專利名稱：分子印跡聚合物的制備及用其分離鹽酸克倫特羅的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化學(xué)工程技術(shù)領(lǐng)域的方法，具體是一種分子印跡聚合物的制 備及用其分離鹽酸克倫特羅的方法。
背景技術(shù)：
鹽酸克倫特羅(簡稱CLB)是一種人工合成的02-腎上腺受體激動劑，又稱 "瘦肉精"、"克喘素"等，臨床一般用其鹽酸鹽。因其對^2-受體選擇性高，作 用強，副作用較小，早期用于防治人、畜支氣管哮喘和痙攣，是理想的平喘藥， 臨床應(yīng)用最為廣泛。由于鹽酸克倫特羅能實現(xiàn)動物營養(yǎng)再分配，改善胴體品質(zhì)， 導(dǎo)致瘦肉率增加。1984年，國外首次將鹽酸克倫特羅作為飼料添加劑應(yīng)用在羊、 肉雞和豬的生產(chǎn)中，并取得了較好的效果，從此鹽酸克倫特羅作為一種詞料添加 劑被大量應(yīng)用。但長期食用含有"瘦肉精"的豬肉和內(nèi)臟會引^^人體心血管系統(tǒng) 和神經(jīng)系統(tǒng)的疾病。人誤食鹽酸克倫特羅， 一般在食用后15 min-6 h出現(xiàn)癥狀， 癥狀可持續(xù)90min-6天。近年來，國際上紛紛開展動物性食品中鹽酸克倫特羅殘 留檢測的研究，以建立起一個完整的動物性食品檢測系統(tǒng)，保障人民的健康安全。 我國于2003年制定了國標(biāo)《動物性食品中克倫特羅殘留量的測定》 (GB/T50091192 -2003)，提出了動物性食品中鹽酸克倫特羅殘留監(jiān)控方法，艮P: 酶聯(lián)免疫法(ELISA)篩選、高效液相色譜法(HPLC)定量到氣質(zhì)聯(lián)機法(GC-MS) 確證和定量。
目前國際上對動物組織中鹽酸克倫特羅殘留的監(jiān)測方法主要分為色譜技術(shù)、 免疫分析技術(shù)和生物傳感技術(shù)及其它三大類。這些方法各有自身的優(yōu)缺點，但 是當(dāng)用于從動物性食品中檢測痕量存在的鹽酸克倫特羅時，為減少復(fù)雜基質(zhì)的干 擾， 一般都需要樣品前處理。目前常用的前處理的方法有固相萃取、液液萃取、 免疫柱層析技術(shù)等，與液液萃取相比，固相萃取技術(shù)操作簡單，處理速度快，節(jié) 約試劑，并可同時處理多個樣品。但是，目前常用的固相萃取的填料與吸附目標(biāo) 物的作用缺乏選擇性，易受復(fù)雜基質(zhì)中類似物的干擾。而免疫柱層析雖然有特異性，但所用抗體價格昂貴，且穩(wěn)定性不足，不能用于強酸、強堿和高溫等極端環(huán) 境。因此，研制新型的固相萃取填料，能夠特異地識別樣品中的鹽酸克倫特羅， 從而高效地選擇性富集、純化檢測物，有很好的現(xiàn)實需要。
分子印跡技術(shù)是基于分子識別的新型聚合物的制備技術(shù)，在印跡中形成的特 異性識別位點能和被分析物選擇性作用，并且這種作用是可逆的。這種化學(xué)合成 的材料機械強度和化學(xué)穩(wěn)定性好，能在極端環(huán)境中使用。近年來，分子印跡技術(shù) 應(yīng)用于固相萃取，將分子印跡聚合物作為固相萃取填料，產(chǎn)生了一個具有廣闊應(yīng) 用前途的領(lǐng)域，主要用于生物樣品中物質(zhì)的提取，特別是生物流體中樣品的分析。 目前，分子印跡技術(shù)在固相萃取技術(shù)方面的應(yīng)用，尤其是在痕量物質(zhì)的檢測方面， 模板殘留問題已經(jīng)嚴(yán)重阻礙了分子印跡聚合物在此領(lǐng)域的應(yīng)用，采用模板類似物 或進一步優(yōu)化聚合物的后處理過程及高效去除模板分子的方法，是研究的重點。
經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)的文獻檢索發(fā)現(xiàn)，Arndt Ellwanger等在《Analyst》(分析學(xué) 家)(2001， 126， 784 _ 792)上發(fā)表的"Evaluation of methods aimed at complete removal of template from molecularly imprinted polymers"(對分子印跡聚 合物去除模板殘留方法的評估)中提出各種不同的分子印跡聚合物的模板去除前 處理方法。經(jīng)過微波萃取處理后得到最低的模板殘留是3 ng/mL。這樣得到的分 子印跡聚合物直接與酶聯(lián)免疫吸附劑測定聯(lián)用后檢測靈敏度不高。
檢索中還發(fā)現(xiàn)，Anders Blomgren等在《Journal of Chromatography A》(色 譜A) (2002， 975， 157-164)上發(fā)表的"Extraction of clenbuterol from calf urine using a molecularly imprinted polymer followed by quantitation by high-performance liquid chromatography with UV detection"(分子印跡聚 合物和HPLC-UV聯(lián)用)中提出以鹽酸克倫特羅的類似物溴布特羅作為模板用本體 聚合的方法合成分子印跡聚合物。該法也存在模板殘留問題，同時在酶聯(lián)免疫吸 附劑測定中會造成交叉感染問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提出了一種分子印跡聚合物的制 備及用其分離鹽酸克倫特羅的方法，通過對洗脫溶劑和洗脫方式的優(yōu)化，減少本 體聚合合成得到的分子印跡聚合物，基本解決了模板分子的滲漏問題，填充在固 相萃取小柱中，用于分離、純化動物組織中殘留的鹽酸克倫特羅，除去食品基質(zhì) 中的雜質(zhì)。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的
本發(fā)明所涉及的分子印跡聚合物的制備方法，包括以下步驟-步驟一，將模板分子克倫特羅、功能單體甲基丙烯酸(MAA)、交聯(lián)劑乙二醇 二甲基丙烯酸酯(EGDMA)按照1: 2-6: 15的摩爾比均勻混合，溶解到致孔劑中， 置入安培瓶中，再加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈(AIBN)，超聲處理后，充入氮氣， 真空封口，熱引發(fā)聚合，形成塊狀聚合物；
步驟二，將合成的塊狀聚合物磨碎，通過樣品篩過濾，并通過索氏抽提除去 大部分模板分子，將得到的分子印跡聚合物在8(TC-15(rC的溫度下放置4 h-12 h，用甲醇勻漿后填充到固相萃取小柱內(nèi)，然后對固相萃取小柱進一步洗脫模板 分子；
步驟三，將除去模板分子的分子印跡聚合物進行干燥處理，得到克倫特羅分 子印跡聚合物。
所述致孔劑，為氯仿和乙腈的混合液，二者的體積比為3: 10。 所述致孔劑，其體積為5 mL-8 mL。 所述超聲處理，超聲時間為5 min-15 min。 所述充入氮氣，時間為5 min-8 min。 所述熱引發(fā)，采用6(TC-7(TC水浴。
所述索氏抽提，是分別用甲醇與醋酸的混合溶液以及甲醇與甲酸的混合溶液 萃取，各萃取3次-6次，每次4 h-6 h，最后用純甲醇萃取1次-2次，其中， 甲醇與醋酸以及甲醇與甲酸的體積比均為9: 1。
所述對固相萃取小柱進一步洗脫模板分子，是指先后用甲醇與醋酸的混合 液、甲醇與甲酸的混合液、乙腈、甲醇進行洗脫處理，每種溶劑的體積為30mL-60 mL，其中，甲醇與醋酸以及甲醇與甲酸的體積比為9: 1。
所述樣品篩，其孔徑大小為38. 5 u m-54 y m。
本發(fā)明所涉及的分子印跡聚合物用于分離鹽酸克倫特羅的方法，包括以下步
驟
步驟一，用甲醇淋洗聚丙烯固相萃取小柱和篩板，將分子印跡聚合物用甲醇 勻漿后填充到固相萃取小柱中，填料的上下兩端加上聚乙烯篩板，在抽真空狀態(tài) 下壓緊填料；步驟二，先后用甲醇與醋酸的混合溶液(9: 1， v/v)、甲醇沖洗固相萃取小 柱，用磷酸溶液和乙腈的混合液活化固相萃取小柱，加入含有鹽酸克倫特羅的樣 品液，用淋洗液淋洗固相萃取小柱，用洗脫液洗脫鹽酸克倫特羅，收集鹽酸克倫 特羅。
所述的篩板，其孔徑大小為20 pm。
所述將分子印跡聚合物用甲醇勻漿后填充到固相萃取小柱中，其填充的分子 印跡聚合物質(zhì)量為20 mg-200 mg。
所述磷酸溶液和乙腈的混合液，其中磷酸溶液和乙腈的體積比為3: 7，磷 酸溶液濃度為3mM， pH=3.4。
所述淋洗液，為水、乙酸與乙腈的混合溶液、乙腈與水的混合溶液、乙腈， 其中，乙酸與乙腈的體積比為2: 98，乙腈與水的體積比為7: 3。
所述的洗脫液，為甲醇與醋酸的混合液，甲醇與醋酸的體積比為9: 1。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果
本發(fā)明合成的克倫特羅分子印跡聚合物是一種多孔的結(jié)構(gòu)，內(nèi)部具有和模板 分子相互補的集團，具有"記憶"功能，所以對模板分子具有很高的特異性和選 擇性。本發(fā)明采用制備的克倫特羅分子印跡聚合物作為固相萃取小柱的填料，可 以用于動物源性食品和水溶液中實際樣品的前處理實踐，從而實現(xiàn)對干擾檢測的 動物基質(zhì)的去除，富集痕量殘留的克倫特羅，提高檢測的靈敏度。本發(fā)明與常規(guī)
的C18固相萃取小柱相比，具有特異性好，容量高的特點。如在0.5 ug/kg水 平豬肉樣品上，C18固相萃取小柱無法檢測到，但分子印跡聚合物固相萃取小柱 的回收率可達到107. 0±3. 97%。
具體實施例方式
下面對本發(fā)明的實施例作詳細說明本實施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下 進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護范圍不限 于下述的實施例。
實施例一
一、制備分子印跡聚合物
步驟一，將模板分子克倫特羅0.5mo1，功能單體甲基丙烯酸(MAA),交聯(lián) 劑乙二醇二甲基丙烯酸脂(EGDMA)，按照l: 2: 15的摩爾比例混勻，溶解到6. 5mL致孔劑(氯仿乙腈=3: 10)中，置入安培瓶中，再加入引發(fā)劑偶氮二異丁
腈(AIBN) 0.021g，超聲10 min，然后充入氮氣5 min，真空封口， 6(TC水浴 24 h，得克倫特羅分子印跡聚合物；
步驟二，取出塊狀聚合物，用研缽磨碎，用孔徑為38 ym的樣品篩進行篩 分，用丙酮懸浮棄去過細微粒。烘干聚合物后，甲醇醋酸(9: 1， v/v)和甲
醇甲酸(9: 1， v/v)索氏抽提各3次去除大部分模板分子，每次6h，最后用
純甲醇萃取l次，再120 'C熱處理8h，然后用甲醇將聚合物勻漿后填充到固相
萃取小柱內(nèi)，依次以甲醇醋酸(9: 1， V/V)、甲醇甲酸(9: 1， v/v)、乙腈
和甲醇為洗脫液進一步洗脫模板分子，每種溶劑的體積為40 mL;
步驟三，將除去模板分子的分子印跡聚合物在6(TC環(huán)境下烘干處理24 h， 得到克倫特羅分子印跡聚合物。
二、采用上述制備的分子印跡聚合物分離鹽酸克倫特羅
步驟一，首先用甲醇沖洗固相萃取小柱和篩板，將合成的分子印跡聚合物 20mg用甲醇勻漿，填充到聚丙烯固相萃取小柱中，柱體積為3mL，在抽真空狀 態(tài)下壓緊填料，最后加上聚乙烯篩板；
步驟二，克倫特羅分子印跡固相萃取小柱純化、富集豬肉中的鹽酸克倫特羅 殘留先后用10mL甲醇醋酸(9: 1， v/v)、 2 mL甲醇沖洗固相萃取小柱，2 mL磷酸溶液(3 mM， pH 3.4):乙腈(3: 7， v/v)活化固相萃取小柱，使之不 抽干。將3 mL經(jīng)處理后的豬肉樣品液(樣品液)加入到固相萃取小柱后，依次 用lmL水，lmL乙酸乙腈(2: 98， v/v)， 1 mL乙月青水(7: 3， v/v)， 1 mL 乙腈淋洗小柱，抽干，然后用3X1 mL甲醇醋酸(9: 1， v/v)洗脫鹽酸克倫 特羅。將洗脫液用氮氣吹干，向所得的殘余物加入IOO yL水，用ELISA檢測樣 品中鹽酸克倫特羅的濃度。
本實施例合成的分子印跡聚合物可以特異的識別鹽酸克倫特羅，可以用于動 物源性食品中鹽酸克倫特羅的分離，凈化和富集。對豬肉中添加鹽酸克倫特羅 10.0 ug/kg標(biāo)準(zhǔn)樣品的回收率為99.4。/。，對其它類藥物無特異性吸附。
實施例二
一、制備分子印跡聚合物
步驟一，將模板分子克倫特羅0.5mo1，功能單體甲基丙烯酸(MAA),交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸脂(EGD區(qū))，按照l: 3: 15的摩爾比例混勻，溶解到5mL 致孔劑(乙腈氯仿=10: 3)中，置入安培瓶中，再加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈(AIBN) 0. 021g，超聲15 min，然后充入氮氣5 min，真空封口， 60'C水浴24 h，得克 倫特羅分子印跡聚合物；
步驟二，取出塊狀聚合物，用研缽磨碎，用孔徑為45 u m的樣品篩進行篩分，
用丙酮懸浮棄去過細微粒。烘干聚合物后，甲醇醋酸(9: 1， v/v)和甲醇
甲酸(9: 1， v/v)索氏抽提各4次去除大部分模板分子，每次5h，最后用純甲 醇萃取2次，再120 'C熱處理8h，然后用甲醇將聚合物勻漿后填充到固相萃取
小柱內(nèi)，依次以甲醇醋酸(9: 1， v/v)、甲醇甲酸(9: 1， v/v)、乙腈和甲
醇為洗脫液進一步洗脫模板分子，每種溶劑的體積為30 mL;
步驟三，將除去模板分子的分子印跡聚合物在6(TC環(huán)境下烘干處理24 h， 得到克倫特羅分子印跡聚合物。
二、采用上述制備的分子印跡聚合物分離鹽酸克倫特羅
步驟一，首先用甲醇沖洗固相萃取小柱和篩板，將合成的分子印跡聚合物 60mg用甲醇勻漿，填充到聚丙烯固相萃取小柱中，柱體積為3mL，在抽真空狀 態(tài)下壓緊填料，最后加上聚乙烯篩板；
步驟二，克倫特羅分子印跡固相萃取小柱純化、富集磷酸溶液(3mM， pH 3. 4): 乙腈(30: 70， v/v)中的鹽酸克倫特羅殘留先后用10mL甲醇醋酸(9: 1， v/v)、 2 mL甲醇沖洗固相萃取小柱，2 mL磷酸溶液(3 mM, pH 3.4):乙腈(3: 7，v/v)活化固相萃取小柱，注意不能使之抽干。上5mL含鹽酸克倫特羅10 u g/mL 磷酸溶液(3mM， pH 3.4):乙腈(30: 70， v/v)的樣品液到固相萃取小柱后， 真空抽氣，使固相萃取小柱處于半干燥狀態(tài)，用3 mL乙腈淋洗固相萃取小柱， 抽干，然后用3X1 mL甲醇醋酸(9: 1， v/v)洗脫鹽酸克倫特羅。將樣品用 0.22 Pm的濾器過濾后，用HPLC分離樣品并通過紫外檢測器檢測樣品中鹽酸克 倫特的濃度。
本實施例合成的分子印跡聚合物可以特異的識別鹽酸克倫特羅，可以用于鹽 酸克倫特羅的分離，凈化和富集，本實施例中的柱容量為9.6 wg/60mg分子印 跡聚合物。
實施例三一、 制備分子印跡聚合物
步驟一，將模板克倫特羅0.5mo1，功能單體甲基丙烯酸(MAA)，交聯(lián)劑二 甲基丙烯酸乙二醇脂(EGDMA)，按照l: 6: 15的摩爾比例混勻，溶解到8mL致 孔劑(乙腈氯仿=10: 3)中，置入安培瓶中，再加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈(AIBN) 0.021g，超聲10 min,然后充入氮氣5 min，真空封口， 60'C水浴24 h，得克 倫特羅分子印跡聚合物；
步驟二，取出塊狀聚合物，用研缽磨碎，用孔徑為54 u m的樣品篩進行篩分， 用丙酮懸浮棄去過細微粒。烘干聚合物后，甲醇醋酸(9: 1， v/v)和甲醇-甲酸(9: 1， v/v)索氏抽提各6次去除大部分模板分子，每次4 h，最后用純 甲醇萃取2次，再120 'C熱處理8h，然后用甲醇將聚合物勻漿后填充到固相萃 取小柱內(nèi)，依次以甲醇醋酸(9: 1， v/v)、甲醇甲酸(9: 1， v/v)、乙腈和 甲醇為洗脫液進一步洗脫模板分子，每種溶劑的體積為60 mL;
步驟三，將除去模板分子的分子印跡聚合物在6(TC環(huán)境下烘干處理24 h， 得到克倫特羅分子印跡聚合物。
二、 采用上述制備的分子印跡聚合物分離鹽酸克倫特羅
步驟一，首先用甲醇沖洗固相萃取小柱和篩板，將合成的分子印跡聚合物 200mg用甲醇勻漿，填充到聚丙烯固相萃取小柱中，柱體積為3mL，在抽真空狀 態(tài)下壓緊填料，最后加上聚乙烯篩板；
步驟二，克倫特羅分子印跡固相萃取小柱純化、富集豬肉中的鹽酸克倫特羅 殘留先后用10 mL甲醇醋酸(9: 1， v/v)、 2 mL甲醇沖洗固相萃取小柱，2 mL磷酸溶液(3 mM， pH 3.4):乙腈(3: 7， v/v)活化固相萃取小柱，注意不 能使固相萃取小柱抽干。上3 mL經(jīng)處理后的豬肉樣品液(樣品液)到固相萃取 小柱后，依次用l mL水，1 mL乙酸乙腈(2: 98， v/v)， 1 mL乙腈水(7: 3， v/v)， 1 mL乙腈淋洗固相萃取小柱，抽干，然后用3X1 mL甲醇醋酸(9: 1， v/v)洗脫鹽酸克倫特羅。將洗脫液用氮氣吹干，向所得的殘余物加入IOO "L 水，用ELISA檢測樣品中鹽酸克倫特羅的濃度。
本實施例合成的分子印跡聚合物可以特異的識別鹽酸克倫特羅，可以用于動 物源性食品中鹽酸克倫特羅的分離，凈化和富集。對豬肉中添加鹽酸克倫特羅 5.0 yg/kg標(biāo)準(zhǔn)樣品的回收率為110. 1%，對其它類藥物無特異性吸附。
權(quán)利要求
1、一種分子印跡聚合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟步驟一，將模板分子克倫特羅、功能單體甲基丙烯酸、交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯按照12-615的摩爾比均勻混合，溶解到致孔劑中，置入安培瓶中，再加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈，超聲處理后，充入氮氣，真空封口，熱引發(fā)聚合，形成塊狀聚合物；步驟二，將合成的塊狀聚合物磨碎，通過樣品篩過濾，并通過索氏抽提除去大部分模板分子，將得到的分子印跡聚合物在80℃-150℃的溫度下放置4h-12h，用甲醇勻漿后填充到固相萃取小柱內(nèi)，然后對固相萃取小柱進一步洗脫模板分子；步驟三，將除去模板分子的分子印跡聚合物進行干燥處理，得到克倫特羅分子印跡聚合物。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子印跡聚合物的制備方法，其特征是，所述致 孔劑，為氯仿和乙腈的混合液，二者的體積比為3: 10。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分子印跡聚合物的制備方法，其特征是，所 述致孔劑，其體積為5 raL-8 mL。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子印跡聚合物的制備方法，其特征是，所述熱 引發(fā)，采用60°C-7(TC水浴。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子印跡聚合物的制備方法，其特征是，所述的 索氏抽提，是指分別用甲醇與醋酸的混合溶液以及甲醇與甲酸的混合溶液萃取， 各萃取3次-6次，每次4h-6h，最后用純甲醇萃取1次-2次，其中，甲醇與 醋酸以及甲醇與甲酸的體積比均為9: 1。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子印跡聚合物的制備方法，其特征是，所述對 固相萃取小柱進一步洗脫模板分子，是指先后用甲醇與醋酸的混合液、甲醇與甲 酸的混合液、乙腈、甲醇進行洗脫處理，每種溶劑的體積為30mL-60mL，其中， 甲醇與醋酸以及甲醇與甲酸的體積比為9: 1。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子印跡聚合物的制備方法，其特征是，所述的 樣品篩，其孔徑大小為38. 5 lim-54 y m。
8、 一種用如權(quán)利要求1所述的分子印跡聚合物分離鹽酸克倫特羅的方法，其特征在于，包括以下步驟步驟一，用甲醇淋洗聚丙烯固相萃取小柱和篩板，將分子印跡聚合物用甲醇 勻漿后填充到固相萃取小柱中，填料的上下兩端加上聚乙烯的篩板，在抽真空狀 態(tài)下壓緊填料；步驟二，先后用甲醇與醋酸的混合溶液、甲醇沖洗固相萃取小柱，用磷酸溶 液和乙腈的混合液活化固相萃取小柱，加入含有鹽酸克倫特羅的樣品液，用淋洗 液淋洗固相萃取小柱，用洗脫液洗脫鹽酸克倫特羅，收集鹽酸克倫特羅。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的用分子印跡聚合物分離鹽酸克倫特羅的方法，其 特征是，所述將分子印跡聚合物用甲醇勻漿后填充到固相萃取小柱中，其填充的 分子印跡聚合物質(zhì)量為20 mg-200 mg。
10、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的用分子印跡聚合物分離鹽酸克倫特羅的方法，其 特征是，所述淋洗液，為水、乙酸與乙腈的混合溶液、乙腈與水的混合溶液、乙 腈，其中，乙酸與乙腈的體積比為2: 98，乙腈與水的體積比為7: 3。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種化學(xué)工程技術(shù)領(lǐng)域的分子印跡聚合物的制備及用其分離鹽酸克倫特羅的方法，制備方法中將克倫特羅、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯按1∶2-6∶15摩爾比混合，溶解到致孔劑中，置入安培瓶中，加入引發(fā)劑，超聲處理后，充入氮氣，真空封口，熱引發(fā)聚合，形成塊狀聚合物；取出塊狀聚合物，磨碎，篩分；烘干聚合物后，用索氏抽提、高溫處理及溶劑洗脫去除模板。分離方法中將分子印跡聚合物勻漿，填充到聚丙烯固相萃取小柱中，填料的上下兩端加上聚乙烯的篩板，壓緊填料；活化固相萃取小柱、淋洗固相萃取小柱、洗脫、收集鹽酸克倫特羅。本發(fā)明制備的分子印跡聚合物選擇性高、特異性高，能耐不良環(huán)境，并能與ELISA聯(lián)用。
文檔編號C08L35/02GK101434679SQ20081020777
公開日2009年5月20日 申請日期2008年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月25日
發(fā)明者張大兵, 武愛波, 鄭素連 申請人:上海交通大學(xué)