專利名稱：分離聚羥基鏈烷酸酯的方法
分離聚羥基鏈烷酸酯的方法本發(fā)明涉及一種從生產(chǎn)細(xì)胞中分離聚羥基鏈烷酸酯的方法。i)分解所述生產(chǎn)細(xì)胞，然后ii)通過(guò)連續(xù)射流分離器將細(xì)胞碎片與聚羥基鏈烷酸酯顆粒分離；iii)用一種堿性水溶液洗滌濃縮的聚羥基鏈烷酸酯，然后iv)用一種含水酸洗滌。聚羥基鏈烷酸酯(PHA)——例如聚羥基丁酸酯(PHB)——可用細(xì)菌合成。例如，在 Biopolymer, Wiley-VCH, 2002中描述了這樣的生物技術(shù)方法。PHB在發(fā)酵末期以被蛋白質(zhì)包膜包裹的顆粒形式存在于細(xì)菌細(xì)胞中(J.Biol. Chem. 1989，vol. 264 (6)，3286-3291)。為獲得足夠純的PHB，必須將其與細(xì)菌細(xì)胞分離。用生物技術(shù)生產(chǎn)的粗混合物除了含有所需的聚羥基鏈烷酸酯外，還含有生產(chǎn)所述 聚羥基鏈烷酸酯的微生物(生產(chǎn)細(xì)胞，生物質(zhì)(biomass)，或非聚羥基鏈烷酸酯物質(zhì))。從 生物質(zhì)中分離聚羥基鏈烷酸酯的方法可以是a)溶解所述生物質(zhì)，b)用合適的提取介質(zhì)提 取所述聚羥基鏈烷酸酯或c)將所述生物質(zhì)(生產(chǎn)細(xì)胞)機(jī)械分解，然后將細(xì)胞碎片與所述 聚羥基鏈烷酸酯(PHA)顆粒分離。對(duì)此最常用的方法是利用溶劑將PHA顆粒從生物質(zhì)中提取出來(lái)(處理b))。結(jié)果 是使用溶劑有許多缺點(diǎn)。不得不投資復(fù)雜而昂貴的基礎(chǔ)設(shè)施來(lái)處理和回收溶劑。提取出的 生物質(zhì)必須不含溶劑殘余物才能進(jìn)一步用作肥料或飼料。由于PHB在很多溶劑中僅能不充 分地溶解，因而所需溶劑的量很多。為分解和溶解所述生物質(zhì)(處理a))，可使用例如酶或化學(xué)方法。此外，可加入表 面活性化合物?？梢远喾N方法組合使用。在Research In Microbiology 2005，156，865-873 中描述了由基因修飾的大腸桿菌(Escherichia coli)細(xì)胞形成的聚羥基丁酸酯(PHB)的 釋放，并在后文提到了細(xì)胞自溶步驟。未描述確切的細(xì)胞自溶條件。細(xì)胞自溶是細(xì)胞通過(guò) 其自身的酶而自溶解的過(guò)程。這種制備方法有以下缺點(diǎn)。由于自溶進(jìn)行不完全并且細(xì)胞碎 片和PHB顆粒仍相互粘著，因而僅能釋放大約80%形成的PHB。WO 2007/135039描述了一種值得注意的機(jī)械處理C)。生產(chǎn)細(xì)胞通過(guò)一種高壓 均化設(shè)備分解并將生產(chǎn)細(xì)胞的細(xì)胞碎片通過(guò)射流分離器與形成的聚羥基鏈烷酸酯顆粒分 離。當(dāng)具有極高聚羥基鏈烷酸酯含量的生產(chǎn)細(xì)胞作為起始物時(shí)此方法非常有效。在其他 情況下，分離除去細(xì)胞碎片(細(xì)胞壁)并不總是完全令人滿意地成功。蛋白質(zhì)(含氮)雜 質(zhì)導(dǎo)致顏色改變(參見(jiàn) Biotechnology Techniques, Vol. 11，No. 6，June 1997，page 411， 左欄最后一段)并導(dǎo)致聚羥基鏈烷酸酯具有較低的熱穩(wěn)定性(Polymer Degradation and Stability 52(1996), page 38，左欄)。因此目標(biāo)是尋找一種可將生產(chǎn)細(xì)胞的細(xì)胞碎片與形成的聚羥基鏈烷酸酯顆粒完 全分離的方法。此目標(biāo)通過(guò)開(kāi)篇處提到的4-步驟處理出色地實(shí)現(xiàn)。此方法因高效、經(jīng)濟(jì)可行性和 卓越的處理能力而從常規(guī)方法中脫穎而出。必需的設(shè)備在技術(shù)上可獲得并且可根據(jù)需要放大，因此所述方法可容易地用于工業(yè)規(guī)模。本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案在步驟i)中通過(guò)機(jī)械方法分解生產(chǎn)細(xì)胞。無(wú)化學(xué) 試劑的分解有其優(yōu)點(diǎn)。已描述可用均化器分解PHB-生產(chǎn)細(xì)菌真養(yǎng)產(chǎn)堿菌(Alcaligenes eutrophus)的細(xì)胞(Bios印aration 1991，2，155-166)。存在于細(xì)胞中的PHB顆粒實(shí)際上 在4次通過(guò)均化器后可與細(xì)胞基本完全分離。在此類均質(zhì)器中，細(xì)胞懸浮液被擠壓通過(guò)一 個(gè)閥(valve)。通過(guò)調(diào)節(jié)閥錐和閥座之間的空隙寬度產(chǎn)生湍流。然后使從所述閥擠出的懸 浮液沖擊鋼板。因此該機(jī)器的壓力限制在1500bar。為產(chǎn)生較高壓力，需要大量電能。用均化器分解細(xì)胞是經(jīng)濟(jì)的，在細(xì)胞單次通過(guò)后 即完全分解的情況下尤為如此。在Bios印aration 1991，2，155-166中描述的方法的缺點(diǎn) 是需要4次通過(guò)均化器。發(fā)明人現(xiàn)已證實(shí)，含有PHA的細(xì)胞，特別是真養(yǎng)產(chǎn)堿菌，可用以下描述的高壓均化 器容易地分解。在這種情況下，在2000bar或更高壓力下單次通過(guò)所述高壓均化器，可分解 超過(guò)99%的細(xì)胞并且PHA基本完全釋放。因此本發(fā)明還涉及使用一種在2000大氣壓或更 高壓力下運(yùn)行的高壓均化器的分解方法。例如，所述均化器包括以下配置合適的均化設(shè)備的實(shí)例a)包括一個(gè)具有至少一個(gè)入口噴嘴的孔板和一個(gè)具有至少一個(gè)出口噴嘴的孔板， 若合適，在所述孔板之間的中部空間弓I入機(jī)械能，或b)包括一個(gè)具有至少一個(gè)入口噴嘴的孔板和一個(gè)沖擊板(impact plate)，若合 適，在所述孔板和所述沖擊板之間的中部空間引入機(jī)械能。實(shí)施方案a)用于分離聚羥基鏈烷酸酯的均化器包括，例如，一個(gè)具有至少一個(gè)入口噴嘴的孔 板和一個(gè)具有至少一個(gè)出口噴嘴的孔板，所述噴嘴相互軸向排列。在孔板之間的中部空間 可放置一個(gè)靜態(tài)混合器。若合適，在中部空間另外引入機(jī)械能。可用于本發(fā)明方法的孔板具有至少一個(gè)孔，即至少一個(gè)噴嘴。兩個(gè)孔板各自可 具有任意所需數(shù)量的孔，但每個(gè)板優(yōu)選不多于5個(gè)孔，特別優(yōu)選不多于3個(gè)孔，極特別優(yōu) 選不多于2個(gè)孔，尤其優(yōu)選不多于1個(gè)孔。兩個(gè)孔板都可具有不同數(shù)目的孔或相同數(shù)目 的孔，優(yōu)選兩個(gè)孔板具有相同數(shù)目的孔。通常，所述孔板是各自具有至少一個(gè)孔的沖孔板 (perforated plate)0在本發(fā)明的方法的另一個(gè)實(shí)施方案中，第二個(gè)孔板被一個(gè)篩網(wǎng)代替，即第二個(gè)孔 板有許多孔和噴嘴?？捎玫暮Y網(wǎng)可涵蓋大范圍的孔徑，一般地孔徑為0. 1至250μπι，優(yōu)選 0. 2至200 μ m,特別優(yōu)選0. 3至150 μ m,尤其優(yōu)選0. 5至100 μ m。所述孔或噴嘴可具有任意可以想到的幾何形狀，例如為圓形、橢圓形、任意所需邊 數(shù)的多邊形——其若合適也可以圓化，或者是星形的。優(yōu)選地，所述孔為圓形。入口孔板的孔的直徑一般是0. 05mm至1cm，優(yōu)選為0. 08mm至0. 8mm，特別優(yōu)選0. 1 至0. 5mm，特別是0. 2至0. 4_。出口孔板的孔的直徑一般是0. 5mm至1cm，優(yōu)選5mm至50_， 特別優(yōu)選10至20mm。所述兩個(gè)孔板優(yōu)選以所述孔或噴嘴相互軸向排列的方式構(gòu)造。軸向排列意指對(duì)于 兩個(gè)孔板而言由噴嘴孔的幾何形狀產(chǎn)生的流向相同。根據(jù)以上描述，用于此的入口噴嘴和 出口噴嘴的孔向并不需要位于一條直線上，它們也可以平行移置。優(yōu)選地，所述孔板平行取向。但是，也可以是其他幾何形狀，特別是非平行的孔板，或入口噴嘴和出口噴嘴孔向 不同。在如上所述的雙孔板系統(tǒng)(入口孔板和出口孔板)中，出口噴嘴有較大的孔。從而 使湍流平息。這種情況下不需要沖擊板?？装宓暮穸瓤扇缢琛?yōu)選地，孔板的厚度為0. 1至100mm，優(yōu)選為0. 5至30mm， 特別優(yōu)選1至10mm。孔板的厚度⑴應(yīng)選擇為使孔的直徑(d)和厚度⑴的比為1 1、 優(yōu)選1 1.5、特別優(yōu)選1 2。兩個(gè)孔板之間的中部空間的長(zhǎng)度可按需而定，一般地中部空間的長(zhǎng)度為1至 500mm，優(yōu)選10至300mm，特別優(yōu)選20至100mm。在兩個(gè)孔板之間的中部空間可放置一個(gè)靜態(tài)混合器，其可完全或部分填充兩個(gè)孔 板之間的部分。優(yōu)選地，所述靜態(tài)混合器在兩個(gè)孔板之間的中部空間的整個(gè)長(zhǎng)度上延伸。靜 態(tài)混合器是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。靜態(tài)混合器可以是，例如閥式混合器(valve mixer), 帶鉆孔的靜態(tài)混合器、由帶槽片層制成的靜態(tài)混合器或由接合肋(engaging rib)制成的靜 態(tài)混合器。此外，可以是螺旋形或N形的靜態(tài)混合器，或者是具有可加熱或可冷卻的混合元 件的靜態(tài)混合器。除了靜態(tài)混合器，可在兩個(gè)孔板之間的中部空間引入機(jī)械能。所述能可以例如以 機(jī)械振動(dòng)、超聲波或轉(zhuǎn)動(dòng)能的形式引入。從而產(chǎn)生湍流，所述湍流具有使顆粒在中部空間不 聚集的作用。實(shí)施方案b)與所述第一種方案不同，所述混合裝置可包括一個(gè)具有至少一個(gè)入口噴嘴的孔板 和一個(gè)沖擊板，若合適，在孔板和沖擊板之間的中部空間可放置靜態(tài)混合器?；蛘?，可不放 置靜態(tài)混合器而在中部空間引入機(jī)械能，或可除靜態(tài)混合器之外，還在中部空間引入機(jī)械 能。上述內(nèi)容適用于具有入口噴嘴的孔板，具有靜態(tài)混合器和引入機(jī)械能的中部空 間。在該方案中，第二個(gè)孔板被一個(gè)沖擊板代替。所述沖擊板的直徑一般比安裝所述 沖擊板的位置處的管直徑小0. 5至20%，優(yōu)選1至10%。通常，所述沖擊板可以是任意幾何形狀，優(yōu)選為圓盤形，因此，前視圖可見(jiàn)環(huán)形縫 隙。也可能是例如狹縫(slot)或槽(channel)的形式。所述沖擊板可以與之前描述的方案中第二個(gè)孔板相似的方式固定于距第一個(gè)孔 板不同距離處。因而孔板和沖擊板之間的中部空間可具有任意所需的長(zhǎng)度；通常，中部空間 的長(zhǎng)度為1至500mm，優(yōu)選10至300mm，特別優(yōu)選20至100mm。本發(fā)明的方法相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)的已知方法具有一些優(yōu)勢(shì)，因?yàn)榭商貏e高產(chǎn)率地獲 得高分子量聚羥基鏈烷酸酯。特別是，通過(guò)該處理方案可獲得Mn為50000至2000000的聚 羥基鏈烷酸酯，特別是100000至200000的聚羥基鏈烷酸酯。將粗乳化物乳化以提供精細(xì)分散的乳化物的溫度一般是0至150°C，優(yōu)選5至 80°C，特別優(yōu)選20至40°C。在這種情況下所述裝置中使用的所有均化部件(homogenizing unit)都可被加熱/冷卻。均化一般在高于大氣壓的壓力下進(jìn)行，即> lbar。然而在這種情況下壓力不超過(guò)10 OOObar,因此確定均化壓力優(yōu)選為> Ibar至10 OOObar，優(yōu)選5至2500bar，特別優(yōu)選 100 至 2000bar。本發(fā)明的方法使用的生產(chǎn)細(xì)胞的濃度為約20至300g/l，優(yōu)選50_220g/l。這種情況下任意類型的細(xì)胞或細(xì)胞層都稱為生產(chǎn)細(xì)胞；特別是動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì) 胞或來(lái)源于微生物的細(xì)胞。同樣優(yōu)選地，生產(chǎn)細(xì)胞為重組生物體。特別合適的生產(chǎn)細(xì)胞是 原核細(xì)胞(包括古生菌)或真核細(xì)胞，特別是細(xì)菌(包括鹽桿菌和甲烷球菌)、真菌、昆蟲 細(xì)胞、植物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞，特別優(yōu)選真養(yǎng)產(chǎn)堿菌(Alcaligenes eutrophus)、大腸桿 菌(Escherichia coli)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、巨大芽孢桿菌(Bacillus, megaterium)、米曲霉(Aspergillus oryzea)、雪灰曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲 霉(Aspergillus niger)、巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)、假單胞菌種(Pseudomonas spec·)、乳桿菌(Lactobacillen)、多形漢遜酵母(Hansenula polymorpha)、里氏木霄 (Trichoderma reesei)和SF9(或相關(guān)細(xì)胞)。特別優(yōu)選地，所述微生物是真養(yǎng)產(chǎn)堿菌。在本發(fā)明的方法中，生產(chǎn)細(xì)胞可在培養(yǎng)(例如發(fā)酵)后直接使用；但也可首先殺 死生產(chǎn)細(xì)菌，例如通過(guò)滅菌(sterilization)，并且若合適通過(guò)濾除培養(yǎng)基來(lái)富集細(xì)胞物質(zhì) (cell mass)ο聚羥基鏈烷酸酯意指通過(guò)生物技術(shù)生產(chǎn)的聚合物。特別是，它們意指以下聚合物 聚(3-羥基丁酸酯)(P-3HB)、聚(3-羥基丁酸酯)/共-3-羥基戊酸酯(P-3HB-共-3HV)、 聚(3-羥基丁酸酯)/共-4-羥基丁酸酯(P-3HB-共-4HB)、聚(3-羥基丁酸酯)/共_3_羥 基己酸酯(P-3HB-共-3HHx)和聚(3-羥基丁酸酯)/共_3_羥基辛酸酯(P-3HB-共-3H0)。在步驟ii)中，通過(guò)連續(xù)射流分離器將細(xì)胞碎片與聚羥基鏈烷酸酯顆粒分離。包 含聚羥基鏈烷酸酯顆粒的小球通過(guò)射流連續(xù)移除，而細(xì)胞碎片則有效地連續(xù)分離至溢流物 (實(shí)際上是“澄清流(clear flow)”)中。不存在由于打開(kāi)鼓筒(drum)而造成的排空，因此 也就沒(méi)有損失、渦流和類似的不穩(wěn)定情況，而這些不穩(wěn)定情況都會(huì)損害有效分離。為了達(dá)到 更高的純度，可將PHA顆粒和清水混合然后再次離心。由此可獲得很純的PHA顆粒的水懸 浮液，然后可將其用已知的方法干燥，例如通過(guò)噴霧干燥。用以下的步驟iii)和iv)，這可 顯著減少。射流分離器也稱為Westfalia分離器。從例如www. gea-westfalia. de可獲得詳 細(xì)的介紹。例如，可提及VisCon 系統(tǒng)，其中射流是粘度控制的。這避免了進(jìn)料條件改變時(shí) 對(duì)分離器參數(shù)(排空時(shí)間)的調(diào)整，從而實(shí)現(xiàn)了恒定固體排放濃度。在VisCon 系統(tǒng)中，射 流不是位于鼓筒邊緣，而是位于鼓筒內(nèi)較小的直徑上。通過(guò)水封(hydrohermetic)進(jìn)料引 入和通過(guò)射流排出增加了分離的細(xì)胞的細(xì)胞活性。在步驟iii)中，用堿性水溶液洗滌之前濃縮的聚羥基鏈烷酸酯顆粒。堿性溶液一般意指氫氧化物，如堿土金屬氫氧化物，特別是堿金屬氫氧化物；碳酸 鹽如堿土金屬碳酸鹽，特別是堿金屬碳酸鹽；和碳酸氫鹽如堿土金屬碳酸氫鹽，特別是堿金 屬碳酸氫鹽。優(yōu)選以0. 01至lmol/1的濃度使用氫氧化物。碳酸鹽和碳酸氫鹽一般以0. 01至 2mol/l的濃度使用。用堿性溶液處理可在0至120°C進(jìn)行，優(yōu)選10至60°C。如上所述，本發(fā)明方法中 的溫度選擇為不會(huì)使顯著量的聚羥基鏈烷酸酯(< 5%)進(jìn)入溶液。
使用堿性溶液時(shí)，氫氧化物的最終濃度通常設(shè)置為0. 001至lmol/1，優(yōu)選0. 01至 0. 5mol/l，特別是 0. 05 至 0. 2mol/l。在用堿性溶液處理后，將所述聚合物從水溶液中移出。可通過(guò)過(guò)濾、離心、沉降或 借助水力旋流器進(jìn)行此過(guò)程。為此目的使用的堿性溶液可以是固體或液體形式。通過(guò)步驟iv)的酸處理，可降低聚羥基鏈烷酸酯顆粒中的堿金屬和堿土金屬的含 量，從而提高聚羥基鏈烷酸酯顆粒的熱穩(wěn)定性。酸處理可理解為洗滌過(guò)程。與DE 19712702描述的方法相反，在本發(fā)明方法中，聚 羥基鏈烷酸酯顆粒不被酸溶解。本發(fā)明的酸不僅包括路易斯酸還包括布朗斯臺(tái)德酸。路易斯將酸定義為具有親電 的電子對(duì)受體的物質(zhì)。根據(jù)布朗斯臺(tái)德的定義，酸是可以向反應(yīng)對(duì)象釋放質(zhì)子的化合物。所述酸可以以固體、液體或氣體的形式存在。此外，所述酸可以以溶于有機(jī)溶劑或 水的溶液的形式存在。特別優(yōu)選的是含水酸。無(wú)機(jī)酸優(yōu)選以0. 01至lmol/1的濃度使用。羧酸和磺酸一 般以0. 01至2mol/l的濃度使用。可使用無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸作為液體酸。優(yōu)選的酸是硫酸、鹽酸、磷酸、亞膦酸、硝酸、 亞硝酸、碳酸、硅酸、次氯酸、高氯酸、氨基磺酸、乙酸、甲酸、丙酸、磺酸、亞磺酸(sulfonous acid)、甲磺酸、三氟甲磺酸或檸檬酸。優(yōu)選地氣體酸為SO2、SO3或CO2。在處理過(guò)程中，聚羥基鏈烷酸酯顆?？纱嬖谟谌芤褐校蛞詽{體、熔體或固體的形 式存在。酸處理可連續(xù)或間歇進(jìn)行。酸處理可在0至120°C進(jìn)行，優(yōu)選10至60°C。如上所述，本發(fā)明方法的溫度選擇 為不會(huì)使顯著量的聚羥基鏈烷酸酯(< 5%)進(jìn)入溶液。使用酸時(shí)，通常將酸的最終濃度設(shè)定為0. 001至lmol/1，優(yōu)選0. 01至0. 5mol/l, 特別是 0. 05 至 0. 2mol/l。用酸處理之后，將所述聚合物從水溶液中移出。可通過(guò)例如過(guò)濾、離心、沉降或借 助水力旋流器進(jìn)行此過(guò)程。為此目的使用的酸可以是液態(tài)、固態(tài)或氣態(tài)。優(yōu)選的形式是使用固體酸。固體酸意指特別是離子交換劑?？蛇x擇使用具有諸如 磺酸、磷酸和羧酸的酸根離子的交換劑。所述酸可以以氣體的形式存在。多余的酸可通過(guò)對(duì)聚羥基鏈烷酸酯溶液脫氣或?qū)?氣體酸提取至另一個(gè)液相中而移除。為了進(jìn)一步減少含氮量，可引入漂白步驟(步驟ν))。合適的漂白劑是0.001至 0. 2M次氯酸和/或過(guò)氧化氫溶液。若使用堿金屬次氯酸鹽，則可有利地在步驟iii)之后直 接進(jìn)行漂白步驟V)，最后用酸洗滌(步驟iv))。在一些情況下，已證明在酸洗滌操作(iv) 后進(jìn)行漂白步驟vi-1)是有利的。使用的設(shè)備在實(shí)施例中，選擇以下的配置I作為分解生產(chǎn)細(xì)胞的高壓均化器。入口噴嘴使用具有14X0. 2mm寬的鉆孔的孔板。發(fā)酵液為一種懸浮液，并且在約2000大氣壓下擠壓穿過(guò) 所述孔板。在中部空間(長(zhǎng)15mm直徑8mm)，懸浮液在接觸到充當(dāng)出口噴嘴的第二塊孔板之 前形成渦流。細(xì)胞懸浮液穿過(guò)一個(gè)錐形鉆孔抵達(dá)出口孔板，然后從一個(gè)單獨(dú)的鉆孔(直徑 1.5mm)離開(kāi)孔板板塊。所述出口孔板相對(duì)于入口噴嘴的鉆孔居中放置。射流分離器使用GEA Westfalia公司的HFC-15型儀器。實(shí)施例Ia 從大腸桿菌生產(chǎn)細(xì)胞中分離3-羥基聚羥基丁酸酯(3-PHB)i)所述方法使用2001生物干物質(zhì)含量為57. 7g/l——其中含有60. 6%的3_聚 羥基丁酸酯——的大腸桿菌發(fā)酵液作為起始物，在發(fā)酵器中冷卻至4°C。根據(jù)B. S.Kim， S. Y. Lee, H. N. Chang in Biotechnology Letters, Vol. 14，811-816 (1992)進(jìn)行發(fā)酵。所述 培養(yǎng)液在1750bar的壓力下全部通過(guò)高壓均化器，并在出口處冷卻至12°C。然后用去離子 水將細(xì)胞勻漿稀釋至固體含量為22. 3g/l。ii)在GEA Westfalia的HFC-15型射流分離器中，以7001/h的進(jìn)料速率分離PHB 顆粒(濃縮物)和細(xì)胞碎片(溢流物)。濃縮物中的總干物質(zhì)濃度是110. lg/Ι，其中含有 90%的3-PHB。在溢流物中有7. 7g/l的總干物質(zhì)，其中含有8. 6%的3-PHB。iii)將所得濃縮物與KOH混合至終濃度為0. 2mol/l，并在30°C攪拌lh。此后將 混合物離心，丟棄上清液并用去離子水將顆粒再懸浮，再次離心并再次丟棄上清液(洗滌 步驟)。iv)接著用硫酸以終濃度為0. lmol/1進(jìn)行洗滌步驟，并用去離子水進(jìn)行再洗滌步 驟。在真空干燥箱中在40°C進(jìn)行干燥。對(duì)比實(shí)施例Ib用與實(shí)施例Ia類似的方式進(jìn)行步驟i)、ii)和iv)的過(guò)程。不進(jìn)行中間步驟iii) (用KOH洗滌)。對(duì)于實(shí)施例Ia和對(duì)比實(shí)施例lb，測(cè)定3-PHB含量、總氮、鉀含量和185°C熱應(yīng)力35 分鐘處理前樣本的分子量(MwI)和處理后樣本的分子量(Mw2)。結(jié)果在下表列出。
權(quán)利要求
1.一種從生產(chǎn)細(xì)胞中分離聚羥基鏈烷酸酯的方法，包括i)分解所述生產(chǎn)細(xì)胞，然后ii)通過(guò)連續(xù)射流分離器將細(xì)胞碎片與聚羥基鏈烷酸酯顆粒分離；iii)將濃縮的聚羥基鏈烷酸酯顆粒用一種堿性水溶液洗滌，然后iv)用一種含水酸洗滌。
2.權(quán)利要求1的方法，其中在步驟i)中，所述生產(chǎn)細(xì)胞通過(guò)一種高壓均化設(shè)備分解。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述均化設(shè)備a)包括一個(gè)具有至少一個(gè)入口噴嘴的孔板和一個(gè)具有至少一個(gè)出口噴嘴的孔板，若合 適，在所述孔板之間的中部空間另外引入機(jī)械能，或b)包括一個(gè)具有至少一個(gè)入口噴嘴的孔板和一個(gè)沖擊板，若合適，在所述孔板和所述 沖擊板的中部空間引入機(jī)械能。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述生產(chǎn)細(xì)胞為一種重組生物體。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述聚羥基鏈烷酸酯為聚(3-羥基丁酸酯)(P-3HB)、聚 (4-羥基丁酸酯)(P-4HB)、聚(3-羥基丁酸酯)/共-3-羥基戊酸酯(P-3HB-共-3HV)、聚 (3-羥基丁酸酯)/共-4-羥基丁酸酯(P-3HB-共-4HB)、聚(3-羥基丁酸酯)/共_3_羥基 己酸酯(P-3HB-共-3HHx)或聚(3-羥基丁酸酯)/共_3_羥基辛酸酯(P-3HB-共-3H0)。
6.權(quán)利要求1的方法，其中步驟iii)中的堿性溶液是0.01至0. 5M堿金屬氫氧化物、 堿金屬碳酸鹽或堿金屬碳酸氫鹽溶液。
7.權(quán)利要求1的方法，其中步驟iv)中的含水酸是0.01至0.5M無(wú)機(jī)酸、羧酸或磺酸。
8.權(quán)利要求1的方法，其中在一個(gè)另外的步驟ν)中，將聚羥基鏈烷酸酯顆粒進(jìn)行漂白 步驟。
9.權(quán)利要求8的方法，其中在漂白步驟vi-1)中，使用0.001至0.2M次氯酸鹽和/或 過(guò)氧化氫溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從生產(chǎn)細(xì)胞中分離聚羥基鏈烷酸酯的方法，其特征在于i)蒸解所述生產(chǎn)細(xì)胞，然后ii)通過(guò)連續(xù)射流分離器將細(xì)胞碎片與聚羥基鏈烷酸酯顆粒分離；iii)用堿性水溶液洗滌濃縮的聚羥基鏈烷酸酯顆粒，然后iv)用含水酸洗滌。
文檔編號(hào)C08G63/90GK102083885SQ200980125749
公開(kāi)日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2009年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月2日
發(fā)明者A·施耐德, B·庫(kù)伯, P·普雷舒伯-普夫呂格爾, R·霍爾曼 申請(qǐng)人:巴斯夫歐洲公司