專利名稱：：一種半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬高分子材料
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：巰基化聚合物(Thiomer)是一類親水性高分子聚合物的側(cè)鏈經(jīng)巰基化合物修飾所得的產(chǎn)物，是一種新型的黏膜黏附性材料。生理?xiàng)l件下其可與黏膜黏液層糖蛋白中富含半胱氨酸的區(qū)域形成二硫鍵，以共價(jià)鍵緊密結(jié)合于黏膜，延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的滯留時(shí)間，提高藥物的局部濃度，促進(jìn)藥物吸收。此外，巰基化聚合物具有原位凝膠性質(zhì)，其分子內(nèi)可形成二硫鍵，以致流變學(xué)性質(zhì)改變。目前，已開發(fā)了陽(yáng)離子巰基化聚合物如殼聚糖-半胱氨酸、殼聚糖-巰基乙酸、殼聚糖-硫代-脒偶合物等，陰離子巰基化聚合物如聚丙烯酸-半胱氨酸、聚丙烯酸-半胱胺、聚丙烯酸-高半胱氨酸、羧甲基纖維素鈉-半胱氨酸、海藻酸鈉-半胱氨酸偶合物等。與相應(yīng)未修飾聚合物相比，巰基化聚合物的黏膜黏附性可增加2140倍。該聚合物可制成微球、納米粒、凝膠、骨架片等給藥載體，用于多種親水性藥物的非注射給藥。此外，巰基化聚合物也可應(yīng)用于制備組織工程支架。透明質(zhì)酸是一種大分子酸性黏多糖，廣泛存在于生物體的結(jié)締組織中，具有較好的生物相容性和生物降解性，可應(yīng)用于組織工程和醫(yī)藥領(lǐng)域。通過交聯(lián)、酯化、接枝等方法對(duì)透明質(zhì)酸進(jìn)行化學(xué)修飾，可提高其機(jī)械強(qiáng)度，減緩其在組織內(nèi)的降解速度，進(jìn)一步擴(kuò)大其應(yīng)用前景。KrumK.等(IntJPharm，2007,343:48-58)通過1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽/N-羥基琥珀酰亞胺介導(dǎo)，將L-半胱氨酸乙酯鍵合于透明質(zhì)酸的羧基上，制得透明質(zhì)酸-半胱氨酸乙酯偶合物。每克聚合物的游離巰基含量大于200pmol/g，二硫鍵含量約為85Hmol/g，其黏膜黏附性比未修飾的透明質(zhì)酸提高了6.5倍，抗酶解能力增強(qiáng)，作為親水性大分子藥物的載體，可能具有較好的緩控釋作用。透明質(zhì)酸-半胱氨酸乙酯偶合物的二硫鍵含量較低，其原位凝膠性較差。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物的制備方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物的應(yīng)用，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足和缺陷。本發(fā)明的構(gòu)思如下本發(fā)明以可生物降解的透明質(zhì)酸為原料，以1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)及N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化其羧基，加入半胱胺鹽酸鹽，使其氨基與透明質(zhì)酸的羧基形成酰胺鍵，制得巰基化透明質(zhì)酸偶合物。合成巰基化透明質(zhì)酸偶合物的過程如下本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物，以透明質(zhì)酸為骨架，半胱胺共價(jià)結(jié)合至透明質(zhì)酸。所述的透明質(zhì)酸的分子量為1.98X1041X106g/mol。所述的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物，相對(duì)每克偶合物，共價(jià)連接的游離巰基基團(tuán)為10200pmol/g，二硫鍵為120500pmol/g。所述的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物，其0.5%3%的水溶液黏度比未修飾透明質(zhì)酸高5100倍。本發(fā)明的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物，其制備方法如下(1)0.4%~1%質(zhì)量百分比的透明質(zhì)酸鈉水溶液中加入終濃度為0.19%1.9%1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.12。/。1.2。/。N-羥基琥珀酰亞胺(NHS),溶解后調(diào)pH56，攪拌30120min;(2)按透明質(zhì)酸與半胱胺鹽酸鹽質(zhì)量比32:11:4投料，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH35,避光反應(yīng)412h，反應(yīng)結(jié)束后，透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。所述的透明質(zhì)酸的分子量為1.98X1041X106g/mol。步驟(1)中優(yōu)選反應(yīng)時(shí)間為4060min，時(shí)間過短反應(yīng)不完全，時(shí)間過長(zhǎng)產(chǎn)物不穩(wěn)定。步驟(2)中優(yōu)選透明質(zhì)酸與半胱胺鹽酸鹽質(zhì)量比為8:11:2，透明質(zhì)酸與半胱胺鹽酸鹽質(zhì)量比過高，則羧基的取代度過低；透明質(zhì)酸與半胱胺鹽酸鹽質(zhì)量比過低，則過量的半胱胺鹽酸鹽在后續(xù)純化處理中較難除凈。步驟(2)中優(yōu)選的反應(yīng)時(shí)間為58h，時(shí)間過短反應(yīng)不完全，時(shí)間過長(zhǎng)則產(chǎn)物易被氧化。本發(fā)明的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物可應(yīng)用于給藥系統(tǒng)、細(xì)胞培養(yǎng)和組織工程。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于(1)本發(fā)明的偶合物的水溶液由于二硫鍵較多而使溶液黏度增加，生理?xiàng)l件下呈凝膠，可開發(fā)成原位凝膠制劑；(2)組成偶合物的材料均為天然可生物降解材料，具有無(wú)毒性、無(wú)免疫原性和抗原性、生物相容性良好的特點(diǎn)；(3)本發(fā)明的偶合物具有較好的親水性，可作為親水性藥物的載體，以化學(xué)鍵結(jié)合于黏膜黏液層，提高藥物的體內(nèi)滯留時(shí)間，增加藥物的局部濃度，提高藥物的生物利用度；(4)本發(fā)明的偶合物相對(duì)于透明質(zhì)酸機(jī)械性能提高，抗酶解能力增強(qiáng)，用作組織工程材料，可減緩其體內(nèi)降解速率。具體實(shí)施例方式通過下面的具體實(shí)施例可進(jìn)一步了解本發(fā)明。但它們不是對(duì)本發(fā)明的限定。實(shí)施例1將200mg分子量為5X105Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.4%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.96%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.58%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS),溶解后調(diào)pH5.5，攪拌45min;加入400mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4.75，避光反應(yīng)5h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含l%NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例2將300mg分子量為1.98Xl(^Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.6%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.19%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.12。/。的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5，攪拌30min;加入300mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH3，避光反應(yīng)4h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含1。/。NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例3將400mg分子量為1X105Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.8%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.48%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.29%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5.5，攪拌40min;加入200mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4，避光反應(yīng)5h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含1。/。NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例4將200mg分子量為1X106Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.4%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為1.4%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.86°/。的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH6，攪拌60min;加入800mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH5，避光反應(yīng)6h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含l%NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例5將500mg分子量為1.98X104Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得1%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為1.9%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和1，/。的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS),溶解后調(diào)pH5，攪拌卯min;加入15.6mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH3，避光反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含l°/。NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例6將300mg分子量為1X106Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.6%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.19%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.12%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5.5，攪拌120min;加入18.8mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4，避光反應(yīng)10h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含1。/。NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例7將400mg分子量為5X105Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.8%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.48%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.29%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH6，攪拌30min;加入50mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4.75,避光反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含1%NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例8將500mg分子量為1X105Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得1%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.%%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.58%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5，攪拌40min;加入125mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH5，避光反應(yīng)4h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含1%NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例9將400mg分子量為1X105Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.8%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為1.4%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.86%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5.5，攪拌45min;加入12.5mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4，避光反應(yīng)6h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含1%NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例10將500mg分子量為5X105Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得1°/。透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為1.9%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和1.2%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH6，攪拌60mhi;加入31.2mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4.75，避光反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCI溶液(pH4)、含l%NaCl的HCI溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例11將200mg分子量為1X106Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.4°/。透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.19%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.12%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS),溶解后調(diào)pH5，攪拌90min;加入25mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH5，避光反應(yīng)10h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含1。/。NaCl的HCl溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例12將300mg分子量為1.98X104Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.6%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.48%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.29%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5.5，攪拌120rnin;加入75mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH3，避光反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含l%NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例13將500mg分子量為5X105Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得1%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.96%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.58%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS),溶解后調(diào)pH6，攪拌30min;加入250mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH3，避光反應(yīng)5h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含l。/。NaCl的HCl溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例14將200mg分子量為1X106Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.4%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為1.4%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.86%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5，攪拌40min;加入200mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4，避光反應(yīng)6h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含P/。NaCl的HCl溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例15將300mg分子量為1.98Xl(^Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.6%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為1.9%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和1.2。/。的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5.5，攪拌45min:加入600mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4.75，避光反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含P/。NaCl的HCl溶液(pH4)、HCI溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例16將400mg分子量為1Xl()5Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.8%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.19%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.12%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH6，攪拌60min;加入1600mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH5，避光反應(yīng)10h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含1。/。NaCl的HCl溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例17將200mg分子量為1X106Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.4%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.48%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.29%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5，攪拌90min;加入6.2mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4，避光反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含P/。NaCl的HCl溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例18將300mg分子量為1.98X104Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.6%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.96%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.58%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS),溶解后調(diào)pH5.5，攪拌120min;加入18.8mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4.75，避光反應(yīng)4h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含l。/。NaCl的HCl溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍千燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例19將400mg分子量為1X105Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.8%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為1.4%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.86%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH6，攪拌30min;加入50mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH5，避光反應(yīng)4h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含l%NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例20將500mg分子量為5X105Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得1%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為1.9%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和1.2°/。的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5，攪拌40min;加入125mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH3，避光反應(yīng)5h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含1。/。NaCl的HCl溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例21將300mg分子量為1.98X104Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.6%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.19°/。的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.12%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5.5,攪拌60min;加入150mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4.75，避光反應(yīng)6h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含1。/。NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍千燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例22將400mg分子量為1X105Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.8%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.48%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.29%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH6，攪拌90min;加入400mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH5，避光反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HCl溶液(pH4)、含1。/。NaCl的HCl溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例23將500mg分子量為5X105Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得1%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為0.96%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.58%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5，攪拌120min;加入1000mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH3，避光反應(yīng)10h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含l%NaCl的HC1溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍千燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例24將200mg分子量為1X106Da的透明質(zhì)酸鈉溶于50ml去離子水，得0.4%透明質(zhì)酸溶液，分別加入終濃度為1.4%的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和0.86%的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，溶解后調(diào)pH5.5，攪拌45min;加入800mg半光胺鹽酸鹽，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH4，避光反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物置截流分子量3500Da的透析袋，依次以HC1溶液(pH4)、含l。/。NaCl的HCl溶液(pH4)、HC1溶液(pH4)透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。實(shí)施例25實(shí)施例1所得的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物分別溶解于0.2M磷酸鹽緩沖液(pH5.8、6.8、7.4)中，終濃度為0.5%，37。C下06h內(nèi)用旋轉(zhuǎn)式黏度計(jì)分別測(cè)定溶液的黏度，結(jié)果如表1所示。結(jié)果表明，溶液pH高于6時(shí)，6h內(nèi)聚合物溶液的黏度比起始時(shí)間點(diǎn)黏度提高IOO倍以上。表l聚合物溶液濃度(終濃度為0.5%)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>權(quán)利要求1.一種半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物，其特征在于以透明質(zhì)酸為骨架，半胱胺的氨基與透明質(zhì)酸的羧基共價(jià)結(jié)合成酰胺鍵。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的偶合物，其特征在于相對(duì)每克聚合物偶合物，共價(jià)連接的游離巰基基團(tuán)為10200pmol/g，二硫鍵為120500(imol/g。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的偶合物，其特征在于所述的透明質(zhì)酸的分子量為1.98X1041X106g/mol。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的偶合物，其特征在于其0.5%3%的水溶液黏度比未修飾透明質(zhì)酸高5100倍。5、如權(quán)利要求1所述的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物的制備方法，其特征在于按如下步驟制備(1)0.4%~1%透明質(zhì)酸鈉水溶液中加入終濃度為0.19%1.9%1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽和0.12%1.2%仆羥基琥珀酰亞胺，溶解后調(diào)pH至56，攪拌30120min;其中透明質(zhì)酸鈉中透明質(zhì)酸的分子量為1.98X104lX106g/mol;(2)按透明質(zhì)酸與半胱胺鹽酸鹽質(zhì)量比32:11:4投料，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH35，避光反應(yīng)412h，反應(yīng)結(jié)束后，透析，冷凍干燥，得半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的巰基化透明質(zhì)酸偶合物的制備方法，其特征在于步驟(1)中反應(yīng)時(shí)間為4060min。7、根據(jù)權(quán)利要求5所述的巰基化透明質(zhì)酸偶合物的制備方法，其特征在于步驟(2)中透明質(zhì)酸與半胱胺鹽酸鹽質(zhì)量比為8:11:2。8、根據(jù)權(quán)利要求5所述的巰基化透明質(zhì)酸偶合物的制備方法，其特征在于步驟(2)中反應(yīng)時(shí)間為58h。9、如權(quán)利要求14中任一項(xiàng)的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物在給藥系統(tǒng)中的應(yīng)用。10、如權(quán)利要求14中任一項(xiàng)的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。11、如權(quán)利要求14中任一項(xiàng)的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物在組織工程屮的應(yīng)用。12、包含權(quán)利要求14中任一項(xiàng)的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物作為生物細(xì)胞或組織的支承物。13、權(quán)利要求14中任一項(xiàng)的半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物或權(quán)利要求12的支承物在制備植入物的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明屬高分子材料
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種半胱胺修飾的巰基化透明質(zhì)酸偶合物及其制備方法和應(yīng)用。透明質(zhì)酸溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)及N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化其羧基，加入半胱胺鹽酸鹽，使其氨基與透明質(zhì)酸的羧基形成酰胺鍵，調(diào)節(jié)各物質(zhì)的配比及反應(yīng)條件，獲得不同巰基含量的巰基化透明質(zhì)酸偶合物。本發(fā)明擴(kuò)展了該巰基化反應(yīng)的應(yīng)用范圍，偶合物黏膜黏附性及生物相容性較好，具有較強(qiáng)的原位凝膠性質(zhì)，為非注射制劑及組織工程等提供優(yōu)良的生物黏附性材料。文檔編號(hào)C08B37/08GK101367884SQ20081020045公開日2009年2月18日申請(qǐng)日期2008年9月25日優(yōu)先權(quán)日2008年9月25日發(fā)明者丁潔英,印春華,翠唐申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)