專利名稱：一種硫酸軟骨素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種硫酸軟骨素的制備方法。
背景技術(shù)：
硫酸軟骨素，英文名chondroitin sulfate，是以動(dòng)物(豬、牛、馬、羊、雞、鯊魚(yú)等) 的軟骨為原料的一種高分子酸性粘多糖，其分子結(jié)構(gòu)為β -D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通過(guò)β 1 — 3糖苷鍵形成的重復(fù)二糖單位所組成的多糖鏈。它是一種白色或微黃色粉末，吸水性強(qiáng)，易溶于水而成粘稠液體，不溶于酒精、丙酮、乙醚和氯仿等有機(jī)溶劑，其鹽類對(duì)熱較穩(wěn)定。目前，硫酸軟骨素通常采用堿-酶解提取法，主要包括以下步驟
1)堿提酶解原料(軟骨)加水浸沒(méi)，用氫氧化鈉調(diào)ΡΗ8.5，升溫至55-60°C，保溫4_6小時(shí)，再加入m的堿性蛋白酶，保持pH8. 5，保溫55-60°C攪拌6_8小時(shí)，升溫至沸騰15分鐘左右，過(guò)濾，得濾液；
2)酒精沉淀濾液中加入3%重量的氯化鈉，降溫至室溫，按體積的2.5倍加入95%酒精，靜止8小時(shí)，取沉淀；
3)氧化按沉淀與水的重量比為1:10的比例混合水，同時(shí)加入3%重量的氯化鈉，調(diào) ρΗΙΟ-12，加入重量雙氧水氧化8小時(shí)，過(guò)濾，取濾液；
4)酒精沉淀干燥濾液調(diào)pH6，加入體積的2.5倍量酒精二次沉淀，沉淀再用95%酒精脫水兩次，干燥粉碎得到硫酸軟骨素成品。由于軟骨原料表面附著許多脂肪或肌肉組織，這些組織是硫酸軟骨素生產(chǎn)過(guò)程中的主要雜質(zhì)，而且硫酸軟骨素溶液比較粘稠，溶液中雜質(zhì)過(guò)多，過(guò)濾非常困難，使規(guī)模產(chǎn)生硫酸軟骨素時(shí)，過(guò)濾效率非常低下，許多廠家使用原始落后的馬槽進(jìn)行過(guò)濾，致使生產(chǎn)效率不高，混進(jìn)的雜質(zhì)影響產(chǎn)品后續(xù)的純化；其次由于硫酸軟骨素溶液中雜質(zhì)過(guò)多，使得純化操作變得復(fù)雜，雜質(zhì)過(guò)于分散不利于回收利用，造成環(huán)境污染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種硫酸軟骨素的制備方法，該制備方法使硫酸軟骨素生產(chǎn)過(guò)程簡(jiǎn)單，原料中的雜質(zhì)能有效處理并回收利用，產(chǎn)品質(zhì)量好。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是該制備方法包括下列步驟
(1)水煮軟骨原料加水浸沒(méi)，升溫至80-100°C，煮12-M小時(shí)，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨；
(2)氣蒸將步驟(1)得到的軟骨放入蒸籠，100-150°C的蒸汽蒸16小時(shí)以上，蒸籠上端設(shè)蒸汽出口，排出蒸汽冷凝后進(jìn)行油水分離，水回到蒸籠，油收集；
(3)酶解將步驟(2)處理的軟骨加水浸沒(méi)，按體積加3%的氯化鈉，用堿調(diào)pH至8-9， 升溫至55-60°C，再按軟骨原料重量1-3%加入2709堿性蛋白酶，保持pH8_9，保溫55_60°C 攪拌4-6小時(shí)，升溫至沸騰12-18分鐘；(4)氧化將步驟(3)得到的溶液，降溫至35-40°C，調(diào)pH至10-12，加入溶液體積的 1-3%雙氧水氧化6小時(shí)以上，過(guò)濾得濾液；
(5)酒精沉淀將步驟(4)得到的濾液，調(diào)pH6-7，加入酒精使溶液酒精濃度達(dá)到60%，沉淀16小時(shí)以上；
(6)脫水烘干沉淀結(jié)束后棄去上層酒精，收集沉淀，脫水干燥，得硫酸軟骨素成品。本發(fā)明取得的效果是
一、本發(fā)明經(jīng)過(guò)水煮得到的軟骨只剩下潔白軟骨組織和表面少量油脂，其它動(dòng)物組織都已剝離，水煮、剝離下來(lái)的其它組織可以回收利用，水可以重復(fù)使用；
二、軟骨再經(jīng)過(guò)氣蒸，可以將軟骨中絕大部分的油脂高溫蒸出，蒸汽冷凝后進(jìn)行油水分離，回收利用；
三、生產(chǎn)過(guò)濾操作簡(jiǎn)單，酶解液中無(wú)油脂及濾渣少，過(guò)濾效率高；
四、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，硫酸軟骨素的含量達(dá)到90%以上。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)解決方案，這些實(shí)施例不能理解為是對(duì)技術(shù)解決方案的限制。實(shí)施例1 依以下步驟制備硫酸軟骨素
(1)水煮100公斤軟骨原料加水浸沒(méi)，升溫至80°C，煮24小時(shí)，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨；
(2)氣蒸將步驟(1)得到的軟骨放入蒸籠，100°C的蒸汽蒸16小時(shí)以上，蒸籠上端設(shè)蒸汽出口，排出蒸汽冷凝后進(jìn)行油水分離，水回到蒸籠，油收集；
(3)酶解將步驟(2)處理的軟骨加水浸沒(méi)，按體積加3%的氯化鈉，用堿調(diào)pH至8，升溫至55°C，再加入lKg2709堿性蛋白酶，保持pH8，保溫55°C攪拌6小時(shí)，升溫至沸騰12分鐘；
(4)氧化將步驟(3)得到的溶液，降溫至35°C，調(diào)pH至10，加入溶液體積的1%雙氧水氧化6小時(shí)以上，過(guò)濾得濾液；
(5)酒精沉淀將步驟(4)得到的濾液，調(diào)pH6，加入酒精使溶液酒精濃度達(dá)到60%，沉淀 16小時(shí)以上；
(6)脫水烘干沉淀結(jié)束后棄去上層酒精，收集沉淀，脫水干燥，得硫酸軟骨素成品 14. 3公斤，硫酸軟骨素含量為92. 5%。實(shí)施例2 依以下步驟制備硫酸軟骨素
(1)水煮100公斤軟骨原料加水浸沒(méi)，升溫至90°C，煮18小時(shí)，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨；
(2)氣蒸將步驟(1)得到的軟骨放入蒸籠，125°C的蒸汽蒸16小時(shí)以上，蒸籠上端設(shè)蒸汽出口，排出蒸汽冷凝后進(jìn)行油水分離，水回到蒸籠，油收集；
(3)酶解將步驟(2)處理的軟骨加水浸沒(méi)，按體積加3%的氯化鈉，用堿調(diào)pH至8.5， 升溫至58°C，再加入2Kg2709堿性蛋白酶，保持pH8. 5，保溫58°C攪拌5小時(shí)，升溫至沸騰 15分鐘；
(4)氧化將步驟(3)得到的溶液，降溫至37°C，調(diào)pH至11，加入溶液體積的2%雙氧水氧化6小時(shí)以上，過(guò)濾得濾液；
(5)酒精沉淀將步驟(4)得到的濾液，調(diào)pH6.5，加入酒精使溶液酒精濃度達(dá)到60%，沉淀16小時(shí)以上；
(6)脫水烘干沉淀結(jié)束后棄去上層酒精，收集沉淀，脫水干燥，得硫酸軟骨素成品 14. 5公斤，硫酸軟骨素含量為92. 8%。。 實(shí)施例3 依以下步驟制備硫酸軟骨素
(1)水煮100公斤軟骨原料加水浸沒(méi)，升溫至100°C，煮12小時(shí)，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨；
(2)氣蒸將步驟(1)得到的軟骨放入蒸籠，150°C的蒸汽蒸16小時(shí)以上，蒸籠上端設(shè)蒸汽出口，排出蒸汽冷凝后進(jìn)行油水分離，水回到蒸籠，油收集；
(3)酶解將步驟(2)處理的軟骨加水浸沒(méi)，按體積加3%的氯化鈉，用堿調(diào)pH至9，升溫至60°C，再加入!3Kg2709堿性蛋白酶，保持pH9，保溫60°C攪拌6小時(shí)，升溫至沸騰18分鐘；
(4)氧化將步驟(3)得到的溶液，降溫至40°C，調(diào)pH至12，加入溶液體積的3%雙氧水氧化6小時(shí)以上，過(guò)濾得濾液；
(5)酒精沉淀將步驟(4)得到的濾液，調(diào)pH7，加入酒精使溶液酒精濃度達(dá)到60%，沉淀 16小時(shí)以上；
(6)脫水烘干沉淀結(jié)束后棄去上層酒精，收集沉淀，脫水干燥，得硫酸軟骨素成品 14. 8公斤，硫酸軟骨素含量為93. H
權(quán)利要求
1. 一種硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于包括下列步驟(1)水煮軟骨原料加水浸沒(méi)，升溫至80-100°C，煮12-24小時(shí)，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨；(2)氣蒸將步驟(1)得到的軟骨放入蒸籠，100-150°C的蒸汽蒸16小時(shí)以上，蒸籠上端設(shè)蒸汽出口，排出蒸汽冷凝后進(jìn)行油水分離，水回到蒸籠，油收集；(3)酶解將步驟(2)處理的軟骨加水浸沒(méi)，按體積加3%的氯化鈉，用堿調(diào)pH至8-9， 升溫至55-60°C，再按軟骨原料重量1%_3%加入2709堿性蛋白酶，保持pH8_9，保溫55_60°C 攪拌4-6小時(shí)，升溫至沸騰12-18分鐘；(4)氧化將步驟(3)得到的溶液，降溫至35-40°C，調(diào)pH至10-12，加入溶液體積的 1-3%雙氧水氧化6小時(shí)以上，過(guò)濾得濾液；(5)酒精沉淀將步驟(4)得到的濾液，調(diào)pH6-7，加入酒精使溶液酒精濃度達(dá)到60%，沉淀16小時(shí)以上；(6)脫水烘干沉淀結(jié)束后棄去上層酒精，收集沉淀，脫水干燥，得硫酸軟骨素成品。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種硫酸軟骨素的制備方法，將軟骨原料溫度控制在80-100℃水煮16-24小時(shí)，取軟骨組織放入蒸籠100-150℃蒸16小時(shí)以上，軟骨組織再經(jīng)酶解、氧化、醇沉，得到硫酸軟骨素產(chǎn)品。本發(fā)明將軟骨原料經(jīng)水煮、氣蒸，回收利用絕大部分雜質(zhì)，降低污染，同時(shí)使得酶解過(guò)濾等操作變得簡(jiǎn)單，得到的硫酸軟骨素產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，硫酸軟骨素的含量在90%以上。
文檔編號(hào)C08B37/08GK102199229SQ20111008702
公開(kāi)日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2011年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月8日
發(fā)明者劉榜惠 申請(qǐng)人:淮安麥德森制藥有限公司