專利名稱：灰樹花子實體或菌絲體x組分多糖的提純分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及了食用菌有效成分的提取分離方法，具體涉及了一種灰樹花子實 體或菌絲體多糖組分的提取分離方法。
背景技術(shù)：
灰樹花(Polyporus frondosus)隸屬于真菌門、擔(dān)子菌亞門、非褶菌目、多 孔菌科、多孔菌屬?；覙浠ㄊ侵氖秤谩⑺幱谜婢?，營養(yǎng)豐富，鮮美可口，是 "可食、可補、可藥，周身是寶"的大型真菌。灰樹花性平、味甘，可以用來治 療小便不利、水腫、腳氣、肝硬化腹水、糖尿病、高血壓和肥胖癥等疾病。
已知從灰樹花菌屬的菌絲體或子實體提取的由帶有P -1 ， 3-鍵連葡萄糖支鏈
的e-i， 6-鍵連葡萄糖主鏈構(gòu)成的或由帶有e-i， 6-鍵連葡萄糖支鏈的e-i， 3-
鍵連葡萄糖主鏈構(gòu)成的多糖具有抗癌活性。
包括下列步驟制備抗癌物質(zhì)也是已知的，所述步驟為用熱水對灰樹花，樹 花菌司象耳蘭(Grifola gigantea) (Tonbimai)或Laetiporus sulphureus(Masutake)進
行提??；減壓濃縮提取液，用有機溶劑對濃縮液進行沉淀，對沉淀物進行透析以 除去低分子量的物質(zhì)，并用親脂有機溶劑提取雜質(zhì)以從透析液中除去它們。
然而，以上描述的那些方法對于制備大量的藥劑和從有限的資源來有效地制 備健康食品而言是不適合，因為這些方法的純化步驟相當復(fù)雜，而且所得的產(chǎn)物 中含有抑制免疫增強活性的物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是利用灰樹花X組分多糖對乙醇醇沉濃度不同性 質(zhì)，使得灰樹花子實體或菌絲體X組分得到分級分離純化，提供了一種有效的
提取x組分多糖的方法。
本發(fā)明實現(xiàn)灰樹花子實體或菌絲體X組分多糖分級分離純化的技術(shù)方案為 將原料粉碎，熱水提取，乙醇沉淀，加入絡(luò)合物絡(luò)合，酸洗，堿復(fù)溶sevag
法脫蛋白，乙醇沉淀，堿復(fù)溶，乙醇再次沉淀，離心，取上清液，繼續(xù)加醇沉淀，
收集這次的醇沉物，醇洗，冷凍干燥，得到灰樹花多糖。 本發(fā)明的分離純化技術(shù)通過以下步驟得以實現(xiàn)A. 粗多糖的提取
以灰樹花子實體或菌絲體為原料，粉碎成細粉，加入1"0倍的水，熱水 90—12(TC提取l-6小時，離心，減壓濃縮至濃縮液相對密度為1.02—1.15，緩慢 加入95%的乙醇至終濃度為30%—80%，攪勻，4。C靜置過夜，過濾，沉淀于乙 醇中保存?zhèn)溆谩?br> B. X組分多糖的分級醇沉純化
(1) A中所得粗多糖擠干乙醇，用5-30倍的蒸餾水復(fù)溶；
(2) 加入20°/?！?00%的CTAOH至不再產(chǎn)生沉淀，調(diào)節(jié)PH》10， 4'C保持 24—72h，離心分離，棄上清液得沉淀；
(3) 取上述(2)所得沉淀加入1-6倍的1-60%的醋酸溶液洗滌1-5遍，離 心，50%--95%的乙醇洗滌l-5遍，離心，所得沉淀用O.l—lM的NaOH溶液復(fù) 溶,離心，上清液用sevag法脫蛋白；
(4) 將(3)中脫蛋白后的溶液加入乙醇使乙醇濃度為50% 70%，靜置， 離心；取沉淀復(fù)溶后加入乙醇使乙醇濃度為30% 40%，靜置，離心；取上清 液加入乙醇使乙醇濃度為70% 90%，靜置，離心，收集沉淀物，用95%的乙 醇和無水乙醇洗滌，冷凍干燥，即得灰樹花X組分多糖。
上述冷凍干燥的程序為-47°C2h， -30TMh，-5°C24h， 27°C4h，真空度保持 在0. 08MPa 0. 09Mpa。
灰樹花子實體或菌絲體X組分多糖的分級分離方法，其特征在于其中所述
的
① X組分的多糖為能與CTA-基團集合的蛋白多糖，集合物不溶于水，其中糖 含量在80%左右，蛋白質(zhì)含量6%-10%，分子量為25 45萬道爾頓且具有良好 的降血脂作用。
② 灰樹花粗多糖脫蛋白后采用不同濃度的乙醇沉淀可以得到分子量不同的各 種多糖，灰樹花X組分的醇沉方法及乙醇濃度為灰樹花粗多糖脫蛋白后加入乙 醇使乙醇濃度為50% 70%，靜置，離心；取沉淀復(fù)溶后醇沉乙醇濃度為30% 40%，靜置，離心；取上清液加入乙醇使乙醇濃度為70% 90%，靜置，離心； 即得灰樹花多糖X組分(分子量為25 45萬道爾頓)
本發(fā)明利用水提乙醇沉淀法得到粗多糖，再利用絡(luò)合物和X組分多糖對PH
4條件不同性質(zhì)而使其得到分離純化。本發(fā)明操作方便，所得目標產(chǎn)物純度高，為 灰樹花X組分多糖的大規(guī)模生產(chǎn)，制備各種藥物及保健食品提供了可行之途徑。
具體實施例方式
實施例1灰樹花X組分(分子量約28W道爾頓)的提取
稱取灰樹花子實體細粉15Kg，加入500L水，100。C提取lh， 8000rpm離心 20min，上清液濃縮至密度為1. 04，加入3倍量的95%的乙醇，4'C靜置過夜，過 濾，所得沉淀加入30倍的熱水復(fù)溶，離心，加入45%的CTAOH至不再產(chǎn)生沉 淀，調(diào)節(jié)PH41， 4-C保持48h，離心分離，棄上清液得沉淀；沉淀用2倍體積 的20%的醋酸洗滌2遍，90%的乙醇洗滌2遍，再用0.5的NaOH溶液復(fù)溶，離心， 上清液用sevag法脫蛋白3次；上清液加入乙醇使乙醇濃度為65%，沉淀，沉淀 用0.2M的NaOH溶液復(fù)溶,加入乙醇沉淀使乙醇濃度為38%,沉淀，離心，取 上清液，繼續(xù)加入乙醇至終濃度為90%，沉淀用95%和無水乙醇分別洗滌，冷 凍干燥，得到2.5g灰樹花X組分多糖，多糖含量為80%，蛋白含量為7.67%， 分子量為28W道爾頓。
實施例2灰樹花X組分(分子量約35W道爾頓)的提取
稱取灰樹花據(jù)四體細粉15Kg,加入500L水，IO(TC提取lh， 8000rpm離心 20min，上清液濃縮至密度為1.04，加入3倍量的95%的乙醇，4'C靜置過夜，過 濾，所得沉淀加入30倍的熱水復(fù)溶，離心，加入60%的CTAOH至不再產(chǎn)生沉 淀，調(diào)節(jié)PH=12， 4。C保持48h，離心分離，棄上清液得沉淀；沉淀用2倍體積 的20%的醋酸洗滌2遍，90%的乙醇洗滌2遍，再用0.5的NaOH溶液復(fù)溶,離心， 上清液用sevag法脫蛋白3次；上清液加入乙醇使乙醇濃度為60%，沉淀，沉淀 用0.2M的NaOH溶液復(fù)溶,加入乙醇沉淀使乙醇濃度為34%，沉淀，離心，取 上清液，繼續(xù)加入乙醇至終濃度為80%，沉淀用95%和無水乙醇分別洗滌，冷 凍干燥，得到2.5g灰樹花X組分多糖，多糖含量為82%,蛋白含量為7.02%, 分子量為35W道爾頓。實施例3灰樹花X組分(分子量約43W道爾頓)的提取
稱取灰樹花子實體細粉15Kg，加入500L水，120'C提取lh， 8000rpm離心 20min，上清液濃縮至密度為1.04，加入3倍量的95%的乙醇，4。C靜置過夜，過 濾，所得沉淀加入30倍的熱水復(fù)溶，離心，加入80%的CTAOH至不再產(chǎn)生沉 淀，調(diào)節(jié)PH41.5， 4t:保持48h,離心分離，棄上清液得沉淀；沉淀用2倍體積 的20%的醋酸洗滌2遍，90%的乙醇洗滌2遍，再用0.5的NaOH溶液復(fù)溶,離心， 上清液用sevag法脫蛋白3次；上清液加入乙醇使乙醇濃度為55%，沉淀，沉淀 用0.2M的NaOH溶液復(fù)溶,加入乙醇沉淀使乙醇濃度為32X，沉淀，離心，取 上清液，繼續(xù)加入乙醇至終濃度為73%，沉淀用95%和無水乙醇分別洗滌，冷 凍干燥，得到2.5g灰樹花X組分多糖，多糖含量為85%，蛋白含量為6.91%， 分子量為43W道爾頓。
權(quán)利要求
1.灰樹花子實體或菌絲體X組分多糖的提純分離方法，其特征在于該方法是將灰樹花子實體或菌絲體提取得到的粗多糖進行絡(luò)合反應(yīng)初步提純并用sevag法脫蛋白后采用分級醇沉的方法制得灰樹花X組分純多糖，該多糖具有良好的降血脂效果。
2. 如權(quán)利要求1所述的灰樹花子實體或菌絲體X組分多糖的提純分離方法，其特 征在于其中所述的蛋白多糖的分離提純包括下列步驟① 將灰樹花粗多糖，加CTA-OH并調(diào)節(jié)PH》10使灰樹花多糖X組分形成絡(luò) 合物沉淀；② 將沉淀物溶解后采用分級醇沉進行純化①制得的沉淀溶解并脫蛋白后加入乙醇使乙醇濃度為50% 70%，靜置，離心；取沉淀復(fù)溶后加入乙醇使乙醇 濃度為30% 40%，靜置，離心；取上清液加入乙醇使乙醇濃度為70% 90%， 靜置，離心，收集沉淀物。③?、谥谐恋砦铮?5%乙醇清洗沉淀，復(fù)溶，冷凍干燥，即冷凍干燥程序 為:-47。C2h,-30。C4h，-5。C24h，27。C4h，真空度保持在0. 08MPa 0. 09MPa，得到灰 樹花X組分純多糖。
3. 如權(quán)利要求2所述的灰樹花子實體或菌絲體X組分多糖的分級分離方法，其特 征在于其中所述的 'X組分的多糖為能與CTA-基團集合的蛋白多糖，集合物不溶于水，其中糖 含量在80%左右，蛋白質(zhì)含量6%-10%，分子量為25 45萬道爾頓且具有良好 的降血脂作用。
全文摘要
本發(fā)明涉及灰樹花子實體或菌絲體X組分多糖的提純分離方法，其特征在于該方法是將灰樹花子實體或菌絲體提取得到的粗多糖進行絡(luò)合反應(yīng)初步提純并用sevag法脫蛋白后采用分級醇沉的方法制得灰樹花X組分純多糖，該多糖具有良好的降血脂效果。本發(fā)明利用水提乙醇沉淀法得到粗多糖，再利用絡(luò)合物和D組分多糖對乙醇醇沉濃度不同性質(zhì)而使其得到分離純化。本發(fā)明操作方便，所得目標產(chǎn)物純度高，為發(fā)揮灰樹花D組分多糖的大規(guī)模生產(chǎn)，制備各種藥物及保健食品提供了可行之途徑。
文檔編號C08B37/00GK101659706SQ20081012031
公開日2010年3月3日 申請日期2008年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月25日
發(fā)明者徐財泉 申請人:徐財泉