專利名稱：聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
癌癥是危害人類健康的重大疾病，發(fā)病率逐年上升。目前，癌癥治療的手段包括手 術(shù)、放療、化療等，為了最大限度地減少復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、提高生存率，積極進(jìn)行癌癥新型療法的探 索十分必要。癌癥的靶向治療是提高癌癥治療效果的一條重要途徑，而癌細(xì)胞中一些蛋白 質(zhì)分子的特異性表達(dá)或過度表達(dá)為癌癥治療提供了分子水平的新靶點(diǎn)。乳腺癌為我國女性 最常見的惡性腫瘤病之一，居女性惡性腫瘤死亡率的首位，以大中城市的發(fā)病率最高。手術(shù) 治療仍為乳腺癌的主要治療手段之一，但是手術(shù)治療會(huì)破壞乳房的外形。放射治療是治療 乳腺癌的主要組成部分，是局部治療手段之一，不過放射治療效果受著射線的生物學(xué)效應(yīng) 的影響，用目前常用的放療設(shè)施較難達(dá)到"完全殺滅"腫瘤的目的。 化療不同于手術(shù)治療和放射治療，它是整體性治療，通過口服及靜脈給藥在全身 起作用?；瘜W(xué)治療能消滅某種癌癥的轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)，是癌癥治療方法中不可缺少的組成部分， 在腫瘤治療中的應(yīng)用越來越廣泛。目前，約20余種腫瘤單用化療可以得到緩解，尤其對于 一些全身性腫瘤如白血病、多發(fā)性骨髓瘤等?；熍c其他治療方法相配合，大大提高了惡性 腫瘤的治療效果，并有效地控制了癌腫的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。但是化療藥物常"是非不清"、"敵我 不分"，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也殺傷了人體正常細(xì)胞。因此，化療可能出現(xiàn)毒性作用和不 良反應(yīng)。如果降低藥物濃度以減少這些副作用，就會(huì)同時(shí)降低對腫瘤的控制效果；反之如增 加劑量，在增加療效的同時(shí)也會(huì)增加副作用。為了打破這一僵局，人們正在不斷嘗試新的靶 向給藥途徑。 正常組織中微血管內(nèi)皮間隙致密、結(jié)構(gòu)完整，大分子和脂質(zhì)粒不易透過血管壁，而 實(shí)體瘤組織中血管豐富、血管壁間隙較寬、結(jié)構(gòu)完整性差，淋巴回流缺失，造成大分子類物 質(zhì)和脂質(zhì)粒具有選擇性，高通透性和滯留性，這種現(xiàn)象就是實(shí)體瘤組織的高通透性和滯留 效應(yīng)，簡稱EPR效應(yīng)(enhanced permeability and retentioneffect)。實(shí)體瘤組織的病理
結(jié)構(gòu)，使得大分子抗癌藥對實(shí)體瘤具有被動(dòng)的靶向性或者選擇性，全身給藥后在腫瘤組織 中有較多的分布，又稱為實(shí)體瘤的被動(dòng)靶向性；而小分子抗癌藥能夠自由通過正常組織和 腫瘤組織的血管壁，在正常組織和腫瘤組織中的藥物分布一致，是造成抗癌效應(yīng)選擇性差、 毒副作用較強(qiáng)的重要原因之一，不具備被動(dòng)靶向作用。 阿霉素(Doxorubicin,簡稱Dox)是一種常用的小分子抗腫瘤藥，具有較強(qiáng)的細(xì)胞 毒性作用，臨床上廣泛應(yīng)用于惡性腫瘤的治療。但該藥具有較強(qiáng)的心臟毒性及骨髓抑制作 用，在臨床應(yīng)用上受到一定程度的限制。但是把阿霉素包載于納米粒和聚合物膠束等一系 列藥物載體系統(tǒng)后既提高藥效又減小毒副作用。目前，臨床上應(yīng)用的是水溶性的阿霉素的 鹽酸鹽，但是有些納米粒和聚合物膠束要靠疏水相互作用才能把藥物包載，故需要先將阿霉素變?yōu)槭杷缘乃幬铩＿@樣更有利于其在細(xì)胞中以及體內(nèi)實(shí)現(xiàn)緩釋。
Bcl2基因是一原癌基因，能抑制細(xì)胞凋亡。它編碼分子量為26Xl(f的蛋白，該蛋 白定位于線粒體膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜及核膜上，具有離子通道和?？康鞍椎碾p重功能，通過維持線 粒體的完整性阻止細(xì)胞凋亡。高表達(dá)Bcl2蛋白不僅與許多腫瘤的發(fā)生有關(guān)，而且在腫瘤化 療耐藥的形成中起主要作用。由于Bcl2蛋白的生物功能在正常細(xì)胞中并不是絕對需要的， 抑制Bcl2蛋白表達(dá)可能不會(huì)對機(jī)體產(chǎn)生較大的影B向，因此，將Bcl2作為抗腫瘤藥物的新靶 點(diǎn)，發(fā)展其小分子抑制物無疑是腫瘤治療的一個(gè)極具前景的切入點(diǎn)。RNA干擾用于抑制細(xì)胞 內(nèi)Bcl2的表達(dá)，但存在結(jié)果不穩(wěn)定、成本高、導(dǎo)入的siRNA易降解等缺點(diǎn)。
RNA干擾(RNAi)是近年來發(fā)現(xiàn)的在生物體內(nèi)普遍存在的一種生物學(xué)現(xiàn)象，是在特 定酶參與下，由雙鏈RNA(dsRNA)介導(dǎo)的特異性基因沉默現(xiàn)象。利用RNA干擾技術(shù)通過siRNA 給藥能特異性抑制致病基因的表達(dá)，具有高效和多樣化的特征，在包括癌癥在內(nèi)的人類疾 病治療中極具潛力。盡管目前在大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)和體外應(yīng)用研究中，siRNA顯示出抑制基因 的良好潛質(zhì)，體外siRNA的傳輸結(jié)果也比較滿意，但在以治療人類疾病為目的的體內(nèi)siRNA 傳輸方面卻面臨著巨大挑戰(zhàn)。由于siRNA分子本身穿透細(xì)胞膜的能力極差，也不具備靶向 功能，而且在生理環(huán)境中極不穩(wěn)定，因此siRNA藥物開發(fā)的一個(gè)重要關(guān)鍵是siRNA傳輸體 系。 尋找合適的載體材料，能夠有效地將siRNA藥物分子輸送到靶細(xì)胞，而且可以在 一段時(shí)間內(nèi)維持其功效十分關(guān)鍵。高分子納米粒已經(jīng)廣泛用于從小分子到生物活性DNA分 子的傳遞的研究，其中很多成果已經(jīng)用于臨床或臨床試驗(yàn)。高分子納米粒傳遞體系的生物 相容性好，具有靶向傳遞的潛能，具有更好的穩(wěn)定性，能有效保護(hù)生物活性分子對生理環(huán)境 的耐受性，并增強(qiáng)細(xì)胞對被傳遞分子的吸收。特別值得指出的是高分子自組裝的納米粒具 有EPR效應(yīng)，可促進(jìn)藥物在腫瘤組織的富集，并能有效地被腫瘤部位細(xì)胞吸收，進(jìn)入細(xì)胞質(zhì) 和各種細(xì)胞器，因此高分子納米粒是極具潛能的siRNA傳遞系統(tǒng)的候選者。而具有良好生 物相容性的可降解高分子載體，特別是具有快速去質(zhì)子化能力的可降解陽離子型高分子載 體能有效結(jié)合和保護(hù)siRNA分子，又能使siRNA在細(xì)胞質(zhì)中迅速釋放，實(shí)現(xiàn)阻斷基因表達(dá)的 目的，這將使這類載體在siRNA給藥中具有更好的優(yōu)勢和應(yīng)用前景。傳統(tǒng)的方式均采用水 溶性的陽離子聚合物，將這些載體分子與siRNA互混得到二者的復(fù)合物或納米粒，從而實(shí) 現(xiàn)傳遞siRNA的目的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物 及其應(yīng)用。 本發(fā)明提供了一種聚乙二醇單甲醚_聚己內(nèi)酯_聚乙烯亞胺三嵌段共聚物。 所述聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物具體可為 mPEG45-PCL100-PEI12。 mPEG45-PCL1Q。-PEI12中，中間嵌段是所述聚己內(nèi)酯， 一個(gè)末端嵌段是所述聚乙二醇 單甲醚，另一個(gè)末端嵌段是所述聚乙烯亞胺；所述聚乙二醇單甲醚嵌段中，聚乙二醇的聚合 度為45，對應(yīng)的數(shù)均分子量為2000g/mol ;所述聚己內(nèi)酯嵌段中，聚己內(nèi)酯的聚合度為100， 對應(yīng)的數(shù)均分子量為11400g/mol ;所述聚乙烯亞胺嵌段中，聚乙烯亞胺的聚合度為12，對應(yīng)的數(shù)均分子量為520g/mol。 所述數(shù)均分子量為核磁共振氫譜CH NMR)分析結(jié)果。 本發(fā)明還提供了 一種合成聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物 的方法，是將聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯兩嵌段聚合物與低分子量聚乙烯亞胺偶聯(lián)得到三 嵌段共聚物； 所述聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯兩嵌段聚合物是以聚乙二醇單甲醚作為引發(fā)劑， 以異辛酸亞錫為催化劑，引發(fā)己內(nèi)酯單體聚合得到的； 所述低分子量聚乙烯亞胺是以對甲基苯磺酸甲酯作為引發(fā)劑，引發(fā)2-甲基-2-噁
唑啉經(jīng)陽離子開環(huán)聚合，再在酸性條件下脫去乙?；玫降?。 所述酸性條件具體可為大于10% (質(zhì)量百分比)的鹽酸水溶液。 所述的三嵌段共聚物制成的納米顆粒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。 所述納米顆粒還可進(jìn)行化學(xué)修飾或配體修飾。 納米顆?？梢圆捎萌魏纬Ｒ?guī)方法制備，例如如下溶劑揮發(fā)法:將三嵌段共聚物溶于四 氫呋喃中，于攪拌下滴入超純水，攪拌兩小時(shí)后，于減壓下除去有機(jī)溶劑，再定容至合適的體積。
本發(fā)明還保護(hù)一種藥物載體，它的活性成分為所述納米顆粒。 載藥納米顆?？梢圆捎萌魏纬Ｒ?guī)方法制備，例如如下溶劑揮發(fā)法將三嵌段共聚 物和疏水性藥物溶于四氫呋喃中，于攪拌下滴入超純水，攪拌兩小時(shí)后，于減壓下除去有機(jī) 溶劑，再定容至合適的體積。 所述藥物載體可應(yīng)用于輸送siRNA和/或化療藥物。
所述化療藥物具體可為疏水性藥物，如阿霉素。 所述藥物載體還可應(yīng)用于制備抑制腫瘤細(xì)胞增殖和/或治療癌癥的藥物。
可根據(jù)預(yù)期目的，用所述藥物載體負(fù)載不同的siRNA和/或化療藥物。比如當(dāng)所 述腫瘤細(xì)胞為乳腺癌細(xì)胞和/或所述癌癥為乳腺癌時(shí)，可用所述藥物載體負(fù)載Bcl2基因的 siRNA和/或阿霉素。 本發(fā)明還保護(hù)一種抑制腫瘤細(xì)胞增殖和/或治療癌癥的藥物，它的活性成分是所 述共聚物負(fù)載siRNA藥物和/或化療藥物形成的納米顆粒。
所述化療藥物具體可為疏水性藥物，如阿霉素。 可根據(jù)預(yù)期目的制備不同功能的藥物。比如當(dāng)預(yù)期制備抑制乳腺癌細(xì)胞增殖和/ 或治療乳腺癌的藥物時(shí)，可用所述藥物載體負(fù)載Bcl2基因的siRNA和/或阿霉素形成的納 米顆粒作為活性成分。 具體可將制備好的載藥納米顆粒與siRNA溶液互混來制備負(fù)載siRNA藥物和化療 藥物的納米顆粒。 本發(fā)明提供的聚乙二醇單甲醚_聚己內(nèi)酯_聚乙烯亞胺三嵌段共聚物具有兩親性 的特征，在水溶液中自組裝形成納米尺度的顆粒，具有疏水的聚己內(nèi)酯內(nèi)核和親水性的聚 乙二醇單甲醚和聚乙烯亞胺外殼。聚乙烯亞胺部分帶有可質(zhì)子化的胺基，在略酸性環(huán)境中 形成的納米顆粒表面帶有可觀的正電荷，通過靜電作用可以結(jié)合帶有負(fù)電的siRNA，起到傳 輸siRNA的作用。聚己內(nèi)酯可以包載疏水性抗癌藥物。本發(fā)明的共聚物作為藥物載體具有 如下優(yōu)點(diǎn)1、相對疏水性，因此在聚合物鏈之間的疏水_疏水相互作用促進(jìn)共聚物自組裝； 2、可生物降解；3、生物相容的；4、合成方法簡單可控；5、原料較為廉價(jià)，節(jié)約成本。
本發(fā)明提供的三嵌段共聚物，具有良好的生物相容性和可降解性，可以在水溶液 中自組裝形成納米顆粒，并包載用于癌癥治療的小分子化療藥物，同時(shí)這種載體自組裝形 成的納米顆粒帶有正電荷，能高效結(jié)合帶有負(fù)電荷的小干擾RNA藥物，是一種能同時(shí)將小 干擾RNA藥物和小分子化療藥物輸送到癌細(xì)胞的載體納米顆粒。這種載體的優(yōu)勢在于它輸 送小干擾RNA藥物進(jìn)入細(xì)胞沉默癌基因的表達(dá)的同時(shí)，也攜載大大低于正常給藥劑量的小 分子化療藥物進(jìn)入癌細(xì)胞，并進(jìn)一步高效殺死癌細(xì)胞，而這一低劑量的化療藥物對正常細(xì) 胞只有極低的副作用。這種結(jié)合輸送小干擾RNA和化療藥物的載體有可能解決臨床上化療 藥物毒性高選擇性低帶來的副作用，同時(shí)提高治療效率，改善癌癥治療的功效。
本發(fā)明首次利用聚乙二醇單甲醚_聚己內(nèi)酯_聚乙烯亞胺嵌段共聚物形成的納米 顆粒輸送針對Bcl2基因的siRNA和抗腫瘤藥物阿霉素，證明了納米顆粒能夠?qū)iRNA和阿 霉素運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)并發(fā)揮增強(qiáng)的沉默基因的作用，以及增強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。 本發(fā)明提供的納米顆粒具有良好的生物相容性，同時(shí)納米顆粒具有很好的穩(wěn)定性和方便制 備等特點(diǎn)，使得這類生物可降解的納米顆粒在化療藥物輸送、RNA干擾藥物輸送，以及二者 的同時(shí)輸送，以治療疾病中具有良好的應(yīng)用前景。


圖1為聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物的合成流程。
圖2為聚合物的111 NMR譜圖；(A)聚乙二醇單甲醚_聚己內(nèi)酯，(B)聚乙二醇單甲 醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺。 圖3為mPEG45-b-PCL咖-b-PEL納米顆粒的表征；(A)熒光激發(fā)光譜圖，(B) I339/I336 強(qiáng)度比與mPEG45-b-PCL咖-b-PEI^濃度對數(shù)(Log C)的關(guān)系，Log特指Log1Q。
圖4為mPEG45-b-PCL咖-b-PE^納米顆粒的透射電子顯微鏡照片。
圖5為不同濃度的納米顆粒的細(xì)胞毒性。 圖6為0. lmg/mL濃度的納米顆粒的粒徑和表面Zeta電勢；(A)粒徑，(B)表面
Zeta電勢。 圖7為納米顆粒與siRNA結(jié)合形成的復(fù)合物在不同N/P比條件下的粒徑和表面電 位；(A)粒徑，(B)表面電位。 圖8為納米顆粒與siRNA結(jié)合形成的復(fù)合物的非變性SDS-PAGE電泳結(jié)果。
圖9為載藥載siRNA納米顆粒進(jìn)入細(xì)胞后的激光共聚焦顯微鏡照片；(A)培養(yǎng)時(shí) 間為0. 5小時(shí)，(B)培養(yǎng)時(shí)間為4小時(shí)。 圖10為載藥載siRNA納米顆粒進(jìn)入細(xì)胞的FACS結(jié)果；(A)培養(yǎng)時(shí)間為0. 5小時(shí)， (B)培養(yǎng)時(shí)間為4小時(shí)。 圖11為載藥載siRNA納米顆粒在乳腺癌細(xì)胞系MCF-7沉默Bcl2效果的 WesternBlot分析結(jié)果。 圖12為載藥載siRNA納米顆粒對乳腺癌MCF_7細(xì)胞系增殖影響的3H標(biāo)記胸腺嘧 啶摻入結(jié)果。
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試劑，如無特殊說明，均是可以從
常規(guī)生化試劑商店購買得到的。 下述實(shí)施例中的Log特指Log1Q 。 siRNA是一種由二十多個(gè)核苷酸組成的雙鏈小分子RNA，帶有負(fù)電荷，可與帶正電
的mPEG45-PCL1Q。-PEI12納米顆粒通過正負(fù)電荷作用形成穩(wěn)定的復(fù)合物。 以下試驗(yàn)中的Bc12 siRNA序列為 正義序列5， -gUACAUCCAUUAUAAgCUgdTdT-3，； 反義序列5 ， -CAgCUUAUAAUggAUgUACdTdT-3 ，。 雜序siRNA序列為 正義序列5， -UUCUCCgAACgUgUCACgUdTdT-3，；
反義序列5， -ACgUgACACgUUCggAgAAdTdT-3'。
實(shí)驗(yàn)中所用siRNA的濃度均為20 y M，由上海吉瑪公司合成。 實(shí)施例1、聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物的合成與表征聚
乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物的合成流程見圖1。 1、聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯(mPEG-PCL)兩嵌段聚合物的合成和表征本實(shí)驗(yàn)中
的聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯兩嵌段聚合物是由聚乙二醇單甲醚作為引發(fā)劑引發(fā)己內(nèi)酯
(CL)的聚合而制備得到的。制備中使用異辛酸亞錫作為催化劑，異辛酸亞錫因其高催化效
率及無毒性，是被最廣泛應(yīng)用的內(nèi)酯及交酯環(huán)狀單體開環(huán)聚合反應(yīng)的催化劑，已被美國FDA
批準(zhǔn)作為食品添加劑。 具體實(shí)驗(yàn)步驟如下以市售聚乙二醇單甲醚(mPEG^分子量2000)為引發(fā)劑， 異辛酸亞錫(Sn(Oct)2)為催化劑制備聚合物，聚合反應(yīng)在手套箱中進(jìn)行。將進(jìn)行反應(yīng) 的圓底燒瓶經(jīng)多次的抽真空火焰干燥和充氮?dú)獾奶幚砗?，放入手套箱，向燒瓶中加?1. 20g(0. 6mmol)mPEG、7. 52g(66mmol)CL單體和0. 006g(0. 015mmol)Sn(Oct)2，在120。C攪拌 下反應(yīng)。待反應(yīng)24小時(shí)后，將產(chǎn)物移出手套箱，用少量的CH^l2溶解，將溶液沉淀到冷的 乙醚中，反復(fù)兩次，收集沉淀物，用油泵抽干至恒重為止，得到聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯 (mPEG-PCL)兩嵌段聚合物。mPEG-PCL聚合物的表征見表l/H NMR譜見圖2(A)。
表ImPEG-PCL聚合物的表征
mPEG-PCLa[CL]: [mPEG]: [Sn(0ct)2]bMnc (g/mol)
mPEG4s-P(X湖110/1/0. 025225101.45 a聚合物右下角的數(shù)字代表聚合物根據(jù)核磁計(jì)算的得到的聚合度；b表示投料時(shí)各
物質(zhì)的摩爾比；eGPC測定的數(shù)均分子量和分散度；
2、低分子量聚乙烯亞胺的合成與表征 低分子量的聚乙烯亞胺是由對甲基苯磺酸甲酯(阿法埃莎(天津)化學(xué)有限公 司)作為引發(fā)劑，引發(fā)2-甲基-2-噁唑啉(阿法埃莎(天津)化學(xué)有限公司)經(jīng)陽離子開 環(huán)聚合，然后再在酸性條件下脫去乙?；玫健＞唧w實(shí)施方法如下
7
在手套箱中，將對甲基苯磺酸甲酯(0. 44g，2. 37mmol) ，2-甲基_2_噁唑(6. 06g， 71.30,1)和溶劑乙腈(llmL)加入到單口燒瓶中。溫度恒定在7(TC，反應(yīng)48小時(shí)。將反 應(yīng)體系冷卻至(TC，加入O. 12M MVCH^N溶液，攪拌1小時(shí)。過硅膠柱后，將溶液濃縮，沉淀 在冷的乙醚中，過濾得到產(chǎn)物聚(2-甲基-2-噁唑啉)。得到產(chǎn)物2. 84g(產(chǎn)率43. 7% )。 ^ NMR(CDC13，卯m) :3. 45(s， _CH2CH2N_) ， 3. 03(s， CH3N_) ， 2. 07 2. 13(m， _C(0)CH3)。根據(jù) 力NMR譜圖計(jì)算，其聚合度約為12。 取出上述產(chǎn)物1. 5g，溶解于15mL 10% (質(zhì)量百分比)的鹽酸水溶液中，在105°C 回流過夜。加入NaOH將反應(yīng)體系的pH值調(diào)節(jié)至10，聚合物沉淀出來。將沉淀經(jīng)離心后分 離，并用冷的蒸餾水洗滌三次，凍干后得到低分子量聚乙烯亞胺，產(chǎn)率90.2%。對低分子量 聚乙烯亞胺進(jìn)行核磁共振氫譜CH NMR)分析？H NMR(d6-匿S0，卯m) :2. 57 (s， _CH2CH2NH_)， 2. 90(s， CH3NH_)。 3、聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物的合成與表征聚乙二醇 單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物是將步驟l制備的聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi) 酯兩嵌段聚合物與步驟2制備的低分子量的聚乙烯亞胺偶聯(lián)得到的。具體的反應(yīng)步驟如 下取2. 5g聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯兩嵌段聚合物溶于20mL無水四氫呋喃(THF)中，加 入羰基二咪唑(CDI)0.3g，室溫下反應(yīng)12小時(shí)。濃縮后，沉淀到冷的乙醚中，過濾后得到固 體顆粒，真空抽干。將其再溶解于20mL的匿SO中，并加入低分子量聚乙烯亞胺0. 28g，在 45t:反應(yīng)24小時(shí)。濃縮后，將聚合物沉淀到冷的6 : l(體積比)的乙醚/甲醇中，過濾后 得到聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物。 對聚乙二醇單甲醚_聚己內(nèi)酯_聚乙烯亞胺三嵌段共聚物(mPEG45-PCL1Q。-PEI12) 進(jìn)行核磁共振氫譜CH NMR)分析，氫譜見圖2(B)。聚乙二醇的聚合度為45，對應(yīng)的數(shù)均分 子量為2000g/mo1 ;聚己內(nèi)酯嵌段的聚合度為IOO，對應(yīng)的數(shù)均分子量為11400g/mol ;聚乙 烯亞胺嵌段的聚合度為12，對應(yīng)的數(shù)均分子量為520g/mol。
實(shí)施例2、納米顆粒的制備和表征 用實(shí)施例1制備的mPEG45-PCL1Q。-PEI12三嵌段共聚物進(jìn)行如下試驗(yàn)。 —、納米顆粒的制備和表征 1、納米顆粒(以下簡稱NP)的制備 兩親性嵌段共聚物在水溶液中會(huì)由于疏水段的疏水相互作用，自組裝形成納米顆 粒。制備納米顆粒的方法有多種，最簡單常見的是溶劑揮發(fā)法。 通過溶劑揮發(fā)法制備納米顆粒將10mg實(shí)施例1制備的mPEG站-PCL，-PEI^三 嵌段共聚物溶于lmL四氫呋喃中，室溫下攪拌1小時(shí)，然后在攪拌下以60mL/h的速度滴入 10mL超純水，再攪拌兩小時(shí)后，于負(fù)壓下除去有機(jī)溶劑，最后定容到2mL，得到濃度為5mg/ mL的納米顆粒溶液。
2、臨界膠束濃度(CMC)的測定 以芘為熒光探針表征兩親性聚合物的聚集體的臨界聚集濃度是最為常見和有效 的方法。將步驟1配制的濃度為5mg/mL的納米顆粒溶液先稀釋至lmg/mL，然后再逐步稀 釋成一系列濃度(按照IX (1/2)11—1梯度稀釋，其中n = 1-21，)，同時(shí)保證每一濃度下芘的 濃度保持6X10—^Ql/L不變。固定最大發(fā)射波長在390nm，掃描芘的激發(fā)光譜。試驗(yàn)設(shè)置 三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。圖3(A)為芘在不同濃度mPEG^-PCL，-PE^聚合物溶液中(取n= 1、3、5、6、7、9、13的濃度)的激發(fā)光譜譜圖。隨著聚合物濃度的增加，芘探針的熒光光 譜發(fā)生了顯著的變化，首先是峰的強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，其次是其(0，0)吸收譜帶從336nm紅移到 339nm，這些變化是由于芘由水環(huán)境轉(zhuǎn)移至疏水環(huán)境，意味著核殼結(jié)構(gòu)的納米顆粒的形成。
結(jié)合上述激發(fā)光譜，計(jì)算每個(gè)濃度下339nm和336nm時(shí)峰的強(qiáng)度比，即1339/1336，將 一系列的1339/1336對相應(yīng)的濃度的對數(shù)作圖，可以得到如圖3(B)所示的S型曲線，圖中的 Log特指Log^由圖可見，曲線呈S型，在低濃度下，聚合物的熒光強(qiáng)度基本穩(wěn)定，當(dāng)達(dá)到一 定濃度后，其比值開始迅速增大，表明芘選擇性的由水環(huán)境進(jìn)入疏水核中，此時(shí)納米顆粒形 成。繼續(xù)增大聚合物濃度時(shí)，熒光強(qiáng)度到達(dá)一個(gè)平臺(tái)，不再增大，這表明共聚物在水中已完 全自組裝形成了以聚己內(nèi)酯為疏水核的納米顆粒。CMC值可由水平線與斜線切線的交點(diǎn)確 定，CMC值為2. 45X 103mg/mL。
3、納米顆粒的形態(tài) 利用透射電子顯微鏡觀察濃度為0. 4mg/mL時(shí)，納米顆粒的形態(tài)，見圖4。可以看到
納米顆粒都呈現(xiàn)規(guī)整的球形結(jié)構(gòu)，粒徑約為30nm，且大小分布相對均一。 4、納米顆粒的生物相容性 將濃度為5mg/mL的納米顆粒溶液稀釋至不同濃度(1 P g/mL至1000 y g/mL)，通過 MTT方法分別測定不同濃度納米顆粒的生物相容性。測定時(shí)采用MCF-7細(xì)胞(購自ATCC公 司，HTB-22)以PEI80(購自sigma)和PEI25000 (sigma，產(chǎn)品目錄號(hào)為9002-98-6)作為對
照。試驗(yàn)設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。 圖5為不同濃度的納米顆粒與MCF-7細(xì)胞共培養(yǎng)72小時(shí)后的細(xì)胞活力。結(jié)果表 明隨著濃度從1 P g/mL增大到1000ii g/mL，納米顆粒對細(xì)胞活力沒有明顯的影響，細(xì)胞活 力一直維持在100%左右，該三嵌段共聚物具有良好的生物相容性。
二、載藥納米顆粒(以下簡稱NP/Dox)的制備 疏水性阿霉素溶液(10mg/mL)的制備lOmg阿霉素鹽酸鹽(浙江海正藥業(yè)股份有 限公司)溶于水，將pH調(diào)至9.6后，凍干后溶解于lmL的二甲亞砜。 通過溶劑揮發(fā)法制作包載疏水性阿霉素的膠束納米顆粒；將10mg實(shí)施例1制備的 mPEG45-PCL，-PE^三嵌段共聚物溶解在1. OmL四氫呋喃中，然后再向其中加入0. L(或 20 ii L)疏水性阿霉素溶液(阿霉素質(zhì)量聚合物質(zhì)量=0. 0004或0. 02)。將10mL超純 水逐滴加入上述溶液中，在室溫下攪拌1小時(shí)后用真空泵將四氫呋喃除掉并且抽去一部分 水，當(dāng)剩余2mL液體時(shí)停止抽真空。取出膠束納米顆粒溶液，然后以5000g離心除去游離的 阿霉素。得到濃度為5mg/mL，阿霉素質(zhì)量聚合物質(zhì)量=1 : 2500的載藥納米顆粒溶液。 得到濃度為5mg/mL，阿霉素質(zhì)量聚合物質(zhì)量=1 : 50的載藥納米顆粒溶液。
三、納米顆粒的粒徑和zeta電勢 將濃度為5mg/mL的納米顆粒溶液稀釋50倍，得到溶液A ;將濃度為5mg/mL的載 藥納米顆粒溶液(阿霉素質(zhì)量聚合物質(zhì)量=1 : 50)稀釋50倍，得到溶液B。通過型號(hào) 為Malvern Zetasizer Nanao ZS90的動(dòng)態(tài)光散射儀檢測溶液A和溶液B中納米顆粒的粒 徑和粒徑分布。設(shè)置三次重復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果取平均值。 圖6 (A)為納米顆粒的粒徑，圖6 (B)為納米顆粒的zeta電勢。包載阿霉素和不包 載阿霉素的聚合物納米顆粒粒徑差距不大，電勢差距也不大。顆粒的平均直徑為45nm，粒徑 分散度為0. 08， zeta電勢為45mV。
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需要指明的是，利用動(dòng)態(tài)光散射測量的粒徑比透射電子顯微鏡的結(jié)果偏大，這主 要是因?yàn)閯?dòng)態(tài)光散射測量的是納米粒在水溶液中的流體動(dòng)力學(xué)半徑，而透射電鏡測量的是 納米顆粒在脫水狀態(tài)的粒徑。但是不管哪種測量方法均顯示上述三嵌段聚合物的納米顆粒 都具有均勻的粒徑分布。 實(shí)施例3、納米顆粒作為載體的性能評價(jià) 用實(shí)施例1制備的mPE^-PCL，-PEI^三嵌段共聚物進(jìn)行如下試驗(yàn)。
—、載siRNA納米顆粒(以下簡稱NP/siRNA)的制備 載siRNA納米顆粒的制備方法如下將不同濃度siRNA溶液與納米顆粒溶液混合， 室溫放置20分鐘。 固定納米顆粒的終濃度為0. lmg/ml，通過改變siRNA的量改變正負(fù)電荷比(N/P 比)，制備體積一致(125 ii 1)但不同N/P比的載siRNA納米顆粒，檢測載siRNA納米顆粒的 粒徑和zeta電勢。試驗(yàn)設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。 當(dāng)N/P比為1 : 0，即只有納米顆粒時(shí)，復(fù)合物粒徑為46. 5±0. 246nm;當(dāng)N/P比為 1.5 : 1時(shí)，復(fù)合物粒徑最大(212士5. 10nm);隨著N/P比的增加，復(fù)合物粒徑先增大然后變 小，并接近N/P比為1 : 0時(shí)的粒徑；圖7(A)為N/P比分別為1、1. 5、2. 5、5、10、25、50、100 時(shí)的復(fù)合物的粒徑變化。在N/P為1 : O時(shí)，復(fù)合物的表面電位最大(45mV);當(dāng)N/P比為 1. 5 : 1時(shí)，復(fù)合物表面電位降低到_18±0. 8mV，表明mPEG45-PCl^。。-PEI^納米粒通過電荷 相互作用與siRNA結(jié)合形成了復(fù)合物；圖7(B)為N/P比分別為1、1. 5、2. 5、5、 10、25、50、 100 時(shí)的復(fù)合物的表面電位變化。 固定siRNA的終濃度為1.6iiM，通過改變納米顆粒的量來改變N/P比，制備體 積一致但不同N/P比的載siRNA納米顆粒。分別進(jìn)行非變性PAGE，上樣時(shí)保持體積一致 (25iU)。當(dāng)二者完全結(jié)合時(shí)，凝膠上不會(huì)有條帶出現(xiàn)。 圖8為N/P比分別為1、2. 5、5、7. 5、10、15的復(fù)合物的非變性SDS-PAGE圖。結(jié)果 表明，N/P比為10時(shí)完全結(jié)合。 二、載藥載siRNA納米顆粒(以下簡稱NP/siRNA/Dox)的性能評價(jià)
1、NP/siRNA/Dox的細(xì)胞吞噬的激光共聚焦結(jié)果
制備NP/siRNA/Dox的方法如下將載藥納米顆粒溶于0pti-MEM，室溫5分鐘；將FAM-siRNA (上海吉瑪公司)溶于 0pti-MEM ;將混勻的載藥納米顆粒于FAM-siRNA混合后室溫放置20分鐘。
制備250 iil N/P = 30的NP/siRNA/Dox溶液，其中共聚物終濃度為3mg/mL，阿霉 素終濃度為60 ii g/mL， FAM-siRNA終濃度為2 ii M。 將NP/siRNA/Dox溶液與MCF-7細(xì)胞(5X 105細(xì)胞/孔)在37。C共同培養(yǎng)0. 5小 時(shí)(或4小時(shí))后，用Hoechst 33342對細(xì)胞核進(jìn)行染色，然后用4%甲醛溶液室溫固定細(xì) 胞30分鐘，用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察。結(jié)果見圖9， (A)培養(yǎng)時(shí)間為0.5小時(shí)，(B)培 養(yǎng)時(shí)間為4小時(shí)。圖9中，細(xì)胞內(nèi)綠色的部分是FAM標(biāo)記的siRNA，細(xì)胞內(nèi)紅色的部分是包 載阿霉素的納米顆粒，細(xì)胞內(nèi)藍(lán)色的部分是細(xì)胞核。通過三種顏色疊加的結(jié)果可以看出4 小時(shí)后，納米顆粒與siRNA在細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)分離，而且納米顆粒并沒有進(jìn)入細(xì)胞核，siRNA主 要分布在細(xì)胞胞漿中。表明mPEG45-PCL1Q。-PEI12納米顆粒能夠有效的將siRNA運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞 內(nèi)，并能夠與siRNA分離，使siRNA發(fā)揮基因沉默的作用。
2、NP/siRNA/Dox的細(xì)胞吞噬的流式細(xì)胞檢測結(jié)果 將MCF-7乳腺癌細(xì)胞(5X 105細(xì)胞/孔)接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，并進(jìn)行如下處
理，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)復(fù)孔 處理1 (對照組)不處理細(xì)胞。 處理2(NP/Dox組)用載藥納米顆粒溶液處理細(xì)胞，納米顆粒的終濃度為375iig/ mL，阿霉素的終濃度為7. 5 ii g/mL。 處理3 (NP/siRNA組)用載siRNA納米顆粒溶液處理細(xì)胞，納米顆粒的終濃度為 375 ii g/mL， FAM-siRNA的終濃度為0. 25nM。 處理4(NP/siRNA/Dox組)用載藥載siRNA納米顆粒溶液處理細(xì)胞，納米顆粒的 終濃度為375 ii g/mL，阿霉素的終濃度為7. 5 ii g/mL， FAM-siRNA的終濃度為0. 25nM。
處理5(NP/Dox+NP/siRNA組)用體積比為1 : 1的載藥納米顆粒溶液和載siRNA 納米顆粒共同處理細(xì)胞，納米顆粒的終濃度為750 ii g/mL，阿霉素的終濃度為7. 5 y g/mL， FAM-siRNA的終濃度為0. 25nM。
將不同處理的細(xì)胞均在37t:進(jìn)行培養(yǎng)。 圖10為0.5小時(shí)(A)和4小時(shí)(B)后，細(xì)胞中阿霉素和FAM標(biāo)記的siRNA的變化。 從圖10中可以看出，納米顆粒同時(shí)輸送阿霉素和siRNA進(jìn)入細(xì)胞，而且隨時(shí)間的延長細(xì)胞 中熒光強(qiáng)度明顯增大。 實(shí)施例4、載藥載siRNA納米顆粒的應(yīng)用 用實(shí)施例1制備的mPEG45-PCL1Q。-PEI12三嵌段共聚物進(jìn)行如下試驗(yàn)。納米顆粒的 制備方法同實(shí)施例2和實(shí)施例3。 —、NP/siRNA/Dox對乳腺癌細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)的作用將MCF-7細(xì)胞以5X 107孔的密度接種于六孔板中24小時(shí)后，分別進(jìn)行如下處理，
每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)復(fù)孔 處理1 (對照組)不處理細(xì)胞。 處理2 (NP組)用納米顆粒溶液處理細(xì)胞，納米顆粒的終濃度為375 ii g/mL。
處理3(NP/Dox組)用載藥納米顆粒溶液處理細(xì)胞，納米顆粒的終濃度為375iig/ mL，阿霉素的終濃度為0. 15 ii g/mL。 處理4(Dox組)用阿霉素溶液處理細(xì)胞，阿霉素的終濃度為0. 2 ii g/mL。 處理5(Bcl2 siRNA組)用Bcl2 siRNA溶液處理細(xì)胞，Bcl2 siRNA的終濃度為
0.25nM。 處理6(lipo組)用載Bcl2 siRNA的Lipofectamine 2000溶液處理細(xì)胞， Bcl2siRNA終濃度為0. 2nM， Lipofectamine 2000所用體積為10 ii 1。 處理7 (NP/N. C siRNA組)用載雜序siRNA的納米顆粒溶液處理細(xì)胞，雜序siRNA 的終濃度為0. 25nM，納米顆粒終濃度為375 y g/mL。 處理8 (NP/Bcl2 siRNA組)用載Bcl2 siRNA的納米顆粒溶液處理細(xì)胞，納米顆 粒的終濃度為375 ii g/mL， Bcl2 siRNA的終濃度為0. 25nM。 處理9(NP/Bc12 siRNA/Dox組)用載藥載siRNA納米顆粒溶液處理細(xì)胞，納米顆 粒的終濃度為375 ii g/mL，阿霉素的終濃度為0. 2 ii g/mL， Bcl2 siRNA的終濃度為0. 25nM。
處理10(NP/Dox+NP/Bcl2 siRNA組)用體積比為1 : 1的載藥納米顆粒溶液
11和載siRNA納米顆粒共同處理細(xì)胞，納米顆粒的終濃度為750ii g/mL，阿霉素的終濃度為 0. 2 ii g/mL， Bcl2 siRNA的終濃度為0. 25nM。 在細(xì)胞經(jīng)過以上幾種條件處理48小時(shí)后，用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞，將細(xì)胞裂解液 收集后用BCA蛋白濃度測定試劑盒(購自Thermo公司，產(chǎn)品目錄號(hào)為23225)測定各樣品 的蛋白濃度。每個(gè)樣品取75yg蛋白在12% SDS聚丙烯酰胺凝膠(SDSPAGE)電泳，然后將 蛋白轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上。用5X牛血清白蛋白封閉PVDF膜2小時(shí)后，用膜清 洗液(溶解0.05% Tween 20的磷酸鹽緩沖液PBS)清洗膜兩次，然后用P-actin(內(nèi)參) 或者Bcl2的一抗孵育PVDF膜2小時(shí)，然后用膜清洗液清洗膜兩次后用帶有辣根過氧化酶 (HRP)標(biāo)記的二抗孵育膜1小時(shí)。通過ECL顯色反應(yīng)將蛋白條帶曝光在底片上。
Western Blot結(jié)果見圖11。圖11中。1 :對照組;2 :NP組;3 :NP/Dox組;4 :Dox 組；5 :Bcl2 siRNA組；6 :lipo組；7 :NP/N. C siRNA組；8 :NP/Bcl2 siRNA組；9 :NP/Bcl2 siRNA/Dox;10 :NP/Dox+NP/Bcl2 siRNA組。不轉(zhuǎn)染Bc12 siRNA的對照實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中的Bcl2 蛋白表達(dá)量均較高，經(jīng)過Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染Bcl2 siRNA的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中的Bcl2蛋 白表達(dá)量有明顯的下降。Bcl2表達(dá)明顯下調(diào)的結(jié)果在NP/siRNA/Dox和NP/Dox+NP/siRNA 實(shí)驗(yàn)組中也觀察到，但是單純的納米粒對細(xì)胞中的Bcl2蛋白表達(dá)沒有明顯的影響。
二、 NP/siRNA/Dox對細(xì)胞增殖的影響 采用311標(biāo)記胸腺嘧啶檢測細(xì)胞增殖的方法檢測經(jīng)過下述處理48小時(shí)后的MCF7細(xì) 胞的增殖水平。 將MCF-7細(xì)胞以7X 103/孔的密度接種于96孔板中24小時(shí)后，分別進(jìn)行如下處
理，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)復(fù)孔 處理1 (對照組)不處理細(xì)胞。 處理2 (NP組)用納米顆粒溶液處理細(xì)胞，納米顆粒的終濃度為0. 6mg/mL。
處理3 (NP/Dox組)用載藥納米顆粒溶液處理細(xì)胞，納米顆粒的終濃度為0. 6mg/ mL，阿霉素的終濃度為0. 24 ii g/mL。 處理4 (Dox組)用阿霉素溶液處理細(xì)胞，阿霉素的終濃度為0. 2 y g/mL。
處理5 (siRNA組)用Bcl2 siRNA溶液處理細(xì)胞，Bc12 siRNA的終濃度為0. 4nM。
處理6(lipo組)用載Bcl2 siRNA的Lipofectamine 2000溶液處理細(xì)胞， Bcl2siRNA終濃度為0. 4nM， Lipofectamine 2000的體積為1 ii 1。 處理7 (NP/siRNA組)用載siRNA納米顆粒溶液處理細(xì)胞，納米顆粒的終濃度為 0. 6mg/mL， Bcl2 siRNA的終濃度為0. 4nM。 處理8 (NP/siRNA/Dox組)用載藥載siRNA納米顆粒溶液處理細(xì)胞，納米顆粒的 終濃度為0. 6mg/mL，阿霉素的終濃度為0. 24 y g/mL， Bcl2 siRNA的終濃度為0. 4nM。
處理9 (NP/Dox+NP/siRNA組)用體積比為1 : 1的載藥納米顆粒溶液和載siRNA 納米顆粒共同處理細(xì)胞，納米顆粒的終濃度為1. 2mg/mL，阿霉素的終濃度為0. 24y g/mL， Bcl2 siRNA的終濃度為0. 4nM。 經(jīng)上述條件處理的MCF-7細(xì)胞在37°C 5%培養(yǎng)箱中培養(yǎng)42小時(shí)，然后每孔中加 入20 ii L含有0. 5 ii Ci3H-TdR的PBS，再繼續(xù)培養(yǎng)6小時(shí)后，用多頭細(xì)胞收集器將每孔培養(yǎng) 物分別吸收于直徑24mm的玻璃纖維濾紙上，抽氣過濾并用蒸餾水充分洗滌。將濾紙片放在 8(TC烘干約lh，然后將濾紙片浸于加了 10ml脂溶性閃爍液(5.0g 2，5_二苯基惡唑(PP0)，
120. 3g 1，4-雙-2-15-苯基惡唑苯(P0P0P)溶解于200mL無水乙醇和800mL甲苯中)的閃爍 杯中，置于e-液體閃爍計(jì)數(shù)器中測定每個(gè)樣品的每分鐘脈沖數(shù)(cpm值)。將各組數(shù)據(jù)取 平均值，然后以處理1的數(shù)值為l，其他各組對其做歸一化處理。 結(jié)果見圖12。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，用mPEG45-PCL，-PEI^膠束納米粒同時(shí)輸送 Bcl2 siRNA和阿霉素能夠顯著抑制MCF-7細(xì)胞的增殖能力，效果和混合NP/Dox與NP/siRNA 處理細(xì)胞相當(dāng)，而膠束納米粒自身對細(xì)胞的增殖能力沒有影響。
權(quán)利要求
聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物。
2. 如權(quán)利要求1所述的三嵌段共聚物，其特征為所述三嵌段共聚物為<formula>formula see original document page 2</formula>
3. —種合成聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物的方法，是將聚乙 二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯兩嵌段聚合物與低分子量聚乙烯亞胺偶聯(lián)得到三嵌段共聚物；所述聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯兩嵌段聚合物是以聚乙二醇單甲醚作為引發(fā)劑，以異 辛酸亞錫為催化劑，引發(fā)己內(nèi)酯單體聚合得到的；所述低分子量聚乙烯亞胺是以對甲基苯磺酸甲酯作為引發(fā)劑，引發(fā)2-甲基-2-噁唑啉 經(jīng)陽離子開環(huán)聚合，再在酸性條件下脫去乙?；玫降?。
4. 一種納米顆粒，它由權(quán)利要求1或2所述的三嵌段共聚物制成。
5. 如權(quán)利要求4所述的納米顆粒，其特征在于所述納米顆粒進(jìn)行了化學(xué)修飾或配體 修飾。
6. —種藥物載體，它的活性成分為權(quán)利要求4或5所述納米顆粒。
7. 如權(quán)利要求6所述的藥物載體，其特征在于所述藥物為siRNA藥物和/或化療藥物。
8. 權(quán)利要求6或7所述藥物載體在制備抑制腫瘤細(xì)胞增殖和/或治療癌癥的藥物中的 應(yīng)用。
9. 一種抑制腫瘤細(xì)胞增殖和/或治療癌癥的藥物，它的活性成分是權(quán)利要求1或2所 述共聚物負(fù)載siRNA藥物和/或化療藥物形成的納米顆粒。
10. 如權(quán)利要求9所述的藥物，其特征在于所述腫瘤細(xì)胞為乳腺癌細(xì)胞；所述癌癥為 乳腺癌；所述siRNA為Bcl2基因的siRNA ;所述化療藥物為阿霉素。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的聚乙二醇單甲醚-聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物，具有良好的生物相容性和可降解性，可在水溶液中自組裝形成納米顆粒，包載用于癌癥治療的小分子化療藥物，同時(shí)形成的納米顆粒帶正電荷，能高效結(jié)合帶負(fù)電荷的小干擾RNA，同時(shí)將小干擾RNA和化療藥物輸送到癌細(xì)胞。其優(yōu)勢在于它輸送小干擾RNA藥物進(jìn)入細(xì)胞沉默癌基因的表達(dá)的同時(shí)，也攜載大大低于正常給藥劑量的化療藥物進(jìn)入癌細(xì)胞，而低劑量的化療藥物對正常細(xì)胞只有極低的副作用。本發(fā)明有可能解決臨床上化療藥物毒性高選擇性低帶來的副作用，同時(shí)提高治療效率，改善癌癥治療的功效。
文檔編號(hào)C08L79/02GK101768276SQ200810246719
公開日2010年7月7日 申請日期2008年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月26日
發(fā)明者杜金志, 王均, 竇雙 申請人:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)