專利名稱：：交聯(lián)透明質(zhì)酸的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種制造交聯(lián)透明質(zhì)酸(cross-linkedhyaluronicacid，cross-linkedHA)的技術(shù)。具體來說，本發(fā)明涉及一種降低產(chǎn)品中交聯(lián)劑含量的交聯(lián)透明質(zhì)酸制造方法。
背景技術(shù)：
：透明質(zhì)酸為一種多糖，其結(jié)構(gòu)由P-l，3-葡萄糖乙酰胺(P-l，3-N-acetylglucosamine)和P-l，4-葡萄糖酸(P-1，4-glucuronicacid)以P-l-4鍵結(jié)形成分子量約為400D的雙糖重復(fù)單位，此雙糖重復(fù)單位再以13-1-3鍵結(jié)重復(fù)連結(jié)，形成的直鏈高分子聚合物。其商業(yè)來源可由菌種如鏈球菌屬的酸酵以及動(dòng)物組織如雞冠中萃取得到。透明質(zhì)酸、其鹽類或其衍生物由于不具有種屬特異性且具有良好的生物相容性、粘彈性、保濕性和生物可降解性，而廣泛應(yīng)用于化妝品、生物醫(yī)學(xué)、醫(yī)療器材和制藥上。直鏈的透明質(zhì)酸在生物體內(nèi)易因酵素(如透明質(zhì)酸水解酵素)和自由基的作用而發(fā)生降解，因而降低在生物體內(nèi)的滯留時(shí)間，還因缺乏機(jī)械強(qiáng)度而限制其應(yīng)用范圍，故在實(shí)際應(yīng)用時(shí)，常對透明質(zhì)酸進(jìn)行交聯(lián)，制備成可溶于水的交聯(lián)透明質(zhì)酸溶液或不溶于水的交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠(hydrogel)或介于兩者之間的物質(zhì)，也可視需要混合兩者使用。然而，當(dāng)通過交聯(lián)劑進(jìn)行透明質(zhì)酸的交聯(lián)反應(yīng)以制備交聯(lián)透明質(zhì)酸時(shí)，常有大量交聯(lián)劑殘留于產(chǎn)物中，而不利于應(yīng)用于生物體內(nèi)，目前最常用以去除或降低殘留交聯(lián)劑的方法包括以透析法或以水或緩沖溶液清洗。但此類純化方法效果有限，同時(shí)對于一端已是鍵結(jié)態(tài)而另一端仍為自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑而言，并無法以透析或清洗的方式去除，且此種含有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑具有反應(yīng)性，如美國發(fā)明專利第5808050號所示，在動(dòng)物體中使用時(shí)具有風(fēng)險(xiǎn)。另一方面，以透析或清洗交聯(lián)透明質(zhì)酸尚有不易放大工藝的問題，且因在中性或接近中性環(huán)境下純化，無菌條件難以控制，再者，如果交聯(lián)透明質(zhì)酸為凝膠狀態(tài)，交聯(lián)程度低的交聯(lián)透明質(zhì)酸因膨潤大，清洗不易，得到的產(chǎn)物的透明質(zhì)酸含量低；交聯(lián)程度高的交聯(lián)透明質(zhì)酸則因膨潤低，殘留的交聯(lián)劑更加不易去除。再者，在清洗過程中，交聯(lián)程度低的透明質(zhì)酸易流失，而喪失潤滑性質(zhì)，對于需充填于針劑中的應(yīng)用，需另外添加直鏈或交聯(lián)的透明質(zhì)酸溶液以增加其潤滑性質(zhì)。美國發(fā)明專利第4716154號揭示一種無菌、不含熱源的交聯(lián)的透明質(zhì)酸制法，可作為眼球的玻璃狀液(vitreoushumor)取代物。此合成方式是以多官能團(tuán)交聯(lián)劑，在堿存在下，在高溫如5(TC下進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)后置于室溫過夜，由于殘留有未反應(yīng)的交聯(lián)劑，接著將所得膠體切成小塊后，以蒸餾水清洗24小時(shí)，再以沸騰的生理食鹽水清洗8小時(shí)，得到固含量0.23%1.2%的膠體。所述專利文獻(xiàn)強(qiáng)調(diào)因此方法殘留有未反應(yīng)的交聯(lián)劑，徹底清洗所合成的膠體極端重要且不可缺少。此方法的缺點(diǎn)包括有(l)需有復(fù)雜的膠體純化步驟；(2)因以沸騰的生理食鹽水去除交聯(lián)劑，使膠體膨潤而僅得到固含量偏低的膠體，如需提高固含量，則需額外步驟；(3)需重新在生理緩沖溶液中膨潤，以調(diào)整其滲透4壓和酸堿值，不利于工業(yè)上使用。美國發(fā)明公開第2006/0194758A1號將高、低分子量的透明質(zhì)酸混合反應(yīng)，產(chǎn)生一種單相的具良好機(jī)械性質(zhì)的膠體，改良了可注射性，但此方法在5(TC交聯(lián)反應(yīng)結(jié)束后，未經(jīng)透析純化前殘留大量未反應(yīng)的交聯(lián)劑，其濃度超過300ppm以上，之后通過透析法以純化試圖去除交聯(lián)劑，但其效果不佳，難以有效去除未反應(yīng)且自由態(tài)的交聯(lián)劑，也無法去除已為鍵結(jié)狀態(tài)但交聯(lián)劑的另一端尚具自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑。美國發(fā)明公開第2005/0281880A1號揭示一種可注射凝膠的制備方法，其步驟包含在一個(gè)密閉容器內(nèi)，交聯(lián)一種或多種聚合物形成膠體；清洗所述膠體；純化所述膠體；均質(zhì)所述膠體形成凝膠。所述方法使用了高濃度雙官能團(tuán)或多官能團(tuán)交聯(lián)劑，有上述鍵結(jié)態(tài)交聯(lián)劑殘留的問題。再者，膠體清洗、純化的時(shí)間需2至3天，由于此時(shí)溶液的酸堿值已接近中性，產(chǎn)生微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。美國發(fā)明公開第2007/0026070A1號揭示一種多糖交聯(lián)凝膠的方法，包括在堿性溶液中，使多糖與二或多官能團(tuán)環(huán)氧化物接觸，以提供一種以環(huán)氧化物交聯(lián)的多糖，其中環(huán)氧化物基本上是以醚鍵與多糖聯(lián)結(jié)；在實(shí)質(zhì)上未從堿性介質(zhì)中移除環(huán)氧化物的情況下，干燥所述環(huán)氧化物交聯(lián)的多糖；以水可溶的溶劑合理清洗交聯(lián)的多糖；中和交聯(lián)的多糖基質(zhì)，形成交聯(lián)的多糖凝膠。此方法同樣具有已是鍵結(jié)狀態(tài)但尚含自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑殘留問題。如要制備交聯(lián)的透明質(zhì)酸固態(tài)物，常用去除交聯(lián)劑的方法是沉淀法，如美國專利第4716224號，但此方法仍有上述尚含自由態(tài)官能團(tuán)的鍵結(jié)態(tài)交聯(lián)劑殘留的風(fēng)險(xiǎn)存在。另一方面，在堿性環(huán)境下的交聯(lián)反應(yīng)時(shí)，透明質(zhì)酸同時(shí)也被水解，故堿性環(huán)境下的反應(yīng)是交聯(lián)反應(yīng)與水解反應(yīng)相互競爭，如Y.時(shí)田(Y.Tokita)與A.岡本(A.Okamoto)，"透明質(zhì)酸的水解降解(HydrolyticDegrationofHyaluronicAcid)"，聚合物降解與穩(wěn)定性(PolymerDegrationandStability)，第48巻，第269-273頁(1995)文獻(xiàn)所述。在堿性環(huán)境反應(yīng)初期，交聯(lián)劑的濃度最高，故反應(yīng)以交聯(lián)反應(yīng)為主，但當(dāng)反應(yīng)一段時(shí)間交聯(lián)劑消耗一定量后，如果以同樣溫度繼續(xù)進(jìn)行反應(yīng)，則反應(yīng)以水解反應(yīng)為主，同時(shí)也會(huì)破壞膠體的性質(zhì)，使膠體性質(zhì)劣化，造成發(fā)生膠體裂解、顏色變成深黃色或甚至變?yōu)楹稚鵁o法使用，故在堿性環(huán)境反應(yīng)時(shí)，進(jìn)行一段時(shí)間的反應(yīng)后就必須終止反應(yīng)，雖然此時(shí)還殘留有大量的交聯(lián)劑。以雙官能團(tuán)或多官能團(tuán)環(huán)氧化物在堿性條件下進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)時(shí)，大多在25t:至6(rC下進(jìn)行，反應(yīng)時(shí)間則在10分鐘至24小時(shí)之間，但實(shí)際的反應(yīng)時(shí)間與所使用的溫度和堿濃度有關(guān)。而這些反應(yīng)下所得的膠體，大多有去除交聯(lián)劑的純化步驟或雖無純化的程序，但仍殘留有相當(dāng)量或大量的交聯(lián)劑。目前文獻(xiàn)中已知的去除交聯(lián)劑的方法都有其缺點(diǎn)，且都無法有效去除交聯(lián)劑或降低交聯(lián)劑含量，尤其無法去除一端已是鍵結(jié)態(tài)另一端仍為自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑。業(yè)界迫切需要一種降低產(chǎn)品中交聯(lián)劑含量的交聯(lián)透明質(zhì)酸制造方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種制造交聯(lián)透明質(zhì)酸的方法，其包含在約l(TC至約3(TC的低反應(yīng)溫度，使包含交聯(lián)劑與透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物的溶液在堿性環(huán)境進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)超過約48小時(shí)。根據(jù)本發(fā)明的方法不需經(jīng)由純化步驟，即可制得在產(chǎn)物中交聯(lián)劑含量低、生物相容性高且可供動(dòng)物體應(yīng)用的交聯(lián)透明質(zhì)酸，以克服常規(guī)技術(shù)中使用純化步驟的缺點(diǎn)。無具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種制造交聯(lián)透明質(zhì)酸的方法，其包含在約l(TC至約3(TC的低反應(yīng)溫度下使包含交聯(lián)劑與透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物、或其混合物的溶液在堿性環(huán)境進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)超過約48小時(shí)。本發(fā)明所說的"透明質(zhì)酸"又稱為玻尿酸，是指一種多糖化合物，其結(jié)構(gòu)由13-1，3-葡萄糖乙酰胺和P-l，4-葡萄糖酸以P-1-4鍵結(jié)形成分子量約為400D的雙糖重復(fù)單位，此雙糖重復(fù)單位再以P-1-3鍵結(jié)重復(fù)連結(jié)，形成的直鏈高分子聚合物。本發(fā)明所說的"透明質(zhì)酸金屬鹽類"是指由透明質(zhì)酸與金屬離子所形成的鹽類，較佳地，其為鉀鹽、鈉鹽或鋅鹽。本發(fā)明所說的"透明質(zhì)酸衍生物"是指含有羥基的多糖類，例如但不限于羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose，CMC)、褐藻酸鹽(alginate)、軟骨素_4_硫酸鹽(chondroitin-4-sulfate)、軟骨素_6_硫酸鹽(chondroitin-6-sulfate)、黃原膠(xanthaneg咖)、殼聚糖(chitosan)、果膠(pectin)、瓊月旨(agar)、鹿角菜膠(carrageenan)或瓜爾膠(gimrgum)。本發(fā)明所說的"交聯(lián)透明質(zhì)酸"是指在含有交聯(lián)劑存在下，使相同分子或不同分子的透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物間，發(fā)生部分交聯(lián)或完全交聯(lián)后，所形成的分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)型態(tài)的交聯(lián)透明質(zhì)酸。其物理型態(tài)可為固態(tài)、液態(tài)(指溶于水或緩沖溶液的交聯(lián)透明質(zhì)酸)、凝膠(指被水或緩沖溶液膨潤的交聯(lián)透明質(zhì)酸膠體)、介于液態(tài)和凝膠間的混合物或是水不溶的固體，此物理型態(tài)可由加入反應(yīng)的交聯(lián)劑含量和合成方法而定。本發(fā)明所說的"交聯(lián)反應(yīng)"是指使兩透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物直鏈間產(chǎn)生鍵結(jié)的反應(yīng)。在堿性環(huán)境下，根據(jù)本發(fā)明的交聯(lián)反應(yīng)以醚鍵形成交聯(lián)，不產(chǎn)生副產(chǎn)物，理論上反應(yīng)可完全進(jìn)行。在本發(fā)明的一具體實(shí)施例中，堿性環(huán)境中堿濃度為約0.05N至約1.5N;較佳為約0.05N至約1N;更佳為約0.2N至約0.5N;尤佳為約0.25N至約0.5N。另一方面，堿性環(huán)境較佳是由無機(jī)堿提供，其中所述無機(jī)堿較佳選自由氫氧化鈉和氫氧化鉀所組成的群組，其中"堿濃度"的定義是指1升的反應(yīng)物中的液體的體積(包含溶劑、堿和交聯(lián)劑的體積，但不包含透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物的體積)中所含堿的當(dāng)量數(shù)。根據(jù)本發(fā)明的方法，使用交聯(lián)劑進(jìn)行所述交聯(lián)反應(yīng)。本發(fā)明中所說的"交聯(lián)劑"是指可將兩透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物直鏈間產(chǎn)生鍵結(jié)的物質(zhì)。通常所述交聯(lián)劑具有多個(gè)官能團(tuán)可分別與多個(gè)的透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物直鏈產(chǎn)生鍵結(jié)，并進(jìn)一步彼此進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)。較佳地，所述交聯(lián)劑為多官能團(tuán)環(huán)氧化物；更佳為雙官能團(tuán)環(huán)氧化物。在本發(fā)明的一較佳具體實(shí)施例中，所述交聯(lián)劑選自由1，4_丁二醇二縮水甘油醚(1，4-butanedio1diglycidylether)、乙二醇二縮水甘油6醚(ethyleneglycoldiglycidylether)、1，6_己二醇二縮水甘油醚(1，6_hexanedioldiglycidylether)、聚丙二酉享二縮水甘油醚(polypropyleneglycoldiglycidylether)、聚丁二酉享二縮水甘油醚(polytetramethyleneglycoldiglycidylether)、新戊二醇二縮水甘油醚(neopentylglycoldiglycidylether)、聚甘油聚縮水甘油醚(polyglycerolpolyglycidylether)、二甘油聚縮水甘油醚(diglycerolpolyglycidylether)、甘油聚縮水甘油醚(glycerolpolyglycidylether)、三羥甲基丙烷聚縮水甘油醚(tri-methylolpropanepolyglycidylether)、季戊四酉享聚縮水甘油醚(pentaerythritolpolyglycidylether)、山梨糖醇聚縮水甘油醚(sorbitolpolyglycidylether)、1，2，7，8-二環(huán)氧辛烷(1，2，7，8-di印oxyoctane)禾口1，3-二環(huán)氧丁烷(1，3-butadienedi印oxide)以及其混合物所組成的群組。本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
中具通常知識者可視所需的交聯(lián)透明質(zhì)酸的交聯(lián)程度和交聯(lián)劑種類選擇合宜的交聯(lián)劑濃度，在本發(fā)明的一較佳具體實(shí)施例中，交聯(lián)劑的濃度為約0.05至約2w/v^;更佳為約0.1至約1.5w/v^;尤佳為約0.1至約1.0w/v^，最佳為約0.6至約1.0w/v%。本發(fā)明的技術(shù)特征在于使用長時(shí)間的低溫反應(yīng)溫度條件進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，根據(jù)本發(fā)明的低反應(yīng)溫度是指約l(TC至約3(TC;較佳為約15。C至約3(TC;最佳為約2(TC至約30°C。在此低反應(yīng)溫度下進(jìn)行的交聯(lián)反應(yīng)，所形成的交聯(lián)透明質(zhì)酸不會(huì)因堿的水解作用而快速劣化，在使交聯(lián)劑消耗至合理的含量后即終止反應(yīng)。本發(fā)明中所說的低反應(yīng)溫度不限于以單一溫度反應(yīng)，也可為多種低反應(yīng)溫度的組合。本發(fā)明所說的"使交聯(lián)劑消耗至合理的含量"是指在最后所得的交聯(lián)產(chǎn)物中交聯(lián)劑含量可為后續(xù)繼續(xù)利用的濃度，例如lppm以下、2ppm以下、5卯m以下、10卯m以下、15卯m以下或20卯m以下，但并不意謂限定本發(fā)明，根據(jù)本發(fā)明交聯(lián)劑的消耗并不局限于因交聯(lián)反應(yīng)而消耗，也可能因水解作用而消耗，也可能交聯(lián)作用和水解作用一起消耗。在本發(fā)明的具體實(shí)施例中，可控制所得的產(chǎn)物的未反應(yīng)完全的交聯(lián)劑含量為低于l卯m、2卯m、2至5卯m、5至10卯m、10至15卯m或15至20卯m。本發(fā)明所說"具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑"包含未與透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物反應(yīng)的交聯(lián)劑和部分官能團(tuán)與透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物反應(yīng)，使交聯(lián)劑官能團(tuán)與透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物間產(chǎn)生鍵結(jié)但部分官能團(tuán)未反應(yīng)而為自由態(tài)時(shí)的交聯(lián)劑。較佳地，所述交聯(lián)反應(yīng)在交聯(lián)透明質(zhì)酸劣化前即停止，本發(fā)明所說"劣化"是指經(jīng)交聯(lián)反應(yīng)后的所得的交聯(lián)透明質(zhì)酸，因?yàn)閴A的水解作用變成深黃色或甚至深褐色，使其無法應(yīng)用，或是指所合成的產(chǎn)物開始發(fā)生明顯降解。通常交聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間與交聯(lián)反應(yīng)的溫度相關(guān)，溫度越高，所需的時(shí)間越短，溫度越低，所需的時(shí)間越長；反應(yīng)時(shí)間也與交聯(lián)劑的濃度和堿濃度相關(guān)，綜合上述，根據(jù)本發(fā)明的反應(yīng)時(shí)間超過48小時(shí)，較佳為約3至約28天，更佳為約3至約11天，最佳為約3至約7天。根據(jù)本發(fā)明，包含透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物的反應(yīng)溶液中透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物的濃度較佳為約2至約40wv%;更佳為約10至約30wv%;尤佳為約15至約20wv%。根據(jù)本發(fā)明的透明質(zhì)酸、其金屬鹽類或其衍生物分子量理論上并未有限制，可單獨(dú)為低分子量、高分子量，也可為兩種高、低分子量的透明質(zhì)酸、其金屬鹽類或其衍生物的任意混合。其分子量例如為10萬以下、10至50萬之間、50萬至100萬之間、100萬至150萬之間、150萬至200萬之間、250萬至300萬之間。較佳為混合高、低分子量的透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，具有反應(yīng)溶液粘度低和適合工藝放大的優(yōu)點(diǎn)。在本發(fā)明的一較佳具體實(shí)施例中，當(dāng)使用1，4_丁二醇二縮水甘油醚lv/v^作為交聯(lián)劑時(shí)，包含透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物溶液中透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物的濃度為20w/v^、堿濃度為0.25N時(shí)，所需的反應(yīng)時(shí)間為3至28天。根據(jù)本發(fā)明的方法較佳在無菌條件下進(jìn)行，但不限于僅在無菌條件下進(jìn)行，也可在一般的環(huán)境下進(jìn)行，只要最終產(chǎn)物的交聯(lián)劑可降低至合理的范圍以下和具有良好的生物相容性即可，其中生物相容性的性質(zhì)可通過細(xì)胞毒性試驗(yàn)進(jìn)行測試。實(shí)際上，根據(jù)本發(fā)明在低反應(yīng)溫度下進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)雖需較長的反樣時(shí)間，但由于是在堿性的環(huán)境中，不容易有微生物的污染，也無現(xiàn)有技術(shù)中在中性緩沖溶液中清洗膠體所產(chǎn)生微生物的污染的高風(fēng)險(xiǎn)。較佳地，根據(jù)本發(fā)明的方法在低反應(yīng)溫度中進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)之前，另外包含在高反應(yīng)溫度下進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)的步驟，其中所述高反應(yīng)溫度為約35t:至約60°C;較佳為約35t:至約5(TC;更佳約35t:至約4(rC。在此方面中，其在高反應(yīng)溫度進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)一段時(shí)間，使透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物先進(jìn)行部份的交聯(lián)反應(yīng)，在其性質(zhì)尚未劣化，或未開始有明顯降解發(fā)生前，再置于低反應(yīng)溫度繼續(xù)進(jìn)行反應(yīng)，使交聯(lián)劑消耗至合理的含量后終止反應(yīng)。本發(fā)明中所說的高反應(yīng)溫度不限于以單一溫度反應(yīng)，也可為多種高反應(yīng)溫度的組合。在本發(fā)明的較佳具體實(shí)施例中，當(dāng)高反應(yīng)溫度為約35t:時(shí)，進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)小于約72小時(shí)；較佳為約4至約48小時(shí)；更佳為約6至約12小時(shí)。當(dāng)高反應(yīng)溫度為約4(TC時(shí)，進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)小于約48小時(shí)；較佳為約2至24小時(shí)；更佳為約3至約6小時(shí)。當(dāng)高反應(yīng)溫度為約5(TC時(shí)，進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)小于約8小時(shí)；較佳為約0.1至約2小時(shí)；更佳為約0.2至約1小時(shí)。當(dāng)高反應(yīng)溫度為約6(TC時(shí)，進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)小于約2小時(shí)；較佳為約0.1至約0.5小時(shí)；更佳為約0.2至約0.3小時(shí)。較佳地，根據(jù)本發(fā)明的方法另外包含稀釋步驟。其是將交聯(lián)反應(yīng)中所得的交聯(lián)透明質(zhì)酸含量，經(jīng)稀釋為所需的濃度和生理上可接受的滲透壓或酸堿值。稀釋的方法例如使用水、中性溶液、緩沖溶液、鹽類溶液或其混合物加入反應(yīng)液中而得。例如調(diào)整交聯(lián)透明質(zhì)酸的含量介于5mg/mL至60mg/mL之間，較佳介于10mg/mL至40mg/mL之間，最佳介于20mg/mL至30mg/mL之間，滲透壓為280至340mOsm/kg之間。較佳地，根據(jù)本發(fā)明的方法另外包含中和步驟，其是將交聯(lián)反應(yīng)中所需的非中性酸堿環(huán)境，中和為中性環(huán)境，較佳為pH值在6.5至7.5之間，使可利于動(dòng)物體內(nèi)應(yīng)用。在本發(fā)明的一具體實(shí)施例中，稀釋步驟與中和步驟可同時(shí)進(jìn)行。較佳地，根據(jù)本發(fā)明的方法另外包含均質(zhì)步驟，其是將最后產(chǎn)物碾碎、壓碎而均勻分散成顆?；蛉芤赫撸缈墒褂镁|(zhì)機(jī)或其它碾碎或壓碎的機(jī)器進(jìn)行均質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的方法所制得的交聯(lián)透明質(zhì)酸，依其型態(tài)可為溶液、凝膠、溶液與凝膠的混合物或進(jìn)一步干燥或冷凍干燥為顆?；蚬腆w，固體的形狀可為但不限于海綿狀、片狀、條狀、球狀或橢圓狀。根據(jù)本發(fā)明的方法不需經(jīng)由純化步驟，即可制得于產(chǎn)物中交聯(lián)劑含量低、生物相容性高且可供動(dòng)物體應(yīng)用的交聯(lián)透明質(zhì)酸，以克服常規(guī)技術(shù)中使用純化步驟的缺點(diǎn)?，F(xiàn)以下列實(shí)例來詳細(xì)說明本發(fā)明，但其并不意謂本發(fā)明僅局限于此等實(shí)例所揭示8的內(nèi)容。實(shí)例一透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%HHA、堿濃度二0.5N、反應(yīng)溫度二3(TC、交聯(lián)劑濃度=lv/v^的1，2，7，8-二環(huán)氧辛烷取8.9mL的去離子水加入lmL的5N氫氧化鈉水溶液和0.lmL交聯(lián)劑1，2，7，8-二環(huán)氧辛烷，在磁石攪拌下加入2克(干重)平均分子量為135萬的透明質(zhì)酸鈉(highmolecularweighthyaluronicacid，HHA)，室溫下攪拌5分鐘后，置于3(TC恒溫箱中反應(yīng)如表1所示的反應(yīng)時(shí)間。反應(yīng)后，所得反應(yīng)物中加入79.2mL的pH值為7.0±0.2的0.073M磷酸鹽緩沖溶液和0.8mL的6N的氯化氫水溶液，以使得均質(zhì)后至生理上可接受的pH值和滲透壓，再將膠體溶液均質(zhì)后，即可得交聯(lián)透明質(zhì)酸產(chǎn)物。均質(zhì)后的交聯(lián)透明質(zhì)酸產(chǎn)物的具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量測定是將產(chǎn)物經(jīng)透明質(zhì)酸水解酵素水解，再依據(jù)奈利斯(Nelis)和Sinsheimer所使用的方法(用于在生理學(xué)條件下測定脂肪族環(huán)氧化物的增敏熒光光度法(ASensitiveFluorimetricfortheDeterminationofAliphaticEpoxidesunderPhysiologicalConditions)，生物化學(xué)分析(Anal.Biochem.)，第115巻，第151-157頁，1981)，在吸收波長為370nm下進(jìn)行測定，此測定方法在具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量為1至300ppm時(shí)檢量線具良好的線性關(guān)系；產(chǎn)物的交聯(lián)透明質(zhì)酸含量測定則先取精秤后的產(chǎn)物約0.1克置于50mL的定量瓶中，加入3mL的6N的硫酸水溶液先行溶解產(chǎn)物后，以去離子水稀釋溶液至定量瓶刻度，再依據(jù)歐洲藥典第四版(2002版)所使用的方法進(jìn)行測定醛糖酸(glucuronicacid)含量后，再換算得交聯(lián)透明質(zhì)酸含量。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量如表l所示。實(shí)施例二透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%HHA、堿濃度二0.5N、反應(yīng)溫度二3(TC、交聯(lián)劑濃度=lv/v^的1，3-二環(huán)氧丁烷除交聯(lián)劑改為1，3-二環(huán)氧丁烷外，其余反應(yīng)條件和含量的測定方法同實(shí)施例一。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量如表1所示。實(shí)施例三透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%HHA、堿濃度二0.25N、反應(yīng)溫度二1(TC、交聯(lián)劑濃度=lv/v^的1，4-丁二醇二縮水甘油醚取9.4mL的去離子水加入0.5mL的5N氫氧化鈉水溶液和0.lmL交聯(lián)劑1，4-丁二醇二縮水甘油醚，在磁石攪拌下加入2克(干重)平均分子量為135萬的透明質(zhì)酸鈉(HHA)，室溫下攪拌5分鐘后，置于l(TC恒溫箱中反應(yīng)。反應(yīng)后，所得反應(yīng)物中加入79.6mL的pH為7.0±0.2的0.1M磷酸鹽緩溶液和0.4mL的6N的氯化氫水溶液，以使得均質(zhì)后至生理上可接受的pH值和滲透壓，再將膠體溶液均質(zhì)后，即可得到交聯(lián)透明質(zhì)酸產(chǎn)物。產(chǎn)物的交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量的測定方法同實(shí)施例一。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量如表1所示。實(shí)施例四透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%HHA、堿濃度二0.25N、反應(yīng)溫度二2(TC、交聯(lián)劑濃度=lv/v^的1，4丁二醇二縮水甘油醚除反應(yīng)溫度改為2(TC外，其余反應(yīng)條件與測定方法同實(shí)施例三。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量如表1所示。實(shí)施例五透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%HHA、堿濃度二0.25N、反應(yīng)溫度二3(TC、交9聯(lián)劑濃度=lv/v^的1，4丁二醇二縮水甘油醚除反應(yīng)溫度改為3(TC外，其余反應(yīng)條件與測定方法同實(shí)施例三。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量如表1所示。實(shí)施例六透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%HHA、堿濃度二0.2N、反應(yīng)溫度二3(TC、交聯(lián)劑濃度=lv/v^的1，4-丁二醇二縮水甘油醚取9.5mL的去離子水加入0.4mL的5N氫氧化鈉水溶液和0.lmL交聯(lián)劑1，4-丁二醇二縮水甘油醚，在磁石攪拌下加入平均分子量為135萬的透明質(zhì)酸鈉(HHA)2.0克(干重)，攪拌5分鐘后置于可控制溫度的恒溫箱中以3(TC反應(yīng)一定時(shí)間后(反應(yīng)時(shí)間如表1所示)，所得反應(yīng)物中加入0.32mL的6N氯化氫水溶液和79.68mLpH為7.0±0.2的0.10M磷酸鹽緩溶液，以使得均質(zhì)后至生理上可接受的pH值和滲透壓，再將膠體溶液均質(zhì)后，即可得到交聯(lián)透明質(zhì)酸產(chǎn)物。產(chǎn)物的交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量的測定方法同實(shí)施例一。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量如表l所示。由表1的結(jié)果可得知當(dāng)于低反應(yīng)溫度進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)超過2天時(shí)，其產(chǎn)品交聯(lián)劑的含量低，可應(yīng)用于生物體內(nèi)。表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>*不在檢量線范圍(1300卯m)實(shí)施例七透明質(zhì)酸鈉濃度=10w/v%HHA、堿濃度二0.05N、高反應(yīng)溫度二50°C、低反應(yīng)溫度=301\交聯(lián)劑濃度=lv/v^的1，4-丁二醇二縮水甘油醚取9.8mL的去離子水加入0.lmL的5N氫氧化鈉水溶液和0.lmL交聯(lián)劑1，4-丁二醇二縮水甘油醚，在磁石攪拌下加入平均分子量為135萬的透明質(zhì)酸鈉(HHA)，攪拌5分鐘后置于可控制溫度的恒溫箱中以5(TC反應(yīng)7小時(shí)后，再以3(rC下反應(yīng)一定時(shí)間后(反應(yīng)時(shí)間如表2所示)，所得反應(yīng)物中加入去離子水9.87mL、0.13mL的6N氯化氫水溶液和20mLpH為7.0±0.2的O.15M磷酸鹽緩溶液，以使得均質(zhì)后至生理上可接受的pH值和滲透壓，再將膠體溶液均質(zhì)后，即可得到交聯(lián)透明質(zhì)酸產(chǎn)物。產(chǎn)物的交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量的測定方法同實(shí)施例一。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量如表2所示。實(shí)施例八透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%HHA、堿濃度二0.5N、高反應(yīng)溫度二4(TC、低反應(yīng)溫度=251\交聯(lián)劑濃度=lv/v^的1，4-丁二醇二縮水甘油醚取8.9mL的去離子水加入lmL的5N氫氧化鈉水溶液和0.lmL交聯(lián)劑1，4-丁二醇二縮水甘油醚，在磁石攪拌下加入平均分子量為135萬的透明質(zhì)酸鈉(HHA)，攪拌5分鐘后置于可控制溫度的恒溫箱中以4(TC反應(yīng)3小時(shí)后，再以25t:下反應(yīng)一定時(shí)間后(反應(yīng)時(shí)間如表2所示)，所得反應(yīng)物中加入0.8mL的6N氯化氫水溶液和79.2mLpH為7.0±0.2的0.073M磷酸鹽緩溶液，以使得均質(zhì)后至生理上可接受的pH值和滲透壓，再將膠體溶液均質(zhì)后，即可得到交聯(lián)透明質(zhì)酸產(chǎn)物。產(chǎn)物的交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑殘留量的測定方法同實(shí)施例一。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量如表2所示。實(shí)施例九透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%HHA、堿濃度二0.5N、高反應(yīng)溫度二4(TC、低反應(yīng)溫度=25°〇、交聯(lián)劑濃度=lv/v^的1，2，7，8-二環(huán)氧辛烷除交聯(lián)劑改為1，2，7，8-二環(huán)氧辛烷，其余反應(yīng)條件和含量的測定方法同實(shí)施例八。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑殘留量如表2所示。實(shí)施例十透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%HA(10w/v%HHA+10w/v%LHA)、堿濃度=0.25N、高反應(yīng)溫度=40°C、低反應(yīng)溫度=10°C、交聯(lián)劑濃度=0.6v/v%的1，4-丁二醇二縮水甘油醚取9.44mL的去離子水加入0.5mL的5N氫氧化鈉水溶液和0.06mL交聯(lián)劑1，4-丁二醇二縮水甘油醚，在磁石攪拌下加入平均分子量為44萬的透明質(zhì)酸鈉(lowmolecularweighthyaluronicacid，LHA)和平均分子量為135萬的透明質(zhì)酸鈉(HHA)各1克(干重)，攪拌5分鐘后置于可控制溫度的恒溫箱中以4(TC反應(yīng)4小時(shí)后，再以l(TC下反應(yīng)一定時(shí)間后(反應(yīng)時(shí)間如表2所示)，所得反應(yīng)物中加入0.4mL的6N氯化氫水溶液和79.6mLpH為7.0±0.2的0.IOM磷酸鹽緩溶液，以使得均質(zhì)后至生理上可接受的pH值和滲透壓，再將膠體溶液均質(zhì)后，即可得到交聯(lián)透明質(zhì)酸產(chǎn)物。產(chǎn)物的交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量的測定方法同實(shí)例一。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量如表2所示。實(shí)施例^^一透明質(zhì)酸鈉濃度=30w/v%HA(15w/v%HHA+15w/v%LHA)、堿濃度=0.25^高反應(yīng)溫度=40"、低反應(yīng)溫度=25"、交聯(lián)劑濃度=0.6v/v^的1，4-丁二醇二縮水甘油醚取9.44mL的去離子水加入0.5mL的5N氫氧化鈉水溶液和0.06mL交聯(lián)劑1，4-丁二醇二縮水甘油醚，在磁石攪拌下加入平均分子量為44萬的透明質(zhì)酸鈉(LHA)和平均分子量為135萬的透明質(zhì)酸鈉(HHA)各1.5克(干重)，攪拌5分鐘后置于可控制溫度的恒溫箱中以4(TC反應(yīng)4小時(shí)后，再以25t:下反應(yīng)一定時(shí)間后(反應(yīng)時(shí)間如表2所示)，所得反應(yīng)物中加入0.4mL的6N氯化氫水溶液和79.6mLpH為7.0±0.2的0.10M磷酸鹽緩溶液，以使得均質(zhì)后至生理上可接受的PH值和滲透壓，再將膠體溶液均質(zhì)后，即可得到交聯(lián)透明質(zhì)酸產(chǎn)物。產(chǎn)物的交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量的測定方法同實(shí)施例一。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑殘留量如表2所示。實(shí)施例十二透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%LHA、堿濃度二0.25N、高反應(yīng)溫度二40°〇、低反應(yīng)溫度=251\交聯(lián)劑濃度=0.6v/v^的1，4-丁二醇二縮水甘油醚除透明質(zhì)酸改為低分子量透明質(zhì)酸鈉(LHA)2.0克(干重)夕卜，其余反應(yīng)條件和含量的測定方法同實(shí)施例i^一。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑殘留量如表2所示。實(shí)施例十三透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%HA(10w/v%HHA+10w/v%LHA)、堿濃度=0.25N、高反應(yīng)溫度=40°C、低反應(yīng)溫度=25°C、交聯(lián)劑濃度=0.1v/v%的1，4-丁二醇二縮水甘油醚取9.49mL的去離子水加入0.5mL的5N氫氧化鈉水溶液和0.OlmL交聯(lián)劑1，4-丁二醇二縮水甘油醚，在磁石攪拌下加入平均分子量為44萬的透明質(zhì)酸鈉(LHA)和平均分子量為135萬的透明質(zhì)酸鈉(HHA)各1.0克(干重)，攪拌5分鐘后置于可控制溫度的恒溫箱中以4(TC反應(yīng)4小時(shí)后，再以25t:下反應(yīng)一定時(shí)間后(反應(yīng)時(shí)間如表2所示)，所得反應(yīng)物中加入0.4mL的6N氯化氫水溶液和79.6mLpH值為7.0±0.2的0.10M磷酸鹽緩溶液，以使得均質(zhì)后至生理上可接受的PH值和滲透壓，再將溶液均質(zhì)后，即可得到交聯(lián)透明質(zhì)酸產(chǎn)物。產(chǎn)物的交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量的測定方法同實(shí)例一。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量如表2所示。實(shí)施例十四透明質(zhì)酸鈉濃度=20w/v%LHA、堿濃度二0.2N、高反應(yīng)溫度二40°C、低反應(yīng)溫度=301\交聯(lián)劑濃度=lv/v^的1，4-丁二醇二縮水甘油醚取9.5mL的去離子水加入0.4mL的5N氫氧化鈉水溶液和0.lmL交聯(lián)劑1，4_丁二醇二縮水甘油醚，在磁石攪拌下加入平均分子量為44萬的透明質(zhì)酸鈉(LHA)2.0克(干重)，攪拌5分鐘后置于可控制溫度的恒溫箱中以40°C反應(yīng)4小時(shí)后，再以3(TC下反應(yīng)一定時(shí)間后(反應(yīng)時(shí)間如表2所示)，所得反應(yīng)物中加入0.32mL的6N氯化氫水溶液和79.68mLpH為7.0±0.2的O.IOM磷酸鹽緩溶液，以使得均質(zhì)后至生理上可接受的pH值和滲透壓，再將膠體溶液均質(zhì)后，即可得到交聯(lián)透明質(zhì)酸產(chǎn)物。產(chǎn)物的交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量的測定方法同實(shí)施例一。不同反應(yīng)時(shí)間下所得的產(chǎn)物其交聯(lián)透明質(zhì)酸含量和具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑含量如表2所示。由表2的結(jié)果可得知當(dāng)于高反應(yīng)溫度反應(yīng)一段時(shí)間后繼續(xù)進(jìn)行低反應(yīng)溫度交聯(lián)反應(yīng)超過2天時(shí)，其產(chǎn)品具有自由態(tài)官能團(tuán)的交聯(lián)劑的含量低，可應(yīng)用于生物體內(nèi)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>*:不在檢量線范圍(1300卯m)上述實(shí)施例僅為說明本發(fā)明的原理和其功效，而非限制本發(fā)明。因此，所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員對上述實(shí)施例所做的修改和變化仍不違背本發(fā)明的精神。本發(fā)明的權(quán)利范圍應(yīng)如前述的權(quán)利要求書所列。權(quán)利要求一種制造交聯(lián)透明質(zhì)酸的方法，其包含在約10℃至約30℃的低反應(yīng)溫度下使包含交聯(lián)劑與透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物的溶液在堿性環(huán)境進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)超過約48小時(shí)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述透明質(zhì)酸的金屬鹽類為鉀鹽、鈉鹽或鋅鹽。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中堿性環(huán)境中堿濃度為約0.05N至約1.5N。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中堿性環(huán)境是由無機(jī)堿提供。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述無機(jī)堿選自由氫氧化鈉和氫氧化鉀所組成的群組。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述交聯(lián)劑為多官能團(tuán)環(huán)氧化物。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述交聯(lián)劑為雙官能團(tuán)環(huán)氧化物。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述交聯(lián)劑選自由1，4-丁二醇二縮水甘油醚(1，4-butanedio1diglycidylether)、乙二醇二縮水甘油醚(ethyleneglycoldiglycidylether)、1，6_己二醇二縮水甘油醚(1，6_hexanedioldiglycidylether)、聚丙二醇二縮水甘油醚(polypropyleneglycoldiglycidylether)、聚丁二醇二縮水甘油醚(polytetramethyleneglycoldiglycidylether)、新戊二酉享二縮水甘油醚(neopentylglycoldiglycidylether)、聚甘油聚縮水甘油醚(polyglycerolpolyglycidylether)、二甘油聚縮水甘油醚(diglycerolpolyglycidylether)、甘油聚縮水甘油醚(glycerolpolyglycidylether)、三羥甲基丙烷聚縮水甘油醚(tri-methylolpropanepolyglycidylether)、季戊四醇聚縮水甘油醚(pentaerythritolpolyglycidylether)、山梨糖醇聚縮水甘油醚(sorbitolpolyglycidylether)、1，2，7，8-二環(huán)氧辛烷(1，2，7，8-di印oxyoctane)和1，3-二環(huán)氧丁烷(1，3-butadienedi印oxide)以及其混合物所組成的群組。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中交聯(lián)劑的濃度為約0.05至約2w/v%。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述低反應(yīng)溫度為約15t:至約30°C。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述低反應(yīng)溫度為約2(TC至約30°C。12.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，其中交聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行約3至約28天。13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中包含透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物的溶液中透明質(zhì)酸、其金屬鹽類、其衍生物或其混合物的濃度為約2至約40wv%。14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在低反應(yīng)溫度中進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)之前，另外包含在高反應(yīng)溫度中進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)的步驟，其中所述高反應(yīng)溫度為約35t:至約60°C。15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，另外包含稀釋步驟，其是將交聯(lián)反應(yīng)中所得的交聯(lián)透明質(zhì)酸稀釋為所需的濃度和生理上可接受的滲透壓或酸堿值。16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，另外包含中和步驟，其是將交聯(lián)反應(yīng)中所需的非中性酸堿環(huán)境中和為中性環(huán)境。17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，另外包含均質(zhì)步驟，其是將交聯(lián)反應(yīng)中所得的交聯(lián)透明質(zhì)酸碾碎、壓碎而均勻分散成顆粒或溶液者。18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述衍生物選自由羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose，CMC)、褐藻酸鹽(alginate)、軟骨素-4-硫酸鹽(chondroitin-4-sulfate)、軟骨素_6_硫酸鹽(chondroitin-6-sulfate)、黃原膠(xanthanegum)、殼聚糖(chitosan)、果膠(pectin)、瓊月旨(agar)、鹿角菜膠(carrageenan)和瓜爾膠(guargum)所組成的群組。全文摘要本發(fā)明涉及一種制造交聯(lián)透明質(zhì)酸的方法，其包含在約10℃至約30℃的低溫下使包含透明質(zhì)酸的溶液進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)超過約48小時(shí)，本發(fā)明的方法不需純化步驟即可降低交聯(lián)劑的含量。文檔編號C08J3/24GK101724164SQ200810172328公開日2010年6月9日申請日期2008年10月31日優(yōu)先權(quán)日2008年10月31日發(fā)明者陳麗夙,陳拓成申請人:科妍生物科技股份有限公司