以取決于分子數(shù)的算術(shù)平均值計(jì)算?？商娲兀琈w(或MW)—重均分子量，代表取決于HES質(zhì)量的單位。優(yōu)選地，本發(fā)明所用羥烷基淀粉具有1-300kD的平均分子量(重均)。羥乙基淀粉可進(jìn)一步呈現(xiàn)0.1-3的優(yōu)選摩爾取代度，優(yōu)選0.1-2，更優(yōu)選0.1-0.9或0.4-2,優(yōu)選0.4-1.3,以及羥乙基基團(tuán)的C2:Q取代比優(yōu)選在2-20范圍內(nèi)。本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"平均分子量"是指根據(jù)Sommermeyer等人，1987，Krankenhauspharmazie,8(8)，271-278;和Weidler等人，1991，Arzneim,ForschungIDrugRes.,41，494-498中所述的LALLS-(低角度激光散射(lowanglelaserlightscattering))-GPC法測(cè)定的重量。此夕卜，對(duì)于10kD及更小的分子量，還用一種之前已經(jīng)用LALLS-GPC定性過(guò)的標(biāo)樣進(jìn)行校準(zhǔn)。根據(jù)本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方案，所用羥乙基淀粉的平均分子量為1-300kD，更優(yōu)選2-200kD，進(jìn)一步優(yōu)選10-150或者4-130kD，更優(yōu)選10-100kD。具有約1-300kD，優(yōu)選10-100kD平均分子量的HES的例子為具有0.1-3摩爾取代度的HES,優(yōu)選0.4-1.3,例如0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2或1.3,優(yōu)選0.7-1.3,例如0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2或1.3。具有約130kD平均分子量的HES的例子為來(lái)自Fresenius的Voluven⑧。Voluven⑧是一種人造膠體，用于例如治療和預(yù)防血容量減少癥時(shí)治療適應(yīng)癥中所用的體積替代。Voluven的特征為平均分子量為130,000+/-20，000D;摩爾取代度為0.4且C2:C6之比為約9:1。本發(fā)明還涉及上述的方法和偶聯(lián)物，其中羥烷基淀粉為具有10-150kD、優(yōu)選10-100kD平均分子量的羥乙基淀粉。平均分子量的優(yōu)選范圍為，例如，10-150kD、或10-130kD、或30-130kD、或50-130kD、或70-130kD、或100-130kD、或10-100kD、或4-100kD、或10-100kD、或12-100kD、或18-100kD、或50-100kD、或4-70kD、或10-70kD、或12-70kD、或18-70kD、或50-70kD、或4-50kD、或10-50kD、或12-50kD、或18-50kD、或4-18kD、或10-18kD、或12-18kD、或4-12kD、或10-12kD或4-10kD。根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的具體實(shí)施方式，所用羥乙基淀粉的平均分子量在高于4kD且低于150kD的范圍內(nèi)，例如約10kD，或者在9-10kD、或10-11kD、或9-llkD的范圍內(nèi)；或者約12kD,或在11-12kD、或12-13kD、或11-13kD的范圍內(nèi)；或者約15kD，或在14-15或15-16kD的范圍內(nèi)；或者約18kD,或在17-18kD、或18-19kD、或17-19kD的范圍內(nèi)；或者約50kD,或在49-50kD、或50-51kD、或49-51kD的范圍內(nèi)；或者約56kD，或在55-56kD、或56-57kD的范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明另一種特別優(yōu)選的具體實(shí)施方式，所用羥乙基淀粉的平均分子量在高于60kD且高達(dá)130kD的范圍內(nèi)，例如約70kD,或在65-75kD的范圍內(nèi)；或者約80kD，或在75-85kD的范圍內(nèi)；或者約90kD，或在85-95kD的范圍內(nèi)；或者約100kD,或在95-105kD的范圍內(nèi)；或者約110kD,或在105-115kD的范圍內(nèi)；或者約120kD,或在115-125kD的范圍內(nèi)；或者約130kD，或在125-135kD的范圍內(nèi)。就摩爾取代度(DS)的上限而言，至高達(dá)3.0的值都是可以的，如0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1,4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2.0,優(yōu)選2.0以下的值，更優(yōu)選1.5以下的值，更進(jìn)一步優(yōu)選1.3以下的值，例如0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2或1.3。因而，摩爾取代度的優(yōu)選范圍為0.1-2、或0.1-1.5、或0.1-1.3、或0.1-1.0、或0.1-0.9、或0.1-0.8。摩爾取代度的更優(yōu)選范圍為0.2-2、或0.2-1.5、或0.2-1.0、或0.2-0.9、或0.2-0.8。摩爾取代度的更優(yōu)選范圍為0.3-2、或0.3-1.5、或0.3-1.0、或0.3-0.9、或0.3-0.8。摩爾耳又代度的更進(jìn)一步優(yōu)選范圍為0.4-2、或0.4-1.5、或0.4-1.0、或0.4-0.9、或0.4-0.8。就摩爾取代度(DS)而言，DS優(yōu)選至少O.l，更優(yōu)選至少0.2、更為優(yōu)選至少0.4且更為優(yōu)選至少0.7。DS的優(yōu)選范圍為0.1-3，優(yōu)選0.1-2，更優(yōu)選0.1-1.3，更優(yōu)選0.1-0.9、更優(yōu)選0.1-0.8，更優(yōu)選0.2-0.8,更優(yōu)選0.3-0.8,甚為優(yōu)選0.4-0.8，還優(yōu)選0.1-0.7，更優(yōu)選0.2-0.7,更優(yōu)選0.3-0.7且更優(yōu)選0.4-0.7。特別優(yōu)選的DS值為，例如，0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.2或1.3，更優(yōu)選0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8,進(jìn)一步優(yōu)選0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8，更進(jìn)一步優(yōu)選0.4、0.5、0.6、0.7或0.8，并且例如特別優(yōu)選0,4或0.5以及0.7或0.8。本發(fā)明文中，摩爾取代度的給定值如1.3可以是精確值或可以理解為在1,25-1.34范圍內(nèi)；或者1.0可以是精確值或可以理解為在0.95-1.04范圍內(nèi)；或者0.9可以是精確值或可以理解為在0.85-0.94范圍內(nèi)；或者0.8可以是精確值或可以理解為在0.75-0.84范圍內(nèi)。因而，例如，給定值0.1可以是精確值0.1或在0.05-0.14范圍內(nèi)；給定值0.4可以是精確值0.4或在0.35-0.44范圍內(nèi)；或者給定值0.7可以是精確值0.7或在0.65-0.74范圍內(nèi)。幾烷基淀粉，優(yōu)選幾乙基淀粉，分子量與其摩爾取代度DS的特別優(yōu)選的組合為，例如，10kD與0.4、或10kD與0.7、或12kD與0.4、或12kD與0.7、或15kD與0.4、或15kD與0.7、或18kD與0.4、或18kD與0.7、或50kD與0.4、或50kD與0.7、或56kD與0.4、或56kD與0.7、或70kD與0.4、或70kD與0.7、或100kD與0.4、或100kD與0.7、或130kD與0.4、或130kD與0.7。就C2:Ce取代比而言，所述取代比優(yōu)選在2-20范圍內(nèi)，更優(yōu)選在2-15范圍內(nèi)，更為優(yōu)選在3-12范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式，還可以采用具有不同平均分子量和/或不同摩爾取代度和/或不同C2:C6取代比的羥乙基淀粉的混合物。因此，可以采用具有不同平均分子量和不同摩爾取代度以及不同C2:C6取代比、或者具有不同平均分子量和不同摩爾取代度以及相同或大致相同C2:C6取代比、或者具有不同平均分子量和相同或大致相同摩爾取代度以及不同C2:Q取代比、或者具有相同或大致相同平均分子量和不同摩爾取代度以及不同C2:Q取代比、或者具有不同平均分子量和相同或大致相同摩爾取代度以及相同或大致相同C2:Q取代比、或者具有相同或大致相同平均分子量和不同摩爾取代度以及相同或大致相同C2:C6取代比、或者具有相同或大致相同平均分子量和相同或大致相同摩爾取代度以及不同C2:Q取代比、或者具有大致相同平均分子量和大致相同摩爾取代度以及大致相同C2:C6取代比的羥乙基淀粉的混合物。在根據(jù)本發(fā)明的不同偶聯(lián)物和/或不同方法中，可以采用不同的羥烷基淀粉，優(yōu)選不同的羥乙基淀粉和/或不同的羥烷基淀粉混合物，優(yōu)選不同的羥乙基淀粉混合物。在一種優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，羥烷基淀粉或其衍生物包含1-100，優(yōu)選1-15,特別優(yōu)選l個(gè)醛基、酮基和/或半縮醛基；或者其中羥烷基淀粉或其衍生物包含1-100,優(yōu)選1-15,特別優(yōu)選1個(gè)a-SH-P氨基基團(tuán)。在另一種優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，活性物質(zhì)包含1-15,優(yōu)選1-8,特別優(yōu)選1個(gè)醛基、酮基和/或半縮醛基；或者其中活性物質(zhì)包含1-15,優(yōu)選1-8，特別優(yōu)選1個(gè)a-SH-P氨基基團(tuán)。該包含至少一個(gè)醛基、酮基、半縮醛基或ct-SH-(3氨基的羥烷基淀粉，優(yōu)選羥乙基淀粉，可由任何適宜的方法提供。在一種優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，包含所述醛基、酮基、半縮醛基或所述a-SH-(3氨基的羥烷基淀粉衍生物由以下方法獲得，該方法包括(a)(1)通過(guò)開(kāi)環(huán)氧化反應(yīng)將至少一個(gè)醛基引入羥烷基淀粉，或者(a)(2)使羥烷基淀粉與至少一種至少雙官能的化合物反應(yīng)，所述化合物包含兩個(gè)官能團(tuán)M!和Q,—個(gè)官能團(tuán)Mi與羥烷基淀粉反應(yīng)，且另一個(gè)官能團(tuán)Q為(i)醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-l3氨基；或(ii)化學(xué)改性生成醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-P氨基的官能團(tuán)。依照(a)(1),優(yōu)選采用高碘酸鹽使羥烷基淀粉經(jīng)歷開(kāi)環(huán)氧化反應(yīng)，生成帶有至少一個(gè)醛基的羥烷基淀粉衍生物。依照(a)(1)的開(kāi)環(huán)氧化反應(yīng)可以在水性介質(zhì)中進(jìn)行。該開(kāi)環(huán)氧化反應(yīng)在0-37。C的溫度下進(jìn)行，優(yōu)選0-5。C。在(a)(2)的一種優(yōu)選具體實(shí)施方式中，官能團(tuán)M,選自羧基、反應(yīng)性羧基、羧酸酐、羧酸酰卣、異氰酸酯、異硫氰酸酯、氯甲酸酯以及環(huán)氧基團(tuán)，官能團(tuán)Q為醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-P氨基，或化學(xué)改性生成醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-(3氨基的官能團(tuán)。根據(jù)本發(fā)明的一種具體實(shí)施方式，依照(a)(2)的方法可以包括使鞋烷基淀粉經(jīng)羥烷基淀粉的任選氧化的還原性末端與至少一種包含至少兩個(gè)官能團(tuán)Mi和Q的化合物反應(yīng)。本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)羥烷基淀粉-優(yōu)選羥乙基淀粉-"經(jīng)任選氧化的還原性末端"反應(yīng)，可以指羥烷基淀粉主要經(jīng)其任選氧化的還原性末端反應(yīng)的過(guò)程。術(shù)語(yǔ)"主要經(jīng)其任選氧化的還原性末端"涉及統(tǒng)計(jì)學(xué)上高于50%、優(yōu)選至少55%、更優(yōu)選至少60%、更優(yōu)選至少65%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少75%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少85%、更優(yōu)選至少90%、進(jìn)一步優(yōu)選至少95%如95%、96%、97%、98%或99%用于給定反應(yīng)的羥烷基淀粉分子經(jīng)每個(gè)羥烷基淀粉分子的至少一個(gè)任選氧化的還原性末端反應(yīng)的過(guò)程，其中給定的經(jīng)至少一個(gè)還原性末端反應(yīng)的羥烷基淀粉分子可以在相同的給定反應(yīng)中通過(guò)官能團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)。如果一個(gè)或多個(gè)羥烷基淀粉分子通過(guò)至少一個(gè)還原性官能團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)并且同時(shí)通過(guò)這種(這些)羥烷基淀粉分子所含且不是還原性末端的至少一個(gè)其它的適宜官能團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)，則這些羥烷基淀粉分子的所有參與反應(yīng)的官能團(tuán)-所述官能團(tuán)包括還原性末端-中，統(tǒng)計(jì)學(xué)上優(yōu)選超過(guò)50%、優(yōu)選至少55%、更優(yōu)選至少60%、更優(yōu)選至少65%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少75%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少85%、更優(yōu)選至少90%,進(jìn)一步優(yōu)選至少95%如95%、96%、97%、98%或99%的是還原性末端。本發(fā)明文中所用術(shù)語(yǔ)"還原性末端"涉及可以以醛基和/或相應(yīng)半縮醛基形式存在的羥烷基淀粉分子的末段醛基。在該還原性末端被氧化的情形中，該酪基或半縮醛基為羧基和/或相應(yīng)內(nèi)酯的形式。根據(jù)本發(fā)明的一種具體實(shí)施方式，依照(a)(2)的方法由此可以包含將羥烷基淀粉在其還原性末端氧化，生成式(Ilia)和/或(IIIb)所示羥烷基淀粉<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>其中，R，、R，，和R，，，如對(duì)式II所定義；以及將在其還原性末端氧化的羥烷基淀粉與至少一種適宜化合物反應(yīng)，生成醛、酮、半縮醛或a-SH-(3氨基官能化的羥烷基淀粉。羥烷基淀粉-優(yōu)選羥乙基淀粉-的氧化可以依照生成具有上述結(jié)構(gòu)(Ilia)和/或(IIIb)的化合物的各種方法或其組合方法來(lái)進(jìn)行。盡管該氧化可以依照生成羥烷基淀粉被氧化的還原性末端的所有適合方法來(lái)進(jìn)行，但是優(yōu)選依照例如DE19628705Al中所述用堿性碘溶液來(lái)進(jìn)行，其相應(yīng)內(nèi)容(實(shí)施例A,第9欄，第6-24行)在此引入作為參考。在另一種優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，羥烷基淀粉的半縮醛基為羥烷基淀粉的還原性末端的醛基的未氧化形式。依照(a)(2)，優(yōu)選使羥烷基淀粉，其還原性末端任選氧化，與包含官能團(tuán)M!和官能團(tuán)Q的至少雙功能的化合物反應(yīng)，M!與羥烷基淀粉優(yōu)選在其任選氧化的還原性末端反應(yīng)，Q為醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-P氨基，或化學(xué)改性生成這些基團(tuán)之一的官能團(tuán)。關(guān)于至少雙功能的化合物中與羥烷基淀粉反應(yīng)的官能團(tuán)Mp特別要提及的是具有結(jié)構(gòu)R、NH-的基團(tuán)，其中R^為氫或烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、芳基環(huán)烷基、烷芳基或環(huán)烷芳基殘基，其中環(huán)烷基、芳基、芳烷基、芳基環(huán)烷基、烷芳基或環(huán)烷芳基殘基可以直接與NH基連接，或者根據(jù)另一種具體實(shí)施方式，可以通過(guò)氧橋與NH基連接。烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、芳基環(huán)烷基、烷芳基或環(huán)烷芳基殘基可被適當(dāng)?shù)厝〈?。關(guān)于優(yōu)選的取代基，可以提及鹵素如F、Cl或Br。特別優(yōu)選的殘基11*為氬、烷基和烷氧基，甚為優(yōu)選氫以及未取代的烷基和烷氧基。烷基和烷氧基基團(tuán)中，優(yōu)選具有1、2、3、4、5或6個(gè)C原子的基團(tuán)。更優(yōu)選甲基、乙基、丙基、異丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基。尤其優(yōu)選曱基、乙基、曱氧基、乙氧基，特別優(yōu)選曱基或曱氧基。根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實(shí)施方式，官能團(tuán)M！具有結(jié)構(gòu)R*-NH-R**-,其中尺**優(yōu)選包含結(jié)構(gòu)單元-NH-和/或結(jié)構(gòu)單元-(C=G)-和/或結(jié)構(gòu)單元-S02-，其中G為O或S。官能團(tuán)R"的具體例子為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>和HHG其中，如果G出現(xiàn)兩次，則其獨(dú)立地為O或S。因此，本發(fā)明還涉及上述的方法和偶聯(lián)物，其中官能團(tuán)Mi選自下組<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>其中G為O或S,并且如果出現(xiàn)兩次，則其獨(dú)立地為O或S,且R，為甲基。根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的具體實(shí)施方式，官能團(tuán)M,為氨基-NH2。對(duì)于Q為醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-P氨基，或化學(xué)改性生成這些基團(tuán)之一的官能團(tuán)的情形，除別的以外，提及以下官能團(tuán)-C-C-雙鍵或C-C-三鍵或芳族C-C-鍵；-巰基或羥基-烷基磺酸肼、芳基磺酸肼；畫(huà)1,2-二醇；-1,2-氨基-硫醇；-疊氮化合物；-1,2-氨基醇；-氨基-NH2或包含結(jié)構(gòu)單元-NH-的氨基衍生物，如氨基烷基、氨基芳基、氨基芳烷基或烷芳基氨基；-羥基氨基-O-NHr，或包含結(jié)構(gòu)單元-O-NH-的羥氨基衍生物，如羥烷基氨基、輕芳基氨基、羥芳烷基氨基或羥烷芳基氨基；-烷氧基氨基、芳氧基氨基、芳烷氧基氨基或烷芳氧基氨基，每種包含結(jié)構(gòu)單元-NH-O-;-具有羰基的殘基，-Q-C(=G)-M，其中G為O或S，M為例如—-OH或畫(huà)SH;-烷氧基、芳氧基、芳烷氧基或垸芳氧基；--烷硫基、芳硫基、芳烷硫基或烷芳硫基；-烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、芳烷基羰基氧基、烷芳基羰基氧基；-活性酯，例如具有酰亞胺結(jié)構(gòu)的羥胺如N-羥基琥珀酰亞胺的酯，或具有結(jié)構(gòu)單元O-N并且其中N是雜芳基化合物的一部分的羥胺的酯，其中G-O且Q不存在，如具有被取代的芳基殘基如五氟苯基、對(duì)硝基苯或三氯苯基的芳氧基化合物；其中Q不存在，或者為NH或雜原子如S或0;--NH-NH2或-NH-NH-;--N02;-腈基；-羰基如醛基或酮基；-羧基；--n=oo或-nk:-s基；-乙烯基卣化物基團(tuán)，如碘乙烯基或溴乙烯基或三氟甲磺酸酯基團(tuán)；--CeC畫(huà)H;--(ONH2CI)-0烷基畫(huà)基團(tuán)-(O0)-CH2-Hal，其中Hal是Cl、Br或I;<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>-包含-S-S-結(jié)構(gòu)的二硫化物基團(tuán)；-基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>在本發(fā)明方法的優(yōu)選具體實(shí)施方式中，官能團(tuán)Mi與羥烷基淀粉基團(tuán)上的OH-基(或者羥烷基淀粉的任選氧化或未氧化的還原性末端)反應(yīng)。這種具體實(shí)施方式中的官能團(tuán)Md尤選羧基或反應(yīng)性羧基，官能團(tuán)Q為醛基、酮基或半縮醛基；特別地，包含M!和Q的雙官能化合物選自曱?；綍跛帷?-甲?；郊姿嵛宸交ァ?-甲?；綍跛酦-羥基琥珀酰亞胺酯、4-(4-曱酰基-3,5-二曱氧基苯氧基)丁酸和4-曱?；郊姿狒蛘哌x自a-酮羧酸、神經(jīng)氨酸或其衍生物以及磷酸吡口多醛的生物相容性化合物。關(guān)于a-酮羧酸，優(yōu)選衍生自氨基酸并且絕大多數(shù)情形下也能從人體中找到的那些a-酮羧酸，優(yōu)選的衍生自氨基酸的a-酮羧酸選自酮纈氨酸、酮亮氨酸、酮異亮氨酸和酮丙氨酸。在本發(fā)明方法的優(yōu)選具體實(shí)施方式中，a-酮羧酸的羧基與羥烷基淀粉上的OH-基(或者羥烷基淀粉的任選氧化或未氧化的還原性末端)反應(yīng)，或者與為氨基的羥烷基淀粉的基團(tuán)Q反應(yīng)。然后a-酮羧酸的剩余無(wú)酮基團(tuán)反應(yīng)形成p塞唑烷。因而，本發(fā)明涉及依照(a)(2)(i)或(a)(2)(ii)的方法，其中羥烷基淀粉與a-酮羧酸反應(yīng)。關(guān)于神經(jīng)氨酸或唾液酸或其衍生物，它們優(yōu)選是生物相容的，特別地是人體內(nèi)存在的糖，其為N-和/或O-乙酰化的。在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，神經(jīng)氨酸或唾液酸為N-乙?；窠?jīng)氨酸。這些化合物由于其吡喃糖結(jié)構(gòu)而表現(xiàn)出為實(shí)現(xiàn)作為間隔基的功能所期望的剛性。另一方面，可以通過(guò)選擇性氧化將醛基引入這些化合物。唾液酸例如作為糖基化蛋白質(zhì)多糖鏈中的末端單糖存在于人體中。在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，唾液酸可^皮選擇性地氧化為醛基。選沖奪性氧化唾液酸或神經(jīng)氨酸的方法為本領(lǐng)域7>知，例如得自L.W.Jaques，B.F.Riesco，W.Weltner，CarbohydrateResearch,83(1980)，21-32和T.Masuda，S.Shibuya,M.Arai，S.Yoshida，T.Tomozawa,A.Ohno，M.Yamashita,T.Honda,Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,13(2003)，669-673。優(yōu)選在與羥烷基淀粉反應(yīng)之前進(jìn)4于唾液酸的氧化。然后可以使任選氧化的唾液酸通過(guò)其羧酸基與羥烷基淀粉反應(yīng)。在本發(fā)明方法的優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，氧化的唾液酸的羧基與羥烷基淀粉上的OH基、或者羥烷基淀粉的任選氧化的或未氧化的還原性末端反應(yīng)；或者與為氨基的羥烷基淀粉的基團(tuán)Q反應(yīng)。氧化的唾液酸的剩余羰基隨后可以反應(yīng)形成喀唑烷。因而，本發(fā)明涉及依照(a)(2)(i)或(a)(2)(ii)的方法，其中羥烷基淀粉與氧化的唾液酸反應(yīng)。關(guān)于磷酸吡。多醛(PyP),它是高生物相容性的雙官能化合物，也稱(chēng)為維生素B6。PyP是一種輔酶，參與氨基轉(zhuǎn)移作用、脫羧作用、外消旋作用以及多種氨基酸側(cè)鏈改性作用。所有的PyP要求酶通過(guò)氨基酸與輔酶之間形成Schiffi威來(lái)作用。在本發(fā)明方法的優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，PyP的磷酸基團(tuán)與羥烷基淀粉上的OH基、或者羥烷基淀粉的任選氧化的或未氧化的還原性末端反應(yīng)形成磷酸酯基團(tuán)；或者與為氨基的羥烷基淀粉的基團(tuán)Q反應(yīng)形成磷酰胺。PyP的剩余羰基隨后可以反應(yīng)形成蓬唑烷。在PyP的情形中，羥烷基淀粉的官能團(tuán)如上所述優(yōu)選通過(guò)使用二氨基化合物引入羥烷基淀粉。因而，本發(fā)明涉及依照(a)(2)(i)或(a)(2)(ii)的方法，其中羥烷基淀粉與磷酸吡哆醛反應(yīng)。在(a)(2)(i)的優(yōu)選實(shí)施方式中，官能團(tuán)Mi選自羧基、反應(yīng)性羧基、羧酸酐、羧酰囟、異氰酸酯、異硫氰酸酯、氯甲酸酯以及環(huán)氧基團(tuán)，官能團(tuán)Q為醛基、酮基、半縮醛基，其中官能團(tuán)Mi與羥烷基淀粉上的OH基反應(yīng)。在(a)(2)(i)的優(yōu)選實(shí)施方式中，官能團(tuán)Mi選自氨基和a-SH-(3氨基且官能團(tuán)Q為a-SH-P氨基，特別地，其中官能團(tuán)Mi與羥烷基淀粉的任選氧化的還原性末端反應(yīng)。在(a)(2)(i)的優(yōu)選實(shí)施方式中，包含所述cc-SH-(3氨基的羥烷基淀粉由以下方法得到，該方法包括使羥烷基淀粉在其任選氧化的還原性末端與包含官能團(tuán)M！且官能團(tuán)Q為oc-SH-(3氨基的化合物反應(yīng)，特別地其中，包含Mi和ot-SH-P氨基的化合物為1,3-二氨基-2-巰基丙烷，或2,3-二氨基-2-巰基丙烷。在(a)(2)(ii)的優(yōu)選實(shí)施方式中，該至少雙官能的化合物包含為羧基或反應(yīng)性羧基的Mi以及為被保護(hù)的a-SH-(3氨基的Q,特別地，其中該至少雙官能的化合物選自D-、L-PG廣Cys(PG2)-OH或者其外消旋混合物、以及它們的活性酯，其中PGi可以是氨基的任何適宜的保護(hù)基，優(yōu)選自叔丁氧羰基(Boc)或9-芴基曱氧羰基(Fmoc)，PG2可以是硫醇的任何適宜的保護(hù)基，優(yōu)選自三苯曱基(Trt)，對(duì)曱氧基三苯甲基(Mmt)、S-叔丁基硫基(S-t-Bu)和乙酰氨基甲基(Acm)。依照(a)(2)(ii),官能團(tuán)Q為這樣的基團(tuán)其被進(jìn)一步改性生成醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-P氨基。根據(jù)這種具體實(shí)施方式，由在其還原性末端任選氧化的羥烷基淀粉與至少雙官能的化合物反應(yīng)得到的羥烷基淀粉衍生物與另一種至少雙官能的化合物鳥(niǎo)應(yīng)，后者包含與該羥烷基淀粉的官能團(tuán)Q反應(yīng)的官能團(tuán)。在(a)(2)(ii)的優(yōu)選情形中，和Q都是氨基-NH2，Mi和Q可以被任何適宜的間隔基間隔開(kāi)。其中，所說(shuō)的間隔基可以是任選取代的直鏈、支鏈和/或環(huán)狀烴殘基。通常，該烴殘基具有1-40、優(yōu)選1-20、更優(yōu)選2-10、更優(yōu)選2-6、特別優(yōu)選2-4個(gè)碳原子。如果存在雜原子，該分隔基團(tuán)通常包含1-20、優(yōu)選1-8、特別優(yōu)選l-4個(gè)雜原子。該烴殘基可以包含任選支化的烷基鏈、或芳基、或具有例如5-7個(gè)碳原子的環(huán)烷基、或?yàn)榉纪榛?、烷芳基，其中烷基部分可以是直鏈?或環(huán)狀烷基基團(tuán)。根據(jù)更優(yōu)選的具體實(shí)施方式，該烴殘基為1-20、優(yōu)選2-10、更優(yōu)選2-6、特別優(yōu)選2-4個(gè)碳原子的烷基鏈。在本發(fā)明根據(jù)(a)(2)(ii)的方法的一種具體實(shí)施方式中，優(yōu)選該包含M!和Q的至少雙官能的化合物為具有1-20個(gè)碳原子的任選取代的二氨基鏈烷，優(yōu)選選自以下的化合物1,2-二氨基乙烷、1，3-二氨基丙烷、1，4-二氨基丁烷、1，5-二氨基戊烷、1,6-二氨基己烷、1，7-二氨基庚烷、1,8-二氨基辛烷、19-二氨基壬烷、1,10-二氨基癸烷、1,11-二氨基十一烷、1，12-二氨基十二烷、1，13-二氨基十三烷、1，14-二氨基十四烷、1,15-二氨基十五烷、1,16-二氨基十六烷、1,17-二氨基十七烷、1,18-二氨基十八烷、1，19-二氨基十九烷、1，20-二氨基二十烷；或具有下式的化合物H2N—[(CRrR2')pO]q[CRV〗「NH2其中R"、R2'、R'和R"'獨(dú)立地選自氫和烷基，優(yōu)選氫和曱基，p為2-4,其中p個(gè)基團(tuán)CR"R"中的殘基W和R"可以相同或不同，q為0-20，優(yōu)選0-10;r為0-20，優(yōu)選2-4,其中當(dāng)q-0時(shí)，r不為0,并且其中r個(gè)基團(tuán)CR'W中的殘基W和R"'可以相同或不同。本發(fā)明優(yōu)選的具體實(shí)施方式還涉及一種上述的方法，其中羥烷基淀粉與選自以下的雙官能化合物反應(yīng)1，2-二氨基乙烷、1,3-二氨基丙烷、1,4-二氨基丁烷、1,5-二氨基戊烷、1，6-二氨基己烷、1，7-二氨基庚烷、1,8-二氨基辛烷、1，9-二氨基壬烷、1，10-二氨基癸烷、l，ll-二氨基十一烷、1,12-二氨基十二烷、1,13-二氨基十三烷、1,14-二氨基十四烷、1,15-二氨基十五烷、1,16-二氨基十六烷、1,17-二氨基十七烷、1，18-二氨基十八烷、1，19-二氨基十九烷、1,20-二氨基二十烷；或具有下式的化合物H2N—[(CRV')pO]q[CR3'R4']廣NH2其中R"、R2'、！13'和114'獨(dú)立地選自氫和烷基，優(yōu)選氫和曱基，p為2-4，其中p個(gè)基團(tuán)CR"R"中的殘基Rr和R"可以相同或不同，q為0-20,優(yōu)選0-4;r為0-20,優(yōu)選2-4,其中當(dāng)q-0時(shí)，r不為O,并且其中r個(gè)基團(tuán)CR"'R"'中的殘基R'和R"'可以相同或不同；特別是與1,4-二氨基丁烷反應(yīng)，生成氨基官能化的羥烷基淀粉衍生物，這種氨基官能化的羥烷基淀粉衍生物進(jìn)一步與至少雙官能的化合物反應(yīng)，該至少雙官能的化合物包含一個(gè)與氨基官能化的羥烷基淀粉的氨基反應(yīng)的官能團(tuán)和一個(gè)為醛基、酮基、半縮醛基或cc-SH-l3氨基中至少一個(gè)的官能團(tuán)。這另一種雙官能化合物優(yōu)選自甲?；綍跛帷?-曱?；綍跛嵛宸交?、4-曱?；綍跛酦-羥基琥珀酰亞胺酯、4-(4-曱?；?3，5-二曱氧基苯氧基)丁酸和4-曱?；綍跛狒?，或者選自a-酮羧酸、神經(jīng)氨酸或其衍生物以及磷酸吡。多醛的生物相容性化合物。在(a)(2)(ii)的另一種具體實(shí)施方式中，包含所述a-SH-P氨基的羥烷基淀粉通過(guò)以下方法得到，該方法包括將羥烷基淀粉在其還原性末端任選地氧化；使該氧化或未氧化的還原性末端與一種化合物的官能團(tuán)M!反應(yīng)，該化合物除M!外還包含官能團(tuán)Q,生成第一羥烷基淀粉衍生物；以及使該第一羥烷基淀粉衍生物的官能團(tuán)Q與一種化合物的官能團(tuán)V反應(yīng)，該化合物除V外還包含^皮任選地保護(hù)的a-SH-P氨基基團(tuán)，生成任選地保護(hù)的a-SH-P氨基官能化的羥烷基淀粉衍生物。官能團(tuán)Mi和Q優(yōu)選如上所述。在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，包含V和任選地保護(hù)的a-SH-P氨基的化合物為半胱氨酸或其衍生物，V為羧基和反應(yīng)性羧基，優(yōu)選反應(yīng)性酯或羧酸酐。優(yōu)選地，在(a)(2)(ii)中，未氧化形式的羥烷基淀粉與帶有氨基M!和氨基Q的雙官能化合物通過(guò)還原性胺化作用反應(yīng)。特別地，該雙官能化合物可以選自伯胺、氨、1,2-二氨基乙烷、1,3-二氨基丙烷、1,4-二氨基丁烷、1，5-二氨基戊烷、1，6-二氨基己烷、1,7-二氨基庚烷、1，8-二氨基辛烷、1，9-二氨基壬烷、1,10-二氨基癸烷、l，ll-二氨基十一烷、1,12-二氨基十二烷、1,13-二氨基十三烷、1，14-二氨基十四烷、1,15-二氨基十五烷、1，16-二氨基十六烷、1,17-二氨基十七烷、1,18-二氨基十八烷、1,19-二氨基十九烷、1,20-二氨基二十烷；或具有下式的化合物H2N—[(CRV^OWCRyhNI^其中R"、R2'、R'和R"'獨(dú)立地選自氫和烷基，優(yōu)選氫和甲基，p為2-4，其中p個(gè)基團(tuán)CR"R"中的殘基R"和R"可以相同或不同，q為0-20,優(yōu)選0-4;r為0-20,優(yōu)選2-4,其中當(dāng)q-0時(shí)，r不為O,并且其中r個(gè)基團(tuán)CR'R"'中的殘基R'和R"'可以相同或不同；特別是1，4-二氨基丁烷。優(yōu)選地，在(a)(2)(ii)中，在其還原性末端氧化的羥烷基Q的雙官能化合物通過(guò)內(nèi)酯開(kāi)環(huán)反應(yīng)而反應(yīng)。特別地，該雙官能化合物選自1，2-二氨基乙烷、1,3-二氨基丙烷、1，4-二氨基丁烷、1，5-二氨基戊烷、1,6-二氨基己烷、1，7-二氨基庚烷、1,8-二氨基辛烷、1,9-二氨基壬烷、1,10-二氨基癸烷、l，ll-二氨基十一烷、1，12-二氨基十二烷、1,13-二氨基十三烷、1,14-二氨基十四烷、1,15-二氨基十五烷、1,16-二氨基十六烷、1，17-二氨基十七烷、1，18-二氨基十八烷、1,19-二氨基十九烷、1，20-二氨基二十烷；或具有下式的化合物H2N—[(CR'R2')pO]q[CR3'R4']「NH2其中R"、R2'、113'和114'獨(dú)立地選自氫和烷基，優(yōu)選氫和甲基，p為2-4，其中p個(gè)基團(tuán)〔111'112'中的殘基111'和112'可以相同或不同，q為0-20,優(yōu)選0-4;r為0-20,優(yōu)選2-4,其中當(dāng)q-0時(shí)，r不為0，并且其中r個(gè)基團(tuán)CR^y中的殘基R'和y可以相同或不同；特別是1，4-二氨基丁烷。優(yōu)選地，在(a)(2)(ii)中，羥烷基淀粉首先與具有氨基Q的雙官能化合物反應(yīng)，該化合物優(yōu)選如上所述制備；然后將所得氨基官能化的羥烷基淀粉進(jìn)一步與具有活化的羧基以及醛基、酮基或半縮醛基的雙官能化合物反應(yīng)。在特別優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，(a)(2)(ii)中的本發(fā)明方法包括使優(yōu)選氧化的羥烷基淀粉與具有氨基M！和氨基Q的化合物反應(yīng)，特別是二氨基烷基化合物，尤其是1,4-二氨基丁烷；然后使氨基官能化的羥烷基淀粉與一種化合物反應(yīng)，該化合物選自任選保護(hù)的半胱氨酸和4-曱酰基苯甲酸。包含至少一個(gè)醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-P氨基的活性物質(zhì)可由任何適宜的方法提供。在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，該包含所述醛基、酮基、半縮醛基或所述a-SH-P氨基的活性物質(zhì)，優(yōu)選任選改性的蛋白質(zhì)、肽、合成肽或寡核普酸由以下方法獲得，該方法包括(b)(1)在其制備或化學(xué)改性期間，將至少一個(gè)醛基、酮基、半縮醛基或至少一個(gè)cc-SH-P氨基引入活性物質(zhì)，或者(b)(2)使活性物質(zhì)與至少雙官能的化合物反應(yīng)，所述化合物包含兩個(gè)官能團(tuán)M2和Q,—個(gè)官能團(tuán)M2與活性物質(zhì)反應(yīng)，且另一個(gè)官能團(tuán)Q為(i)醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-(3氨基；或(ii)化學(xué)改性生成醛基、酮基、半縮醛基或cc-SH-(3氨基的官能團(tuán)。優(yōu)選在(b)(1)中，活性物質(zhì)為通過(guò)有機(jī)合成制備-優(yōu)選采用合成樹(shù)脂生產(chǎn)-的蛋白質(zhì)或肽，該合成方法允許生成酪基官能化的、酮基官能化的、半縮醛基官能化的或a-SH-P氨基官能化的蛋白質(zhì)或肽；或者其中在(b)(1)中，活性物質(zhì)為采用表達(dá)載體生產(chǎn)的蛋白質(zhì)或肽，所述載體可生成醛基官能化的、酮基官能化的、半縮醛基官能化的或a-SH-|3氨基官能化的蛋白質(zhì)或肽；或者其中在(b)(1)中，活性物質(zhì)為蛋白質(zhì)或肽，且該蛋白質(zhì)和肽的主鏈被醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-(3氨基取代；或者其中在(b)(1)中，活性物質(zhì)為蛋白質(zhì)或肽，其中所述醛基、酮基、半縮醛基或所述a-SH-(3氨基直接與該蛋白質(zhì)或肽的主鏈鍵接或者為該主鏈的側(cè)鏈的一部分。在(b)(1)的優(yōu)選具體實(shí)施方式中，該活性物質(zhì)通過(guò)活性物質(zhì)的改性得到，特別是蛋白質(zhì)或肽通過(guò)氧化以引入醛基。在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，該活性物質(zhì)為蛋白質(zhì)或肽，且醛基、酮基或半縮醛基包含在多肽的碳水化合物部分糖類(lèi)片段中；特別地，其中糖類(lèi)片段碳水化合物部分選自羥基醛、羥基酮及其化學(xué)改性物。該糖類(lèi)片段碳水化合物部分可以是天然存在的糖類(lèi)片段碳水化合物部分的衍生物且選自葡萄糖、半乳糖、甘露糖和唾液酸，可被任選地化學(xué)氧化或酶氧化，優(yōu)選碳水化合物側(cè)鏈的氧化的半乳糖或者氧化的唾液酸殘基，更優(yōu)選碳水化合物側(cè)鏈的末端半乳糖或唾液酸殘基，末端碳水化合物的氧化優(yōu)選經(jīng)酶途徑或經(jīng)化學(xué)途徑進(jìn)行，化學(xué)氧化優(yōu)選采用高碘酸鹽進(jìn)行。在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，碳水化合物部分為天然存在的按水化合物部分的衍生物且為末端半乳糖，其經(jīng)酶氧化或經(jīng)化學(xué)氧化，其中該末端半乳糖殘基任選地在末端唾液酸裂解后得到。在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，oc-SH-13氨基包含在活性物質(zhì)-優(yōu)選蛋白質(zhì)或肽-的半胱氨酸殘基中，該半胱氨酸殘基優(yōu)選為活性物質(zhì)的N-末端半胱氨酸殘基。在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，活性物質(zhì)為具有N-末端半胱氨酸殘基的改性蛋白質(zhì)或肽，所述半胱氨酸殘基不為二硫橋的構(gòu)成部分；特別地其中，具有N-末端半胱氨酸殘基的改性蛋白質(zhì)或肽為天然存在的蛋白質(zhì)或肽的變異型，通過(guò)以下得到(l)將半胱氨酸殘基添加到N-末端氨基酸上，(2)用半胱氨酸取代N-末端氨基酸，或者(3)消去N-末端氨基酸直至得到末端半胱氨酸?？蓪⑺峒暗陌腚装彼嵩诤铣善陂g引入肽中。肽合成在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的(W.Chang,P.D.White;Fmocsolidphasepeptidesynthesis,apracticalapproach;OxfordUniversityPress,Oxford,2000，ISBN0199637245)。重組的多肽可以用標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)獲得，例如在MolecularCloning:ALaboratoryManual,第三版，Sambrook等人編輯,CSHLPress2001中所述的技術(shù)。簡(jiǎn)單地說(shuō)，多肽可以由重組表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)，所述重組表達(dá)載體包含編碼所需多肽的核酸，將該核酸可操作地連接到至少一種可以使得所需多肽進(jìn)行表達(dá)的調(diào)節(jié)序列上。例如，可以分離出編碼所需多肽的核酸序列并將其克隆到表達(dá)載體中，然后將該表達(dá)載體轉(zhuǎn)移到用于所述多肽進(jìn)行表達(dá)的適宜宿主細(xì)胞中。該類(lèi)載體可以是質(zhì)粒、噬菌?；蛘沉?。例如，可以以適宜的方式將核酸分子克隆到原核或真核表達(dá)載體中(參見(jiàn)以上MolecularCloning)。該類(lèi)表達(dá)載體包含至少一個(gè)啟動(dòng)子并且還可以包含用于開(kāi)始進(jìn)行翻譯的信號(hào)并且-在原核表達(dá)載體的情形中-還可以包含用于結(jié)束翻譯的信號(hào)，而在真核表達(dá)載體的情形中，優(yōu)選地包含用于結(jié)束轉(zhuǎn)錄和用于多腺苷酸化的表達(dá)信號(hào)。在大腸桿菌中表達(dá)的原核表達(dá)載體的實(shí)例為例如如US4,952,496中所述以T7RNA聚合酶所識(shí)別的啟動(dòng)子為基礎(chǔ)的表達(dá)載體；在釀酒酵母中表達(dá)的真核表達(dá)載體的實(shí)例例如為載體G426/Met25或P526/Ga11(Mumberg等人，(1994)Nucl.AcidsRes"22，5767-5768);在昆蟲(chóng)表達(dá)中的表達(dá)載體實(shí)例例如為桿狀病毒載體，例如EP-B1-0127839或EP-B1-0549721中或者由Ciccarone等人("用桿狀病毒穿梭載體在大腸桿菌中產(chǎn)生重組桿狀病毒DNA("GenerationofrecombinantBaculovirusDNAinE.coliusingbaculovirusshuttlevector"XI997)Volume13，U.Reischt,ed.(Totowa，NJ:HumanaPressInc.))所述的載Rc/CMW和Rc/ASW以及SW40-載體，這些載體7>知且可商業(yè)購(gòu)得，或者實(shí)施例4中所述的EBNA-系統(tǒng)，基于辛德畢斯(Sindbis)復(fù)制子的pCytTs(Boorsma等人，(2002)Biotechnol.Bioeng.79(6):602-609)，辛德畢斯病毒表達(dá)系統(tǒng)(Schlesinger(1993)TrendsBiotechnol.11(1):18-22)或腺病毒表達(dá)系統(tǒng)(He等人，(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA95:2509-2514)。制備這些表達(dá)載體的分子生物學(xué)方法以及用于對(duì)宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染和對(duì)該類(lèi)被轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的方法以及由所述被轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞制備和獲得本發(fā)明多肽的條件為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知。具有所需N-末端半胱氨酸殘基的多肽可由如上所述表達(dá)和純化的多肽生成，通過(guò)將感興趣的多肽克隆到N-末端引導(dǎo)序列后面，除去該N-末端引導(dǎo)序列而得到具有所需N-末端半胱氨酸殘基的多肽。其例如可以通過(guò)對(duì)如上所述表達(dá)和純化的多肽進(jìn)行蛋白水解性裂解來(lái)進(jìn)行。在這類(lèi)情形中，克隆、表達(dá)一種融合多肽并對(duì)其進(jìn)行純化，其中半胱氨酸殘基緊鄰一種高選擇性蛋白酶裂解部位，例如Cys殘基緊鄰因子X(jué)a裂解部位lie(Glu/Asp)GlyArg|(Cys/His)，或者His或Cys殘基緊鄰腸激酶裂解部位AspAspAspAspLys|(Cys/His),其中l(wèi)表示^皮蛋白酶裂解的部位。其還可以通過(guò)例如在表達(dá)期間對(duì)多肽進(jìn)行裂解，例如在ER易位階段被信號(hào)肽酶裂解來(lái)進(jìn)行。在此類(lèi)情形中，克隆并表達(dá)一種融合多肽，其中Cys殘基緊鄰將該重組多肽指向分泌途徑的信號(hào)肽(其綜述可參見(jiàn)Rapoport等人，AnnuRevBiochem.1996;65:271-303)。操縱重組多肽的編碼序列從而使得可以產(chǎn)生在所需位置具有所的(Sambrook,同上)。對(duì)(b)(2)的優(yōu)選的具體實(shí)施方式如同以上對(duì)(a)(2)的描述，只要活性物質(zhì)含有與上述M,基團(tuán)反應(yīng)的官能團(tuán)，特別優(yōu)選的官能團(tuán)M2和Q如同以上對(duì)官能團(tuán)M!和Q的描述。在特別優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，活性物質(zhì)選自蛋白質(zhì)和肽并且依照以上(b)(1)獲得，優(yōu)選如上所述。在依照(A)的特別優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，包含醛基的羥烷基淀粉通過(guò)(a)(2)(ii)得到，優(yōu)選通過(guò)如下得到使優(yōu)選氧化的羥烷基淀粉與具有氨基M！和氨基Q的化合物反應(yīng)，該化合物特別為二氨基烷基化合物，尤其為1，4-二氨基丁烷；然后使氨基官能化的羥烷基淀粉與包含醛基的雙官能化合物反應(yīng)，該化合物特別為4-曱?；郊姿?；然后使該羥烷基淀粉的醛基與活性物質(zhì)的任選保護(hù)的a-SH-(3氨基反應(yīng)，活性物質(zhì)通過(guò)(b)(2)(i)獲得，優(yōu)選通過(guò)將任選保護(hù)的半胱氨酸引入該活性物質(zhì)，特別是蛋白質(zhì)或肽。在依照(B)的特別優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，包含醛基的活性物質(zhì)通過(guò)(b)(l)得到，優(yōu)選是如下得到通過(guò)化學(xué)改性、優(yōu)選通過(guò)將蛋白質(zhì)或肽氧化而將醛基引入；然后使該活性物質(zhì)的醛基與包含a-SH-(3氨基的羥烷基淀粉反應(yīng)，所述羥烷基淀粉得自(a)(2)(ii),優(yōu)選通過(guò)使優(yōu)選氧化的羥烷基淀粉與具有氨基M!和氨基Q的化合物反應(yīng)，該化合物特別為雙氨基烷基化合物，尤其為1,4-二氨基丁烷；然后使氨基官能化的羥烷基淀粉與包含a-SH-P氨基的雙官能化合物、特別是半胱氨酸反應(yīng)。依照(A)和(B)的本發(fā)明活性物質(zhì)與羥烷基淀粉的反應(yīng)可以在任何適宜的溶劑或至少兩種溶劑的混合物中、在適宜的pH和適宜49的反應(yīng)溫度下進(jìn)行。在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，反應(yīng)(A)或(B)在溫度0-40。C、優(yōu)選0-25°C、特別優(yōu)選20-25°C,在溶劑存在下，pH3.5-10、優(yōu)選4-8、特別優(yōu)選4.8-8.0下進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選0.1-24h、特別為約21h。溶劑優(yōu)選自水、水性緩沖液、DMF(二曱基曱酰胺)、DMSO(二曱基亞砜)、DMA(二曱基乙酰胺)及其混合物。羥烷基淀粉與活性物質(zhì)的分子比為約1:1到200:1,優(yōu)選10:1到100:1,特別為40:1到70:1。此外，本發(fā)明涉及可由上述方法得到的活性物質(zhì)與羥烷基淀粉的偶聯(lián)物。在另一種具體實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及活性物質(zhì)與羥烷基淀粉的偶聯(lián)物，其中活性物質(zhì)和羥烷基淀粉通過(guò)具有式(i)、(r)或(r，)所示結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接其中R、R2、R2，、R3、R3'和R4獨(dú)立地選自氫、任選地適宜耳又代的直鏈、環(huán)狀和/或支鏈烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳烷基:優(yōu)選氫,所述偶聯(lián)物具有式(IV)、(IV，)或UV")所示的結(jié)構(gòu)(IV)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>其中HAS，是羥烷基淀粉或其衍生物的殘基，與醛基、酮基或半縮醛基鍵接；其中AS，是活性物質(zhì)或其衍生物的殘基，與a-SH-(3氨基鍵接；或者具有式(v)、(V，)或(V，，)所示的結(jié)構(gòu)HAS'(v，，)^脇，是羥烷基淀粉或其衍生物的殘基，與aie氨基鍵t鍵f妄活冊(cè)質(zhì)或其衍生物的殘基，與醛基、酮基或半縮』在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，該偶聯(lián)物選自其中Rs如同以上對(duì)R!到R4的定義，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage55</formula>式IV，a、IV，b、V，b或V，c中，n為整數(shù)，優(yōu)選n是0-20，并且在式Va、Vb、V，d或V，e中，n為整數(shù)，優(yōu)選n是l-20。在式IV，b和V，c的優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，n為2-4，特別為2。在優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，偶聯(lián)物為其中R，、R，，和/或R，，，如同對(duì)式II的定義，并且其中在HES的至少一個(gè)葡萄糖單元中，R，、R，，和/或R，，，至少之一獨(dú)立地選自以下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage55</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage56</formula><idO(VId)其中n為整數(shù)，優(yōu)選1-20和/或其中R，、R，，和/或R，，，至少之一為-(CH2CH20)m-R、其中m為整數(shù)，優(yōu)選1-3，R"選自式(Via)、(VIb)、(VIc)和(VId)。在另一種具體實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及oc-SH-(3氨基官能化的羥烷基淀粉衍生物，選自其中Rs如同以上對(duì)Ri到R4的定義,以及其中n為整數(shù)，優(yōu)選0-20，或者選自hes'(vr)其中R，、R，，和/或R，，，如同對(duì)式II的定義，并且其中在HES的至少一個(gè)葡萄糖單元中，R，、R，，和/或R，，，至少之一獨(dú)立地選自以下其中n為整數(shù)，優(yōu)選1-20和/或其中R，、R"和/或R"，至少之一》-(CH2CH20)m-R##，其中m為整數(shù)，優(yōu)選1-3,R糾選自式(VI，a)、(VI，b)、和(VI，c)。特別用于式(VI)和(VP)中的縮寫(xiě)HES"和HES，是指HES分子的殘基，該殘基與(VI)和(Vr)中所示鍵合HES"和HES，的糖片段一起，構(gòu)成HES分子，該分子反過(guò)來(lái)又構(gòu)成式(VI和(VI，)中定義的偶聯(lián)物的一部分。在另一種具體實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及上述偶聯(lián)物，用在人體或動(dòng)物體的治療方法中或者用作治療劑。根據(jù)本發(fā)明的偶聯(lián)物純度可為至少50%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少90%、特別為至少95%或至少99%。在特別優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，該偶聯(lián)物純度可達(dá)100%,即不存在其它副產(chǎn)物。因此，根據(jù)另一方面，本發(fā)明還涉及一種可以包含本發(fā)明偶聯(lián)物的組合物，其中偶聯(lián)物的含量為至少50wt-%、更優(yōu)選至少70wt-%、更優(yōu)選至少90wt-%、特別為至少95wt-%或至少99wt-%。在特別優(yōu)選的具體實(shí)施方式中，該組合物可由該偶聯(lián)物組成，即該偶聯(lián)物的含量為100wt-%。因而，本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，包含上述偶聯(lián)物或可由上述方法得到的偶聯(lián)物。而且，本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，包含上述偶聯(lián)物或可由上述方法得到的偶聯(lián)物，所述藥物組合物還包含至少一種藥學(xué)上可接受的稀釋劑、輔料或載體。附圖概述圖1表示通過(guò)SDS凝膠電泳對(duì)蛋白質(zhì)-HES偶聯(lián)物粗品的分析，該偶聯(lián)物從H-Cys(H)-HES10/0.4與氧化的EPO經(jīng)"塞唑烷形成而得到。泳道X:Roti-MarkSTANDARD(CarlRothGmbH+Co.KG，Karlsmhe，D)從頂端到底部的分子量標(biāo)記200kDa、119kDa、66kDa、43kDa、29kDa、20kDa、14.3kDa泳道A:H-Cys(H)-HES10/004與氧化的EPO的偶聯(lián)圖2表示通過(guò)SDS凝膠電泳對(duì)蛋白質(zhì)-HES偶聯(lián)物粗品的分析，該偶聯(lián)物從H-Cys-肽-NH2與醛基HES經(jīng)，塞唑烷形成而得到。泳道X:Roti-MarkSTANDARD(CarlRothGmbH+Co.KG,Karlsruhe,D)從頂端到底部的分子量標(biāo)記200kDa、119kDa、66kDa、43kDa、29kDa、20kDa、14.3kDa泳道A:醛基HES10/0.7在pH4.6下的偶聯(lián)泳道B:醛基HES50/0.7在pH4.6下的偶聯(lián)泳道C:反應(yīng)對(duì)照肽在pH4.6下泳道D:醛基HES10/0.7在pH8.0下的偶聯(lián)泳道E:醛基HES50/0.7在pH8.0下的偶聯(lián)泳道F:反應(yīng)對(duì)照肽在pH8.0下圖3表示通過(guò)瓊脂凝膠電泳對(duì)DNA-HES偶聯(lián)物粗品的分析，該偶聯(lián)物從H-Cys(H)-HES50/0.7與醛改性的DNA經(jīng)，塞唑烷形成而得到，如以下實(shí)驗(yàn)部分8.4-8.5中所述。泳道X:pUC19/MspI標(biāo)記(CarlRothGmbH+Co.KG,KarlsruheD)從頂端到底部的分子量標(biāo)記501/489bp、404bp、331bp、242bp、190bp、147bp、lll/110bp、67bp。泳道A,頂排H-Cys(H)-HES50/0.7與FBA改性的DNA在pH4.6下的偶聯(lián)，如實(shí)驗(yàn)部分8.5中所述；泳道B，頂排反應(yīng)對(duì)照；Oxo-HES50/0.7與FBA改性的DNA在pH4.6下的偶聯(lián)，如實(shí)驗(yàn)部分8.5中所述；泳道C，頂排H-Cys(H)-HES50/0.7與FBA改性的DNA在pH8.0下的偶聯(lián)，如實(shí)驗(yàn)部分8.5中所述；泳道D,頂排反應(yīng)對(duì)照；Oxo-HES50/0.7與FBA的改性DNA在pH8.0下的偶聯(lián)，如實(shí)驗(yàn)部分8.5中所述；泳道E:頂排反應(yīng)對(duì)照；FBA改性的DNA在水中，無(wú)HES衍生物；泳道A，底排H-Cys(H)-HES50/0.7與曱?；胚岣男缘腄NA在pH4.6下的偶聯(lián)，如實(shí)驗(yàn)部分8.5中所述；泳道B，底排反應(yīng)對(duì)照；Oxo-HES50/0.7與甲?；胚岣男缘腄NA在pH4.6下的偶聯(lián)，如實(shí)驗(yàn)部分8.5中所述；泳道C,底排H-Cys(H)-HES50/0.7與曱酰基吲哚改性的DNA在pH8.0下的偶聯(lián)，如實(shí)驗(yàn)部分8.5中所述；泳道D,底排反應(yīng)對(duì)照；Oxo-HES50/0.7與曱?；胚岣男訢NA在pH8.0下的偶聯(lián)，如實(shí)驗(yàn)部分8.5中所述；泳道E:底排反應(yīng)對(duì)照；曱?；?。呆改性的DNA在水中，無(wú)HES書(shū)f生物。圖4-6表示通過(guò)HPLC反相色譜法在290nm下UV檢測(cè)，對(duì)柔紅霉素-HES偶聯(lián)物粗品的分析，該偶聯(lián)物從H-Cys(H)-HES50/0.7與柔紅霉素經(jīng)p塞唑烷形成而得到，如以下實(shí)驗(yàn)部分9.中所述。圖4:偶聯(lián)物粗品的HPLC分析；圖7:圖8:圖9:圖10圖5:柔紅霉素的HPLC分析；圖6:H畫(huà)Cys(H)-HES50/0.7的HPLC分析；圖7-9表示通過(guò)HPLC反相色鐠法在220nm下UV檢測(cè)，對(duì)泰樂(lè)菌素—HES偶聯(lián)物粗品的分析，該偶聯(lián)物從H-Cys(H)-HES50/0.7與泰樂(lè)菌素經(jīng)噻唑烷形成而得到，如以下實(shí)驗(yàn)部分9.中所述。偶聯(lián)物粗品的HPLC分析泰樂(lè)菌素的HPLC分析H-Cys(H)-HES50/0.7的HPLC分析表示通過(guò)SDS凝膠電泳對(duì)肽-HES偶聯(lián)物粗品的分析，如以下實(shí)驗(yàn)部分IO.中所述。泳道X:Roti-MarkSTANDARD(CarlRothGmbH+Co.KG，Karlsruhe,D)從頂端到底部的分子量標(biāo)記200kDa、119kDa、66kDa、43kDa、29kDa、20kDa、14.3kDa泳道A:HES10/0.7與肽在DMF中21。C下的偶聯(lián)HES10/0.7與肽在DMF中37。C下的偶聯(lián)反應(yīng)對(duì)照肽在DMF中50。C下HES10/0.7與肽在50°C、pH4.6下的偶聯(lián)HES10/0.7與肽在DMF中50。C下的偶聯(lián)HES10/0.7與肽在1%三硝基甲笨、50°C、pH4.6下的泳迢B:泳道C:泳道D:泳道E:泳道F:偶聯(lián)泳道G:的偶聯(lián)HES10/0.7與肽在DMF中、1%三硝基曱苯、50。C下實(shí)施例1.H-Cys(S-t-Bu)畫(huà)HES10/0.4的合成1.1從氧化的HES合成氨基HES10/0.4將Oxo-HES10/0.4(4g,MW=10.9kDa,DS=0.4,SupramolParenteralColloidsGmbH,Rosbach-Rodheim，D)在真空中80°C下加熱整夜，氬氣下溶解入無(wú)水二曱基亞砜中(25mL,Fluka,Sigma隱AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)并添力o1,4-二氨基丁烷(4.0mL,Fluka，Sigma誦AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)。45。C下攪拌24h后將該反應(yīng)混合物添加到2-丙醇U25mL,CarlRothGmbH+Co.KG,Karlsruhe,D)中并在-20。C下保溫培養(yǎng)1h。將沉淀產(chǎn)物在4。C下離心過(guò)濾收集，用2-丙醇(100mL)洗滌并離心過(guò)濾收集。將該粗產(chǎn)物溶解在水(20mL，Milli-Q)中，用Milli-Q水透析43h(SnakeSkin透析管，3.5kDaMWCO,PerbioSciencesDeutschlandGmbH,Bonn,D),然后冷凍干燥。分離產(chǎn)物的收率為65%。1.2從氨基HES合成Fmoc-Cys(stBu)-HES10/0.4將Fmoc-Cys(S國(guó)tBu)-OH(150mg,Fluka，Sigma-AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)和l-羥基-lH畫(huà)苯并三哇(61.4mg,Aldrich,Sigma-AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)溶解在N，N-二曱基曱酰胺(3.5mL，肽合成級(jí)，Biosolve,Valkenswaard,NL)中并添加N，N'陽(yáng)二異丙基石友二亞胺(54.3|aL，F(xiàn)luka，Sigma-AldrichChemieGmbH,Taufkirchen，D)。在21°C下保溫培養(yǎng)30min后，添力卩1.1中所得的氨基HES10/0.4(0.35g),室溫下攪拌整夜后，將該反應(yīng)混合物添加到冰冷的丙酮(CarlRothGmbH+Co.KG,Karlsruhe,D)與乙醇(DAB,Sonnenberg,Braunschweig,D)的1:1混合物(35mL，v/v)中，-20°(:下保溫培養(yǎng)1h。將沉淀產(chǎn)物在4。C下離心分離收集、溶解在水中(20mL,Milli-Q)并添加二氯甲烷(20mL,CarlRothGmbH+Co,KG,Karlsmhe,D)。將該混合混合均勻并離心分離。將上層含水液用Milli-Q水(SnakeSkindialysistubing,3.5kDaMWCO,PerbioSciencesDeutschlandGmbH，Bonn,D)透析41小時(shí)并冷凍千燥。分離產(chǎn)物的收率為78%。1.3從Fmoc-Cys(stBu)曙HES10/0.4合成H-Cys(stBu)國(guó)HES10/0.4將1.2中所得Fmoc-Cys(S-tBu)HES10/0.4(0.35g)溶解在艱。定溶液冷的丙酮與乙醇的1:1混合物(35mL，v/v)中并在-20。C下保溫培養(yǎng)1h。將沉淀產(chǎn)物在4。C下離心分離收集，用叔丁基甲基醚(25mL,AcrosOrganics，Geel，B)洗滌并在-20。C下保溫培養(yǎng)1h。將沉淀產(chǎn)物在4。C下離心分離收集并在氮?dú)饬髦懈稍?。分離產(chǎn)物的收率為68%。2.醛基HES10/0.7的合成2.1從氧化的HES合成氨基HES10/0.7將Oxo畫(huà)HES10/0.7(6.02g，MW=14.7kDa,DS=0.76,SupramolParenteralColloidsGmbH,Rosbach國(guó)Rodheim，D)在真空中80°C下加熱16.5h，氬氣下溶解入無(wú)水二甲基亞石風(fēng)中(25mL,Fluka，Sigma-AldrichChemieGmbH，Tautkirchen,D)并添力o1,4-二氨基丁烷(5.1mL,Fluka，Sigma-AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)。40。C下攪拌17h后將該反應(yīng)混合物添加到水冷的丙酮與乙醇的1:1混合物U50mL，v/v)中。將沉淀產(chǎn)物在4。C下離心過(guò)濾收集，用冰冷的丙酮與乙醇的1:1混合物(40mL，v/v)洗滌并離心過(guò)濾收集。將該粗產(chǎn)物溶解在水(80mL)中，用Milli-Q水透析42h(SnakeSkin透析管，3.5kDaMWCO，PerbioSciencesDeutschlandGmbH，Bonn,D)，然后冷凍干燥。分離產(chǎn)物的收率為67%。2.2從氨基HES合成醛基HES10/0.7將4畫(huà)曱?；綍跛?75mg，LancasterSynthesis,Frankfurt/Main,D)和l-羥基-lH-苯并三峻(115mg，Aldrich,Sigma-AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)溶解在N，N-二曱基甲酰胺(DMF，5mL，肽合成級(jí)，Biosolve，Valkenswaard,NL)中并添加N,N'-二異丙基碳二亞胺(102|aL,Fluka,Sigma-AldrichChemieGmbH,Taufkirchen,D)。在室溫下保溫培養(yǎng)30min后，添加氨基HES10/0.7(0.5g,MW=14.7kDa,DS=0.76)。室溫下振蕩整夜后，將該反應(yīng)混合物添加到2-丙醇(30mL,CarlRothGmbH+Co.KG，Karlsruhe,D)中并在-20。C下保溫培養(yǎng)1h。將沉淀產(chǎn)物在4。C下離心過(guò)濾收集，用2-丙醇(30mL)洗滌并離心過(guò)濾收集。將該粗產(chǎn)物溶解在水(lOmL,Milli-Q)62中,用Milli-Q水透析44h(SnakeSkin透析管,3.5kDaMWCO,PerbioSciencesDeutschlandGmbH,Bonn,D)，然后冷凍干燥。分離產(chǎn)物的收率為86%。3.醛基HES50/0.7的合成3.1從氧化的HES合成氨基HES50/0.7將Oxo國(guó)HES50/0.7(6.09g，MW=56.7kDa，DS=0.76,SupramolParenteralColloidsGmbH,Rosbach-Rodheim,D)在真空中80°C下加熱16.5h，氬氣下溶解入無(wú)水二曱基亞砜中(32mL,Fluka，Sigma-AldrichChemieGmbH，Tautkirchen,D)并添力口1,4-二氨基丁烷(1.2mL,Fluka，Sigma-AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)。40。C下攪拌17h后將該反應(yīng)混合物添加到水冷的丙酮與乙醇的1:1混合物(150mL,v/v)中。將沉淀產(chǎn)物在4。C下離心過(guò)濾收集，用冰冷的丙酮與乙醇的1:1混合物(40mL，v/v)洗滌并離心過(guò)濾收集。將該粗產(chǎn)物溶解在水(80mL)中，用Milli-Q水透析42h(SnakeSkin透析管，3.5kDaMWCO,PerbioSciencesDeutschlandGmbH,Bonn，D),然后冷凍干燥。分離產(chǎn)物的收率為82%。3.2從氨基HES合成醛基HES50/0.7將4-曱?；郊姿?124mg，LancasterSynthesis,Frankfurt/Main,D)和l畫(huà)羥基-lH-苯并三峻(174mg，Aldrich,Sigma-AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)溶解在N，N-二曱基曱酰胺(DMF,38mL，肽合成級(jí)，Biosolve，Valkenswaard,NL)中并添加N，N'-二異丙基碳二亞胺(155jLiL，F(xiàn)luka,Sigma-AldrichChemieGmbH，Taufkirchen，D)。在室溫下保溫培養(yǎng)30min后，添加氨基HES50/0.7(3.80g，MW=56.7kDa，DS=0.76)。室溫下振蕩整夜后，將該反應(yīng)混合物添加到2-丙醇(160mL,CarlRothGmbH+Co.KG，Karlsruhe,D)中并在-20。C下保溫培養(yǎng)lh。將沉淀產(chǎn)物在4。C下離心過(guò)濾收集，溶解在DMF(20mL)中，用2-丙醇如上所述沉淀并離心過(guò)濾收集。將該粗產(chǎn)物溶解在水中，用Milli-Q水透析24h(SnakeSkin透析管，3.5kDaMWCO，PerbioSciencesDeutschlandGmbH,Bonn,D),然后冷凍千燥。將產(chǎn)物溶解在水(20mL)中，用冰冷的丙酮與乙醇的1:1混合物(150mL,v/v)沉淀，-20匸下保溫培養(yǎng)1h并離心過(guò)濾收集。將該粗產(chǎn)物溶解在水(29mL)中，用Milli-Q水透析24h(SnakeSkin透析管，10kDaMWCO,PerbioSciencesDeutschlandGmbH，Bonn,D)，然后冷凍干燥。分離產(chǎn)物的收率為77%。4.從H-Cys(H)-HES10/0.4和氧化的EPO形成瘙唑烷4.1H-Cys(StBu)-HES10/0.4的脫保護(hù)將實(shí)施例1中得到的H-Cys(StBu)-HES10/0.4(10mg)溶解在醋酸鈉緩沖液中(1mL,0,1M，pH4.6,10mMEDTA)并添加鹽酸三-(2-羧乙基)-膦(2.8mg，TCEP，AcrosOrganics,Geel，B)。將該反應(yīng)混合物在室溫下保溫培養(yǎng)30min并滲濾除去過(guò)量的TCEP:將反應(yīng)混合物用緩沖液(磷酸鈉，0.1M，pH8.1,ImMEDTA)稀釋至0.5mL,在Vivaspin500濃縮器(VivaScience,5kDaMWCO，Hannover,Germany)中于13000xg、20。C下離心分離10min。用緩沖液將殘余液稀釋至0.5mL并如上所述離心分離35min，重復(fù)該洗滌步驟三次。用相同的反應(yīng)緩沖液將H-Cys(H)-HES10/0.4溶液稀釋至150nL,最終計(jì)算濃度為66.6ug/mL。4.2與氧化的EPO的偶聯(lián)為制備氧化的EPO,向保持在(TC共20mL的2.0mg/mLEPO溶液(重組制備的EPO,具有人類(lèi)EPO的氨基酸序列且與可商購(gòu)的Epoietinot:Erypo,ORTHOBIOTECH,Jansen-Cilag或EpoietinP:NeoRecormon,Roche具有類(lèi)似或?qū)嵸|(zhì)上相同的特性，參見(jiàn)EP0148605、EPO205564、EPO411678)添力口2.2mL10mM偏高石典酸鈉的冰冷溶液，得到最終濃度1mM的偏高^(guò)典酸鈉。將該混合物在冰浴中0。C下黑暗保溫培養(yǎng)1小時(shí)，添加40丙三醇終止反應(yīng)，再保溫5分鐘。緩沖液混合物變成pH5.5醋酸鈉緩沖液。向所得氧化的EPO(14.9|aL,1.34mg/mL,pH5.5的醋酸鈉緩沖液)中添加4.1中所得的H-Cys(H)-HES10/0.4溶液(5pL)。室溫下保溫培養(yǎng)21h后，通過(guò)SDS凝膠電泳分析該反應(yīng)混合物。采用XCellSureLockMiniCell(InvitrogenGmbH,Karlsruhe,D)和ConsortE143電源(CONSORTnv，Tumhout，B)進(jìn)行SDS凝膠電泳。將10%的Bis/Tris凝膠與在還原條件下的MOPS連續(xù)緩沖液(均來(lái)自InvitrogenGmbH,Karlsruhe,D)—起按照廠家說(shuō)明書(shū)使用。5.從H-Cys(H)-肽-NH2和醛基HES形成p塞唑烷向在其N(xiāo)-末端帶有自由半胱氨酸殘基的肽溶液(2yL,15jLig，3147g/mol，在DMF中7.5mg/mL，H-CLPSLEGNMQQPSEFHCMMNWSSHIAAC-NH2，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)Fmoc固相合成及HPLC純化得到)中添加20juL在反應(yīng)緩沖液(參見(jiàn)表1,超聲浴中脫氣15min)中的醛基HES溶液(參見(jiàn)表1)，將該混合物室溫下保溫培養(yǎng)整夜。采用XcellSureLockMiniCell(InvitrogenGmbH,Karlsruhe,D)和ConsortE143電源(CONSORTnv,Tumhout,B)進(jìn)行SDS凝月交電泳分析。將10%的Bis/Tris凝膠與在還原條件下的MOPS連續(xù)緩沖液(均來(lái)自InvitrogenGmbH,Karlsruhe,D)—起4姿照廠家j兌明書(shū)^f吏用。表1:反應(yīng)條件<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>6.結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果可從圖中看出。如可從以上實(shí)施例中看出的，采取了兩種不同的策略，一種情形中(參見(jiàn)4.)，羰基通過(guò)高碘酸鹽氧化引入EPO的多糖，并與含a-SH-(3氨基的HES偶聯(lián)。這種HES10/0.4衍生物從在還原末端氧化的HES通過(guò)兩步合成。該氧化的HES經(jīng)已知步驟轉(zhuǎn)化成氨基HES(參見(jiàn)1.1.),隨后與被保護(hù)的半胱氨酸(Fmoc-Cys(StBu)-OH)酰化(參見(jiàn)1.2.)，并脫保護(hù)(參見(jiàn)1.3.)。另一條路線(參見(jiàn)5.)采用已知氨基HES(參見(jiàn)2丄和3.1.)與4-甲?；綍跛岷驮谄銷(xiāo)-端帶有未保護(hù)的半胱氨酸的肽通過(guò)?；铣傻娜┗鵋ES10/0.7和酪基HES50/0.7(參見(jiàn)2.2.和3.2.)。兩種策略都實(shí)現(xiàn)了幾乎完全轉(zhuǎn)化(參見(jiàn)圖1和2)。醛基HES與Cys-肽的偶聯(lián)在pH4.6和pH8.0下進(jìn)行得同樣好(參見(jiàn)圖2，泳道A和D或者泳道B和E)。在這些反應(yīng)條件下該肽與HES10/0.7或HES50/0.7的反應(yīng)失敗。在改進(jìn)的反應(yīng)條件下，可期望成功。根據(jù)本發(fā)明的方法對(duì)蛋白質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)在于帶有N-末端半胱氨酸殘基的變異型可以通過(guò)表達(dá)獲得，而其它也便于化學(xué)選擇性偶聯(lián)的蛋白質(zhì)的修飾將不會(huì)通過(guò)這種路線獲得。由此，期望可以進(jìn)行通過(guò)蛋白質(zhì)的N-末端殘基與羥烷基淀粉-特別是羥乙基淀粉-的選擇性反應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明的方法另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于醛基、酮基或半縮醛基與a-SH-I3氨基反應(yīng)的化學(xué)選擇性。因而，期望不與例如蛋白質(zhì)或肽的側(cè)鏈的官能團(tuán)反應(yīng)。7.H-Cys(H)-HES50/0.7的合成7.1從氧化的HES合成氨基HES50/0.7將Oxo-HES50/0.7(10.1g，MW=44.2kDa，DS=0.7,Lot502,S罕amolParenteralColloidsGmbH,Rosbach-Rodheim，D)在真空中80。C下加熱72h,氬氣下溶解入無(wú)水二曱基亞石風(fēng)中(52mL,Fluka,Sigma-AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)并添加1，4畫(huà)二氨基丁烷(2.3mL，F(xiàn)luka，Sigma-AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)。45°C下攪拌19.5h后將該反應(yīng)混合物滴加到丙酮(CarlRothGmbH+Co.KG,Karlsruhe,D)與乙醇(DAB，Sonnenberg，Braunschweig,D)的1:1混合物(400mL，v/v)中。將沉淀產(chǎn)物離心過(guò)濾收集。將該粗產(chǎn)物溶解在水(100mL，Milli-Q)中，用20mM乙酸透析24h并用水透析3.5h(SnakeSkin透析管，10kDaMWCO，PerbioSciencesDeutschlandGmbH，Bonn,D)。冷凍干燥后分離產(chǎn)物的收率為84%。7.2從氨基HES50/0.7合成Fmoc-Cys(StBu)-HES50/0.7將Fmoc-Cys(S畫(huà)tBu)-OH(293.1mg,Fluka,Sigma國(guó)AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)和l-羥基-lH國(guó)苯并三唑(155.9mg,Aldrich,Sigma陽(yáng)AldrichChemieGmbH,Tautkirchen,D)溶解在N,N-二曱基曱酰胺(30mL，肽合成級(jí)，Biosolve，Valkenswaard，NL)中并添加N,N'-二異丙基石友二亞胺(138jaL，F(xiàn)luka，Sigma-AldrichChemieGmbH，Taufkirchen，D)。在21°C下保溫培養(yǎng)30min后，添力卩7.1中所得的氨基HES50/0.7(3.00g)。室溫下攪拌整夜后，將該反應(yīng)混合物添加到丙酮(CarlRothGmbH+Co.KG，Karlsruhe,D)與乙醇(DAB,Son謹(jǐn)berg,Braunschweig,D)的1:1混合物(230mL,v/v)中。將沉淀產(chǎn)物離心分離收集、溶解在DMF(30mL)中并再次如上所述沉淀。離心分離后，將粗產(chǎn)物溶解在水(30mL，Milli-Q)中，用MUli-Q水透析28小日寸(SnakeSkin透析管，10kDaMWCO,PerbioSciencesDeutschlandGmbH，Bonn,D)并冷凍干燥。分離產(chǎn)物的收率為98%。7.3從Fmoc-Cys(StBu)曙HES50/0.7合成H-Cys(StBu)-HES50/0.7將7.2中所得Fmoc-Cys(S-tBu)HES50/0.7(2.62g)溶解在DMF(20mL)中并添加p底咬(5mL,Fluka，Sigma-AldrichChemieGmbH，Taufkirchen,D)。室溫下攪拌15min后，將該反應(yīng)混合物添加到丙酮與乙醇的1:1混合物(190mL，v/v)中。將沉淀產(chǎn)物離心分離收集，溶解在DMF(25mL)中并再次如上所述沉淀。離心分離后，將粗產(chǎn)物溶解在水(25mL，Milli-Q)中，用Milli-Q水透析45小時(shí)(SnakeSkin透析管，10kDaMWCO，PerbioSciencesDeutschlandGmbH，Bonn，D)并冷凍干燥。分離產(chǎn)物的收率為83%。7.4從H-Cys(StBu)-HES50/0.7合成H-Cys(H)畫(huà)HES50/0.7將7.3中所得H-Cys(S-tBu)HES50/0.7(0.50g)溶解在50mM鹽酸三-(2-羧乙基)-膦溶液(5mL,TCEP,AcrosOrganics,Geel,B，在0.1MpH5.0的醋酸鈉緩沖液中)。室溫下攪拌lh后，將該反應(yīng)混合物用5mM的含水EDTA透析22小時(shí)并用水(Milli-Q)透析1小時(shí)(SnakeSkin透析管，IOkDaMWCO,PerbioSciencesDeutschlandGmbH，Bonn,D在Milli-Q水中)并冷凍干燥。分離產(chǎn)物的收率為978.與DNA的偶聯(lián)8.1曱?；艈B修飾的DNA的雜交將5，-甲酰基卩引咮修飾的DNA(按照A.Okamoto等人，TetrahedronLett.2002,43,4581-4583所介紹的曱?；胚嵝揎?，即3-甲酰基吲哚修飾；200juL，atdbio,Southampton,UK，lotA0795,M=9361g/mol,水中c=37.8序列XTACTCACCCTGCGAATTCAACTGCTGCCTC)與未修飾的互補(bǔ)鏈(199mL，atdbio,Southampton,UK,lotA0794,M=9376g/mol，水中c=38.2|aM，序濃度按l:l摩爾比雜交。將溶液混合并在95。C下保溫培養(yǎng)5min,得到最終濃度0.356mg/mL的雙鏈dna。將157jal(55.9mg)冷凍干燥過(guò)夜，溶解于水(27.9,Milli-Q)中，得到2mg/mL的最終計(jì)算濃度。該濃度為計(jì)算所得未經(jīng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。8.25'-氨基-C6-修飾DNA的雜交將5'-氨基-C6-修飾DNA(59.1nmol，biomers.netGmbH，Ulm，D,lot00033426—1DNA,M=9218g/mol，59.1nmol，序歹'J:Milli-Q)。將其(38.78iaL，595nM)基于廠商給出的濃度按1:l摩爾比與未#^乍的互^卜鏈(600mL，atdbio，Southampton,UK,lotA0794,M=9376g/mol，水中c=38.2|aM,序歹'J:在95。C下保溫培養(yǎng)5min，得到最終計(jì)算濃度0.667mg/mL的雙鏈DNA。該濃度為計(jì)算所得未經(jīng)實(shí)驗(yàn)4企測(cè)。8.3從5'-氨基-C6-修飾的DNA形成FBA-修飾的DNA將4_甲?；郊姿徵牾啺孵?50jiL，在DMF中4mg/mL,Novabiochem,MerckKGaA,Darmstadt,D)添力口到如8.2中所述得到的雙鏈5'-氨基-C6-修飾的DNA(500mL，在水中0.667mg/mL)中，將該清澈溶液在21。C下保溫培養(yǎng)5h。將該反應(yīng)混合物在Vivaspin500濃縮器(VivaScience,5kDaMWCO,Hannover,Germany)中在13000xg、21。C下離心分離15min。將殘余溶液用水(Milli-Q)稀釋至0.5mL,并如上述離心分離12min,重復(fù)該洗滌步驟三次。將DNA溶液用水稀釋至167|aL,得到2mg/mL的最終計(jì)算濃度。該濃度為計(jì)算所得未經(jīng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。8.4從H-Cys(H)-HES50/0.7和甲?；Ｒ龁B修飾的DNA形成p塞唑烷將在反應(yīng)緩沖液(參見(jiàn)以下表2)中的HES50/0.7衍生物溶液(4HL,147.5mg/mL，參見(jiàn)表l)添加到如8.1中所述得到的甲?；?。引咮修飾DNA的水溶液中(1.4jaL，2mg/mL)。21。C下保溫培養(yǎng)14h后，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分析該反應(yīng)混合物。采用AgagelStandard系統(tǒng)和MinicellPowerPackP20電源(均來(lái)自BiometraGmbH，G6ttingen,D)。2%瓊脂糖NEEOUltra-Qualitat(CarlRothGmbH+Co.KG,Karlsruhe,D)與0.5xTBE連續(xù)緩沖液一起在55V下使用1h。采用GelDoc2000凝膠文件編集系統(tǒng)與軟件QualityOneV4.0.3(均來(lái)自BIO-RAD實(shí)驗(yàn)室，Miinchen，D)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可參見(jiàn)圖2。表2:反應(yīng)條件<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>8.5從H-Cys(H)-HES50/0.7和FBA修飾的DNA形成嚷唑烷將在反應(yīng)緩沖液(參見(jiàn)以下表3)中的HES50/0.7衍生物溶液(4iaL,147.5mg/mL,參見(jiàn)以下表3)添加到如8.3中所述得到的FBA修飾dna的水溶液中(1.5mL,2mg/mL)。21°c下保溫培養(yǎng)14h后，如8.4中所述通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分析該反應(yīng)混合物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可參見(jiàn)圖3。表3:反應(yīng)條件<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>9.與有機(jī)小分子偶聯(lián)(此處抗生素(柔紅霉素)和細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑(泰樂(lè)菌素))通過(guò)形成p塞唑烷偶聯(lián)到有機(jī)小分子將如7.4中所述得到的H-Cys(H)-HES50/0.7(11.0mg)溶解到機(jī)小分子的DMF(參見(jiàn)以下表4)溶液(44|aL，具有濃度[A]mg/mL,13.4當(dāng)量，參見(jiàn)以下表4)中，21。C下保溫培養(yǎng)整夜并通過(guò)HPLC分析40pL該反應(yīng)混合物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可參見(jiàn)圖4-9。釆用柔紅霉素(Fluka,Sigma-Aldrich,Taufkirchen,D)和酒石酸泰樂(lè)菌素(均來(lái)自BioChemikagrade,Fluka，Sigma-Aldrich，Taufkirchen，D)作為有機(jī)小分子。為進(jìn)行HPLC分析，使用ReproSil-PURBasicC18柱150x4.6mmi,d.(Order#RI5.B9.S1546,Dr.MaischGmbH，Ammerbuch，D)和AktaBasic色譜分析系統(tǒng)(泵P900Ser.#01118816,UV-檢測(cè)器UV900Ser.#01120613，pH/傳導(dǎo)率-檢測(cè)器pH/C900Ser.#01120665，級(jí)分收集器Frac900Ser.#01120011以及軟件Unicorn5.0Ser.#01119821,均來(lái)自AmershamBiosciences,Freiburg,D)。對(duì)于所有分析采用以下方法-緩沖液A:具有0.1TFA的水(RotisolvLC-MSGarde,CarlRothGmbH+Co.KG,Karlsmhe，D)畫(huà)緩沖液B:15%具有0.1TFA的水與85%具有0.1%TFA的乙腈的混合物(均為RotisolvLC-MS級(jí)，CarlRothGmbH+Co.KG，Karlsruhe,D)。-梯度0。/。的緩沖液B，2柱體積(CV);線性梯度0-50%的緩沖液B15CV，線性梯度50-100。/。的緩沖液B7CV,100%緩沖液B7CV,00/o緩沖液B5CV。國(guó)220and290nm處的UV—檢測(cè)。-流速2m!7min。表4:反應(yīng)條件<table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>10.從H-Cys-肽和未修飾的HES形成瘞唑烷將在其N(xiāo)-末端帶有游離半胱氨酸殘基的肽溶液(liaL，20jug,2528g/mol,在DMF中20mg/mL，序歹'JH國(guó)Cys-Asn-Thr-Arg-Lys畫(huà)Arg-Ile陽(yáng)Arg曙Ile國(guó)Gln-Arg誦Gly-Pro-Gly國(guó)Arg-Ala-Phe-Val曙Thr-Ile-Gly-Lys-OH，SC623,NeoMPSS.A.，Strasbourg,F)添加到9mLHES10/0.7(在[反應(yīng)緩沖液]中408mg/mL(參見(jiàn)以下表5)，MW=9.2kDa,DS=0.7,Lot437,SupramolParenteralColloidsGmbH,Rosbach-Rodheim,D)的溶液中，將Triton-X100溶液(ljuL，在水中10%)添加到所選反應(yīng)物(參見(jiàn)以下表5)中，將該混合物在[B]。C下保溫培養(yǎng)整夜。為通過(guò)SDS凝膠電泳分析，采用XCellSureLockMiniCell(InvitrogenGmbHKarlsruhe,D)和ConsortE143電源(CONSORTnv,Turnhout，B)。將12%的Bis/Tris凝膠與在還原條件下的MOPS連續(xù)緩沖液(均來(lái)自InvitrogenGmbH,Karlsruhe,D)—起按照廠商說(shuō)明書(shū)使用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可參見(jiàn)圖10。表5:反應(yīng)條件<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>11.根據(jù)以上第8-10項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果11.1通過(guò)形成p塞唑烷與DNA偶聯(lián)(以上第8項(xiàng))通過(guò)形成噻唑烷與DNA的偶聯(lián)以?xún)煞N不同的醛修飾的DNA(參見(jiàn)以上第8.項(xiàng))實(shí)現(xiàn)。所需DNA-醛或者可商購(gòu)，如在曱酰基吲哚修飾的DNA情形中(參見(jiàn)以上第8.1項(xiàng))，或者從可商購(gòu)的5'-氨基-DNA和4-曱?；綍跛徵牾啺孵?參見(jiàn)以上第8.3項(xiàng))制備e含a-SH-(3氨基的HES(H-Cys(H)隱HES50/0.7)從H畫(huà)Cys(StBu)HES50/0.7通過(guò)用TCEP還原并通過(guò)沉淀和透析純化來(lái)制備(參見(jiàn)以上第7.4項(xiàng))。H-Cys(StBu)-HES50/0.7的制備與H-Cys(StBu)HES10/0.4的制備類(lèi)似(參見(jiàn)以上第4.1項(xiàng))。與兩種醛修飾的DNA的偶聯(lián)結(jié)果示于圖3中。較高分子量新帶的出現(xiàn)表明成功的偶聯(lián)。其增加的帶寬是由于偶聯(lián)物的HES部分的分子量分布。偶聯(lián)在pH4.6(泳道A)或pH8.0(泳道C)下實(shí)現(xiàn)。用H-Cys(H)-HES50/0.7的起始材料OxoHES50/0.7觀察不到偶聯(lián)(泳道B和D)。11.2與有機(jī)小分子的偶聯(lián)(以上第9項(xiàng))對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑(柔紅霉素，參見(jiàn)以下圖4)和抗生素(泰樂(lè)菌素，參見(jiàn)以下圖7),通過(guò)形成噻唑烷實(shí)現(xiàn)與有機(jī)小分子的偶聯(lián)。含a-SH-P氨基的HES起始材料(與偶聯(lián)反應(yīng)中濃度相同)作為寬帶出現(xiàn)，保留時(shí)間10min左右(參見(jiàn)以下圖6，9)。其增加的峰寬是由于HES的分子量分布。有機(jī)小分子化合物的HPLC分析(與偶聯(lián)反應(yīng)中濃度相同)示于圖5和8中。保留時(shí)間在HES起始材料和有機(jī)小分子化合物之間的新的寬峰的出現(xiàn)表明成功的偶聯(lián)(圖4和7)。寬峰的形成再一次反映了偶聯(lián)物的HES部分的分子量分布。ll.3用未修飾HES的偶聯(lián)(以上第10項(xiàng))對(duì)于N-末端帶有游離半胱氨酸殘基的肽(參見(jiàn)以上第IO項(xiàng))溶液，該溶液為在以DMF為溶劑且溫度范圍在2rC-5(TC之間的溶液(圖10,泳道A、B)、或者在pH4.6、50。C下的水性緩沖液中的溶液(圖10，泳道D),通過(guò)形成噻唑烷實(shí)現(xiàn)與未修飾HES的偶聯(lián)。5(TC下在去污劑TritonX-100存在下也能觀察到偶聯(lián)(圖10,泳道F和G)。較高分子量處新帶的出現(xiàn)表明了成功的偶聯(lián)。其增加的帶寬是由于偶聯(lián)物的HES部分的分子量分布。權(quán)利要求1.一種用于制備活性物質(zhì)與羥烷基淀粉的偶聯(lián)物的方法，其中活性物質(zhì)與羥烷基淀粉經(jīng)由具有以下式(I)、式(I’)或式(I”)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接其中R1、R2、R2’、R3、R3’和R4獨(dú)立地選自氫、任選地適宜取代的直鏈、環(huán)狀和/或支鏈烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳烷基，優(yōu)選氫，所述方法包括(A)使羥烷基淀粉或其包含醛基、酮基或半縮醛基的衍生物的醛基、酮基或半縮醛基團(tuán)與活性物質(zhì)或其包含如下α-SH-β氨基基團(tuán)的衍生物的α-SH-β氨基基團(tuán)反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式(I)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；或者與活性物質(zhì)或其包含如下α-SH-β氨基基團(tuán)的衍生物的α-SH-β氨基基團(tuán)反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式(I’)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；或者與活性物質(zhì)或其包含如下α-SH-β氨基基團(tuán)的衍生物的α-SH-β氨基基團(tuán)反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式(I”)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；其中R1、R2、R2’、R3、R3’和R4如上定義；或者(B)使活性組分或其包含醛基、酮基或半縮醛基的衍生物的醛基、酮基或半縮醛基團(tuán)與包含如下α-SH-β氨基基團(tuán)的羥烷基淀粉衍生物的α-SH-β氨基基團(tuán)反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式(I)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；或者與包含如下α-SH-β氨基基團(tuán)的羥烷基淀粉衍生物的α-SH-β氨基基團(tuán)反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式(I’)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；或者與包含如下α-SH-β氨基基團(tuán)的羥烷基淀粉衍生物的α-SH-β氨基基團(tuán)反應(yīng)，由此制備經(jīng)由具有式(I”)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接的所述活性物質(zhì)與所述羥烷基淀粉的偶聯(lián)物；其中R1、R2、R2’、R3、R3’和R4如上定義。2.權(quán)利要求1的方法，其中羥烷基淀粉具有以下式(II)的結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中R，、R"和R"，獨(dú)立地為氫、直鏈或支鏈羥烷基，或基團(tuán)—[(CR'R2)mO以CRV]廣OH其中，R1、R2、R和R"獨(dú)立地選自氫和烷基，優(yōu)選氫和甲基，m為2-4，其中m個(gè)基團(tuán)CR1112中的殘基R和R2可以相同或不同；n為0-20，優(yōu)選0-4;o為0-20,優(yōu)選2-4,其中當(dāng)n-0時(shí)，o不為0,并且其中o個(gè)基團(tuán)CR3R4中的殘基R和W可以相同或不同。3.權(quán)利要求2的方法，其中R，、R，，和R，，，獨(dú)立地為氫或2-羥乙基。4.權(quán)利要求l-3的方法，其中羥烷基淀粉為羥乙基淀粉。5.權(quán)利要求4的方法，其中羥乙基淀粉的分子量為1-300kD,更優(yōu)選2-200kD、更優(yōu)選10-150kD或4-130kD，更優(yōu)選10-100kD。6.權(quán)利要求4或5任一項(xiàng)的方法，其中羥乙基淀粉的摩爾取代度為0.1-3、優(yōu)選0.1-2、更優(yōu)選0.1-0.9或0.4-2，優(yōu)選0.4-1,3。7.權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)的方法，其中羥乙基淀粉優(yōu)選的羥乙基C2:C6取代比在2-20范圍內(nèi)。8.權(quán)利要求l-7任一項(xiàng)的方法，其中活性物質(zhì)選自蛋白質(zhì)、肽、小分子藥物、活性劑、糖蛋白、寡核苷酸，如DNA、RNA、PNA或其衍生物。9.權(quán)利要求8的方法，其中活性物質(zhì)選自包含a-SH-P氨基基團(tuán)的蛋白質(zhì)、肽和PNA，優(yōu)選包含半胱氨酸基團(tuán)，特別是N-末端半胱氨酸基團(tuán)。10.權(quán)利要求8或9任一項(xiàng)的方法，其中蛋白質(zhì)選自EPO、G-CSF、IFNa、IFN(3、ATIII、IL-2、IL-3、肌紅蛋白、SOD、BSA、rhEPO、rhG-CSF、rhIFNa、rhIFNP、rhATIII、rhlL陽(yáng)2、rhlL-3、A1AT、因子VII、因子VIII、因子IX、tPa禾口APC。11.權(quán)利要求8的方法，其中活性物質(zhì)選自包含醛基、酮基或半縮醛基的蛋白質(zhì)、糖蛋白或肽，優(yōu)選在多糖側(cè)鏈上含有醛基的糖蛋白，或者合成肽。12.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中羥烷基淀粉或其衍生物包含1-100，優(yōu)選1-15,特別優(yōu)選1個(gè)醛基、酮基和/或半縮醛基；或者其中羥烷基淀粉或其衍生物包含1-100、優(yōu)選1-15,特別優(yōu)選1個(gè)a-SH-(3氨基基團(tuán)。13.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中活性物質(zhì)包含1-15,優(yōu)選1-8,特別優(yōu)選1個(gè)醛基、酮基和/或半縮醛基；或者其中活性物質(zhì)包含1-15、優(yōu)選1-8，特別優(yōu)選1個(gè)a-SH-P氨基基團(tuán)。14.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中根據(jù)(A)，羥烷基淀粉的半縮醛基是未氧化形式的羥烷基淀粉的還原性末端的半縮醛基。15.權(quán)利要求l-14任一項(xiàng)的方法，其中包含所述醛基、酮基、半縮醛基或所述a-SH-P氨基的羥烷基淀粉衍生物由以下方法獲得，該方法包4舌(a)(1)通過(guò)開(kāi)環(huán)氧化反應(yīng)將至少一個(gè)醛基引入羥烷基淀粉，或者(a)(2)使羥烷基淀粉與至少一種至少雙官能的化合物反應(yīng)，所述化合物包含兩個(gè)官能團(tuán)Mi和Q，一個(gè)官能團(tuán)M,與羥烷基淀粉反應(yīng)，且另一個(gè)官能團(tuán)Q為(i)醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-P氨基；或(ii)化學(xué)改性生成醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-P氨基的官能團(tuán)。16.權(quán)利要求15的方法，其中在(a)(l)中，采用高碘酸鹽使羥烷基淀粉經(jīng)歷開(kāi)環(huán)氧化反應(yīng)，生成帶有至少一個(gè)醛基的羥烷基淀粉衍生物。17.權(quán)利要求15的方法，其中在(a)(2)中，官能團(tuán)M,與羥烷基淀粉上的OH-基或者羥烷基淀粉的氧化或未氧化的還原性末端反應(yīng)。18.權(quán)利要求15的方法，其中在(a)(2)中，官能團(tuán)M,為羧基或反應(yīng)性羧基，官能團(tuán)Q為醛基、酮基或半縮醛基。19.權(quán)利要求18的方法，其中包含Mi和Q的雙官能化合物選自曱?；郊姿?、4-曱?；綍跛嵛宸交?、4-曱酰基苯曱酸N-羥基琥珀酰亞胺酯、4-(4-曱?；?3,5-二曱氧基苯氧基)丁酸，或者選自oc-酮羧酸、神經(jīng)氨酸或其衍生物以及磷酸吡。多醛的生物相容性化合物。20.權(quán)利要求15的方法，其中在(a)(2)(ii)中，該至少雙官能的化合物包含氨基M,和氨基Q。21.權(quán)利要求20的方法，其中至少雙官能的化合物為具有1-20個(gè)碳原子的任選取代的二氨基鏈烷，優(yōu)選選自以下的化合物1，2-二氨基乙烷、1，3-二氨基丙烷、1,4-二氨基丁烷、1,5-二氨基戊烷、1,6-二氨基己烷、1，7-二氨基庚烷、1,8-二氨基辛烷、1，9-二氨基壬烷、1,10-二氨基癸烷、l，ll-二氨基十一烷、1,12-二氨基十二烷、1,13-二氨基十三烷、1,14-二氨基十四烷、1，15-二氨基十五烷、1,16-二氨基十六烷、1,17-二氨基十七烷、1，18-二氨基十八烷、1,19-二氨基十九烷、1，20-二氨基二十烷；或具有下式的化合物H2N—[(CRV')pO〗q[CR3'R4']「NH2其中R"、R2'、113'和114'獨(dú)立地選自氬和烷基，優(yōu)選氫和曱基，p為2-4，其中p個(gè)基團(tuán)CRi'Rr中的殘基R^'和R"可以相同或不同，q為0-20,優(yōu)選0-10;r為0-20，優(yōu)選2-4,其中當(dāng)q-0時(shí)，r不為0，并且其中r個(gè)基團(tuán)CR^W中的殘基R'和y可以相同或不同。22.權(quán)利要求20或21的方法，還包括使羥烷基淀粉與包含兩個(gè)氨基Mi和Q的至少雙官能的化合物反應(yīng)生成的羥烷基淀粉衍生物在其氨基Q與包含醛基、酮基和半縮醛基的另一種雙官能化合物反應(yīng)，生成具有醛基、酮基或半縮醛基的羥烷基淀粉衍生物。23.權(quán)利要求22的方法，其中該另一種雙官能化合物選自曱酰基苯曱酸、4-曱?；綍跛嵛宸交?、4-曱?；綍跛酦-羥基琥珀酰亞胺酯、4-(4-曱?；?3，5-二甲氧基苯氧基)丁酸和4-甲?；郊姿狒?4.權(quán)利要求20-23任一項(xiàng)的方法，其中羥烷基淀粉通過(guò)其任選氧化的還原性末端與官能團(tuán)M,反應(yīng)。25.權(quán)利要求24的方法，其中統(tǒng)計(jì)學(xué)上高于50%、優(yōu)選至少55%、更優(yōu)選至少60%、更優(yōu)選至少65%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少75%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少85%、更優(yōu)選至少90%、進(jìn)一步優(yōu)選至少95%如95%、96%、97%、98%或99%用于給定反應(yīng)的羥烷基淀粉分子經(jīng)每個(gè)羥烷基淀粉分子的至少一個(gè)任選氧化的還原性末端反應(yīng)。26.權(quán)利要求15的方法，其中在(a)(2)(i)中，官能團(tuán)M!選自羧基、反應(yīng)性羧基、羧酸酐、羧酸酰卣、異氰酸酯、異硫氰酸酯、氯曱酸酯以及環(huán)氧基團(tuán)，官能團(tuán)Q為醛基、酮基、半縮醛基。27.權(quán)利要求26的方法，其中官能團(tuán)1V^與羥烷基淀粉上的OH基團(tuán)反應(yīng)。28.權(quán)利要求15的方法，其中在(a)(2)(i)中，官能團(tuán)Mi選自氨基和a-SH-(3氨基，官能團(tuán)Q為a-SH-p氨基。29.權(quán)利要求28的方法，其中官能團(tuán)M!與羥烷基淀粉的任選氧化的還原性末端反應(yīng)。30.權(quán)利要求29的方法，其中統(tǒng)計(jì)學(xué)上優(yōu)選超過(guò)50%、優(yōu)選至少55%、更優(yōu)選至少60%、更優(yōu)選至少65%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少75%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少85%、更優(yōu)選至少90%,進(jìn)一步優(yōu)選至少95%如95%、96%、97%、98%或99%用于給定反應(yīng)的羥烷基淀粉分子經(jīng)每羥烷基淀粉分子至少一個(gè)任選氧化的還原性末端反應(yīng)。31.權(quán)利要求15的方法，其中在(a)(2)(i)中，包含所述a-SH-13氨基的羥烷基淀粉通過(guò)如下方法得到，該方法包含使羥烷基淀粉在其任選氧化的還原性末端與包含官能團(tuán)M!以及作為官能團(tuán)Q的a-SH-(3氨基的化合物反應(yīng)。32.權(quán)利要求31的方法，其中包含M!和a-SH-P氨基的化合物為1，3-二氨基-2-巰基丙烷或2,3-二氨基-1-巰基丙烷。33.權(quán)利要求15的方法，其中在(a)(2)(ii)中，所述至少雙官能的化合物包含為羧基或反應(yīng)性羧基的N^以及為被保護(hù)的a-SH-P氨基的Q。34.權(quán)利要求15的方法，其中所述至少雙官能的化合物選自D-、L-PGi-Cys(PG2)-OH或者其外消旋混合物、以及它們的活性酯，其中PG!可以是氨基的任何適宜的保護(hù)基，優(yōu)選自叔丁氧羰基(Boc)或9-藥基甲氧羰基(Fmoc)，PG2可以是硫醇的任何適宜的保護(hù)基，優(yōu)選自三苯曱基(Trt),對(duì)曱氧基三苯曱基(Mmt)、S-叔丁基硫基(S-t-Bu)和乙酰氨基甲基(Acm)。35.權(quán)利要求15的方法，其中在(a)(2)(ii)中，包含所述oc-SH-13氨基的羥烷基淀粉通過(guò)以下方法得到，該方法包括將羥烷基淀粉在其還原性末端任選地氧化；使該氧化或未氧化的還原性末端與一種化合物的官能團(tuán)M,反應(yīng)，該化合物除M!外還包含官能團(tuán)Q，生成第一羥烷基淀粉衍生物；以及使該第一羥烷基淀粉衍生物的官能團(tuán)Q與一種化合物的官能團(tuán)V反應(yīng)，該化合物除V外還包含被任選地保護(hù)的a-SH-(3氨基，生成任選地保護(hù)的a-SH-(3氨基官能化的羥烷基淀粉衍生物。36.權(quán)利要求35的方法，其中包含M!和Q的化合物為二氨基化合物或碳二咪唑或N，N，-二琥珀酰亞胺基碳酸酯。37.權(quán)利要求36的方法，其中至少雙官能的化合物為具有1-20個(gè)碳原子的任選取代的二氨基鏈烷，優(yōu)選選自以下的化合物1,2-二氨基乙烷、1,3-二氨基丙烷、1,4-二氨基丁烷、1,5-二氨基戊烷、1，6-二氨基己烷、1,7-二氨基庚烷、1,8-二氨基辛烷、1，9-二氨基壬烷、1,10-二氨基癸烷、1,11-二氨基十一烷、1,12-二氨基十二烷、1，13-二氨基十三烷、1,14-二氨基十四烷、1,15-二氨基十五烷、1,16-二氨基十六烷、1,17-二氨基十七烷、1,18-二氨基十八烷、1，19-二氨基十九烷、1,20-二氨基二十烷；或具有下式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>其中R"、R2'、！13'和114'獨(dú)立地選自氫和烷基，優(yōu)選氫和甲基，p為2-4，其中p個(gè)基團(tuán)CRi'R"中的殘基W和R"可以相同或不同，q為0-20,優(yōu)選0-10;r為0-20，優(yōu)選2-4,其中當(dāng)q=0時(shí)，r不為0，并且其中r個(gè)基團(tuán)CR3'R4'中的殘基R'和F^'可以相同或不同。38.權(quán)利要求35-37任一項(xiàng)的方法，其中所述包含V和任選地保護(hù)的a-SH-(3氨基的化合物為半胱氨酸或其衍生物，V為羧基或反應(yīng)性羧基，優(yōu)選反應(yīng)性酯或羧酸酐，或者所述包含V的化合物為1,3-二氨基-2-巰基丙烷或2,3-二氨基-1-巰基丙烷。39.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中包含所述醛基、酮基、半縮醛基或所述a-SH-P氨基的活性物質(zhì)，優(yōu)選任選改性的蛋白質(zhì)、肽、合成肽或寡核苷酸由以下方法獲得，該方法包括(b)(1)在其制備或化學(xué)改性期間，將至少一個(gè)醛基、酮基、半縮醛基或至少一個(gè)cc-SH-(3氨基引入該活性物質(zhì)，或者(b)(2)使該活性物質(zhì)與至少雙官能的化合物反應(yīng)，所述化合物包含兩個(gè)官能團(tuán)M2和Q,—個(gè)官能團(tuán)M2與活性物質(zhì)反應(yīng)，且另一個(gè)官能團(tuán)Q為(i)醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-P氨基；或(ii)化學(xué)改性生成醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-(3氨基的官能團(tuán)。40.權(quán)利要求39的方法，其中在(a)(l)中，活性物質(zhì)為通過(guò)有機(jī)合成制備的、優(yōu)選采用合成樹(shù)脂生產(chǎn)的蛋白質(zhì)或肽，該合成方法允許生成醛基官能化的、酮基官能化的、半縮醛基官能化的或oc-SH-(3氨基官能化的蛋白質(zhì)或肽；或者其中在(b)(l)中，活性物質(zhì)為采用表達(dá)栽體生產(chǎn)的蛋白質(zhì)或肽，該載體得到可導(dǎo)致生成醛基官能化的、酮基官能化的、半縮醛基官能化的或a-SH-(3氨基官能化的蛋白質(zhì)或肽；或者其中在(b)(l)中，活性物質(zhì)為蛋白質(zhì)或肽，且該蛋白質(zhì)和肽的主鏈被醛基、酮基、半縮醛基或a-SH-P氨基取代；或者其中在(b)(l)中，活性物質(zhì)為蛋白質(zhì)或肽，其中所述醛基、酮基、半縮醛基或所述a-SH-P氨基直接與該蛋白質(zhì)或肽的主鏈鍵接或者為該主4連的側(cè)鏈的一部分。41.權(quán)利要求39的方法，其中在(b)(l)中，活性物質(zhì)為蛋白質(zhì)或肽，且所述醛基、酮基或半縮醛基包含在多肽的潭水化合物部分中。42.權(quán)利要求41的方法，其中所述碳水化合物部分選自羥基醛、羥基酮及其化學(xué)改性物。43.權(quán)利要求41的方法，其中碳水化合物部分是天然存在的碳水化合物部分的衍生物且選自葡萄糖、半乳糖、甘露糖和唾液酸，可被任選地化學(xué)氧化或酶化氧化，優(yōu)選碳水化合物側(cè)鏈的氧化的半乳糖或者氧化的唾液酸殘基，更優(yōu)選碳水化合物側(cè)鏈的末端半乳糖或唾液酸殘基，末端碳水化合物部分的氧化優(yōu)選經(jīng)酶途徑或經(jīng)化學(xué)途徑進(jìn)行，化學(xué)氧化優(yōu)選采用高碘酸鹽進(jìn)行。44.權(quán)利要求41的方法，其中碳水化合物部分為天然存在的碳水化合物部分的衍生物且為末端半乳糖，其經(jīng)酶氧化或經(jīng)化學(xué)氧化，其中該末端半乳糖殘基任選地在末端唾液酸裂解后得到。45.權(quán)利要求39的方法，其中在(b)(2)(i)中，oc-SH-p氨基包含在活性物、優(yōu)選蛋白質(zhì)或肽的半胱氨酸殘基中，該半胱氨酸殘基優(yōu)選為活性物質(zhì)的N-末端半胱氨酸殘基。46.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中活性物質(zhì)為具有N-末端半胱氨酸殘基的改性蛋白質(zhì)或肽，所述半胱氨酸殘基不是二硫橋的構(gòu)成部分。47.權(quán)利要求46的方法，其中具有N-末端半胱氨酸殘基的改性蛋白質(zhì)或肽為天然存在的蛋白質(zhì)或肽的變異型，通過(guò)以下得到(1)將半胱氨酸殘基添加到N-末端氨基酸上，(2)用半胱氨酸取代N-末端氨基酸，或者(3)消去N-末端氨基酸直至得到末端半胱氨酸。48.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中反應(yīng)(A)或(B)在溫度0-40。C、優(yōu)選0-25。C、特別優(yōu)選20-25。C，溶劑存在下，pH3.5-10、優(yōu)選4-8、特別優(yōu)選4.8-8.0下進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選0.1-24h、特別為約21h。49.權(quán)利要求48的方法，其中溶劑選自水、水性緩沖液、DMF、DMSO、DMA及其混合物。50.權(quán)利要求48或49任一項(xiàng)的方法，其中羥烷基淀粉與活性物質(zhì)的分子比為約1:1到200:1，優(yōu)選10:1到100:1,特別為40:1到70:1。51.—種可由權(quán)利要求l-50任一項(xiàng)的方法得到的活性物質(zhì)與羥烷基淀粉的偶聯(lián)物。52.—種活性物質(zhì)與羥烷基淀粉的偶聯(lián)物，其中活性物質(zhì)和羥烷基淀粉通過(guò)具有式(i)、(r)或(r，)所示結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中R!、R2、R2，、R3、Ry和R4獨(dú)立地選自氫、任選地適宜取代的直鏈、環(huán)狀和/或支鏈烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳烷基，優(yōu)選氬，所述偶聯(lián)物具有式(IV)、UV，)或(IV，，)所示的結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>(IV，)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>(IV，，)其中HAS，是羥烷基淀粉或其與醛基、酮基或半縮醛基鍵接的衍生物的殘基；其中AS，是活性物質(zhì)或其與a-SH-P氨基鍵接的衍生物的殘基；或者具有式(V)、(V，)或(V")所示的結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中HAS，是羥烷基淀粉或其與a-SH-P氨基鍵接的衍生物的殘基；其中AS，是活性物質(zhì)或其與醛基、酮基或半縮醛基鍵接的衍生物的殘基。53.權(quán)利要求52的偶聯(lián)物，其中偶聯(lián)物選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中Rs如同以上對(duì)R!到R4的定義，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>式IV，a、IV，b、V，b或V，c中，n為整數(shù)，優(yōu)選n是0-20，并且在式Va、Vb、V，d或V，e中，n為整數(shù)，優(yōu)選n是l-20。54.權(quán)利要求52的偶聯(lián)物，其中偶聯(lián)物為其中R，、R，，和/或R，，，如同對(duì)式II的定義，并且其中在HES的至少一個(gè)葡萄糖單元中，R，、R，，和/或R，，，的至少一個(gè)獨(dú)立地選自以下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>(VId)其中n為整數(shù)，優(yōu)選1-20和/或其中R，、R，，和/或R，，，的至少一個(gè)為-(CH2CH20)m-R",其中m為整數(shù)，優(yōu)選1-3，W選自式(Via)、(VIb)、(VIc)和(VId)。54.55.—種a-SH-P氨基官能化的羥烷基淀粉衍生物，選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>(VII)其中Rs如同以上對(duì)R!到R4的定義，以及其中n為整數(shù)，優(yōu)選0-20,或者選自其中R，、R，，和/或R，，，如同對(duì)式II的定義，并且其中在HES的至少一個(gè)葡萄糖單元中，R'、R，，和/或R，，，的至少一個(gè)獨(dú)立地選自以下和(VI,b)^"NHnNH20(VI'c)其中n為整數(shù)，優(yōu)選1-20和/或其中R，、R，，和/或R，"的至少一個(gè)為-(CH2CH20)m-R糾，其中m為整數(shù)，優(yōu)選1-3,R胖選自式(VI，a)、(VI，b)、和(VI，c)。56.權(quán)利要求51-54任一項(xiàng)的偶聯(lián)物，用在人體或動(dòng)物體的治療方法中。57.權(quán)利要求51-54任一項(xiàng)的偶聯(lián)物，用作治療劑。58.—種藥物組合物，其包含權(quán)利要求51-54任一項(xiàng)的偶聯(lián)物。59.權(quán)利要求58的藥物組合物，其還包含至少一種藥學(xué)上可接受的稀釋劑、輔料或載體。60.—種組合物，其包含權(quán)利要求51-54任一項(xiàng)的活性物質(zhì)與羥烷基淀粉的偶聯(lián)物。全文摘要本發(fā)明涉及一種制備活性物質(zhì)與羥烷基淀粉的偶聯(lián)物的方法，并涉及活性物質(zhì)與羥烷基淀粉、優(yōu)選羥乙基淀粉的偶聯(lián)物，其中偶聯(lián)物通過(guò)羥烷基淀粉與活性物質(zhì)經(jīng)由具有式(I)、式(I’)或式(I”)結(jié)構(gòu)的化學(xué)殘基共價(jià)鍵接而制備，其中R₁、R₂、R_2＇、R₃、R_3＇和R₄獨(dú)立地選自氫、任選地適宜取代的直鏈、環(huán)狀和/或支鏈烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳烷基，優(yōu)選氫。文檔編號(hào)C08B31/00GK101262889SQ200680033326公開(kāi)日2008年9月10日申請(qǐng)日期2006年9月12日優(yōu)先權(quán)日2005年9月12日發(fā)明者H·諾爾勒,N·贊德申請(qǐng)人:弗雷澤紐斯卡比德國(guó)有限公司